Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2012. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-09-14T00:53:09Z No. of bitstreams: 1 2012_KleniaRodriguesPacheco.pdf: 2182418 bytes, checksum: 30aa13c050c27588ce64e0710d842f13 (MD5) / Approved for entry into archive by Leandro Silva Borges(leandroborges@bce.unb.br) on 2012-09-14T20:00:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_KleniaRodriguesPacheco.pdf: 2182418 bytes, checksum: 30aa13c050c27588ce64e0710d842f13 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-14T20:00:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_KleniaRodriguesPacheco.pdf: 2182418 bytes, checksum: 30aa13c050c27588ce64e0710d842f13 (MD5) / O feijoeiro (Phaseolus vulgaris) é suscetível a muitas doenças, entre elas, se encontra a murcha-de-esclerócio (podridão do colo) causada por Sclerotium rolfsii. O controle do S. rolfsii ocorre com o auxílio de práticas preventivas e por controle biológico ou químico. O estudo teve como objetivo selecionar e testar isolados de Trichoderma oriundos de solos do DF, avaliar e comparar os Trichoderma spp. selecionados e fosfitos (Cu, Ca, Mg e K) aos fungicidas no controle da murcha-de-esclerócio. Nos ensaios realizados foram utilizados dois isolados de S. rolfsii (UB 193 e UB 228). Dos 65 isolados de Trichoderma testados in vitro selecionaram-se os seguintes: 5, 11, 12, 15, 102, 103, 127, 136, 137, 1525, 1637, 1642, 1643, 1649, 1700 e EST 5. Esses isolados de Trichoderma, bem como os fosfitos [Fosfito: Cu (25% P2O5 + 5% Cu); K1 (40% P2O5 + 20% K2O); Mg1 (30% P2O5 + 4% Mg); Ca1 (30% P2O5 + 7% Ca); Ca2 (10% P2O5 + 6% Ca); K2 (40% P2O5 + 20% K2O); K3 (20% P2O5 + 20% K2O); K4 (30% P2O5 + 20% K2O); K5 (27% P2O5 + 27% K2O)] e fungicidas [Tebuconazol (250 g/L); Tiofanato-Metílico (500 g/L); Procimidona (500 g/kg); Carbendazim (500 g/kg)] foram avaliados quanto ao efeito sobre a germinação de esclerócios do patógeno em laboratório e sobre a doença em casa de vegetação. Os isolados de Trichoderma 1649, 1525 e 1637 foram os mais eficientes na inibição da germinação de esclerócios de S. rolfsii em laboratório. Além disso, os isolados 5, 12, 102, 103, 1525 e 1649 foram eficientes na melhoria do número de plantas sadias de feijoeiro em casa de vegetação. Dos testes realizados com fosfitos, as formulações com Potássio (K2) e Cálcio (Ca1) controlaram o patógeno no teste em casa de vegetação. Dos agentes químicos testados, o produto que reduziu significativamente a doença foi o Tebuconazol. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Phaseolus vulgaris (Common bean) is susceptible to several diseases, among them there is the sclerotium wilt, also known as stem rot caused by Sclerotium rolfsii. The control of the disease could be throughout preventive practices or by biological or chemical control. This study was carried out to evaluate the effects of Trichoderma spp., phosphites (Cu, Ca, Mg, and K) and traditional fungicides to control sclerotium wilt of common bean. The experiments were performed with two isolates of S. rolfsii (UB 193 and UB 228). Sixty-five Trichoderma isolates were tested in vitro for inhibition of S. rolfsii, and the following ones were selected: 5, 11, 12, 15, 102, 103, 127, 136, 137, 1525, 1637, 1642, 1643, 1649, 1700 and EST 5. These selected Trichoderma, phosphites [Phosphite: Cu (25% P2O5 + 5% Cu); K1 (40% P2O5 + 20% K2O); Mg1 (30% P2O5 + 4% Mg); Ca1 (30% P2O5 + 7% Ca); Ca2 (10% P2O5 + 6% Ca); K2 (40% P2O5 + 20% K2O); K3 (20% P2O5 + 20% K2O); K4 (30% P2O5 + 20% K2O); K5 (27% P2O5 + 27% K2O)] and fungicides [Tebuconazole (250 g/L); Methyl Thiophanate (500 g/L); Procymidone (500 g/kg); Carbendazim ( 500 g/kg)] were tested for evaluation of sclerotial germination under laboratory conditions, and to evaluate the effects on disease of bean plants under greenhouse conditions. The Trichoderma isolates 1649, 1525 and 1637 were more efficient in reducing sclerotial germination. In addition, the isolates 5, 12, 102, 103, 1525 e 1649 significantly improved the number of non-diseased plants under greenhouse conditions. Phosphites of K (K2) and Ca (Ca1) inhibited sclerotial germination in laboratory and reduced disease in plants grown in greenhouse. Tebuconazole was the product that significantly reduced disease severity on bean under greenhouse condition.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2006. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2009-10-27T17:43:04Z No. of bitstreams: 1 2006_Adriana Magali de Freitas Alves Rezende.pdf: 1149055 bytes, checksum: ed2168fcf9108dd63d08a57481ba855f (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-10-06T14:53:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Adriana Magali de Freitas Alves Rezende.pdf: 1149055 bytes, checksum: ed2168fcf9108dd63d08a57481ba855f (MD5) / Made available in DSpace on 2010-10-06T14:53:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Adriana Magali de Freitas Alves Rezende.pdf: 1149055 bytes, checksum: ed2168fcf9108dd63d08a57481ba855f (MD5) Previous issue date: 2006 / A bacteriose da goiabeira (Psidium guajava) causada por Erwinia psidii Rodrigues Neto et al. (1987) foi identificada pela primeira vez no Brasil em 1982, nas regiões de Valinhos e Pindamonhangaba, no Estado de São Paulo. Atualmente a doença se encontra em outras regiões paulistas, nos Estados de Minas Gerais, no Espírito Santo, no Paraná e no Distrito Federal. Devido à sua distribuição geográfica restrita ao Brasil, pouco se conhece sobre um controle efetivo da bacteriose, visto que a maioria dos produtos cúpricos utilizados causam sintomas de fitotoxidade nas plantas, assim como não se têm conhecimento do uso de variedades resistentes. O presente trabalho teve como objetivo estudar a resistência genética das variedades de goiaba comumente plantadas, assim como a utilização de produtos químicos no controle. No estudo da resistência genética foram avaliadas cinco variedades de goiaba e diferentes isolados de E. psidii, em dois métodos de inoculação: por pulverização (1x108 ufc/ml) e por agulha (1x109 ufc/ml). No estudo do controle da doença foram utilizados produtos cúpricos e o Fegatex (cloretos de benzalcônio), nos meios 523 e MMCC, em testes “in vitro”, em casa de vegetação e no campo. Foi também avaliada a sensibilidade de isolados de E. psidii a diferentes antibióticos. Verificou-se que na inoculação por agulha, dos isolados UnB 1285, 1288 e 1289, todas as variedades apresentaram 100% de plantas infectadas nas hastes, folhas e brotações (nota 4); enquanto que na inoculação por pulverização, os isolados UnB 1287 e 1288, apresentaram essa mesma percentagem de plantas infectadas, podendo ocorrer diferenças nos graus de agressividade entre os isolados. Em testes “in vitro” verificou-se que todos isolados de E. psidii no meio 523 foram mais resistentes ao sulfato de cobre e hidróxido de cobre, enquanto que no meio MMCC (baixa capacidade de complexar o cobre) todos os isolados apresentaram maior resistência ao hidróxido de cobre. Resultados também mostraram que os cloretos de benzalcônio mostraram melhor eficiência no controle “in vitro” comparado aos produtos cúpricos. Na avaliação dos antibióticos verificou-se que os isolados UnB 1285 e 1286 mostraram ser mais sensíveis à ação dos antibióticos. O princípio ativo oxacilina não apresentou efeito sobre a bactéria, para todos isolados testados. Sob condição de casa de vegetação, o sulfato de cobre mostrou maior grau de fitotoxidade nas folhas de goiabeira, reduzindo o desenvolvimento das brotações, no entanto, mostrou melhor eficiência no controle da bacteriose. O tratamento com cloretos de benzalcônio, não apresentou fitotoxidade e mostrou bom desenvolvimento nas plantas, assim como bom controle da doença. Em experimento de campo, verificou-se sintomas leves de fitotoxidade no estádio de inflorescência, na variedade Pedro Sato, com todos os produtos, e na variedade Comum, com exceção dos cloretos de benzalcônio. Nos frutos pequenos, os sintomas severos foram percebidos na variedade Pedro Sato, no tratamento com sulfato de cobre e na variedade Comum, no tratamento com sulfato de cobre e oxicloreto de cobre. Nos frutos médios, foi verificada evolução dos sintomas severos, na variedade Pedro Sato, nos tratamentos com oxicloreto de cobre e sulfato de cobre; e na variedade Comum em todos os tratamentos cúpricos. Para o controle da doença, o tratamento com hidróxido de cobre mostrou melhor eficiência na variedade Pedro Sato; enquanto que na variedade Comum, o tratamento com Fegatex (cloretos de benzalcônios) foi melhor, não apresentando nenhum sintoma de fitotoxidade. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The bacterial disease of the guava (Psidium guajava) caused by Erwinia psidii Rodrigues neto et al. (1987) was identified first time in Brazil in 1982, in the regions of Valinhos and Pindamonhangaba, in the State of São Paulo. Actually the disease is found in other regions of São Paulo, and the States of Minas Gerais, Espirito Santo, Paraná and in the Federal District. Due to their geographical distribution restricted to the Brazil, little is known about an effective control of the disease; seen that the majority of the copper products utilized cause symptoms of phytotoxicity in the plants; as well as do not have knowledge of the use of resistant variety. The present work had the objective to study the genetic resistance of guava variety frequently planted, as well as the utilization of chemical products in the control. In the study of the genetic resistance were studied five varieties of guava and different strains of E. psidii, in two methods of inoculation: by spraying (1x108 ufc/ml) and by needle (1x109 ufc/ml). In the study of the control of the disease were utilized copper products and the Fegatex (benzalconium chlorides), in the media, 523 and MMCC, in “in vitro” tests, in greenhouse and in the field. Also was evaluated the sensibility of strains of E. psidii to different antibiotic. The inoculation by needle of strains UnB 1285, 1288 and 1289 it was verified that all variety presented 100% of plants infected in the twig, leaves and budding (note 4); whereas in the inoculation by spraying, the strains UnB 1287 and 1288 presented that same percentage to plant infected, being able to occur differences in the level of virulence of the strains. In the “in vitro” tests it was verified that all of the stains of E. psidii in the medium 523 were more resistant to the copper sulfate and copper hydroxide, whereas in the medium MMCC (Medium Minimal Complexing Copper) all the strains presented more resistance to the copper hydroxide. Results also showed that the fegatex (benzalconium clorides) presented better efficiency in the control “in vitro” compared to the copper products. The evaluation of the antibiotics was variable and the strains UnB 1285 and 1286 showed to be more sensible. The oxacilin, did not present effect on the bacteria, for all strains studied. Under greenhouse conditions, the copper sulfate showed more phytotoxicity in the leaves of guava, reducing the development of the budding, however showed better efficiency in the control of the bacteria. The treatment with fegatex (benzalconium clorides), did not present phytotoxicity and showed good development of the plants, as well as good control of the disease. In the field condition it was verified light symptoms of phytotoxicity in the stadium of inflorescence, in the variety Pedro Sato, with all of the products and in the Comum variety, with the exception of the benzalconium clorides. In the small fruits, the severe symptoms were perceived in the variety Pedro Sato, in the treatment with copper sulfate and in the Common variety, in the treatment with copper sulfate and copper oxycloride. In the medium fruits, it was verified evolution of the severe symptoms, in the variety Pedro Sato, in the treatment with copper oxycloride and copper sulfate; and in the Common variety in all of the copper treatments. For the control of the disease, the treatment with copper hydroxide showed better efficiency in the variety Pedro Sato; whereas in the Common variety, the treatment with fegatex (benzalconum clorides) was better, presenting no symptom of phytotoxicity.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2005. / Submitted by Alexandre Marinho Pimenta (alexmpsin@hotmail.com) on 2009-11-06T21:57:39Z No. of bitstreams: 1 dissertacao RAILENE DE AZEVEDO PEREIRA.pdf: 2038438 bytes, checksum: 2a881ae8945df3475524a3521b0ed467 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-10-27T14:33:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dissertacao RAILENE DE AZEVEDO PEREIRA.pdf: 2038438 bytes, checksum: 2a881ae8945df3475524a3521b0ed467 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-10-27T14:33:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao RAILENE DE AZEVEDO PEREIRA.pdf: 2038438 bytes, checksum: 2a881ae8945df3475524a3521b0ed467 (MD5) Previous issue date: 2005 / Os inibidores de α-amilase e de proteinases vegetais tem sido amplamente estudados, devido ao papel destes fatores de resistência contra insetos-praga. Este trabalho tem como objetivo identificar inibidores de α-amilase e de proteinases, presentes em sementes de Phaseolus coccineus e sementes de algaroba (Prosopis juliflora), com potencial inseticida no controle da broca-do-café (Hypothenemus hampei) e de pragas de grãos armazenados de feijão Acanthoscelides obtectus e Callosobruchus maculatus. Um gene que codifica para o inibidor de α-amilase de 223 resíduos de aminoácidos, denominado AI-Pc1 foi clonado de sementes de Phaseolus coccineus, acesso 35590. AI-Pc1 tem 70 a 98% de identidade de aminoácidos com outros inibidores de α-amilases de feijão, já descritos. Uma construção contendo o gene AI-Pc1, regulado pelo promoter da fitohemaglutinina PHA-L, foi introduzida em plantas de fumo, via Agrobacterium tumefasciens. A presença e expressão do gene AI-Pc1 em plantas transformadas (parental T0 e geração T1) foi confirmada por reação de cadeia da polimerase (PCR), Western blot e ELISA. Extrato protéico das sementes de plantas transformadas reagiram positivamente com o anticorpo policlonal contra o anticorpo αAI-1, enquanto que nenhuma reação foi observada em plantas não transformadas. Ensaios imunológicos mostraram que AI-Pc1 representa cerca de 0,05% da proteína solúvel total de sementes de plantas (T0). A proteína recombinante expressa em plantas de fumo foi biologicamente ativa onde 125 ng de inibidor AI-Pc1 inibe 65% da atividade da α-amilase de H. hampei. Utilizando semente de P. coccineus, acesso 35619, um inibidor de proteinase serínica pertencente à classe Bowman-Birk foi purificado utilizando técnicas cromatográficas que incluem coluna de troca iônica DEAE-Cellulose, coluna de filtração molecular Superdex 75, coluna fase-reversa líquida de alta pressão Vydac C-18 e Source 5RPC. O inibidor, denominado de PcBBI1, é uma proteína rica em cisteína e estável ao calor em pH alcalino. Análises por MALDI-TOF/MS mostraram que o inibidor PcBBI1 esta presente em semente de P. coccineus na forma de um monômero de 8.689 Da ou de um dímero de 17.378 Da. O efeito inibitório de PcBBI1 foi analisado por ensaio in vitro para tripsina e quimotripsina pancreática bovina e para proteinases digestivas de larvas de H. hampei. O inibidor foi fortemente ativo contra as enzimas semelhantes à tripsina de H. hampei, inibindo 80% da atividade proteolítica. Adicionalmente, um inibidor de proteinase cisteínica foi isolado das sementes de algaroba (Prosopis juliflora). Este inibidor, denominado de Pj, foi purificado usando uma coluna de filtração molecular Sephacryl S-200 seguido por uma coluna de fase-reversa líquida de alta pressão Vydac 18 TP. O inibidor Pj mostrou uma massa molecular de 20.000 Da por eletroforese em gel de poliacrilamida com SDS e massa molecular de 19.276 Da por espectrometria de massa. A inibição da papaína pelo inibidor Pj foi do tipo não-competitivo, com um valor de Ki de 0.59 x 10-9. A atividade gelatinásica da papaína também foi fortemente inibida pelo inibidor Pj. A seqüência de aminoácidos da extremidade N-terminal do inibidor Pj mostrou homologia com a seqüência de aminoácidos da extremidade N-terminal de inibidores de proteinase da família Kunitz. Pj foi fortemente efetivo contra proteinases digestivas do gorgulho do feijão Acanthoscelides obtectus e do gorgulho de caupi Callosobruchus maculatus e foi moderadamente ativo contra proteinases digestivas do gorgulho da vagem Mimosestes mimosae e do gorgulho do feijão comum Zabrotes subfasciatus. Estes resultados sugerem que o inibidor AI-Pc1 e PcBBI1 isolados de P. coccineus e o inibidor Pj purificado de sementes de P. juliflora são candidatos promissores para obter cultivares de plantas resistentes ao ataque destes insetos-praga. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Plant α-amylase and proteinases inhibitors are extensively studied, in part due to their role as defense factors against insect pests. In this works, we have identified α-amylase and proteinase inhibitors, found in of Phaseolus coccineus bean and algaroba (Prosopis juliflora) seeds. Those molecules exhibit an insecticidal potential in the control of coffee berry borer (Hypothenemus hampei) and pests from stored grains of beans Acanthoscelides obtectus and Callosobruchus maculatus A gene encoding an α-amylase inhibitor protein of 223 amino acids residues, named aAI-Pc1, was isolated from an wild bean P. coccineus, acess 35590. aAI-Pc1 has 70-98% amino acid identity with other known bean α-amylase inhibitors. A construction with aAI-Pc1 gene driven by the PHA-L phytohemaglutinin promoter was introduced into tobacco plants by Agrobacterium-mediated transformation. The presence and expression of the aAI-Pc1 gene in regenerated (T0) and progeny (T1) transformant plants were determined by PCR amplification, enzyme-liked immuno sorbent assay (ELISA) and immunoblot analysis. Seed protein extracts from selected transformant reacted positively with polyclonal antibody raised against αAI-1, while no reaction was observed with untransformed plants. Immunological assays showed that aAI-Pc1 represented up to 0.05% of the total soluble proteins in seeds of T0 plants. The recombinant inhibitor expressed in tobacco plants was biologically active and 125 ng aAI-Pc1 inhibited 65% of the H. hampei α-amylase activity. A serine proteinase inhibitor belonging to the Bowman-Birk class was purified from P. coccineus seeds, acess 35619, using chromatographic techniques that include DEAE-Cellulose ionic exchange column, Superdex 75 gel filtration column and reverse phase high performance liquid chromatography column (Vydac C-18 and Source 5RPC). The inhibitor, nominated PcBBI1, is a protein cystein-rich and heat stable at alkaline pH MALDI-TOF/MS analysis showed that the inhibitor is present in the seeds from P. coccineus as a monomer of 8.689 Da or a dimmer of 17.378 Da. The inhibitory effect of PcBBI1 towards trypsin and chymotrypsin from bovine pancreas and digestive proteinases from H. hampei larvae was analyzed in vitro assay. The inhibitor was highly active against trypsin-like enzymes from H. hampei, inhibiting 80% of proteolytic activity. Additionally, a proteinaceous inhibitor with high activity against papain was found in seeds of the xerophytic algaroba tree (Prosopis juliflora). The proteinase inhibitor Pj was purified using Sephacryl S-200 gel filtration followed by reverse-phase high-performance liquid chromatography on a Vidac 18 TP. Inhibitor Pj showed a Mr of 20.000 on sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis an a Mr of 19.276 Da by mass spectrometry. The inhibitor of papain by the Pj inhibitor was the noncompetitive type, with a Ki value of 0.59 x 10-9 M. The gelatinase activity of papain was strongly inhibited by Pj too. The N-terminal amino acid sequence of the Pj inhibitor showed homology with the N-terminal amino acid sequence of the Kunitz-proteinase inhibitor family. Pj was strongly effective against digestive proteinases from bean weevil Acanthoscelides obtectus and cowpea weevil Callosobruchus maculatus and Mexican bean weevil Zabrotes subfasciatus. The data shown here suggest that the protein present in algaroba seeds is involved with defense responses to insects and may be an important tool to be used in engineering plants resistant to bean weevils.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2007. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2009-11-26T16:39:45Z No. of bitstreams: 1 2007_AnaAngelicaAlvesFelix.PDF: 2494604 bytes, checksum: 8789c6d849ecc146c1154916d3f7eb96 (MD5) / Approved for entry into archive by Carolina Campos(carolinacamposmaia@gmail.com) on 2010-01-19T16:55:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_AnaAngelicaAlvesFelix.PDF: 2494604 bytes, checksum: 8789c6d849ecc146c1154916d3f7eb96 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-19T16:55:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_AnaAngelicaAlvesFelix.PDF: 2494604 bytes, checksum: 8789c6d849ecc146c1154916d3f7eb96 (MD5) Previous issue date: 2007 / Amostras de sementes de plantas nativas de matas, cerrado e de campo empregadas para a confecção de artesanato de várias regiões do Brasil foram avaliadas quanto aos aspectos fitossanitários. Realizou–se o levantamento e identificação de fungos associados às sementes, bem como os sintomas nas mesmas. Técnicas de desinfestações superficiais e de tratamento natural com uma solução de óleos vegetais extraídos de essências florestais foi empregada para o controle dos fungos. As sementes de Euterpe oleraceae, E. precatoria var. precatoria, Dipterix alata, Orbignya phalerata, Phytelephas macrocarpa, Socratea exorrhiza, Hymenaea courbaril L. var. stilbocarpa, Leucaena leucocephala, Schefflera morototoni, Astrocaryum faranae, Sapindus saponaria, Ipomoea pes-caprae, Caesalpinia peltophoroides, Heliconia metallica, Cyperus rotundus e Astrocaryum aculeatum, apresentaram – se naturalmente infectadas com uma gama significante de fungos. Os fungos mais freqüentes associados às sementes foram Alternaria alternata, Aspergillus spp., Cladosporium sp., Chaetomium sp., Botryodiplodia sp., Epicoccum sp., Eurotium sp., Fusarium sp., Monilia sp., Nigrospora sphaerica, Penicillium sp., Pestalotiopsis sp., Phialophora sp., Rhizoctonia sp., Rhizopus sp., Syncephalastrum sp. e Verticillium sp. Os danos causados por estes fungos foram deformações, manchas necróticas, podridões moles e deterioração parcial ou total das sementes. O tratamento com a solução de óleos foi bastante eficiente para todos os fungos, com a erradicação da maioria deles. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Some seed samples of native plants from forestry, cerrado and savannas which are currently employed for the confection of handcrafts from several brazilian regions were valued as far as the phytosanitary aspects are concerned. The fungi overview and identification associated to the seeds as well as their symptoms were accomplished. Techniques of superficial de-infections and natural treatment with appropriate vegetable oil solutions extracted from tree essences were used to the control of fungi studied in the current work. Seeds of Euterpe oleraceae, E. precatoria var. precatoria, Dipterix alata, Orbignya phalerata, Phytelephas macrocarpa, Socratea exorrhiza, Hymenaea courbaril L. var. stilbocarpa, Leucaena leucocephala, Schefflera morototoni, Astrocaryum faranae, Sapindus saponaria, Ipomoea pes-caprae, Caesalpinia peltophoroides, Heliconia metallica, Cyperus rotundus and Astrocaryum aculeatum, have shown themselves naturally infected with a significant range of fungi. The most frequent fungi associated to the seeds were Alternaria alternata, Aspergillus spp., Cladosporium sp., Chaetomium sp., Botryodiplodia sp., Epicoccum sp., Eurotium sp., Fusarium sp., Monilia sp., Nigrospora sphaerica, Penicillium sp., Pestalotiopsis sp., Phialophora sp., Rhizoctonia sp., Rhizopus sp., Syncephalastrum sp. e Verticillium sp. The damages caused by these fungi have been associated to deformations, necrotic spots and soft rotten as well as partial or total decay of seeds. The treatment we propose here was accomplished with the natural oils solution and it has been shown that the proposed technique is very efficient in the control of all the fungi for the complete eradication of them.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2006. / Submitted by Érika Rayanne Carvalho (carvalho.erika@ymail.com) on 2009-12-01T02:37:43Z No. of bitstreams: 1 2006_JanderdaSilvaNeves.pdf: 5657161 bytes, checksum: f46bab6723ba3c1245bf77c9be7f7a2a (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-01-12T23:51:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_JanderdaSilvaNeves.pdf: 5657161 bytes, checksum: f46bab6723ba3c1245bf77c9be7f7a2a (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-12T23:51:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_JanderdaSilvaNeves.pdf: 5657161 bytes, checksum: f46bab6723ba3c1245bf77c9be7f7a2a (MD5) Previous issue date: 2006-10 / A ferrugem asiática (Phakopsora pachyrhizi) da soja é uma das doenças mais agressivas que incidem na cultura. Dependendo do clima e da cultivar de soja, perdas severas de rendimento podem ocorrer. O objetivo principal deste estudo foi avaliar o efeito de aplicações de fosfito e dos fungicidas na severidade da doença (porcentagem da área foliar afetada), na produtividade (kg/ha), e na massa (g) de 1000 grãos. Os experimentos de campo foram conduzidos de dezembro 2005 a abril 2006 em Cristalina, Goiás, Brasil. Utilizou-se delineamento de blocos ao acaso com nove tratamentos e cinco repetições. Os tratamentos foram os seguintes: (1) testemunha; (2) uma aplicação do fosfito (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) + (0,5% v/v) óleo vegetal; (3) duas aplicações do fosfito (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) + (0,5% v/v) óleo vegetal; (4) duas aplicações do pyraclostrobin + epoxiconazole (66,5+25 g.i.a/ha); (5) uma aplicação do pyraclostrobin + epoxiconazole (66,5+25 g.i.a/ha)+ fosfito (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) e uma aplicação do fosfito (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) + (0,5% v/v) óleo vegetal; (6) duas aplicações do tiofanato metílico+flutriafol (300+60g.i.a/ha); (7) uma aplicação do tiofanato metílico+flutriafol (300+60gi.a/ha)+fosfito (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) e uma aplicação do fosfito (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) + (0,5% v/v) óleo vegetal; (8) duas aplicações do tebuconazole (100 g.i.a/ha); (9) uma aplicação do tebuconazole (100 g.i.a/ha) + fosfito (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) e uma aplicação do fosfito (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) + (0,5% v/v) óleo vegetal. As aplicações foram feitas no inicio do aparecimento das primeiras lesões na cultivar Emgopa 313(ciclo tardio) nos estágios de crescimento da soja V8 e reaplicado em R2, no outro com a cultivar Coodetec 219RR (ciclo médio) nos estágios R1 e R5. As avaliações da severidade da doença foram feitas a cada sete dias após a aplicação dos produtos. Em ambos, após a primeira aplicação dos produtos todos os tratamentos reduziram significativamente a severidade da doença do sétimo ao trigésimo quinto dia da avaliação. Entretanto, após a segunda aplicação dos produtos, a doença apenas foi reduzida significativamente do sétimo ao vigésimo segundo dia da avaliação. Na avaliação final dos tratamentos somente os fungicidas tradicionais (pyraclostrobin + epoxiconazole, tiofanato metílico + flutriafol e tebuconazole) reduziu significativamente a severidade da doença. A produtividade e a massa de 1000 grãos foram significativamente mais elevados para tratamentos com pyraclostrobin + epoxiconazole, tiofanato metílico + flutriafol e tebuconazole. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Asian rust (Phakopsora pachyrhizi) of soybean is one of the most destructive diseases. Depending on the soybean cultivar and on the climate severe yield losses might occur. The main goal of this study was to evaluate de effects of phosphite and fungicides applications on disease severity (percentage of foliar area affected), on yield of seeds (kg/ha), and on mass (g) of 1000 seeds. For these purposes, two field experiments were conduced from December 2005 to April 2006 in Cristalina, Goias, Brazil. Both experiments were conduced in a complete randomized design with nine treatments and five replications. The treatments were the following: (1) no treatment; (2) one application of phosphite (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) + vegetable oil (0.5% v/v); (3) two applications of phosphite (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) + vegetable oil (0.5% v/v); (4) two applications of pyraclostrobin + epoxyconazole (66,5+25 g.i.a/ha); (5) one application of pyraclostrobin + epoxyconazole (66,5+25 g.i.a/ha)+ phosphite (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) and one application of phosphite (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) + vegetable oil (0.5% v/v); (6) two applications of methyl thiophanate + flutriafol (300+60 g.i.a/ha); (7) one application of methyl thiophanate + flutriafol (300+60 g.i.a/ha) + phosphite (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) and one application of phosphite (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) + vegetable oil (0.5% v/v); (8) two application of tebuconazole (100 g.i.a/ha); (9) one application of tebuconazole (100 g.i.a/ha) + phosphite (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) and one application of phosphite (1192 P2O5+596 K2O g.i.a/ha) + vegetable oil (0.5% v/v). In one of the experiments the applications were made on V8 and R2 soybean growth stage, while in the other at the R1 and R5 stages. Evaluations of disease severity were made every seven days after the application of the products. In both experiments, after the first application of the products all treatments significantly reduced disease severity from the seventh through the thirty-fifth day of evaluation. Nevertheless, after the second application of the products the disease was reduced significantly from the seventh through the twenty-second day of evaluation. At the end of evaluations only treatments with traditional fungicides (pyraclostrobin + epoxyconazole, methyl thiophanate + flutriafol, and tebuconazole) significantly reduced disease severity. Yield and mass of 1000 seeds were significantly higher for treatments with pyraclostrobin + epoxyconazole, methyl thiophanate + flutriafol and tebuconazole.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2008. / Submitted by Thaíza da Silva Santos (thaiza28@hotmail.com) on 2010-02-27T05:13:17Z No. of bitstreams: 1 Dissert_Kenia Fonseca.pdf: 2200353 bytes, checksum: 3769946a1dd85e8640f9336fa122f74c (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-03-01T23:35:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissert_Kenia Fonseca.pdf: 2200353 bytes, checksum: 3769946a1dd85e8640f9336fa122f74c (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-01T23:35:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissert_Kenia Fonseca.pdf: 2200353 bytes, checksum: 3769946a1dd85e8640f9336fa122f74c (MD5) Previous issue date: 2008-03-04 / O Brasil tem se destacado na produção de maracujá, entretanto, a produtividade média está muito abaixo do potencial da cultura. Um dos motivos da baixa produtividade são os problemas fitossanitários, que comprometem a produção e qualidade dos frutos. Para contornar estes problemas, programas de melhoramento genético têm sido realizados por meio de cruzamentos intra e interespecíficos entre genótipos comerciais e genótipos selvagens que, em geral, apresentam resistência a doenças. Objetivou-se, neste trabalho, obter, avaliar e caracterizar plantas da quarta e quinta geração de retrocruzamentos (RC4 e RC5, respectivamente) originadas do cruzamento base interespecífico das espécies P. edulis e P. setacea, quanto à virose do endurecimento dos frutos e quanto à recuperação do genoma recorrente com base em marcadores Randon Amplified Polymorphic DNA (RAPD). O trabalho foi realizado na Embrapa Cerrados. Em condições de campo, coletou-se aleatoriamente, dez folhas de cada planta RC4 e RC5 e também de três plantas de cada genitor (P. setacea e P. edulis) em épocas diferentes, para avaliação da severidade da virose. De acordo com uma escala visual de notas, classificouas em resistentes, medianamente susceptíveis, susceptíveis e altamente susceptíveis. Foi realizada uma inoculação mecânica em condições controladas e avaliou-se a manifestação de sintomas dessa doença em 60 plantas RC5 e seus genitores. Verificou-se a resistência das plantas P. setacea e a susceptibilidade das plantas RC e da espécie P. edulis. Para a caracterização de plantas RC4 e RC5 e da recuperação do genoma recorrente com base em marcadores RAPD, selecionou-se 17 plantas RC4 e 16 plantas RC5 com base na resistência à virose (avaliado como supramencionado). Utilizou-se também folhas de três plantas P. setacea e P. edulis. Amostras de DNA de cada material genético foram amplificadas para obtenção de marcadores RAPD. A maior distância genética foi observada entre os dois genitores (P. edulis e P. setacea), verificando-se uma grande porcentagem de polimorfismos. As plantas RC5 apresentaram maior recuperação do genitor recorrente e maior distância genética do genitor resistente quando comparadas com as plantas RC4. Entre as plantas RC4 e RC5, foram selecionadas aquelas com maior resistência à virose e mais próximas geneticamente do genitor recorrente para fornecer pólen para as sucessivas gerações, diminuindo, dessa forma, o tempo gasto para a recuperação do genoma recorrente. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Brazil is an expoent in passion fruit production, however, the average productivity is quite below its potential. Among the reasons for low productivity are the phytosanitary problems, that compromise the production and the quality of the fruit. Breeding programs that use intra and interspecific crossings have been conducted to overcome these problems. The objective of the present work is to obtain, evaluate and characterize plants of the fourth and fifth backcrossing generation (RC4 and RC5, respectively) originated from the base interspecific crossing between species Passiflora setacea and P. edulis) regarding the woodiness virus disease and the recovery of recurrent genome based on Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) markers. The experiment was carried out at Embrapa Cerrados. Ten leaves per RC4 and RC5 plant and three plants per genitor (P. setacea and P. edulis) were randomly collected, at different time points, for evaluation of virus symptons. They were classified into highly resistant, resistant, susceptible and highly susceptible, according to a visual scale of grades. Artificial inoculation was held under controlled conditions and the incidence of this disease in 60 plants RC5 and their genitors was evaluated. The resistance of P.setacea and the susceptibility of RC plants and P.edulis species were verified. To characterize RC4 and RC5 plants and the recover of the recurrent genome based on RAPD markers, 17 RC4 plants and 16 RC5 plants were collected, based on virusis resistance (evaluation as before mentioned). Leaves of three P. setacea and P. edulis plants were also used. DNA samples of each genetic material was amplified to obtain RAPD markers. The greatest genetic distance was observed between the two genitors (P. edulis and P. setacea), with a large percentage of polymorphisms. RC5 plants showed greater recovery of the recurrent genitor and greater genetic distance to the resistant genitor when compared with RC4 plants. Among RC4 and RC5 plants were selected those with greater resistance to virusis and genetically closer to the recurrent genitor to provide pollen for successive generations, in order to decrease the time spent on the recurrent genome recovery.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2009. / Submitted by Raquel Viana (tempestade_b@hotmail.com) on 2010-03-29T16:57:29Z No. of bitstreams: 1 2009_GlenioGomesNazareno.pdf: 3188511 bytes, checksum: 03ee5a4cfe8b6bab0d7544478f56e417 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-04-06T21:06:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_GlenioGomesNazareno.pdf: 3188511 bytes, checksum: 03ee5a4cfe8b6bab0d7544478f56e417 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-04-06T21:06:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_GlenioGomesNazareno.pdf: 3188511 bytes, checksum: 03ee5a4cfe8b6bab0d7544478f56e417 (MD5) Previous issue date: 2009-04 / O trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da matéria orgânica no desenvolvimento de nematóides na cultura de alface cv. Verônica. Foram utilizados esterco bovino e cama de frango, dois insumos muito usados pelos olericultores na produção de hortaliças. O experimento foi conduzido na Estação Experimental de Biologia, Universidade de Brasília, em casa de vegetação e utilizando vasos, de julho a novembro de 2008. Foi utilizado o arranjo de parcelas subdividida 3x10 sendo duas raças de M. incognita (raças 1 e 3) e a espécie M. javanica usadas como parcela e os 10 tratamentos como subparcela: 1 – testemunha (sem adubação); 2 – adubação química na dosagem recomendada para a cultura; quatro doses de esterco bovino (3, 4, 5, 6) – com base em 3,0 kg/m2: 3 - 50%, 4 - 100%, 5 – 150% e 6 – 200%; quatro doses de cama de frango (7, 8, 9, 10)– com base em 1,2 kg/m2: 7 – 50%, 8 – 100%, 9 – 150% e 10 – 200%. A inoculação dos nematóides em alface, com aproximadamente 5.000 ovos e eventuais juvenis por planta, foi realizada 15 dias após do transplante. Avaliou-se a produção de massa fresca e seca da parte aérea da planta, a massa fresca da raiz, número de galhas, massa de ovos e ovos, além do fator de reprodução. O nematóide Meloidogyne javanica se mostrou menos afetado, em suas características biológicas, pelos adubos utilizados, sendo mais agressivo para a planta. Meloidogyne incognita raças 1 e 3, por outro lado, se mostraram mais suscetíveis e mais sensíveis ao esterco bovino, um indicativo de que esse esterco possa apresentar efeito supressivo sobre essa espécie. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / This research was carried out aiming to evaluate the effect of organic manure in the control of root-knot nematodes in lettuce cv. Verônica. Organic cattle and chicken manure were evaluated; they are both used for vegetable production in the region. The experiment was carried out at Estação Experimental de Biologia, University of Brasilia, from July to November 2008. The experiment was conducted under the design of subdivided parcels 3x10, represented by two races of M. incognita (races 1 and 3) and M. javanica as parcel, and the 10 treatments as subparcel: 1 – no fertilization; 2 – chemical; four doses of cattle manure (3, 4, 5, 6)– based on 3,0 kg/m2: 3 – 50%, 4 – 100%, 5 – 150% e 6 – 200%; and four doses of chicken manure (7, 8, 9, 10) – based on 1,2 kg/m2: 7 – 50%, 8 – 100%, 9 – 150% e 10 – 200%. The nematode inoculation was performed 15 days after transplanting with 5.000 nematode eggs per vessel. Fresh and dry matter weight for plant and fresh root weight, gals’ number, egg mass and eggs number in the root system and reproduction factor were evaluated. Meloidogyne javanica was less affected in its biological characteristics showing to be more aggressive to the plant compared to the others. Meloidogyne incognita r 1 and 3, on the other hand, were more susceptible to cattle manure, an indication that this type of fertilization can present a suppressive effect over this particular specie of nematodes.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2009. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-04-20T12:44:22Z No. of bitstreams: 1 2009_RodrigoMarquesMello.pdf: 1285876 bytes, checksum: 7e4315431bb551422be777e8b3f855bf (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-04-20T17:16:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_RodrigoMarquesMello.pdf: 1285876 bytes, checksum: 7e4315431bb551422be777e8b3f855bf (MD5) / Made available in DSpace on 2010-04-20T17:16:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_RodrigoMarquesMello.pdf: 1285876 bytes, checksum: 7e4315431bb551422be777e8b3f855bf (MD5) Previous issue date: 2009 / A cultura do maracujá é uma das mais importantes dentre as fruteiras cultivadas no Brasil, apesar de apresentar sérios problemas fitossanitários. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a produtividade e a reação de genótipos de maracujazeiro-azedo à virose do endurecimento dos frutos, causada pelo Cowpea aphid-borne mosaic vírus (CABMV), no Distrito Federal. Os experimentos foram realizados na Fazenda Água Lima, para a avaliação da produtividade e reação a virose causada pelo CABMV, e na Estação Experimental da Biologia, para a avaliação das progênies, em casa de vegetação, quanto à incidência e severidade ao CABMV em mudas. O experimento conduzido na Fazenda Água Limpa teve o seguinte delineamento experimental: blocos casualizados, com 14 tratamentos (os genótipos) e quatro repetições, sendo a parcela útil constituída por oito plantas. Os genótipos estudados foram: PCF2, EC-RAM, AR01, AR02, MAR20#36, MAR20#46, AP1, FP01, FB200, RC3, GA2, MAR20#03, MAR20#23 e MAR20#09. Realizaram-se 50 colheitas em que foram determinados os seguintes parâmetros: produtividade (kg/ha), massa média dos frutos (g); classificação dos frutos em cinco classes (primeira, 1B, 1A, 2A e 3A) de acordo com o diâmetro; número de frutos por hectare e coloração da casca (amarelo rosa ou roxo). Na avaliação geral, houve um maior rendimento dos genótipos PCF-2 (43.288 kg/ha), EC-RAM (40.673 kg/ha) e AR01 (40.603 kg/ha). O PCF-2 produziu a maior quantidade de frutos (456.208 frutos/ha), estatisticamente superior aos demais. Com o EC-RAM foi obtida a maior produtividade de frutos rosa (23.161 kg/ha) e roxo (10.169 kg/ha). Todos os genótipos apresentaram maior produção de frutos de cor amarela. Para a virose, foram observadas a severidade e incidência em dois períodos distintos: de fevereiro a maio de 2008 e de dezembro de 2008 a março de 2009. No primeiro período de avaliação, todos os genótipos foram considerados moderadamente suscetíveis a virose CABMV. Porém, no segundo período, apenas os genótipos MAR20#03, PCF-2, AR01, AR02, MAR20#46 foram considerados moderadamente suscetíveis e os demais, suscetíveis ao xv CABMV. No segundo experimento, as progênies dos genótipos avaliados em campo foram usadas para testes sob condições controladas em casa de vegetação, com uso de isolados do vírus CABMV. O delineamento experimental foi em blocos casualizados, em arranjo de parcela subdividida, sendo as parcelas formadas pelas quatro épocas de avaliação e as subparcelas, por 12 genótipos, totalizando-se 48 tratamentos, com quatro repetições. Avaliou-se a incidência e a severidade da virose, nos seguintes genótipos: Rubi Gigante, Gigante Amarelo, GA2, EC-L-7, EC-3-0, MAR20#19, MAR20#34, MAR29#09, MAR20#41, Redondão, FB200 e AR02. Todos os genótipos foram considerados Medianamente Suscetíveis (MS). Rubi Gigante apresentou as menores médias de severidade (nota 1,55) e incidência do vírus em folha (55,67%), enquanto a menor incidência em planta (79,12%) foi verificada com o genótipo MAR20#19. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The passion fruit is one the most agricultural products in Brazil. However it has serious fitossanitary problems. This work was carried out in order to evaluate passion fruit genotypes and reaction to the cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV) in the Federal District. Two experiments were performed. The first one was carried out at Água Limpa farm, University of Brasília, Brasília, Brazil, to evaluate the agronomic performance and reaction of different passionfruit genotypes to the virus. This experiment used a design with randomized blocks with 14 treatments (genotypes), four replication and, 8 plants per plot was used. Fourteen genotypes were evaluated: PCF2, EC-RAM, AR01, AR02, MAR20#36, MAR20#46, AP1, FP01, FB200, RC3, GA2, MAR20#03, MAR20#23 e MAR20#09. The parameters considered, after fifty harvests were: yield (Kg/ha), average fruit weight, number of fruits and peel color. The incidence (number of symptomatic leves) and severity (level of mosaic, blisters and malformation) were evaluated in two periods: from February to May, 2008; and from December, 2008, to March, 2009. The highest yields were obtained for the PCF-2 (43.288 kg/ha), EC-RAM (40.673 kg/ha) e AR01 (40.603 kg/ha). The PCF-2 produced the biggest number of fruits, 456.208 fruits/ha. The EC-RAM had the biggest yield of pink fruits (23.161 kg/ha) and purple (10.169 kg/ha). All the genotypes had a bigger yield of yellow fruits than Pink and purple. All the genotypes were considered moderately susceptible in the first period. The second one only the MAR20#03, PCF-2, AR01, AR02, MAR20#46 was considered moderately susceptible, the orders was susceptible. The second experiment was made in the Biology Experimental station in the University of Brasilia and used a design with randomized blocks with four repetition, 12 genotypes (Rubi Gigante, MAR20#09, MAR20#19, MAR20#34, MAR29#41, ARO2, GIGANTE AMARELO, EC-L-7, EC-3-0, REDONDÃO, FB200) and 6 different times of evaluating. All the genotypes were considerate Medium Susceptible (MS). The Rubi Gigante had the best results to severity (grade 1,55) and incidence to the virus in leaves (55,67%) and MAR20#19 the best in the incidence in plants (79,12%).

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2011. / Submitted by Rafael Barcelos Santos (rafabarcelosdf@hotmail.com) on 2011-06-21T20:10:44Z No. of bitstreams: 1 2011_Athos Silva de Oliveira.pdf: 1005468 bytes, checksum: 4f0942fa66ae15543a3e4bb01c8f944f (MD5) / Approved for entry into archive by Eveline Gonçalves(eveline@bce.unb.br) on 2011-06-22T13:03:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_Athos Silva de Oliveira.pdf: 1005468 bytes, checksum: 4f0942fa66ae15543a3e4bb01c8f944f (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-22T13:03:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_Athos Silva de Oliveira.pdf: 1005468 bytes, checksum: 4f0942fa66ae15543a3e4bb01c8f944f (MD5) / Os tospovírus (família Bunyaviridae) são fitopatógenos que possuem genoma de RNA fita simples tripartido, denominados S (Small), M (Medium) e L (Large). Os dois primeiros possuem polaridade ambisenso e o último polaridade negativa. São vírus envelopados e transmitidos por tripes, insetos da ordem Thysanoptera, de maneira circulativa e propagativa. Além disso, acarretam significantes perdas na produção e qualidade de vegetais de interesse econômico em diversas partes do mundo. Neste trabalho um novo e distinto tospovírus foi isolado em plantas de feijão apresentando mosaico com áreas necróticas. Após experimentos de caráter biológico, sorológico e molecular, este foi caracterizado e nomeado tentativamente de Bean necrotic mosaic virus (BeNMV). No processo de caracterização biológica o BeNMV apresentou um estreito espectro de hospedeiros, replicando-se sistemicamente somente em três plantas indicadoras (Datura stramonium L, Physalis pubescens L. e Phaseolus vulgaris L. cv. Santana) após transmissão por inoculação mecânica. Diferentemente do esperado, os sintomas visualizados no campo não foram reproduzidos em Phaseolus vulgaris em casa de vegetação. BeNMV mostrou-se sorologicamente diferente quando comparado com outras espécies brasileiras em ensaio de diferenciação sorológica realizado após produção de anticorpo policlonal anti-BeNMV. Entretanto, uma fraca reação cruzada foi observada entre Tomato spotted wilt virus (TSWV), Groundnut ringspot virus (GRSV) e este novo tospovírus. Na caracterização molecular duas proteínas estruturais foram elucidadas, o precursor das glicoproteínas do envelope Gn e Gc e a RNA polimerase dependente de RNA ou proteína L. Ambas apresentaram o maior tamanho entre as já caracterizadas, tendo 1141aa e 2932aa, respectivamente. Também, apresentaram uma baixa identidade com as demais, indicando, após estudos filogenéticos, a descoberta de uma provável nova ramificação evolutiva do gênero Tospovírus. Curiosamente, talvez por suas características intrínsecas e significativamente divergentes quando comparado as demais espécies do gênero, ainda não foi possível caracterizar a proteína estrutural do nucleocapsídeo (N) viral. Trabalhos estão em andamento para concluir a caracterização deste novo e distinto tospovírus. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Tospoviruses (family Bunyaviridae) are plant-infecting pathogens with a tripartite RNA genome, named S (Small), M (Medium) and L (Large). The latter has a negative polarity, while the other two have ambisense polarity. These viruses have enveloped particles and are transmitted by thrips insects (order Thysanoptera) in a circulative-propagative manner. Moreover, tospoviruses cause significant quality and yielding losses to economically important cultures worldwide. In this study a new and distinct tospovirus was isolated from bean plants (Phaseolus vulgaris L.) showing necrotic mosaic symptoms. After biological, serological and molecular assays, the new virus was characterized and tentatively named Bean necrotic mosaic virus (BeNMV). BeNMV showed a narrow host-range, presenting systemic infection, after mechanical inoculation, on three different indicator host-species (Datura stramonium L,. Physalis Pubescens L. and Phaseolus vulgaris L., cv. Santana). Alternate from what could be expected, field-observed symptoms were not reproducible on greenhouse grown beans. As demonstrated in serological differentiation assays utilizing specific polyclonal anti-sera, BeNMV was distinct from other known tospoviruses common in Brazil. Weak cross-reaction was detected between Tomato spotted wilt virus (TSWV), Groundnut ringspot virus (GRSV) and the new tospovirus. Two viral structural proteins were resolved, being the largest ones known among the tospoviruses so far - the glycoprotein precursor of Gn and Gc envelope proteins and the RNA-dependent RNA polymerase (L protein) with 1141aa and 2932aa, respectively. Both proteins showed little identity with available sequences from other tospovirus species in phylogeny assays, indicating that BeNMV constitutes a new evolutionary branch in the genus Tospovirus. Due to BeNMV's discrete genome coding and significant divergence from other tospovirus species, the nucleocapsid structural protein (N) could not be characterized. Further efforts are being made to achieve complete characterization of this new and distinct tospovirus.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2011. / Submitted by Suelen Silva dos Santos (suelenunb@yahoo.com.br) on 2011-06-28T16:24:18Z No. of bitstreams: 1 2011_VivianJesusMiranda.pdf: 2223657 bytes, checksum: 8ae576873fa3b7447df05b15485f671b (MD5) / Approved for entry into archive by Guilherme Lourenço Machado(gui.admin@gmail.com) on 2011-06-30T15:01:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_VivianJesusMiranda.pdf: 2223657 bytes, checksum: 8ae576873fa3b7447df05b15485f671b (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-30T15:01:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_VivianJesusMiranda.pdf: 2223657 bytes, checksum: 8ae576873fa3b7447df05b15485f671b (MD5) / A soja é uma cultura de grande importância econômica no Brasil. No entanto, vários fatores bióticos afetam sua produtividade. Entre esse fatores destacam-se os danos causados por insetos-praga, como lagartas desfolhadoras e por fitonematoides. Várias estratégias envolvendo transgenia têm sido desenvolvidas para o controle de pragas e doenças, sendo importante o uso de promotores gênicos capazes de direcionar a expressão de transgenes nos tecidos atacados, atingindo níveis adequados para desencadear a proteção vegetal. Vários trabalhos sugerem um importante papel da via ubiquitina-proteassoma ao longo do desenvolvimento das plantas, assim como em resposta a estresses bióticos. Particularmente, genes codificadores de enzima de conjugação a ubiquitina (E2) mostraram ser ativados em sítio de alimentação de Meloidogyne incognita e em resposta ao ataque de insetos. Neste contexto, o presente trabalho tem como objetivo determinar o perfil de expressão transcricional do gene E2 em diferentes tecidos de soja, em diferentes fases do desenvolvimento, em raízes inoculadas com M. incognita e folhas infestadas por Anticarsia gemmatalis, pela técnica de qRT-PCR, como caracterização de promotor cognato UceS8.3, previamente isolado e patenteado. Para a normalização do gene E2 nos experimentos de qPCR, oito genes de referência clássicos foram selecionados e validados quanto a sua estabilidade de expressão nas diferentes condições experimentais analisadas. Os melhores genes de referência foram utilizados na quantificação dos níveis do transcrito do gene E2. O acúmulo de transcritos de E2 foi determinado espacial e temporalmente, nos orgãos de raiz, caule, folha, flor e vagem, nos fases de desenvolvimento (V4, R2 e R4). Foi observado que ocorre acúmulo de transcritos de E2 em R4, provavelmente relacionado a senescência da planta. Em seguida, bioensaios foram conduzidos em raízes de soja inoculadas com juvenis de segundo estádio (J2) de M. incognita, e em folhas infestadas com lagartas de quarto ínstar de A. gemmatalis. Nas interações com nematóide e com insetos, foi detectado acúmulo de transcritos de E2 de 2 a 6 vezes. Paralelamente, o banco de bibliotecas subtrativas GENOSOJA foi utilizado para verificar acúmulo de transcritos de E2 em resposta a estresses (bióticos e abióticos). As análises in silico mostraram que o gene E2 é mais abundante em resposta a bactéria Bradirhyzobium japonicum, ao fungo Phakopsora pachyrhyzi e ao estresse hídrico. Os resultados obtidos de quantificação de transcritos de E2 e da análise in silico foram relacionados a cis-elementos presentes na região regulatória, e indicam que o promotor UceS8.3 representa uma importante ferramenta biotecnológica para obtenção de plantas geneticamente modificadas resistentes a fitonematóides, doenças fúngicas, insetos desfolhadores e/ou deficiência hídrica. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Soybean is a crop of great economic importance in Brazil. However, several biotic factors have been affecting soya productivity. Among them, the damage caused by insect pests such as defoliating caterpillars and plant nematodes. Several strategies involving transgenic plants have been developed to control pests and diseases, being important the utilization of gene promoters capable of driving transgene expression in tissues attacked, at appropriate levels to trigger plant protection. Several studies suggest an important role of ubiquitin-proteasome pathway during plant development and in plant responses to biotic stresses. Particularly, genes encoding ubiquitin conjugation factors (E2) have been shown to be activated in feeding sites of Meloidogyne incognita and in response to insect attack. In this context, this study aims to determine the accumulation of the E2 transcripts considering different tissues of soybean, different stages of development, roots inoculated with M. incognita and leaves infested with Anticarsia gemmatalis, by qRT-PCR technique in order to further characterize its cognate promoter (UceS8.3). Aiming E2 gene normalization in qPCR experiments, eight classical reference genes were selected and validated for their expression stability. The best reference genes were used in the normalization of the E2 gene. To characterize the spatial and temporal accumulation of E2 transcripts, samples of root, stem, leaf, flower and pod were collected at three different developmental stages (V4, R2 and R4). It was found that E2 transcripts accumulated in R4, probably related to senescence process. Thus, bioassays were conducted in soybean roots inoculated with second stage juveniles (J2) of M. incognita, and leaves infested with fourth instar larvae of A. gemmatalis. Considering the nematode and caterpillars interactions, it was detected an E2 transcripts accumulation of 2 to 6 times. Parallely, the subtractive libraries bank GENOSOJA was used to verify the accumulation of E2 transcripts in response to other stresses (biotic and abiotic). In silico analysis showed that the E2 gene is more abundant in response to Bradirhyzobium japonicum bacteria, Phakopsora pachyrhyzi fungal, and to drought stress. The results were related to cis-elements present in the regulatory region, and suggested that the UceS8.3 promoter represents an important biotechnological tool to genetic modified plant generation resistant to plant nematodes, fungal diseases, defoliating insects and/or hydric deficit.