Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2011. / Submitted by Max Lee da Silva (bruce1415@hotmail.com) on 2011-06-28T14:32:38Z No. of bitstreams: 1 2011_LucianaRamalhoDeFarias.pdf: 2230097 bytes, checksum: ad0589346d3e4e161f07d665eb227f60 (MD5) / Approved for entry into archive by Elna Araújo(elna@bce.unb.br) on 2011-07-04T19:52:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_LucianaRamalhoDeFarias.pdf: 2230097 bytes, checksum: ad0589346d3e4e161f07d665eb227f60 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-04T19:52:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_LucianaRamalhoDeFarias.pdf: 2230097 bytes, checksum: ad0589346d3e4e161f07d665eb227f60 (MD5) / O percevejo-marrom Euschistus heros é uma praga que reduz consideravelmente a produtividade nacional de culturas agrícolas de grande importância econômica, dentre elas a soja. Visando subsidiar o desenvolvimento de ferramentas biotecnológicas alternativas para auxílio no controle dessa praga, o presente trabalho realizou o estudo da expressão de genes relacionados à olfação e análise do perfil e sítios de expressão utilizando as técnicas de qPCR em Tempo Real e hibridização in situ, respectivamente. A prospecção foi realizada através da construção de uma biblioteca de cDNA a partir do RNA total extraído das antenas utilizando o kit Smart cDNA Library Construction (Clontech®). Mil clones foram sequenciados e, através de bioinformática, foram identificadas duas sequências de 477 e 294 pares bases pertencentes a genes da família das proteínas ligantes de odorantes (Odorant Binding Protein - OBP) que foram denominados EherOBP1 e EherOBP2, respectivamente. O EherOBP1 possui sequência deduzida de aminoácidos de 16 kDa e pI 5,18, peptídio sinal na extremidade N-terminal, domínio de ligação a feromônio (Pheromone Binding Protein – PBP) e seis resíduos de cisteína em posições conservadas, todas características esperadas para proteínas integrantes da família OBP. Embora parcial, a sequência deduzida de aminoácidos de EherOBP2 já pode também ser atribuída a função hipotética de proteína ligante a odor devido a presença do domínio PBP e cinco resíduos de cisteína em posições conservadas. A análise da expressão diferencial através de RT-PCR quantitativo em tempo real (qRT-PCR) indicou que as antenas representam o principal sítio de produção da EherOBP1 em ambos os sexos, sendo a expressão nas antenas de macho cerca de três vezes maior que nas antenas de fêmeas. Em relação a EherOBP2, foi observada uma predominância da expressão nas antenas e abdômen de machos, sendo esta cerca de cinco vezes maior em relação à expressão observada nas antenas de fêmeas. A partir dos resultados obtidos com a localização da hibridização in situ nas antenas foi possível inferir que os mRNAs das EherOBPs são localizados especificamente na base dos órgãos olfativos (sensilas), havendo diferenças na expressão ao longo da antena entre machos e fêmeas. Neste trabalho foram identificados dois transcritos gênicos relacionados à olfação que codificam duas proteínas com provável função de ligação a odorantes. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / In Brazil, the stink bug Euschistus heros represents an important agricultural plague responsible for economic damages on several cultures, including the soy. Aiming the development of alternatives biotechnological tools, the present work conducted the study of the expression of genes related to olfaction through the construction of a cDNA library from transcripts (mRNA) isolated from the antennae and analysis of the profile and sites of expression using the techniques of real-time qPCR and in situ hybridization, respectively. cDNA library was successfully constructed from total RNA extract from adults antenna using the Smart cDNA Library Construction Kit (Clontech®). A total of 1000 cDNA clones were randomly selected and submitted to sequencing. Two transcripts encoding OBPs were identified by bioinformatics approaches. The E. heros OBPs nucleotide sequences showed 477 and 294 pb and were named as EherOBP1 and EherOBP2, respectively. The deduced amino acid sequence of EherOBP1 has16kDa and pI 5.18, signal peptide at the N-terminal, PBP domain and six cysteine residues in conserved positions, all the expected features for members of OBP protein family. Although partial, the deduced amino acid sequence of EherOBP2 can be assigned as a hypothetical Odorant Binding Protein due the presence of PBP domain and five cysteine residues in conserved positions. Analysis of differential expression by quantitative real time PCR indicated that antenna are the main production site of EherOBP1 in both sexes, and the expression in male antennae is about three times higher than in female antennae. Regarding to EherOBP2, there was a predominance of expression in the antennae and abdomen of males, which is about six times greater than the expression observed in the antennae of females. In situ hybridization results showed that EherOBPs mRNAs are specifically expressed on the base of the antenna olfactory organs (sensilas) with differences in the localization of the expression along the antenna of male and female. In this work were identified two transcripts related to olfaction encoding proteins with hypothetical function odorant binding.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2009. / Submitted by Luiza Moreira Camargo (luizaamc@gmail.com) on 2011-07-04T17:02:45Z No. of bitstreams: 1 2009_CelsoKatsuhiroTomita.pdf: 3918672 bytes, checksum: 87168058ea48a56c1d1277f06e3eb476 (MD5) / Approved for entry into archive by Elna Araújo(elna@bce.unb.br) on 2011-07-08T22:12:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_CelsoKatsuhiroTomita.pdf: 3918672 bytes, checksum: 87168058ea48a56c1d1277f06e3eb476 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-08T22:12:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_CelsoKatsuhiroTomita.pdf: 3918672 bytes, checksum: 87168058ea48a56c1d1277f06e3eb476 (MD5) / A saúde, do latim salutis, é o estado comum de equilíbrio da maioria dos organismos, num sistema metabólico estável, é uma existência, comum e normal na maioria das populações de organismos vivos. O número de organismos que causam doenças é de 2 a 3%, em relação ao total, num universo muito maior, salus, tanto para seres humanos como para as plantas. A agricultura moderna, com o manejo intensivo e incorporação de alta tecnologia, aumentaram o uso de pesticidas na agricultura, causando alterações na ciclagem da matéria orgânica, dos nutrientes, na redução da biodiversidade, no controle biológico natural de doenças e de pragas, nas atividades bióticas do solo e da cultura; a persistência tem selecionado populações resistentes de pragas e doenças cujo controle se tornaram inviáveis. Por outro lado, sistemas de produção orgânicos estão em crescente ascensão no cenário nacional e internacional, contudo muito carente de pesquisas. Assim, é de fundamental importância a busca de alternativas por métodos de proteção de plantas e aumento de produção sem uso de pesticidas. Em sistemas de produção natural com aplicação de substrato orgânico bioativado promoveu o melhor controle da incidência e severidade da podridão-doestipe causada por Phytophthora palmivora nos perfilhos de pupunheira em relação ao sistema de produção convencional, com uso de adubos químicos e aplicação de fungicidas, apresentando uma efetividade de 70,8% de controle do manejo com composto bioativo (CB) em relação ao manejo químico padrão da fazenda (Test); integrando o manejo, CB com a cobertura morta (CM), seus resultados foram mais promissores, 84,2% em relação à Test, 80,2% (Rid) de controle, sendo melhores que a aplicação de fungicidas, e 45,4% superior do que apenas a aplicação do CB. O uso apenas da CM, reduziu a incidência em 10,8% em relação a Test. Estes estudos foram repetidos três vezes em campo, em duas épocas diferentes e seus resultados foram muito semelhantes, concluindo que o uso de compostos bioativos e com cobertura morta podem reduzir a incidência da doença. Em manejos intensivos, como nos cultivos protegidos, com sucessivos plantios de gypsophila, por anos seguidos e com presença do inóculo de Phytophthora sp, o manejo sob sistema de produção convencional com xvi uso de fertilizantes químicos e fungicidas causaram maior número de plantas mortas (pm) do que no sistema natural nas respectivas épocas: primavera, verão, outono e inverno, e no progresso da doença. O sistema de manejo natural tornou viável o manejo sucessivo da mesma cultura sobre a mesma área com fontes de inóculo, suprimindo o progresso da doença nos anos subseqüente, mesmo em épocas de verão. Mas os melhores resultados de produção de flores de gypsophila ficam para plantios de outono e inverno. Em culturas de goiaba a incidência da Morte dos Ponteiros causada por Erwinia psidii foi favorecida em sistemas de produção convencional especificamente sob manejo com uso de herbicidas no controle de ervas espontâneas que indiretamente tornaram as plantas mais suscetíveis à doença, e os resultados foram comuns nas diferentes épocas de poda e nos sucessivos anos estudados. O sistema de produção natural suprimiu o desenvolvimento da doença, sendo significativamente superior no controle ao manejar o solo com uso de composto bioativo, pulverizando o extrato líquido do composto na parte aérea e com o uso de cobertura morta. A poda de verão em sistema de produção convencional compromete totalmente a brotação, as flores e frutos da goiabeira, nesta época de grande incidência e severidade da doença, o manejo sob sistema de produção natural promoveu melhor controle de doenças, principalmente na sua forma integrada, proporcionando uma boa produtividade para a época em relação ao sistema convencional. Nas outras épocas de poda, a incidência das doenças foi mais restrita, contudo a supressão da doença e a produtividade foi maior para o sistema de manejo com compostos bioativos, líquido e cobertura morta. Na fruticultura a persistência do inóculo de ano para ano é permanente num país tropical, contudo manejos somente com uso de matéria orgânica, composto bioativo no solo podem suprimir o desenvolvimento do patógeno sobre os tecidos vegetais na parte aérea da planta, indicando formas de resistência sistêmica induzida na planta. A integração completa dos manejos orgânicos proporciona maior retenção do progresso da doença durante o seu desenvolvimento fenológico da planta, diminuindo a incidência da doença e aumentando a produtividade, quando comparado ao sistema de produção convencional. Os resultados apresentado em diferentes agroecossistemas, patossitemas, patógenos e hospedeiros indicam certa consistência no controle das doenças sob sistema de produção natural em relação ao sistema convencional. O sistema de produção natural promove a manutenção da condição normal da planta, a saúde, e ainda permite cultivos sucessivos sob pertinência do domínio da biodiversidade de organismos atuarem sobre os patógenos controlando o nível de incidência da doença, diferente do sistema do uso de fungicidas, bactericidas e herbicidas, no intuito de eliminar os organismos, esterilizando o meio. Contudo, mesmo pelo número de repetições dos resultados positivos, há necessidade de entender melhor os mecanismos que promovem a supressão das doenças e a saúde da planta em campo. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Health, the Latin salutis is the common state of equilibrium for most organizations, a stable metabolic system, there is a common and normal in most populations of living organisms. The numbers of organisms that cause disease are 2 to 3% of the total, a much larger universe, salus, both for humans and to plants. Modern agriculture, with intensive management and incorporation of high technology, increased use of pesticides in agriculture, causing changes in the cycling of organic matter, nutrients, reduction of biodiversity, natural biological control of diseases and pests, activities biotic in soil and culture, the persistence has selected resistant populations of pests and diseases whose control have become unviable. Furthermore, organic production systems are in ascendancy in the national and international cenary, but very few in research. It is therefore of fundamental importance the search for alternative methods of crop protection and increase of production without use of pesticides. In production systems with application of natural organic substrate bioactivated promoted better control of the incidence and severity of Stem Rot caused by Phytophthora palmivora in the pupunha palm crop of tillers compared to conventional production system, using chemical fertilizers and application of fungicides, with an effectiveness of 70.8 % control of the management of bioactive compound (CB) compared to standard chemical management of the farm (Test), integrating the management, CB with mulch (CM), the results were more promising, 84.2% compared to the Test , 80.2% (Rid) of control, and better than the application of fungicides, and 45.4% higher than just the application of the CB. The pupunha palm crop, using only the CM reduced the incidence by 10.8% compared to Test. These studies were repeated three times on the field at two different times and the results were very similar, concluding that the use of bioactive compounds and mulch can reduce the incidence of the disease. In intensive management production systems, at greenhouses, with successive plantings of gypsophila, followed by years and presence of inoculum of Phytophthora sp, management or production system with conventional chemical fertilizers and fungicides caused the greatest number of dead plants (pm) than in the natural system in their respective seasons spring, summer, autumn and winter, xix and the progress of the disease. The management system had natural viable management succession of the same culture over the same area sources of inoculum by removing the progress of the disease in subsequent years, even in times of summer. But the best results in production of gypsophila flowers were planted for fall and winter. In cultures of guava the incidence of bacterial blight, caused by Erwinia psidii was favorable to conventional production systems specifically under management with the use of herbicides for control of weeds that indirectly made the plant more susceptible to disease severity, and the results were shared at different pruning times and successive years studied. The production system suppressed the natural development of the disease, being significantly higher in the control to manage the soil with the use of bioactive compost, spraying the liquid extract of compost in the aerial part of the plant and the use of mulch. The summer pruning in conventional production system fully committed to budding, flowers and fruits of guava, in this epoch of high incidence and severity of the disease, under the management of natural production system provided better disease control, especially in its integrated form, providing a good yield for the season compared to the conventional system. At other times of pruning, the incidence of the disease was smaller, yet the suppression of disease and yield was higher for the management system with bioactive compost, liquid and mulch. In fruit the persistence of inoculum from year to year is standing in a tropical country, but managements only with the use of organic matter in soil, bioactive compost may suppress the development of the disease on the plant tissue in the aerial parts, indicating forms of systemic resistance induced in the plant. The full integration of organic management provides greater retention of the progress of the disease during its phenological development of the plant, reducing the incidence of infection and increasing productivity when compared to conventional production system. The results presented in different agroecosystems, patosystems, pathogens and hosts indicates some consistency in the control of diseases under natural production system in relation to the conventional system. The natural production system promotes the maintenance of normal plant condition, health, and allows successive crops on the relevance of biodiversity of organisms act on pathogens by controlling the level of incidence of the disease differs from the system that use fungicides, bactericides and herbicides, in order to remove the bodies, sterilizing the medium. However, even the number of repetitions of the positive results, there is need to better understand the mechanisms that promote the elimination of diseases and plant health in the field.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2009. / Submitted by Luiza Moreira Camargo (luizaamc@gmail.com) on 2011-07-04T17:29:31Z No. of bitstreams: 1 2009_MarcelloArraisLima.pdf: 1866483 bytes, checksum: 1cec10d4db895e70df39656e79d784ee (MD5) / Approved for entry into archive by Elna Araújo(elna@bce.unb.br) on 2011-07-08T23:28:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_MarcelloArraisLima.pdf: 1866483 bytes, checksum: 1cec10d4db895e70df39656e79d784ee (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-08T23:28:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_MarcelloArraisLima.pdf: 1866483 bytes, checksum: 1cec10d4db895e70df39656e79d784ee (MD5) / Os objetivos do trabalho foram: (a) avaliar genótipos de soja quanto a reação à ferrugem asiática (Phakopsora pachyrhizi); (b) verificar o progresso da doença em campo de soja associados às condições ambientais, correlacionando-as à variação temporal de urediniósporos coletados no ar; (c) determinar a influência do ambiente na infecção por P. pachyrhizi; e (d) avaliar a influência da concentração de urediniósporos de P. pachyrhizi sobre a doença. Os principais resultados são a seguir apresentados. Quanto à reação dos genótipos, resultados semelhantes em estufa e laboratório mostraram os menores valores de doença pelo genótipo GT04-9062. Todavia, em campo, o genótipo menos afetado foi o GT04-9180. Quanto a flutuação aérea de inoculo, houve grande variação na quantidade de esporos coletados entre janeiro e fevereiro de 2007 (~100-600/dia) e 2008 (~50-500/dia). A captura dos urediniósporos realizada em armadilha (Burkard) foi maior entre 11:00 (~65-80/h) e 19:00h (~35-80/h). Houve correlação positiva entre a quantidade de esporos e os fatores ambientais. Quanto a concentração de inóculo, 1 x 105 urediniósporos/ml proporcionou resultados de doença que permitiram a reação diferencial de ferrugem em genótipos com variada susceptibilidade. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The main objectives of this study were: (a) to evaluate the reaction of soybean (Glycine max) genotypes to the Asian rust (Phakopsora pachyrhizi); (b) to evaluate the association of rust progress to the airborne urediniospores; (c) to evaluate the effects of climate on rust progress; and, (d) to evaluate the effects of spore concentration on disease. The principal results are described as follow. The genotype GT04-9062 was less affected by the disease on laboratory and greenhouse trials. However, under commercial field conditions, the less affected one was GT04-9180. The highest amount of airborne spore collected (Burkard spore trap) was in January and February 2007 (~100-600/day) and 2008 (~50-500/day), from 11 a.m (~65-80/h) to 7 p.m. (~35-80/h). There was positive correlation between collected airborne spores and to the climate factors. The inoculum concentration of 1x105 spores/ml allowed an ideal amount of disease for genotype reaction comparisons.

Dissertação (mestrado)–Universidade de Brasília, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2011. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2011-10-21T15:27:46Z No. of bitstreams: 1 2011_MonicaAlvesMacedo.pdf: 2014920 bytes, checksum: ac713dc35d768784883d99373bfcd251 (MD5) / Approved for entry into archive by Elzi Bittencourt(elzi@bce.unb.br) on 2011-10-24T13:49:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_MonicaAlvesMacedo.pdf: 2014920 bytes, checksum: ac713dc35d768784883d99373bfcd251 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-10-24T13:49:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_MonicaAlvesMacedo.pdf: 2014920 bytes, checksum: ac713dc35d768784883d99373bfcd251 (MD5) / O tomateiro é uma das principais hortaliças cultivadas no país, sendo também uma das culturas que mais sofre danos pelo ataque de diversos patógenos. Dentre os patógenos de origem viral que infectam o tomateiro as principais espécies são Tomato sereve rugose virus – ToSRV e Tomato golden vein virus – TGVV (Begomovirus); Tomato spotted wilt virus – TSWV e Grounut ringspot virus - GRSV (Tospovirus); Cucumber mosaic virus – CMV (Cucumovirus); Peper yellow mosaic virus - PepYMV e Potato virus Y - PVY (Potyvirus) e; Tomato mosaic virus – ToMV (Tobamovirus); e mais recentemente Tomato chlorosis virus - ToCV (Crinivirus). Os begomovírus se destacam, na atualidade, devido à diversidade de espécies e pela maior incidência na cultura. Esses vírus pertencem à família Geminiviridae, podem apresentar um ou dois (DNA-A e DNA-B) componentes genômicos e são transmitidos por moscas-brancas, insetos sugadores de seiva. O objetivo deste trabalho foi avaliar o grau de susceptibilidade de materiais de tomate plantados no país a oito dos principais vírus que afetam a cultura; determinar as espécies de begomovírus predominantes no país nos anos de 2009-2010, e estudar os fatores que influenciam na predominância de ToSRV nas regiões produtoras de tomate do Brasil. Inicialmente, foi feita uma avaliação da resistência de materiais de tomate comumente plantados no país a oito dos principais vírus que afetam a cultura. A avaliação da resistência dos materiais de tomate foi determinada a partir da inoculação de isolados de CMV, PVY, PepYMV, TSWV, GRSV e ToMV (inoculação mecânica) e de ToSRV e TGVV (inoculação por mosca-branca). Como resultado, não foi verificado materiais com resistência do tipo imunidade para cinco das oito espécies de vírus avaliadas. Foram verificados materiais resistentes apenas para isolados das espécies TSWV, ToMV e PVY, sendo que para os demais vírus todas as cultivares apresentaram-se como susceptíveis. Apenas algumas cultivares (somente para o segmento mesa) mostraram níveis diferentes de resistência para o isolado de begomovírus ToSRV avaliado. A partir de então, os estudos foram direcionados para os begomovírus visando determinar as espécies atualmente predominantes no país (coletas nos anos 2009-2010) e estudar os fatores que influenciam na predominância de ToSRV nas regiões produtoras de tomate do Brasil. Para o estudo de prevalência das espécies de begomovírus, as amostras isoladas de tomateiro foram coletadas nas principais regiões produtoras de tomate do país. O DNA total foi extraído e os begomovírus foram detectados por PCR. As amostras positivas foram selecionadas e essas foram amplificadas por RCA (amplificação por círculo rolante) seguido pela caracterização a partir da digestão com enzima de corte freqüente MspI. A análise da diversidade foi realizada por eletroforese com a separação em padrões de migração de fragmentos de DNA. Ao todo foram analisadas 600 amostras positivas e 36 padrões de digestão foram selecionados. Uma amostra de cada padrão foi selecionada aleatoriamente e o DNA-A dos begomovírus presentes nas amostras foram seqüenciados parcialmente (sequenciamento direto do RCA) e apenas as espécies distintas estão sendo clonadas e seqüenciadas completamente. Como resultado houve predominância de ToSRV, seguido de Tomato mottle leaf curl virus (TMoLCV). Em paralelo, isolados de ToSRV e TGVV, espécies mais relatadas como predominantes no país, sendo que TGVV vem aparentemente reduzindo sua incidência, foram selecionados para a avaliação do processo de infecção e o estudo de transmissão por moscas-brancas. O círculo de hospedeiras de plantas cultivadas e daninhas para os vírus TGVV e ToSRV foi determinado, indicando um círculo de hospedeiros semelhante entre eles. Adicionalmente, a cinética de infecção foi avaliada em agroinoculação com TGVV e ToSRV em infecção simples e mista. O monitoramento consistiu na observação de sintomas e coleta de amostras foliares para posterior detecção por PCR a cada três dias, para determinar a velocidade de infecção e a porcentagem de plantas infectadas com cada vírus. Para os ensaios de transmissão, inicialmente foram aperfeiçoados os protocolos de inoculação por mosca-branca, avaliando a forma de aquisição, inoculação, a quantidade de insetos por planta e a cultivar de tomate utilizada como planta-teste. Como metodologia-padrão foi adotado o uso da cultivar Viradoro, a aquisição a partir de folhas destacadas de tomateiro infectado em tubos de polietileno e três insetos/planta confinados em copos plásticos para a inoculação. Os períodos de aquisição e inoculação do inseto-vetor foram padronizados em 48h. Para a determinação da eficiência de transmissão foram realizados ensaios com infecção simples e mista. Foi determinada também a porcentagem de aquisição dos vírus pelo inseto-vetor após 48h de inoculação em insetos alimentados em folhas com infecção simples e mista. Como resultado, não houve diferença significativa entre as taxa de aquisição de ToSRV e TGVV em insetos alimentados em folhas com infecção simples e mista. Mas, a porcentagem de infecção por ToSRV em plantas inoculadas por vetor e por agroinoculação (inoculação simples ou mista) foi invariavelmente superior à taxa de infecção por TGVV em todos os ensaios realizados. Verificou-se que a infecção de tomateiro pelo isolado de ToSRV é mais eficiente quando comparado com a infecção por TGVV. Em infecções simples e mistas, a taxa de plantas infectadas com ToSRV foi maior em todos os ensaios. Em conclusão, muito provavelmente a predominância de ToSRV em campo está relacionada com a maior eficiência de colonização e infecção do ToSRV em tomateiro e também com a maior eficiência de transmissão pela mosca-branca de ToSRV, sugerindo a excelente adaptação dessa espécie em tomateiro em condições de cultivo no Brasil. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The tomato plant is one of the major vegetable grown in the country and is also the crop most damaged by numerous pathogens. Among the main viral diseases that affect this crop, the following viruses are specially important: Tomato severe rugose virus - ToSRV and Tomato golden vein virus (Begomovirus), Tomato spotted wild virus - TSWV and Groundnut ringspot virus - GRSV (Tospovirus), Cucumber mosaic virus - CMV (Cucumovirus); Pepper yellow mosaic virus - PepYMV and Potato virus Y - PVY (Potyvirus), and Tomato mosaic virus - ToMV (Tobamovirus), and more recently Tomato chlorosis virus - ToCV (Crinivirus). At present, begomoviruses are considered the most important viruses, given the species diversity and high incidence. These viruses belong to the family Geminiviridae, have one or two (DNA-A and DNA-B) genomic components, and are transmitted by sap-sucking whiteflies. The main objective of the present work was to evaluate the susceptibility of tomato materials cultivated in the country to the eight major viruses affecting the crop, to determine the begomovirus species prevalence in the country within 2009-2010, and to study the factors that influence the prevalence of ToSRV in tomato producing areas of Brazil. Initially, the resistance of tomato materials commonly planted in the country was evaluated to eight of the major viruses affecting this crop. Resistance was evaluated against inoculation of CMV, PVY, PepYMV, TSWV, ToMV and GRSV (mechanical inoculation), and ToSRV and TGVV (inoculation by whitefly). As a result, no immune-like resistance was observed against five out of eight tested virus species. Resistant materials were only found for TSWV, ToMV and PVY, whereas for the other viruses all cultivars were classified as susceptible. Only for begomoviruses, some cultivars (only for fresh market) showed different levels of resistance to isolates of begomoviroses. Then, the studies were focused on begomoviruses, and aimed to determine the current prevalent species in the country (collected within years 2009-2010) and to study the factors that influence the prevalence of ToSRV on tomatoes in Brazil. For the study on the prevalent begomovirus species, tomato isolates were sampled in the main growing regions of the country. Total DNA was extracted and the begomoviruses were detected using PCR. The positive samples were selected and they were amplified by RCA (rolling circle amplification) followed by genotyping by digestion with the frequent cutting enzyme, MspI. The diversity analysis was performed by comparison of migration patterns of digested DNA fragments in an agarose gel. A total of 600 positive samples were analyzed and 36 migration patterns were detected. One sample from each pattern was randomly selected, the DNA-A of each begomovirus present in the sample was partially sequenced (direct sequencing of RCA), and only the different species are being cloned and sequenced completely. As a result ToSRV was the predominant species, followed by Tomato mottle leaf curl virus (TMoLCV). In parallel, isolates of ToSRV and TGVV, species reported as more prevalent in the country, being TGVV apparently reducing in its incidence, were selected for the studies on the infection process and transmission by whiteflies. TGVV and ToSRV host range, including weeds and crops, was determined. Additionally, the infection kinetics was evaluated by agroinoculation of TGVV and ToSRV in single and mixed infections. Infection was monitored by symptom observation and virus detection by PCR from leaf samples collected every three days to determine the infection rate and percentage of plants infected with each virus. For the transmission tests, the whitefly inoculation protocols were initially optimized, by evaluating the procedure of acquisition, of inoculation, the number of insects per plant and the tomato cultivar used as the test plant. The standard methodology was defined by using the Viradoro cultivar, acquisition from infected detached tomato leaves in polyethylene tubes, and three insects per plant confined in plastic cups for inoculation. The acquisition and inoculation access periods were standardized in 48 hours. The transmission efficiency tests were performed with single and mixed infections. Additionally, the percentage of whiteflies that had acquired the virus 48h after inoculation was determined in single and mixed infections. As a result, no significant difference was found between the acquisition rate of ToSRV and TGVV in insects fed on leaves with single and mixed infections. However, the infection percentage of plants agro or vector-inoculated with ToSRV (single or mixed inoculation) was invariably higher than the rate of infection of TGVV in all tests. Infection of tomato plants by the ToSRV isolate was more efficient than infection with TGVV. In single and mixed infections, the rate of infected plants by ToSRV was higher in all tests. In conclusion, most probably the predominance of ToSRV in the field is related to the efficiency of colonization and infection of ToSRV in tomato plants and also to the higher efficiency of whitefly transmission, suggesting the excellent adaptation of this species in tomato under growing conditions in Brazil.

Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2011. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2011-12-05T11:58:51Z No. of bitstreams: 1 2011_AntonioJosePachecoLeao.PDF: 957364 bytes, checksum: 4170382a2802feb3b59699991b960ff8 (MD5) / Approved for entry into archive by Elzi Bittencourt(elzi@bce.unb.br) on 2011-12-05T14:22:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_AntonioJosePachecoLeao.PDF: 957364 bytes, checksum: 4170382a2802feb3b59699991b960ff8 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-12-05T14:22:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_AntonioJosePachecoLeao.PDF: 957364 bytes, checksum: 4170382a2802feb3b59699991b960ff8 (MD5) / O Brasil destaca-se no cenário mundial como o maior produtor e consumidor de maracujá. Por outro lado, a alta incidência de doenças tem causado perdas expressivas na quantidade e na qualidade dos frutos, bem como, reduzindo sensivelmente a vida útil dos pomares comerciais no campo. Tais fatores têm incentivado o uso demasiado de defensivos agrícolas no controle de doenças, muitas vezes, sem alcançar com sucesso este objetivo, e muitas vezes, causando fitotoxidez nas plantas, contaminação do meio ambiente e do próprio homem. Diante deste cenário, esse trabalho teve como objetivos: 1) Comparar tipos de fixadores (grampo e fita) do enxerto ao porta-enxerto; 2) Determinar a eficácia de fungicidas e indutores de resistência no índice de pegamento de enxertos; 3) Determinar os índices de pegamento de enxertos sobre porta-enxerto de espécies silvestres e híbridos inter e intra-específicos e avaliar o desenvolvimento inicial dessas plantas em campo. 4) Avaliar a eficiência do uso da enxertia por encostia visando à produção de mudas com sistemas radiculares múltiplos. Como enxertos, utilizaram-se ponteiras da cv. BRS Gigante amarelo. Como porta-enxertos, foram utilizados os híbridos interespecíficos (geração F1) entre P. caerulea x Passiflora edulis “flavicarpa” comercial, P. vitifolia x P. setacea; um híbrido intraespecífico de P. edulis (BRS Gigante Amarelo) e a espécie silvestre P. serrato-digitata. As enxertias foram realizadas pelos métodos de “Garfagem em Fenda Cheia” e “Encostia” na altura 10 cm e de 05 cm a 20 cm respectivamente. Os experimentos foram conduzidos na Embrapa Cerrados, em Planaltina-DF, sob condições controladas em casa de vegetação e em campo. Foram comparados os efeitos do uso do grampo já utilizado para enxertia em cucurbitáceas e da fita de plástico convencional já utilizada nas enxertias do tipo garfagem para frutíferas em geral. Após a enxertia por Garfagem em Fenda Cheia, foram colocados sacos de plástico apropriado cobrindo o local da enxertia para evitar desidratação do enxerto, conforme recomendado para outras espécies de frutíferas. Para a enxertia tipo Encostia, utilizou-se somente fitas de plástico para fixação do enxerto ao porta-enxerto. Para comparar o efeito do grampo e da fita, utilizou-se delineamento inteiramente casualizado com dois tratamentos (fita e grampo), 10 repetições e três plantas úteis por parcela. Para o experimento referente ao efeito de fungicidas e indutores de resistência, utilizou-se o delineamento experimental inteiramente casualizado, com 4 repetições de 10 plantas úteis e 10 tratamentos. Para avaliar o potencial dos porta enxertos, experimento foi montado na casa de vegetação usando delineamento experimental em blocos ao acaso, com quatro repetições de cinco plantas úteis, quatro porta-enxertos e a cultivar BRS Gigante Amarelo, oriunda de sementes (pé-franco) como testemunha, totalizando cinco tratamentos. Para analisar o desempenho inicial dos porta-enxertos em campo, as mudas, formadas em sacos de polietileno de 2,5 litros de capacidade, foram plantadas em covas medindo 40 x 40 x 40cm, localizadas em Latossolo-Vermelho-amarelo (LVA) com histórico de podridão-do-colo (Fusarium solani) e adubadas com 5 litros de esterco de galinha poedeira, 500 gramas de superfosfato simples e 50 gramas de calcário dolomítico Filler. As plantas estão sendo conduzidas em espaldeiras verticais com um único fio de arame a 1,90 m do solo e irrigadas por gotejamento. O delineamento experimental foi em blocos ao acaso, com quatro repetições de cinco plantas úteis, três porta-enxertos e a cultivar BRS Gigante Amarelo, oriunda de sementes (pé-franco) como testemunha, totalizando cinco tratamentos. Para avaliar a eficácea da enxertia por “Encostia” na formação de m udas de sistemas radiculares múltiplos, utilizaram-se como porta-enxertos, o híbrido interespecífico F1 entre P. caurulea x P. edulis “roxo” silvestre (CPAC – ERE) e o híbrido intraespecífico P.edulis “flavicarpa” x P. edulis “flavicarpa” (BRS Gigante amarelo). O delineamento foi em blocos ao acaso com 6 tratamentos, 5 repetições 4 plantas úteis por parcela. Verificou-se que: 1) Não houve diferença significativa ao nível de 5% pelo teste de Tukey, entre os dois tipos de fixadores (fita e grampo) no índice de pegamento dos enxertos, embora esse índice tenha sido melhor com o uso do grampo; 2) O tratamento com Nativo a 0,1% pulverizado nos cortes e, posteriormente na muda toda, foi o mais eficaz; 3) Índices de pegamentos de enxertos de 40,0%, 93,3%, 96,6% e 100,0% foram obtidos respectivamente sobre porta-enxertos de P. caerulea x RC3 (P. edulis “flavicarpa” x P. edulis “roxo” silvestre), P. vitifolia x P. setacea, P. serrato-digitata e BRS Gigante amarelo (P. edulis “flavicarpa” x P. edulis “flavicarpa”. O híbrido entre P. caerulea x P. edulis “flavicarpa” apresentou alta susceptibilidade ao nematóide das galhas (Meloidogyne javanica), fato que pode ter comprometido o índice de pegamento da enxertia; 4) A enxertia por “Encostia” mostrou-se promissora para produção de mudas de maracujá com sistema radicular múltiplo e simples, propiciando índices de pegamento satisfatórios; 5) Em campo, os melhores desempenhos, até o momento, tem sido observados nas mudas enxertadas sobre P. vitifolia x P. setacea e sobre P. serrato-digitata, seguidos por BRS Gigante amarelo sobre BRS Gigante amarelo em relação à testemunha pé franco oriunda de sementes de BRS Gigante amarelo. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Brazil stands out on the world scenery as the largest producer and consumer of passion fruit. On the other hand, the high incidence of disease has caused significant losses in fruit quantity and quality as well as reducing significantly the commercial orchard lifetime in the field. These factors have encouraged the overuse of pesticides to control diseases, many times without achieving successfully this goal, and often causing phytotoxicity in plants, and contamination of the environment and of the human being. Facing this scenery, this study aimed to: 1) compare types of holders (staples and tape) from the graft to the rootstock; 2) To determine the efficacy of fungicides and resistance inducers in the grafting success ratio, 3) To determine the grafting success ratio on rootstock of wild species and inter and intra-specific hybrids and evaluate the initial development of these plants in the field. 4. To evaluate the efficiency of the use of approach grafting aimed at producing seedlings with multiple root systems. As grafts were used tips of BRS – Gigante amarelo. As rootstock were used inter-specific hybrids (F1 generation) between P. caerulea x commercial Passiflora edulis "flavicarpa", P. vitifolia x P. setacea; an intra-specific hybrid of P. edulis (BRS Gigante amarelo), and the wild species P. serrato-digitata. The grafts were realized by the "cleft grafting and the approach grafting" methods that were held at 10 cm height for the cleft and from 5 cm to 20 cm height for the approach method made along of the rootstock stem. The experiments were conducted at Embrapa Cerrados, in Planaltina-DF, under controlled conditions in greenhouse and field. It was compared the effects of using the clip already used for grafting on other species of plants and the conventional plastic tape already used in the grafts for fruit trees in general. It was used the completely randomized design with two treatments, 10 replications and three plants per plot. After the graft by cleft grafting, were placed appropriate plastic bags covering the grafting place of the graft to avoid dehydration, as recommended for other fruit species. For the approach type, were used only plastic tapes to fix the graft to the rootstock. To evaluate the effect of fungicides and resistance inducers in the grafting success ratio, was used the "cleft" grafting and the fixation of the grafts with plastic tape, being the graft and the rootstock, the BRS Gigante amarelo cultivar. The experimental design was completely randomized design with four replications, 10 plants per plot; It was used several fungicides and resistance inducers sprayed in the cuts of the graft and rootstock and then sprayed all over the seedling before putting the plastic bag to protect the graft. Some fungicides and resistance inducers were also sprayed on rhizosfere of rootstock and grafting seedlings. To analyze the grafting success ratio on rootstock of wild species and inter and intra-specific hybrids and evaluate the initial performance of rootstocks in the field the seedlings were formed in polyethylene bags of 2.5 liters, planted in holes measuring 40 x 40 x 40 cm, located in a Dystrophic Red-Yellow soil (LVA) with history of root rot (Fusarium solani) and fertilized with 5 liters of chicken manure, 500 grams of superphosphate and 50 grams of lime Filler. Plants are being conducted on vertical trellises with a single wire at 1.90 m from the soil and drip irrigated The experimental design used was randomized blocks with four repetitions of five useful plants, four rootstocks and the BRS Gigante amarelo cultivar, originated from seeds (ungrafted) as the control, totalizing five treatments. On field conditions was not analyzed the hybrid P. caerulea x P. edulis.To evaluate the efficiency of the use of approach grafting aimed at producing seedlings with multiple root systems was used the experimental design randomized blocks with six treatments, five repetitions and four usefull plants. It was verified that: 1) There was no significant difference at 5% by Tukey test, between the two types of holders (tape and staple) in the grafting success ratio, although this index has been better with the clip staple use. 2) The treatment with Nativo at 0.1% sprayed into the cuts and then all over the seedling, was the most effective. 3) The grafting success ratio of 40.0%, 93.3%, 96.6% and 100.0% were obtained respectively on rootstocks of P. caerulea x RC3 (P. edulis "flavicarpa" x P. edulis "purple" wild), P. vitifolia x P. setacea, P. serrato-digitata and BRS Gigante amarelo (P. edulis "flavicarpa" x P. edulis "flavicarpa." The hybrid between P. caerulea x P. edulis "flavicarpa" showed high susceptibility to root-knot nematode (Meloidogyne javanica), which may have affected the grafting success ratio. 4) The use of approach grafting was usefull in producing seedlings with multiple root systems. 5) In the field, the best performance so far, has been observed on plants grafted on P. vitifolia x P. setacea and on P. serrato digitata, followed by BRS Gigante amarelo on BRS Gigante amarelo.

Dissertação(mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2011. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-03-23T15:42:52Z No. of bitstreams: 1 2011_HugoDesouzaMottaMoreira.pdf: 1295206 bytes, checksum: a09a50b2ac8983dc5e4a8bfdcad3bcec (MD5) / Approved for entry into archive by Elzi Bittencourt(elzi@bce.unb.br) on 2012-03-26T14:51:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_HugoDesouzaMottaMoreira.pdf: 1295206 bytes, checksum: a09a50b2ac8983dc5e4a8bfdcad3bcec (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-26T14:51:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_HugoDesouzaMottaMoreira.pdf: 1295206 bytes, checksum: a09a50b2ac8983dc5e4a8bfdcad3bcec (MD5) / Dentre as frutas produzidas o maracujazeiro está em franca ascensão no Brasil. Entretanto, o cultivo enfrenta diversos problemas na produção e qualidade de frutos causados por, entre outros fatores, fitopatógenos e a falta de materiais superiores. Nesse sentido, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a produtividade, qualidade de frutos e a resistência de progênies de maracujazeiro azedo a virose do endurecimento dos frutos (Cowpea aphid-borne mosaic vírus-CABMV) e verrugose (Cladosporium sp.) bem como estimar parâmetros genéticos que qualificam a influência genética e ambiental nos caracteres propiciando fonte de estratégias de melhoramento genético. O experimento foi realizado na Fazenda Água Lima, utilizando o delineamento experimental em blocos casualizados, com 32 tratamentos (progênies) e quatro repetições, sendo a parcela útil constituída por oito plantas. As progênies avaliadas foram: PLANTA 6, MAR20#40, PLANTA 1, MAR20#29, MAR22#2005, ROXO AUSTRALIANO, MAR20#15, MSC, RC3, RUBI GIGANTE, ARO1, ARO2, MAR20#49, BRS SOL DO CERRADO, MAR20#06, PLANTA 5, MAR20#23, PLANTA 4, PLANTA 2, PLANTA 7, MAR20#03, EC30, MAR20#10, MAR20#34, MAR20#21, FB200, FP01, BRS GIGANTE AMARELO, EC-RAM, GA2, REDONDÃO e MAR20#39. Em campo, foram realizadas 20 colheitas em que se determinou produtividade e número de frutos por hectare, massa média dos frutos (g); classificação dos frutos em cinco classes (primeira, 1B, 1A, 2A e 3A) de acordo com o diâmetro equatorial. Os resultados para o desempenho agronômico mostraram na avaliação geral que houve uma maior produtividade estimada e quantidade de frutos da progênie MAR20#23 (15.474 kg/ha), acima da média nacional, a qual também obteve maior rendimento para frutos 1B. BRS Gigante Amarelo foi a progênie mais produtiva para frutos de primeira (3.343 kg/ha ;53.939 fruto/ha) e AR01 se destacou entre os frutos classe 2A (17.094 frutos/ha; 3.706 kg/ha), ideais para consumo in natura. A maior massa média total por fruto foi obtida pela MSC (155g). Para produtividade total estimada observou-se valor de herdabilidade (ha2) de 65%, com razão CVg/CVe de 0,68, 71% para número total de frutos, com razão CVg/CVe de 0,78, e número de frutos de primeira com ha2 = 81%. A razão CVg/CVe foi menor que 1 para a maioria das variáveis resposta. Para avaliação da reação das progênies quanto às doenças, foram feitas avaliações em frutos para cladosporiose e em folhas para virose, considerando incidência, severidade da doença e porcentagem de plantas resistentes. Todas foram viii classificadas como moderadamente resistentes a virose, sendo que Planta 4 apresentou baixos valores de severidade e incidência e maior porcentagem de plantas resistentes. A herdabilidade para severidade, incidência e porcentagem de plantas resistentes a virose foi: 55%, 37% e 47% respectivamente. Observou-se que a razão CVg/CVe foi menor que 1 para todas as características avaliadas. Quanto a verrugose, a progênie Planta 2 foi considerada moderadamente suscetível. As herdabilidades da severidade e da incidência resultaram em 51% e 57% respectivamente. Por sua vez, a razão (CVg/CVe) foi menor que 1 para todas as características avaliadas. Nesse sentido, os materiais genéticos mostraram consideráveis perspectivas para serem usados em futuros cruzamentos, dando continuidade à pesquisa de melhoramento genético do maracujazeiro visando produtividade e resistência a doenças. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Among the fruits produced, passionfruit is potentialy growing in Brazil. However, the crop faces several problems in production and fruit quality caused by pathogens and the absence of superior materials. In this context, the present work was carried out to evaluate the productivity, fruit quality and resistance of progenies to Passionfruit woodiness virus (Cowpea aphid-borne mosaic virus-CABMV) and to scab (Cladosporium sp.), as well to estimate parameters which qualify the genetic and environmental influence on genetic characters providing a source of genetic improvement strategies. The experiment was conducted at Água Limpa Farm, using randomized block experimental design with 32 treatments (progenies) and four replications, and the useful portion consists of eight plants. The progenies were: PLANTA 6, MAR20#40, PLANTA 1, MAR20#29, MAR22#2005, ROXO AUSTRALIANO, MAR20#15, MSC, RC3, RUBI GIGANTE, ARO1, ARO2, MAR20#49, BRS SOL DO CERRADO, MAR20#06, PLANTA Among the fruits produced, passionfruit is potentialy growing in Brazil. However, the crop faces several problems in production and fruit quality caused by pathogens and the absence of superior materials. In this context, the present work was carried out to evaluate the productivity, fruit quality and resistance of progenies to Passionfruit woodiness virus (Cowpea aphid-borne mosaic virus-CABMV) and to scab (Cladosporium sp.), as well to estimate parameters which qualify the genetic and environmental influence on genetic characters providing a source of genetic improvement strategies. The experiment was conducted at Água Limpa Farm, using randomized block experimental design with 32 treatments (progenies) and four replications, and the useful portion consists of eight plants. The progenies were: PLANTA 6, MAR20#40, PLANTA 1, MAR20#29, MAR22#2005, ROXO AUSTRALIANO, MAR20#15, MSC, RC3, RUBI GIGANTE, ARO1, ARO2, MAR20#49, BRS SOL DO CERRADO, MAR20#06, PLANTA 5, MAR20#23, PLANTA 4, PLANTA 2, PLANTA 7, MAR20#03, EC30, MAR20#10, MAR20#34, MAR20#21, FB200, FP01, BRS GIGANTE AMARELO, EC-RAM, GA2, REDONDÃO and MAR20#39. In the field, during 20 evaluations, it was determined productivity and number of fruits per hectare, the average mass of fruits (g) and classification of fruits into 5 types (first, 1B, 1A, 2A and 3A) in accordance to equatorial diameter. The results for agronomic performance showed that there was a higher estimated productivity and quantity of fruit in the progeny MAR20#23 (15,474 kg/ha), over the national average, which also had higher yield for fruits 1B. BRS Gigante Amarelo was the most productive progeny in first fruits type (3343 kg/ha, 53,939 fruit/ha) and AR01 distinguished itself for 2A fruits type (17,094 fruits/ha, 3,706 kg/ha), ideal for in natura consumption. The higher total average mass per fruit was obtained by the MSC (155g). In order to estimate total productivity there was observed value of inheritability (ha2) of 65%, with reason CVg/CVe of 0.68, 71% for total number of fruits, reason CVg/CVe 0.78, and number of fruits first type with ha2=81%. The reason CVg/CVe was less than 1 for most response variables. To estimate the progenies reaction to diseases, were evaluated scab symptoms in fruits and virus symptoms in leaves, considering the incidence, disease severity and percentage of resistant plants. All were classified as moderately resistant to virus, which Plant 4 had low levels of severity and incidence, and higher percentage of resistant plants. Inheritability for severity, incidence and percentage of plants resistant to viral infection was 55%, 37% and 47% respectively. It was observed that the reason CVg/CVe was less than 1 for all traits. To scab, progeny Plant 2 was considered moderately susceptible. Inheritability of the incidence and severity resulted in 51% and 57% respectively. In turn, the reason (CVg/CVe) was less than 1 for all traits. In this sense, genetic materials showed considerable prospects for use in future crosses, continuing the search for plant breeding in order to yeld and passion fruit disease resistance.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-08-13T15:19:40Z No. of bitstreams: 1 2013_LeydyLorenaMendozaTobar.pdf: 2616918 bytes, checksum: 6590982254752b2aa82977414720ad55 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-08-15T14:04:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_LeydyLorenaMendozaTobar.pdf: 2616918 bytes, checksum: 6590982254752b2aa82977414720ad55 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-15T14:04:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_LeydyLorenaMendozaTobar.pdf: 2616918 bytes, checksum: 6590982254752b2aa82977414720ad55 (MD5) / A cultura de tomate no Brasil é uma das mais importantes do ponto de vista econômico e social. Estudos publicados pela FAO em 2011 posicionam o Brasil no oitavo lugar do ranking mundial de produção. O cultivo de tomateiro no Brasil é feito em diferentes estados e durante grande parte dos meses do ano, favorecendo a ocorrência de diferentes doenças de importância econômica, dentre elas, destacam-se aquelas causadas por espécies do gênero Begomovirus. O gênero Begomovirus encontra-se composto por espécies com partículas geminadas formadas por dois icosaedros incompletos e ácido nucleico do tipo ssDNA encapsidado em um componente ou dois componentes genômicos (DNA A e B), denominadas de monopartidas ou bipartidas, respectivamente. Até o presente momento no Brasil, em tomateiro, não foram relatadas espécies de begomovírus de genoma monopartido. Espécies de Begomovirus são transmitidas com grande eficiência pelo vetor Bemisia tabaci. Para controle das doenças causadas por espécies de Begomovirus esforços vêm sendo concentrados no desenvolvimento de materiais elite através da introgressão de genes de resistência, muitas vezes, provenientes de acessos selvagens do gênero Solanum. Um exemplo é a linhagem LAM 144R que contém o gene dominante Ty-1 caracterizado por conferir resistência a diferentes espécies de Begomovirus. Neste trabalho a linhagem LAM 144R foi avaliada com o objetivo de elucidar os mecanismos virais da resistência conferida pelo Ty-1 e a amplitude da resistência deste gene frente às espécies de Begomovirus bipartidos encontrados no Brasil: Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV), Tomato rugose mosaic virus (ToRMV), Tomato severe rugose virus (ToSRV) e Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV). A avaliação da replicação viral foi realizada mediante experimentos de agroinfiltação do componente A de ToCMoV na linhagem resistente LAM 144R e na isolinha suscetível LAM 144S. A quantificação da carga viral foi realizada por PCR quantitativa em tempo real (qPCR), usando primers específicos para capa proteica (CP1). Os dados foram analisados pelo teste não paramétrico Kruskal-Wallis. O título viral foi significativamente menor nas plantas da isolinha LAM 144R em comparação com LAM 144S, mostrando uma quantidade duas vezes menor de carga viral na linhagem resistente no décimo dia após a infiltração. Para avaliar o efeito deste gene no movimento a longa distância de Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV) na linhagem LAM 144R duplas enxertias foram realizadas. Plantas LAM 144S (suscetível) foram inoculadas com ToCMoV. Duplas enxertias foram realizadas utilizando como enxerto segmentos de LAM 144R ou LAM144S e como sobre-enxerto, LAM 144S. Amostras foram coletadas em diferentes tempos após as enxertias e a detecção de ToCMoV por PCR e Southern blot mostraram uma restrição no movimento viral a longa distância quando foram usadas as plantas LAM 144R contendo o gene Ty-1 como enxerto Para o estudo da amplitude da resistência conferida pelo gene Ty-1 na linhagem LAM 144R, plantas foram inoculadas via biobalística com DNA das quatro espécies de Begomovirus mencionadas acima. Como controle positivo utilizou-se plantas de LAM 144S. As avaliações de sintomas foram realizadas aos 21 e 40 dias após inoculação (dai) e a acumulação viral foi avaliada aos 30 (dai) mediante Southern Blot usando sondas para o componente A de Begomovirus. Como resultado as plantas de LAM 144R inoculadas com ToCMoV apresentaram sintomas leves e baixa acumulação viral. Para ToSRV observou-se ausência de sintomas ou sintomas leves e baixa acumulação viral. Para ToRMV poucas plantas apresentaram sintomas leves e não foi detectada acumulação viral. Para ToYVSV observou-se sintomas leves em algumas plantas, um baixa acumulação viral em cinco delas e uma forte acumulação em duas amostras. Os resultados encontrados neste estudo demonstram que LAM 144R pode ser considerada promissora para uso em programas de melhoramento no desenvolvimento de diferentes cultivares comerciais. _____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The tomato crop in Brazil is important economically and socially. FAO placed, Brazil in the 8th position in the world rank of tomato production. Tomatoes in Brazil are grown in different states and during most months of the year, what favors the appearance of different diseases of economic importance, such as those caused by begomoviruses. Begomoviruses are transmitted very efficiently by the vector Bemisia tabaci. The genome can be either monopartite or bipartite (DNA A and DNA B). So far, only bipartite tomato begomoviruses have been reported in Brazil. To control diseases caused by begomovirus include the development of elite materials through introgression of resistance genes from wild Solanum accessions. An example is the line LAM 144R that contains the dominant gene Ty-1 which confer resistance to different Begomovirus species. This line LAM 144R was here evaluated in order to elucidate the mechanisms of viral resistance conferred by Ty-1. The breadth of this resistance was tested by inoculation with four bipartite Begomovirus-especies found in Brazil: Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV), Tomato rugose mosaic virus (ToRMV), Tomato severe rugose virus (ToSRV), and Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV). As positive control LAM 144S were used plants. Symptoms were scored at 21 and 40 days after inoculation (dai) and viral accumulation was evaluated at 30 (dai) by Southern blot. As a result LAM 144R mild symptoms and low or no viral accumulation was observed with ToCMoV, ToSRV, ToRMV and ToYVSV. The evaluation of virus replication was carried out by agronfiltration experiments of ToCMoV DNA-A in the resistance LAM 144R and susceptible LAM 144S isolines. Quantification of the viral load was performed by quantitative polymerase chain reaction (qPCR) using primers specific for coat protein (CP1). Data were analyzed by nonparametric Kruskal-Wallis test. The viral titer was significantly lower in plants LAM 144R compared to the isoline LAM 144S, showing 2 times lower viral load in the resistant lineage ten days after agroinfiltration. To avaluate the effect of this gene on the long-distance movement of Tomato chlorotic mottel virus , in near isogening lines LAM 144R and LAM 144S, double grafts were performed. Plants LAM 144S (susceptible) were inoculated with ToCMoV. Double grafts were performed using graft segments of LAM 144R and LAM 144S and as overgraft, LAM 144S plants. Samples were collected at different times after grafting and ToCMoV was detected by PCR, Southern blot, and tissue blott showing a restriction in long-distance viral movement when plants LAM 144R containing the Ty-1 gene was used as graft. The results of this study demonstrate that LAM 144R can be considered promising for the use in breeding programs for the development of new resistent cultivars. The evaluation of virus replication was carried out by agronfiltration of ToCMoV DNA-A in the resistant LAM 144R and susceptible LAM 144S isolines. Quantification of viral load was performed by quantitative polymerase chain reaction (qPCR) using primers specific for the coat protein (CP1). Data was analyzed by nonparametric Kruskal-Wallis test. The viral titer was significantly lower in plants LAM 144R compared to the LAM 144S, showing 2 times lower viral load in the resistant line at tenth day after agroinfiltration. To evaluate the effect of this gene on the long-distance movement of Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV) in the near isogenig lines LAM 144R and LAM 144S, double grafts were performed. Plants LAM 144S (susceptible) were inoculated with ToCMoV. Double grafts were performed using as grafts LAM 144R or LAM 144S segments and as overgrafts, LAM 144S plants. Samples were collected at different times ToCMoV was detected by PCR and Southern blot showing a restriction in long-distance viral movement when plants LAM 144R containing the Ty-1 gene was used as grafts. The results of this study demonstrate that LAM 144-R can be considered promising for the use in breeding programs for the development of new resistent cultivars to different Begomovirus species.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Molecular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-08-12T14:05:17Z No. of bitstreams: 1 2013_LigiaMoreiradeAlmeida.pdf: 1709399 bytes, checksum: 799e962d60dcfee21c8420ba47ada14d (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-08-15T14:38:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_LigiaMoreiradeAlmeida.pdf: 1709399 bytes, checksum: 799e962d60dcfee21c8420ba47ada14d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-15T14:38:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_LigiaMoreiradeAlmeida.pdf: 1709399 bytes, checksum: 799e962d60dcfee21c8420ba47ada14d (MD5) / Os begomovírus pertencem à família Geminiviridae e são transmitidos eficientemente pelo vetor Bemisia tabaci, conhecido como mosca-branca. Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV) é um dos principais begomovírus que afetam a cultura do tomateiro no Brasil. Plantas infectadas com ToCMoV geralmente desenvolvem sintomas de clorose internerval, manchas cloróticas e mosqueado amarelo. ToCMoV e outros begomovírus do Novo Mundo são compostos por dois componentes de DNA circular de fita simples (conhecidos como DNA-A e DNA-B) que se replicam no núcleo das células infectadas. Uma das melhores estratégias para controle da dispersão da doença é o emprego de cultivares resistentes. Recentemente, uma linha quase isogênica de ‘Santa Clara’ (SC) chamada ‘LAM 157’, carregando o gene de resistência tcm-1, foi obtida pela Embrapa Hortaliças. O gene tcm-1 confere resistência a diferentes espécies de begomovírus e é caracterizado pela redução ou ausência de sintomas e restrição do acúmulo viral em plantas infectadas. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a resistência conferida na linhagem LAM 157 em resposta à infecção causada pelo begomovírus ToCMoV. Os mecanismos de replicação e movimento viral a longa distância foram avaliados na linhagem LAM 157 e na linhagem suscetível ‘Santa Clara’. A replicação viral foi analisada por meio de agroinfiltração de folíolos com o DNA-A de ToCMoV seguida de quantificação absoluta do acúmulo viral resultante por qPCR no segundo, sexto e décimo dias após a agroinfiltração. A quantidade de DNA viral aumentou com o tempo em todas as plantas infectadas, evidenciando a replicação viral. No entanto, essa quantidade foi estatisticamente menor em LAM 157. O movimento viral a longa distância foi avaliado por meio de dupla-enxertia sobre porta enxerto ‘Santa Clara’ infectado com ToCMoV e posterior análise por PCR, para determinar se a resistência conferida pela linhagem LAM 157 impediria a movimentação do vírus a longa distância. Foi possível detectar a presença de ToCMoV por PCR nos folíolos apicais do grupo controle, 10 dias após a primeira enxertia. Neste momento, não foi detectado vírus no grupo com enxertos de plantas resistentes, evidenciando um atraso no movimento viral. Trinta dias após a segunda enxertia, todas as plantas do grupo controle encontravam-se infectadas, enquanto no grupo com plantas LAM 157, em apenas duas de seis plantas foi detectada a presença do vírus. Os resultados sugerem que a resistência apresentada pela isolinha LAM 157 se deve a restrição na replicação viral aliada a uma menor eficiência no movimento viral. Os MicroRNAs (miRNAs) são pequenos RNAs endógenos que regulam a expressão de diversos genes que estão envolvidos com muitos processos biológicos fundamentais. Para verificar uma possível expressão diferencial de miRNAs em tomateiros inoculados com ToCMoV, foram analisados o acúmulo de miRNAs previamente associados com o desenvolvimento da planta e miRNAs relacionados com as respostas à estresse. Plantas suscetíveis de SC e de plantas resistentes da linhagem 'LAM 157' foram inoculados por bombardeamento de partículas com clone infeccioso de ToCMoV. Ácidos nucleicos totais foram isolados a partir de folhas apicais com infecção sistêmica, 17 dias após a inoculação, e separados em gel desnaturante de poliacrilamida. Foram realizados Northern blots utilizando como sondas oligonucleótidos complementares aos miRNAs, marcados com γ32P-ATP na extremidade 5’. A quantidade de miRNAs 159, 164, 168 e 172 (previamente associados com o desenvolvimento da planta) acumulada pelas plantas controle, foi comparada nas plantas SC e ‘LAM 157’ infectadas com ToCMoV. Os resultados mostraram um acúmulo diferencial de miRNAs entre plantas resistentes e suscetíveis, infectados e controles inoculados. Estes resultados sugerem que a expressão dos miRNAs da planta hospedeira pode ser afetada em consequência da infecção por ToCMoV e podem refletir diferenças na intensidade da expressão de sintomas, bem como nos níveis de resistência ao vírus. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Begomoviruses belong to the Family Geminiviridae and are efficiently transmitted by the vector Bemisia tabaci, also known as whitefly. Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV) Tomato chlorotic mottle virus (ToCMoV) is one of the main begomovirus species affecting tomatoes in Brazil. Plants infected with ToCMoV generally develop symptoms of vein chlorosis, chlorotic spots, and mottling. ToCMoV and other begomoviruses from New World are composed by two circular single stranded DNA components (known as DNA-A and DNA-B) that replicate in the nucleus of infected cells. One of the best strategies to control the disease spread is the use of resistant cultivars. Recently, a ‘Santa Clara’ (SC) near-isogenic line named ‘LAM 157’ carrying the resistance locus tcm-1 was obtained by Embrapa. The broad tcm-1 locus resistance to different begomovirus species is characterized by the reduction or absence of symptoms and restriction of virus accumulation in infected plants. This work aimed to describe the resistance conferred by the tcm-1 locus in ‘LAM 157’ in response to the infection caused by the begomovirus ToCMoV. The mechanisms of viral replication and movement were evaluated in resistant line LAM 157 and in susceptible line ‘Santa Clara’. Viral replication was analyzed in leaves vacuum-agroinfiltrated with the ToCMoV DNA-A, followed by the absolute quantification of viral accumulation by qPCR two, six and ten days after agroinfiltration. The amount of viral DNA increased with time in all the infiltrated plants reflecting viral replication, but it was significantly lower in ‘LAM 157’. For evaluation of viral long distance movement, a double grafting experiment was performed. ToCMoV infected SC plants were used as rootstock in two groups where scions of susceptible SC and resistant LAM 157 were grafted. In both, final scions were SC plants. ToCMoV was detected by PCR in apical leaves from control group 10 days after the first grafting. At this time, no virus was detected in resistant grafts confirming a delay in virus movement. Thirty days after the second grafting, all plants from the control groups were infected, while in the group of LAM 157 intergraft only in two of six plants were detected the presence of virus. The results indicated that the resistant response in “LAM 157” is due the restriction of viral replication, in addition to a lower efficiency of viral movement in these resistant plants. MicroRNAs (miRNAs) are small endogenous RNAs that regulate the expression of several genes that are involved in many important biological processes. To verify a possible differential expression of miRNAs in tomato inoculated with ToCMoV, the accumulation of miRNAs previously reported to be related to plant development and with stress responses was studied. Susceptible ‘Santa Clara’ (SC) plants and resistant ‘LAM 157’ plants were inoculated by particle bombardment with infectious clone of ToCMoV. Total nucleic acids were isolated from systemically infected leaves 17 days post inoculation and loaded in denaturing polyacrylamide gel. Northern blots were performed using as probes gamma32P-γATP end-labeled oligonucleotides complementary to miRNAs. The amount of miRNAs 159, 164, 168 and 172 (previously related with plant development) accumulated by control plants of SC and ‘LAM 157’ was compared with those in ToCMoV-infected plants. The results showed differential accumulation of miRNAs between infected susceptible and resistant plants and mock-inoculated controls. These results suggest that the expression of host miRNAs can be affected as a result of ToCMoV infection and may reflect differences in symptom expression intensity as well as in the levels of virus resistance.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-09-10T21:30:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Aline Gleyce Julião Bomfim.pdf: 1213201 bytes, checksum: 343455b262935f8c75c16d8f5f743bfa (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-10-01T23:08:13Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Aline Gleyce Julião Bomfim.pdf: 1213201 bytes, checksum: 343455b262935f8c75c16d8f5f743bfa (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-01T23:08:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Aline Gleyce Julião Bomfim.pdf: 1213201 bytes, checksum: 343455b262935f8c75c16d8f5f743bfa (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / Fungos fitopatogênicos são aqueles que, assim como endófitos, habitam no interior dos tecidos vegetais. No entanto, os micro-organismos denominados como fitopatogênicos, diante de estresses bióticos e abióticos, tornam-se patógenos e causam doenças nas plantas por meio de distúrbios em seu metabolismo celular. A família Cactaceae possui uma fisiologia propícia para o surgimento de doenças, a incidência de fungos fitopatogênicos é alta devido a sua fisiologia, por apresentarem caule, ramos e cladódios suculentos. O controle das doenças tem sido feito principalmente por meio da utilização de defensivos agrícolas, produtos como inseticidas, fungicidas, herbicidas, vermífugos e solventes. Porém, diante dos prejuízos causados por esses produtos de natureza química, tem levantado uma preocupação com a saúde e o meio ambiente e alternativas estão sendo procuradas para substituir o uso desses produtos. Entre as alternativas, encontram-se os fungos isolados de plantas da Caatinga, dentre elas os cactos. Esses fungos isolados das partes aéreas dos vegetais, denominados fungos endofíticos têm despertado o interesse da comunidade científica, especialmente por seus potenciais na produção de metabólitos. O presente estudo objetivou selecionar fungos endofíticos de cactáceas crescendo em áreas da Caatinga que estão depositados na Micoteca URM-UFPE quanto à atividade antagônica a fungos fitopatogênicos isolados de palma forrageira (Nopalea cochenillifera). Foram testados 20 espécies de fungos endofíticos frente a 10 isolados de fitopatógenos da palma forrageira. O potencial antagônico foi analisado por três parâmetros: inibição, parasitismo e competição. O antagonismo por inibição foi o mais expressivo, contando com 17 espécies de endófitos com potencial inibitório. As melhores espécies foram Aspergillus tamarii e Penicillium griseofulvum que inibiram todos os isolados de fitopatógenos utilizados no teste. Além destas, A. niger, A. ochraceus, A. parasiticus, A. versicolor, Cladosporium sphaerospermum, P. chrysogenum, P. commune e Purpureocillium lilacinum que obtiveram 90% no potencial de inibição. Trichoderma longibrachiatum obteve resultado expressivo, porém, apresentou apenas antagonismo por parasitismo. Todas as 20 espécies de fungos endofíticos isolados de cactáceas depositadas na Micoteca URM-UFPE mostraram-se eficientes na produção de quitinase. Aspergillus parasiticus URM6868 foi o fungo endofítico que apresentou maior atividade 4,28 (U/mL). / Phytopathogenic fungi live within internal plant tissues like endophytic fungi. However microorganisms phytopathogenic when when they are affected by biotic and abiotic stresses, these become pathogens and cause disease in plants through disturbances in their cellular metabolism. The Cactaceae family has a favorable physiology to the emergence of diseases, the incidence of pathogenic fungi is high due to their physiology, presenting stem, branches and succulent cladodes. The disease control has been done mainly through the use of pesticides. Such as insecticides, fungicides, herbicides, wormers and solvents. However, the damage caused by these products of chemical nature, a concern have been raised about health and environment and the alternatives are being sought to replace the use of these products. Amongst the alternatives are the fungi isolated from Caatinga's plants, among them fungi from cactaceae. These fungi isolated from the aerial parts of the plant, called endophytes have awoken the interest of the scientific community, especially for its potential in the production of metabolites. This study aimed to select endophytic fungi isolated from Caatinga's cactaceae that are deposited in the URM Culture Collection- UFPE with antagonistic activity to pathogenic fungi isolated from the cacti (Nopalea cochenillifera). Twenty species of endophytic fungi against 10 isolated of pathogenic fungiwere tested. The antagonistic potential was analyzed by three parameters: Inhibition, parasitism and competition. Antagonism by inhibition was the most expressive, presented 17 species of endophytic with inhibitory potential. The best species were Aspergillus tamarii and Penicillium griseofulvum with 100% of inhibition. Aspergillus niger, Aspergillus ochraceus, Aspergillus parasiticus, Aspergillus versicolor, Cladosporium sphaerospermum, Penicillium chrysogenum, Penicillium commune and Purpureocillium lilacinum showed 90% of inhibition. Trichoderma longibrachiatum obtained significant results, however, showed only antagonism by parasitism. All 20 species of endophytic fungi isolated from cactus deposited in the URM Culture Collection -UFPE were effective in producing chitinase. Aspergillus parasiticus URM 6868 was the endophytic fungus that demonstrated higher activity 4.28 (U / mL).

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-09-18T14:11:27Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1374908 bytes, checksum: fdd5dbffd013f92a4375592a131835fd (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-18T14:11:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1374908 bytes, checksum: fdd5dbffd013f92a4375592a131835fd (MD5) Previous issue date: 2018-03-23 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Clonostachys rosea é eficaz no biocontrole de várias doenças fúngicas. Ao longo dos anos, constatou-se a eficiência de isolados obtidos no Brasil no biocontrole do mofo cinzento do tomateiro, causado por Botrytis cinerea. Há evidências de que o isolado NCR61/F produza compostos supressivos ao patógeno, mas desconhecia-se a bioatividade e a natureza desses compostos. Assim, estudou-se a bioatividade de compostos de filtrados e extratos do cultivo de C. rosea em meio líquido a B. cinerea e se caracterizaram os metabólitos secundários produzidos. Filtrados e extratos do crescimento do isolado inibiram o crescimento micelial e a germinação de conídios de B. cinerea. O antagonista produziu 51 metabólitos, como peptaibols, glisopreninas e bissorbicilinoides e alguns inderterminados, principalmente após 10 dias de cultivo. Clonostachys rosea é adaptado a diferentes ecossistemas e pode colonizar tecidos de raízes e folhas, mas a dinâmica de sobrevivência nesses tecidos é pouco compreendida. Estudou-se a sobrevivência do isolado NCR61/F como epífita em folhas, na rizosfera e no rizoplano de tomateiros, até 48 dias após a aplicação. A sobrevivência do antagonista diminuiu ao longo do tempo nas superfícies foliares e radiculares, mas sua população permaneceu estável na rizosfera de tomateiros. Um aspecto fundamental e inédito quanto a aplicações de C. rosea é seu efeito na microbiota de folhas de tomateiro, o que foi, também, estudado. O efeito deletério de C. rosea no microbiota foi de curta duração e transiente. O efeito foi maior nas comunidades epifítica e endofítica de fungos, com maior redução em diversidade e riqueza de comunidades até 3 dias após a aplicação. A abundância de filos e alguns gêneros, como Cladosporium e Alternaria, e Cercospora foi menor nas plantas tratadas com o antagonista que nas não tratadas. Em bactérias epifíticas, houve maiores alterações na diversidade aos 3 e 12 dias, e gêneros como Bacillus, Arthrobacter and Enterobacter foram menos abundantes nos dias iniciais após a aplicação. Ao final das avaliações (24 dias), houve resiliência da microbiota foliar de plantas tratadas com o antagonista e aumento gradual das populações. Em conclusão, constatou-se que C. rosea produz compostos inibitórios a B. cinerea, pode sobreviver em folhas e raízes e rizosfera de tomateiro e altera de forma transitória as comunidades fúngicas e bacterianas da solanácea. As informações aqui geradas são relevantes para compreender os mecanismos de antagonismo de C. rosea NCR61/F, sua capacidade de sobrevivência e o efeito perturbador da sua aplicação no microbiota do tomateiro. O conhecimento gerado é importante para traçar estratégias de uso do antagonista e, até mesmo, para validar o seu uso sustentável como agente de biocontrole. / Clonostachys rosea is effective in biocontrol of several fungal diseases. Over the years, we studied the efficiency of isolates obtained in Brazil in the biocontrol of gray mold of tomato, caused by Botrytis cinerea. There is evidence that the C. rosea isolate NCR61/F produces compounds suppressive to the pathogen, but the bioactivity and nature of these compounds was unknown. Thus, the bioactivity of filtrate compounds and extracts of C. rosea culture in liquid medium against B. cinerea was studied and the secondary metabolites produced were characterized. Filtratess and extracts from the growth of the isolate inhibited the mycelial growth and conidial germination of B. cinerea. The antagonist produced 51 metabolites, such as peptaibols, glisoprenins and bissorbicilinoids and some undetermined, mostly after 10 days of culture. Clonostachys rosea is adapted to different ecosystems and can colonize tissues of roots and leaves, but the dynamics of survival in these tissues is little understood. The survival of the isolate NCR61/F isolate was studied as epiphyte in leaves, rhizosphere and rizoplane of tomato plants, up to 48 days after application. The survival of the antagonist decreased over time on leaf and root surfaces, but its population remained stable in the tomato rhizosphere. A fundamental and new aspect of the applications of C. rosea is its effect on the microbiota of tomato leaves, which was also studied. The deleterious effect of C. rosea on the microbiota was transient. The effect was higher in the epiphytic and endophytic communities of fungi, with greater reduction in diversity and richness of communities until 3 days after application. The abundance of phyllum and some genera, such as Cladosporium, Alternaria and Cercospora was lower in plants treated with the antagonist than in plants not treated. Regarding epiphytic bacteria, there were major changes in diversity at 3 and 12 days, and genera such as Bacillus, Arthrobacter and Enterobacter were less abundant in the initial days after application. At the end of the evaluations (24 days), there was resilience of the foliar microbiota of plants treated with the antagonist and gradual increase of the populations. In conclusion, it was found that C. rosea produces inhibitory compounds to B. cinerea, can survive in leaves, roots and rhizosphere of tomato and transiently changes the fungal and bacterial communities of tomato plants. The information generated here is relevant to understand the mechanism of antagonism of C. rosea NCR61/F, its ability to survive and the disturbing effect of its application on the tomato microorganism. The generated knowledge is important to draw strategies of antagonist use and even to validate its sustainable use as biocontrol agent.