Fetal exposure to excess glucocorticoid is associated with low birth weight and increased cardiovascular disease risk in first generation offspring. Such phenotypes can be produced experimentally through the administration of the synthetic glucocorticoid dexamethasone (Dex) to pregnant rats during the last week of gestation. These ‘programmed effects’ can be transmitted to a second generation through both maternal and paternal lines. The overall hypothesis for this thesis was that the transmission of programmed effects through the male line may result from alterations in fetal germ cells, which form sperm in adulthood. Epigenetic reprogramming of germ cells is characterised by the genome-wide erasure and subsequent re-establishment of 5-methylcytosine (5mC), however this process has not previously been described for the rat. Furthermore, the involvement of more recently identified cytosine modifications; 5-hydroxymethylcytosine (5hmC), 5- formylcytosine (5fC) and 5-carboxylcytosine (5caC), has not been characterised during germ cell ontogeny. Using immunofluorescence to study DNA modifications during late gestation I identified that 5hmC, 5fC and 5caC were present between e14.5 and e16.5 but absent thereafter. In contrast, 5mC was absent during this time but remethylation was noted from e19.5 onwards. Prenatal Dex exposure was associated with the presence of significantly more 5mC-positive germ cells at e19.5 relative to controls. This difference did not persist at e20.5 suggesting that Dex exposure promotes premature global remethylation. The mechanisms for this are unclear since there were no differences between groups in the localisation of the DNA methyltransferases DNMT3a and 3b, or in markers of normal testis maturation. To enable the study of gene-specific changes in DNA methylation in the germline a colony of Germ Cell Specific-Enhanced Green Fluorescent Protein (GCS-EGFP) rats was established and characterised. GCS-EGFP rats had a transgenerational decrease in pup weight with Dex exposure, as in Wistar rats. The expression of both established and novel candidate genes was compared between strains. Multiple genes across different pathways had altered expression, with some affected in both Wistar and GCS-EGFP rats, whilst other differences were strain-specific. Enhanced Reduced Representation Bisulfite Sequencing was performed on liver and fetal germ cells from males exposed to Dex in utero to explore effects on DNA methylation. These studies confirm that epigenetic reprogramming occurs in the rat and that this process may be susceptible to modification by prenatal Dex exposure. GCS-EGFP rats also exhibited a Dex programming phenotype, with decreased pup weight and altered liver gene expression. The use of this unique strain of rats will permit dissection of the mechanisms for the transmission of programmed phenotypes across generations.

Resumo não diponível.

A Síndrome do Álcool Fetal (SAF) se refere a um conjunto de malformações que podem estar presentes em crianças, filhas de mães que consumiram bebida alcoólica durante a gestação. Esta síndrome apresenta um conjunto distinto de anomalias onde as mais freqüentes são fissura palpebral estreita, lábio superior fino, filtro liso, restrição de crescimento e anomalias do sistema nervoso central. A exposição pré-natal ao álcool pode trazer sérias conseqüências que permanecem a vida toda. Sua incidência, nos Estados Unidos, chega a 1 em cada 100 nascimentos, mas esta estimativa varia de país para país devido a diferenças culturais, genéticas e do método de avaliação. O cérebro é o órgão mais vulnerável do corpo aos efeitos da exposição pré-natal ao álcool. O dano causado ao sistema nervoso central por tal exposição resulta em danos neurológicos permanentes, incluindo anomalias de comportamento e atraso de desenvolvimento. A redução no intelecto é a manifestação comportamental mais comum observada do dano causado ao sistema nervoso central. Apesar disto, o déficit de comportamento social está se tornando uma seqüela frequentemente encontrada em indivíduos expostos. Recentemente, vários estudos têm sugerido que crianças com SAF apresentam dificuldades emocionais e comportamentais que podem levar a uma série de problemas secundários. Este estudo tem como objetivo avaliar o consumo de álcool materno durante a gestação e verificar a presença de sinais relacionados à SAF em adolescente e jovem adultos, de escolas públicas, e comparar com uma amostra de indivíduos institucionalizados. Também, analisar fatores de risco ambiental que possam estar relacionados com o comportamento antisocial observado nestes adolescentes. Cento e quarenta e cinco estudantes (controles) e 262 adolescentes da Fundação de Atendimento Sócio-Edudativo - FASE (probandos) foram avaliados em relação a características maternas, história familiar, consumo materno de álcool durante a gestação, exame físico e teste de QI. Quase 40% dos controles e 49% dos probandos tiveram exposição pré-natal ao álcool. Todas as análises estatísticas foram feitas comparando as variáveis previamente citadas com a quantidade de ingesta materna de álcool durante a gestação: nenhuma, esporádica e muita. Entre os estudantes, não encontramos diferenças significantes nas características gestacionais e de ambiente familiar quando comparadas entre os padrões de consumo materno de álcool. No que diz respeito aos sinais físicos da SAF, as seguintes medidas foram estatisticamente diferentes: perímetro cefálico e fissura palpebral. Em relação aos adolescentes institucionalizados, diferenças foram encontradas entre as características de ambiente familiar: não amamentar é mais comum entre as mulheres que bebem, bem como ter um membro da família condenado ou preso. A violência doméstica, criminalidade familiar, abuso infantil e alcoolismo familiar são as quatro variáveis que predizem o uso de álcool durante a gestação. Quando comparamos ambos os grupos juntos como uma única amostra constatou-se que algumas características do ambiente familiar eram muito importantes, como criminalidade familiar e abuso infantil; as medidas antropométricas não foram diferiram entre expostos e não expostos, exceto pelo perímetro cefálico. Estas particularidades do ambiente familiar estão influenciando o comportamento anti-social de modo a tornar os efeitos do consumo materno de álcool menos evidente entre os caracteres físicos. Mesmo assim, todos os indivíduos com sinais de SAF mostraram características similares: crescimento e desenvolvimento pobre, algumas dismorfias faciais e baixo escore no teste de QI.

xii, 154 leaves : ill. ; 28 cm Typescript. (Another copy on microfilm is located in Archives) Thesis (Ph.D) -- University of Oregon Includes vita and abstract Bibliography: leaves 134-154 University of Oregon theses, Dept. of Biology, Ph.D., 1980

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-04-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:03Z : No. of bitstreams: 1 Publico-12552a.pdf: 2026550 bytes, checksum: 8ba78ef62234ba3ae6b0f470c9930cc4 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:03Z : No. of bitstreams: 2 Publico-12552a.pdf: 2026550 bytes, checksum: 8ba78ef62234ba3ae6b0f470c9930cc4 (MD5) Publico-12552b.pdf: 1918117 bytes, checksum: 56a7e44d521d8916af6643491d369625 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:03Z : No. of bitstreams: 3 Publico-12552a.pdf: 2026550 bytes, checksum: 8ba78ef62234ba3ae6b0f470c9930cc4 (MD5) Publico-12552b.pdf: 1918117 bytes, checksum: 56a7e44d521d8916af6643491d369625 (MD5) Publico-12552c.pdf: 1869279 bytes, checksum: 6df6167cf77f67d7b3321d11d9094b64 (MD5). 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Os “modelos” foram mensurados por dois diferentes observadores, com os métodos XI VOCALTM, VOCALTM (Virtual Organ Computer-Aided anaLysis TM) e Multiplanar. A validade foi determinada comparando-se a porcentagem de diferença entre o volume calculado e o ‘real’. Para construção dos intervalos de referência para volume cardíaco procedeu-se um estudo transversal, avaliando 303 gestantes normais entre 20 e 34 semanas. Realizou-se uma única avaliação com método XI VOCALTM em 10 planos. Resultados: Todos os métodos apresentaram boa confiabilidade na volumetria dos “modelos”, quando comparados ao volume “real”. Não houve diferença estatística entre os métodos, entretanto as mensurações pelo XI VOCALTM, em 10 planos, apresentaram menor margem de erro (diferença média de 0,18cm³), sem comprometimento do tempo de exame. A avaliação cardíaca fetal permitiu a construção de um modelo de regressão linear ponderada, demonstrado maior variabilidade volumétrica com a progressão da idade gestacional. Com base na distribuição formataram-se os percentis 5, 10, 25, 50, 75, 90 e 95. Na análise da variabilidade intra e interobservador não houve diferença estatisticamente significante (p= 0,041 e p= 0,175, respectivamente), com alta reprodutibilidade (CCI >0,95). Conclusões: O método XI VOCALTM apresenta boa acurácia, principalmente em 10 planos, de acordo com os achados in vitro. O método demonstrou boa reprodutibilidade in vitro e in vivo. O volume cardíaco fetal demonstrou uma curva de ascenção ponderada entre 20 e 34 semanas de gestação. / Objectives: Validating an in vitro method for XI VOCALTM (eXtended Imaging Virtual Organ Computer-Aided anaLysys) three-dimensional ultrasound study; establishing intervals of reference to evaluate fetal heart volume between 20 and 34 gestational weeks; assessing the intraobserver and interobserver reproducibility for this method. Methods: In order to validate an in vitro method, three plastic models filled with ultrasound gel were constructed. These models were measured by two different observers using three different scan methods: XI VOCALTM, VOCALTM and Multiplanar. In order to achieve a reference curve with normal values of fetal heart volume, a cross-sectional study including 303 pregnant women between 20 and 34 gestational weeks was evaluated. The assessment was performed using a 10 plane section for each case. Results: All methods had high reliability and were considered useful for in vitro studies. There was no difference between the methods, although the evaluation using XI VOCALTM closer to the real volume of the models (mean difference 0,18 cm ³). The fetal heart evaluation allowed the construction of a polynomial regression model, with increasing of variability according to gestational age progression. The intervals of reference were calculated according to the percentiles 5, 10, 25, 50, 75, 90 and 95. There was no difference regarding the results achieved intra or inter observers (p = 0.041 and p = 0.175, respectively). The reproducibility of the method was considered good (ICC> 0.90). Conclusions: The XI VOCALTM method can be used for in vitro evaluation, with good accuracy, mainly with 10 planes section. This method has good reproducibility in clinical practice. The fetal heart volume has a rising curve between 20 and 34 gestational weeks. / TEDE

MARTINS NETO, Manoel. Fatores prognósticos para o óbito neonatal em gestações com diástole zero ou reserva na dopplervelocimetria das artérias umbilicais. 2009. 87 f. Dissertação (Mestrado em Tocoginecologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-23T17:46:06Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_mmartinsneto.pdf: 474196 bytes, checksum: e235f8add5c02c395b78131baaa8ad4b (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-12-23T17:47:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_mmartinsneto.pdf: 474196 bytes, checksum: e235f8add5c02c395b78131baaa8ad4b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-23T17:47:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_mmartinsneto.pdf: 474196 bytes, checksum: e235f8add5c02c395b78131baaa8ad4b (MD5) Previous issue date: 2009 / Objectives: evaluate the perinatal results in pregnancies with fetal brain sparing on the Doppler velocimetric study and identify the main prognostic factors associated with neonatal death. Methods: it is a transverse study from the charts of pregnant wowen with diagnosis of brain sparing, absent or reversed end-diastolic flow in the umbilical artery, followed at the Service of Maternal-Fetal Medicine of Maternidade-Escola Assis Chateaubrind – Universidade Federal do Ceará. There were analyzed 143 patients with single pregnancies, without structural or chromosomal anomalies, presenting gestacional age above 22 weeks and fetal weight equal or above 500 grams. ROC curve was constructed for gestacional age and weight at birth (independent variables) and neonatal death (dependent variable). The perinatal results were evaluated on the general population and on each group (brain sparing, absent and reversed end-diastolic flow), later compared with each other. For the statistical analisys it was utilized the tests: Shapiro-Wilk, Levene, t Studente, Mann-Whitney, ANOVA, Kruskal Wallis, Fisher. Chi-square, Logistical and Multinomial Regression. All were considered statistically significant when p < 0.05. Results: the majority of pregnante wowen (78.3%) presented some hypertensive disturb associated to the pregnancy. The pregnancy was resolved in the first 24 hours after Doppler velocimetric diagnosis on most cases (74.8%), being the abdominal acess utilized in 96.5% of the times. At the moment of delivers, the average gestational age was 33.6 weeks and the weight was 1684g. The newborns were classified as small for gestational age in 69.6% and needed ICU admission in 63% of the cases. The indexes of perinatal mortality for brain sparing, absent and reversed end-diastolic flow were respectively 11.1, 31.1 and 70.6%. The weight of the newborn (area bellow the ROC curve 0.934, p=0.000 and gestational age at birth (area 0.909, p=0.000) have shown to be good predictors of neonatal death. The cutoff point calculated for the weight was 1010g and for the gestational age as 32.5 weeks. The incidence of diminished amniotic fluid indez (AFI) in the pregnancies with lethal perinatal outcome was 41.2% and in those without lethality was 41.3%. Conclusions: fetuses with diagnosis of brain sparing, absent and reversed end-diastolic flow presented progressively worse and statistically different with each other prognosis. The gestational age and weight at birth showed excellent correlation with neonatal mortality. The AFI did not demonstrate association with lethality rate. / Objetivos. Avaliar os fatores prognósticos para o óbito neonatal em gestações com diástole zero ou reversa na dopplervelocimetria da artéria umbilical Métodos. Estudo transversal a partir dos prontuários das gestantes com diagnóstico de diástole zero (DZ) ou reversa (DR) em artéria umbilical acompanhadas no Serviço de Medicina Materno Fetal da Maternidade-Escola Assis Chateaubriand – Universidade Federal do Ceará. Foram analisadas 48 pacientes com gestação única, sem anomalias estruturais ou cromossômicas, apresentando idade gestacional superior a 22 semanas e menor do que 34 semanas. Para a avaliação estatística, foram empregados os testes: t Student, Exato de Fisher, Qui-quadrado de Pearson e Regressão Logística e Multinomial. Todos foram considerados estatisticamente significantes quando p<0,05. Resultados. As síndromes hipertensivas foram observadas na maioria (78,3 %) das gestantes. A maioria (52,1%) das gestações foi resolvida nas primeiras 24 horas após o diagnóstico dopplervelocimétrico. Em uma semana, 81,3% dos casos tinham terminado em parto, preferencialmente (85,4%) pela via abdominal. Os maiores percentuais da idade gestacional no momento do diagnóstico dopplervelocimétrico concentraram-se na faixa de 25 e 27 semanas. Os pesos do RN variaram entre 550g e 2600g, com média de 1021,7g. Os recém-nascidos foram classificados como pequenos para idade gestacional em 79,1% dos casos. Ao primeiro minuto de vida, 24 (57,1%) RN apresentaram índices de Apgar menores do que 7. Ocorreram 26 óbitos neonatais. Do estudo estatístico univariado dos fatores de risco antenatais, a idade gestacional no momento do diagnóstico dopplervelocimétrico revelou-se variável significativamente relacionada com o óbito neonatal (RR; 2,1, 95% CI 1.152 – 4.008, p = 0.011). Do estudo estatístico univariado dos fatores de risco pós-natais peso do RN (RR; 2,6, 95% CI 1.329 - 5.238, p = 0.001) e Apgar ao primeiro minuto (RR; 1,9, 95% CI 1.03 – 3.588,p = 0.027) revelaram-se variáveis significativamente relacionadas com o óbito neonatal, com peso do RN apresentando sensibilidade de 76,9%, especificidade de 73,6%, valor preditivo positivo de 80,0% e valor preditivo negativo de 30%, e Apgar ao primeiro minuto apresentando sensibilidade de 61,5%, especificidade de 61,1%, valor preditivo positivo de 69,5% e valor preditivo negativo de 47,6%. Conclusões. Diástole zero ou reversa estão relacionadas com resultados perinatais adversos, cujo risco para óbito neonatal está relacionado com a idade gestacional no momento do diagnóstico dopplervelocimétrico e com o peso do RN e com Apgar ao primeiro minuto.

VASCONCELOS, Rodney Paiva. Resultados perinatais em gestações com centralização de fluxo fetal ao estudo dopplervelocimétrico arterial. 2007. 82 f. Dissertação (Mestrado em Tocoginecologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2007. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-26T11:39:24Z No. of bitstreams: 1 2007_dis_rpvasconcelos.pdf: 2967190 bytes, checksum: 6ec883fbd5555bd748f69436b13ace79 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-12-26T11:40:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_dis_rpvasconcelos.pdf: 2967190 bytes, checksum: 6ec883fbd5555bd748f69436b13ace79 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-26T11:40:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_dis_rpvasconcelos.pdf: 2967190 bytes, checksum: 6ec883fbd5555bd748f69436b13ace79 (MD5) Previous issue date: 2007 / Evaluate the perinatal results in pregnancies with fetal brain sparing on the Doppler velocimetric study and identify the main prognostic factors associated with neonatal death. Methods: it is a transverse study from the charts of pregnant women with diagnosis of brain sparing, absent or reversed end-diastolic flow in the umbilical artery, followed at the Service of Maternal-Fetal Medicine of Maternidade-Escola Assis Chateaubriand – Universidade Federal do Ceará. There were analyzed 143 patients with single pregnancies, without structural or chromosomal anomalies, presenting gestational age above 22 weeks and fetal weight equal or above 500 grams. ROC curve was constructed for gestational age and weight at birth (independent variables) and neonatal death (dependent variable). The perinatal results were evaluated on the general population and on each group (brain sparing, absent and reversed end-diastolic flow), later compared with each other. For the statistical analisys it was utilized the tests: Shapiro-Wilk, Levene, t Student, Mann-Whitney, ANOVA, Kruskal Wallis, Fisher, Chi-square, Logistical and Multinomial Regression. All were considered statistically significant when p < 0.05. Results: the majority of pregnant women (78.3%) presented some hypertensive disturb associated to the pregnancy. The pregnancy was resolved in the first 24 hours after Doppler velocimetric diagnosis on most cases (74.8%), being the abdominal access utilized in 96.5% of the times. At the moment of delivery, the average gestational age was 33.6 weeks and the weight was 1684g. The newborns were classified as small for gestational age in 69.6% and needed ICU admission in 63% of the cases. The indexes of perinatal mortality for brain sparing, absent and reversed end-diastolic flow were respectively 11.1, 31.1 and 70.6%. The weight of the newborn (area bellow the ROC curve 0.934, p=0.000) and gestational age at birth (area 0.909, p=0.000) have shown to be good predictors of neonatal death. The cutoff point calculated for the weight was 1010g and for the gestational age was 32.5 weeks. The incidence of diminished amniotic fluid index (AFI) in the pregnancies with lethal perinatal outcome was 41.2% and in those without lethality was 41.3%. Conclusions: fetuses with diagnosis of brain sparing, absent and reversed end-diastolic flow presented progressively worse and statistically different with each other prognosis. The gestational age and weight at birth showed excellent correlation with neonatal mortality. The AFI did not demonstrate association with lethality rate. / Avaliar os resultados perinatais em gestações com centralização do fluxo fetal ao estudo dopplervelocimétrico e identificar os principais fatores prognósticos associados com o óbito neonatal. Métodos: estudo transversal a partir dos prontuários das gestantes com diagnóstico de centralização do fluxo fetal (CF), diástole zero (DZ) ou reversa (DR) acompanhadas no Serviço de Medicina Materno-Fetal da Maternidade-Escola Assis Chateaubriand – Universidade Federal do Ceará. Foram analisadas 143 pacientes com gestações únicas, sem anomalias estruturais ou cromossômicas, apresentando idade gestacional superior a 22 semanas e com peso fetal igual ou acima de 500 gramas. Construiu-se curva ROC para idade gestacional e peso ao nascer (variáveis independentes) e óbito neonatal (variável dependente). Os resultados perinatais foram avaliados na população geral e em cada grupo (CF, DZ e DR), sendo posteriormente comparados entre si. Para a avaliação estatística, utilizou-se os testes: Shapiro-Wilk, Levene, t Student, Mann-Whitney, ANOVA, Kruskal Wallis, Exato de Fisher, Chi-quadrado de Pearson, Regressão Logística e Multinomial. Todos foram considerados estatisticamente significantes quando p<0,05. Resultados: a maioria das gestantes (78,3%) apresentou algum distúrbio hipertensivo associado à gravidez. A gestação foi resolvida nas primeiras 24 horas após o diagnóstico dopplervelocimétrico na maioria dos casos (74,8%), sendo a via abdominal utilizada em 96,5% das vezes. No momento do parto, a idade gestacional média foi 33,6 semanas e o peso foi 1684g. Os recém-nascidos foram classificados como pequenos para idade gestacional em 69,6% e necessitaram de internamento em UTI em 63% dos casos. Os índices de mortalidade perinatal para CF, DZ e DR foram, respectivamente, de 11,1, 31,1 e 70,6%. O peso do RN (área sob a curva ROC 0,934, p=0,000) e idade gestacional ao nascer (área 0,909, p=0,000) mostraram ser bons preditores de óbito neonatal. O ponto de corte calculado para o peso foi 1010g e para a idade gestacional foi 32,5 semanas. A incidência do índice de líquido amniótico (ILA) diminuído nas gestações com desfecho perinatal letal foi 41,2% e naquelas sem letalidade foi 41,3%. Conclusões: fetos com diagnóstico de CF, DZ e DR apresentaram prognósticos progressivamente piores e estatisticamente diferentes entre si. A idade gestacional e peso ao nascer mostraram excelente correlação com mortalidade neonatal. O ILA não demonstrou associação com taxa de letalidade.

Made available in DSpace on 2012-09-06T01:11:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 847.pdf: 9895789 bytes, checksum: 7d936ca38ffbf1d9d9dca8733c9a0d67 (MD5) Previous issue date: 2005 / Beta-ionona (4-[2,6,6-trimethyl-1-cyclohexen-1-1yl]-3-buten-2-one; CAS 79-77-6) é um sesquiterpeno degradado (C13) encontrado nos óleos essenciais de uma variedade de plantas, entre os quais o óleo de violeta. Este composto tem sido usado na indústria, como intermediário na síntese de fragrâncias, vitamina A e como aditivo alimentar, sobretudo na indústria de vinhos. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial embriotóxico da beta-ionona que, em estudos anteriores, mostrou claros indícios de induzir embrioletalidade em ratos. Ratas Wistar foram tratadas por entubação gástrica com beta-ionona (125, 250, 500 e 1000 mg/kg de peso corporal/dia) ou apenas com veículo (óleo de milho), entre os dias 6 e 15 de gravidez. No dia 21, as fêmeas foram sacrificadas por inalação de CO2 e submetidas à cesárea. O útero gravídico foi pesado com todo seu conteúdo. (...) Neste nível de dose, a beta-ionona também afetou adversamente o desenvolvimento embrionário, causando embrioletalidade, evidenciada pelo aumento de perdas peri-implantação e pelo discreto aumento na proporção de reabsorções por implantações. Ainda em relação ao efeito embrioletal da beta-ionona observado neste estudo, pode-se dizer que as fêmeas foram mais suscetíveis do que os machos. No presente estudo, não foram encontrados indícios de retardo do crescimento intra-uterino induzido pelo exposição in utero à beta-ionona, nem aumento na incidência de alterações estruturais de vísceras ou esqueléticas em nenhum dos níveis de dose estudados. Os dados deste estudo indicaram que a beta-ionona não é teratogênica em ratos, uma vez que não houve aumento na freqüência de malformações viscerais e/ou esqueléticas em conseqüência à exposição in utero a este composto.

MACHADO, Rosângela Pinheiro Gonçalves. Modulação genética do bcl11a no perfil inflamatório, hemolítico, estresse oxidativo e nos níveis de hemoglobina fetal em pacientes com anemia falciforme. 2015. 89 f. Tese (Doutorado em Desenvolvimento e Inovação Tecnológica em Medicamentos) – Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-22T16:11:43Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_rpgmachado.pdf: 1587388 bytes, checksum: 0b0a86a18ef3b5eb8bd26f4097003545 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-10-23T11:02:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_rpgmachado.pdf: 1587388 bytes, checksum: 0b0a86a18ef3b5eb8bd26f4097003545 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-23T11:02:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_rpgmachado.pdf: 1587388 bytes, checksum: 0b0a86a18ef3b5eb8bd26f4097003545 (MD5) Previous issue date: 2015 / 8 ABSTRACT Sickle cell disease (SCD) is an autosomal hereditary hemoglobinopathies caused by a point mutation in the beta globin gene generates an abnormal hemoglobin called hemoglobin S (Hb S) in homozygous. The disease is characterized by presenting a variability of symptoms, which is due to m ultiple factors, including fetal hemoglobin (HbF), the haplotypes of the beta globin gene and polymorphisms BCL11A gene, among others. The assessment of genetic modulators in AF has been developed in order to improve the understanding of its pathophysiolog y and direct therapeutic approach aiming his individualization. The research set out to determine the genetic modulation of polymorphisms BCL11A gene (rs4671393, rs7557939 and rs1186868) on the inflammatory profile, hemolytic, oxidative stress and the conc entrations of HbF, Hb in patients with AF, in steady state. The study was cross and analytical type with 42 adult patients receiving outpatient treatment at the University Hospital Walter Cantídio (HUWC), with molecular diagnostics and haplotypes of the be ta globin gene S previously realized. The patients were taking hydroxyurea (HU), on average 20 mg / kg body weight. Biological samples of peripheral blood were obtained for performing laboratory tests: The dosages of IL - 6 pro - inflammatory cytokine, IL - 17, TNF - alpha and IL - 10 and anti - inflammatory TGF - beta by ELISA; reticulocyte counts by the manual method, dosage methemoglobin (MetHb) and lactate dehydrogenase (LDH) by spectrophotometry; nitrite (NOx), malondialdehyde (MDA) serum, erythrocyte antioxidant en zymes catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GPx) for kits and spectrophotometry. Genetic polymorphisms of BCL11A gene regions, rs4671393, rs7557939 and rs1186868 were determined by Real Time PCR. Dosages of HbF, and HbS were performed by HPLC (High Pe rformance Liquid Chromatography). The data age, sex and clinical events were obtained from medical records. All statistical analysis was performed using the free software R, in version 3.1.2. To analyze the frequency of sex and genotype by region and assoc iations between the type of haplotype and clinical events with the regions of BCL11A, they used the chi - square test and Fisher's exact. Held the ANOVA parametric test (obtained under distributional assumptions), and the non - parametric Kruskal - Wallis to ana lyze the association of genotypes BCL11A gene with age, the levels of Hb, HbF, inflammatory profile, hemolytic and oxidative stress. It was considered significant at the 5% level. Most patients (57.14%) were female. The age of the included patients was 18 - 65 years, mean and median value of 35.1 and 33 years respectively. Only rs7557939 of BCL11A, genotype A / G was the most prevalent and the prevalence of genotype A / G was higher in women, while in men the highest prevalence was genotype A / A. However, rs 1186868 of BCL11A, the majority (56.52%) of women had the C / T genotype and half the men showed the T / T genotype. No BCL11A region of the gene showed a significant association with haplotype S beta - globin gene Regarding gene BCL11A modução the levels of HbF, and HbS, it was found that there was a significant rs1186868 results in the mutant genotype T / T, showed higher levels o Hb and lower levels of HbF. In rs7557939 there was a significant decrease in HbF in the mutant allele A / A, however, there was no relationship with the HbS. There was no association between SNPs in the three regions studied, with the average number / median of inflammatory modulators, hemolysis markers of oxidative stress and clinical events at the level of 5% .The findings reinf orce the hypothesis of genetic modução of BCL11A gene polymorphisms in relation to levels of HbF, where the wild allele, rs7557939 and rs1186868 in the regions had a protective character in prognosis decorência of referral increased levels of HbF in patien ts with AF study. / A anemia falciforme (AF) é uma hemoglobinopatia hereditária autossômica causada por uma mutação pontual no gene da beta globina gerando uma hemoglobina anormal denominada de hemoglobina S (HbS), em homozigose. A doença se caracteriza por apresentar uma variabilidade do quadro clínico, que se deve à múltiplos fatores, dentre eles a concentração de hemoglobina fetal (HbF), os haplótipos do gene da beta globina e os polimorfismos do gene BCL11A, entre outros. A avaliação dos moduladores genéticos na AF tem sido desenvolvida com a finalidade de melhorar o entendimento da sua fisiopatologia e direcionar a abordagem terapêutica objetivando sua individualização. A pesquisa se propôs a determinar a modulação genética dos polimorfismos do gene BCL11A (rs4671393, rs7557939 e rs1186868) sobre o perfil inflamatório, hemolítico, no estresse oxidativo e nas concentrações das HbF, HbS nos pacientes portadores de AF, em estado estacionário. O estudo foi do tipo transversal e analítico com 42 pacientes adultos, em acompanhamento ambulatorial no Hospital Universitário Walter Cantídio (HUWC), com diagnóstico molecular e haplótipos do gene da beta globina S previamente realizados. Os pacientes estavam em uso de Hidroxiuréia (HU), em média, 20mg/kg de peso corporal. Amostras biológicas de sangue periférico foram obtidas para a realização dos exames laboratoriais: as dosagens das citocinas pró inflamatórias IL-6, IL-17, TNF-alpha e das antiinflamatórias IL-10 e TGF-beta, por Elisa; contagem de reticulócitos por metodologia manual, dosagem de metemoglobina (MetHb) e lactato desidrogenase (LDH), por espectrofotometria; do nitrito (NOx), malonaldeído (MDA) séricos, as enzimas antioxidantes eritrocitárias, catalase (CAT) e da glutationa peroxidase (GPx) por kits e espectrofotometria. Os polimorfismos genéticos do gene BCL11A nas regiões, rs4671393, rs7557939 e rs1186868 foram determinados por Real Time PCR. As dosagens da HbF e HbS foram realizadas por HPLC (High Performance Liquid Chromatography). Os dados idade, sexo e eventos clínicos foram obtidos dos prontuários. Toda a análise estatística foi realizada usando o software livre R, na versão 3.1.2. Para análise da frequência do sexo e dos genótipos, por região e das associações entre o tipo de haplótipo e dos eventos clínicos com as regiões do BCL11A, foram usados os testes de Qui-quadrado e o exato de Fisher. Realizou-se o teste paramétrico de ANOVA (obtido sob suposições distribucionais), bem como o teste não-paramétrico de Kruskal-Wallis para a análise da associação dos genótipos do gene BCL11A com a idade, os níveis de HbS, HbF, perfil inflamatório, hemolítico e do estresse oxidativo. Foi considerado significante ao nível de 5%. A maioria dos pacientes (57,14%) era do sexo feminino. A idade dos pacientes incluídos foi de 18 a 65 anos, com valor médio e mediano de 35,1 e 33 anos, respectivamente. Somente a rs7557939 do BCL11A, o genótipo A/G foi o mais prevalente e a prevalência do genótipo A/G foi maior nas mulheres , enquanto nos homens a prevalência maior foi do genótipo A/A. No entanto, a rs1186868 do BCL11A, a maioria (56,52%) das mulheres apresentaram o genótipo C/T e a metade dos homens apresentaram o genótipo T/T. Nenhuma região do gene BCL11A apresentou associação significativa com os haplótipos do gene da beta globina S. Em relação a modução do gene BCL11A com os níveis de HbS e HbF, verificou-se que na rs1186868 houve resultado significativo do genótipo mutante T/T, que apresentou maiores níveis de HbS e menores níveis de HbF. Na rs7557939 houve uma diminuição significante de HbF no alelo mutante A/A, porém, não houve relação com a HbS. Nâo houve associação entre os SNPs, nas três regiões estudadas, com relação ao número médio/mediano dos moduladores inflamatórios, marcadores de hemólise, do estresse oxidativo e dos eventos clínicos, ao nível de 5%.Os achados reforçam a hipótese da modução genética dos polimorfismos do gene BCL11A em relação aos níveis de HbF, onde os alelos selvagens, nas regiões rs7557939 e rs1186868 apresentaram um caráter protetor no prognóstico em decorência de terem apresentado aumento dos níveis de HbF, nos pacientes com AF do estudo.

Muitos caminhos bioquímicos e interações moleculares ainda são pouco conhecidos para as ciências biomédicas, dentre elas a ação de pequenos compostos tóxicos no desenvolvimento embrionário de diferentes modelos biológicos. Neste sentido, dois cenários críticos, de amplo interesse clínico e de impacto social, se destacam: o abuso de tabaco e de bebidas alcoólicas. Sabe-se que os derivados químicos do tabaco e do etanol são capazes de alterar o funcionamento de diferentes vias bioquímicas, levando a modificações. Por exemplo, crianças nascidas de mulheres fumantes expostas ou usuárias de tabaco mostram inúmeras alterações morfológicas e funcionais em diferentes tecidos do seu organismo. Da mesma forma, o abuso de álcool durante a gravidez é responsável por danos ao tecido neural do feto que, ao nascer, apresenta problemas cognitivos, motores e de aprendizado que se agravam ao longo da vida. Esse quadro patológico é chamado de Síndrome Alcoólica Fetal (SAF). Infelizmente, devido à complexidade inerente dos sistemas bioquímicos, os mecanismos moleculares subjacentes a ambos cenários são escassos. Assim, essa dissertação de mestrado visa aplicar diversas ferramentas de químio-biologia de sistemas para elucidar os possíveis alvos e caminhos moleculares relacionados às anomalias geradas pelo abuso de tabaco e à SAF. Para tanto, análises topológicas globais e locais de redes de interação foram empregadas juntamente com informações transcritômicas para ambas as condições de uso de tabaco e de etanol em modelo humano e murino (Mus musculus). As análises dos efeitos do tabaco no desenvolvimento mostram que o abuso deste resulta na alteração na biossíntese de prostaglandinas e leucotrieno, assim como na regulação negativa de genes HOX e receptores de ácido retinóico. Da mesma forma, foi possível identificar diversas proteínas relacionados a diferenciação celular e formação do tecido ósseo. Por fim, as análises dos efeitos do etanol no neurodesenvolvimento indicam que o etanol afeta a diferenciação neural e importantes processos como a via de glutamato e o metabolismo de diferentes vitaminas. As análises indicam que o etanol pode causar graves quadros de neuroinflamação. Também se observou que diversas vitaminas têm a sua biossíntese e o seu metabolismo alterado pelo etanol, com importantes implicações no neurodesenvolvimento. / Many pathways and molecular interactions are still poorly described in biomedical sciences. Among these pathways, the knowledge related to the action of toxic compounds during embryonic development is largely unknown. In this sense, two scenarios, of broad clinical and social impact stand out: the abuse of tobacco and alcohol in the form of fermented or distillates. It is known that the chemical derivatives of tobacco and ethanol are capable of alter the functionality of different biochemical pathways. For example, children born from smoking abusing women or exposed to tobacco smoke show innumerous morphological alterations in different tissues. In addition, the abuse of alcohol during pregnancy is responsible for damages in the fetus neural tissue. Those fetuses, after birth and during growth, present cognitive, motors and learning problems that aggravate in the course of life. This pathology is called Fetal Alcohol Syndrome (FAS). Unfortunately, due to the inherent complexity of biochemical systems, the molecular mechanisms underlying both scenarios are scarce and poorly understood. Thus, this master’s degree dissertation aim to apply different chemo-systems biology tools to elucidate the possible molecular pathways and potential targets related to the tobacco and SAF-related anomalies. For such, local and global topological analyses from interaction networks were employed together with transcriptomic information to both conditions of tobacco and ethanol abuse in human and mice (Mus musculus). The analysis of the effect of tobacco during development shows that the abuse of this drug results in the alteration of prostaglandin and leukotriene biosynthesis, as well for a negative regulation of HOX gene receptors and retinoic acid. Moreover, it was possible to identify different proteins related to osteogenesis. Finally, the analysis of the effects of ethanol in neurodevelopment indicate that ethanol impair neural differentiation and essential process, such as glutamate pathway and the metabolism of different vitamins. The gathered data also propose a model where ethanol can promote severe neuroinflammation. In addition, was observed that multiple vitamins had their biosynthesis and metabolism impaired by ethanol, with crucial implications for neurodevelopment.