A Área de Proteção Ambiental (APA) Lagoa Silvana está localizada na parte noroeste do município de Caratinga/MG. Desde sua criação pela Prefeitura Municipal de Caratinga, em 1996, os instrumentos de gestão, previstos em lei, que lhe permitiriam cumprir suas finalidades não foram elaborados, tornando-a em vão. Com intuito de colaborar com a consolidação da APA, este trabalho objetivou identificar, caracterizar e compreender as percepções dos atores sociais ligados a esta Unidade de Conservação (UC) quanto à sua efetivação. Para alcançar esses objetivos, realizou-se pesquisa de natureza descritivo-exploratória junto a esses agentes sociais envolvidos com a UC. A abrangência do estudo alcançou as comunidades residentes no interior da APA e instituições privadas, além de três órgãos públicos: a Prefeitura Municipal de Caratinga (PMC); o Parque Estadual do Rio Doce (PERD) e a Policia Militar de Minas Gerais (PMMG). Os dados foram coletados por meio da pesquisa documental; método survey, com questionário aplicado junto à população residente na APA; diagnóstico rápido participativo com as lideranças locais e entrevista semi-estruturada junto ao público sócio-institucional. A única localidade de moradores identificada na APA denomina-se Vila de Cordeiro de Minas e esta se revelou carente em termos de infra-estrutura básica e muito dependente de uma economia associada à silvicultura de eucalipto e aos repasses de recursos da união. Foram identificadas na área seis empresas: Cenibra S.A.; Usiminas S.A.; Clube Náutico Alvorada; Campus Piau; José A. Filho e Cia. LTDA. e o Clube Lagoa Nova. De modo geral, os atores sociais entrevistados demonstraram limitado conhecimento sobre a criação e situação da UC; porém, colocaram-se a disposição de contribuírem para sua consolidação. Na percepção do público envolvido com a APA, as principais limitações para efetivação da UC referem-se ao desconhecimento sobre existência e finalidades da APA, à inércia do poder público, à carência de serviços públicos, ao despreparo técnico e fragilidade dos órgãos de governo responsáveis pela gestão das UC’s municipais, à apatia e à falta de mobilização e conscientização da comunidade residente na APA, à pesca e caça predatória, ao desmate, incêndio e roubo de madeira, às nascentes desprotegidas, à falta de recursos ao produtor rural e à deficitária prestação de serviço médico-odontológico e de saneamento básico. Por outro lado, as principais vantagens e potencialidades estão associadas às presenças de uma instituição de ensino superior e de empresas de grande porte dentro dos limites da UC, às proximidades com o PERD e com a cidade de Ipatinga, à beleza cênica da área, ao convívio entre os moradores locais, às possibilidades de investimentos e geração de empregos e à oportunidade de participação direta nas tomadas de decisões referentes à APA. A partir deste contexto, algumas diretrizes foram propostas ao poder público, a saber: divulgar a existência e importância da APA; revisar seu decreto de criação; realizar os estudos socioambientais pertinentes; contratar equipe técnica para a elaboração dos Instrumentos de Gestão; estabelecer parcerias visando o efetivo funcionamento da UC; elaborar projeto de saneamento básico para Vila de Cordeiro de Minas; criar programas de recuperação e proteção ambiental; incentivar a agricultura familiar e; encomendar estudo sobre a viabilidade do ecoturismo na região.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA14MA131.pdf: 1544474 bytes, checksum: 4f496b43924d95177e7139e1fc3bca48 (MD5) Previous issue date: 2014-02-25 / This study aimed to investigate the use of immunocytochemistry (ICC) as a quick diagnostic method of rabies, and to perform a retrospective study of positive rabies cases of the Animal Pathology Laboratory (LAPA/CAV) archives, by using immunohistochemistry (IHC). The study was divided into two stages: data collection from the LAPA/CAV archives between 1987 and 2011, through the processing of paraffin embedded samples for histopathology and IHC; and clinical follow-up of susceptible animals between the years of 2012 and 2013, in which naturally dead or euthanized animals were necropsied. Central nervous system samples were collected for immunocytochemistry assessment, in addition to direct immunofluorescence (DIF) and histopathology with hematoxylin and eosin staining. The retrospective study showed that the affected animals ages ranged from 4 months to 10 years. Most frequently reported clinical signs were incoordination of the hind limbs, progressing to decumbency and death in 2-7 days. Northeastern (Vale do Itajaí) and eastern Santa Catarina were the regions with most of the cases submitted to the laboratory. During the clinical follow-up stage 13 animals presented the paralytic form of the disease, and one showed the furious form. The histological alterations observed in both stages of the study consisted of mild to severe perivascular lymphocytic and macrophagic meningoencephalitis, sometimes with foci of gliosis and neuronal necrosis; Negri inclusion bodies were observed in 85% of the retrospective study cases and 88% of the clinically assessed animals. IHC was essential to the diagnosis conclusion in the retrospective study, especially those in which no Negri bodies were found. The ICC was positive in 85,7% (12/14) of the cases, including one animal whose direct immunofluorescence was negative, and also proved to be a fast and easy-to-perform test. Rapid diagnostic techniques are extremely important as they allow for prevention and control measures to be taken quickly / Este trabalho teve como objetivos utilizar a imunocitoquímica (ICQ) como método rápido de diagnóstico para raiva, e realizar estudo retrospectivo de casos positivos de raiva nos arquivos do Laboratório de Patologia Animal (LAPA/CAV), através da imunohistoquímica (IHQ). O estudo foi dividido em duas etapas, levantamento de dados entre os anos de 1987 e 2011 no LAPA/CAV, através de processamento das amostras mantidas em parafina, para histopatologia e imunohistoquímica (IHQ), e acompanhamento clínico de animais suspeitos entre os anos de 2012 e 2013, no qual bovinos mortos naturalmente ou eutanasiados foram necropsiados. Amostras de sistema nervoso central foram coletadas para aplicação de ICQ, além de imunofluorecência direta e histopatologia com coloração de Hematoxilina e Eosina. No estudo retrospectivo observou-se que a idade dos animais afetados variou de quatro meses a 10 anos. Os principais sinais clínicos relatados foram incoordenação dos membros posteriores, evoluindo para decúbito e morte em 2 a 7 dias. As regiões do vale e leste de Santa Catarina foram às com maior numero de casos remetidos ao laboratório. Durante o acompanhamento clínico 13 animais apresentaram a forma paralítica da doença e um bovino apresentou forma furiosa. As alterações histológicas observadas, nas duas etapas do trabalho consistiram em meningonecefalite linfocítica e macrofágica perivascular, variando de leve a acentuada, por vezes com focos de gliose e necrose neuronal; Corpúsculos de inclusão de Negri foram observados em 85% dos casos do levantamento e 88% dos animais acompanhados clinicamente. A IHQ foi essencial para a conclusão do diagnóstico nos casos do estudo retrospectivo, especialmente aqueles em que não foram observadas inclusões de Negri. A ICQ foi positiva em 85,7% (12/14) dos bovinos com raiva, inclusive em um animal cuja IFD foi negativa, além de se mostrar um teste rápido e de fácil execução. Técnicas que buscam o diagnóstico rápido são extremamente importantes, pois permitem que medidas de prevenção e controle possam ser tomadas mais rapidamente

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-09-20T13:09:53Z No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-09-20T13:10:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-09-20T13:10:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-20T13:10:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2010-09-10 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Traditionally, confirmatory diagnosis of malaria is made by microscopic examination of blood. Therefore, the diagnosis of the disease may be complicated by the lack of people or equipment necessary to obtain a fast and reliable diagnosis, especially in areas of difficult access. For these and other reasons, rapid, practical and sensitive methods have been developed, such as immunochromatographic strips. Therefore, this work aimed to develop a lateral flow system for the diagnosis of malaria caused by Plasmodium falciparum. So, polyclonal and monoclonal antibodies against the protein HRP2 (Histidine rich protein 2) of Plasmodium falciparum were produced using a recombinant protein that it fused to a glutathione-S-transferase (rHRP2-GST, obtained in previous work). After hibridomas production, only 20 responded against the protein rHRP2-GST, and of these only four showed some react ivity against the native protein. The monoclonal antibody that reacted better on this last ELISA test and in an immunofluorescence was used on a lateral flow system standardized here. For this standardization, the system was first mounted in lateral flow competitive format followed by a sandwich system using polyclonal anti-rHRP2-GST. In assays using red blood cells parasitized by P. falciparum, positive results were obtained (detection of the infection in the immunochromatographic strip) using polyclonal antibodies. The system was stable within the test period, thus demonstrating that possibly in a controlled product ion environment, this lateral flow system could remain stable for a time suitable for marketing / Tradicionalmente, o diagnóstico confirmatório da malária é feito pelo exame microscópico do sangue. Logo, o diagnóstico da doença pode ser complicado com a falta de pessoas ou equipamentos necessários para a obtenção de um diagnóstico confiável e rápido. Por esta e outras razões, métodos rápidos, práticos e sensíveis vêm sendo desenvolvidos, como, por exemplo, as fitas imunocromatográficas. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um sistema em fluxo lateral para o diagnóstico de malária causada por Plasmodium falciparum. Logo, anticorpos policlonais e monoclonais contra a proteína HRP2 (“Histidine rich protein 2”) de Plasmodium falciparum foram produzidos utilizando para isso uma proteína recombinante desta fusionada a uma cauda de glutationa-S-transferase (rHRP2-GST, obtida em trabalhos anteriores). Após a obtenção dos hibridomas, apenas 20 responderam contra a proteína rHRP2-GST, e dentre estes apenas 4 apresentaram alguma reatividade contra a proteína nativa. O anticorpo monoclonal que melhor reagiu a este ultimo ELISA e em um ensaio de imunofluorescencia foi utilizado em um sistema de fluxo lateral padronizado nesta tese. Para esta padronização, foi montado primeiramente um sistema em fluxo lateral em formato competitivo seguido de um sistema em sanduíche utilizando anticorpos policlonais anti-rHRP-GST. Nos ensaios utilizando hemácias parasitadas por P. falciparum, foram obtidos resultados positivos (detecção da infecção na fita imunocromatográfica) usando os anticorpos policlonais. O sistema apresentou estabi l idade dentro do período de teste, demonstrando assim que possivelmente, em um ambiente de produção controlado, este sistema em fluxo lateral poderia permanecer estável por um tempo satisfatório para sua comercialização.

A doença de Chagas é uma zoonose causada pelo protozoário flagelado Trypanosoma cruzi. Estima-se que 8 milhões de pessoas estão infectadas com o T. cruzi em todo o mundo, principalmente na América Latina. Testes tradicionais de diagnóstico estão sendo gradualmente substituídos por métodos inovadores. A utilização de antígenos recombinantes foi proposta nos anos 90, e várias combinações foram testadas com soros de pacientes com diferentes formas clínicas de diferentes regiões da América Latina. Apesar do ganho em especificidade, estes testes apresentaram menor sensibilidade, frustrando expectativas. Este estudo objetivou analisar a variabilidade genética dos genes KMP11 e 1F8 que codificam antígenos comumente utilizados em diagnóstico experimental. Cepas de T. cruzi pertencentes a diferentes sub-grupos taxonômicos e de diferentes regiões foram analisadas para avaliar o impacto da variação antigênica em testes de diagnóstico. Maximizando a sensibilidade, evitar reatividade cruzada com epítopos de outros agentes patogênicos deve permitir a concepção de melhores testes rápidos. Num primeiro passo, DNA genômico foi extraído das seguintes cepas: Dm28c, Colombiana, Y, 3663, 4167, LL014 e CL Brener e foi realizada a amplificação dos genes 1F8 e KMP11 que codificam antígenos a partir destas cepas. Em seguida foram realizadas a clonagem, sequenciamento, expressão e detecção dos antígenos recombinantes. Na etapa final, análises de estruturas secundárias e terciárias, a última apenas para o antígeno 1F8, visualizaram as diferenças nas sequências de aminoácidos obtidas a partir de sequenciamento de DNA. Os resultados apresentados neste estudo mostram que o antígeno KMP11 de T. cruzi possui uma similaridade na sequência de aminoácidos muito elevada com o T. rangeli, mostrando a necessidade de um mapeamento antigênico desta proteína em todos os tripanosomatídeos que apresentaram alta similaridade com o antígeno de T. cruzi, como o T. rangeli, para verificar a presença de epítopos específicos de T. cruzi. O antígeno 1F8 pode ser uma ferramenta útil no diagnóstico da doença de Chagas e que será necessário aprofundar os conhecimentos sobre os determinantes antigênicos para futuramente elaborar poli-epítopos sintéticos adaptados de um maior número possível de antígenos, obtendo a maior especificidade e sensibilidade nos testes de diagnóstico sorológico e de teste rápido da doença de Chagas. Este estudo representa um passo crucial para a otimização de antígenos recombinantes para o diagnóstico da doença de Chagas. / Chagas disease is a zoonosis caused by the flagellate protozoan Trypanosoma cruzi. An estimated 8 million people are infected with T. cruzi worldwide, mostly in Latin America. Traditional diagnostic tests are gradually being replaced by more innovative methods, such as rapid tests and Real Time PCR. The use of recombinant antigens in serology or rapid tests has been proposed in the 90s, and several combinations were tested with sera from patients with different clinical forms in different regions in Latin America. Despite the gain in specificity, these tests showed lower sensitivity, frustrating expectations. This study aims to analyze the genetic variability of KMP11 and 1F8 genes coding for antigens commonly used in such experimental diagnostic. T. cruzi strains belonging to different taxonomic sub-groups and different regions were analyzed in order to assess the impact of antigenic variation in diagnostic tests. Maximizing sensitivity and avoiding cross-reactive epitopes for other pathogens should allow for the design of better rapid tests. In a first step, genomic DNA was extracted from the following strains: DM28c, Colombiana, Y, 3663, 4167, LL014 and CL Brener and we performed amplification of the 1F8 and KMP11 antigen encoding genes from these strains. Gene fragments were cloned, sequenced, and subcloned in expression vectors, followed by detection of the recombinant antigens. Using structural prediction and modeling, secondary and tertiary structures were analyzed the latter only for the 1F8 antigen, to visualize the differences in the amino acid sequences revealed from DNA sequencing. The results presented in this study show that the KMP11 T. cruzi antigen, has a very high similarity in amino acid sequence with T. rangeli, showing the need for antigenic mapping of this protein in all trypanosomatids that showed high similarity with the T. cruzi and T. rangeli, for the presence of specific epitopes of T. cruzi. The 1F8 antigen may be a useful tool in the diagnosis of Chagas disease and will need to know more about the antigenic determinants to further develop poly-epitope synthetic adapted from a larger number of possible antigens, obtaining the highest specificity and sensitivity in tests serological diagnosis and rapid test for Chagas disease.This study represents a crucial step for the optimization of recombinant antigens for the diagnosis of Chagas disease.

A doença de Chagas é uma zoonose causada pelo protozoário flagelado Trypanosoma cruzi. Estima-se que 8 milhões de pessoas estão infectadas com o T. cruzi em todo o mundo, principalmente na América Latina. Testes tradicionais de diagnóstico estão sendo gradualmente substituídos por métodos inovadores. A utilização de antígenos recombinantes foi proposta nos anos 90, e várias combinações foram testadas com soros de pacientes com diferentes formas clínicas de diferentes regiões da América Latina. Apesar do ganho em especificidade, estes testes apresentaram menor sensibilidade, frustrando expectativas. Este estudo objetivou analisar a variabilidade genética dos genes KMP11 e 1F8 que codificam antígenos comumente utilizados em diagnóstico experimental. Cepas de T. cruzi pertencentes a diferentes sub-grupos taxonômicos e de diferentes regiões foram analisadas para avaliar o impacto da variação antigênica em testes de diagnóstico. Maximizando a sensibilidade, evitar reatividade cruzada com epítopos de outros agentes patogênicos deve permitir a concepção de melhores testes rápidos. Num primeiro passo, DNA genômico foi extraído das seguintes cepas: Dm28c, Colombiana, Y, 3663, 4167, LL014 e CL Brener e foi realizada a amplificação dos genes 1F8 e KMP11 que codificam antígenos a partir destas cepas. Em seguida foram realizadas a clonagem, sequenciamento, expressão e detecção dos antígenos recombinantes. Na etapa final, análises de estruturas secundárias e terciárias, a última apenas para o antígeno 1F8, visualizaram as diferenças nas sequências de aminoácidos obtidas a partir de sequenciamento de DNA. Os resultados apresentados neste estudo mostram que o antígeno KMP11 de T. cruzi possui uma similaridade na sequência de aminoácidos muito elevada com o T. rangeli, mostrando a necessidade de um mapeamento antigênico desta proteína em todos os tripanosomatídeos que apresentaram alta similaridade com o antígeno de T. cruzi, como o T. rangeli, para verificar a presença de epítopos específicos de T. cruzi. O antígeno 1F8 pode ser uma ferramenta útil no diagnóstico da doença de Chagas e que será necessário aprofundar os conhecimentos sobre os determinantes antigênicos para futuramente elaborar poli-epítopos sintéticos adaptados de um maior número possível de antígenos, obtendo a maior especificidade e sensibilidade nos testes de diagnóstico sorológico e de teste rápido da doença de Chagas. Este estudo representa um passo crucial para a otimização de antígenos recombinantes para o diagnóstico da doença de Chagas. / Chagas disease is a zoonosis caused by the flagellate protozoan Trypanosoma cruzi. An estimated 8 million people are infected with T. cruzi worldwide, mostly in Latin America. Traditional diagnostic tests are gradually being replaced by more innovative methods, such as rapid tests and Real Time PCR. The use of recombinant antigens in serology or rapid tests has been proposed in the 90s, and several combinations were tested with sera from patients with different clinical forms in different regions in Latin America. Despite the gain in specificity, these tests showed lower sensitivity, frustrating expectations. This study aims to analyze the genetic variability of KMP11 and 1F8 genes coding for antigens commonly used in such experimental diagnostic. T. cruzi strains belonging to different taxonomic sub-groups and different regions were analyzed in order to assess the impact of antigenic variation in diagnostic tests. Maximizing sensitivity and avoiding cross-reactive epitopes for other pathogens should allow for the design of better rapid tests. In a first step, genomic DNA was extracted from the following strains: DM28c, Colombiana, Y, 3663, 4167, LL014 and CL Brener and we performed amplification of the 1F8 and KMP11 antigen encoding genes from these strains. Gene fragments were cloned, sequenced, and subcloned in expression vectors, followed by detection of the recombinant antigens. Using structural prediction and modeling, secondary and tertiary structures were analyzed the latter only for the 1F8 antigen, to visualize the differences in the amino acid sequences revealed from DNA sequencing. The results presented in this study show that the KMP11 T. cruzi antigen, has a very high similarity in amino acid sequence with T. rangeli, showing the need for antigenic mapping of this protein in all trypanosomatids that showed high similarity with the T. cruzi and T. rangeli, for the presence of specific epitopes of T. cruzi. The 1F8 antigen may be a useful tool in the diagnosis of Chagas disease and will need to know more about the antigenic determinants to further develop poly-epitope synthetic adapted from a larger number of possible antigens, obtaining the highest specificity and sensitivity in tests serological diagnosis and rapid test for Chagas disease.This study represents a crucial step for the optimization of recombinant antigens for the diagnosis of Chagas disease.

As doenças respiratórias agudas (DRAs) são as causas mais comuns de morbidez e mortalidade infantil mundial, podendo ser causadas por uma grande variedade de microorganismos. A fim de se detectar os vírus respiratórios mais comumente associados às infecções agudas do trato respiratório e traçar seu perfil epidemiológico, utilizamos um protocolo de GS RT-PCR (GeneScan Transcrição Reversa-Reação em Cadeia da Polimerase) para a rápida detecção simultânea do, vírus influenza A e B, parainfluenzavirus tipo 1, 2 e 3, picornavirus, metapneumovirus e o adenovírus. As amostras clínicas foram colhidas de crianças menores de cinco anos de idade, apresentando sintomas respiratórios, no Hospital Universitário (HU) da Universidade de São Paulo (USP), durante o ano de 2003. O GS RT-PCR se mostrou uma metodologia sensível e específica, capaz de detectar uma diversidade maior de agentes infecciosos do trato respiratório em relação à Imunofluorescência Indireta (IFI), reduzindo neste estudo a porcentagem de amostras negativas de 69,9% (235 amostras) para 22% (74 amostras). / A reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) assay based on automated fluorescent capillary electrophoresis and GeneScan software analysis was used to detect nine common respiratory viruses in clinical specimens from young children. Assays for human respiratory syncytial virus (HRSV), human parainfluenza viruses 1, 2, and 3, influenza A and B viruses, human metapneumovirus, adenovirus and picornavirus were incorporated into a screening PCR standard assay format. The optimized assay panel was used to test 336 respiratory specimens obtained from children hospitalized with acute respiratory illness (ARI) that had been previously tested by viral culture and indirect immunofluorescence staining (IIF). GS RT-PCR showed be a sensitive and specific methodology, able to detect a larger diversity of respiratory viruses regarding IFI, reducing in this study the percentage of negative samples of 69,9% (235 samples) to 22% (74 samples).

As doenças respiratórias agudas (DRAs) são as causas mais comuns de morbidez e mortalidade infantil mundial, podendo ser causadas por uma grande variedade de microorganismos. A fim de se detectar os vírus respiratórios mais comumente associados às infecções agudas do trato respiratório e traçar seu perfil epidemiológico, utilizamos um protocolo de GS RT-PCR (GeneScan Transcrição Reversa-Reação em Cadeia da Polimerase) para a rápida detecção simultânea do, vírus influenza A e B, parainfluenzavirus tipo 1, 2 e 3, picornavirus, metapneumovirus e o adenovírus. As amostras clínicas foram colhidas de crianças menores de cinco anos de idade, apresentando sintomas respiratórios, no Hospital Universitário (HU) da Universidade de São Paulo (USP), durante o ano de 2003. O GS RT-PCR se mostrou uma metodologia sensível e específica, capaz de detectar uma diversidade maior de agentes infecciosos do trato respiratório em relação à Imunofluorescência Indireta (IFI), reduzindo neste estudo a porcentagem de amostras negativas de 69,9% (235 amostras) para 22% (74 amostras). / A reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) assay based on automated fluorescent capillary electrophoresis and GeneScan software analysis was used to detect nine common respiratory viruses in clinical specimens from young children. Assays for human respiratory syncytial virus (HRSV), human parainfluenza viruses 1, 2, and 3, influenza A and B viruses, human metapneumovirus, adenovirus and picornavirus were incorporated into a screening PCR standard assay format. The optimized assay panel was used to test 336 respiratory specimens obtained from children hospitalized with acute respiratory illness (ARI) that had been previously tested by viral culture and indirect immunofluorescence staining (IIF). GS RT-PCR showed be a sensitive and specific methodology, able to detect a larger diversity of respiratory viruses regarding IFI, reducing in this study the percentage of negative samples of 69,9% (235 samples) to 22% (74 samples).