Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, Brasília, 2013. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2014-10-03T18:57:37Z No. of bitstreams: 1 2013_GuilhermeÁlvaresLapidus.pdf: 934140 bytes, checksum: 7d0f21caae10e965231d7c6fdf2fc5f4 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-10-03T18:58:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_GuilhermeÁlvaresLapidus.pdf: 934140 bytes, checksum: 7d0f21caae10e965231d7c6fdf2fc5f4 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-03T18:58:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_GuilhermeÁlvaresLapidus.pdf: 934140 bytes, checksum: 7d0f21caae10e965231d7c6fdf2fc5f4 (MD5) / Apresenta estudo sobre a relação da irrigação do tomate [Solanum lycopersicum L. (= Lycopersicon esculentum Mill.) e o fungo Fusarium oxysporum Schl. f. sp. lycopersici (Sacc.) Snyder & Hansen, causador da murcha de fusário. Devido à sua grande capacidade de sobrevivência, mesmo na ausência de hospedeiros, F. oxysporum f. sp. lycopersici (Fol) é responsável por inviabilizar grandes áreas de cultivo, forçando os produtores à contínua busca de áreas livres do fungo (Agrios, 2004).

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2014. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2014-10-16T19:08:21Z No. of bitstreams: 1 2014_FrancileneLopesdaSilva.pdf: 2838227 bytes, checksum: 2ba894041194431b0f5e7d4cf0cf231e (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-10-16T19:09:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_FrancileneLopesdaSilva.pdf: 2838227 bytes, checksum: 2ba894041194431b0f5e7d4cf0cf231e (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-16T19:09:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_FrancileneLopesdaSilva.pdf: 2838227 bytes, checksum: 2ba894041194431b0f5e7d4cf0cf231e (MD5) / Algumas espécies de Trichoderma quando em íntima associação com plantas hospedeiras podem desencadear sua resposta de defesa e, desta forma, induzir resistência contra subsequentes infecções fúngicas. No presente trabalho foi analisado a expressão dos genes codificadores de proteínas de defesa (Glu, Chit 1, LOX, PER e PAL) em feijoeiro comum, Phaseolus vulgaris, em resposta à asssociação com os isolados das espécies T. asperellum (468/02) e T. harzianum (475/2 e 303/2), após 24, 48 e 72 horas de interação; Além disso, foi analisado o secretoma da interação entre o feijoeiro comum e o isolado 303/02 visando mapear proteínas com papel na interação entre T. harzianum e feijoeiro comum em um sistema hidropônico. A presença do T. asperellum 468/02 e T. harzianum 457/02 aumentaram a expressão dos genes de defesa do feijoeiro Chit, Glu e PAL durante as primeiras 24h de interação. Um aumento mais tardio, com 72 h, foi observado na expressão desses mesmos genes de defesa em feijoeiro na presença T.harzianum 303/02. O gene PER teve sua expressão aumentada com 48 h de interação para os três isolados. O aumento na expressão do gene LOX foi baixa para os isolados 468/02 e 457/02 e não foi observado aumento para o isolado 303/02. A análise por LC-MS/MS do secretoma de T. harzianum 303/02 crescido na ausência da planta hospedeira permitiu a identificação de 185 proteínas, identificadas principalmente com enzimas hidróliticas (27 %), como as α ou β-1,3-, 1,4 e 1,6 glicanase, quitinases, e algumas poteases (16,5 %) como as serina e aspartato proteases. Uma cerato-platanina e uma alginato liase também foram identificadas nesta condição. A análise do secretoma da condição Co-cultivo (Feijoeiro comum/ T. harzianum) permitiu a identificação de 165 proteínas, sendo também a maioria formada por glicosil hidrolases (quitinase and glicanases). Estas mesmas sequências foram pareadas com o banco de dados de Phaseolus vulgaris, resultando na identificação de 7 proteínas de plantas: 2 glicosil hidrolases (famílias 17 e 18) proteínas relacionadas a patogênese e inibitores de proteases. Em ambas as condições foram encontradas muitas proteínas sem anotação no banco de dados. Não foram identificadas proteínas no secretoma da planta crescida sozinha. Os resultados obtidos sugerem que os isolados T. harzianum 457 e 303/02 e T. asperellum 468/02 agem como moduladores de resposta de defesa da planta. Provavelmente, eles desencadeiam a expressão de genes de defesa ou genes que codificam enzimas que participam da produção de compostos secundários envolvidas na resposta de defesa da planta. Estudos futuros serão realizados para confirmar a capacidade desses fungos de modular a resposta de defesa do feijoeiro comum bem como para mapear proteínas fúngicas envolvidas nesta interação. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Trichoderma species may trigger their defense responses and induce resistance against subsequent fungal infections. In the present work, the expression pattern of genes encoding defense proteins (Chit, Glu, LOX, PER and PAL) in common bean, Phaseolus vulgaris, was evaluated in response to association with T. asperellum (strain 468/02) and T. harzianum (strains 457/02 and 303/02) after 24, 48 and 72 hours of interaction. In addition, the secretome of this interaction was analyzed to mapp proteins playing a role in the association between T. harzianum and bean in a hydroponic system. The presence of T. asperellum 468/02 and T. harzianum 457/02 increased the expression of defense genes Chit, Glu and PAL in common bean during the first 24 hours of interaction. By contrast, a late increase, with 72 h, in the expression of these same defense genes in common bean was observed in the presence of T. harzianum 303/02. PER gene expression was increased with 48 h of interaction for all isolates. The increase in LOX gene expression was low for 468/02 and 457/02 strains and no increased was observed for 303/02 strain. LC-MS/MS analysis of the secretome T. harzianum 303/02 grown in the absence of the host plant led to the detection of 185 proteins, mostly identified as hydrolytic enzymes (27%), such as α or β-1,3-, 1,4 and 1,6 glucanases, chitinases, and some proteases (16.5%), such as serine and aspartate proteases. A cerato-platanin and an alginate lyase were also identified on this condition. Secretome analysis of the co-culture condition (common bean/T. harzianum 303/02 isolate) led to the detection of 165 proteins, mostly identified as glycosyl hydrolases (chitinases and glucanases). These sequences were mapped to P. vulgaris database, resulting in the identification of 7 plant proteins, 2 glycoside hydrolases (family 17 and 18), pathogenesis-related proteins and protease inhibitors. No proteins were identified when the plants were grown in the absence of T. harzianum 303/02. The results obtained suggested that T. asperellum 468/02 and T. harzianum (457/02 and 303/02) act as inducers of defense common bean. Probably, they triggered the expression of defense genes or genes encoding enzymes pertaining to secondary compounds pathways with roles in plant defense. T. harzianum 303/02 secreted mainly hydrolases (glycosyl hydrolases and proteases) in the absence or presence of the host plant. Further studies will be carried out to confirm their ability to modulate common bean defense response as well as to map fungal proteins presenting role in this association.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-10-23T16:08:50Z No. of bitstreams: 1 2014_EdivânioRodriguesdeAraújo (2).pdf: 3003726 bytes, checksum: 23430b119aff14a628af0d6d8cbfc70c (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-11-12T12:15:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_EdivânioRodriguesdeAraújo (2).pdf: 3003726 bytes, checksum: 23430b119aff14a628af0d6d8cbfc70c (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-12T12:15:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_EdivânioRodriguesdeAraújo (2).pdf: 3003726 bytes, checksum: 23430b119aff14a628af0d6d8cbfc70c (MD5) / A mancha-bacteriana está entre os fatores que prejudicam a produção de tomate no Brasil. A doença é causada por um complexo de espécies do gênero Xanthomonas: X. euvesicatoria, X. vesicatoria, X. perforans e X. gardneri. Os objetivos dessa tese são: i) realizar um levantamento da frequência de ocorrência de espécies e raças causadoras da doença em lavouras brasileiras de tomate, tanto destinadas ao consumo in natura quanto ao processamento industrial; ii) estabelecer protocolos de detecção e identificação simultânea das espécies causadoras da doença; iii) compreender o efeito da temperatura e molhamento foliar no monociclo da doença; iv) identificar possíveis agentes causadores da mancha-bacteriana e a comunidade bacteriana presente em mudas assintomáticas cultivadas em viveiro comercial e sementes comerciais de tomateiro. Para alcance desses objetivos, testes de patogenicidade, técnicas moleculares baseadas na PCR (BOX-PCR, iniciadores específicos), além de sequenciamento do gene de avirulência avrXv3 foram utilizados. O efeito da temperatura (15; 20; 25; 30 e 35°C) e molhamento foliar (0; 6; 12; 24 e 48 horas) na severidade da doença foi avaliado para as duas espécies de maior ocorrência: X. perforans e X. gardneri. Da mesma forma, foi verificado o efeito in vitro da temperatura na taxa de multiplicação em meio de cultura dessas espécies. Por fim, por meio de coletas de água superficial no filoplano de mudas assintomáticas e maceração de sementes, buscou-se identificar possíveis agentes patogênicos, tentando identificá-los por isolamento direto, uso de iniciadores específicos e sequenciamento do rRNA de 16S. Com base nos resultados obtidos, verificou-se que X. perforans é a espécie predominante (≈ 92% dos isolados) nos campos brasileiros de produção de tomate, em ambos os segmentos produtivos: consumo in natura e processamento industrial. Entre os isolados de X. perforans, a raça T3 predomina, representando 97,3% desses isolados. Cinco isolado foram identificados como raça T4. Esses isolados apresentaram uma inserção de 858 pb no gene avrXv3, relacionada à família de proteínas YscJ/HrcJ. Por meio dos protocolos estabelecidos foi possível identificar as quatro espécies causadoras da doença com iniciadores específicos tanto utilizando PCR convencional como PCR multiplex. As espécies X. perforans e X. gardneri apresentaram comportamento distinto com relação ao ótimo de temperatura para seu desenvolvimento. Enquanto X. perforans incitou maior porcentagem de área foliar lesionada quando exposta a temperaturas acima de v 25°C, com agressividade crescente até o limite superior testado (35°C), observou-se para X. gardneri uma redução da agressividade nos limites inferior (15°C) e superior de temperatura. Essas espécies só incitaram doença quando o período de molhamento foliar foi igual ou maior que 12 horas. Do mesmo modo, a temperatura teve efeito direto na taxa de crescimento in vitro de X. perforans. Por fim, foi possível identificar um isolado de X. euvesicatoria associado a mudas assintomáticas de tomateiro, além dos gêneros Agrobacterium, Enterobacter, Microbacterium, Sphingobium e Sphingomonas. Com isso, estratégias de manejo da doença devem focalizar X. perforans, já que é a espécie predominante. No mesmo sentido, estratégias de controle denominadas evasivas devem ser adotadas, uma vez que a doença apresenta faixas limítrofes para as variáveis temperatura e molhamento foliar. Este é o primeiro registro da ocorrência da raça T4 no país. Os isolados bacterianos dos demais gêneros encontrados em sementes e mudas devem ser avaliados quanto ao seu potencial como agentes de controle biológico. Levantamentos sistemáticos das espécies/raças causadoras da doença devem ser continuados para o auxílio nas tomadas de decisão. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Bacterial spot is among the limiting factors in tomato production in Brazil. The disease is caused by a species complex of the genus Xanthomonas: X. euvesicatoria, X. vesicatoria, X. perforans and X. gardneri. The aims of this thesis were: i) to perform a survey the frequency of occurrence of species and races causing bacterial spot on Brazilian tomato crops; ii) to establish protocols for simultaneous detection and identification of the species causing disease; iii) to understand the effect of temperature and leaf wetness on the monocycle of tomato bacterial spot; iv) to identify possible causal agents of tomato bacterial spot and bacterial community present in asymptomatic seedlings and seeds. For achieving these objectives, pathogenicity tests, molecular techniques based on PCR (BOX-PCR, specific primers) and sequencing of avirulence gene avrXv3 were used. The effect of temperature (15, 20, 25, 30, and 35°C) and leaf wetness (0, 6, 12, 24, and 48 hours) on disease severity was assessed. Likewise, the in vitro effect of temperature on the population growth rate of X. perforans and X. gardneri was checked. Finally, by collecting surface water on the phylloplane of asymptomatic seedlings and soaking commercial seeds, the presence of potential pathogens were surveyed. Direct isolation, using PCR with specific primers and sequencing of 16S rRNA were the tempted methods applied. Based on the results, we found that X. perforans is the predominant species (≈ 92% of isolates) in Brazilian tomato fields, in both production segments: fresh market and processing. Among strains of X. perforans, the T3 race was predominant, representing 97.3% of these isolates. Five isolates were identified as T4 race. These isolates had an insertion of 858 bp in avrXv3 gene related to a protein YscJ/HrcJ family. The protocols enabled the identification of the four species causing the disease with specific primers using both conventional PCR and multiplex PCR. The species X. perforans and X. gardneri showed different behaviors with respect to the optimum temperature for development. Xanthomonas perforans caused more disease at temperatures above 25°C, with increasing aggressiveness up to the upper limit tested (35°C). On the other hand, X. gardneri decreased the disease severity from the optimal temperature for both lower and upper limit of temperature. Both species only incited disease vii when leaf wetness periods were longer than six hours. In the same way, the temperature had a direct effect on the in vitro growth rate of X. perforans. Finally, it was possible to identify an isolate of X. euvesicatoria associated with asymptomatic tomato seedlings in a commercial nursery production, besides the genus Agrobacterium, Enterobacter, Microbacterium, Sphingomonas and Sphingobium. Thus, disease management strategies should focus on the species X. perforans, since it is the predominant species. Similarly, control strategies based on evasion should be applied, since the disease has a borderline range for the temperature and leaf wetness. This is the first report of occurrence of race T4 in Brazil. Bacterial isolates from other genus found in seeds and seedlings should be evaluated to assess their biological control potential. Systematic surveys of species/races causing the disease should be continued to aid in the control decision taking.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2014. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-10-22T14:08:21Z No. of bitstreams: 1 2014_FlaviaLeonelEmediato.pdf: 10358008 bytes, checksum: e76a51d9ed66c88a8b913916507e4c5d (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-11-17T12:48:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_FlaviaLeonelEmediato.pdf: 10358008 bytes, checksum: e76a51d9ed66c88a8b913916507e4c5d (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-17T12:48:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_FlaviaLeonelEmediato.pdf: 10358008 bytes, checksum: e76a51d9ed66c88a8b913916507e4c5d (MD5) / Cultivares comerciais de bananeira (Musa spp) são cultivados em muitos países de ambientes tropicais e subtropicais. A reprodução assexuada da espécie resultou em uma base genética restrita, sem resistência a pragas e doenças, tornando as estratégias de melhoramento convencional muito limitadas devido a esterilidade de muitos cultivares comerciais. As estratégias de melhoramento não-convencionais, como a transformação e seleção assistida por marcadores, oferecem uma abordagem alternativa para a introgressão de genes de resistência em cultivares comerciais. Genes de resistência (R) em plantas codificam receptores de proteínas que reconhecem assinaturas moleculares de efetores de patógenos de plantas, desencadeando mecanismos de defesa como a imunidade disparada por efetores (ETI). Essa resistência pode ser perdida durante a co-evolução do hospedeiro e patógeno, favorecendo a evolução das novas raças patogênicas. Neste contexto, o desenvolvimento contínuo de cultivares de plantas resistentes é necessária, a fim de acompanhar a evolução de patógenos. O objetivo geral deste estudo foi identificar genes potencialmente envolvidos em respostas a estresses bióticos, que servirão como fonte de recursos para análises de expressão diferencial durante a interação de Musa acuminata com o patógeno Mycosphaerella musicola e o desenvolvimento de marcadores SSR para busca de polimorfismos em genótipos de M. acuminata. Dessa forma, foram identificados 14 unigenes expressando proteínas NBS-LRR em tecidos foliares de Calcutta 4 e 25 em Cavendish Grande Naine, ambos infectados e nãoinfectados. O mapeamento desses unigenes com modelos que contêm o domínio NB-ARC no genoma de referência de M. acuminata ssp. malaccensis var. Pahang (DH Pahang) identificou 38 contigs unigenes mapeando a 40 modelos de genes completos em Calcutta 4 e 43 contigs unigenes mapeando em 40 modelos de genes em Cavendish Grande Naine. Foram desenvolvidos 156 marcadores icrossatélites para os genes alvo derivados de diferentes fontes: sequências de transcritoma de folhas da interação M. acuminata e M. musicola, mapeadas em sequências de clones de BAC de M . acuminata Calcutta 4 contendo análogos a genes de resistência NB-ARC (RGAs); Sequências do genoma completo de M. acuminata DH Pahang contendo domínios conservados NB-ARC e outros genes R; e transcritos da interação entre M. acuminata e M. musicola minerados para genes de defesa. Destes locos SSR identificados, 21 (13,46%) foram polimórficos, com alelos por loco variando de 2 a 4, e o conteúdo de informação de polimorfismo variando de 0,31 a 0,67. As análises de expressão de 51 genes alvo demonstraram que 19 obtiveram especificidade na reação de PCR em tempo real e que a maioria dos genes envolvidos em processos de defesa não foram modulados, com exceção do gene da corismato sintase e NAC. O gene NPR1 foi expresso apenas no cultivar suscetível e os RGAs 37, 43, M09A31, M09A21, B03A51 e B03A11 tiveram um aumento de expressão quando inoculados com o patógeno. Os RGAs 43 e RGA 37 mostraram indução significativa em M. acuminata Calcutta 4 quando inoculada com o patógeno e os RGAs 9330, 7100, 6160, M09A31 e M09A21 apresentaram regulação negativa em Calcutta 4. Esta análise foi consistente com a tendência aparente de caracterizações anteriores de genes R individuais já que alguns genes R são induzidos por uma variedade de estímulos, alguns exibem respostas muito específicas e outros parecem não ser responsivos ao patógeno. A caracterização contínua de genes envolvidos em respostas ao estresse biótico em M. acuminata durante a interação com M. musicola, bem como o desenvolvimento de marcadores moleculares, irá contribuir para o desenvolvimento de uma gestão eficaz da doença Sigatoka com base no melhoramento genético através da transformação de plantas ou seleção assistida por marcadores. ________________________________________________________________________ ABSTRACT / Commercial banana cultivars (Musa spp.) are grown across numerous countries in different tropical and subtropical environments. Conventional breeding strategies are limited due to sterility in many commercial cultivars. Asexually-driven evolution has resulted in a restricted genetic base, lacking resistance to pests and disease. Non-conventional breeding strategies, such as transformation and marker-assisted selection, offer an alternative approach for introgression of resistance genes in commercial cultivars. Resistance (R) genes in plants encode protein receptors that recognize molecular signatures of effectors of plant pathogens, triggering defense mechanisms of effector-triggered immunity (ETI). Such resistance can be lost during host and pathogen co-evolution, favouring the more rapid evolution of new pathogenic races. In this context, the continuous development of resistant plant cultivars is required in order to accompany pathogen evolution. The objective of this work was to identify genes potentially involved in responses to biotic stresses, which will serve as a resource for the design of specific primers for differential expression analysis during the interaction of M. acuminata with the pathogen Mycosphaerella musicola and development of SSR markers to search for polymorphisms in M. acuminata genotypes. From this, 14 expressed NBS-LRR R genes from Calcutta 4 and 25 in Cavendish Grande Naine. A total of 156 microsatellite markers were developed for genes potentially involved in resistance and defense responses, derived from different sources: 454-pyrosequencing derived leaf transcriptome sequences derived from the M. acuminata x M. musicola interaction, which mapped to BAC clone sequences from M. acuminata Calcutta 4 containing NB-ARC resistance gene analogs (RGAs); M. acuminata DH Pahang whole genome sequence regions containing conserved domains belonging to NB-ARC and other R genes; and 454-pyrosequencing transcripts from the M. acuminata x M. musicola interaction, enriched for defense genes. Among SSR loci evaluated, 21 (13.46%) were polymorphic, with alleles per locus ranging from 2 to 4, and polymorphism information content ranging from 0,31 to 0,67. The expression analysis of 51 target genes showed that 19 had specificity in real time PCR reaction and that most of the genes involved in defense processes were not modulated, with the exception of NAC and chorismate synthase gene. The NPR1 gene was expressed only in the susceptible cultivar and RGA 37, 43, M09A31, M09A21, B03A51 and B03A11 had increased expression when inoculated with the pathogen. The RGAs 43 and 37 showed significant induction in M. acuminata Calcutta 4 when inoculated with the pathogen and the RGAs 9330, 7100, 6160, M09A31 and M09A21 showed downregulation in Calcutta 4. This analysis was consistent with the apparent trend of previous individual genes R characterizations since some genes are induced by a variety of stimuli, exhibit some very specific responses and others seem to be responsive to the pathogen. The continued characterization of genes involved in response to biotic stress in M. acuminata during interaction with M. musicola, as well as the development of molecular markers, will contribute to the development of effective management of Sigatoka disease based on genetic improvement through plant transformation or marker assisted selection.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-11-07T14:18:13Z No. of bitstreams: 1 2014_FlaviaSantanaSouzadaCosta.pdf: 5304298 bytes, checksum: 0aa869b4cb44917de0cfb5dfa7dc8eb7 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-11-11T09:54:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_FlaviaSantanaSouzadaCosta.pdf: 5304298 bytes, checksum: 0aa869b4cb44917de0cfb5dfa7dc8eb7 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-11T09:54:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_FlaviaSantanaSouzadaCosta.pdf: 5304298 bytes, checksum: 0aa869b4cb44917de0cfb5dfa7dc8eb7 (MD5) / Bioinseticidas à base de B. thuringiensis (Bt) são os mais comercializados e conhecidos emtodo o mundo por seu potencial no controle de insetos-praga. Porém seu efeito comoorganismo endofítico e promotor de crescimento são pouco estudados. Para avaliação dessesefeitos, foram realizados testes iniciais para verificar a ação de Bt sobre o crescimentovegetativo de plantas de algodão a partir da seleção de quatro estirpes de Bt (S1450, S1905,S2122 e S2124) por sua atividade tóxica sobre insetos da ordem Lepidoptera, três genótiposde algodão (BRS 8H, BRS Aroeira e BRS 286) e dois métodos de inoculação (via semente evia planta) em casa de vegetação. Os parâmetros analisados foram: germinação, altura,número de folhas, massa seca da parte aérea e radicular e comprimento de raiz. Ao final doexperimento as plantas foram oferecidas a larvas de S. frugiperda para avaliar a mortalidade.Com base nas análises dos resultados de eficiência em altura, massa seca e número de folhas,foi possível selecionar a estirpe S2122, a cultivar BRS 8H e o método de inoculação emsementes. Um segundo ensaio foi, então, planejado para dar continuidade dos estudos comdiferentes concentrações da estirpe S2122 de Bt e observação dos mesmos parâmetros. A cadasemana foi realizado um bioensaio oferecendo folhas destes tratamentos para larvas de S.frugiperda. Os resultados dos testes iniciais permitiram a conclusão de que o método deinoculação mais eficiente na promoção de crescimento de plantas de algodão foi via sementese que diferentes estirpes possuem padrões de interações diferenciados para determinadacultivar. Na segunda parte do trabalho, os resultados dos experimentos apresentaramdiferenças estatísticas na concentração 108 UFC/mL, mostrando incremento no crescimentovegetal das plantas de algodão e na produção de fitomassa. Embora tenha sido verificadabaixa mortalidade das lagartas nos bioensaios realizados semanalmente, as lagartas que sealimentaram de folhas dos tratamentos com Bt exibiram sintomas de intoxicação comaparência debilitada. Provavelmente as larvas destes insetos se alimentaram da proteínatóxica, porém em concentrações sub-letais. Estes sintomas de intoxicação foram observadosaté dezoito dias após a emergência das plantas. __________________________________________________________________________ ABSTRACT / Bioinsecticides based on B. thuringiensis (Bt) are the most commercialized and well-knownones worldwide due to their potential for controlling insect pests. However, their effects as anendophytic organism and growth promoter have scarcely been studied. To evaluate theseeffects, initial tests were carried out to verify the action of Bt on the vegetative growth ofcotton plants, from the selection of four strains of Bt (S1450, S1905, S2122 and S2124), fortheir toxic activity on insects of the order Lepidoptera, using three cotton genotypes (BRS 8H,BRS Aroeira and BRS 286) and two methods of inoculation (via seed and via plant) in agreenhouse. The parameters analyzed were: germination, height, number of leaves, dry massof the aerial and root parts and length of the root. At the end of the experiment the plants wereoffered to larvae of S. frugiperda to evaluate the mortality rate. Based on the analyses of theresults for efficiency in terms of height, dry mass and number of leaves, it was possible toselect strain S2122, cultivar BRS 8H and the method of seed inoculation. A second assay wasthen planned, to continue the studies with different concentrations of strain S2122 of Bt andobservation of the same parameters. A bioassay was carried out each week, offering leavesfrom these treatments to larvae of S. frugiperda. The results of the initial tests led to theconclusion that the most efficient inoculation method in promoting cotton plant growth wasvia seeds, and that different strains have different patterns of interaction for each cultivar. Inthe second part of the work, the experimental results presented statistical differences at aconcentration of 108 UFC/mL, showing an increase in vegetative growth of cotton plants andin the production of plant mass. Although low mortality was seen for larvae in the weeklybioassays, those that fed on the leaves of treatments with Bt exhibited symptoms ofintoxication and a debilitated appearance. The larvae of these insects probably fed on the toxicprotein, but in sub-lethal concentrations. These symptoms of intoxication were observed until18 days after the plants emerged.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2014. / Submitted by Larissa Stefane Vieira Rodrigues (larissarodrigues@bce.unb.br) on 2014-12-08T17:59:56Z No. of bitstreams: 1 2014_RafaelaMarianaKososki.pdf: 3328066 bytes, checksum: 1f13cd84a1808e52d84d2769176a578a (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-12-08T18:54:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_RafaelaMarianaKososki.pdf: 3328066 bytes, checksum: 1f13cd84a1808e52d84d2769176a578a (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-08T18:54:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_RafaelaMarianaKososki.pdf: 3328066 bytes, checksum: 1f13cd84a1808e52d84d2769176a578a (MD5) / O cultivo do maracujazeiro (Passiflora edulis Sims.) em escala comercial teve inicio no começo da década de 1970. O Brasil é o maior produtor e consumidor mundial de maracujá, sendo a Bahia o maior produtor nacional. Nos últimos anos tem-se observado uma redução na produtividade, o que se deve, principalmente, à ocorrência de doenças nessa cultura. Entre tais doenças, destaca-se a mancha oleosa ou queima bacteriana (Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae), a verrugose (Cladosporium spp.) e a morte precoce (causada por um conjunto de fitopatógenos). Em programas de melhoramento, a estimativa de parâmetros genéticos é importante na indicação de recursos a serem utilizados e também no ganho de seleção esperado. Oito experimentos com 24 genótipos cada, de maracujazeiro-azedo, foram avaliadas aos 7, 14, 21, 28 e 35 dias, quanto à resistência a Septoria passiflorae e Cladosporium herbarum em condições de casa de vegetação na Universidade de Brasília. O delineamento foi o de blocos casualizados com quatro repetições, 24 tratamentos (genótipos) e seis plantas por parcela. Já para bacteriose, foram realizados 2 ensaios experimentais na Estação Experimental de Biologia - EEB da Universidade de Brasília, no Distrito Federal, em condições de casa de vegetação (26 a 32º C). O delineamento foi em blocos casualisados com parcela subdividida, parcela (épocas), subparcela de 24 genótipos com 4 repetições e 6 plantas por parcela. Ensaio 1 (clorose e necrose), isolado RIO CLARO e Ensaio 2 (clorose e necrose), isolado LIMEIRA, com 24 genótipos cada. Na diversidade genética foram avaliados 24 genótipos de maracujazeiro-azedo mais resistentes, às principais doenças avaliadas em casa de vegetação (EEB). O trabalho laboratorial foi realizado no Laboratório de Genética e Biologia Molecular - Embrapa Cerrados com a extração de DNA pelo método do CTAB com algumas modificações. O objetivo do presente trabalho foi o de avaliar a reação de genótipos de maracujazeiro azedo a septoriose (S. passiflorae), a verrugose (C. herbarum) e a mancha oleosa (X. axonopodis pv. passiflorae) em de casa de vegetação; estudar a variabilidade genética das genótipos de maracujazeiro utilizadas em casa de vegetação com base em marcadores moleculares de DNA e identificar genótipos de maracujazeiro com potencial utilização no melhoramento genético. Assim, verificou-se como resistentes à septoriose: AR 01 PLANTA 1, AR 02 PLANTA 1, ECL 7 PLANTA 3, MAR20#34, MAR20#15 PLANTA 2, MAR20#44, MAR20#15 PLANTA 3, ECL 7 PLANTA 1, MAR20#12 PLANTA 1, EC-3-0 PLANTA 10 , MAR20#34 PLANTA 6, MAR20#21 PLANTA 2, MAR20#23 PLANTA 2, AR 02 PLANTA 2, ECRAM PLANTA 3, GIGANTE AMARELO PLANTA 1, MAR20#10 PLANTA 2. Não se verificou materiais resistentes à verrugose. Verificou-se como material resistente à bacteriose: Passiflora nitida. As distâncias genéticas entre os 24 acessos de maracujá variaram de 0,021 a 0,303 entre os genótipos de maracujá. Com base na análise de agrupamento, foram encontrados diferentes grupos de similaridade e verificada a variabilidade genética entre os genótipos de maracujá (Passiflora sp.) trabalhadas. Assim, o desenvolvimento de cultivares resistentes à doenças é importante para as culturas agrícolas, pois teremos a redução de custos de produção, maior segurança de trabalhadores agrícolas e consumidores, melhor qualidade mercadológica, maior preservação do ambiente e maior sustentabilidade do agronegócio. E no caso de P. edulis, tal estratégia é de fundamental importância tendo em vista a alta suscetibilidade das atuais variedades comerciais às principais doenças. A busca e a caracterização de fontes de resistência a doenças para a implementação e o sucesso de programas de melhoramento. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The cultivation of passionfruit (Passiflora edulis Sims.) on a commercial scale began in the early 1970s. Brazil is the largest producer and consumer of passionfruit, and Bahia is the largest producing state. In recent years it has been observed a reduction in productivity, which is due mainly to the occurrence of diseases that culture. Among these diseases, there is the bacterial spot or blight (Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae), scab (Cladosporium spp.) and premature death (caused by a number of pathogens). In breeding programs, the estimation of genetic parameters is important in directing resources to be used and also to predict the expected selection gain. Eight experiments with 24 genotypes each of passion fruit were evaluated at 7, 14, 21, 28 and 35 days for resistance to Septoria passiflorae and Cladosporium herbarum conditions in a greenhouse at the University of Brasilia. The experimental design was randomized with four replications of 24 treatments (genotypes) and six plants per plot blocks. As for disease, the two experimental trials were conducted at the Experimental Biology Station - BSE from the University of Brasilia, Federal District, under greenhouse conditions (26 to 32º C). The design was randomized blocks with plot subdivided plot (times), subplot 24 genotypes with 4 replications and 6 plants per plot. Test 1 (chlorosis and necrosis), isolated RIO CLARO and Test 2 (chlorosis and necrosis), isolated LIMEIRA with 24 genotypes each. Genetic diversity in 24 genotypes more resistant passionfruit were evaluated, the major diseases evaluated in a greenhouse at the Experimental Biology Station - BSE from the University of Brasilia. The laboratory work was conducted at the Laboratory of Genetics and Molecular Biology - EMBRAPA Cerrado with DNA extraction by the CTAB method with some modifications. The aim of this study was to evaluate the reaction of genotypes of sour passionfruit to septoria spot (S. passiflorae), scab (C. herbarum) and oily spot (X. axonopodis pv. passiflorae) in a greenhouse; study the genetic variability of genotypes of passion used in greenhouse based on DNA molecular markers and identify genotypes of passion with potential use in breeding. Thus, the following genotypes were considered resistant to the Septoria spot: AR 01 PLANTA 1, AR 02 PLANTA 1, ECL 7 PLANTA 3, MAR20#34, MAR20#15 PLANTA 2, MAR20#44, MAR20#15 PLANTA 3, ECL 7 PLANTA 1, MAR20#12 PLANTA 1, EC-3-0 PLANTA 10 , MAR20#34 PLANTA 6, MAR20#21 PLANTA 2, MAR20#23 PLANTA 2, AR 02 PLANTA 2, ECRAM PLANTA 3, GIGANTE AMARELO PLANTA 1, MAR20#10 PLANTA 2. There was no scab-resistant materials. The only material considered resistant to the bacterial blight was Passiflora nitida. The genetic distances between the 24 accessions of passion ranged from 0.021 to 0.303 between genotypes passion fruit. Based on cluster analysis, different groups of similarity showed the genetic variability among the genotypes of passionfruit. Thus, the development of disease resistant cultivars is important for crops, because we have to reduce production costs, greater safety of agricultural workers and consumers, marketing better quality, greater preservation of the environment and increased sustainability of agribusiness. And in the case of P. edulis, such a strategy is of fundamental importance due to the susceptibility of current commercial varieties to major diseases. The search and characterization of sources of disease resistance to the implementation and success of breeding programs.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2014. / Submitted by Thomaz Siqueira Araujo (thomaz001.ta@gmail.com) on 2015-05-06T18:13:17Z No. of bitstreams: 1 2014_NédioRodrigoTormen.pdf: 1088713 bytes, checksum: 77829b02405687d8043add07a761209c (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-05-06T20:39:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_NédioRodrigoTormen.pdf: 1088713 bytes, checksum: 77829b02405687d8043add07a761209c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-06T20:39:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_NédioRodrigoTormen.pdf: 1088713 bytes, checksum: 77829b02405687d8043add07a761209c (MD5) / A soja (Glycine max L.) é atualmente o principal produto do agronegócio brasileiro e contribui de forma expressiva para o desenvolvimento do país. A ocorrência de doenças está entre os principais fatores que limitam as maiores produtividades e algumas doenças consideradas menos severas, como a seca da haste e da vagem, têm sido ignoradas. Este trabalho objetivou avaliar o efeito do espaçamento entre linhas, cultivares de soja e fungicida sobre a incidência da seca da haste da soja causada por Diaporthe phaseolorum var. sojae e sobre a produtividade da cultura. O ensaio foi instalado em campo em duas épocas de semeadura (15/11 e 15/12/2012) em Planaltina/DF. O delineamento experimental utilizado foi de blocos completos ao acaso, em esquema de parcelas subsubdivididas, com quatro repetições. Foram testados três espaçamentos entre linhas (42, 60 e 75 cm), duas cultivares de soja (“Syn1180RR” e “Syn1080RR”) e o fungicida boscalida (500 g i.a. ha-1), aplicado nos estádios R1 e R3 da soja, além da testemunha sem controle. As variáveis mensuradas foram a estatura das plantas, número de ramos, incidência da doença em hastes e sementes de soja, peso de 100 grãos e produtividade. Os resultados obtidos permitem concluir que a ampliação do espaçamento entre linhas favoreceu a incidência da doença em hastes e sementes de soja, houve diferença de suscetibilidade entre as cultivares (“Syn1180RR” mais susceptível; “Syn1080RR” menos susceptível) e a aplicação de fungicida reduziu a incidência da doença. O terço superior foi mais afetado pela doença em comparação com o mediano e inferior. A seca da haste e da vagem reduziu a produtividade da soja. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Currently, soybean (Glycine max L.) represents important role on Brazilian agribusiness and contribute significantly for the economical development of Brazil. The occurrence of diseases corresponds to an important factor limiting greater yield rates and some diseases considered to be less severe, as the stem blight, have been ignored. This work aims to assess the effect of row spacing, cultivar and fungicide on the incidence of soybean stem blight and yield. The experiment was carried out under field conditions, in two seedling times (11/15/2012 and 12/15/2012) in Planaltina/DF. The treatments were arranged on randomized blocks design, with a split-split plot arrangement and four replicates. The treatments evaluated were row spacing (42, 60 and 75 cm), soybean cultivars (“Syn1180RR” and “Syn1080RR”) and the fungicide boscalid (500 g a.i ha-1), sprayed at R1 and R3 soybean growth stages, and a control plot without fungicide. The parameters evaluated were plant height, branch number per plant, disease incidence on stems and seeds, seed weight and yield. The data obtained suggests that broader row spacing induced greater disease incidence in stems and seeds, there was difference between cultivars in terms of susceptibility (“Syn1180RR” more susceptible; “Syn1080RR” less susceptible) and fungicide applications reduced the disease incidence. The stem blight incidence was higher at the top parts of the plants. The disease reduced the yield of soybean crop.

Dissertação (Mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de ciências biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ecologia, 2012. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-26T15:13:15Z No. of bitstreams: 1 2012_DiegoMartinsMagalhaes.pdf: 2344391 bytes, checksum: 68933edb5741bb4bcd8c7ec8d6ec9f94 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-26T15:16:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_DiegoMartinsMagalhaes.pdf: 2344391 bytes, checksum: 68933edb5741bb4bcd8c7ec8d6ec9f94 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-26T15:16:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_DiegoMartinsMagalhaes.pdf: 2344391 bytes, checksum: 68933edb5741bb4bcd8c7ec8d6ec9f94 (MD5) / O bicudo-do-algodoeiro, Anthonomus grandis Boheman (Coleoptera: Curculionidae), é considerado uma das pragas-chave da cotonicultura brasileira devido ao prejuízo econômico causado por sua infestação, ausência de inimigos naturais eficientes e difícil controle por inseticidas. Uma das formas de monitoramento dessa praga tem sido feita através de armadilhas contendo feromônio de agregação e tem mostrado relativo sucesso. No entanto, estudos de campo revelaram que durante o período de floração do algodoeiro o número de insetos capturados nestas armadilhas diminui consideravelmente, sugerindo que voláteis produzidos pela planta neste estágio fenológico podem estar envolvidos na atração do bicudo. Os objetivos do trabalho foram avaliar o perfil químico dos compostos orgânicos voláteis do algodoeiro nos diferentes estágios fenológicos e sob diferentes condições de herbivoria, bem como a atratividade destes para os adultos de A. grandis. Além disso, verificou-se a existência de sinergismo entre os voláteis liberados pelo algodoeiro e o feromônio de agregação emitido por machos de A. grandis. Assim, foram conduzidas coletas de voláteis de plantas de algodão, nos estágios vegetativo e reprodutivo, quando danificadas por insetos de diferentes guildas alimentares: o percevejo Euschistus heros Fabricius (Hemiptera: Pentatomidae), a lagarta Spodoptera frugiperda J. E. Smith (Lepidoptera: Noctuidae) e o besouro A. grandis. Os extratos contendo os voláteis do algodoeiro obtidos das aerações foram usados em bioensaios em olfatômetro em “Y” para avaliar a resposta de adultos de A. grandis e para análises químicas, por cromatografia gasosa e cromatografia gasosa acoplada ao espectrômetro de massas. Os dados de olfatometria mostraram que os adultos de A. grandis foram atraídos pelos voláteis emitidos por plantas de algodão no estágio reprodutivo danificadas por co-específicos. Os voláteis induzidos por herbivoria do bicudo-do-algodoeiro em plantas no estágio reprodutivo apresentaram efeito sinérgico com o feromônio de agregação, aumentando o potencial de atração deste. Os voláteis induzidos por herbivoria de heteroespecíficos não foram atrativos para os adultos de A. grandis. As análises químicas mostraram que o algodoeiro produz diferentes perfis de liberação de voláteis de acordo com seu estágio fenológico e inseto que o ataca. Esse perfil foi qualitativamente semelhante, contudo apresentou diferenças quantitativas entre os tratamentos. O algodão no estágio vegetativo liberou voláteis em maior concentração quando comparado com o estágio reprodutivo. Em ambos os estágios, as maiores taxas de liberação de voláteis foram observadas nos tratamentos de herbivoria por A. grandis. Dessa forma, os resultados mostram que A. grandis usa os voláteis emitidos pelo algodoeiro danificado por co-específicos para a localização de hospedeiros e que compostos de origem terpênica estariam envolvidos em sua atratividade. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The boll weevil, Anthonomus grandis Boheman (Coleoptera: Curculionidae), is considered the major pest in cotton fields in Brazil, due to the economic losses caused by its infestation, absence of effective natural enemies and difficult to control through the insecticides usage. This pest has been successfully monitored throughout traps baited with aggregation pheromone with relative success. However, field studies showed that the number of insects caught in these traps was significantly reduced during the cotton blooming, suggesting that volatiles produced by plants in this phenological stage may be involved in the boll weevil’s attraction. The objectives of this study were evaluate the chemical profile of volatile organic compounds emitted by cotton plants at different phenological stages and under different infestation conditions, as well as the attractiveness of these volatiles to adults of A. grandis. In addiction, we verified if there is synergism between the volatiles released by cotton plants and the aggregation pheromone emitted by male boll weevils. Thus, headspace volatile were collected from cotton plants, in the vegetative and reproductive stages, and damaged by insects of different feeding guilds: the brown-stink bug Euschistus heros Fabricius (Hemiptera: Pentatomidae), the fall-armyworm Spodoptera frugiperda J. E. Smith (Lepidoptera: Noctuidae) and the boll weevil A. grandis. The cotton plant extracts obtained from headspace collections were used in “Y” tube olfactometer bioassays to evaluate the boll weevil’s response and for chemical analysis using gas chromatography and gas chromatography-mass spectometry. Olfactometry data showed that adults of A. grandis were attracted by volatiles emitted from cotton reproductive plants damaged by conspecific. Boll weevil’s herbivore-induced volatiles in cotton reproductive plants presented a synergistic effect with the aggregation pheromone, increasing its attracting potential. Volatiles induced by heterospecific herbivores were not attractive to adults of A. grandis. Chemical analysis showed that cotton plants produced different volatile profiles, based on their phenological stage and attacking insects. These profiles were qualitatively similar, but showed significant quantitative differences between treatments. Vegetative cotton plants released higher volatile concentrations compared to reproductive cotton plants. In both stages, the highest released volatile rates were observed in A. grandis herbivore treatments. Thus, the results showed that A. grandis uses conspecific herbivore induced volatiles to localize hosts plants and terpenic compounds may be involved in its attractiveness.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2010. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-06-26T22:46:49Z No. of bitstreams: 1 2010_WelcimarGoncalvesCunha.pdf: 2975091 bytes, checksum: 539028d8614ac1d1f4d4b204dd2e7de4 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-27T14:27:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_WelcimarGoncalvesCunha.pdf: 2975091 bytes, checksum: 539028d8614ac1d1f4d4b204dd2e7de4 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-27T14:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_WelcimarGoncalvesCunha.pdf: 2975091 bytes, checksum: 539028d8614ac1d1f4d4b204dd2e7de4 (MD5) / O mofo branco, causado pelo fungo Sclerotinia sclerotiorum, é hoje um dos principais problemas da cultura da soja e afeta diretamente a economia dos principais países produtores. A incidência desse patógeno acarreta em danos expressivos na produção e qualidade dos grãos, podendo atingir perdas em torno de 80%. O ácido oxálico, produzido pelo fungo durante o processo de infecção, é considerado o principal fator de patogenicidade do fungo S. sclerotiorum. A expressão de enzimas que degradam o ácido oxálico em plantas transgênicas tem sido utilizada em diversas culturas visando o desenvolvimento de cultivares resistentes. No presente trabalho, o gene oxdc que codifica para a enzima oxalato descarboxilase, isolado do fungo Flammulina velutipes, foi inserido via biobalística no genoma da soja. Dezesseis eventos T2 foram avaliados via inoculação de discos de micélio do fungo S. sclerotiorum em folhas destacadas. A análise da curva de progresso da doença revelou que todos os eventos transgênicos apresentaram atraso no desenvolvimento dos sintomas quando comparados com o controle não transgênico. A área abaixo da curva de progresso da doença foi utilizada para sumarizar a severidade da doença em cada evento transgênico e no controle. O teste de Kruskal-Wallis revelou que houve diferença significativa (P ≤ 0,05) entre os tratamentos. Os eventos OXDC.9.21 e OXDC.8.18 tiveram os menores índices de severidade. Tais eventos apresentaram respectivamente, índices de severidade 96% e 93% menor que o apurado para o controle. Os resultados impetrados a partir da curva de progresso da doença e da severidade da doença utilizando o teste de inoculação da folha destacada com o fungo S. sclerotiorum sugerem que a expressão do gene da oxdc em soja confere aumento do nível de resistência das plantas ao patógeno.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2012. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-07-19T20:22:18Z No. of bitstreams: 1 2012_AnnaCristinadeFreitas.pdf: 2030875 bytes, checksum: 8e3c0630c707b786907b6adba46bb9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-08-09T12:42:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_AnnaCristinadeFreitas.pdf: 2030875 bytes, checksum: 8e3c0630c707b786907b6adba46bb9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-09T12:42:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_AnnaCristinadeFreitas.pdf: 2030875 bytes, checksum: 8e3c0630c707b786907b6adba46bb9c7 (MD5) / O cancro bacteriano da videira, causado por Xanthomonas campestris pv. viticola (Xcv) Nayudu ( (Dye), foi detectado no Brasil pela primeira vez em 1998, em plantas de Vitis vinifera, variedade Red Globe, em Petrolina, Pernambuco. A doença é responsável por prejuízos ao cultivo da videira no Vale do Submédio São Francisco, apresentando incidência expressiva e importância econômica. Uma das medidas mais eficazes para conter sua disseminação para novas áreas é o uso de material de propagação livre do patógeno. Este estudo teve como objetivo geral otimizar a técnica de PCR (Reação da Polimerase em Cadeia) para detecção de Xcv em tecidos assintomáticos de videira. Foram objetivos específicos: determinar o limite mínimo de detecção por BIO-PCR aliado ao uso de meio semi-seletivo NYDAM e por Nested-PCR em frutos e folhas inoculados e assintomáticas; desenvolver um controle interno para falsos negativos e validar a BIO-PCR e a Nested-PCR em mudas de viveiros e em plantas sintomáticas e assintomáticas de áreas de produção no Vale do Submédio São Francisco. A determinação do limite mínimo de detecção de Xcv por BIO-PCR e Nested-PCR foi realizada com a inoculação de Xcv em frutos e folhas de videira nas concentrações de 102 a 108 ufc/ml. O limite mínimo de detecção por BIO-PCR em frutos e folhas foi de 102 ufc/ml. Com a Nested-PCR o limite mínimo de detecção em frutos foi de 102 ufc/ml e de 103 ufc/ml em folhas. Para o desenvolvimento do controle interno, foram incluídos iniciadores universais para o gene do 16S rRNA de bactérias (F984/1492) em reações multiplex com os iniciadores Xcv1F/Xcv3R. Amplificação dos dois fragmentos esperados ocorreu com DNA purificado de Xcv e com amostras positivas (lavados de folhas) por BIO-PCR e Nested-PCR. Contudo, em 16 amostras negativas por Nested-PCR, apenas em uma ocorreu a amplificação do fragmento correspondente ao gene de 16SrRNA. Na validação dos métodos em áreas de produção com histórico da doença, 97% das amostras coletadas com sintomas foram positivas por BIO-PCR e 69,7% positivas por Nested-PCR. Entre as amostras sem sintomas, a detecção de Xcv só foi possível por BIO-PCR (29,7 % das amostras). De 60 amostras de mudas assintomáticas coletadas em dois viveiros na região, detectou-se Xcv por BIO-PCR em três amostras (5%) de um dos viveiros. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Bacterial canker of grapevine, caused by Xanthomonas campestris pv. viticola (Xcv) Nayudu (Dye), was detected in Brazil in 1998, affecting plants of Vitis vinifera, cultivar Red Globe, in Petrolina, Pernambuco State. This disease is responsible for economic losses in vineyards in the São Francisco river valley, northeastern Brazil. One of the most effective measures to prevent its dissemination to new areas is the use of pathogen-free propagating material. The objective of the present study was to optimize the PCR (polymerase chain reaction)-based method to detect Xcv in asymptomatic grapevine tissues. The specific objectives were: to determine the minimum detection limits of BIO-PCR combined with the use of the semi-selective medium NYDAM and of Nested-PCR in inoculated and asymptomatic fruits and leaves; to develop an internal control for false negatives; and to validate the BIO-PCR and Nested-PCR methods by testing asymptomatic plants from nurseries and symptomatic and asymptomatic plants from grapevine-producing areas in the São Francisco river valley. The detection limit of BIO-PCR and Nested-PCR was performed by inoculating Xcv in grapevine fruits and leaves, at concentrations from 102 to 108 cfu/ml. The lower detection limit of BIO-PCR in fruits and leaves was 102 cfu/ml. Using Nested-PCR, the detection limit in fruits was 102 cfu/ml, and 103 cfu/ml in leaf samples. To develop the internal control for PCR, universal primers for bacterial 16S rRNA gene (F984/1492) were included in multiplex reactions with primer pair Xcv1F/Xcv3R. Amplification of the two expected fragments occurred with purified Xcv DNA and with samples (washes from leaves) tested positive by BIO-PCR and Nested-PCR. However, only one out of 16 samples tested negative by nested-PCR yielded the 16SrRNA amplicon. When validating the methods in production areas with a history of the disease, 97% of the symptomatic samples were positive by BIO-PCR and 69.7% positive by Nested-PCR. Among asymptomatic samples, detection of Xcv was possible only by BIO- PCR (29.7% of samples). Among 60 samples from asymptomatic plants collected in two nurseries in the region, Xcv was detected by BIO-PCR in three samples (5%) from one of the nurseries.