Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-09-15T14:30:16Z No. of bitstreams: 2 Tese- Érica Eugênio Lourenço Gontijo - 2016.pdf: 2253704 bytes, checksum: db396485a7f8b5e9945a2d3be4fa771b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-09-15T15:27:32Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese- Érica Eugênio Lourenço Gontijo - 2016.pdf: 2253704 bytes, checksum: db396485a7f8b5e9945a2d3be4fa771b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-15T15:27:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese- Érica Eugênio Lourenço Gontijo - 2016.pdf: 2253704 bytes, checksum: db396485a7f8b5e9945a2d3be4fa771b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-06-23 / Outro / INTRODUCTION: The frequency of embryo production and successful pregnancy are the main parameters used to measure the quality of human reproduction laboratories. OBJECTIVE: We compared the success in the production and quality of embryos, success rate and factors related to pregnancy in LabRep/HC/UFG before deep adjustments estrututurais, when it was classified as conventional laboratory and after adequaçãos, when it began to be classified as an ISO 5/7 laboratory and factors related to the success of fertilization. METHOD: The study was divided into two parts. The first evaluated the embryo quality and the second risk factors capable of interfering with the success of pregnancy. information of 278 cycles of women were surveyed who submitted any Assisted Human Reproduction technique during the study period. In the first analysis were surveyed: cleavage of the embryo, the result of βHCG, embryo quality and microbiological contamination of the means of embryos crops. In the second, they evaluated the size of follicles per woman, amount of aspirated oocytes, raised, inseminated and injected, ovarian stimulation scheme, maternal infections, infertility period and sperm quality. The study design was a case control. Data were entered into Epi-Info 3.3.2 and analyzed in BioEstat 5.3 program. We evaluated the relationship between the groups and the factors and the success of pregnancy the odds ratio (OR) and chi-square test (p = 0.05). RESULTS: In the first analysis it was observed that the ISO 5/7 laboratory, there were successful in the formation of embryos and the conventional O , CI - 2: 0.24, p: 0.81). 5/7 96.6% ISO laboratory embryos were generated A or B, since the conventional laboratory, 90.4% were A or B. The pregnancy success in the laboratory I O was , and conventional laboratory O CI to 2: 2,24; p: 0.13). The second correlation was found with pregnancy failure female factors: having more than 40 years (OR 6.04, CI: 1.34 to 27.08; p: 0.010), higher infertility time 97 months (OR: 4.49, CI: 1.65 to 12, .21; p: 0.00) and have endometrial thickness of less than 10mm (OR: 5.42, CI: 2.44 to 12.05; p:0.001). The male factors with correlation were: oligozoospermia (OR:3,35; IC:1,41-7,92; p:0,010) e teratozoospermia (OR:4,14; IC:1,89-9,07; p:0,010).Microbiological contamination was found in 11.06% of semen samples. CONCLUSIONS: There was no statistical difference between the results of the two laboratories, however we observed a trend of better quality embryos in ISO 5/7 laboratory. It was concluded that the patients attended the LabRep/HC/UFG, present a great heterogeneity of clinical profiles and different reproductive characteristics. It shows how a major challenge that encourages the ongoing investment in cutting edge technology and processes, as well as constant improvement of the multidisciplinary team that make up the lab. / INTRODUÇÃO: A frequência de produção de embriões e sucesso na gravidez são os principais parâmetros usados para verificar a qualidade de laboratórios de reprodução humana. OBJETIVO: Comparar o sucesso na produção e qualidade de embriões, taxa de sucesso e fatores relacionados a gravidez no LabRep/HC/UFG, antes de profundas adequações estrututurais, quando era classificado como laboratório convencional e após as adequaçãos, quando passou a ser classificado como um laboratório ISO 5/7 e os fatores relacionados ao sucesso da fertilização. MÉTODO: O desenho do estudo foi do tipo caso controle. Os dados foram inseridos no programa Epi-Info 3.3.2 ® e analisados no programa BioEstat 5.3 ®. Foram avaliadas a relação entre os grupos e dos fatores e o sucesso da gravidez pelo odds ratio (OR) e qui-quadrado (p=0,05). O estudo se deu no Laboratório de Reprodução Humana do HC/UFG Goiânia-Goiás. Foram pesquisadas informações de 278 ciclos de mulheres que submeteram a uer técnica de FIV, ICSI E IIU, como tratamento de Reprodução Humana Assistida no período do estudo. O trabalho foi dividido em três artigos para melhor compreensão dos resultados. No primeiro artigo realizou-se uma revisão bibliográfica sobre relação entre alterações bioquímicas, ambientais e microbiológicas e o sucesso da técnica de fertilização in vitro. O segundo artigo avaliou a qualidade embrionária e o terceiro, os fatores de risco com capacidade de interferir no sucesso da gestação. Na primeira análise foram pesquisadas: clivagem do embrião, resultado do βHCG, qualidade embrionária e a contaminação microbiológica dos meios de cultivos de embriões. Na segunda, foram avaliados o tamanho dos folículos por mulher, quantidade de oócitos aspirados, captados, inseminados e injetados, esquema de estimulação ovariana, infecções maternas, período de infertilidade e qualidade espermática. RESULTADOS: No primeiro trabalho científico onde comparou-se o sucesso na produção e qualidade de embriões, taxa de sucesso e contaminação microbiológica nos meios de cultura onde os embriões foram cultivados antes das adequações estrututurais, quando era classificado como laboratório convencional e após as adequaçãos, quando passou a ser classificado como um laboratório ISO 5/7, foi observado que no laboratório ISO 5/7, houve 74,1% de sucesso na formação de embriões e no convencional 67,8% (OR:1,30; IC:0,47-3,61; אּ2:0,24; p:0,81). No laboratório ISO 5/7 96,6% dos embriões gerados eram A ou B, já no laboratório convencional, 90,4% eram A ou B. O sucesso de gravidez no laboratório ISO 5/7 foi de 22,8% e no laboratório convencional de 36,2% (OR:1,9; IC: 0,81-4,52; אּ 2: 2,24; p: 0,13). No segundo trabalho científico onde avaliou-se os fatores relacionados a gravidez no LabRep/HC/UFG, foi encontrado correlação do insucesso de gravidez com os fatores femininos: ter mais de 40 anos (OR: 6,04; IC: 1,34-27,08; p:0,010), tempo de infertilidade superior a 97 meses (OR: 4,49; IC: 1,65-12,.21; p:0,001) e possuir endométrio com espessura inferior a 10mm (OR: 5,42; IC: 2,44-12,05; p:0,001). Os fatores masculinos com correlação foram: oligozoospermia (OR: 3,35; IC: 1,41-7,92; p:0,010), teratozoospermia (OR: 4,14; IC: 1,89-9,07; p:0,010). Foi encontrado contaminação microbiológica em 6.11% das amostras de sêmen. CONCLUSÕES: No primeiro trabalho científico foi possível concluir que não houve diferença estatística entre os resultados dos entre os dois laboratórios. No segundo trabalho científico concluiu-se que os fatores relacionados ao insucesso do tratamento de reprodução assistida encontrados foram: idade superior a 40 anos, tempo de infertilidade superior a 96 meses e espessura endometrial inferior a 10mm e presença de sêmen de baixa qualidade.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:38:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_liziane_vianna.pdf: 321138 bytes, checksum: e8e76002b27c6cb6d710d3cd63a4c088 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / The objective of this study was to evaluate alternative methods to the gradient of Percoll® for sperm selection used in bovine in vitro production systems. We evaluated the following parameters: sperm quality, embryo development, the viability after cryopreservation and sex ratio of bovine embryos produced in vitro. Four treatments were performed: percoll group (90 and 45%) 4 mL, centrifuged at 700xg for 20 min; minipercoll group (90 and 45%) 800 &#956;L, centrifuged at 700xg for 5 min; miniisolate group (90 and 45%) 800 &#956;L, centrifuged at 700xg for 5 min; and minioptiprep group (30,28 and 26%) 1,2 mL, centrifuged at 900xg for 15 min. Different gradients did not affect the semen characteristics compared with the evaluation immediately after thawing (P>0,05). It was only observed a decrease in total motility in minioptiprep group (P<0,05). The cleavage rates were similar among the percoll and miniisolate groups (P>0,05). Minipercoll and minioptiprep groups were lower to percoll (P<0,05) and similar to isolate (P>0,05). At Day 7 the developmental rates were higher in miniisolate group than other groups (P<0,05). But at D8 the developmental rates of minigradients were similar to percoll (P>0,05). Among the minigradientes, the miniisolate was higher to minipercoll and minioptiprep (P<0,05). The treatments did not affect the sex ratio expected of 50:50% (P.0,05) and there was no difference among the four groups (P>0,05). Also, there was no difference in survival rates after vitrification (P>0,05). In conclusion, the miniisolate and the minioptiprep groups, in the concentration and volume used in our experiment, reached similar results to the percoll group. So, they are alternatives to the gradient of Percoll® in the routine of IVP bovine embryos. / O objetivo do presente estudo foi avaliar possíveis alternativas ao gradiente de Percoll®, para seleção espermática, no sistema de produção in vitro de embriões bovinos. Foram avaliados os seguintes parâmetros: qualidade espermática, desenvolvimento embrionário, viabilidade após a criopreservação e a proporção sexual dos embriões bovinos produzidos in vitro. Foram realizados quatro tratamentos: grupo percoll (90 e 45%) - 4 mL, centrifugado 700xg por 20 min; grupo minipercoll (90 e 45%) 800 &#956;L, centrifugado a 700xg por 5 min; gupo miniisolate (90 e 45%) 800 &#956;L, centrifugado a 700xg por 5 min; e grupo minioptiprep (30, 28 e 26%) - 1,2 mL, centrifugado a 900xg por 15 min. A passagem pelos gradientes não afetou as características do sêmen em comparação com a avaliação realizada logo após o descongelamento (P>0,05), sendo somente observada uma diminuição da motilidade total para o grupo minioptiprep (P<0,05). Quanto a produção in vitro de embriões, não foi observada diferença na taxa de clivagem entre os grupos percoll e miniisolate (P>0,05), sendo o minipercoll e o minioptiprep inferiores ao percoll (P<0,05) e semelhantes ao miniisolate (P>0,05). No desenvolvimento embrionário, o miniisolate foi superior aos demais grupos em D7 (P<0,05). Em D8, os três minigradientes foram semelhantes ao percoll (P>0,05). Entre os minigradientes, o miniisolate foi superior ao minipercoll e ao minioptiprep (P<0,05). A passagem pelos gradientes não afetou a proporção sexual esperada de 50:50%, além disso, não houve diferença entre os grupos (P>0,05). Não houve diferença quanto à taxa de sobrevivência a vitrificação nos quatro grupos em 48 h (P>0,05). Concluímos que o miniisolate e o minioptiprep, nas concentrações e volumes estudados neste trabalho, atingiram resultados semelhantes ao percoll. Portanto, são alternativas a utilização do gradiente de Percoll®, na rotina de produção de embriões bovinos in vitro.

O presente trabalho avaliou a efetividade do tratamento com tripsina (TT) na eliminação do BoHV-1 Colorado, causador da Rinotraqueíte Infecciosa Bovina (IBR). Camundongos fêmeas Swiss, com idade entre 6 e 8 semanas, foram superovuladas com 0,2mL a 5UI de hormônio eCG e, após 48h com hCG e acasaladas com machos inteiros da mesma linhagem e idade. Após 18 horas, as fêmeas foram eutanasiadas e, através de abertura no peritônio, os zigotos foram coletados. Foram separados zigotos para cinco ensaios que forneceram os seguintes dados: o BoHV-1 Colorado altera a taxa de clivagem e a morfologia do embrião; a tripsina, seguindo recomendações da IETS, não danifica o embrião; os embriões expostos aos vírus e submetidos ao TT não alteram sua morfologia e taxa de clivagem; foram detectados (nested-PCR+) vírus viáveis (MDBK+) após o TT. Estes resultados demonstram que o TT não foi efetivo para eliminar o BoHV-1 Colorado, porém em alguns ensaios o TT demonstrou eficiência na inativação do vírus o que torna-o um importante método de controle in vitro. / This study evaluated the effectiveness of treatment with trypsin (TT) in the elimination of BoHV-1 Colorado, which causes infectious bovine rhinotracheitis (IBR) Swiss female mice, aged 6 and 8 weeks, were superovulated with 0.2 mL 5UI hormone eCG and 48h after hCG and mated with males of the same lineage and age. After 18 hours, females were euthanized, and through na opening in the peritoneum, the zygotes were collected. Zygotes were separated for five trials that provided the following data: the Colorado BoHV-1 alters the cleavage rate and embryo morphology; trypsin, following recommendations of the IETS, does not damage the embryo; the embryos exposed to the virus and subjected to TT does not change their morphology and cleavage rate; were detected (nested-PCR +) viable virus (MDBK +) after the TT. These results demonstrate that TT was not effective to eliminate the BoHV-1 Colorado, but in some tests showed the TT efficiency in inactivating the virus makes it na important method of control in vitro.

Submitted by Michele Mologni (mologni@unoeste.br) on 2018-08-30T12:23:36Z No. of bitstreams: 1 Alan Brunholi Giroto.pdf: 1342184 bytes, checksum: eec4738d5199b553c1a6ae446589328b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-30T12:23:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alan Brunholi Giroto.pdf: 1342184 bytes, checksum: eec4738d5199b553c1a6ae446589328b (MD5) Previous issue date: 2018-05-25 / In this study we aimed to evaluate how PAPP-A addition during in vitro maturation affected the IGF-1 quantification, transcript abundance related to cumulus oocyte complexes (COCs) and blastocysts quality, embryonic yield, as well as post-warming survival. We matured COCs through a 24 h treatment of TCM199 serum-free medium, either with PAPP-A supplementation (100 ng/mL; PAPP-A group) or without (control). Maturation medium was collected for IGF-1 quantification, and matured COCs were used for in vitro fertilization and culturing. The PAPP-A group exhibited 1.27 times higher IGF-1 concentrations than control. A comparison of in vitro embryo production across the groups found no difference in cleavage rate, embryonic yield, and survival, 3 and 24 h post-cryopreservation. In PAPP-A oocytes, only TXNRD1 was up-regulated. However, in PAPP-A cumulus cells, VNN1 and HDAC2 were up-regulated, while AGPAT1, AGPAT9, FASN, CASP3, EGFR, HAS2, IMPDH1, and MTIF3 were down-regulated. Finally, in PAPP-A blastocysts, CPT2, CASP9, DNMT3A, TFAM, and KRT8 were up-regulated, while ATF4, CASP3, and IFITM3 were down-regulated. We concluded that PAPP-A addition increased IGF-1 but did not influence embryonic yield and survival. Nevertheless, elevated IGF-1 could improve embryo competence through modulating expression of genes involved with lipid metabolism, oocyte competence and apoptosis in COCs and blastocysts. / A protéina sérica associada à prenhez (PAPP-A) é capaz de modular a biodisponibilidade do IGF-1 (fator de crescimento semelhante à insulina tipo 1) pela quebra das ligação com as proteínas de ligação do IGF (IGFBPs). O objetivo foi avaliar como a adição da PAPP-A durante a maturação in vitro (MIV) afetou a biodisponibilidade de IGF-1, a abundância de transcritos nos oócitos e células do cumulus e blastocistos, a produção embrionária e a sobrevivência pós aquecimento. Foi realizada a MIV de 24 h em complexos cumulus oócitos (CCOs – 20/grupo) oriundos de abatedouro, em meio TCM199 livre de soro, com adição de PAPP-A (100 ng/mL; grupo PAPP-A) ou sem (controle). O IGF-1 foi quantificado no meio de maturação e os CCOs maturados foram utilizados na fertilização e cultivo in vitro. Oócitos e células do cúmulus foram separados; e blastocistos foram congelados para a realização da expressão gênica. Taxa de clivagem e produção de blastocistos foram calculados como porcentagem e transformados para arco seno. Dados de expressão gênica foram normalizados com a média do grupo de controle. Os resultados foram analisados por test t, porém a criopreservação embrionária foi testada por Qui-quadrado (JMP software, SAS). Diferenças foram consideradas significativas quando p ≤ 0,05. O grupo PAPP-A apresentou 27% mais concentração de IGF-1 biodisponível. Na produção in vitro de embriões, não encontrou-se diferença na taxa de clivagem, produção e sobrevivência embrionária. Apenas o gene TXNRD1 mostrou maior expressão nos oócitos do grupo PAPP-A. No entanto, nas células do cumulus PAPP-A, o VNN1 e HDAC2 apresentaram maior expressão, enquanto os genes AGPAT1, AGPAT9, FASN, CASP3, EGFR, HAS2, IMPDH1 e MTIF3 apresentaram menor expressão. Nos blastocistos PAPP-A, os genes CPT2, CASP9, DNMT3A, TFAM e KRT8 apresentaram maior expressão, enquanto os genes ATF4, CASP3 e IFITM3 apresentaram menor expressão. Em conclusão, a adição de PAPP-A durante a MIV aumentou o IGF-1 biodisponível, mas não influenciou a produção e a sobrevivência embrionária após desvitrificação. No entanto, o aumento do IGF-1 biodisponível pode melhorar a competência embrionária através da modulação da expressão gênica em oócitos, células do cúmulus e blastocistos.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-05T11:17:28Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_ProducaoInvitroEmbrioes.PDF: 1935608 bytes, checksum: 2cd63044454d30a88b39d3bc30f867e4 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-09T17:24:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_ProducaoInvitroEmbrioes.PDF: 1935608 bytes, checksum: 2cd63044454d30a88b39d3bc30f867e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-09T17:24:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_ProducaoInvitroEmbrioes.PDF: 1935608 bytes, checksum: 2cd63044454d30a88b39d3bc30f867e4 (MD5) Previous issue date: 2014-06-13 / Trata-se da aplicação de biotecnicas de reprodução na espécie Pecari tajacu para melhorar seu potencial para a criação em cativeiro visando sua produção, conservação e multiplicação de recursos genéticos. Para determinar o tempo de maturação in vitro foram utilizados 48 fêmeas, foram selecionados 69 CCOs e divididos em 4 grupos por idade e tempo de MIV, e então submetidos a ativação partenogenética em Ionomicina e 6-DMAP. Para análise da progressão meiótica 165 oócitos foram divididos em 4 grupos conforme a suplementação de hormônios na MIV e tempo de maturação. Na criopreservação foram utilizados espermatozoides epididimários de 9 machos, diluídos em Tris-frutose e ACP-120 e divididos em grupos de refrigeração a 4ºC e congelamento a -196ºC e presença da glutationa (GSH), foram avaliados os parâmetros motilidade, vigor e viabilidade após a diluição a fresco e criopreservação. Para a produção de embriões, 97 oócitos após MIV de 36 horas foram divididos grupos de ativação partenogenética, FIV e ICSI. Através da ativação partenogenética obteve-se taxas de clivagens (47%) para os oócitos de fêmeas com menos de 2 anos submetidos a MIV em 36 horas, em todos os grupos observaram-se clivagens porém não houve diferenças significativas (P>0,05) entre os grupos analisados, observou-se taxa de blastocisto (15,4%) somente no grupo de oócitos ativados após MIV de 44 horas. Na analise da progressão meiótica, em todos os tempos analisados foram encontrados oócitos em MII. Na criopreservação dos espermatozoides observaram-se queda nos parâmetros analisados nos dois diluidores em todos os grupos, a presença da glutationa não interferiu significativamente nos parâmetros analisados. No resfriamento, as taxas de motilidade e viabilidade foram superiores no ACP-120 (> 50%) e no congelamento em tris-frutose (33% e 18%). A produção de embriões in vitro foi bem sucedida na ativação partenogenética (62,9%) e na ICSI (52,6%), na FIV as taxas foram baixas (7%), a produção de blastocisto ocorreu somente nos embriões partenotos (4,5%). Os resultados mostraram a viabilidade de biotecnicas reprodutivas como conservação de gametas, e produção in vitro de embriões na espécie Pecari tajacu. / This work considers the application of reproduction biotechniques on species Pecari tajacu designed to improve its potential for upbringing in captivity and aiming its production, conservation and the multiplication of genetical resources. To determine the maturation time in vitro, 48 females were utilized. An amount of 69 CCOs were selected and divided in 4 groups, per age and per time of MIV. They were then submitted to parthenogenetic activation in ionomycin and 6-DMAP. For the meiotic progression analysis, 165 oocytes were divided in 4 groups according to supplementation of hormones in MIV and time of maturation. For the cryopreservation, epididymal sperm of 9 males were utilized, diluted in Tris-fructose and ACP-120 and divided in groups of refrigeration at 4°C and freezing at -196 °C in the presence of glutathione (GSH), where the parameters of motility, vigor and viable sperm were evaluated, after fresh dilution and cryopreservation. For the embryo production, 97 oocytes after MIV of 36 hours were divided in groups of parthenogenetic activation, IVF and ICSI. Through parthenogenetic activation the rates of cleavages were obtained (47%) for the oocytes of females with less than 2 years of age, submitted to MIV in 36 hours. In all groups cleavages were observed, but with no significant difference (P>0,05) among the groups analysed. One blastocyst rate of 15,4% was observed only in the group of oocytes activated after MIV of 44 hours. In the meiotic progression analysis, in all times analyzed oocytes were found in MII. In the cryopreservation of the spermatozoa it was observed a drop of the parameters analyzed in the two extenders in all groups. The presence of glutathione did not interfere significantly in the parameters analyzed. In the freezing, the rates of motility and viable sperm were superior in ACP-120 (> 50%) and in the freezing in tris-fructose, 33% and 18%. The production of embryos in vitro was well succeeded in the parthenogenetic activation (62,9%) and in ICSI (52,6%). In IVF the rates were low (7%). The production of blastocyst occurred only in the partenotes embryos (4,5%). The results of this work showed the feasibility of reproductives biotechniques, such gametes conservation and in vitro production of embryos of the species Pecari tajacu.