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Perfil enzimático antioxidante en habitantes de Nueva Cajamarca – San MartínAhumada Dávila, Obed Jonatán, Bardales Arroyo, Michael Jaime January 2011 (has links)
Se determinó los niveles de actividad de las enzimas antioxidantes: Superóxido dismutasa (SOD) y catalasa (CAT); y la concentración de malondialdehído (MDA) como un indicador de la peroxidación lipídica, en eritrocitos de 48 personas aparentemente sanas: 24 residentes de Nueva Cajamarca (Región San Martín) y 24 residentes de Lima.
En los sujetos de Nueva Cajamarca se encontró mayores niveles de actividad de las enzimas: catalasa (0,61 0,10 k CAT / g Hb) en relación con los de Lima (0,57 0,16 k CAT / g Hb), (p < 0,025) y superóxido dismutasa (2142,00 2685,07 U SOD / g Hb) que en los de Lima (1536,62 594,18 U SOD / g Hb), (p = NS) y mayor concentración de malondialdehído (11,55 4,68 ηmol MDA / g Hb) que los obtenidos en Lima (11,11 3,99 ηmol MDA / g Hb), (p = NS).
-- Palabras clave: superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT), alondialdehído (MDA), peroxidación lipídica. / -- It was determined the activity levels of antioxidant enzymes: Superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT), and the concentration of malondialdehyde (MDA) as an indicator of lipid peroxidation in erythrocytes of 48 apparently healthy people: 24 residents of Nueva Cajamarca (Region San Martin, 856 m above sea level) and 24 residents of Lima (150 m above sea level).
In Nueva Cajamarca subjects found higher levels of activity of the enzymes: catalase (0.61 0.10 k CAT / g Hb) in relation to those of Lima (0.57 0.16 k CAT / g Hb), (p <0.025) and superoxide dismutase (2142.00 2685.07 U SOD / g Hb) than in Lima (1536.62 594.18 U SOD / g Hb) (p = NS) and higher concentration of malondialdehyde (11.55 4.68 ηmol MDA / g Hb) than those obtained in Lima (11.11 3.99 ηmol MDA / g Hb) (p = NS)
-- Key words: superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), malondialdehyde (MDA), lipid peroxidation.
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Determinación de los niveles séricos de enzimas cardíacas en perros adultos con enfermedad cardiovascular y aparentemente normalesPino Valdivia, Oswaldo January 2006 (has links)
Para evaluar su uso como predictor de daño miocárdico en insuficiencia cardíaca se determinaron los niveles séricos de las enzimas Asparto aminotransferasa (AST), Creatina fosfokinasa (CK), isoenzima Creatina fosfokinasa – MB (CK-MB) y Lactato Deshidrogenasa (LDH) en perros adultos con enfermedad cardiovascular (ECV) y aparentemente sanos. Fueron estudiados 25 animales sin distinción de sexo y raza, Los cuales se dividieron en 2 grupos: 10 animales aparentemente sanos (G1) y 15 animales con enfermedad Cardiovascular (G2). Se muestrearon sueros de ambos grupos y se analizaron por espectrofotometría. Los valores obtenidos fueron procesados mediante la prueba estadística “el Test de la t de student para comparar dos muestras independientes”. Los resultados indican que los niveles séricos de la Isoenzima CK-MB tuvieron diferencia estadística significativa (p menor a 0.05) a favor de los animales con ECV; y el resto de enzimas (AST, CK Y LDH) no obtuvieron diferencia estadística significativa. Se concluye que la CK-MB puede servir como predictor de daño miocárdico progresivo en la insuficiencia cardíaca canina.
Palabras Clave: Asparto aminotransferasa (AST), Creatina fosfokinasa (CK), isoenzima Creatina fosfokinasa – MB (CK-MB), Lactato Deshidrogenasa (LDH), Enfermedad cardiovascular, Perros adultos. / --- Serum levels of the enzymes Asparte amino transferase ( AST ), Creatine kinase ( CK ), the MB fraction of Creatine kinase ( CK - MB ) and Lactate Dehydrogenase ( LDH ) were measured in adult dogs with cardiovascular illness and apparently healthy; they could evaluate their use as predictor of myocardial damage in heart failure. 25 animals irrespective of sex and race were studied, them as they split in 2 groups: 10 apparently healthy animals (G1) and 15 animals with illness Cardiovascular (G2). We sampled serums in the 2 groups and they were examined for spectrophotometry. The obtained values were analyzed by means of the statistical test the Test of student's t to compare two independent samples. The results indicate than levels of CK-MB had statistical significant difference (p menor a 0.05) in favor to dogs with cardiovascular illness. The rest of enzymes (AST, CK and LDH) did not obtain statistical significant difference. We Conclude than CK- MB can serve as predictor of progressive myocardial damage in the heart failure.
Key Words: Asparte amino transferase (AST), Creatine kinase (CK), the MB fraction of Creatine kinase (CK - MB) and Lactate Dehydrogenase (LDH), cardiovascular illness, Adult dog.
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Desempeño de cinco métodos fenotípicos para la detección de metalobetalactamasas en bacilos gram negativos tipificados genotípicamenteYauri Condor, Katherine Silvia January 2016 (has links)
Evalúa el desempeño de cinco métodos fenotípicos para la detección de metalobetalactamasas (MBL) en bacilos gram negativos. Es un estudio observacional, descriptivo y de corte transversal. Utiliza 100 aislamientos de bacilos gram negativos tipificados genotípicamente en estudios preliminares. Los métodos que se evalúan son: Prueba de discos combinados con inhibidor (EDTA), Prueba de sinergia de doble disco, Test de Hodge Modificado (cepa E. coli ATCC 25922), Test de Hodge Modificado (cepa K. pneumoniae ATCC 700603) y Blue Carba Test. De los 32 aislamientos productores de MBL, 27 son del tipo IMP, 3 del tipo VIM y 2 del tipo NDM. De los 68 aislamientos no productores de MBL, 66 son aislamientos no poseedores de MBL, 1 del tipo CTX + impermeabilidad y 1 aislamiento del tipo. El método de discos combinados con inhibidor y el método de sinergia de doble disco son los más específicos (100%) y el Blue Carba Test el más sensible (100%). Respecto a los discos de EDTA se encuentra un índice Kappa de 1.0 entre los discos comerciales y los discos in-house, es decir una concordancia perfecta. En conclusión, los cinco métodos presentaron un buen desempeño para la detección de MBL. Se recomienda la implementación de un método fenotípico para la detección de MBL en los laboratorios clínicos de rutina. El método debe ser elegido según costo-beneficio de acuerdo a las características de la cepa MBL prevalente.
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Identificación de genes de Metalo β-lactamasas en Pseudomonas aeruginosa de aislados clínicos hospitalarios 2016Salvador Luján, Gina Nilda, Salvador Luján, Gina Nilda January 2017 (has links)
Identifica la prevalencia de genes que codifican carbapenemasas de tipo metalo β-lactamasas (MBL) en aislados clínicos de P. aeruginosa. Analiza 76 aislados clínicos de P. aeruginosa resistentes a Ceftazidima y “no sensibles” (intermedio o resistentes) a Imipinem y/o Meropem colectados en el Hospital Militar Central de enero a setiembre del 2016. Muestras de secreciones respiratorias, heridas, orinas y hemocultivos de pacientes hospitalizados son procesadas en el Laboratorio de Microbiología. Determina la sensibilidad antimicrobiana por el método de disco de difusión según los criterios del Clinical and Laboratory Standards Institute. Realiza la detección fenotípica de MBL por el test de sinergia de doble disco con imipenem, meropenem y EDTA. La detección genotípica se realiza amplificando por PCR multiplex, los genes blaIMP y blaVIM, mientras que para el gen blaNDM se hizo PCR convencional. Obtiene fenotípicamente 25 de 76 pruebas positivas para MBL, 24(31.58%) de las cuales se confirmaron genéticamente, encontrando el gen blaIMP (23/24, 95.83%) y el gen blaVIM (1/24, 4.17%). La sensibilidad de la prueba fenotípica es del 100% y la especificidad del 98%. Concluye que el 31.58% de los aislamientos clínicos de P. aeruginosa recuperados de pacientes hospitalizados en el HMC, presentan MBL, siendo el gen blaIMP el más prevalente. / Tesis
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Recombinação genética e produção de celulases em Trichoderma pseudokoningii var. Rifai / not availableFurlaneto, Marcia Cristina 31 August 1989 (has links)
No presente trabalho foram realizados estudos genéticos em Trichoderma pseudokoningii e verificada a atividade celulolítica da linhagem selvagem, mutante e recombinantes obtidos de heterocários. Com o objetivo de se obter mutantes auxotrófico, testou-se dois agentes mutagênicos, a luz ultravioleta e o ácido nitroso. Através de irradiação com luz ultravioleta foram obtidos dezenove mutantes autotróficos simples e dezoito com dupla deficiência, e dois mutantes morfológicos com ácido nitroso. Sete mutantes com dupla marcas autotróficas e morfológicas foram utilizados para a obtenção de heterocários. Colônias recombinantes foram obtidas diretamente dos heterocários em diferentes meios seletivo, sugerindo a ocorrência de parameiose nesta espécie. Colônias protróficas crescidas em MM eram binucleadas e de coloração verde, indicando um sistema não autônomo para a pigmentação de conídios. Estas colônias dicarióticas formaram setores em MC acrescido de benomyl, sugerindo a ocorrência de uma fase diplóide altamente instável e parassexualidade. Foi descrito um método para a obtenção e fusão de protoplastos. Colônias recombinantes foram recuperadas diretamente de produtos de fusão, numa freqüência aproximadamente 1000 vezes superior em relação às obtidas à partir de heterocário. Quanto a atividade celulolítica da linhagem selvagem e mutantes, observou-se que os valores de índices enzimáticos foram diretamente proporcionais ao maior ou menor grau de compactação das colônias. Colônias de linhagem selvagem originadas de protoplastos regenerados apresentaram índices de atividade celulolítica inferiores em relação às colônias originadas de conídios, indicando um efeito negativo da protoplastização sobre a atividade enzimática / In this work genetic studies were carried out in Trichoderma pseudokoningii in order to test the cellulolitic activity in wild and mutant strains and recombinants obtained from heterokaryons. Two mutagenic agents were tested aiming to obtain auxotrophic mutants-Utraviolet light and nitrous acid. Through UV light were obtained 19 simple auxotrophic mutants and 18 double mutants and through nitrous acid two morphological mutants. Seven color mutants carrying two auxotrophic markers were used to get heterokaryons. Recombinant colonies were directly recovered from heterokaryons onto different seletive media, indicating the occurrence of parameiosis. Prototrophic colonies grown in minimal medium were binucleated and green coloured, revealing a non autonomous system for conidia pigmentation. These dikaryotic colonies gave rise to sectors in complete medium plus benomyl suggesting the occurrence of a highly unstable diploid phase and parassexuality. It was described as well a method for protoplasts obtention and fusion. Recombinant colonies were directly recovered from fusion products in a frequency almost 1000 times higher than the recombinants from heterokaryons. For cellulolitic activity in wild and mutant strains it was shown that the enzymatic indexes were directly proportional to the higher or smaller degree of colony compactation. Colonies regenerated from protoplasts of the wild strain showed worst cellulolitic activity than colonies rosen from conidia. This is a negative effect of protoplastization on the cellulolitic activity. Electrophoretic patterns for esterase of the wild and mutant strains showed different profiles according to number and band position. It might be suggested a relation between band patterns and conidia coloration.
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Melhoramento genético e caracterização de mutantes pectinolíticos de Penicillium chrysogenum / not availablePelissari, Francisco Alberto 02 February 2001 (has links)
O presente trabalho teve como objetivo elevar, por meio de mutações, a produção de enzimas pectinolíticas e manter em níveis insignificantes a de celulases na linhagem IFO 4626 de Penicillium chrysogenum. No 1º ciclo de mutação-seleção utilizando radiação ultravioleta foram obtidos mutantes que, selecionados em meio de cultura sólido apresentaram produção de pectinases superior à linhagem original, foram isolados 390 mutantes e destes, os 38 superiores foram reavaliados destacando-se a linhagem M85. Na avaliação em meio de cultura líquido, a M 85, quando comparada à original, apresentou elevação da atividade especifica de PL em torno de 40% cultivada em MMTf e de 20% na atividade especifica de PG, no mesmo meio. Aumento menos expressivo de atividade específica de PL foi encontrado quando cultivou-se a M 85 em MMTf, 10% enquanto que para a atividade específica de PG no mesmo meio não houve mudança significativa. Dando continuidade ao processo de melhoramento, a M 85 foi submetida a um novo ciclo de mutação-seleção por meio do acido nitroso. Foram isolados através de seleção em meio de cultura sólido, 410 novos mutantes. Destes, 8 se destacaram, sendo superior entre eles, a linhagem L 85. Na avaliação em meio de cultura líquido, no MMTf, a L 85 quando comparada à M 85 e a IFO 4626 teve aumentada a atividade específica de PL elevada em torno de 100% e 200% respectivamente; para a atividade especifica de PG, o aumento foi de 15% e 40% com relação a M85 e IFO 4626, respectivamente. A atividade específica de PL da linhagem L 85 cultivada no meio MMTf apresentou aumento em torno de 30% e 40% quando comparada a M85 e IFO 4626, respectivamente. Com relação à atividade especifica de PG da L 85 cultivada no meio MMTf, não houve alteração significativa quando comparada com as linhagens IFO 4626 e M 85 no referido meio / not available
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Balanço de nutrientes e digestibilidade ileal dos aminoácidos de alguns ingredientes, na presença de multi-carboidrase e fitase, usando leitões recém-desmamados / Nutrient balance and ileal amino acids digestibility of some ingredients fed to weaned pigs with or without multi-carbohydrase and phytase suplementationDadalt, Julio Cezar 09 October 2015 (has links)
Na maioria dos estudos de digestibilidade de aminoácidos em suínos usam-se animais de peso igual ou superior a 20 kg, isso se deve a menor dificuldade na implantação de cânulas íleo-cecais e a melhor recuperação pós-cirúrgica na fase do crescimento. No entanto, avaliar ingredientes com leitões mais jovens torna-se importante, visto que há limitações fisiológicas do trato gastrointestinal nesse período que podem afetar o seu desenvolvimento. Assim, 175 leitões desmamados, divididos em 7 ensaios experimentais com 25 animais cada, foram usados para determinar o balanço de nutrientes e da energia, a digestibilidade ileal aparente (AID) e estandardizada (SID) dos aminoácidos (AA) de sete ingredientes usualmente utilizados em dietas de leitões, com ou sem suplementação de multi-carboidrase (MC) e fitase (F). Os leitões foram desmamados aos 23 dias de idade e alojados em gaiolas para estudo de digestibilidade e metabolismo, permanecendo no experimento até os 45 dias de idade. Adaptação, coleta total de fezes e urina ocorreram do 10° ao 20° dia do período experimental e as amostragens do conteúdo ileal se deu ao abate, no 22° dia (45 dias de idade). Foi utilizado o delineamento experimental inteiramente casualisado com 4 tratamentos e cinco repetições. O leitão foi considerado como unidade experimental. As dietas experimentais consistiram de ingrediente teste sem enzimas e combinado a MC, F ou MC + F. Dois tipos de dieta referência foram usados como base para os cálculos do balanço nutricional e os coeficientes de digestibilidades aparente e estandardizada dos aminoácidos. Óxido de cromo (0,3%) foi usado como marcador indigestível nas avaliações dos aminoácidos. A enzima MC apresentava 10% de galactomananase, 10% de xilanase, 10% de β-glucanase, 60% de cevada maltada e 10% de α-galactosidase. A F era proveniente da fermentação de Saccharomyces cerevisiae com atividade de 10.000 FTU/g. Os ingredientes testados foram: farelo de arroz integral, soja integral micronizada, farelo de trigo, quirera de arroz, sorgo, milho e farinha de soja texturizada. Os resultados indicaram efeitos da combinação ingrediente e enzima exógena e as evidencias se deram de acordo com as características bromatológicas de cada um / Most of the studies, involving AA digestibility in pigs are used animals with 20 kg minimal weight or higher than. This is due difficulty to implant a simple T-cannula on distal ileum of younger pigs, besides a better post-surgical recovery in growing phase. However, ingredient evaluations with young pigs become important because there are physiological limitations in gastrointestinal tract that may affect its performance. Thus, 175 weaned pigs, divided into seven experimental trials with 25 animals each, were used to determine the nutrients and energy balance, the apparent (AID) and standardized (SID) ileal digestibility of amino acids (AA) from seven ingredients usually used in pig diets, with or without multi-carbohydrase (MC) and phytase (Phy) supplementation. Weaned piglets at 23 d old were housed in cages to studies digestibility and metabolism, remaining in the experiment until 45 d of age. Pig adaptation to feces and urine collection was 10 to 20 d experimental period and ileal content sampling at slaughter at 22 d (45 d old). A completely randomized experimental design was used with 4 treatments and 5 replicates. The pig was considered as an experimental unit. The experimental diets consisted of test ingredient as the sole source of protein with or without MC, Phy or MC+Phy. Two kind of reference diet were used to calculate the nutrient balance or AID and SID of AA. Titanium dioxide (0.3%) was used as indigestible marker. The MC enzyme had: galactomannanase, 10%; xylanase, 10%; beta-glucanase, 10%; malted barley, 60% and α-galactosidase, 10%. The Phy was obtained from the Saccharomyces cerevisiae fermentation with 10,000 FTU/g activity. The ingredients used were: rice bran, micronized full fat soybean meal, wheat bran, broken rice, sorghum, corn and texturized soybean meal. The results indicated effects from ingredients and enzymes combinations and the evidences occurred according to bromatological characteristics of each one
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Uso de carboidrases em dietas à base de milho e farelo de soja para frangos de cortePasquali, Guilherme Aguiar Mateus. January 2019 (has links)
Orientador: Antonio Celso Pezzato / Resumo: O uso de enzimas que degradam polissacarídeos não-amiláceos (PNAs) em dietas para monogástricos tem sido cada vez mais explorado por nutricionistas, apesar dos mecanismos pelos quais estas enzimas melhoram o valor nutritivo dos alimentos ainda não estarem totalmente esclarecidos. Assim, este estudo foi desenvolvido com o objetivo de evidenciar os principais mecanismos de ação de enzimas que degradam PNAs e o efeito sobre frangos de corte alimentados com dietas à base de milho e farelo de soja. O primeiro experimento, relatado no Capítulo II, foi desenvolvido para avaliar os efeitos da inclusão de diferentes produtos enzimáticos compostos por xilanase e β-glucanase em dietas à base de milho com dois níveis de energia para frangos de corte sobre o desempenho, características intestinais, umidade de cama, incidência de lesões de pododermatite, e parâmetros bioquímicos do sangue. Foram utilizados 1.200 pintos machos, distribuídos em esquema fatorial 2 × 4 (dois níveis de energia × ausência ou inclusão de três diferentes xilanases + β-glucanases). O ganho de peso e a conversão alimentar foram prejudicados pelo fornecimento de dietas de baixa energia (CN; 2.925 kcal/kg na fase inicial e 3.025 kcal/kg na fase de crescimento). O uso de diferentes produtos enzimáticos compostos por xilanase e β-glucanase não afeta o desempenho e a qualidade intestinal de frangos de corte alimentados com dietas à base de milho. O experimento referente ao Capítulo III teve como objetivo avaliar o efeito... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor
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Obtenção de inulinase: recuperação e ampliação de escala / Production of inulinase: recovery and scale-upPessoa Junior, Adalberto 22 September 1995 (has links)
A transferência de oxigênio para o meio, durante o cultivo de Candida kefyr DSM 70106, mostrou ter grandE influência na produção de inulinase extracelular. O KLa (coeficiente volumétrico de transferência de oxigênio) de 43 h-1 foi o que proporcionou a obtenção de atividade enzimática mais elevada (37,5 U.mL-1). Este parâmetro foi utilizado como critério para ampliação de escala do cultivo em biorreator de 15 litros para 300 litros. O volume de meio obtido foi congelado para utilização nos processos seguintes de separação de células e purificação da inulinase. Para isto foram utilizados três processos diferentes, a saber, filtração (microfiltração, diafiltração e ultrafiltração), extração líquido-líquido por micela reversa e cromatografia de troca iônica em leito fluidizado. Durante a separação de células, a membrana de microfiltração tipo HVLP com 0,45 µm de diâmetro de poro foi a que possibilitou a passagem de maior fluxo de filtrado (324 L.h-1.m-2) quando comparada com outras membranas de poros e materiais diferentes. Associado a este fluxo obteve-se ainda a passagem pela membrana de 99% da enzima presente. Foram também estudados diferentes tipos de módulos de filtração. Os filtros rotativos foram os que apresentaram melhores desempenhos, com destaque para o tipo \"Biodruckfilter\". Fluxo de filtrado de 300 L.h-1.m-2 e transmissão de 99% da enzima foram obtidos neste filtro. Os filtros tipo cassete e os tubulares apresentaram desempenhos, em geral, inferior a 50% quando comparados em termos de fluxo de filtrado. O processo de filtração em escala ampliada, realizada no filtro cassete, apresentou fluxo de filtrado 45% inferior ao obtido na pequena escala. Os estudos de extração líquido-líquido por micela reversa foram feitos utilizando um agente tensoativo catiônico (BDBAC- [N-Benzyl-N-Dodecyl-N bis(2-hydroxyethyl) ammonium chloride] e um aniônico (AOT- sodium-di-2ethyl-hexyl-sulphosuccinate). O BDBAC proporcionou recuperação de 91 % da enzima presente inicialmente. Na ampliação de escala do processo foi verificado um rendimento de 77%, e o aumento da atividade enzimática específica, nos dois casos, foi de aproximadamente 2,8 vezes. Em comparação com os dois processos anteriores, o processo de purificação da inulinase com separação simultânea de células por cromatografia de trocaiônica em leito fluidizado foi o que proporcionou maior aumento da atividade enzimática específica (da ordem de 4,3 vezes). Após adsorção e eluição do leito cromatográfico, 93,1% da enzima foi recuperada. / It has been observed that the production of extracellular inulinase by Candida kefyr DSM 70106 was markedly affected by the rate of oxygen transfer to the medium. The highest inulinase activity (37,5 U.Ml-1) was attained at a KLa value (volumetric coefficient of oxygen transfer) equal to 43 h-1. As such, KLa was chosen as a criterion for scaling-up the bioreactor capacity from 15 L to 300 L. Once the fermentation ended, the whole fermented broth was frozen for further cell separation and inulinase purification. For that, three different processes were used, namely filtration (microfiltration, diafiltration and ultrafiltration), liquid-liquid extraction by reversed micelles and ion-exchange chromatography in fluidized bed. Microfiltration membranes differing in the chemical nature and on the pores diameter were used in cell separations. The highest filtrate flow (FF = 324 L.h-1.m-2) occurred when HVLP type membrane (0,45 µm pore diameter) was employed. Moreover, 99% of inulinase passed through the membrane. Several types of filtration modules were also studied. The rotatory filter, such as the \"Biodruckfilter\" (FF=300 L.h-1.m-2 and 99% of inulinase transmission), presented remarkable performance when compared with cassette and tubulartype filters, in which FF was lower than 50%. Furthermore, filtration carried out with a scaled-up cassette module presented a FF 45% lower than that observed on a smaller scale. Studies on liquid-liquid extraction by reverse micelles were made utilizing a cationic surfactant (BDBAC- [N-Benzyl-N-Dodecyl-N-bis(2-hydroxyethyl) ammonium chloride] and an anionic surfactant (AOT-sodium-di-2-ethyl-hexylsulphosuccinate). The use of BDBAC resulted in a recuperation of 91 % of the enzyme initially present, which decreased about 77% when the process was scaled-up. Neverthless, in both cases the increase in specific enzymatic activity was about 2.8 times. In comparison with the aforementioned processes, the ion-exchange chromatography in fluidized bed, in which inulinase purification and cell separation take place simultaneously, provided. an increase in specific enzymatic activity of about 4.3 times. After adsorption and elution of the chromatographic bed about 93% of the inulinase was recovered.
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Recombinação genética e produção de celulases em Trichoderma pseudokoningii var. Rifai / not availableMarcia Cristina Furlaneto 31 August 1989 (has links)
No presente trabalho foram realizados estudos genéticos em Trichoderma pseudokoningii e verificada a atividade celulolítica da linhagem selvagem, mutante e recombinantes obtidos de heterocários. Com o objetivo de se obter mutantes auxotrófico, testou-se dois agentes mutagênicos, a luz ultravioleta e o ácido nitroso. Através de irradiação com luz ultravioleta foram obtidos dezenove mutantes autotróficos simples e dezoito com dupla deficiência, e dois mutantes morfológicos com ácido nitroso. Sete mutantes com dupla marcas autotróficas e morfológicas foram utilizados para a obtenção de heterocários. Colônias recombinantes foram obtidas diretamente dos heterocários em diferentes meios seletivo, sugerindo a ocorrência de parameiose nesta espécie. Colônias protróficas crescidas em MM eram binucleadas e de coloração verde, indicando um sistema não autônomo para a pigmentação de conídios. Estas colônias dicarióticas formaram setores em MC acrescido de benomyl, sugerindo a ocorrência de uma fase diplóide altamente instável e parassexualidade. Foi descrito um método para a obtenção e fusão de protoplastos. Colônias recombinantes foram recuperadas diretamente de produtos de fusão, numa freqüência aproximadamente 1000 vezes superior em relação às obtidas à partir de heterocário. Quanto a atividade celulolítica da linhagem selvagem e mutantes, observou-se que os valores de índices enzimáticos foram diretamente proporcionais ao maior ou menor grau de compactação das colônias. Colônias de linhagem selvagem originadas de protoplastos regenerados apresentaram índices de atividade celulolítica inferiores em relação às colônias originadas de conídios, indicando um efeito negativo da protoplastização sobre a atividade enzimática / In this work genetic studies were carried out in Trichoderma pseudokoningii in order to test the cellulolitic activity in wild and mutant strains and recombinants obtained from heterokaryons. Two mutagenic agents were tested aiming to obtain auxotrophic mutants-Utraviolet light and nitrous acid. Through UV light were obtained 19 simple auxotrophic mutants and 18 double mutants and through nitrous acid two morphological mutants. Seven color mutants carrying two auxotrophic markers were used to get heterokaryons. Recombinant colonies were directly recovered from heterokaryons onto different seletive media, indicating the occurrence of parameiosis. Prototrophic colonies grown in minimal medium were binucleated and green coloured, revealing a non autonomous system for conidia pigmentation. These dikaryotic colonies gave rise to sectors in complete medium plus benomyl suggesting the occurrence of a highly unstable diploid phase and parassexuality. It was described as well a method for protoplasts obtention and fusion. Recombinant colonies were directly recovered from fusion products in a frequency almost 1000 times higher than the recombinants from heterokaryons. For cellulolitic activity in wild and mutant strains it was shown that the enzymatic indexes were directly proportional to the higher or smaller degree of colony compactation. Colonies regenerated from protoplasts of the wild strain showed worst cellulolitic activity than colonies rosen from conidia. This is a negative effect of protoplastization on the cellulolitic activity. Electrophoretic patterns for esterase of the wild and mutant strains showed different profiles according to number and band position. It might be suggested a relation between band patterns and conidia coloration.
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