ARRUDA, Mariana Oliveira. Análise retrospectiva de aspectos clínico-epidemiológicos de infecções respiratórias agudas virais em crianças atendidas em um serviço de emergência de um hospital terciário de Fortaleza. 2011. 117 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-04-29T13:23:35Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_moarruda.pdf: 1566144 bytes, checksum: a82c4d21581b2ad8b10e1585c2d181f7 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-04-29T16:29:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_moarruda.pdf: 1566144 bytes, checksum: a82c4d21581b2ad8b10e1585c2d181f7 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-29T16:29:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_moarruda.pdf: 1566144 bytes, checksum: a82c4d21581b2ad8b10e1585c2d181f7 (MD5) Previous issue date: 2011 / Acute respiratory infections (ARI) are important causes of morbidity and mortality worldwide, affecting mainly children under five years old. These infections can be caused by different organisms, but viruses are the most frequent. This study aimed to describe clinical and epidemiological aspects of viral ARI in children 0-12 years of age treated in the emergency department of a tertiary hospital in the city of Fortaleza, from January 2007 to December 2008. Therefore, we collected 1318 samples of nasopharyngeal secretions of children. The samples were subjected to indirect immunofluorescence for detection of the following respiratory viruses: respiratory syncytial virus (RSV), human metapneumovirus (hMPV), adenovirus, influenza A and B and parainfluenza 1, 2 and 3. The results of this study showed that at least one respiratory virus was detected in 383 (29.1%) samples. The most prevalent virus was RSV (44.4%), and presented the same seasonal pattern of a defined association with the rainy season. Co-infection occurred in 12 (3.1%) samples and RSV was the most frequently associated. The average age of patients was 23 months and there was no association between gender of these patients and positivity of the tests, although most children were male. Among the clinical diagnoses of viral etiology, there was predominance of upper respiratory infection diseases (URID) (51.2%), and in relation to the specific diagnosis of the lower respiratory infections diseases (LRID), stood out pneumonia. Therefore, the results of this study highlight the importance of viruses as causes of ARI in children in Fortaleza, with the highest rates occurring between the months March to June, differing from the southern region, where the highest rates are found in the months from July to October. / As infecções respiratórias agudas (IRA) são importantes causas de morbidade e mortalidade em todo o mundo, acometendo principalmente crianças menores de cinco anos de idade. Essas infecções podem ser causadas por diferentes microrganismos, porém os vírus são os mais frequentes. Esse estudo teve como objetivo descrever aspectos clínicos e epidemiológicos de IRA de etiologia viral em crianças de zero a 12 anos de idade atendidas em serviço de emergência de um hospital terciário da cidade de Fortaleza-CE, no período de janeiro de 2007 a dezembro de 2008. Para tanto foram coletadas 1318 amostras de secreção de nasofaringe das crianças. As amostras foram submetidas à técnica de imunofluorescência indireta para detecção dos seguintes vírus respiratórios: vírus sincicial respiratório (VSR), metapneumovírus humano (MPVh), adenovírus, influenza A e B e parainfluenza 1, 2 e 3. Os resultados desse estudo mostraram que pelo menos um vírus respiratório foi detectado em 383 (29,1%) amostras. O vírus mais prevalente foi o VSR (44,4%), tendo o mesmo apresentado um padrão de sazonalidade definido, com associação a estação chuvosa. A co-infecção ocorreu em 12 (3,1%) amostras e o VSR foi o mais frequentemente associado. A média de idade dos pacientes foi de 23 meses e não houve associação entre o gênero desses pacientes e a positividade dos exames, apesar da maioria das crianças serem do sexo masculino. Entre os diagnósticos clínicos de etiologia viral, houve predomínio de infecção da via aérea superior (IVAS) (51,2%), e em relação ao diagnóstico específico das infecções da via aérea inferior (IVAI), destacou-se a pneumonia. Portanto, os resultados desse estudo ressaltam a importância dos vírus como causadores de IRA em crianças na cidade de Fortaleza, com as maiores taxas ocorrendo entre os meses de março a junho, diferenciando-se da região Sul do país, onde as maiores taxas são encontradas nos meses de julho a outubro.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2016-08-09T20:37:17Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Anniely Carvalho Rebouças Oliveira - 2016.pdf: 1878998 bytes, checksum: 1afecfd5948d2abb2a5374cbeb9ff005 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2016-08-09T20:41:31Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Anniely Carvalho Rebouças Oliveira - 2016.pdf: 1878998 bytes, checksum: 1afecfd5948d2abb2a5374cbeb9ff005 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-09T20:41:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Anniely Carvalho Rebouças Oliveira - 2016.pdf: 1878998 bytes, checksum: 1afecfd5948d2abb2a5374cbeb9ff005 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-04-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The acute respiratory infections (ARIs) are an important cause of morbidity and mortality worldwide. Viruses have an important role in the etiology of the respiratory infections. Children less than five years of age have about four to six ARIs per year and this is a common cause of hospitalization, mainly in developing countries. In Brazil, particularly in the West-Central region, studies that evaluated the circulation of respiratory viruses in the pediatric population are scarce. Thus, this study aimed to investigate the occurrence of respiratory viruses in the pediatric population, from Goiânia-Goiás. Between May/2014 and May/2015, samples of nasal swabs were collected from children from zero to six years of age presenting or not respiratory symptoms, attended at the Materno Infantil hospital in Goiânia. For the molecular screening, 16 viruses were investiged using three Multiplex Nested-PCR protocols. It two hundred and fifty one samples were collected, of wich 90 (35,9%) were positive for at least one respiratory agent, being rhinovirus (31%), respiratory syncytial virus (27,4%) and parainfluenza virus (13,3%) the most prevalent. Children under two years of age had greater overall positive, although not statistically significant. Similar detection rate was observed among the groups symptomatic (37%) and asymptomatic (34,5%). For the symptomatic group, children whose samples were collected during the dry period (p<0,05) and those with up to two years of age were most affected (p<0,05). In the asymptomatic group no statistical difference was observed. It was observed rate of co-detection of 6,4% (16/251), mostly in samples of symptomatic patients (13/16) (p<0,05). The evaluation of the temporal profile showed a higher detection rate during the dry season, less rainfall, relative humidity and cooler temperatures. The results reinforce the importance of respiratory viruses in children and contribute to further understanding of the epidemiological and temporal factors associated with different pathogens in our region. Thus, they open the way to new studies in the state of Goiás, also providing information to assist in the construction of control measures and more effective prevention of these infections. / As infecções do trato respiratório (ITRs) representam importante causa de morbimortalidade em todo o mundo, sendo os vírus importantes agentes etiológicos. Estima-se que grande parte das crianças menores de cinco anos de idade tenha a cada ano de quatro a seis ITRs, sendo esta causa comum de hospitalização, especialmente em países em desenvolvimento. No Brasil, em particular na Região Centro-Oeste, estudos que avaliem a circulação de vírus respiratórios em população pediátrica são escassos. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo investigar a ocorrência de diferentes vírus respiratórios em população pediátrica de Goiânia-Goiás, apresentando ou não quadro sintomático respiratório. Durante o período de maio/2014 a maio/2015, foram coletadas amostras de swab respiratório de crianças entre zero e seis anos de idade, apresentando quadro de infecção respiratória ou assintomáticas para a mesma, atendidas no Hospital Materno Infantil, em Goiânia. As amostras foram submetidas à triagem molecular para 16 vírus respiratórios por meio de três protocolos de multiplex nested-PCR. No total, 251 amostras foram coletadas, das quais 90 (35,9%) apresentaram positividade para pelo menos um agente respiratório, sendo rinovírus (31%), vírus sincicial respiratório (27,4%) e parainfluenza (13,3%) os mais frequentes. Crianças com até dois anos de idade apresentaram maior positividade global, contudo sem diferença estatística. Índice de detecção semelhante foi observado entre os grupos sintomático (37%) e assintomático (34,5%). Para as crianças do grupo sintomático, foram mais afetadas aquelas cujas amostras foram coletadas durante período de seca (p<0,05) e aquelas com até dois anos de idade (p<0,05). No grupo assintomático, nenhuma diferença estatística foi observada. Foi observado índice de co-detecção de 6,4% (16/251), sendo a maioria de indivíduos sintomáticos (13/16) (p<0,05). A avaliação do perfil temporal demonstrou maior índice de detecção nos meses de seca, com menor precipitação pluviométrica, umidade relativa do ar e temperaturas mais frias. Os resultados obtidos no presente estudo reforçam a importância dos vírus respiratórios na população pediátrica, auxiliando na compreensão dos fatores epidemiológicos e temporais associados aos diferentes patógenos em nossa região. Desta forma, abrem caminhos para novos estudos no estado de Goiás, fornecendo ainda informações que auxiliem na construção de medidas de controle e prevenção mais eficazes contra estas infecções.

Submitted by Heitor Rapela Medeiros (heitor.rapela@ufpe.br) on 2015-03-06T13:45:50Z No. of bitstreams: 2 TESE MARIA JOSE COUTO OLIVEIRA.pdf: 3444115 bytes, checksum: 23f3f8857155eb1b13b9abe031e11e3b (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-06T13:45:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE MARIA JOSE COUTO OLIVEIRA.pdf: 3444115 bytes, checksum: 23f3f8857155eb1b13b9abe031e11e3b (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-02-29 / Durante a pandemia (2009-2010) com o vírus influenza A(H1N1)pdm09 foi recomendado o tratamento com o oseltamivir ou zanamivir. Com o aumento da detecção de vírus de Influenza A (H1N1) sazonal resistente ao oseltamivir houve a preocupação de que o mesmo ocorresse com o novo vírus pandêmico. Nesta pandemia, muitos pacientes com suspeita de infecção pelo vírus A(H1N1)pdm09 tiveram o teste negativo para influenza A, ficando sem uma definição do agente etiológico. Testes moleculares podem detectar a presença de mutações relacionadas à resistência ao oseltamivir, à virulência e antigenicidade do vírus, assim como podem definir o diagnóstico etiológico por vírus respiratórios. Para esclarecer essas questões dois estudos foram realizados. O primeiro foi a “Caracterização genética dos vírus influenza A (H1N1)pdm09 detectados no Estado de Pernambuco, Brasil, no período de maio de 2009 a maio de 2010”, com o objetivo de verificar a resistência desse vírus ao oseltamivir e também avaliar a diversidade genética dos vírus circulantes. Foram analisadas 118 amostras do vírus A(H1N1)pdm09 através de pirosequenciamento, precedida da transcrição reversa e reação em cadeia da polimerase em tempo real (rRT-PCR) para amplificação do H1N1pdm-N1 fragmento C e posterior detecção da mutação H274Y, utilizando o equipamento PyroMark Q-96 ID no modo SNP (single nucleotide polymorphism). Foram sequenciados os genes da hemaglutinina de 31 amostras, pela técnica de Sanger, de acordo com o Protocolo do CDC para Influenza. Foi utilizado o kit “Big Dye® terminator Cycle Sequencing” (Applied Biosystem) e o produto submetido ao método de precipitação X-terminator. A mutação H274Y não foi observada, indicativo de que os vírus sequenciados eram sensíveis ao oseltamivir. As 31 amostras sequenciadas mostraram-se intimamente relacionadas com a cepa de referência A/California/7/2009(H1N1), entretanto, foram detectados 14 tipos de mutações, porém sem implicação no aumento da virulência. O segundo estudo realizado: ”Aspectos epidemiológicos e virológicos da infecção por Influenza A(H1N1)pdm09 e frequência de outros vírus respiratórios no Estado de Pernambuco, Brasil: 2009 – 2010” teve como objetivo analisar a pandemia de influenza no estado e identificar os vírus respiratórios responsáveis pelo quadro clínico que levou à hipótese diagnóstica da influenza pandêmica. Foram analisados espécimes de 705 casos para detecção do vírus da influenza A, utilizando-se a PCR em tempo real, sistema TaqMan, de acordo com o Centers for Disease Control and Prevention / Atlanta, das quais, 26,3% (186/705) foram positivas para o vírus A(H1N1)pdm09 e 2,3% (16/705) positivas para influenza A sazonal. Para detecção de outros vírus respiratórios foram analisadas 146 amostras negativas para o vírus A (H1N1)pdm09 por RT-PCR multiplex, com o kit “FTD Respiratory21 PLUS”. Entre as amostras negativas para o vírus A(H1N1)pdm09, 36,5% (53/146) foram positivas para outros vírus respiratórios, com três casos de infecção viral múltipla. Foram detectados: rhinovírus (41%), coronavírus 43 (14,3%), metapneumovírus humano (14,3%), bocavírus (7,1%), vírus respiratório sincicial (5,3%), influenza B (3,6%), parainfluenza 2 (3,6%), parainfluenza 3 (3,6%), adenovírus (1,8%), coronavírus HKU (1,8%), enterovírus (1,8%) e parainfluenza 1 (1,8%). Estes resultados mostram a circulação, além da Influenza A(H1N1)pdm09, de outros vírus respiratórios no estado em 2009-2010; evidenciam a necessidade da análise laboratorial dos casos suspeitos de influenza e a importância do monitoramento laboratorial das infecções respiratórias, uma vez que o diagnóstico etiológico baseado apenas em critérios clínicos nem sempre é acurado.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-12-14T08:11:41Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - ítalo de Araújo Castro - 2015.pdf: 2281966 bytes, checksum: fa56d97881ce8b52bd310d3446c61552 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-12-14T08:16:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - ítalo de Araújo Castro - 2015.pdf: 2281966 bytes, checksum: fa56d97881ce8b52bd310d3446c61552 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-14T08:16:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - ítalo de Araújo Castro - 2015.pdf: 2281966 bytes, checksum: fa56d97881ce8b52bd310d3446c61552 (MD5) Previous issue date: 2015-04-23 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Acute respiratory infection (ARI) is a major cause of morbity and mortality worldwide, particularly among children, and most of these infections are caused by viruses. Respiratory viral infections can cause symptoms ranging cough, coryza, sneezing, fever and airflow obstruction. Furthermore, the infection poses as an important trigger of asthma exacerbation, frequent clinical condition in children, and its prevalence has been rising in the last years. There are few epidemiologic studies analyzing the relationship between ARIs and asthma in Brazil. Based on this background, the aim of the study was investigate the occurrence of viral respiratory infections in pediatric patients with and without asthma in Goiânia – Goiás. Between august, 2012 and august, 2013 225 nasal aspirates and/or nasal swab samples were obtained from children with four to 14 years old. The samples were screened by Multiplex Nested-PCR for detection of 16 common respiratory viruses. From 225 samples, 42 had at least one virus detected. Samples from four different patients had more than one virus detected. The viral detection rate in ARI patients (25%), exacerbated asthma (16.3%) and stable asthma (14.8%) showed no significant difference. The most frequent viruses detected were Rhinovirus (28.6%), FLUA (11.9%), Adenovirus (11.9%), HBoV (11.9%) and RSVA (9.5%). The monthly detection rate was higher during the rainy season, period marked by great rainfall and high relative air humidity. Among the positive samples, RSV were detected during the great rainfall months and high air humidity, while the FLU and HBoV were detected during the winter months, period with low air humidity in the Mid-West region. The seasonal profile from the other viruses was unclear. The obtained results reinforces the importance of the viral pathogens in the pediatric population. Although the viral detection rate was not statistically significant, the presence of these pathogens in children is an important matter for consideration, especially to delineate control and prevention measures concerning ARIs and its impact on preexistent asthma. Hence, this study is the first of the kind in the region, and the data provided tried to fill the knowledge gaps about seasonality and circulation of these pathogens. / Infecções agudas do trato respiratório (ITR) representam importante causa de morbidade e mortalidade entre crianças e os vírus constituem os principais agentes etiológicos responsáveis por essas infecções. Além da capacidade de causar doenças com sintomas comuns desde a tosse, coriza, espirros, febre e obstrução nasal, estão frequentemente associados à exacerbação de quadros de asma, condição clínica crônica mais frequente em crianças cuja prevalência vem aumentando nos últimos anos. Considerando a população de asmáticos, os dados epidemiológicos relacionando infecções respiratórias virais e asma no Brasil são escassos. Neste contexto, o presente estudo objetivou investigar a ocorrência de infecções por vírus respiratórios em população pediátrica asmática e não asmática da cidade de Goiânia – Goiás. Para isso, entre agosto de 2012 e agosto de 2013 foram coletadas 225 amostras de aspirado nasofaríngeo e/ou swab nasal de crianças entre quatro e 14 anos de idade, as quais foram submetidas à triagem molecular para detecção de 16 vírus respiratórios, por meio de três protocolos de Multiplex Nested-PCR. Das 225 amostras, 42 apresentaram positividade para pelo menos um vírus. Amostras de quatro pacientes apresentaram mais de um vírus detectado. Os índices de detecção viral encontrados para pacientes apresentando ITR (25%), asma exacerbada (16,3%) e asma estável (14,8%) não apresentaram diferenças significativas. Os vírus mais frequentemente detectados foram os Rinovírus (28,6%), Influenza A (FLUA) (11,9%), Adenovírus (11,9%), Bocavírus Humanos (HBoV) (11,9%) e Vírus Sincicial Respiratório A (RSV) (9,5%). Maiores índices de detecção viral foram observados durante a estação chuvosa da região, período de maior precipitação pluviométrica e umidade relativa do ar (UR). Dentre as amostras positivas, os RSV foram detectados nos meses de maior precipitação pluviométrica e UR, enquanto os FLU e HBoV foram detectados durante os meses de inverno coincidindo com a estação seca. Os demais vírus não apresentaram perfil sazonal definido. Os dados obtidos ressaltam a importância dos agentes virais na população pediátrica. Embora o índice de detecção viral não tenha sido significativo entre os pacientes apresentando asma exacerbada e asma estável, a presença desses agentes infecciosos em crianças constitui um fator a ser considerado ao traçar-se estratégias de prevenção e controle dos quadros de ITR, e seu impacto em quadros preexistentes de asma. Além disso, os resultados agregam conhecimento sobre a circulação e sazonalidade desses patógenos, uma vez que este é o primeiro estudo visando a detecção molecular de vírus respiratórios em crianças na região Centro-Oeste.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-27Bitstream added on 2014-06-13T19:11:25Z : No. of bitstreams: 1 souza_avg_me_botfm.pdf: 5208360 bytes, checksum: d0caf95e74fc05f32950a4bbcec4f765 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O Vírus Sincicial Respiratório humano (VSR) é o principal agente causal das Infecções Respiratórias Agudas (IRAs) em lactantes e pré-escolares. Apresenta dois subgrupos – A e B – sendo o primeiro responsável por quadros clínicos mais graves. Os RNA mensageiros virais codificam 11 proteínas conhecidas, das quais a proteína F é responsável pela fusão viral à célula e se apresenta na forma de F0 com peso molecular de 67kDa, podendo ser clivada em duas unidades: F2 de 20kDa e a F1 de 47kDa. A proteína F recombinante (Fr), expressa em E.coli (BL21A no vetor pET28a), foi cedida por pesquisadores da UNESP de São José do Rio Preto. Com intuito de produzir anticorpos monoclonais contra a proteína Fr para fins de diagnóstico laboratorial, inoculamo-la em camundongos isogênicos Balb/c. Durante o desenvolvimento do monoclonal, foi necessário a eliminação da contaminação de cultura por Mycoplasma ssp. Após ajuste de dose de inoculação e descontaminação do antígeno (hipótese: contaminação com endotoxinas provenientes de E.coli), seis clones secretores de anticorpos monoclonais foram produzidos (5 do tipo IgM e 1 do tipo IgG2a) e testados, simultâneamente, contra toxina bacteriana e proteína Fr (40μg/mL) por técnica de ELISA indireto. Paralelamente, testes por citometria de fluxo foram realizados, incubando-se os clones obtidos com E.coli (bactéria com membrana permeabilizada e in natura). Os clones (VIRSV2-87A74 e VIRSV2-87A80) apresentam um reconhecimento inespecífico de proteínas da E. coli e não foi possível caracterizar os clones obtidos em função da dificuldade de se obter novas amostras de proteína Fr. Para o futuro, os anticorpos obtidos deverão ser marcados com isotiocinato de fluoroceína e comporem um amplo teste epidemiológico em paralelo com o kit disponível em mercado respeitando a sazonalidade da doença. Novos ensaios para caracterização... / The Human Respiratory Syncytial Virus (HRSV) is the main cause of Acute Respiratory Insufficiency in suckling child and children below 5 years old. It has 2 subgroups – A and B – being the first one responsible for more dangerous clinical situations. The viral messenger RNA codifies 11 known proteins, which the F protein is responsible for the viral fusion and it is presented as F0 with molecular weight of 67kDa, but once is broke it generates two units: F2 with 20kDa and F1 with 47kDa. The recombinant F (Fr) protein were expressed on E.coli (BL21A, on vector pET28a), and it was given to us by researches from UNESP of São José do Rio Preto. Wishing to produce monoclonal antibodies (Mab) against Fr protein to laboratorial diagnosis, mice (Balb/c) were inoculated with de antigen (Fr protein). During the development of the Mab, it was necessary to eliminate, from the culture, Mycoplasma spp. After we adjusted the necessary amount to inoculate on the mice and eradicated the contamination of the antigen (hypotheses: there were endotoxins from the E.coli), six clones that secrete Mab were produced (5 of the kind IgM, and 1 of the kind IgG2a) and they were tested, simultaneously, against bacterium toxin and Fr protein (40μg/mL) using ELISA technique. Together, flow cytometry test were performed when we incubated the clones with E. coli (bacterium with permeable membrane and in natura). The clones (VIRSV2-87A74 and VIRSV2-87A80) presented an unspecific recognition for the proteins from E.coli and it was not possible to characterize the cells because we couldn´t get more samples of Fr protein. For the future, the Mab should be conjugated with FITC and then, they must be part of a wide epidemiologic test side by side from the commercial kit, always respecting the seasonal disease. New assays to characterize antibodies (like Western blotting and imunepreciptation) are already being done... (Complete abstract click electronic access below)

Viruses are etiologic agents of a great number of diseases of human beings and animals. However, there are only a little amount antiviral medicines available that is almost exclusively used in human health. Several studies have demonstrated that propolis has biological activities against virus, bacteria and fungi. Its chemical composition is diverse varying according to season, plants available and collection. The antiviral activity of ethanolic extracts of propolis have already been described for some human viruses. The aim of this study was to evaluate the antiviral activity of propolis ethanolic extracts against two viruses causing respiratory disease in small animals, the feline calicivirus (FCV) and canine adenovirus 2 (CAV-2), and also the bovine diarrheal disease virus (BVDV).Two samples of ethanolic extracts of propolis were used; one obtained in the lab and another obtained commercially. In order to perform the experiments the MTT test ((3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) was used to determine the 50% cytotoxic concentration (CC50), the 50% inhibitory concentration (IC50) and, the terapeuthic index (TI=IC50/CC50). The propolis extracts were added to the cell cultures in different moments of the viral infection. They were included before virus inoculation, after virus inoculation, and before and after virus inoculation. The two propolis samples showed similarities in the qualitative analysis but they had small differences in the quantitative analysis. The CC50 of the extracts varied among 251 and 343μg/ml and the commercial extract showed less toxicity. Both extracts demonstrated better antiviral activity when added before virus inoculation and the ITs varied from 6 to 13. The best results were obtained with the propolis extracted in the lab. The BVD was the virus showing the greater sensitivity to the ethanolic extracts in the conditions applied. Taken all the data together, it can be concluded that the ethanolic extract of propolis has a potential for future use as a medicine in the therapy of respiratory disease caused by CAV-2, and, also, that the action mechanisms on BVDV should be better evaluated in detail regarding the hepatitis C virus (HCV). / Os vírus são os agentes etiológicos de um grande número de enfermidades em seres humanos e animais, no entanto, há um pequeno número de fármacos antivirais disponíveis para o uso que é feito quase exclusivamente na medicina humana. Estudos demonstram que a própolis apresenta variada atividade biológica frente a vírus, bactérias e fungos. Sua composição química é bastante diversa, podendo variar conforme a época, vegetação e área de coleta. A atividade antiviral de extratos aquosos e etanólicos de própolis já foi descrita para alguns vírus humanos. O presente trabalho tem como objetivo avaliar a atividade antiviral do extrato de própolis frente a dois vírus causadores de doença respiratória em pequenos animais, o calicivírus felino (FCV) e o adenovírus canino tipo 2 (CAV-2), e também ao vírus da diarréia viral bovina (BVDV). Foram testadas neste experimento duas amostras de extrato etanólico de própolis, uma delas obtida comercialmente e a outra extraída no laboratório. Para realizar este estudo utilizou-se o método colorimétrico do MTT (3-(4,5 dimetiltiazol-2yl)-2-5-difenil-2H tetrazolato de bromo), através do qual determinou-se a concentração citotóxica a 50% (CC50), concentração inibitória a 50% (IC50) e o índice terapêutico (IT=IC50/CC50). Os extratos de própolis foram adicionados ao cultivo celular em diferentes momentos da infecção viral. Estes foram incluídos antes da inoculação viral, depois da inoculação viral, e antes e depois da inoculação viral. As duas amostras de própolis apresentaram similaridades na análise qualitativa e pequenas diferenças na análise quantitativa. A CC50 destes extratos variou de 251 a 343μg/ml sendo que o extrato comercial apresentou-se ligeiramente menos tóxico. Ambos os extratos demonstraram melhor atividade antiviral quando adicionados anteriormente à inoculação viral apresentando ITs que variaram de 6 a 13. Os melhores resultados foram obtidos com o própolis extraído no laboratório. O BVDV foi o vírus que demonstrou maior sensibilidade ao extrato etanólico de própolis nas condições experimentais aplicadas. Levando-se em consideração os resultados obtidos, pode-se concluir que o extrato etanólico de própolis apresenta potencial para futura utilização como fármaco no tratamento de doenças respiratórias causadas pelo CAV2 e que o mecanismo de ação sobre o BVDV deve ser avaliado com maiores detalhes com vistas ao vírus da hepatite C (HCV).

As doenças respiratórias agudas (DRAs) são as causas mais comuns de morbidez e mortalidade infantil mundial, podendo ser causadas por uma grande variedade de microorganismos. A fim de se detectar os vírus respiratórios mais comumente associados às infecções agudas do trato respiratório e traçar seu perfil epidemiológico, utilizamos um protocolo de GS RT-PCR (GeneScan Transcrição Reversa-Reação em Cadeia da Polimerase) para a rápida detecção simultânea do, vírus influenza A e B, parainfluenzavirus tipo 1, 2 e 3, picornavirus, metapneumovirus e o adenovírus. As amostras clínicas foram colhidas de crianças menores de cinco anos de idade, apresentando sintomas respiratórios, no Hospital Universitário (HU) da Universidade de São Paulo (USP), durante o ano de 2003. O GS RT-PCR se mostrou uma metodologia sensível e específica, capaz de detectar uma diversidade maior de agentes infecciosos do trato respiratório em relação à Imunofluorescência Indireta (IFI), reduzindo neste estudo a porcentagem de amostras negativas de 69,9% (235 amostras) para 22% (74 amostras). / A reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) assay based on automated fluorescent capillary electrophoresis and GeneScan software analysis was used to detect nine common respiratory viruses in clinical specimens from young children. Assays for human respiratory syncytial virus (HRSV), human parainfluenza viruses 1, 2, and 3, influenza A and B viruses, human metapneumovirus, adenovirus and picornavirus were incorporated into a screening PCR standard assay format. The optimized assay panel was used to test 336 respiratory specimens obtained from children hospitalized with acute respiratory illness (ARI) that had been previously tested by viral culture and indirect immunofluorescence staining (IIF). GS RT-PCR showed be a sensitive and specific methodology, able to detect a larger diversity of respiratory viruses regarding IFI, reducing in this study the percentage of negative samples of 69,9% (235 samples) to 22% (74 samples).

As doenças respiratórias agudas (DRAs) são as causas mais comuns de morbidez e mortalidade infantil mundial, podendo ser causadas por uma grande variedade de microorganismos. A fim de se detectar os vírus respiratórios mais comumente associados às infecções agudas do trato respiratório e traçar seu perfil epidemiológico, utilizamos um protocolo de GS RT-PCR (GeneScan Transcrição Reversa-Reação em Cadeia da Polimerase) para a rápida detecção simultânea do, vírus influenza A e B, parainfluenzavirus tipo 1, 2 e 3, picornavirus, metapneumovirus e o adenovírus. As amostras clínicas foram colhidas de crianças menores de cinco anos de idade, apresentando sintomas respiratórios, no Hospital Universitário (HU) da Universidade de São Paulo (USP), durante o ano de 2003. O GS RT-PCR se mostrou uma metodologia sensível e específica, capaz de detectar uma diversidade maior de agentes infecciosos do trato respiratório em relação à Imunofluorescência Indireta (IFI), reduzindo neste estudo a porcentagem de amostras negativas de 69,9% (235 amostras) para 22% (74 amostras). / A reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) assay based on automated fluorescent capillary electrophoresis and GeneScan software analysis was used to detect nine common respiratory viruses in clinical specimens from young children. Assays for human respiratory syncytial virus (HRSV), human parainfluenza viruses 1, 2, and 3, influenza A and B viruses, human metapneumovirus, adenovirus and picornavirus were incorporated into a screening PCR standard assay format. The optimized assay panel was used to test 336 respiratory specimens obtained from children hospitalized with acute respiratory illness (ARI) that had been previously tested by viral culture and indirect immunofluorescence staining (IIF). GS RT-PCR showed be a sensitive and specific methodology, able to detect a larger diversity of respiratory viruses regarding IFI, reducing in this study the percentage of negative samples of 69,9% (235 samples) to 22% (74 samples).

Orientador: Elenice Deffune / Banca: Mirthes Ueda / Banca: Rejane Tommasini Grotto / Resumo: O Vírus Sincicial Respiratório humano (VSR) é o principal agente causal das Infecções Respiratórias Agudas (IRAs) em lactantes e pré-escolares. Apresenta dois subgrupos - A e B - sendo o primeiro responsável por quadros clínicos mais graves. Os RNA mensageiros virais codificam 11 proteínas conhecidas, das quais a proteína F é responsável pela fusão viral à célula e se apresenta na forma de F0 com peso molecular de 67kDa, podendo ser clivada em duas unidades: F2 de 20kDa e a F1 de 47kDa. A proteína F recombinante (Fr), expressa em E.coli (BL21A no vetor pET28a), foi cedida por pesquisadores da UNESP de São José do Rio Preto. Com intuito de produzir anticorpos monoclonais contra a proteína Fr para fins de diagnóstico laboratorial, inoculamo-la em camundongos isogênicos Balb/c. Durante o desenvolvimento do monoclonal, foi necessário a eliminação da contaminação de cultura por Mycoplasma ssp. Após ajuste de dose de inoculação e descontaminação do antígeno (hipótese: contaminação com endotoxinas provenientes de E.coli), seis clones secretores de anticorpos monoclonais foram produzidos (5 do tipo IgM e 1 do tipo IgG2a) e testados, simultâneamente, contra toxina bacteriana e proteína Fr (40μg/mL) por técnica de ELISA indireto. Paralelamente, testes por citometria de fluxo foram realizados, incubando-se os clones obtidos com E.coli (bactéria com membrana permeabilizada e in natura). Os clones (VIRSV2-87A74 e VIRSV2-87A80) apresentam um reconhecimento inespecífico de proteínas da E. coli e não foi possível caracterizar os clones obtidos em função da dificuldade de se obter novas amostras de proteína Fr. Para o futuro, os anticorpos obtidos deverão ser marcados com isotiocinato de fluoroceína e comporem um amplo teste epidemiológico em paralelo com o kit disponível em mercado respeitando a sazonalidade da doença. Novos ensaios para caracterização... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Human Respiratory Syncytial Virus (HRSV) is the main cause of Acute Respiratory Insufficiency in suckling child and children below 5 years old. It has 2 subgroups - A and B - being the first one responsible for more dangerous clinical situations. The viral messenger RNA codifies 11 known proteins, which the F protein is responsible for the viral fusion and it is presented as F0 with molecular weight of 67kDa, but once is broke it generates two units: F2 with 20kDa and F1 with 47kDa. The recombinant F (Fr) protein were expressed on E.coli (BL21A, on vector pET28a), and it was given to us by researches from UNESP of São José do Rio Preto. Wishing to produce monoclonal antibodies (Mab) against Fr protein to laboratorial diagnosis, mice (Balb/c) were inoculated with de antigen (Fr protein). During the development of the Mab, it was necessary to eliminate, from the culture, Mycoplasma spp. After we adjusted the necessary amount to inoculate on the mice and eradicated the contamination of the antigen (hypotheses: there were endotoxins from the E.coli), six clones that secrete Mab were produced (5 of the kind IgM, and 1 of the kind IgG2a) and they were tested, simultaneously, against bacterium toxin and Fr protein (40μg/mL) using ELISA technique. Together, flow cytometry test were performed when we incubated the clones with E. coli (bacterium with permeable membrane and in natura). The clones (VIRSV2-87A74 and VIRSV2-87A80) presented an unspecific recognition for the proteins from E.coli and it was not possible to characterize the cells because we couldn't get more samples of Fr protein. For the future, the Mab should be conjugated with FITC and then, they must be part of a wide epidemiologic test side by side from the commercial kit, always respecting the seasonal disease. New assays to characterize antibodies (like Western blotting and imunepreciptation) are already being done... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The most common viruses involved in acute respiratory diseases among young children are the respiratory syncytial virus (RSV), influenzavirus (FLU), parainfluenzavirus (PIV), adenovirus (AdV) and human rhinovirus (HRV). The purpose of the present study was to identify the main respiratory viruses that affected children younger than five years old in Uberlândia, in Midwestern Brazil. Nasopharyngeal aspirates from 379 children attended at Hospital de Clínicas (HC/UFU), from 2001 to 2004, with acute respiratory disease, were collected and tested by either immunofluorescence assay (IFA) or reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). RSV was detected in 26.4% (100/379) of samples, FLU A and B in 9.5% (36/379), PIV 1, 2 and 3 in 6.3% (24/379) and AdV in 3.7% (14/379). Negative and indeterminate samples (205) by IFA were tested by RT-PCR for detection of HRV, and 29.6% (112/379) was positive. RSV, particularly among children in their first 6 months of life, and HRV cases showed highest incidence. For both virus, bronchiolitis and pneumonia/bronchopneumonia were the main nosological presentation among children less than 6 months, were RSV responded for 40,3% and 34,6% of the cases, respectively, and the HRV were detected in 25,0% of bronchiolitis cases and 15,4% of pneumonia/bronchopneumonia cases at the same referred age group. Negative samples by both IFA and RT-PCR might be indicative that other pathogens, such as coronavirus, human metapneumovirus and bacteria, could be the causative agent in these infections. Laboratorial diagnosis constituted an essential instrument to determine the incidence of the most common viruses in respiratory infections among young children in this region. / Os vírus mais comumente envolvidos em doenças respiratórias agudas em crianças são os vírus respiratório sincicial (VRS), influenzavírus tipos A e B (FLU A e B), parainfluenzavírus tipos 1, 2 e 3 (PIV-1, -2 e -3), adenovírus (AdV) e os rinovírus (HRV). O objetivo geral do presente estudo foi identificar os principais vírus respiratórios envolvidos em doenças respiratórias aguda (DRA) em crianças de até cinco anos de idade no período de 2001 a 2004. Aspirados de nasofaringe de 379 crianças atendidas no Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia (HC/UFU) com doença respiratória aguda foram coletadas e testadas pelas reações de imunofluorescência indireta (IFI) ou transcrição reversa da reação em cadeia da polimerase (RT-PCR). O VRS foi detectado em 26,4% (100/379) dessas amostras, FLU tipos A e B em 9,5% (36/379), PIV 1, 2 e 3 em 6,3% (24/379) e AdV em 3,7% (14/379). As amostras negativas e inconclusivas pela IFI (205) foram testadas por RT-PCR para detecção dos HRV, sendo que 26,9% (112/379) foram positivas. Neste estudo, os vírus mais comumente detectados em quadros clínicos de bronquiolite e pneumonia/broncopneumonia em crianças menores de seis meses de idade foram o VRS, respondendo por 40,3% e 34,6% do total de casos, respectivamente, e o HRV, identificado em 25,0% dos casos de bronquiolite e em 15,4% dos casos de pneumonia/broncopneumonia na mesma faixa etária. Relacionado à sazonalidade, a circulação dos vírus identificados predominou nos meses de temperaturas mais baixas. Esse padrão foi evidente para o VRS, que apresentou um pico de ocorrência em abril e maio, enquanto que o pico do FLU e HRV ocorreu em julho. Amostras negativas tanto pela IFI quanto pela RT-PCR indicam que outros patógenos, incluindo coronavírus, metapneumovirus humano além de bactérias, podem ter sido os responsáveis pelas infecções. Finalizando, este estudo foi essencial para um diagnóstico conclusivo de DRAs causadas por vírus, bem como para determinar quais agentes virais circularam nesta região. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas