Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-25 / Temos demonstrado, em nosso laboratório, que dietas lipídicas enriquecidas com óleo de peixe ou óleo de soja apresentam efeito antiinflamatório associado a alterações em mediadores inflamatórios, como corticosteróides, bradicinina, calicreína, óxido nítrico e citocinas, em modelo de inflamação aguda. Embora o consumo de dietas enriquecidas com óleo de peixe tem também sido associado à diminuição da inflamação crônica, dietas hiperlipídicas parecem aumentar o risco de desenvolvimento da colite ulcerativa e de câncer de colon. Neste trabalho, verificamos se dietas hiperlipídicas ou normolipídicas, enriquecidas com óleo de peixe, óleo de soja ou com a mistura desses podem alterar o processo inflamatório, a liberação de mediadores inflamatórios e o dano oxidativo do DNA na colite experimental, induzida por sulfato de sódio dextran (DSS). Para isto, ratos machos Wistar, recém-desmamados foram divididos em 6 grupos, alimentados durante 47 dias com as dietas experimentais; 3 grupos foram alimentados com dietas hiperlipídicas (20%), ricas em óleo de soja (HS), óleo de peixe (HP) ou mistura de óleo de soja e peixe (HSP) e 3 grupos foram alimentados com dietas normolipídicas (5%) enriquecidas com óleo de soja (S), óleo de peixe (P) ou mistura de óleo de soja e peixe (SP). A dieta S foi o controle tanto dos grupos hiperlipídicos como dos grupos normolipídicos. A colite foi induzida, em todos os animais, no dia 36, com 3% de DSS na água de beber por 7 dias (dia 36 ao 42). No 43º dia o DSS foi descontinuado e no 48º dia os animais foram sacrificados, após jejum alimentar de 24 horas. Durante a indução da colite foi avaliado diariamente o índice de atividade da doença (IAD). Foram coletadas amostras sanguíneas para dosagem de corticosterona, o fígado para análise da incorporação dos ácidos graxos e o cólon distal que foi dividido em fragmentos para análise histológica, dano oxidativo de DNA, dosagem da atividade da enzima mieloperoxidase (MPO) e das concentrações teciduais das citocinas IL-4, IFNg e IL-10. Nos grupos alimentados com dietas hiperlipídicas não foram encontradas diferenças nas concentrações de IL-4 e INF-g, MPO, corticosterona, índice de inflamação, comprimento do cólon e IAD. No entanto, a dieta HP aumentou as concentrações de IL-10 em relação à dieta HS e somente a dieta HSP aumentou a razão IL-10/IL-4 (citocina antiinflamatória / proinflamatória) associada à diminuição do dano de DNA. Esses dados demonstram que dietas hiperlipídicas, ricas em óleo de soja ou peixe, não exacerbam a colite experimental em relação ao controle normolipídico (S), e que a mistura desses óleos tem efeito benéfico no equilíbrio das citocinas e na manutenção da integridade do DNA. Nos grupos alimentados com dietas normolipídicas não foram observadas diferenças nos níveis de corticosterona, IFN-g e IL-4. Somente a dieta SP diminuiu o IAD, a MPO e o índice de inflamação, além de aumentar a IL-10 e proteger contra o dano de DNA em relação ao controle (S). A dieta P promoveu um efeito intermediário, não sendo diferente do controle e da dieta SP, em relação à gravidade da doença, porém aumentou os níveis de IL-10 e diminuiu o dano de DNA em relação à dieta controle (S). Adicionalmente, foi observado uma alta correlação entre o aumento de IL-10 e a diminuição do dano de DNA. Esses dados demonstram que a dieta normolipídica SP reduz a injúria colônica e o dano de DNA e sugerem que essa dieta (SP) pode contribuir como terapia complementar na colite ulcerativa para diminuir o uso de drogas antiinflamatórias e prevenir o câncer de colon. / Background: Ulcerative colitis (UC) is characterized by recurrent episodes of colonic inflammation with an imbalance in the synthesis and release of cytokines. Chronic colonic inflammation has been associated with DNA damage and colorectal cancer. Dietary polyunsaturated fatty acids (PUFA), can modulate immune function, inflammation and carcinogenesis. Therefore, we investigated whether PUFA could influence colonic injury, plasma corticosterone and tissue myeloperoxidase activity (MPO), DNA damage and cytokines in colitic rats. Methods: Male weaning Wistar rats were fed for 47 days with an AIN-93 diet with control (C), fish (F) or a mixture of fish and soybean oil (SF). UC was induced from day 36 until day 42 by 3% DSS in drinking water. On day 48, the rats were anesthetized and, blood samples were collected for corticosterone determination. The distal colon was excised for histological analysis and to quantify the cytokine (IL- 4, IL-10 and INF-g), MPO and DNA damage. The disease activity index (DAI) was recorded daily during colitis induction. Results: DAI, MPO, histological analyses showed decreases (p<0.05) only in the SF group compared with the C group. IL-10 was increased and DNA damage was reduced in the groups F and SF, and an inverse correlation between these variables (r=0.77) was found. There were no differences in corticosterone, IFN-g and IL-4 levels. Conclusions: Soybean and fish oil mixture may be effective in improving colonic injury and DNA damage, and it could be an important complementary therapy in UC to reduce the use of anti-inflammatory drugs and prevent colorectal cancer. Running head: PUFA and colonic inflammation / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

O objetivo dessa tese foi avaliar a expressão de citocinas Th1 (IL-12 e INF&#61543;), citocinas Th2 (IL-4, IL-6 e IL-10) e das citocinas pró-inflamatórias IL-18, IL-1&#61538; e TNF&#61537; no fluido gengival de pacientes com periodontite crônica portadores da doença de Crohn (DC), de retocolite ulcerativa idiopática (RCUI) e em indivíduos saudáveis (o grupo controle, GC). Como objetivo secundário, avaliamos a função dos neutrófilos no fluido gengival desses pacientes através da mensuração das metaloproteinases da matriz -8, -9 (MMP-8 e MMP-9) e da atividade da elastase. Quinze pacientes com DC (idade média 38.2 11.4 anos), 15 pacientes com RCUI (idade média 45.0 10.5 anos) e 15 pacientes saudáveis (idade média 42.1 7.8 anos) participaram desse estudo. Todos os dentes presentes, com exceção dos terceiros molares, foram examinados. Profundidade de bolsa (PB), nível de inserção clínica (NI), presença de placa e de sangramento a sondagem foram avaliados em seis sítios por dente. Em cada paciente, o fluido de 4 sítios com periodontite (PB &#61619; 5 mm e NI&#61619; 3mm) e de 4 sítios com gengivite (PB&#61603; 3 mm e NI &#61603; 1 mm) foram coletados através de pontas de papel absorvente pré-fabricadas. O sistema LUMINEX foi utilizado na mensuração das IL-1&#61538;, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12p70, TNF&#61537;, INF&#61543;, MMP-8 e MMP-9. A IL-18 foi analisada através do ensaio ELISA e a atividade de elastase através de uma reação enzimática. O soro desses pacientes também foi analisado e o coeficiente de correlação de Pearson foi utilizado na análise da correlação entre as citocinas no soro e no fluido gengival. Nos sítios com gengivite, a quantidade total de IL-4 foi significativamente menor no grupo RCUI do que no grupo GC (p=0.016). Nos sítios com periodontite, a quantidade total de IL-4 foi significativamente menor no grupo DC do que no grupo GC (p=0.029). A quantidade total da IL-6 (p=0.028) assim como sua concentração (p=0.044) foram significativamente maiores no grupo RCUI do que no grupo GC. No soro, os níveis da IL-18 foram significativamente mais altos nos grupos DC (p=0.011) e RCUI (p=0.019) do que no grupo GC. No grupo RCUI, a IL-18 do soro se correlacionou positivamente com a IL-1&#61538; do fluido gengival (r=0. 667, p=0.01). Concluindo, nos pacientes com doença inflamatória intestinal, os níveis da IL-4 estavam mais baixos no fluido gengival e os níveis da IL-18 estavam aumentados no soro quando comparados aos controles. A função dos neutrófilos foi similar entre os pacientes com doença inflamatória intestinal e os controles. Com exceção da correlação positiva entre a IL-18 sérica e a IL-1&#61538; no fluido gengival dos pacientes com retocolite ulcerativa idiopática, não houve correlação entre as diversas citocinas mensuradas no soro e as citocinas mensuradas no fluido gengival nos controles nem nos pacientes com doença inflamatória intestinal. Não houve a caracterização de um padrão de resposta Th1 ou Th2 no fluido gengival dos pacientes com doença inflamatória intestinal. / The aim of this thesis was to evaluate the expression of Th1 cytokines (IL-12 and INF-&#947;), Th2 cytokines (IL-4, IL-6 and IL-10) and the pro-inflammatory cytokines IL-18, IL-1&#61538; and TNF-&#945; in the gingival crevicular fluid (GCF) from Crohns disease (CD) patients, ulcerative colitis (UC) patients and healthy individuals (control group, CG) who had chronic periodontitis. Besides, we measured elastase activity, matrix metalloproteinase -8 and -9 (MMP-8 and -9) to address the neutrophil function in the GCF. Fifteen CD patients (mean age 38.2 &#61617; 11.4 years), 15 UC patients (mean age 45.0 &#61617; 10.5 years) and 15 systemically healthy controls (mean age 42.1 &#61617; 7.8 years) were enrolled in this study. All the present teeth, except for the third molars were examined. Probing pocket depth (PPD), clinical attachment loss (CAL), presence of plaque and presence of bleeding on probing were assessed in six sites per tooth. In every subject, GCF from 4 gingivitis sites (PPD &#61603; 3mm and CAL &#61603; 1mm) and from 4 periodontitis sites (PPD &#61619; 5mm and CAL&#61619; 3mm) were collected with filter strips. The data were reported as total amount and concentration. IL-1&#61538;, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12p70, TNF&#945;, INF&#947;, MMP-8 and MMP-9 were analyzed by the Luminex analyzer. IL-18 was analyzed using a commercially available ELISA assay and the elastase activity by an enzymatic reaction. The serum was also analysed and the correlations between the cytokines in the GCF and in the serum were calculated by Pearson correlation analysis. In gingivitis sites, the total amount of IL-4 was significantly lower in the UC group than in the CG group (p=0.016). In periodontitis sites, the total amount of IL-4 was significantly lower in CD group than in the CG group (p=0.029). The total amount of IL-4 was lower in UC group than in CD group (p=0.077). Similarly, IL-4 concentrations in both CD (p=0.096) and UC (p=0.064) groups were lower than in CG group. IL-6 total amount (p=0.028) and IL-6 concentration (p=0.044) were significantly higher in the UC group than in the CG group. In the serum, IL-18 levels were significantly higher in CD (p=0.011) and UC (p=0.019) groups than in the CG group. In UC group, there was a positive correlation between serum IL-18 levels and IL-1&#61538; in the GCF (r=0. 667, p=0.01). In conclusion, IBD patients had lower IL-4 levels in the GCF and higher IL-18 levels in the serum than healthy controls. The neutrophil function in IBD patients is similar to controls. Except for the positive correlation between IL-18 in the serum and IL-1&#61538; in the GCF, there was no correlation between the cytokines in serum and in the GCF either in IBD patients or in controls. There was not a Th1 or Th2 polarization in the GCF from IBD patients.

Estudos recentes têm avaliado a presença de polimorfismos do gene multidroga resistente 1 (MDR1), que codifica o transportador de membrana de efluxo chamado de P-glicoproteína, seu potencial papel na suscetibilidade das doenças inflamatórias intestinais (DII) e suas possíveis correlações com aspectos clínicos das DII. Dados conflitantes podem resultar da análise genética de populações distintas. Investigamos se os polimorfismos do gene MDR1 estão associados com as DII em população do sudeste do Brasil e suas possíveis correlações com fenótipos, atividade de doença, resposta ao tratamento e efeitos colaterais. Como métodos, a presente pesquisa trabalhou com 146 pacientes com Doença de Crohn (DC) e 90 com Retocolite Ulcerativa Idiopática (RCUI), que foram recrutados através de critérios diagnósticos estabelecidos. Os polimorfismos do MDR1 mais comumente descritos na literatura, C1236T, G2677T e C3435T, foram avaliados por PCR. As frequências genotípicas de pacientes com RCUI e DC foram analisadas na população de estudo. Associações de genótipo-fenótipo com características clínicas foram estabelecidas e riscos estimados para as mutações foram calculados. Nenhuma diferença significativa foi observada nas freqüências genotípicas para os polimorfismos G2677T/A e C3435T do MDR1 na DC ou na RCUI. O polimorfismo C1236T foi significativamente mais comum na DC do que na RCUI (p = 0,036). Na RCUI foram encontrados mais homens nos polimorfismos C1236T e G2677T no grupo de heterozigotos. Foram encontradas associações significativas entre o polimorfismo C3435T do gene MDR1 em pacientes com fenótipo estenosante na DC (OR: 3,16, p = 0,036), em oposição ao comportamento penetrante (OR: 0,31, p = 0,076). Na DC, associações positivas também foram encontradas entre o polimorfismo C3435T, à atividade moderada/severa da doença (OR: 3,54, p = 0,046), e à resistência / refratariedade ao corticosteróide (OR: 3,29, p = 0,043) nos homozigotos polimórficos. Nenhuma associação significativa foi encontrada entre os polimorfismos do MDR1 e categorias fenotípicas, atividade de doença ou resposta ao tratamento da RCUI. Em conclusão, os resultados do presente estudo sugerem que os polimorfismos do gene MDR1 poderiam estar implicados na susceptibilidade a DC e no seu fenótipo estenosante, como também estarem associados com uma resposta inadequada ao tratamento em um grupo de pacientes com DC. A forte relação com a DC suporta a existência de papéis adicionais para o MDR1 em mecanismos específicos subjacentes na patogênese da DC, como o controle da microbiota intestinal, mediação e regulação da fibrose. Além disso, compreender os efeitos de vários fármacos associados a estas variantes do MDR1 pode contribuir para a prescrição personalizada de regimes terapêuticos.

Orientador: Luiz Claudio Di Stasi / Resumo: A Doença Inflamatória Intestinal (DII) inclui duas principais doenças: a Doença de Crohn e a Retocolite Ulcerativa, ambas caracterizadas por períodos de exacerbação dos sintomas acompanhados por intervalos prolongados de remissão. Apesar da etiologia ser pouco elucidada, sabe-se da influência de fatores genéticos, imunológicos e ambientais. A terapia farmacológica atual não é eficaz para todos os pacientes, apresenta alto custo e desencadeia diversos efeitos colaterais, portanto é necessário o desenvolvimento de novas terapias sendo que as plantas medicinais e componentes presentes na dieta, devido as suas propriedades antioxidantes e/ou imunomoduladora, apresentam uma opção atrativa como terapia complementar. A espécie Cnidoscolus aconitifolius (Mill.) I.M. Johnst, popularmente conhecida como chaya, foi selecionada dada sua composição química, rica em fibra e compostos antioxidantes e suas atividades antioxidante e anti-inflamatória testadas em outras afecções. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade anti-inflamatória intestinal das folhas escaldadas e desidratadas de chaya em duas formas: como extrato metanólico 70% (100, 200 e 300 mg/kg, via oral por gavage) e como farinha incorporada na dieta nas concentrações 5, 10 e 20%, no modelo de indução de inflamação intestinal pelo ácido trinitrobenzenosulfonico (TNBS) em ratos. Para tanto, foram avaliados os parâmetros clínicos gerais (ingestão diária de alimentos, peso corporal, diarréia), parâmetros macroscópicos da l... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Inflammatory Bowel Disease (IBD) comprise two major diseases, Crohn's disease and Ulcerative Colitis, both characterized by periods of exacerbation of symptoms accompanied by prolonged remission intervals. Although the etiology is not certain elucidated, the influence of genetic, immunological and environmental factors is well known. The current pharmacological therapy is not effective for all patients, due to a high cost and triggers several side effects. Therefore, it is necessary to develop new therapies and medicinal plants with their antioxidant and/or immunomodulatory properties are an attractive option as complementary therapy. Cnidoscolus aconitifolius (Mill.) I.M. Johnst, popularly known as chaya, was selected because of its chemical composition, rich in fiber and antioxidant compounds and its antioxidant and anti-inflammatory activity tested in other diseases. The aim of this study was to evaluate the intestinal anti-inflammatory activity of the blanched and dehydrated Chaya leaves in two preparations: as a 70% methanol extract (100, 200 and 300 mg/kg, oral route by gavage) and as flour incorporated in the diet at 5%, 10% and 20% concentrations in the experimental model of intestinal inflammation induced by trinitrobenzenesulfonic acid (TNBS) in rats. For that, clinical parameters (daily food intake, body weight, diarrhea), macroscopic damage (score, lesion extension, weight/length ratio and adherence), biochemical parameters (quantification of total glutathione con... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Luiz Claudio Di Stasi / Resumo: A Doença Inflamatória Intestinal é uma doença crônica, cuja patogênese envolve uma interação complexa de fatores múltiplos. Entre os novos compostos estudados para o tratamento da inflamação intestinal, a 4-metilesculetina (4-ME) apresentou potentes atividades antioxidante e anti-inflamatória intestinal, porém estudos mais detalhados sobre o mecanismo de ação das cumarinas são necessários. Neste trabalho, foram verificados que os tratamentos com a 4-ME preveniram a depleção dos níveis de glutationa total, diminuíram a atividade de mieloperoxidase e glutationa peroxidase (GPX), preveniram a diminuição da atividade de glutationa redutase (GSR) e glutationa S-transferase. Além disso, os tratamentos com a 4-ME preveniram a redução da abundância relativa de RNAm de γ-glutamil transferase 1, glutationa redutase e fator nuclear eritroide 2 relacionado ao fator 2 causada pela inflamação intestinal. A investigação da interação entre a 4-ME e GSR, GPX ou proteína inibitória κB (IkB) mostrou que a 4-ME interage com a GSR e IkB por um processo predominantemente estático, enquanto a interação entre a 4-ME e GPX ocorre por um processo dinâmico. As forças de van der Waals e as pontes de hidrogênio possuem papel fundamental na formação e na estabilização do complexo GSR/4-ME, por outro lado interações hidrofóbicas determinam as interações da 4-ME com a GPX e a IkB. Adicionalmente, os resultados indicam que o grupo metila do carbono C-4 é o segundo epítopo mais próximo na interação GSR/4-ME. ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Orientador: Aline Witaicenis Fantinati / Resumo: A Doença Inflamatória Intestinal (DII) engloba duas principais doenças: a Doença de Crohn e a Retocolite Ulcerativa. Esta doença é multifatorial com etiologia complexa e não totalmente elucidada. Considerando-se que não existe cura e que os fármacos utilizados podem apresentar sérios efeitos colaterais, além de muitos pacientes não responderem aos tratamentos disponíveis; estudos voltados para o desenvolvimento de novas estratégias de tratamento são importantes. Estudos têm evidenciado que a associação entre fármacos e alimentos funcionais, pode resultar em uma relação de muito sucesso no tratamento de pacientes com doenças crônicas, sobretudo nas doenças que afetam o trato gastrointestinal. Assim, o uso de alimentos funcionais, especialmente, os ricos em fibras, compostos antioxidantes e lipídeos bioativos podem ser potenciais na prevenção ou tratamento da DII. Com base nisto, a espécie Persea americana Mill., conhecida popularmente como abacate ou avocado, foi selecionada para o presente estudo, pois além de possuir estes compostos, apresenta descrita atividade antioxidante, anti-cancerígena, anti-bacteriana, anti-inflamatória e cicatrizantes. Diante disso, o presente estudo teve como objetivo avaliar a atividade da dieta enriquecida com a polpa de Persea americana Mill. var. Hass no modelo experimental de inflamação intestinal induzida por TNBS em ratos. Para tanto, a polpa da espécie foi incorporada na dieta de ratos Wistar machos, nas concentrações de 5%, 10% ou 20%, por... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Inflammatory Bowel Disease (IBD) comprises two major diseases: Crohn Disease and Ulcerative Colitis. This disease is multifactorial with complex and not fully elucidated etiology. Considering that there is no cure and the drugs may cause serious side effects, and many patients do not respond to the available treatments; therefore researches focused on the development of new treatment strategies are important. Studies have evidenced that the association between drugs and functional foods can result in a very successful relationship forward treating patients with chronic diseases, mainly diseases that affect the gastrointestinal tract. Thus, the use of functional foods, especially ones rich in fibers, antioxidants and bioactive lipids could be potential candidates to the prevention or treatment of IBD. Based on this, Persea americana Mill., popularly known as avocado, was selected for this study, due to the presence of mentioned compounds and also for the antioxidant, anti-cancer, anti-bacterial, anti-inflammatory and cicatrizing activities. Therefore the present study aimed to evaluate the activity of enriched diet with Persea americana Mill. var. Hass pulp in the experimental model of intestinal inflammation induced by TNBS in rats. For this, the fruit pulp was incorporated in the diet of male Wistar rats, in concentrations of 5%, 10% or 20% for 21 days before and 7 days after of induction of intestinal inflammation by TNBS and the animals were killed on the 29º day. Addition... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O objetivo dessa tese foi avaliar a expressão de citocinas Th1 (IL-12 e INF&#61543;), citocinas Th2 (IL-4, IL-6 e IL-10) e das citocinas pró-inflamatórias IL-18, IL-1&#61538; e TNF&#61537; no fluido gengival de pacientes com periodontite crônica portadores da doença de Crohn (DC), de retocolite ulcerativa idiopática (RCUI) e em indivíduos saudáveis (o grupo controle, GC). Como objetivo secundário, avaliamos a função dos neutrófilos no fluido gengival desses pacientes através da mensuração das metaloproteinases da matriz -8, -9 (MMP-8 e MMP-9) e da atividade da elastase. Quinze pacientes com DC (idade média 38.2 11.4 anos), 15 pacientes com RCUI (idade média 45.0 10.5 anos) e 15 pacientes saudáveis (idade média 42.1 7.8 anos) participaram desse estudo. Todos os dentes presentes, com exceção dos terceiros molares, foram examinados. Profundidade de bolsa (PB), nível de inserção clínica (NI), presença de placa e de sangramento a sondagem foram avaliados em seis sítios por dente. Em cada paciente, o fluido de 4 sítios com periodontite (PB &#61619; 5 mm e NI&#61619; 3mm) e de 4 sítios com gengivite (PB&#61603; 3 mm e NI &#61603; 1 mm) foram coletados através de pontas de papel absorvente pré-fabricadas. O sistema LUMINEX foi utilizado na mensuração das IL-1&#61538;, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12p70, TNF&#61537;, INF&#61543;, MMP-8 e MMP-9. A IL-18 foi analisada através do ensaio ELISA e a atividade de elastase através de uma reação enzimática. O soro desses pacientes também foi analisado e o coeficiente de correlação de Pearson foi utilizado na análise da correlação entre as citocinas no soro e no fluido gengival. Nos sítios com gengivite, a quantidade total de IL-4 foi significativamente menor no grupo RCUI do que no grupo GC (p=0.016). Nos sítios com periodontite, a quantidade total de IL-4 foi significativamente menor no grupo DC do que no grupo GC (p=0.029). A quantidade total da IL-6 (p=0.028) assim como sua concentração (p=0.044) foram significativamente maiores no grupo RCUI do que no grupo GC. No soro, os níveis da IL-18 foram significativamente mais altos nos grupos DC (p=0.011) e RCUI (p=0.019) do que no grupo GC. No grupo RCUI, a IL-18 do soro se correlacionou positivamente com a IL-1&#61538; do fluido gengival (r=0. 667, p=0.01). Concluindo, nos pacientes com doença inflamatória intestinal, os níveis da IL-4 estavam mais baixos no fluido gengival e os níveis da IL-18 estavam aumentados no soro quando comparados aos controles. A função dos neutrófilos foi similar entre os pacientes com doença inflamatória intestinal e os controles. Com exceção da correlação positiva entre a IL-18 sérica e a IL-1&#61538; no fluido gengival dos pacientes com retocolite ulcerativa idiopática, não houve correlação entre as diversas citocinas mensuradas no soro e as citocinas mensuradas no fluido gengival nos controles nem nos pacientes com doença inflamatória intestinal. Não houve a caracterização de um padrão de resposta Th1 ou Th2 no fluido gengival dos pacientes com doença inflamatória intestinal. / The aim of this thesis was to evaluate the expression of Th1 cytokines (IL-12 and INF-&#947;), Th2 cytokines (IL-4, IL-6 and IL-10) and the pro-inflammatory cytokines IL-18, IL-1&#61538; and TNF-&#945; in the gingival crevicular fluid (GCF) from Crohns disease (CD) patients, ulcerative colitis (UC) patients and healthy individuals (control group, CG) who had chronic periodontitis. Besides, we measured elastase activity, matrix metalloproteinase -8 and -9 (MMP-8 and -9) to address the neutrophil function in the GCF. Fifteen CD patients (mean age 38.2 &#61617; 11.4 years), 15 UC patients (mean age 45.0 &#61617; 10.5 years) and 15 systemically healthy controls (mean age 42.1 &#61617; 7.8 years) were enrolled in this study. All the present teeth, except for the third molars were examined. Probing pocket depth (PPD), clinical attachment loss (CAL), presence of plaque and presence of bleeding on probing were assessed in six sites per tooth. In every subject, GCF from 4 gingivitis sites (PPD &#61603; 3mm and CAL &#61603; 1mm) and from 4 periodontitis sites (PPD &#61619; 5mm and CAL&#61619; 3mm) were collected with filter strips. The data were reported as total amount and concentration. IL-1&#61538;, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12p70, TNF&#945;, INF&#947;, MMP-8 and MMP-9 were analyzed by the Luminex analyzer. IL-18 was analyzed using a commercially available ELISA assay and the elastase activity by an enzymatic reaction. The serum was also analysed and the correlations between the cytokines in the GCF and in the serum were calculated by Pearson correlation analysis. In gingivitis sites, the total amount of IL-4 was significantly lower in the UC group than in the CG group (p=0.016). In periodontitis sites, the total amount of IL-4 was significantly lower in CD group than in the CG group (p=0.029). The total amount of IL-4 was lower in UC group than in CD group (p=0.077). Similarly, IL-4 concentrations in both CD (p=0.096) and UC (p=0.064) groups were lower than in CG group. IL-6 total amount (p=0.028) and IL-6 concentration (p=0.044) were significantly higher in the UC group than in the CG group. In the serum, IL-18 levels were significantly higher in CD (p=0.011) and UC (p=0.019) groups than in the CG group. In UC group, there was a positive correlation between serum IL-18 levels and IL-1&#61538; in the GCF (r=0. 667, p=0.01). In conclusion, IBD patients had lower IL-4 levels in the GCF and higher IL-18 levels in the serum than healthy controls. The neutrophil function in IBD patients is similar to controls. Except for the positive correlation between IL-18 in the serum and IL-1&#61538; in the GCF, there was no correlation between the cytokines in serum and in the GCF either in IBD patients or in controls. There was not a Th1 or Th2 polarization in the GCF from IBD patients.

Estudos recentes têm avaliado a presença de polimorfismos do gene multidroga resistente 1 (MDR1), que codifica o transportador de membrana de efluxo chamado de P-glicoproteína, seu potencial papel na suscetibilidade das doenças inflamatórias intestinais (DII) e suas possíveis correlações com aspectos clínicos das DII. Dados conflitantes podem resultar da análise genética de populações distintas. Investigamos se os polimorfismos do gene MDR1 estão associados com as DII em população do sudeste do Brasil e suas possíveis correlações com fenótipos, atividade de doença, resposta ao tratamento e efeitos colaterais. Como métodos, a presente pesquisa trabalhou com 146 pacientes com Doença de Crohn (DC) e 90 com Retocolite Ulcerativa Idiopática (RCUI), que foram recrutados através de critérios diagnósticos estabelecidos. Os polimorfismos do MDR1 mais comumente descritos na literatura, C1236T, G2677T e C3435T, foram avaliados por PCR. As frequências genotípicas de pacientes com RCUI e DC foram analisadas na população de estudo. Associações de genótipo-fenótipo com características clínicas foram estabelecidas e riscos estimados para as mutações foram calculados. Nenhuma diferença significativa foi observada nas freqüências genotípicas para os polimorfismos G2677T/A e C3435T do MDR1 na DC ou na RCUI. O polimorfismo C1236T foi significativamente mais comum na DC do que na RCUI (p = 0,036). Na RCUI foram encontrados mais homens nos polimorfismos C1236T e G2677T no grupo de heterozigotos. Foram encontradas associações significativas entre o polimorfismo C3435T do gene MDR1 em pacientes com fenótipo estenosante na DC (OR: 3,16, p = 0,036), em oposição ao comportamento penetrante (OR: 0,31, p = 0,076). Na DC, associações positivas também foram encontradas entre o polimorfismo C3435T, à atividade moderada/severa da doença (OR: 3,54, p = 0,046), e à resistência / refratariedade ao corticosteróide (OR: 3,29, p = 0,043) nos homozigotos polimórficos. Nenhuma associação significativa foi encontrada entre os polimorfismos do MDR1 e categorias fenotípicas, atividade de doença ou resposta ao tratamento da RCUI. Em conclusão, os resultados do presente estudo sugerem que os polimorfismos do gene MDR1 poderiam estar implicados na susceptibilidade a DC e no seu fenótipo estenosante, como também estarem associados com uma resposta inadequada ao tratamento em um grupo de pacientes com DC. A forte relação com a DC suporta a existência de papéis adicionais para o MDR1 em mecanismos específicos subjacentes na patogênese da DC, como o controle da microbiota intestinal, mediação e regulação da fibrose. Além disso, compreender os efeitos de vários fármacos associados a estas variantes do MDR1 pode contribuir para a prescrição personalizada de regimes terapêuticos.

As Doenças inflamatórias intestinais (DII) são multifatoriais e sua etiologia envolve susceptibilidade genética, fatores ambientais, disbiose e ativação exacerbada do sistema imunológico no intestino. Essas doenças também tem sido relacionadas a baixos níveis de dehidroepiandrosterona (DHEA), um hormônio precursor de diversos esteroides e relacionado à modulação das respostas imunes. Porém, os mecanismos precisos que relacionam as ações deste hormônio com a proteção ou susceptibilidade à doença de Crohn ou colite ulcerativa ainda não são totalmente conhecidos. Sendo assim, este projeto buscou entender o papel imunomodulador do DHEA exógeno in vitro e in vivo durante a inflamação intestinal experimental induzida por dextran sulfato de sódio (DSS) em camundongos C57BL/6. Inicialmente, in vitro, DHEA inibiu a proliferação de células do baço de forma dose dependente nas concentrações de 5?M, 50?M ou 100?M, com diminuição da produção de IFN-?. Este hormônio não foi tóxico para células de linhagem mieloide, embora tenha causado necrose em leucócitos nas doses mais elevada (50 ?M e 100?M), o que pode ter influenciado a diminuição das citocinas in vitro. Nos ensaios in vivo, os camundongos tratados com DHEA (40 mg/Kg) foram avaliados na fase de indução da doença (dia 6) e durante o reparo tecidual, quando os animais expostos ao DSS e ao DHEA por 9 dias foram mantidos na ausência destas drogas até o dia 15. Houve diminuição do escore pós-morte, melhora no peso e nos sinais clínicos da inflamação intestinal, com redução de monócitos no sangue periférico com 6 dias e aumento de neutrófilos circulantes na fase de reparo tecidual (15 dias). Ainda, a suplementação com DHEA levou à redução da celularidade da lâmina própria (LP) e ao restabelecimento do comprimento normal do intestino. O uso deste hormônio também diminuiu a expressão do RNAm de IL-6 e TGF-?, enquanto aumentou a expressão de IL-13 no colón dos animais durante a fase de indução da doença, o que provavelmente ajudou na atenuação da inflamação intestinal. Além disso, houve acúmulo de linfócitos CD4+ e CD8+ no baço e diminuição apenas de linfócitos CD4+ nos linfonodos mesentéricos (LNM), indicando retenção das células CD4+ no baço após uso do DHEA. O tratamento foi também capaz de aumentar a frequência de células CD4 produtoras de IL-4 e diminuir CD4+IFN-?+ no baço, além de reduzir a frequência de CD4+IL-17+ nos LNM, sugerindo efeito do DHEA no balanço das respostas Th1/Th2/Th17 relacionadas à colite. Em adição, as células de baço dos animais tratados com DHEA e expostos ao DSS se tornaram hiporresponsivas, como visto pela diminuição da proliferação após re-estímulos in vitro. Finalmente, DHEA foi capaz de atuar no metabolismo dos camundongos tratados, levando à diminuição de colesterol total e da fração LDL no soro durante a fase de indução da doença, sem gerar quaisquer disfunções hepáticas. Com isso, podemos concluir que o DHEA atua por meio do balanço das respostas imunes exacerbadas, minimizando os danos locais e sistêmicos causados pela inflamação intestinal induzida por DSS. / Inflammatory bowel diseases (IBD) are multifactorial diseases whose etiology involves genetic susceptibility, environmental factors, dysbiosis and exacerbated activation of the immune system in the gut. These diseases have also been associated to lower levels of dehydroepiandrosterone (DHEA), a precursor of various steroid hormones, related to modulation of immune responses. However, the precise mechanisms that link the actions of this hormone with protection or susceptibility to Crohn\'s disease or ulcerative colitis are still not fully understood. Thus, this project aimed to understand the immunomodulatory role of exogenous DHEA in vitro and in vivo in experimental intestinal inflammation induced by dextran sodium sulfate (DSS) in C57BL/6 mice. Initially, in vitro, DHEA inhibited the proliferation of spleen cells in a dose dependent way on the concentrations of 5?M, 50?M and 100?M, with decreased production of IFN-?. This hormone was not toxic to myeloid lineage cells, although it caused necrosis of leukocytes at the highest doses (50?M and 100?M), which may have influenced the decrease of the cytokines in vitro. Mice treated with DHEA (40 mg / kg) were evaluated at the induction phase of the disease (day 6) and during tissue repair, when animals exposed to DSS and DHEA for 9 days were maintained in the absence these drugs until the day 15. There was decrease of postmortem score, improved weight and clinical signs of intestinal inflammation, besides reduced peripheral blood monocytes on day 6, together with an increase in circulating neutrophils in tissue repair phase (15 days). Supplementation with DHEA also led to a reduction in cellularity of the lamina propria (LP) and to the restoration of normal length of the gut. The use of this hormone also decreased the expression of of IL-6 and TGF-? mRNA, while IL-13 was augmented in the colon of mice during the induction phase of the disease, a fact probably related to attenuation of intestinal inflammation. Furthermore, there was accumulation of CD4+ and CD8+ cells in the spleen along with decreased CD4+ leukocytes in mesenteric lymph nodes (MLN), indicating retention of CD4+ cells in the spleen after use of DHEA. The treatment was also able to increase the frequency of CD4+ cells producing IL-4 and decrease CD4+IFN-?+ in spleen, with reduced frequency of CD4+IL-17+ in the MLN, suggesting a role for DHEA on the balance of Th1/Th2/Th17 responses related colitis. In addition, splenocytes of mice treated with DHEA and exposed to DSS became hiporresponsives as seen by decreased proliferation after re-stimulation in vitro. Finally, DHEA was able to act on the metabolism of treated mice, leading to decreased total cholesterol and LDL cholesterol in serum during the induction phase of the disease, without generating any liver dysfunction. Thus, we concluded that DHEA acts by balancing the exacerbated immune responses, minimizing local and systemic damages caused by intestinal inflammation induced by DSS.

Os mosquitos representam o grupo mais importante de vetores de doenças infecciosas para o homem. Para que possam ter sucesso no repasto sanguíneo e sejam capazes de adquirir os nutrientes necessários para a maturação dos ovos, a saliva desses vetores possui atividades anti-hemostáticas e imunomoduladoras. Sabendo-se da importância da saliva dos artrópodes hematófagos para sua alimentação e para a transmissão de patógenos causadores de doenças o objetivo deste estudo foi caracterizar as atividades imunomoduladoras de um peptídeo descrito no salivoma de A. aegypti, presente somente em glândulas salivares de mosquitos fêmeas e cujo papel biológico ainda é desconhecido. Observou-se que o peptídeo denominado AeMOPE-1 inibiu a produção de mediadores pró-inflamatórios por macrófagos ativados, assim como induziu a resposta imune para o perfil Th2. O tratamento com o AeMOPE-1 reduziu os sintomas clínicos da colite experimental. Essa é a primeira descrição de um peptídeo salivar de A. aegypti com atividade imunomoduladora em macrófagos e com potencial ação terapêutica. / Mosquitoes are the most important vectors of pathogens that causing infectious to humans. To female succeed in their hematophagous habit and thus acquire the nutrients necessary for the maturation of their eggs, their saliva has components with anti-hemostatic and immunomodulatory activities. Thus, the aim of this project was to study the role of a novel salivary peptide described in the A. aegypti sialome, present only in female salivay glands, whose biological functions are still unknown. It was observed that the peptide named AeMOPE-1 inhibited the production of pro-inflammatory mediators by activated macrophages, as well as induced the immune response to the Th2 profile. Treatment with AeMOPE-1 reduced the clinical symptoms of experimental colitis. This works presents the first salivary peptide from A. aegypti with potent activity on macrophage biology and potential clinical application.