Orientador: Ronilson Agnaldo Moreno / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T13:11:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Benvengo_YuneHelenaBorges_M.pdf: 3907328 bytes, checksum: 1af1c3bbe7b8872636e0d8a3a9ce5088 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A infecção por Helicobacter pylori é uma das mais comuns em todo o mundo estando relacionada ao câncer gástrico, gastrite crônica, úlceras, adenocarcinomas e linfomas gástricos. O metronidazol foi muito usado como componente de terapias contra H. pylori. No entanto metronidazol é um composto mutagênico e a resistência a esse antimicrobiano é muito comum. Isso estimulou o interesse em antimicrobianos que tivessem resistência incomum para H. pylori. No Brasil, onde o índice de resistência para metronidazol foi determinado em 42%, a furazolidona passou a ser usada nas terapias de erradicação. A furazolidona e o metronidazol, são compostos classificados como nitro-heterocíclicos ou nitroaromáticos e possuem mecanismos de ação similares. O mecanismo de resistência da H. pylori ao metronidazol foi relacionado com alterações nos genes NAD(P)H nitroredutase oxigênio insensível (rdxA) e NAD(P)H flavina oxidorre- dutase (fixA) produtores de nitroredutases que reduzem o metronidazol gerando produtos intermediários os quais tem ação tóxica. Devido a algumas linhagens apresentarem resistência simultânea para metronidazol e furazolidona foi sugerido que os mecanismos de resistência para essas drogas poderiam ser os mesmos. Entretanto linhagens.construídas em laboratório com os genes rdxA e frxA inativados não apresentaram resistência a furazolidona. Nesse estudo foi utilizado o método de transformação natural, feitos com os produtos de PCR dos genes rdxA e frxA de oito amostras brasileiras resistentes simultaneamente aos dois antimicrobianos para verificar o envolvimento dos genes rdxA e fdxA com a resistência ao metronidazol e a furazolidona. Das oito amostras utilizadas foram obtidos foram obtidos seis transformantes de diferentes produtos de PCR do gene rdxA, resistentes ao metronidazol. Não foram obtidos transformantes com o gene fixA resistentes ao metronidazol, nem transformantes resistentes a furazolidona com nenhum dos dois genes. Os resultados .obtidos nesse trabalho indicam que à resistência ao metronidazol esta relacionada ao gene rdxA , mas não ao frxA, e sugere que o gene rdxA influencia a concentração inibitória mínimade furazolidona, mas não confere resistência / Abstract: Helicobacter Pylori infection is one of the most common infections worldwide and recognized as the major cause of peptic ulcer disease, risk factor for gastric adenocarcinoma and primary gastric Iymphoma. Metronidazole has often used in combination therapies against H. pylori. However, metronidazole is highly mutagenic and resistance to this drug is very common.These stimulated the use the altematives drugs that resistance was uncommon in H. pylori. In Brazil, where the levei of resistance for metronidazole was detected in 42%, the nitrofuran furazolidone passed to be one of the components therapies. Metronidazole and furazolidone are classified as nitroeterocyclic and nitroaromatic compounds, hence the modes of drug action are similar and nitroreduction is required for activation these. The mechanism of metronidazole resistance among H. pylori strains has been reIated to alterations in gene products having metronidazole nitroreductase activity, like the oxygen insensitiveNAD(p)H nitroredutase (RdxA), and NAD(p)H flavin oxidoredutase (FrxA). Due some strains present simultaneous resistance for furazolidone and metronidazole suggests that the resistance mechanismfor these drugs may be the same. However, frxA and rdxA knockout mutations constructed in laboratory reference strains are not resistant to furazolidone, which indicates that mutations in others genes were also need for resistance. We used natural transformation with PCR products of eigth brazilian clinical isolates, simultaneous resistant to this these two drugs, for verifify the involvement of the genes rdxA and ftxA with resistance to metronidazole and furazolidone drugs. Our results showed that metronidazole resistance are associated with rdxA gene, but not fixA, and suggest the involvement of rdxA gene in increased leveI of furazolidone minimum inhibitoryconcentration , but not coffer resistance / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Elenice Deffune / Coorientador: Andrei Moroz / Banca: Maria de Lourdes R. da Cunha / Banca: Flávia Karina Delella / Resumo: As infecções por MRSA podem ser consideradas um problema de saúde pública, com alta taxa de mortalidade. Desta maneira, com a ampla disseminação do MRSA é necessário adotar programas de vigilância que avaliem o perfil de sensibilidade dos isolados, além estimular o desenvolvimento tecnológico objetivando métodos mais rápidos e confiáveis que antecipem a escolha da terapêutica mais adequada propondo métodos de prevenção e vacinas para o avanço no controle da infecção hospitalar. Diante deste desafio este projeto tem como objetivo a caracterização de anticorpos monoclonais anti-MRSA obtidos por protocolos de imunização clássica e a obtenção de outros anticorpos com método de imunização subtrativa. Foram utilizados 10 camundongos Balb/C que receberam como tolerógeno proteínas de cepas de E.coli e MSSA associados a 100mg/kg/d de ciclofosfamida (CFM) em D1, D2,D3,D15, D16 e D17. Em D+31, 38, 45 e 54 foram feitas injeções de 50μg de proteínas da cepa de MRSA, anteriormente genotipada e confirmada a presença do gene mec A. Foram preparados extratos antigênicos por 3 métodos diferentes: fervura, morte à temperatura ambiente seguida de filtração 0,22μm e morte à temperatura ambiente e exposição ao banho ultrassônico. Pelo método de fervura obteve-se em média 5,31mg/mL enquanto que as técnica de morte a TA ambiente, filtrado ou submetido ao banho ultrassônico obtiveram em média uma concentração protéica duas vezes maior indicando a existência de proteínas termolábeis. Foi identificado uma taxa de mortalidade de 30% nos animais provavelmente associado ao uso da CFM. Foram realizadas 7 fusões celulares com a construção de 4.402 híbridos com uma taxa de eficiência de fusão de 2,42 vezes menor do que aquela obtida nos protocolos de imunização clássica. Dois hibridomas foram escolhidos para a clonagem pelo método de diluição limitante, cuja caracterização imunoquímica identifica... / Abstract: The MRSA infections are considered a public health problem, with a high mortality rate. Thus, with the wide spread of MRSA it's necessary to embrace monitoring programs to evaluate the sensitivity profile of the isolates, as well as to stimulate technological development aiming faster and more reliable methods to anticipate the choice of the most appropriate therapy by proposing methods of prevention and vaccines to advance the control of hospital infections. Therefore, this study aims the characterization of anti-MRSA monoclonal antibodies obtained by classical immunization protocols and the obtaining of other antibodies with the subtractive immunization method. We used 10 Balb/C mice that received as tolerogen proteins of strains of E. coli and MSSA associated with 100mg/kg/d of cyclophosphamide (Cy) in D1, D2, D3, D 15, D16 and D17. On D+31, 38, 45 and 54 we made injections of 50 μg of the MRSA strain protein, previously genotyped and with confirmed presence of mec A. We prepared antigenic extracts by 3 different methods: boiling, death at ambient temperature followed by 0.22 μm filtration and death at ambient temperature and exposure to ultrasonic wash.The boiling method resulted on average 5.31mg/mL, whereas the technique of death at ambient temperature, filtered or exposed to ultrasonic wash culminated on average in a protein concentration two times higher, indicating the existence of heat labile proteins.We identified a mortality rate of 30% in the animals, which was probably associated with the use of Cy. We performed seven cellular fusions with the construction of 4.402 hybrids with a fusion efficiency rate of 2.42 times smaller than that obtained in protocols of classical immunization.We selected two hybridomas for cloning by the limiting dilution method, whose immunochemical characterization identifies bands of 30 and 50 kDa. The proteomic analysis of protein bands that was recognized by the two clones confirm that the ... / Mestre

Nos últimos anos o aumento na incidência de candidose superficial e invasiva causada por espécies emergentes resistentes tem sido atribuído a disseminação do uso de antibióticos e agentes imunossupressores. O aumento de Candida não-albicans deve-se ao incremento de pacientes imunodeprimidos, neutropênicos, recém nascidos de baixo peso, procedimentos invasivos e iatrogenia. Todos esses fatores permitem que agentes pouco virulentos, causem doenças. Vários estudos bioquímicos e moleculares foram realizados no sentido de elucidar as causas da resistência a antifúngicos em leveduras. Os objetivos do presente estudo foram: estudar leveduras do gênero Candida isoladas da cavidade bucal de pacientes com e sem HIV; comparação de métodos de identificação dos isolados; determinar o perfil de sensibilidade aos antifúngicos anfotericina B e fluconazol pelas metodologias de microdiluição CLSI, AFSTEUCAST e difusão em agar Etest e obter amostras heterorresistentes à anfotericina B e ao fluconazol por indução e seleção. Foram identificados 22 isolados de C. albicans, 3 de C. tropicalis, 3 de C. parapsilosis e 2 de C. glabrata segundo o método clássico. A identificação por métodos morfológicos e bioquímicos foi 100% concordante com o método molecular (PCR), tanto pela amplificação dos primers espécies-específicos (C. albicans e C. dubliniensis) quanto pela comparação do tamanho do fragmento amplificado pelos primers da região ITS2. A correlação entre a metodologia Etest e os dois métodos de microdiluição foi alta. Todas as amostras selvagens foram sensíveis a anfotericina B (CIM£2,0μg/mL) e apenas um isolado (3,33%) de C. tropicalis foi resistente ao fluconazol (CIM³64,0μg/mL por CLSI e CIM³64,0μg/mL por AFST-EUCAST). Foram selecionadas amostras heteroresistentes através da pressão seletiva utilizando meio adicionado de fluconazol (8μg/mL) e em seguida com anfotericina B (1,0μg/mL). A pressão seletiva também foi feita iniciando-se com anfotericina B e em seguida fluconazol. Paralelamente, as amostras selvagens foram submetidas à indução de resistência através do cultivo primeiro em concentrações crescentes de fluconazol (16,0; 32,0; 64,0; 128 e 256mg/mL) e em seguida com anfotericina B (0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 e 3,0mg/mL). Os testes também foram feitos invertendo-se os antifúngicos, iniciando com anfotericina B e depois fluconazol. Foram obtidas três amostras heterorresistentes a fluconazol, das quais duas foram por indução (C. glabrata e C. tropicalis) e uma por seleção (C. tropicalis.). Ambas amostras de C. tropicalis foram originadas de um mesmo isolado selvagem. Nenhuma amostra mudou seu perfil de sensibilidade para anfotericina B, apesar de alguns isolados apresentarem capacidade de crescimento em várias concentrações deste antifúngico (1,0 a 3,0μg/mL). Após cultivos sucessivos em meio livre de droga, somente a cepa obtida por seleção manteve seu fenótipo de resistência. As cepas selvagens e suas mutantes apresentaram o mesmo perfil quando comparadas pela amplificação da região ITS2. Conclui-se que, embora a maior parte das espécies estudadas seja C. albicans (73,33%) todas as amostras heteroresistentes ao fluconazol obtidas foram Candida nãoalbicans (10%). As duas cepas mutantes obtidas pelo mesmo isolado inicial possuem, possivelmente, mecanismos múltiplos e distintos de resistência que, associado ao isolado, conferem resistência e/ou adaptabilidade à levedura frente ao antifúngico. / In the last years the increase in the incidence of superficial and invasive candidosis caused by resistant species has been attributed to the use of antibiotics and immunosuppression drugs. The increase do Candida non-albicans isolate due to the increment of patient immunocompromised, immunodeficiency virus infection, neutropenic, newly born of low weight, procedures invasives and iatrogenic. All those factors allow that agents a little virulent, caused diseases. Several biochemical and molecular studies have been accomplished for elucidating the causes of resistance in yeasts. The aims of the present research were: to study yeasts of the gender Candida isolated of the buccal cavity patients with and without HIV; comparison of methods of identification of isolates ; to determine the sensibility profile to the amphotericin B and fluconazole antifungals by microdilution methodologies CLSI, AFST-EUCAST and Etest difusion agar and acquisition of heteroresistent samples to amphotericin B and to fluconazole by induction and selection experiments. Were identifications 22 C. albicans, 3 C. tropicalis, 3 C. parapsilosis and 2 C. glabrata through the classic methods. The identification by morphologic and biochemisth was 100% agreement with the results obtained by the molecular method (PCR), them by the amplification of the species with specific primers (C. albicans and C. dubliniensis) as for the comparison of the size of the fragment amplified by the primers of region ITS2. The correlation among the methodology Etest and the two microdilution methods (CLSI and AFST-EUCAST) was higth. All samples wilds were suscetibility to amphotericin B (CIM£2,0μg/mL) and just one isolate (3,33%) of C. tropicalis was resistent to fluconazole (CIM³64,0μg/mL por CLSI e CIM³ 64,0μg/mL por AFST-EUCAST). Resistant strains were obtained by selective pressure using a medium amended with Fluconazole (8 μg/mL) and after that a medium with Amphothericin B (1.0 μg/mL). The selective pressure was also performed using Amphothericin B at first followed by Fluconazole. Similarly, wild samples were submitted to the induction of resistance by culturing in increasing concentrations of Fluconazole (16.0; 32.0; 64.0; 128 e 256mg/mL) followed by culturing in increasing concentrations of Amphotericin B (0.5; 1.0; 1.5; 2.0; 2.5 e 3.0mg/mL) and, after that, inverting the antifungal agents: Amphotericin B at first, followed by Fluconazole. Three samples heteroresistant to Fluconazole were obtained, two of which obtained by induction (C. glabrata and C. tropicalis) and one by selection (C. tropicalis.). Both C. tropicalis samples were originated from te same wild strain.None sample chamged its susceptibility profile to amphotericin B, in spite of some isolates that presented capacity of growth in several concentrations of this antifungals (1,0 a 3,0μg/mL). After successive cultivations in medium free of drugs, only the sample obtained by selection maintained your resistance phenotype. The wild samples and their mutants presented the same profile when compared by the amplification of the region ITS2. In conclusion, although most of the studied species were C. albicans (73,33%), all the fluconazol-heteroresistant samples obtained were Candida no-albicans (10%). The two mutant samples obtained from the same initial isolate possibly possess multiple and different mechanisms of resistance that, associated to the isolate, confer resistance and/or adaptability to the yeast in front to antifungal. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Resumo: Baseado nas informações geradas após o seqüenciamento do genoma, foi desenvolvido uma série de meios de cultura de composição definida (XDM1, XDM2, XDM3, XDM4 e XDM5). Portanto, um dos objetivos do presente trabalho foi estabelecer a curva de crescimento da X. fastidiosa no meio definido XDM2. Foi utilizada a estirpe 9a5c de X. fastidiosa mantida nesse mesmo meio de cultura. A medida da taxa de crescimento bacteriano foi realizada através de leituras de densidade óptica durante dezesseis dias com intervalos de 48 horas. A avaliação da viabilidade celular foi realizada através da contagem de unidade formadora de colônia (UFC) por diluição seriada. As duas avaliações apresentaram uma alta correlação (R2= 0,91) verificada através de regressão exponencial. O início da fase estacionária foi obtido após 10 dias de crescimento. De posse dos dados de UFC, foi possível calcular o tempo de geração da X. fastidiosa no meio XDM2, de aproximadamente 21 horas. Comparando o tempo de geração obtido na curva de crescimento em meio PW (11,37h), foi comprovado que a bactéria apresenta um crescimento mais rápido em meio PW do que no meio definido XDM2. Outro aspecto interessante revelado no estudo do genoma funcional da X. fastidiosa está relacionado à expressão de genes associados à patogenicidade. O principal mecanismo de patogenicidade é a formação de biofilme no xilema da planta hospedeira conduzindo ao bloqueio dos vasos do xilema. Análise da expressão diferencial de genes desse fitopatógeno em condição de virulência e durante a formação do biofilme revela padrões de genes associados à adaptação e competitividade no ambiente do hospedeiro. Esses genes possivelmente são ativados no biofilme maduro e são essenciais para sua manutenção na planta. Além disso, sabe-se que bactérias que formam biofilme apresentam resistência crescente a compostos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Based on informations generated after the genome sequencing, a series of culture media of defined composition were developed (XDM1, XDM2, XDM3, XDM4 e XDM5). Therefore, one of the objectives of the present work was to establish the growth curve of X. fastidiosa in the defined medium XDM2. For this, we utilized the 9a5c strain of X. fastidiosa maintained in this medium. The measurement of the bacterial growth rate was done by optical density analysis during sixteen days with intervals of 48 hours. The evaluation of cellular viability was carried out counting the colony units forming (CFU) by serial dilution. Both evaluations presented a high correlation (R2 = 0,91) verified by exponential regression. The beginning of the stationary phase was observed after ten days of growth. With the data of CFU, it was possible to calculate the generation time of X. fastidiosa in XDM2 medium, estimated to be of approximated 21 hours. Comparing the generation time obtained for the growth curve in PW medium (11,37 hours), we proved that the bacteria grow faster in PW compared with the defined medium XDM2. Another interesting aspect reveled by the study of functional genome of X. fastidiosa is related to the expression of genes associated with pathogenicity. The main mechanism of its pathogenicity is the formation of a biofilm in the xylem of the host plant, causing the blockage of the xylem vessels. Analysis of the differential expression of genes of this phytophatogen in condition of virulence and during the biofilm formation reveals standards associated to adaptation and competition in the host environment. These genes are possibly activated in the mature biofilm and are essential for its maintenance in the plant. Besides, it is known that bacteria that form biofilm present elevated resistance to antimicrobial compounds while biofilm is structured, like antibiotics, heavy metals... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Marcos Antonio Machado / Coorientador: Alessandra Alves de Souza / Banca: Ivan Maia de Godoy / Banca: Henrique Ferreira / Mestre

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Estudo caso-controle realizado nos 23 CSRJ, cujo objetivo geral foi desenvolver um modelo de predição para a resistência aos quimioterápicos que possa ser utilizado no diagnóstico, tratamento e prognóstico. Os doentes de estudo foram selecionados a partir de uma base populacional, no período de maio-iulho, 1994. A amostra foi calculada segundo SCHLESSELMAN, 1982, utilizando como parâmetros de cálculo o estudo de resistência mundial realizado pela OMS no período de 94 a 97. A base populacional (1074) foram todos os doentes que procuraram os CSMPJ, no período do estudo, a populacão alvo foram 813 doentes que apresentavaram sintomas respiratórios. Forarn incluídos 552 doentes com cultura positiva para M.tuberciilosis, e Teste de Sensibilidade, método das proporções, realizados no CRPHF. Foram excluídos 353 doentes - 99 tuberculose extrapulmonar, 157 culturas negativas, 77 culturas contaminadas, 8 culturas extraviadas e 8 falências.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-28Bitstream added on 2014-06-13T20:01:59Z : No. of bitstreams: 1 rodrigues_mvp_dr_botfm.pdf: 2095427 bytes, checksum: da1c8df4916765105802c2a6f424aa29 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Os Staphylococcus aureus são os principais microrganismos causadores de infecções nosocomiais, com uma grande variedade de manifestações clínicas, a variação deste espectro de manifestações geralmente depende dos numerosos fatores de virulência que cada cepa produz, entretanto, a importância desses patógenos está inserida na combinação da virulência mediada por suas toxinas, seu caráter invasivo e seu perfil de resistência a antibióticos. O presente estudo teve por objetivos documentar a disseminação de clones endêmicos e identificar os fatores individuais relacionados à sua aquisição, e relacioná-los a prevalência de fatores de resistência e virulência em cepas de MRSA isoladas de culturas clínicas e/ou de vigilância de pacientes de um hospital de ensino. No presente trabalho 1078 amostras de Staphylococcus aureus provenientes de pacientes internados no Hospital Estadual Bauru foram identificadas e testadas fenotipicamente frente a oxacilina (1 g), cefoxitina (30 g), vancomicina (30 g), eritromicina (15 g) e gentamicina (10 g) sendo que dessas, 810 (75.1%) apresentaram perfil fenotípico para Staphylococcus aureus Resistentes a Meticilina – MRSA. A avaliação genotípica do perfil de resistência foi realizada através da amplificação do gene mecA pela técnica de PCR onde foi observado que das 443 amostras testadas foi detectado o gene mecA em 336 amostras (75.8%), e que dessas, 305 amostras (90.8%) apresentaram perfil SCCmec Tipo III ou Tipo IIIA, 6 amostras (1.8%) Tipo II e 25 amostras (7.4%) Tipo IV. A avaliação do perfil genotípico de virulência mostrou a seguinte distribuição, 15.6% (n=69) genes da Leucocidina de Panton Valentine (lukPV), 14% (n=62) gene da Síndrome do Choque Tóxico (tst), 31.8% (n=141) gene da Enterotoxina A (sea), 19.8% (n=88) gene da Enterotoxina B (seb), 38.1% (n=169) gene da... / Staphylococcus aureus are the most common microorganisms causing nosocomial infections, with a wide variety of clinical manifestations, the variation of the spectrum of manifestations generally depends upon the numerous virulence factors that each strain produces, however, the importance of these pathogens is included in the combination of virulence mediated by their toxins, its invasive nature and profile of antibiotic resistance. This study aimed to document the spread of endemic clones and identify the individual factors related to its acquisition, and relate them to the prevalence of resistance and virulence factors in strains of MRSA isolated from clinical cultures and / or surveillance patients a teaching hospital. In this study 1078 samples of Staphylococcus aureus from hospitalized patients in Bauru State Hospital were identified phenotypically and tested against oxacillin (1  g), cefoxitin (30  g), vancomycin (30  g), erythromycin (15  g) and gentamicin (10  g) and that these, 810 (75.8%) showed phenotypic profile for Methicillin Resistant Staphylococcus aureus - MRSA. The evaluation of genotypic resistance profiles was performed by amplification of the mecA gene by PCR where it was observed that of 443 samples tested was detected mecA gene in 336 samples (75.8%), and that these, 305 samples (90.8%) profile were SCCmec type III or type IIIA, six samples (1.8%) type II and 25 samples (7.4%) type IV. The evaluation of virulence genotype was distributed as follows, 15.6% (n = 69) genes of Panton Valentine Leukocidin (lukPV), 14% (n = 62) gene for toxic shock syndrome (tst), 31.8% (n = 141) gene of enterotoxin A (sea), 19.8% (n = 88) gene of enterotoxin B (seb), 38.1% (n = 169) gene of enterotoxin C (sec-1), 100% (n = 443) Delta Hemolysin gene (hld), 99.5% (n = 441) Alpha Hemolysin gene (hla), 0.9% (n = 4) Exfoliative toxin A (eta), 3.6% (n = 16) Exfoliative... (Complete abstract click electronic access below)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Estudo caso-controle realizado nos 23 CSRJ, cujo objetivo geral foi desenvolver um modelo de predição para a resistência aos quimioterápicos que possa ser utilizado no diagnóstico, tratamento e prognóstico. Os doentes de estudo foram selecionados a partir de uma base populacional, no período de maio-iulho, 1994. A amostra foi calculada segundo SCHLESSELMAN, 1982, utilizando como parâmetros de cálculo o estudo de resistência mundial realizado pela OMS no período de 94 a 97. A base populacional (1074) foram todos os doentes que procuraram os CSMPJ, no período do estudo, a populacão alvo foram 813 doentes que apresentavaram sintomas respiratórios. Forarn incluídos 552 doentes com cultura positiva para M.tuberciilosis, e Teste de Sensibilidade, método das proporções, realizados no CRPHF. Foram excluídos 353 doentes - 99 tuberculose extrapulmonar, 157 culturas negativas, 77 culturas contaminadas, 8 culturas extraviadas e 8 falências.

Orientador: Laercio Luis Vendite / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Matematica, Estatistica e Ciencia da Computação / Made available in DSpace on 2018-07-21T00:03:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Egreggio_AndreaRegina_M.pdf: 1755325 bytes, checksum: 755939d522c33b132d8db5c45207851c (MD5) Previous issue date: 1996 / Mestrado / Mestre em Matemática Aplicada

Orientadores: Marcelo de Carvalho Ramos, Maria Cecilia Barisson / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T01:15:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Milan_Arlete_M.pdf: 2380396 bytes, checksum: 8b3168431347ab625bac1135be8ebb1c (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Introdução: A Pseudomonas aeruginosa é um importante agente de infecção nosocomial e motivo de grande preocupação por apresentar, com freqüência, resistência a diversos antimicrobianos. Os principais mecanismos de resistência encontrados são: inativação por enzimas, alterações na permeabilidade da membrana celular e promoção de efluxo. O conhecimento dos mecanismos de resistência que operam nesses microrganismos, bem como o estudo epidemiológico-molecular desses isolados, pode contribuir para a melhor compreensão e conseqüente controle dessas infecções no ambiente hospitalar. Objetivos: Determinar a Concentração Inibitória Mínima do Imipenem de Pseudomonas aeruginosa resistentes a esse antimicrobiano, isoladas de pacientes internados em hospital; Determinar a frequência de produção de metalo-beta-lactamases e da expressão da porina Opr D2 de Pseudomonas aeruginosa resistentes ao Imipenem, isoladas de pacientes internados em hospital; Genotipar e estudar a relação genética de Pseudomonas aeruginosa resistentes ao Imipenem, isoladas de pacientes internados em hospital. Materiais e Métodos: Foram estudadas 138 cepas isoladas de diversas amostras clínicas, identificadas bioquimicamente por técnicas de rotina e por automação. A triagem para a detecção de amostras produtoras de MBL's foi realizada pela fita de Etest combinada com EDTA. A extração e eletroforese de proteínas da parede celular foi executada para avaliar a expressão de porina Opr D2. Para a genotipagem foi utilizada a técnica de PFGE. Resultados e Discussões: Foram estudados 138 isolados, encaminhados como resistentes ao Imipenem. Em 128 desses isolados a resistência foi confirmada através do teste de difusão com disco e com a determinação do MIC (n = 98), através do Etest. A pesquisa da porina Opr D2 foi realizada em todos os isolados resistentes, ou seja, 128 casos. Em 68 deles não havia a expressão dessa proteína. Quando combinados os resultados da pesquisa de metalo-beta-lactamases e da deleção da porina Opr D2, encontramos 24 isolados que exibiam ambos os mecanismos de resistência. Da análise genotípica de 117 isolados, mostrou um acentuado polimorfismo, mesmo em isolados obtidos em um mesmo paciente. Não foram caracterizados surtos. Conclusões: A maioria das cepas de Pseudomonas aeruginosa resistentes ao Imipenem, isoladas em ambiente hospitalar, possui elevada resistência; A produção de meta-lobeta-lactamases constitui um mecanismo de resistência importante nesses isolados; A deleção da porina Opr D2 de membrana celular foi observada na maioria dos isolados. Em cerca de um terço deles havia também produção de metalo-beta-lactamase; A conglomeração desses isolados foi baixa, não caracterizando surtos em todos os casos; A variabilidade genotípica dos isolados foi intensa, mesmo em um determinado paciente, indicando que as ações relativas ao controle da disseminação desse patógeno deve ser de natureza rotineira, com as precauções de contato de universais e com o controle do uso de antimicrobianos / Abstract: Objective: Metallo-ß-lactamase production and Opr D2 channels expression was investigated in Imipenem resistant Pseudomonas aeruginosa recovered from hospital acquired infections. Design: Descriptive study in a convenient sample of organisms. Setting: Two 400-bed general teaching hospital, both tertiary care teaching hospitals, in Campinas, Brazil. All Imipenem resistant P. aeruginosa, recovered from March, 2000 through December 2004 from hospitalized patients were collected. Methods: Disk diffusion tests were used to confirm Imipenem resistance. Etest MBL was done to check for MBL production, and. Imipenem MIC's. Opr D2 expression was checked using cellular membrane proteins electrophoresis PFGE-genotyping was done in all isolates. Results: A sample of 128 Imipenem resistant Pseudomonas aeruginosa isolates was collected during the study period. Most isolates exhibited Imipenem MIC's = 256 µg / mL. Macrorestriction analysis (SpeI) using pulsed field gel electrophoresis (PFGE) showed a substantial polymorphism. Only 15 strains could be allocated to seven clusters, six with two isolates and one with three isolates. Ninety-nine Imipenem resistant isolates were screened for MBL production, and 87 were screened for both MBL, and porin Opr D2 expression. Sixty four isolates showed MBL production. Conclusion: Dissemination of MBL producing-genotypically heterogenous Pseudomonas aeruginosa strains was documented in the hospitals studied. Lack of Opr D2 combined with MBL production contributed to the high imipenem-resistance rates observed / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Jose Pedrazzoli Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-01T18:06:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Salvatti_ChristinadaCunhaEcclissato_M.pdf: 11733895 bytes, checksum: 514b6dfca8aff1fcc736e6ecdea49609 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A infecção pelo Helicobacter pylori é associada com uma variedade de doenças digestivas e apresenta alta prevalência em países em desenvolvimento, apesar de poucos dados sobre a susceptibilidade da bactéria aos antimicrobianos comumente usados nos esquemas de erradicação nesses países. O objetivo do presente estudo foi avaliar a resistência do Helicobacter pylori ao metronidazol, claritromicina, amoxicilina, tetraciclina e furazolidona em pacientes dispépticos no Brasil. Noventa pacientes dispépticos foram avaliados. A resistência foi avaliada pelo teste de diluição em ágar. A resistência ao metronidazol foi detectada em 38 pacientes (42%); a amoxicilina em 26 indivíduos (29%); a claritromicina em 6 pacientes (7%); a tetraciclina em 6 pacientes (7%); e à furazolidona em 4 indivíduos (4%). Treze culturas foram resistentes a 2 agentes antimicrobianos, e oito foram resistentes a três agentes. Os resultados encontrados confirmam a necessidade da realização de cultura e teste de susceptibilidade para a definição dos padrões de resistência em determinadas áreas geográficas para o uso generalizado de um esquema de erradicação da infecção pelo Helicobacter pylori / Abstract: Helicobacter pylori infection is associated with a wide range of digestive diseases and is very prevalent in developing countries, although few data exist on the susceptibility of H pylori to antimicrobials commonly used in eradication schedules in these countries. The aim of this study was to evaluate the resistance of h. pylori to metronidazole, clarithromycin, amoxicillin, tetracyclin, and furazolidone in dyspeptic Brazilian patients. Ninety consecutive H pylori-positive patients was enrolled. Resistance was evaluated by an agar diluition test. Resistance to metronidazole was detected in 38 patients (42%); to amoxicillin in 26 individuais (29%); to clarithromycin in 6 patients (7%); to tetracycline in 6 patients (7%); and to furazolidone in 4 individuais (4%). Thirteen strains were resistant to two agents, and eight strains were resistant to three antimicrobials. These results confirm the need for culture and susceptibility testing to define H. pylori resistance patterns in particular geographical areas before the general use of an eradication schedule. They also suggest the possibility of resistance to such antimicrobials as amoxicillin or tetracycline in geographical areas with a high prevalence of H. pylori and still not fully evaluated for antimicrobial susceptibility / Mestrado / Medicina Interna / Mestre em Ciências Médicas