Introdução. As Repetições Palindrômicas Curtas Agrupadas e Regularmente Interespaçadas (CRISPRs) são DNAs que consistem de repetições de nucleotídeos. Existem 3 tipos: CRISPR1-CAS, CRISPR3-CAS e CRISPR2. Os bacteriófagos são partículas virais que infectam bactérias. Os bacteriófagos SAP6, IME-EF1, BC-611, VD-13 e F4 são encontrados em E. faecalis assim como FL1ABC, FL2AB, FL3AB e FL4A. Objetivo. Identificar e caracterizar as classes de CRISPRs e bacteriófagos de E. faecalis e E. faecium isoaldos de amostras alimentares, clínicas e fezes de animais. Materiais e métodos. Foram usadas DNA de 153 isolados, sendo 98 de E. faecalis e 55 de E. faecium. A técnica de detecção foi a PCR utilizando iniciadores para os genes CRISPR1-Cas, CRISPR2, CRISPR3-cas e bacteriófagos, seguido por electroforese em gel de agarose. Resultados. Para E. faecalis foram detectadas 58 isolados que amplifacaram para o gene CRISPR1-Cas; 87 para CRISPR2 e 13 para CRISPR3-Cas. Para E. faecium foram detectadas 4 isolados positivos para o gene CRISPR1-Cas; 18 para CRISPR2 e 1 para CRISPR3-CAS. O bacteriófago FL2ABfoi detectado em 13 isolados de E. faecalis; o bacteriófago FL3AB em 13 isolados de E. faecalis e o FL4A em 28 isolados de E. faecalis. Conclusão. Neste estudo nos encontramos diferentes proporções e distribuições dos genes CRISPRs em E. faecalis e E. faecium. O bacteriófago FL4A apresentou-se como o mais frequente entre os bacteriófagos avalados. / Introduction. The CRISPR are small portions of DNA consisting of nucleotide repeats. There are three types of CRISPRs recognized: CRISPR-associated genes cas: CRISPR1-CAS and CRISPR3-CAS and a orphan locus lacking cas genes: CRISPR2. Bacteriophages are viral particles that infect bacterial. The bacteriophages SAP6, IME-EF1, BC-611 and F4 are found in E. faecalis as well as FL1ABC, FL2AB, FL3AB, FL4A. Objectivy: To Identify and to characterize CRISPRs genes and bacteriophage genes in E. faecalis and E. faecium isolated from food, clinical and animal fecal samples. Materials and methods. A total of 153 DNA samples were used, 98 from E. faecalis and 55 from E. faecium. The PCR technique using primers was used to detect the genes CRISPR1-Cas, CRISPR2, CRISPR3-cas and bacteriophages, followed the agarose gel electrophoresis. Results. To E. faecalis was detected 58 isolates that amplified the CRISPR1-Cas genes, 87 to CRISPR2 and 13 to CRISPR3-Cas. To E. faecium was detected 4 isolates positive to CRISPR1-Cas gene, 18 to CRISPR2 e 1 to CRISPR3-CAS. The FL2AB bacteriophage was detected in 13 isolates of E. faecalis; the FL3AB bacteriophage in 13 isolates of E. faecalis and the FL4A in 28 isolates of E. faecalis. Conclusion. In this work, we found out different proportions and distributions of CRISPRs genes in E. faecalis e E. faecium. The FL4A bacteriophage showed a high frequency among the bacteriophages tested.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / <i>Enterococcus faecium</i> tem se destacado no cenário das infecções hospitalares, particularmente, amostras portadoras de características de multirresistência. Apesar de serem responsabilizados como agentes etiológicos em diferentes quadros clínicos, fatores associados a patogênese das infecções ainda não estão esclarecidos. Entretanto, sabe-se que a capacidade de formação de biofilmes pode ser responsabilizada como um dos atributos capazes de promover o papel patogênico desses microrganismos. Assim sendo, este estudo se propôs a investigar a capacidade de formação de biofilmes por duas amostras de <i>E. faecium</i>: SS-1274 (derivada da amostra tipo da espécie) e CL-6729 (multirresistente e pertencente a um complexo clonal globalmente disperso). As amostras foram caracterizadas fenotipica e genotipicamente para confirmação da identificação, determinação da susceptibilidade a 17 antimicrobianos, caracterização da concentração mínima inibitória para ampicilina, gentamicina e vancomicina, determinação do genótipo vanA e detecção de genes associados a expressão dos genes asa1, cylA, esp, gelE e hyl. A análise quantitativa da formação por 24h e 72h dos biofilmes foi realizada por metodologia do cristal violeta, em placas de microtitulação de poliestireno. Foram construídas curvas de formação pela avaliação da DO570nm das preparações coradas por cristal violeta em períodos de tempo de 2h a 74h. A influência de subCMIs de ampicilina, gentamicina e vancomicina na formação de biofilmes de <i>E. faecium</i> foi também caracterizada em ensaios de quantificação da biomassa. A presença de DNA e proteínas foi avaliada em ensaios de destacamento e por fluorimetria. A arquitetura, distribuição espacial e reação aos fluorocromos Syto9 e SYPRO Ruby Protein foram evidenciadas por microscopia confocal de varredura a laser. Análises proteômicas através da avaliação por SDS-PAGE e por ESI-Q-TOF também foram empregadas para avaliação de biofilmes versus crescimento planctônico. Nossos resultados demonstraram que a amostra CL-6729 apresentou uma maior biomassa nos tempos analisados. Apesar da menor quantidade de biomassa da amostra SS-1274, o perfil da curva de formação foi semelhante a CL-6729. As análises da matriz por ensaios quantitativos e microscopia confocal revelaram que proteína parece ser um importante constituinte para ambas as amostras, entretanto biofilmes formados na presença de da CMI e durante 24h, parecem sofrer alterações na constituição. Os resultados relativos às espectrometrias de massa sugerem que células de biofilmes de <i>E. faecium</i> podem também estar metabolicamente ativas, devido a identificação de um considerável número de proteínas relacionadas ao metabolismo e divisão celular, similarmente às células planctônicas. No entanto, investigações complementares são necessárias para quantificar as diferenças relacionadas a sua expressão. Foi observado que ambas as amostras independente das variações fenotípicas e genotípicas são capazes de formar biofilmes maduros exibindo constituição e arquitetura similares. Entretanto, nossos resultados sugeriram que cada amostra responde as diferentes situações de acordo com seus determinantes de virulência e resistência. / <i>Enterococcus faecium</i> has emerged as an important pathogen related to the scenario of the hospitalar infections, particularly strains bearing characteristics of multidrug resistance. Despite being identified as the etiological agents in various infections, their virulence traits remain unclear. However, it is known that the ability to form biofilms may be implicated as one of the attributes capable of promoting the pathogenic role of these microorganisms. Therefore, this study aimed to investigate the ability of biofilm formation by two strains of <i>E. faecium</i>: SS-1274 (derived from the type strain) and CL-6729 (belonging to a clonal complex globally dispersed). Quantitative analysis of biofilm formation were carried out by using the semiquantitative crystal violet assay after 24h and 72 h of incubation in poliestirene microtiter plates. Growth curves were obtained for biomass quantification by crystal violet assay after a range of incubation period from 2h to 74 h. The influence of subinhibitory concentrations (subMICs) of ampicillin, gentamicin and vancomycin in the biofilm formation of <i>E. faecium</i> is further characterized in assays for quantification of biomass. The presence of DNA and protein in extracellular polymeric substance (EPS) was evaluated by detachment assays and by fluorimetry. The architecture, spatial distribution and reaction against the fluorochromes Syto9 (DNA stain) and Sypro Ruby Protein (protein stain) were observed by confocal laser scanning microscopy (CLSM). Proteomic analysis was evaluated by polyacrylamide gel electrophoresis in the presence of sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE) and by ESI-Q-TOF mass spectrometry. Our results showed that the multidrug resistance strain (CL-6729) formed greater biomass than the reference strain (SS-1274) at the different periods. The growth curve analyses suggest different stages during the process of maturation of these structures. Despite the lower amount of biomass of SS-1274, the profile of the growth curve, during the period measured, was similar to CL-6729. The analysis of extracellular polymeric substance by confocal microscopy and quantitative assays revealed that protein appears to be an important constituent for the biofilms constituition of both strains. However biofilms formed in the presence of antimicrobials, especially those formed in the presence of of CMI and during 24h seem to suffer changes in the constitution. The results for mass spectrometry suggest that biofilm cells of <i>Enterococcus faecium</i> can also be metabolically active because the identification of a considerable number of proteins related to the metabolism and cell division, similarly to planktonic cells. However, further investigations are needed to quantify the differences related to its expression.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseFPV.pdf: 1288045 bytes, checksum: b356eeb79ac01761862715bac11d9f18 (MD5) Previous issue date: 2005-04-15 / In relation to many types of diets, soybean has been researched as a possible cohelping resource in the treatment of diverse pathologies. Therefore, the objective of this current work was to investigate the manifestation of a new soybean fermented product with added Enteroccocus Faecium and Lactobaccilus Jugurti on the lipid metabolism of male Wistar rats, aged approximately 3 months and weighing between 220-240 grams. They were divided into four experimental groups and treated with different types of diets: Standard diet C; Standard diet associated to the fermented product CPF 1ml/day/rat); Hypercholesterolemic diet associated to the Fermented Product HPF; Hypercholesterolemic diet H. The rats were maintained sedentary throughout the entire experimental period. After 08 weeks of treatment they were slaughtered, separating and weighing the plasma, the white retroperitoneal adipose tissues RET and epididimal EPI, the brown interescapular adipose tissue TAM, gastrocnemic muscle GAST and liver FIG. These were stored in a freezer at -20oC for biochemical and morphological analysis. The results demonstrated that the soybean fermented product diminished body weight gain in rats submitted to the high rate cholesterol diet as well as the standard diet. Most of the evidence proved that the soybean fermented product diminished the lipid synthesis, adipose areas and diameter, increased lipololysis, diminished the fat content (in some situations) and the RET and EPI adipose tissues, mainly when the animals were submitted to a hypercholesterolemic diet. Furthermore, it was observed that this product reduced the fat content, lipid synthesis and FIG weight, even when the animals were submitted to a high rate cholesterol diet. Another effect that was observed of the soybean fermented product was the diminishing of the fat content in GAST. Moreover, when the product was administered in the hypercholesterolemic group, it increased the fat content and reduced the lipid synthesis in TAM in relation to the H group. It can be suggested that administering the soybean fermented product can be a possible co-helper in reducing adiposity, in preventing hepatic esteatosis and in controlling body weight. / Em relação aos vários tipos de dietas utilizadas, a soja tem sido pesquisada como um possível recurso coadjuvante no tratamento de diversas patologias. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi investigar a ação de um novo produto fermentado de soja acrescido do Enteroccocus Faecium e do Lactobaccilus Jugurti sobre o metabolismo lipídico em ratos submetidos a uma dieta enriquecida com colesterol. Para isto, ratos machos da linhagem Wistar, com idade aproximada de 3 meses, pesando entre 220-240 gramas, foram divididos em quatro grupos experimentais, tratados com diferentes tipos de dieta: Dieta padrão - C; Dieta padrão associada ao produto fermentado - CPF, (1 ml/dia/rato); Dieta Hipercolesterolêmica associada ao Produto Fermentado - HPF; Dieta Hipercolesterolêmica - H. Os ratos foram mantidos sedentários durante todo o período experimental. Após 08 semanas de tratamento foram sacrificados, sendo o plasma, os tecidos adiposos brancos retroperitoneal - RET e epididimal - EPI, o tecido adiposo marrom interescapular - TAM, músculo gastrocnêmio - GAST e o fígado - FIG separados, pesados e estocados em freezer a - 20o C para as análises bioquímicas e morfológicas. Os resultados demonstraram que o produto fermentado de soja diminuiu o ganho de peso corporal em ratos submetidos tanto à dieta com alto teor de colesterol, assim como a dieta padrão. A maioria das evidências demonstraram que o produto fermentado de soja diminuiu a síntese lipídica, área e o diâmetro dos adipócitos, aumentou a lipólise, diminuiu o conteúdo de gordura (em algumas situações) e o peso dos tecidos adiposos RET e EPI, principalmente quando os animais foram submetidos a uma dieta hipercolesterolêmica. Além disso, foi observado que este mesmo produto reduziu o conteúdo de gordura, a síntese lipídica e peso do FIG, mesmo quando os animais foram submetidos a uma dieta com alto teor de colesterol. Outro efeito observado do produto fermentado soja foi à diminuição do conteúdo de gordura no GAST. Ademais o produto quando administrado no grupo hipercolesterolêmico aumentou o conteúdo de gordura e reduziu a síntese lipídica no TAM em relação ao grupo H. Pode-se sugerir que a administração do produto fermentado de soja pode ser um possível coadjuvante na redução da adiposidade, na prevenção da esteatose hepática e no controle de peso corporal.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / <i>Enterococcus faecium</i> tem se destacado no cenário das infecções hospitalares, particularmente, amostras portadoras de características de multirresistência. Apesar de serem responsabilizados como agentes etiológicos em diferentes quadros clínicos, fatores associados a patogênese das infecções ainda não estão esclarecidos. Entretanto, sabe-se que a capacidade de formação de biofilmes pode ser responsabilizada como um dos atributos capazes de promover o papel patogênico desses microrganismos. Assim sendo, este estudo se propôs a investigar a capacidade de formação de biofilmes por duas amostras de <i>E. faecium</i>: SS-1274 (derivada da amostra tipo da espécie) e CL-6729 (multirresistente e pertencente a um complexo clonal globalmente disperso). As amostras foram caracterizadas fenotipica e genotipicamente para confirmação da identificação, determinação da susceptibilidade a 17 antimicrobianos, caracterização da concentração mínima inibitória para ampicilina, gentamicina e vancomicina, determinação do genótipo vanA e detecção de genes associados a expressão dos genes asa1, cylA, esp, gelE e hyl. A análise quantitativa da formação por 24h e 72h dos biofilmes foi realizada por metodologia do cristal violeta, em placas de microtitulação de poliestireno. Foram construídas curvas de formação pela avaliação da DO570nm das preparações coradas por cristal violeta em períodos de tempo de 2h a 74h. A influência de subCMIs de ampicilina, gentamicina e vancomicina na formação de biofilmes de <i>E. faecium</i> foi também caracterizada em ensaios de quantificação da biomassa. A presença de DNA e proteínas foi avaliada em ensaios de destacamento e por fluorimetria. A arquitetura, distribuição espacial e reação aos fluorocromos Syto9 e SYPRO Ruby Protein foram evidenciadas por microscopia confocal de varredura a laser. Análises proteômicas através da avaliação por SDS-PAGE e por ESI-Q-TOF também foram empregadas para avaliação de biofilmes versus crescimento planctônico. Nossos resultados demonstraram que a amostra CL-6729 apresentou uma maior biomassa nos tempos analisados. Apesar da menor quantidade de biomassa da amostra SS-1274, o perfil da curva de formação foi semelhante a CL-6729. As análises da matriz por ensaios quantitativos e microscopia confocal revelaram que proteína parece ser um importante constituinte para ambas as amostras, entretanto biofilmes formados na presença de da CMI e durante 24h, parecem sofrer alterações na constituição. Os resultados relativos às espectrometrias de massa sugerem que células de biofilmes de <i>E. faecium</i> podem também estar metabolicamente ativas, devido a identificação de um considerável número de proteínas relacionadas ao metabolismo e divisão celular, similarmente às células planctônicas. No entanto, investigações complementares são necessárias para quantificar as diferenças relacionadas a sua expressão. Foi observado que ambas as amostras independente das variações fenotípicas e genotípicas são capazes de formar biofilmes maduros exibindo constituição e arquitetura similares. Entretanto, nossos resultados sugeriram que cada amostra responde as diferentes situações de acordo com seus determinantes de virulência e resistência. / <i>Enterococcus faecium</i> has emerged as an important pathogen related to the scenario of the hospitalar infections, particularly strains bearing characteristics of multidrug resistance. Despite being identified as the etiological agents in various infections, their virulence traits remain unclear. However, it is known that the ability to form biofilms may be implicated as one of the attributes capable of promoting the pathogenic role of these microorganisms. Therefore, this study aimed to investigate the ability of biofilm formation by two strains of <i>E. faecium</i>: SS-1274 (derived from the type strain) and CL-6729 (belonging to a clonal complex globally dispersed). Quantitative analysis of biofilm formation were carried out by using the semiquantitative crystal violet assay after 24h and 72 h of incubation in poliestirene microtiter plates. Growth curves were obtained for biomass quantification by crystal violet assay after a range of incubation period from 2h to 74 h. The influence of subinhibitory concentrations (subMICs) of ampicillin, gentamicin and vancomycin in the biofilm formation of <i>E. faecium</i> is further characterized in assays for quantification of biomass. The presence of DNA and protein in extracellular polymeric substance (EPS) was evaluated by detachment assays and by fluorimetry. The architecture, spatial distribution and reaction against the fluorochromes Syto9 (DNA stain) and Sypro Ruby Protein (protein stain) were observed by confocal laser scanning microscopy (CLSM). Proteomic analysis was evaluated by polyacrylamide gel electrophoresis in the presence of sodium dodecyl sulfate (SDS-PAGE) and by ESI-Q-TOF mass spectrometry. Our results showed that the multidrug resistance strain (CL-6729) formed greater biomass than the reference strain (SS-1274) at the different periods. The growth curve analyses suggest different stages during the process of maturation of these structures. Despite the lower amount of biomass of SS-1274, the profile of the growth curve, during the period measured, was similar to CL-6729. The analysis of extracellular polymeric substance by confocal microscopy and quantitative assays revealed that protein appears to be an important constituent for the biofilms constituition of both strains. However biofilms formed in the presence of antimicrobials, especially those formed in the presence of of CMI and during 24h seem to suffer changes in the constitution. The results for mass spectrometry suggest that biofilm cells of <i>Enterococcus faecium</i> can also be metabolically active because the identification of a considerable number of proteins related to the metabolism and cell division, similarly to planktonic cells. However, further investigations are needed to quantify the differences related to its expression.

Introdução. As Repetições Palindrômicas Curtas Agrupadas e Regularmente Interespaçadas (CRISPRs) são DNAs que consistem de repetições de nucleotídeos. Existem 3 tipos: CRISPR1-CAS, CRISPR3-CAS e CRISPR2. Os bacteriófagos são partículas virais que infectam bactérias. Os bacteriófagos SAP6, IME-EF1, BC-611, VD-13 e F4 são encontrados em E. faecalis assim como FL1ABC, FL2AB, FL3AB e FL4A. Objetivo. Identificar e caracterizar as classes de CRISPRs e bacteriófagos de E. faecalis e E. faecium isoaldos de amostras alimentares, clínicas e fezes de animais. Materiais e métodos. Foram usadas DNA de 153 isolados, sendo 98 de E. faecalis e 55 de E. faecium. A técnica de detecção foi a PCR utilizando iniciadores para os genes CRISPR1-Cas, CRISPR2, CRISPR3-cas e bacteriófagos, seguido por electroforese em gel de agarose. Resultados. Para E. faecalis foram detectadas 58 isolados que amplifacaram para o gene CRISPR1-Cas; 87 para CRISPR2 e 13 para CRISPR3-Cas. Para E. faecium foram detectadas 4 isolados positivos para o gene CRISPR1-Cas; 18 para CRISPR2 e 1 para CRISPR3-CAS. O bacteriófago FL2ABfoi detectado em 13 isolados de E. faecalis; o bacteriófago FL3AB em 13 isolados de E. faecalis e o FL4A em 28 isolados de E. faecalis. Conclusão. Neste estudo nos encontramos diferentes proporções e distribuições dos genes CRISPRs em E. faecalis e E. faecium. O bacteriófago FL4A apresentou-se como o mais frequente entre os bacteriófagos avalados. / Introduction. The CRISPR are small portions of DNA consisting of nucleotide repeats. There are three types of CRISPRs recognized: CRISPR-associated genes cas: CRISPR1-CAS and CRISPR3-CAS and a orphan locus lacking cas genes: CRISPR2. Bacteriophages are viral particles that infect bacterial. The bacteriophages SAP6, IME-EF1, BC-611 and F4 are found in E. faecalis as well as FL1ABC, FL2AB, FL3AB, FL4A. Objectivy: To Identify and to characterize CRISPRs genes and bacteriophage genes in E. faecalis and E. faecium isolated from food, clinical and animal fecal samples. Materials and methods. A total of 153 DNA samples were used, 98 from E. faecalis and 55 from E. faecium. The PCR technique using primers was used to detect the genes CRISPR1-Cas, CRISPR2, CRISPR3-cas and bacteriophages, followed the agarose gel electrophoresis. Results. To E. faecalis was detected 58 isolates that amplified the CRISPR1-Cas genes, 87 to CRISPR2 and 13 to CRISPR3-Cas. To E. faecium was detected 4 isolates positive to CRISPR1-Cas gene, 18 to CRISPR2 e 1 to CRISPR3-CAS. The FL2AB bacteriophage was detected in 13 isolates of E. faecalis; the FL3AB bacteriophage in 13 isolates of E. faecalis and the FL4A in 28 isolates of E. faecalis. Conclusion. In this work, we found out different proportions and distributions of CRISPRs genes in E. faecalis e E. faecium. The FL4A bacteriophage showed a high frequency among the bacteriophages tested.

Trensums Food AB är ett företag som producerar ett flertal olika livsmedelsprodukter åt flera globala varumärksägare. Några produkter som produceras av företaget är olika såser bl.a. BBQ-sås och vaniljsås. Genom att tillsätta syra i såserna så att pH blir &lt; 4,2 anses produkterna säkra. Uppdragsgivare till produkten menar att det är viktigt att använda ättiksyra istället för andra syror och att inte pH är helt avgörande för en säker produkt. Syftet med projektet var att undersöka hur effektiva olika organiska svaga syror är på att avdöda olika mikroorganismer i BBQ-sås och mjölkbaserad sås. Det som främst påverkar den antimikrobiella aktiviteten hos en syra är mängden odissocierad syra. Mängden odissocierad syra i produkten beror på syrans pKa-värde, totala halten av syran och det omgivande pH i produkten. pH mättes i produkterna för att se om pH är avgörande för avdödningen eller om det är valet av syra som är viktigast. Syrorna som undersöktes var ättiksyra, citronsyra och mjölksyra på mikroorganismerna Candida utilis, Bacillus subtilis och Enterococcus faecium. BBQ-sås och mjölkbaserad sås tillverkades i olika batcher med viktprocenten 0, 0,12, 0,24 samt 0,36 % av respektive syra. I varje prov ympades respektive mikroorganism till en uppskattad halt på ca 103 CFU/ml. Efter 5 dagars inkubation i rumstemperatur mättes halten CFU/ml. Ättiksyra var den syra som var effektivast både i BBQ-såsen och den mjölkbaserade såsen. I BBQ-såsen reducerade ättiksyra med samtliga viktprocent alla mikroorganismerna till under minsta detektionsgränsen (&lt; 101 CFU/ml). Citronsyra och mjölksyra reducerade enbart E.faecium och B.subtilis till under minsta detektionsgränsen. I den mjölkbaserade såsen som även var kontaminerad av andra mikroorganismer var det bara ättiksyra som synligt reducerade halten med ökad viktprocent syra. pH var lägre i BBQ-såsen med citronsyra och mjölksyra än med ättiksyra. Detta visar på att avdödningen av de undersökta mikroorganismerna inte bara är pH-beroende utan också påverkas av vilken syra som används. Den antimikrobiella aktiviteten beror på syrans pKa-värde och därmed mängden odissocierad syra. Ättiksyra har ett högre pKa-värde än både citronsyra och mjölksyra och befinner sig i högre utsträckning i odissocierad tillstånd än de övriga syrorna i båda produkterna. / Trensums Food AB is a company that produces a wide variety of food products to different global trademark owners. Some of the products produced by Trensums Food AB are different kind of sauces, including BBQ-sauce and vanilla sauce. The sauce products are considered safe when an acid is added resulting in a pH &lt; 4,2. The outsource of the company claims that it is important to use acetic acid instead of other kind of acids and that the pH is not crucial to consider the product safe. The goal of this project was to investigate how effectively different kind of organic acids work against microorganisms in the BBQ-sauce and milk-based sauce produced by Trensums Food AB. The main antimicrobial activity of an acid depends on its concentration of undissociated acid. Which further depends on the pKa-value of the acid and also the surrounding pH in the product. The pH was measured in the products to see if pH is critical for the antimicrobial activity or if the choice of acid is more important. The acids used in this project was acetic acid, citric acid and lactic acid and they were tested on Candida utilis, Bacillus subtilis and Enterococci faecium. BBQ-sauce and milk-based sauce were made in different batches containing 0, 0,12, 0,24 and 0,36 weight percent of respective acid. Each batch contained 103 CFU/ml of respective microorganism. After 5 days of incubation a viable count was performed. The acetic acid was the most effective acid in both type of sauces, reducing all microorganisms below the detection limit (&lt; 101 CFU/ml) in the BBQ-sauce within all batches. The citric acid and lactic acid reduced only E.faecium and B.subtilis to a value below the lowest level of detection. In the milk-based sauce, which was contaminated with additional microorganisms, it was only the acetic acid that showed an increasing effect of antimicrobial activity with increasing concentration of acid. The pH was lower in the BBQ-sauce when using citric acid and lactic acid compared to when using acetic acid. Thus concluding that the antimicrobial activity of the selected microorganisms is not solely dependent on the level of pH but additionally the type of acid being used. The acetic acid has a higher pKa-value compared to the other acids and is therefore to a higher extent in a undissociated state.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-12-08Bitstream added on 2014-06-13T19:01:16Z : No. of bitstreams: 1 bedani_r_dr_arafcf.pdf: 613120 bytes, checksum: d031cc68ff60a01cf7493fa3bed1a364 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O objetivo desse trabalho foi investigar a influência do consumo do “iogurte” de soja fermentado com Enterococcus faecium CRL 183 sobre o perfil e atividade metabólica da microbiota intestinal de animais e humanos, de maneira a evidenciar prováveis mecanismos de ação indireta na diminuição do risco de ocorrência de câncer de cólon. Os ratos foram divididos em 6 grupos (n=10): I – animais que receberam ração à base de caseína; II – animais que receberam ração à base de carne + 3 mL/kg peso corpóreo/dia do produto não fermentado; III – animais que receberam ração à base de carne + 3 mL/kg peso corpóreo/dia de E. faecium ; IV – animais que receberam apenas ração à base de carne; V – animais que receberam ração à base de carne + 3 mL/kg peso corpóreo/dia de “iogurte” de soja esterilizado; VI – animais que receberam ração à base de carne + 3 mL/kg peso corpóreo/dia do “iogurte” de soja. Os animais consumiram os diferentes produtos (“iogurte” de soja, “iogurte” de soja esterilizado, suspensão de E. faecium e produto não fermentado) durante 4 semanas do período experimental. Foram estudadas a capacidade de aderência de Enterococcus faecium CRL 183 ao cólon e de sobrevivência nas fezes de ratos, além das determinações de pH, concentração de amônia e composição da microbiota fecal. A sobrevivência desse microrganismo no trato gastrointestinal foi verificada por técnicas de isolamento e identificação a partir do cólon e das fezes dos animais que receberam este microrganismo na forma de produto fermentado (“iogurte” de soja) e cultivo puro. Para a confirmação da espécie E. faecium foi utilizada a técnica de PCR. A composição da microbiota fecal foi verificada realizando a enumeração dos seguintes grupos de bactérias: aeróbios e anaeróbios totais, Enterococcus sp, Lactobacillus spp, Bifidobacterium spp... / The aim of this study was to investigate the effect of the consumption of soy yoghurt, fermented with Enterococcus faecium CRL 183, on composition and metabolic activity of intestinal microbiota of animals and humans, and to verify potential mechanisms involved in the anti-carcinogenic action. The rats were placed in 6 groups, distinguished by their diets: for 90 days, group I was given a standard casein-based rodent feed and groups II-VI, the beef-based feed. From the 30th day, groups II, III, V and VI also received the following products: II) unfermented soy product; III) pure suspension of E. faecium CRL 183; V) sterilized soy yoghurt; VI) soy yoghurt. The animals received the different products during 4 weeks. The capacity of E. faecium to adhere on colon and to survive gastrointestinal passage was determined by monitoring rat faecal samples and colon by microbiological and molecular analysis. Species confirmation of E. faecium was performed by PCR amplification. The composition of the faecal microbiota was determined by counting culturable bacteria in the following groups: total aerobes and anaerobes, Enterococcus spp. Enterobacteria, Clostridium spp., Bacteroides spp., Lactobacillus spp. and Bifidobacterium spp. Enzymatic activities of b-galactosidase, b-glucosidase and b-glucuronidase were verified in rat faecal samples. Nitroreductase and azoreductase activities were determined in the caecal contents of mice. The culture of E. faecium CRL 183 was tested for antimicrobial substance production by spot-on-the-lawn assay. Forty healthy adult volunteers who were between 40 and 50 years old participated of this study. The subjects consumed 100 mL/day of soy yoghurt (group F) or unfermented product (group P) during 4 weeks. In feces of volunteers enzymatic activities of bgalactosidase, b-glucosidase and b-glucuronidase were verified. The administration of soy yoghurt and pure suspension... (Complete abstract click electronic access below)

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2003. / Härtill 5 uppsatser.

Master of Science / Food Science Institute / Randall K. Phebus / With the implementation of the Food and Drug Administration’s Food Safety Modernization Act, the food industry must scientifically verify that current production processes provide sufficient protection against pathogens. This study was conducted to validate a simulated commercial baking process for hamburger buns to control Salmonella spp. contamination and to determine the appropriateness of using non-pathogenic surrogates (Enterococcus faecium ATCC 8459 or Saccharomyces cerevisiae) for in-plant process validation studies. Wheat flour was separately inoculated (~6 log CFU/g) with three Salmonella serovars (Typhimurium, Newport or Senftenberg) or E. faecium. Dough was formed, proofed, and baked to mimic commercial manufacturing conditions. Non-inoculated dough was used to evaluate S. cerevisiae (Baker’s yeast) survival during baking. Buns were baked for 9, 11 and 13 min in a conventional oven set at 218°C, with internal bun temperature profiles recorded. Salmonella serovars and S. cerevisiae were reduced by >6 log[subscript]10 CFU/g after 9 min of baking. E. faecium was detected by direct plating after 11 min of baking but not after 13 min. After 13 min of baking, all three target organisms were eliminated (>6 log CFU/g reduction) in the buns. D- and z-values of Salmonella spp. (3-serovar cocktail), E. faecium, and S. cerevisiae in bun dough were also determined. D-values of Salmonella spp. and E. faecium during heating of dough were 28.64 and 133.33, 7.61 and 55.67, and 3.14 and 14.72 min at 55, 58 and 61°C, respectivly; whereas, D-values of S. cerevisiae were 18.73, 5.67 and 1.03 min at 52, 55 and 58°C, respectivly. The z-values of Salmonella spp., E. faecium and S. cerevisiae were 6.58, 6.25 and 4.74ºC, respectively. E. faecium demonstrated greater thermal resistance than Salmonella spp. and S. cerevisiae, making it an appropriate (and conservative) surrogate to establish thermal process lethality in the validation of commercial baking operations. The low thermal tolerance of S. cerevisiae relative to Salmonella limits its usefulness as a potential surrogate for process validations.

Orientador: Elizeu Antonio Rossi / Banca: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Daniela Cardoso Umbelino Cavallini / Banca: Susana Marta Isay Saad / Banca: Elaine Cristina Pereira de Martinis / Resumo: O objetivo desse trabalho foi investigar a influência do consumo do "iogurte" de soja fermentado com Enterococcus faecium CRL 183 sobre o perfil e atividade metabólica da microbiota intestinal de animais e humanos, de maneira a evidenciar prováveis mecanismos de ação indireta na diminuição do risco de ocorrência de câncer de cólon. Os ratos foram divididos em 6 grupos (n=10): I - animais que receberam ração à base de caseína; II - animais que receberam ração à base de carne + 3 mL/kg peso corpóreo/dia do produto não fermentado; III - animais que receberam ração à base de carne + 3 mL/kg peso corpóreo/dia de E. faecium ; IV - animais que receberam apenas ração à base de carne; V - animais que receberam ração à base de carne + 3 mL/kg peso corpóreo/dia de "iogurte" de soja esterilizado; VI - animais que receberam ração à base de carne + 3 mL/kg peso corpóreo/dia do "iogurte" de soja. Os animais consumiram os diferentes produtos ("iogurte" de soja, "iogurte" de soja esterilizado, suspensão de E. faecium e produto não fermentado) durante 4 semanas do período experimental. Foram estudadas a capacidade de aderência de Enterococcus faecium CRL 183 ao cólon e de sobrevivência nas fezes de ratos, além das determinações de pH, concentração de amônia e composição da microbiota fecal. A sobrevivência desse microrganismo no trato gastrointestinal foi verificada por técnicas de isolamento e identificação a partir do cólon e das fezes dos animais que receberam este microrganismo na forma de produto fermentado ("iogurte" de soja) e cultivo puro. Para a confirmação da espécie E. faecium foi utilizada a técnica de PCR. A composição da microbiota fecal foi verificada realizando a enumeração dos seguintes grupos de bactérias: aeróbios e anaeróbios totais, Enterococcus sp, Lactobacillus spp, Bifidobacterium spp... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to investigate the effect of the consumption of soy yoghurt, fermented with Enterococcus faecium CRL 183, on composition and metabolic activity of intestinal microbiota of animals and humans, and to verify potential mechanisms involved in the anti-carcinogenic action. The rats were placed in 6 groups, distinguished by their diets: for 90 days, group I was given a standard casein-based rodent feed and groups II-VI, the beef-based feed. From the 30th day, groups II, III, V and VI also received the following products: II) unfermented soy product; III) pure suspension of E. faecium CRL 183; V) sterilized soy yoghurt; VI) soy yoghurt. The animals received the different products during 4 weeks. The capacity of E. faecium to adhere on colon and to survive gastrointestinal passage was determined by monitoring rat faecal samples and colon by microbiological and molecular analysis. Species confirmation of E. faecium was performed by PCR amplification. The composition of the faecal microbiota was determined by counting culturable bacteria in the following groups: total aerobes and anaerobes, Enterococcus spp. Enterobacteria, Clostridium spp., Bacteroides spp., Lactobacillus spp. and Bifidobacterium spp. Enzymatic activities of b-galactosidase, b-glucosidase and b-glucuronidase were verified in rat faecal samples. Nitroreductase and azoreductase activities were determined in the caecal contents of mice. The culture of E. faecium CRL 183 was tested for antimicrobial substance production by spot-on-the-lawn assay. Forty healthy adult volunteers who were between 40 and 50 years old participated of this study. The subjects consumed 100 mL/day of soy yoghurt (group F) or unfermented product (group P) during 4 weeks. In feces of volunteers enzymatic activities of bgalactosidase, b-glucosidase and b-glucuronidase were verified. The administration of soy yoghurt and pure suspension... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor