Le NMD (nonsense-mediated mRNA decay) est un mécanisme qui reconnaît et dégrade les ARNm portant un codon stop prématuré afin d’empêcher la synthèse de protéines tronquées qui pourraient avoir des effets néfastes pour la cellule ou tout simplement être non fonctionnelles. Cependant, dans un certain nombre de cas, selon la position du codon stop prématuré, la protéine tronquée qui serait synthétisée si le NMD n’existait pas, pourrait remplir complètement ou partiellement la fonction de la protéine sauvage. Il faut noter qu’un codon stop prématuré est retrouvé dans le gène responsable d’une pathologie dans un tiers des maladies génétiques et de nombreuses formes de cancer. Dans la plus grande majorité des cas, la maladie se développe non pas parce qu’une protéine tronquée non fonctionnelle ou instable est synthétisée, mais plutôt parce que le gène muté n’est pas exprimé du fait de l’intervention du NMD sur l’ARNm qui en dérive. Une nouvelle approche thérapeutique de ces maladies serait d’inhiber le NMD afin de permettre la synthèse de protéines tronquées fonctionnelles et sauver le phénotype clinique. Nous avons donc décidé de rechercher des inhibiteurs du mécanisme du NMD parmi des petites molécules chimiques. Pour cela, nous avons mis au point un système de criblage en culture cellulaire reliant l’efficacité du NMD dans une cellule avec une activité luciférase mesurable directement sur les cultures cellulaires, au moyen d’un luminomètre. A partir d’un premier criblage d’environ 1500 composés chimiques, nous avons identifié une nouvelle molécule capable d’inhiber efficacement le NMD. De façon intéressante, cette nouvelle molécule est capable également d’induire la synthèse de protéines entières à partir d’un ARNm portant un codon stop prématuré. Nous avons utilisé cet inhibiteur dans des expériences pour déterminer son potentiel thérapeutique sur des modèles cellulaires de maladies génétiques tels que la dystrophie musculaire de Duchenne, la mucoviscidose et le cancer. Nos résultats démontrent que l’inhibition du NMD peut être en effet envisagée comme une nouvelle approche thérapeutique pour des maladies causées par l’apparition d’une mutation non sens. Nous avons aussi identifié une autre molécule chimique capable d’inhiber le NMD et permettant de faire un lien entre efficacité du NMD et intégrité du cytosquelette. / MRNAs harboring a premature termination codon are rapidly degraded by a mechanism called nonsense-mediated mRNA decay (NMD). NMD is a surveillance pathway that prevents the synthesis of truncated proteins that could be harmful for the cell or simply be non-functional. However in some cases, depending on the position of the premature stop codon, the truncated protein that would be synthesized if there were no NMD would be partially or fully as functional as the wild-type protein. It is noteworthy that premature termination codons are found in approximately one-third of inherited genetic disorders and several forms of cancer. In most of cases the disease arises not because a non-functional or unstable truncated protein is synthesized, but instead because the degradation of the transcript by NMD leads to complete loss of protein production. Therefore, NMD inhibition could be an interesting therapeutic approach in some cases of nonsense-related genetic diseases in which functional truncated proteins can restore the clinical phenotype. We decided to search for NMD inhibitors among thousands of small molecules. We developed a cell-based screening method which couples NMD efficiency into the cell to a luciferase activity that can be measured directly into cells by a luminometer. From a screening of approximately 1500 compounds, we have identified one molecule capable of efficiently inhibit NMD. Interestingly, this compound is also able to induce the synthesis of full-length proteins from an mRNA bearing a premature termination codon. We evaluated the therapeutic potential of this compound in different cellular models of genetic disorders such as Duchenne’s muscular dystrophy, cystic fibrosis and cancer. Our results demonstrate that NMD inhibition in general can be considered as an useful therapeutic approach to rescue PTC consequences in genetic diseases provoked by the apparition of a nonsense mutation. We have also identified another compound that inhibits NMD and uncovers a relationship between the NMD efficiency and the integrity of the cytoskeleton.

[pt] Nesta dissertação, estudamos do ponto de vista fenomenológico, os efeitos de neutrinos estéreis para os observáveis de massas de neutrinos baseado nos dados do experimento LSND e nos resultados divulgados recentemente pela colaboração MiniBooNE. Consideramos observáveis de massa as seguintes quantidades: o parâmetro de massa cinemática cuja medida é realizada em experimentos com o decaimento beta do tritium tendo seu valor atual fornecido pelos experimentos Mainz e Troitsk; a massa efetiva de Majorana, que é uma quantidade que pode ser obtida em experimentos com o duplo decaimento beta sem neutrinos; finalmente, a soma de massas dos neutrinos, a qual é vinculada por dados cosmológicos. Nossa análise é realizada considerando os possíveis ordenamentos de massas para o caso em que temos dois neutrinos estéreis além dos três neutrinos ativos usuais, cuja adição é necessária para explicar os resultados de LSND e MiniBooNE ao mesmo tempo. Neste cenário, temos oito possíveis ordenamentos de massas, os quais dividimos em três grupos. No primeiro grupo, temos que os dois neutrinos estéreis são mais pesados que os três neutrinos ativos. No segundo grupo, os dois neutrinos estéreis são mais leves que os três neutrinos ativos. Cada um destes dois grupos tem possibilidades que dependem do ordenamento de massas dos neutrinos ativos que pode ser normal ou invertido. No terceiro e último grupo temos que um neutrino estéril é mais leve e o outro mais pesado que os três neutrinos ativos. Neste grupo, existem quatro possibilidades de ordenamento associada ao posicionamento dos neutrinos estéreis e ao ordenamento dos neutrinos do setor ativo. Investigamos os observáveis de massas em cada um destes cenários. / [en] In this dissertation we study, from the phenomenological point of view, the effects of sterile neutrinos for the observables related to neutrino masses based on the data of the LSND experiment and on the results releasedrecently by the MiniBooNE collaboration. We consider the following mass related obsevables: the kinematic mass parameter which is obtained in tritium beta decay experiments whose current value is provided by Mainzand Troitsk experiments; the Majorana effective mass, it is a quantity that can be obtained in neutrinoless double beta decay experiments. In additionto these quantities, we also consider the sum of neutrinos masses, which isconstrained by cosmological data. Our analysis is performed by considering the possible mass orderings for the cases where we have two sterile neutrinosbeyond the three standard active neutrinos, whose addition is necessary to explain the results of LSND andMiniBooNE simultaneously. In this scenariot here are eight possible mass orderings, which are divided into three groups.In the first group we have two sterile neutrinos which are heavier thanthe three active neutrinos. In the second group the two sterile neutrinosare lighter than the three active neutrinos. Each of these two groups canbe further divided into 2 subgroups depending on the mass ordering ofthe active neutrinos that can be normal or inverted. In the third and lastgroup we have one sterile neutrino lighter and the other heavier than thethree active neutrinos. In this group there are four possibilities of ordering depending on the positioning of the sterile neutrinos with respect to theactive ones and on the mass ordering of the active states. We investigate systematically the masses observable in each of these scenarios.

Dans ce travail, nous étudions les propriétés statistiques de certains systèmes dynamiques déterministes et stochastiques. Nous nous intéressons particulièrement aux valeurs extrêmes et à la récurrence. Nous montrons l’existence de Lois pour les Valeurs Extrêmes(LVE) et pour les Statistiques des Temps d’Entrée (STE) et des Temps de Retour (STR) pour des systèmes avec décroissance des corrélations rapide. Nous étudions aussi la convergence du Processus Ponctuel d’Evènements Rares (PPER).Dans la première partie, nous nous intéressons aux systèmes dynamiques déterministes, et nous caractérisons complètement les propriétés précédentes dans le cas des systèmes dilatants. Nous montrons l’existence d’un Indice Extrême (IE) strictement plus petit que 1 autour des points périodiques, et qui vaut 1 dans le cas non-périodique, mettant ainsi en évidence une dichotomie dans la dynamique caractérisée par l’indice extrême. Dans un contexte plus général, nous montrons que le PPER converge soit vers une distribution de Poisson pour des points non-périodiques, soit vers une distribution de Poisson mélangée avec une distribution multiple de type géométrique pour des points périodiques. De plus, nous déterminons explicitement la limite des PPER autour des points de discontinuité et nous obtenons des distributions de Poisson mélangées avec des distributions multiples différentes de la distribution géométrique habituelle. Dans la deuxième partie, nous considérons des systèmes dynamiques stochastiques obtenus en perturbant de manière aléatoire un système déterministe donné. Nous élaborons deux méthodes nous permettant d’obtenir des lois pour les Valeurs Extrêmes et les statistiques de la récurrence en présence de bruits aléatoires. La première approche est de nature probabiliste tandis que la seconde nécessite des outils d’analyse spectrale. Indépendamment du point choisi, nous montrons que l’IE est constamment égal à 1 et que le PPER converge vers la distribution de Poisson standard. / In this work, we study the statistical properties of deterministic and stochastic dynamical systems. We are particularly interested in extreme values and recurrence. We prove the existence of Extreme Value Laws (EVLs) and Hitting Time Statistics (HTS)/ ReturnTime Statistics (RTS) for systems with decay of correlations against L1 observables. We also carry out the study of the convergence of Rare Event Point Processes (REPP). In the first part, we investigate the problem for deterministic dynamics and completely characterise the extremal behaviour of expanding systems by giving a dichotomy relying on the existence of an Extremal Index (EI). Namely, we show that the EI is strictly less than 1 for periodic centres and is equal to 1 for non-periodic ones. In a more general setting, we prove that the REPP converges to a standard Poisson if the centre is non-periodic, and to a compound Poisson with a geometric multiplicity distribution for the periodic case. Moreover, we perform an analysis of the convergence of the REPP at discontinuity points which gives the convergence to a compound Poisson with a multiplicity distribution different than the usual geometric one.In the second part, we consider stochastic dynamics by randomly perturbing a deterministic system with additive noise. We present two complementary methods which allow us to obtain EVLs and statistics of recurrence in the presence of noise. The first approach is more probabilistically oriented while the second one uses spectral theory. We conclude that, regardless of the centre chosen, the EI is always equal to 1 and the REPP converges to the standard Poisson. / Neste trabalho, estudamos as propriedades estatısticas de sistemas dinâmicos deterministicos e estocasticos. Estamos particularmente interessados em valores extremos e recorrência. Provamos a existência de Leis de Valores Extremos (LVE) e Estatısticas doTempo de Entrada (ETE) / Estatısticas de Tempo de Retorno (ETR) para sistemas comdecaimento de correlaçoes contra observaveis em L1. Também realizamos o estudo daconvergência dos Processos Pontuais de Acontecimentos Raros (PPAR). Na primeira parte, investigamos o problema para dinâmica determinıstica e caracterizamos completamente o comportamento extremal de sistemas expansores. Mostramos que ha uma dicotomia quanto 00E0 existência de um Indice de Extrema (IE). Nomeadamente, provamos que o IE é estritamente menor do que 1 em torno de pontos periodicos e é igual a 1 para pontos aperiodicos. Num contexto mais geral, mostramos que os PPAR convergem para um processo de Poisson simples ou um processo de Poisson composto, em que a distribuiçao de multiplicidade é geométrica, dependendo se o centro é um ponto aperiodico ou periodico, respectivamente. Além disso, realizamos uma analise da convergência dos PPAR em pontos de descontinuidade, o que conduziu à descoberta de convergência para um processo de Poisson composto com uma distribuiçao de multiplicidade diferente da usual distribuiçao geométrica. Na segunda parte, consideramos dinâmica estocastica obtida por perturbaçao aleatoria de um sistema determinıstico por inclusao de um ruıdo aditivo. Apresentamos duas técnicas complementares que nos permitem obter LVE e as ETE na presen¸ca deste tipo de ruıdo. A primeira abordagem é mais probabilıstica enquanto que a outra usa sobretudo teoria espectral. Conclui-se que, independentemente do centro escolhido, o IE é sempre igual a 1 e os PPAR convergem para o processo de Poisson simples.

Este estudo de coorte prospectivo avaliou cárie dentária e qualidade de vida em gestantes com e sem excesso de peso pré-gestacional. As gestantes foram avaliadas depois do 1º trimestre de gestação (T1) e após o parto (T2), sendo divididas em dois grupos: gestantes com excesso de peso pré-gestacional (GPE=53) e com peso normal (GPN=40). As pacientes foram avaliadas quanto a: cárie dentária (ICDAS), qualidade de vida (OHIP-14), dados antropométricos, socioeconômicos e hábitos comportamentais de higiene bucal. Os testes Qui-Quadrado, Mann-Whitney, McNemar e Wilcoxon foram adotados (p<0,05). Na avaliação dentro de cada grupo se comparando os tempos (T1 e T2) houve aumento de manchas brancas em GPN e GPE e neste, houve também aumento de lesões em dentina (p<0,05). Já quanto à análise do tratamento, GPN e GPE tiveram aumento de dentes restaurados e com restaurações deficientes (p<0,05). Dentro dos grupos GPN e GPE, houve diferenças significativas para lesões em esmalte e número de dentes perdidos. Na qualidade de vida, em GPN e GPE, houve diferenças quanto à limitação funcional, dor física e OHIP-14 total. Entretanto, em GPN houve diferença significativa para incapacidade psicológica e em GPE para incapacidade social (p<0,05). Na comparação entre os grupos GPN e GPE na qualidade de vida ocorreu diferença na dimensão invalidez (p<0,05). GPN e GPE mostraram redução no número de escovações diárias, frequência e uso de fio dental, após o parto. Conclui-se que tanto as gestantes com excesso de peso quanto as com peso normal apresentaram maior incidência de lesões em esmalte. Entretanto, aquelas com excesso de peso e obesidade tiveram, também, aumento das lesões em dentina e maior número de dentes perdidos. Após o parto, a qualidade de vida parece melhorar e os hábitos comportamentais de higiene bucal piorar. / This prospective cohort study evaluated dental decay and quality of life in pregnant women with and without excess pre-gestational weight. The pregnant women were evaluated after the first trimester (T1) of pregnancy and after childbirth (T2), been divided in two groups: pregnant women with excess pre-gestational weight (GPE=53) and normal weight (GPN=40). The patients were evaluated for: dental decay (ICDAS), quality of life (OHIP-14), anthropometric data, socioeconomic and behavioral habits of oral hygiene. The testes Chisquare, Mann-Whitney, McNemar and Wilcoxon were adopted (p<0,05). In the intra groups evaluation comparing (T1 and T2) there was an increase of white spots in GPN and GPE and in this, there was also an increase on dentin lesions (p<0,05). Within the GPN and GPE groups, there was significant differences for lesions on enamel and the number of missing teeth. In the quality of life, in the groups GPN and GPE, there was a difference in the limitation of physical pain and OHIP-14 total. However, in GPN there was significant difference for psychological incapacity and in GPE for social incapacity (p<0,05). In the comparison between the GPN and GPE groups in the quality of life, there was difference in the disability dimension (p<0,05). The GPN and GPE groups presented decrease in the number of tooth brushing, frequency and the use of dental floss, after childbirth. It is concluded that the number of pregnant women with or without excess weight presented incidence of enamel lesions. However, the pregnant women with excess weight and obesity also had a higher increase in the dentin lesions and a higher number of missing teeth. After childbirth, the quality of life seems to improve, and the behavioral habits of oral hygiene worsen.

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A legislação brasileira permite o uso de leite cru na fabricação de queijos curados se o período de cura for superior a 60 dias (a 5°C ou mais). Entretanto, não há evidência científica sólida de que durante a cura ocorre suficiente inativação de Brucella abortus, sob a perspectiva da segurança dos alimentos. Além disso, não há metodologia oficial para quantificação de brucelas em matriz alimentar. Desta forma este projeto propõe um protocolo para estudos da curva de decaimento de Brucella abortus durante a cura de queijos. Três partidas de queijo tipo parmesão foram feitas com leite tipo A pasteurizado, artificialmente contaminado com uma cepa pouco patogênica de Brucella abortus (1119-3). O queijo foi curado a 18°C e analisado a cada 3-4 dias até o 60º dia ou até que duas análises consecutivas fossem negativas. As amostras foram submetidas à pesquisa quantitativa de brucela em meio Farrel (36°C/3 dias). A média do Tempo de Redução Decimal (D18°C), ponderado pelas incertezas, foi de 4,31 ± 0,49 dias. Estes resultados são preliminares e é necessário realizar mais análises para gerar dados mais precisos sobre esse parâmetro, especialmente usando cepas de campo. O Tempo de Redução Decimal associado à cura do queijo é um parâmetro importante para os modelos de avaliação de risco da transmissão de brucelose pelo consumo de queijo. / Brazilian legislation allows the use of raw milk to produce ripened cheeses, when the ripening period is over 60 days (at 5°C or above). However, there is not solid scientific evidence that the ripening process inactivates enough amounts of Brucella abortus, from the food safety perspective. In addition, there is no official methodology for brucela counting in food matrix. So, this project proposes a protocol to study the decay curve of Brucella abortus during cheese ripening. Three batches of parmesan type cheese were made with pasteurized milk artificially contaminated with a less pathogenic strain of Brucella abortus (1119-3). The cheese was ripened at 18°C and analyzed each 3-4 days until 60th or until two consecutive negative results. The samples were submitted to quantitative culture for brucela in Farrel medium (36°C/3 days). The average of Decimal Reduction Time (D18°C), weighted by uncertainties, was 4,31 ± 0,49 days. This is a preliminary result and we need to run more samples to generate more accurate data about this parameter, specially using field strains. The Decimal Reduction Time associated with ripening step is an important data to input risk assessment models for cheese-born brucelosis.

A obesidade e a cárie dentária são problemas de saúde pública, que atingem a população infantil. O objetivo deste estudo foi identificar a prevalência de cárie dentária e relacioná-la com a concentração da enzima anidrase carbônica VI, do íon cálcio, fluxo salivar e quantidade de biofilme dentário em crianças com sobrepeso/obesidade. Foram avaliadas 112 crianças de 4 a 6 anos de idade, de ambos os gêneros. A análise antropométrica foi realizada (percentil do IMC) e através dessa análise as crianças foram divididas em dois grupos: G1 sobrepesos/obesos (n=41) e G2 normais (n=71). Os exames bucais realizados para a cárie dentária foram os índices ceo-s e ICDAS II, quantidade de biofilme dentário pelo Índice de Placa de Turesky e volume de fluxo salivar estimulado. A concentração do íon Cálcio na saliva foi analisada pelo kit colorimétrico e da enzima Anidrase Carbônica VI pelo kit ELISA. Na sequência, as crianças de cada grupo foram divididas em 3 subgrupos: LC (livres de cárie), LI (com lesões iniciais) e C (com cárie). Os testes Wilcoxon, Mann-Whitney, teste t e correlação de Spearman foram aplicados (p<0,05). Não houve diferença significativa no ceo-s entre os grupos. Houve maior concentração média de cálcio salivar no G1 (G1=2847,96mM; G2=1230,90mM;p=0,001) e maior concentração da Anidrase Carbônica VI no G2 (G1=3455,18 pg/mL; G2=442428,9pg/mL;p=0,000). No G1 houve correlação negativa entre o ceo-s e íon Cálcio (r=-0,444;p=0,010). Já no G2, houve correlação negativa entre placa e a Anidrase Carbônica VI (r=-0,551;p=0,014). Pode-se concluir que o íon cálcio é fator protetor para cárie dentária em crianças. Já a anidrase carbônica VI parece não ser biomarcador para a cárie dentária. / Obesity and dental caries are public health problems that affect the child population. The aim of this study was to identify the prevalence of dental caries and relate it to the concentration of the enzyme carbonic anhydrase VI, calcium ion, salivary flow, and dental plaque in overweight/obesity children. The study was conducted on 112 children aged 4-6, of both genders. Anthropometric analysis was performed (BMI percentile) and by this analysis the children were divided into two groups: G1 - overweight/obese (n=41) and G2 - normal (n=71). The oral examinations performed for dental caries were the dmfs and ICDAS II indexes, measurement of the amount of dental plaque by the Turesky Board Index and volume of stimulated salivary flow. The concentration of calcium ion in saliva was measured by a colorimetric kit and the enzyme carbonic anhydrase VI by an ELISA kit. Then, children from each group were divided into three subgroups: CF (caries-free), IL (initial lesions) and D (decayed teeth). The Wilcoxon test, Mann-Whitney, t test and Spearman correlation (p<0.05) were applied. There was no significant difference in the dmfs between groups. There was higher concentration of salivary calcium in G1 (G1=2847.96mM; G2=1230.90mM; p=0.001), and higher concentration of carbonic anhydrase VI in G2 (G1 = 3455.18 pg/ml; G2 = 442428.9pg/ml; p = 0.000). In G1, there was negative correlation between dmfs and salivary calcium (r = -0.444; p = 0.010). In G2, there was negative correlation between dental plaque and carbonic anhydrase VI (r=-0.551; p=0.014). It can be concluded that the calcium ion is a protective factor for dental caries in children. The carbonic anhydrase VI does not seem to be a biomaker of dental caries.

Neste trabalho foram estudados os níveis excitados do 193Ir produzidos a partir do decaimento &beta; do 193Os (T1/2 ~ 30h). Para a obtenção das amostras radioativas, ~ 5mg de Ósmio metálico (99% enriquecido em 192Os) foram irradiados no reator IEA-R1, sob um fluxo de nêutrons da ordem de 1012cm2 s1 e depois analisadas, empregando-se a técnica de espectroscopia &gamma; simples (unidimensional) com espectrômetro &gamma; de alta resolução, bem como as técnicas de espectroscopia de coincidência &gamma;&gamma; e de correlação angular direcional &gamma;&gamma; (&theta;) usando um sistema de aquisição multiparamétrica composto por 4 detectores HPGe. A partir destes dados, foi possível adicionar 28 transições a este esquema de decaimento, 11 das quais já eram conhecidas de outros estudos envolvendo reações nucleares, além de 17 observadas pela primeira vez. Também foram acrescentados 8 níveis excitados ao esquema de decaimento, sendo 3 conhecidos por outras reações e 5 completamente novos. Além disso, foi possível confirmar a suspeita encontrada na literatura de que os níveis a 848,93keV e 849,093keV são o mesmo, além de confirmar a existência de um nível excitado a 806,9keV. A análise de correlação angular direcional permitiu a definição do spin de do nível excitado a 874kev (5/2+), além de propor uma probabilidade de 79% do nível a 1078keV ter spin 5/2, e de restringir as possibilidades de spin para o nível novo a 960keV para duas (1/2 ou 3/2). Também foi possível determinar a razão de mistura multipolar (&delta;Ln+1/Ln) para 43 transições, sendo 19 pela primeira vez e praticamente todas as restantes com precisão melhor que a encontrada na literatura. Finalmente, foi feita uma tentativa de compreender o núcleo através de um modelo teórico, o qual reproduziu muito bem o estado fundamental e os dois primeiros estados excitados do 193Ir. / In this work, the excited levels of 193Ir populated by the &beta; decay of 193Os (T1/2 30h) were investigated. For that purpose, 5mg samples of 99%-enriched 192Os were irradiated under a thermal neutron flux of 1012s1 and then analysed both using single gamma spectroscopy and a 4-detector multiparametric acquisition facility, which provided data for both a &gamma;&gamma; coincidence analysis and a directional angular correlation &gamma;&gamma; (&theta;) study. From these data, 28 transitions were added to this decay scheme, 11 of which were previously known from nuclear reactions and 17 observed for the first time. Eight excited levels were also added to the decay scheme, 3 of which were known from nuclear reaction studies the remaining 5 are suggested for the first time. Moreover, it was possible to confirm suspicions found in reference that the levels at 848.93keV and 849.093keV are indeed the same; it was also possible to confirm the existence of an excited level at 806.9keV, which had been inferred, but not experimentally confirmed in &beta; decay studies to date. The angular correlation analysis allowed for the definition of the spin of the excited level at 874keV as 5/2+; moreover, the results showed a 79% probability that the spin of the 1078keV level is 5/2, and also restricted the spin possibilities for the new excited level at 960keV to two values (1/2 or 3/2). It was also possible to measure the multipolarity mixing ratio (&delta;Ln+1/Ln) for 43 transitions 19 of them for the first time and most of the others with a better precision than previously known. Finally, an attempt was made to understand the low-lying levels structure for this nucleus using a theoretical model, which reproduced the ground state and the two lowest-lying excited levels in 193Ir.

Fungos de podridão branca e fungos de podridrão parda são capazes de degradar a biomassa lignocelulósica utilizando diferentes mecanismos. Os fungos de podridão parda degradam a celulose e a hemicelulose enquanto modificam a lignina, sendo, portanto, as enzimas hidrolíticas ativas em substrato rico em lignina. O arsenal enzimático diferenciado desses fungos torna-os alvos para prospecção de enzimas que podem ser aplicadas em diversos processos biotecnológicos. O fungo Gloeophyllum trabeum é uma das espécies mais compreendidas deste grupo, e sabe-se que é capaz de degradar a celulose sem produzir CBHs. Além disso já foi reportado uma GH5 proveniente desse organismo com caraterísticas processivas. Nossa tentativa de clonagem dessa enzima (GtGH5) em A. nidulans A773 não foi bem sucedida, todavia nosso grupo esta repetindo os passos de clonagem e expressão. No genoma desse organismo esta presente um gene que codifica uma GH45. A GtGH45 foi a clonada e expressa com alto rendimento em A. nidulans cepa A773. A expressão, secreção e acumulaçao da GtGH45 foi positiva após 72 h de incubação em meio líquido (maltose como indutor), confirma por eletroforese SDS-PAGE do extrato enzimático concentrado e dialisado. A massa molar de 18,4 kDa foi consistente com a predição da sequência de 204 amino-ácidos obtída apartir da sequência gênica e corrobora com a caracterização por espectometria de massas (18,9 kDa). A análise filogenética é consistente com estudos anteriores, agrupando a proteína alvo com outras GH45s de basidiomicetos na subfamília C. A enzima purificada foi testada para determinação da especificidade pelo substrato apresentando maior atividade em arabinoxilana, xilana, arabinoxilana e CMC e foi capaz de gero celo-oligômeros a partir da hidrólise de PASC. O pH ótimo em CMC foi 2,5, além se demonstrar ser temoestável em ensaio de Thermoflour. A hidrólise enzimática de substratos lignocelulósicos derivados de cana-de-açúcar mostrou que a GtGH45 foi eficiente para suplementar coqueteis enzimáticos comerciais, principalmente na conversão de xilana. / White-rot and brown-rot basidiomycetes are able to transform lignocellulosic materials through different mechanisms. The brown-rot fungi are able to degrade cellulose and hemicellulose meanwhile modifies lignin. The hydrolytic enzymes of these fungi act on a lignin-enriched substrate, which makes them targets to prospect new enzymes for polysaccharides hydrolysis. Gloeophyllum trabeum is one of the best understood fungal species in this group. An interesting processive GH5-endoglucanase (EG) has been described in this species suggesting an unusual pathway for lignocellulosic degradation without cellobiohydrolases (CBH). Our first attempt to clone this GtGH5 was default but our grup is trying a new attempt of heterologous expression of this protein. Furthermore, G. trabeum genome points out for a low molar mass GH45-EG. Here we report on a recombinant high-yield G. trabeum ATCC 11539 GtGH45 production system. Expression and secretion of endoglucanase GtGH45 was positive after 72 h incubation of the transformed A. nidulans stain A773 in stationary liquid cultures (maltose as inductor). The SDS-PAGE electrophoresis of ultra-filtrated extract showed a single-band GtGH45 over expressed band. The molar mass of 18,4 KDa was consistent with the predicted 204 amino acids sequence derived from gene sequence analyses and corroborates with mass spectometry characterization (18,9 KDa). Even more, the phylogenetic analyze is consistent to previews studies, clustering the target protein with others GH45 from basidiomycetes at subfamily C. The purified protein was assayed for substrate specificity showing activity against xylan, arabinoxylan and PASC. GtGH45 was able to produce cello-oligomers from PASC. The optimum pH was 2.5 with CMC as the substrate. Xylan conversion was enhanced when GtGH45 was mixed with commercial enzymes in enzymatic hydrolysis of alkaline-sulfite pretreated sugar cane bagasse.

Fitas amorfas ferromagnéticas apresentam um decaimento com o tempo da susceptibilidade magnética. Tal fenômeno é conhecido como aftereffect ou desacomodação (DA). Para explicar esse fenômeno em ligas amorfas existem dois modelos importantes. O modelo de Allia e Vinai prevê uma dependência do decaimento relativo da permeabilidade A?/? com a magnetostricção de saturação ?s. Construímos um sistema de medidas adequado para realizar tais experimentos. Fabricamos e caracterizamos magneticamente três séries de composições Co77-x MnxSi14B9 (série 1: x = O, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9; série 2: x = 0, 2, 4, 6, 8, 10, 15); Co75-xMnx Fe1Mo1Si14B9 (série 3: 1, 3, 4, 5, 6, 7). Preocupados em evitar a dispersão de dados frequentemente observada na literatura, mantivemos os parâmetros de fabricação da fita constantes, bem como também a proporção de metalóides. Apesar dos cuidados, nossos resultados ainda apresentaram certa dispersão. Mesmo assim, foi possível concluir que nossos resultados são bem descritos pelo modelo. A caracterização magnética das fitas de Co-Mn e o estudo da dependência da DA com ?s nessas ligas deram origem a um artigo que se tornou nosso primeiro trabalho publicado em revista internacional. O modelo proposto por Kronmüllerer dá maior ênfase à cinética dos processos responsáveis pelo decaimento da susceptibilidade. Por isso foi necessário construir um novo sistema que nos permitisse realizar medidas em diferentes temperaturas. Realizamos medidas de desacomodação em Co67Fe4Mo1Si12B16. Conseguimos eliminar as contribuições irreversíveis da DA através de um tratamento térmico seguido de um processo de estabilização. Os resultados das medidas de DA foram ajustados de acordo com a expressão prevista pelo modelo, fornecendo um valor de ?0 ~ 10-12 segundos, que é da ordem do inverso da frequência de Debye nesses materiais. Concluímos que os dois modelos estudados são igualmente úteis no estudo da desacomodação e devem ser tratados como aspectos complementares do mesmo problema. / Amorphous ferromagnetic alloys show a decay of magnetic susceptibility. This phenomenon is known as aftereffect or disaccomodation (DA). There are two major models which explain this effect in amorphous materials. According to Allia et al., the decay of susceptibility presents a dependence on the saturation magnetostriction ?s. We built an adequate system for measurement of DA based on this model. Ribbons of compositions: Co77-x MnxSi14B9 (series 1: x = O, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9; series 2: x = 0, 2, 4, 6, 8, 10, 15); Co75-xMnx Fe1Mo1Si14B9 (series 3: 1, 3, 4, 5, 6, 7), were produced by melt-spinning. Production parameters were held constant as well as the metalloid concentration in order to prevent the data dispersion which is commonly observed in the literature. Despite our cane, results show a certain dispersion, although it is possible to confirm the validity of this model in describing such alloys The magnetic characterization and study of the dependence of DA on ?s on these alloys originated our first international publication. Kronmülller proposes another model which emphasizes the kinetics of the processes originating such decay. We built another system which allows measurements at, higher temperatures. Measurements were made in Co67Fe4Mo1Si12B16. Irreversible contributions were eliminated by a heat treatment followed by a stabilization process. Fitting of the resulting data to the theoretical expression yields a value of ?0 ~ 10-12 s, which corresponds in order of magnitude to the inverse of Debye frequency in these materials. We conclude that both models are useful in the study of DA in amorphous and should be treated as complementary aspects of the same problem.