Orientador: Maria Stella Gonçalves Raddi / Banca: Luís Marcos da Fonseca / Banca: Alberto Camilo Alecio / Banca: Carlos Henrique Gomes Martins / Banca: Miriam Sannomiya / Resumo: O glicoalcalóide esteroidal solamargina (SM) e sua aglicona solasodina (SD), isolados de frutos de Solanum palinacanthum (juá), foram avaliados in vitro quanto à citotoxicidade, mutagenicidade, atividade antimicrobiana na presença de sistema de metabolização microssomal hepático (fração S9). A viabilidade das linhagens celulares RAW 264.7, SiHa e HepG2 expostas a diferentes concentrações (200 - 6,25 µg/mL) dos alcalóides, na presença ou não da fração S9, foi avaliada após 24 horas pela técnica do MTT-tetrazólio e Vermelho Neutro (VN). A curva dose-resposta indicou que a fração microssomal diminui o efeito citotóxico dos alcalóides para as linhagens RAW e SiHA, entretanto essa atividade foi potencializada para a linhagem HepG2. Atividade antibacteriana para Staphylococcus aures, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa, através da técnica de microdiluição, demonstrou que a fração S9 potencializou esse efeito para ambos os alcalóides, entretanto a concentração inibitória mínima (CIM) só foi definida para S. aureus (1,0 mg/mL), porém apenas com efeito bacteriostático. O teste de mutagenicidade, realizado pela técnica de AMES, demonstrou efeito mutagênico apenas para a SM na linhagem TA98 na ausência de ativação metabólica nas concentrações acima de 400 µg/mL. Espectrometria de massas foi utilizada para comparar os fragmentos gerados pelos alcalóides após metabolização com a fração S9. A análise espectral evidenciou a presença de diferentes fragmentos, indicando biotransformação dos alcalóides / Abstract: The steroidal glycoalkaloid solamargine (SM) and its aglycone solasodine (SD), isolated from fruits of Solanum palinacanthum (juá) were evaluated in vitro for cytotoxicity, mutagenicity, antimicrobial activity in the presence of hepatic microsomal metabolizing system (S9 fraction). The viability of RAW 264.7 cell lines, SiHa and HepG2 cells exposed to different concentrations (200 to 6.25 mg/mL) of alkaloids, in the presence or absence of S9 fraction was analyzed after 24 hours using the techniques of the MTT-tetrazolium and Neutral Red (RN). The dose-response curve indicated that the microsomal fraction decreased to cytotoxic of alkaloids lines for RAW and Siha, however this activity has was potentiated to the HepG2. Antibacterial activity Staphylococcus aures, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa by the microdilution technique, showed that the fraction S9 potentiated the effect to both alkaloids, however the minimum inhibitory concentration (MIC) was defined only for S. aureus (1.0 mg / mL), but without bactericidal effect. The mutagenicity test, performed by the technique of AMES, demonstrated mutagenic effect only for the SM strain TA98 in the absence of metabolic activation at concentrations above 400 mg/mL. Mass spectrometry was used to compare the fragments generated by alkaloids after metabolization with S9 fraction. Spectral analysis showed the presence of different fragments, indicating biotransformation of alkaloids / Doutor

Medicamentos antimicrobianos são cada vez mais utilizados, com finalidades diversas, em medicina veterinária. Esta conduta pode ocasionar a presença de resíduos destes compostos em alimentos de origem animal. Desta forma, o controle da presença destes contaminantes se torna imprescindível do ponto de vista de saúde pública. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento, validação e posterior utilização de metodologias para análise de antimicrobianos em produtos destinados à alimentação animal e produtos de origem animal destinados ao consumo humano. Diferentes metodologias, com abordagem tanto qualitativa como quantitativa, foram desenvolvidas, contemplando as seguintes classes de antimicrobianos: sulfonamidas, quinolonas, fluorquinolonas, tetraciclinas, beta-lactâmicos, macrolídeos, lincosamidas, além de trimetoprima e bromexina. Os métodos multirresíduos desenvolvidos contemplaram um total de até 46 compostos diferentes numa mesma análise. A cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas foi utilizada, com diferentes abordagens: cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em modo tandem (LC-MS/MS) e cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas híbrida quadrupolo-tempo de voo (LC-QTOF). Os diferentes procedimentos de preparo de amostras foram desenvolvidos com o enfoque comum de reunir eficiência, praticidade, baixo custo e baixa produção de resíduos, combinação ideal para análises de rotina. As metodologias validadas foram aplicadas à análise de 4962 amostras provenientes do Serviço de Inspeção Federal (SIF), do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, sendo 2728 amostras de músculos de animais de diferentes espécies, 1105 amostras de leite bovino e 1129 amostras de rações. Foram detectados resíduos em 130 das 1126 amostras de rações, representando 11,25% das amostras analisas. Já para os alimentos de origem animal, o número de amostras contendo resíduos acima do limite de quantificação foi 39, que corresponde a 1,02% do total de amostras analisadas (3833). Entretanto, as amostras não conformes, que são aquelas com concentração de resíduos acima do limite máximo de resíduo estabelecido para o composto naquela matriz, foram apenas 13, representando 0,34% do total de amostras analisadas.Por fim, as metodologias desenvolvidas se mostraram adequadas para detecção simultânea de antimicrobianos em matrizes biológicas, proporcionando maior rapidez, menor custo de análise e geração de resultados confiáveis quando testadas em amostras reais nas condições existentes nos serviços de inspeção. / The objective of this work was the development, validation and subsequent use of methodologies for analyzing antimicrobials in products intended for animal nutrition and products of animal origin for human consumption. Different methodologies, with both qualitative and quantitative approaches, were developed, covering the following classes of antimicrobials: sulfonamides, quinolones, fluoroquinolones, tetracyclines, beta-lactams, macrolides, lincosamides, in addition to trimethoprim and bromexin. Liquid chromatography coupled to mass spectrometry was used with different approaches: liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) and liquid chromatography coupled to quadrupole-time hybrid mass spectrometry (LC-QTOF). The different preparation of samples developed with the common approach of to bringing efficiency, practicity, low cost and low waste generation, ideal combination for routine analysis. Developed methodologies were applied to 4962 samples of the Federal Inspection Service (SIF), of the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply, 2728 samples of muscles of different species, 1105 samples of bovine milk and 1129 samples of rations. Positive results were obtained in 130 of 1126 feed samples, representing 11.25% of the analyzed samples. For animal origin products, the number of samples above the quantification limit was 39 to 3833 samples analyzed, corresponding to 1.02% of the total. However, non-compliant samples, which are those with a concentration above the maximum residue limit established for the compound in that matrix, were only 13, representing 0.34% of the total samples analyzed. Finally, the methodologies developed were suitable for the simultaneous detection of different antimicrobials of different classes in different foods of animal origin, providing greater speed and lower analytical cost when tested in real samples under conditions in the inspection service.

Tese de mestrado integrado. Engenharia Química. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2008

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-19Bitstream added on 2014-06-13T20:24:23Z : No. of bitstreams: 1 lovaglio_rb_dr_rcla.pdf: 1731223 bytes, checksum: 43dfc85c18edb74e4fc520e7b8f963ac (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os biossurfactantes são metabólitos secundários que apresentam atividade de superfície, podendo ser aplicados em diferentes processos industriais, como produção de fármacos, compostos químicos, cosméticos, biorremediação de ambientes poluídos por petróleo e derivados e recuperação terciária do petróleo. A maior vantagem destes compostos quando comparado aos surfactantes sintéticos reside na sua diversidade estrutural, baixa toxicidade e alta biodegradabilidade. Apesar das inúmeras vantagens apresentadas pelos biotensoativos, eles não são comercialmente utilizados devido ao alto custo de produção. O objetivo deste trabalho foi estudar a produção de ramnolipídios por mutantes de P. aeruginosa a partir de resíduos industriais e óleos vegetais, bem como caracterizar as propriedades de solução desses biossurfactante, além de verificar a influência da fonte de carbono na produção de homólogos de ramnolipídios por P. aeruginosa. Na primeira etapa as fermentações foram conduzidas em tubos de ensaio, após a seleção dos micro-organismos com potencial para alta produção, os mesmos foram testados em frascos Erlenmeyer. O mutante com potencial para elevada produção foi avaliado, junto com a linhagem selvagem, em fermentadores. A linhagem selecionada e a utilização do meio de cultura livre de cálcio contendo óleo de girassol como fonte de carbono acarretou em um aumento de 70% na produção de ramnolipídios. A adição de etanol às soluções de ramnolipídios comprovou o potencial desse tensoativo para serem aplicados na indústria de cosméticos, já que as propriedades de tensão superficial, agregação e emulsificação foram mantidas nas três concentrações de álcool adicionadas. Além disso, verificou-se que a mudança da fonte de carbono acarreta alteração nos tipos ácidos graxos e proporções de homólogos de ramnolipídios produzidos por P. aeruginosa LBI 2A1 / The biosurfactants are secondary metabolites that exhibit surface activity and can be applied in different industrial processes such as production of pharmaceuticals, chemicals, cosmetics, bioremediation of environments polluted by oil and derivatives and tertiary recovery of oil. The greatest advantage of these compounds compared to synthetic surfactants lies in their structural diversity, low toxicity and high biodegradability. Despite the numerous advantages provided by biosurfactants, they are not commercially used due to the high cost of production. The present study aimed to evaluate the production of rhamnolipids by mutants of P. aeruginosa using industrial waste and vegetable oils as carbon source, as well as to characterize the properties of these biosurfactant solutions and investigate the influence of carbon source in the production of homologous rhamnolipds by P. aeruginosa. In the first stage fermentations were conducted in test tubes, after selection of microorganisms with potential for high production they were tested in Erlenmeyer flasks. The mutant with the potential for increased production was assessed, along with the wild strain in bioreactors. The selected strain and the calcium free medium used with sunflower oil as carbon source resulted in an 70% increase in the production of rhamnolipids. The addition of ethanol to the rhamnolipids solutions proved the potential of this biosurfactant to be applied in the cosmetic industry, since the properties of surface tension, emulsification and aggregation were held in all three concentrations of ethanol added. Moreover, it was found that changing the carbon source caused alteration in the types of fatty acids and rhamnolipids counterparts proportions produced by P. aeruginosa LBI 2A1

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-27Bitstream added on 2014-06-13T18:44:36Z : No. of bitstreams: 1 ponsoni_k_dr_arafcf_parcial.pdf: 291098 bytes, checksum: ded44be69f5a06409ab135b631b76818 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:24:38Z: ponsoni_k_dr_arafcf_parcial.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:27:36Z : No. of bitstreams: 2 ponsoni_k_dr_arafcf_parcial.pdf.txt: 9765 bytes, checksum: 6a53e824c7376acd98b390476f4febe5 (MD5) 000706924.pdf: 1415375 bytes, checksum: a00e2e39155c8dd73399a29f7d5fe6bd (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:33:13Z: 000706924.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:43:27Z : No. of bitstreams: 2 ponsoni_k_dr_arafcf_parcial.pdf.txt: 9765 bytes, checksum: 6a53e824c7376acd98b390476f4febe5 (MD5) 000706924.pdf: 1415375 bytes, checksum: a00e2e39155c8dd73399a29f7d5fe6bd (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:48:53Z: 000706924.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:49:45Z : No. of bitstreams: 1 000706924.pdf: 1415375 bytes, checksum: a00e2e39155c8dd73399a29f7d5fe6bd (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-27T11:47:06Z: 000706924.pdf,Bitstream added on 2014-10-27T11:48:03Z : No. of bitstreams: 1 000706924.pdf: 1415375 bytes, checksum: a00e2e39155c8dd73399a29f7d5fe6bd (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O glicoalcalóide esteroidal solamargina (SM) e sua aglicona solasodina (SD), isolados de frutos de Solanum palinacanthum (juá), foram avaliados in vitro quanto à citotoxicidade, mutagenicidade, atividade antimicrobiana na presença de sistema de metabolização microssomal hepático (fração S9). A viabilidade das linhagens celulares RAW 264.7, SiHa e HepG2 expostas a diferentes concentrações (200 – 6,25 µg/mL) dos alcalóides, na presença ou não da fração S9, foi avaliada após 24 horas pela técnica do MTT-tetrazólio e Vermelho Neutro (VN). A curva dose-resposta indicou que a fração microssomal diminui o efeito citotóxico dos alcalóides para as linhagens RAW e SiHA, entretanto essa atividade foi potencializada para a linhagem HepG2. Atividade antibacteriana para Staphylococcus aures, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa, através da técnica de microdiluição, demonstrou que a fração S9 potencializou esse efeito para ambos os alcalóides, entretanto a concentração inibitória mínima (CIM) só foi definida para S. aureus (1,0 mg/mL), porém apenas com efeito bacteriostático. O teste de mutagenicidade, realizado pela técnica de AMES, demonstrou efeito mutagênico apenas para a SM na linhagem TA98 na ausência de ativação metabólica nas concentrações acima de 400 µg/mL. Espectrometria de massas foi utilizada para comparar os fragmentos gerados pelos alcalóides após metabolização com a fração S9. A análise espectral evidenciou a presença de diferentes fragmentos, indicando biotransformação dos alcalóides / The steroidal glycoalkaloid solamargine (SM) and its aglycone solasodine (SD), isolated from fruits of Solanum palinacanthum (juá) were evaluated in vitro for cytotoxicity, mutagenicity, antimicrobial activity in the presence of hepatic microsomal metabolizing system (S9 fraction). The viability of RAW 264.7 cell lines, SiHa and HepG2 cells exposed to different concentrations (200 to 6.25 mg/mL) of alkaloids, in the presence or absence of S9 fraction was analyzed after 24 hours using the techniques of the MTT-tetrazolium and Neutral Red (RN). The dose-response curve indicated that the microsomal fraction decreased to cytotoxic of alkaloids lines for RAW and Siha, however this activity has was potentiated to the HepG2. Antibacterial activity Staphylococcus aures, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa by the microdilution technique, showed that the fraction S9 potentiated the effect to both alkaloids, however the minimum inhibitory concentration (MIC) was defined only for S. aureus (1.0 mg / mL), but without bactericidal effect. The mutagenicity test, performed by the technique of AMES, demonstrated mutagenic effect only for the SM strain TA98 in the absence of metabolic activation at concentrations above 400 mg/mL. Mass spectrometry was used to compare the fragments generated by alkaloids after metabolization with S9 fraction. Spectral analysis showed the presence of different fragments, indicating biotransformation of alkaloids

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-09-05Bitstream added on 2015-03-03T12:07:02Z : No. of bitstreams: 1 000794866_20160904.pdf: 841244 bytes, checksum: 15789344d00520491ff203ff9f7b6fa2 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-09-09T14:06:02Z: 000794866_20160904.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-09T14:06:35Z : No. of bitstreams: 1 000794866.pdf: 3309197 bytes, checksum: 719601c6e873cea248933afaaa2f8cf8 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-09-12T15:36:45Z: 000794866.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-12T15:37:23Z : No. of bitstreams: 1 000794866.pdf: 3309197 bytes, checksum: 719601c6e873cea248933afaaa2f8cf8 (MD5) / Caesalpinia ferrea Mart. pertence à familia Fabaceae ( Caesalpinioideae ) , cresce em todo o terr itório brasileiro, sendo largamente distribuída nas regiões norte e nordeste, conhecida vulgarmente como pau - ferro ou jucá. N este trabalho , foi realizado o estudo fitoquímico, a determinação quantitativa de metabólitos secundários, a avaliação das atividad es mutagênica e an tirradicalar e a determinação dos teores de fenóis totais do extrato etanólico das cascas do caule de C . ferrea . Análises por HPLC - ESI - IT - MS ( High Performance Liquid Chromatography - Electrospray Ionization - Ion Trap – Mass Spectrometry ) e FIA - ESI - IT - MS n ( Flow Injection Analysis - Electrospray Ionization - Ion Trap – Mass Spectrometry ), modo negativo , permitiram identificar vinte substâncias pela análise dos padrões de fragmentações e comparação com dados da literatura ( ácido gálico e der ivad o s , ácido elágico e derivados , galotaninos, elagitaninos, catequina e uma procianidina ) . No estudo fitoquímico, foram utilizadas técnicas cromatográficas usuais, como Cromatografia em Coluna Clássica (sílica gel e s ephadex LH - 20 ), MPLC ( Medium Pressure Liquid Chromatrography ) e HPLC , que forneceram um éster de ftalato, um açúcar, ácido gálico, dois derivados do ácido quínico e um derivado glicosilado do ácido elágico, que foram identificados por métodos espectroscópicos ( Ultra vi oleta e Ressonância Magné tica Nuclear) e espectrométricos ( Espectrometria de Massas ). Um método analítico foi desenvolvido utilizando a técnica de HPLC - PDA ( High Performance Liquid Chromatography - Photodiode Array Detector ) que permitiu a quantificação d e seis substâncias ( ácido gálico, ácido galoil quínico, galato de etila, dilactona do ácido valoneico, ácido elágico e ácido 3 - O - metilelágico - 4 ' - O - ? - D - arabinopiranosídeo ) no extrato. Nesta... / Caesalpinia ferrea Mart. belongs to the family Fabaceae (Caesalpin ioideae) grows throughout the Brazilian territory, being widely distributed in the northern and northeastern regions, known commonly as pau - ferro or jucá . In t his research describes the phytochemical study, and the determination of the quantitative seconda ry metabolites, the mutagenic evaluation and antiradical activities and the total phenol levels determination of the ethanolic extract from the C . ferrea Martius stem bark. The analyses by the HPLC - ESI - IT - MS (High Performance Liquid Chromatography – Electr ospray Ionization – Ion trap – Mass Spectometry) and FIA – ESI - IT - MS n (Flow Injection Analysis – Electrospray Ionization – Ion Trap – Mass Spectometry), negative mode, it allowed to identify twenty substances by the standard analyses of the fragmentation a nd comparison with the data that are in the literature (gallic acid and derived, ellagic acid and derivatives, gallotannins, ellagitannis, cathechin and proantocyanidin). In the phytochemical study, it was used common chromatographic technical, like the Cl assical Column Chromatography (silica gel and sephadex LH - 20), MPLC (Medium Pressure Liquid Chromatrography) and HPLC , that provided a phthalate ester, a sugar, a gallic acid, two quinic acid derived and a glycosylated ellagic acid derivative , that were id entified by spectroscopic (Ultraviolet and Nuclear Magnetic Ressonance) and spectrometric (Mass s pectrometry ). An analytical method was developed using th e HPLC - PDA (High Performance Liquid Chromatography - Photodiode Array Detector) , which permitted quant ification of six substances (gallic acid, gal l o y l quinic acid, ethyl gallate, valoneic acid dilactone, ellagic acid and 3 - O - metilel la gic acid - 4 ' - O - ? - D - arabinopyranoside) in the extract. In this quantification, ellagic acid (57.64 ± 1.22 ?g.mL - 1 ) and...

Orientador: Maysa Furlan / Co-orientador: Lidiane Gaspareto Felippe / Banca: Rafael Victorio Carvalho Guido / Banca: Adriana Aparecida Lopes / Resumo: A clonagem de oxidoesqualeno ciclase das folhas de M. ilicifolia já foi estudada por nosso grupo, bem como os estudos de expressão em S. cerevisiae geneticamente modificada para melhor produção da friedelina. Para o desenvolvimento do trabalho, optou-se por realizar a expressão do gene de friedelina sintase de Kalanchoe daigremontiana obtido comercialmente, cuja sequência foi otimizada de acordo com o codon usage de S. cerevisiae. A partir das mutações sítio-dirigidas, duas mutações no gene sintético foram confirmadas. A primeira mutação do resíduo de leucina para valina na posição 483 do gene sintético levou à produção da friedelina e dos triterpenos -amirina e taraxerol enquanto a segunda mutação do resíduo de leucina para treonina na mesma posição deste gene produziu unicamente a -amirina. Após a padronização e análises das mutações no gene sintético, as mesmas mutações foram realizadas no gene da friedelina sintase de Maytenus ilicifolia. A mutação por valina levou à produção de -amirina e friedelina e, igualmente ao gene sintético, a mutação por treonina levou à formação apenas da -amirina. De acordo com a mutação gerada, os compostos produzidos pela levedura foram analisados por cromatografia gasosa acoplada a detector de massas e observou-se que algumas mutações levavam a uma alteração da especificidade do produto formado pela enzima. Esses estudos sugerem que a relação da estrutura proteica-função da enzima produtora da friedelina possa estar associada ao ajuste da cavidade ativa da enzima e, quando um resíduo de aminoácido do sítio ativo é substituído por resíduos menores, a ampliação da cavidade proporciona a estabilização prévia do carbocátion em um triterpeno com menor número de rearranjos, como a -amirina. Desta forma, estes dados contribuem com o entendimento da especificidade desta enzima, são os primeiros a... / Abstract: The cloning of oxidosqualene cyclase from Maytenus ilicifolia leaves and expression in Saccharomyces cerevisiae has been studied by our group to generate friedelin. The main objective of this project was to carry out the expression of friedelin synthase gene using commercially Kalanchoe daigremontiana, whose sequence has been optimized according to the codon usage of S. cerevisiae. In such studies, two mutations in the synthetic gene were confirmed. The first mutation of valine for leucine residue at position 483 synthetic gene led to the production of friedelin, β-amyrin and tararexol, while the second mutation of leucine to threonine residue, at the same position, produced exclusively β-amyrin. The same mutations were performed using the gene of friedelin synthase of Maytenus ilicifolia. The compound identities were confirmed by gas chromatography and mass spectrometry. The results suggested that the ratio of protein production-enzyme function, involved in the production of friedelin, may be associated with the active cavity of the enzyme setting, when an amino acid residue of the active site is replaced for smaller, expanding the cavity to provide the prior stabilization of the carbocation in the biosynthetic pathway of triterpenes to produce β-amyrin. Thus, these data contribute to understand the specificity of such enzyme. Furthemore, this studie was the first one to show the importance of each amino acid in the active site of the enzyme to produce a pentacyclic triterpene with the highest number of rearrangements and was the basis for future studies of enzyme engeenering to increase productivity of such compounds. / Mestre

Orientador: Vanderlan da Silva Bolzani / Banca: Juliana Rodrigues / Banca: Cristiano Soleo de Funari / Resumo: O gênero Eugenia pertence à família Myrtaceae e compreende cerca de 400 espécies de ocorrência em todo o território nacional. Algumas espécies são muito conhecidas pelas atividades antifúngica, antiviral e bactericida. Outras são descritas pelas propriedades apresentadas na redução dos níveis de triglicerídeos e colesterol. As espécies de Eugenia apresentam uma composição química diversificada, como relatos na literatura da presença de terpenos, derivados flavonoidicos (quercetina, metoxiquercetina, miricetina) e outros fenólicos como chalconas, taninos e flavonas. Mesmo tratando-se de espécies com frutos comestíveis, a literatura é bastante escassa quanto à composição química das folhas de E. handroana e E. pyriformis, e todo trabalho relatado até o presente trata-se especialmente dos óleos essenciais. Desta forma, este projeto tem como objetivo o estudo bioguiado dos extratos das folhas de três espécies do gênero: E. pyriformis Cambess, E. uniflora L. e E. handroana D. Legrand, visando identificar substâncias presentes nas frações bioativas nos ensaios antioxidante e de inibição da glicação com vistas ao desenvolvimento de cosméticos e alimentos funcionais. Extratos hidroetanólicos e suas frações foram analisados por CLAE-DAD e avaliados por ensaios biológicos (ensaio antioxidante com radical DPPH•, ação redutora sobre radicais peroxila e antiglicação), sendo a fração acetato de etila a mais ativa nas três espécies estudadas nos ensaios descritos. A fração acetato de etila ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The genus Eugenia belongs to the family Myrtaceae and comprises about 400 species of occurrence throughout the national territory. Some species are well known for antifungal, antiviral and bactericidal activities. Others are described by their properties in reducing triglyceride and cholesterol levels. The species of Eugenia have a diverse chemical composition, such as reports in the literature of the presence of terpenes, flavonoid derivatives (quercetin, methoxyquercetin, myricetin) and other phenolics such as chalcones, tannins and flavones. Even though it is species with edible fruits, the literature is rather scarce as to the chemical composition of the leaves of E. handroana and E. pyriformis, and all the literature reported to date is especially about the essential oils. In this way, this project aims at the bio-guided study with leaf extracts of three species of the genus: E. pyriformis Cambess, E. uniflora L. and E. handroana D. Legrand, aiming to identify substances present in the bioactive fractions, in the antioxidant and inhibition of glycation assays with a view to the development of cosmetics and functional foods. Hydroethanolic extracts and their respective fractions were analyzed by HPLC-DAD and accompanied by biological assays (antioxidant assay with DPPH• radical, reducing action on peroxyl radicals and antiglycation), with ethyl acetate fraction being the most active in the three species studied in the described assays. The ethyl acetate fraction of E. pyriformis and E. handroana was fractionated by column chromatography and the resulting fractions were submitted to biological assays. The fraction C was selected because for presented significant results in the antioxidant and promising results in the antiglycation assay. This fraction was then submitted to fractionation by preparative high performance liquid chromatography (HPLC), leading to the identification... / Mestre

Fungos filamentosos produzem uma ampla diversidade de metabólitos secundários que tem significativo impacto na sociedade. Alguns metabólitos são explorados pela sua atividade como antibióticos e fármacos e outros estão envolvidos em doenças, na interação dos fungos com plantas e animais. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi obter metabólitos secundários como pigmentos e metabólitos biologicamente ativos produzidos por fungos filamentosos. Foram selecionadas cinco linhagens sendo elas Diplodia sp, Fusarium graminearum, Monascus purpureus, Penicillium expansum e Penicillium sp. Estes fungos foram selecionados devido à sua capacidade de produzir e secretar pigmentos em meio ágar batata dextrose. Para confirmação ou identificação em nível de espécie dos fungos, foram utilizados o sequenciamento parcial da região intergênica (ITS) do DNA ribossomal e uma região do gene da β-tubulina. Quatro dos cinco fungos foram identificados como Fusarium graminearum, Monascus purpureus e duas linhagens de Penicillium chrysogenum (linhagens 1 e 2), sendo os primers para região ITS mais adequados para a identificação em nível de espécie. As quatro linhagens produziram pigmentos em resíduos agroindustriais sob cultivo submerso. Devido à diversidade de metabólitos com atividades antibióticas produzidos por fungos filamentosos, estes filtrados coloridos foram testados contra fungos e bactérias, sendo que de quinze filtrados testados onze apresentaram inibição contra fungos e bactérias de importância médica, alimentar e agronômica. Os filtrados de resíduo de uva e soro de queijo do fungo Penicillium chrysogenum 1 se destacaram, apresentando, também, atividade amebicida contra linhagem de Acanthamoeba polyphaga ATCC 30461. Utilizando a técnica ESI-MS, foi realizado um perfil metabólico do filtrado de soro de queijo, sendo confirmada a presença de penicilina G, pela massa molar protonada e pelo perfil de fragmentação por ESI-MS/MS. Além disso, foi sugerida a presença dos metabólitos penicilina V e rugulosina, com comprovada atividade antibiótica. Portanto, o fungo Penicillium chrysogenum 1 foi selecionado para estudos futuros de caracterização dos pigmentos produzidos e análise mais detalhada dos metabólitos ativos, devido ao status GRAS atribuído a essa espécie, aos poucos estudos relacionados à produção de pigmentos e ao potencial de produzir metabólitos ativos em resíduos agroindustriais. / Filamentous fungi produce a diverse array of secondary metabolites that have a remarkable impact on society. Some metabolites are exploited for their antibiotic and pharmaceutical activities, other are involved in diseases, due to the fungi interactions with plants or animals. In this context, the goal of this work was the obtention of secondary metabolites as pigments and biologically active metabolites produced by filamentous fungi. Five strains were selected Diplodia sp, Fusarium graminearum, Monascus purpureus, Penicillium expansum and Penicillium sp. These fungi were selected due to the ability to produce and secrete pigments on potato dextrose agar. To confirm and/or identify the fungi at species level, we used the partial sequencing of the intergenic region (ITS) of the ribosomal DNA and a region of the β-tubulin gene. Four of the five fungi were identified as Fusarium graminearum, Monascus purpureus and two strains of Penicillium chrysogenum (strains 1 and 2) and the primers to the ITS region were more suitable for the identification at species. The four strains produced pigments on agro-industrial residues under submerged culture. Because of the diversity of antibiotic activity metabolites produced by fungi, these coloured filtrates were tested against fungi and bacteria. From the fifteen tested filtrates, eleven showed inhibition against bacteria and fungi with medical, food and agronomical importance. The filtrates of grape waste and cheese whey of the fungus Penicillium chrysogenum 1 showed higher activity, including, amoebicidal activity against a strain of Acanthamoeba polyphaga ATCC 30461. Using an ESI-MS approach, a metabolic profile was obtained for the cheese whey filtrate, being confirmed the presence of penicillin G, because of the protonated molar mass and the fragmentation profile by ESI-MS/MS. In addition, was suggested the presence of the metabolites penicillin V and rugulosin, all with proven antibiotic activity. Therefore, the fungus Penicillium chrysogenum 1 was selected for future studies as the characterization of the produced pigments and more detailed analysis of the active metabolites, due to the GRAS status attributed to this specie, to the few studies related to the pigments production and to the potential to produce active metabolites on agro-industrial residues.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. / Made available in DSpace on 2012-10-18T01:02:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T18:24:39Z : No. of bitstreams: 1 172769.pdf: 12140850 bytes, checksum: 4d8446c1e7e8ed5667117b5d8b4f5050 (MD5) / No presente trabalho, apresenta-se um estudo sobre o processo de nitretação por plasma com um enfoque na físico-química do mesmo. O desenvolvimento deste estudo tem como objetivo o conhecimento de processos físico-químicos presentes no processo de nitretação por plasma, através da correlação de resultados obtidos no plasma com análises alcançadas no material tratado. Esta metodologia correlativa faz uso de diferentes técnicas de análise, tanto para os diagnósticos do plasma, como para as análises efetuadas no material. No que se refere ao plasma, são utilizadas as técnicas de espectrometria de massa e espectroscopia de emissão e, para o material, as técnicas de microscopia eletrônica de varredura, microscopia óptica e difratometria de raios-X. O processo é efetuado em ambientes nitretantes de N2-H2, com a aplicação de condições típicas e a utilização de amostras de Fe-puro sinterizadas. São realizadas modificações em parâmetros macroscópicos tais como a concentração dos constituintes da mistura gasosa (N2-H2), a temperatura da amostra, a pressão gasosa e o tempo de tratamento. A realização do trabalho deixa importantes contribuições à compreensão do processo de nitretação por plasma. Possibilita o estudo da formação de espécies no plasma e sua interação com o material. Além disso, permite a avaliação da descarbonetação ocorrida na superfície e sua relação com a nitretação. Finalmente, os resultados corroboram o trabalho já publicado, há algum tempo, por Szabo e Wilhelmi (1984), que até então, permanecia sem reconhecimento algum.