Neste estudo caracterizamos a expressão de Mif nas células trofoblásticas (CT), placentárias e decidua (D) na gestação em camundongos.A imunolocalização foi realizada nos dias de gestação(dg) 7,5, 10,5, 13,5 e 17,5.Com cones ectoplacentários e placentas fetais (PL) realizou-se ensaios de Western blotting e qRT-PCR nos mesmos dg.D foram submetidas a qPCR.Aos 7,5 dg as CT gigantes e D apresentaram imunomarcação.Dos 10,5 ao 17,5 dg o Mif concentrou-se nas CTG e no espongiotrofoblasto.Na D, a imunomarcação foi menor que aos 7,5 dg.A expressão protéica na PL aumentou do 7,5 dg para o 10,5 dg (p=0,005) e para o 13,5 dg (p=0.03).A maior expressão gênica foi em 10,5 dg e diferente em 13,5 dg (p=0,048) e 17,5 dg (p=0,009).Na D, a maior expressão gênica foi em 7,5 dg e diferente dos 10,5 (0,012) e 13,5 (0,032) dg.O aumento da expressão de Mif na PL coincide com a organização em quatro camadas e com o início da circulação fetal.Esta distribuição temporal e tecido-específica sugere o MIF como modulador no início da placentação ou na sua adaptação ao ambiente uterino / The goal of this study was to characterize Mif expression by trophoblast (TC),fetal placenta (FP) and decidua (D) during mouse pregnancy.Mif was immunolocalized at TC and D on gestation days (gd) 7.5, 10.5, 13.5 and 17.5.Ectoplacental cones (EC) and FP were used for Western blotting and qPCR.D were also used for qRT-PCR.On gd 7.5,DC and TC giant (TGC) showed strong reactivity.On gds 10.517.5,were concentrated in TGC and spongiotrophoblast cells. D reactivity was weaker than 7.5 gd.Protein expression at FP increased from gd 7.5 to 10.5 (p=0.005) and to 13.5 (p=0.03).Higher mRNA expression was found on gd 10.5 and was different from gds 13.5 (p=0.048) and 17.5 (p=0.009).At D on gd 7.5 was greater than those on gds 10.5 (0,012) and 13.5 (0,032).The up-regulation of Mif coincides with the stage that placenta assumes its four-layered organization and the fetal blood circulation begins,This temporal tissue-specific distribution and expression data suggests that Mif may play a modulator role in the onset of placentation or in it adaptation to the uterine environment

Orientador: Claudia Maria Bertan Membrive / Resumo: Em bovinos, o 17β-estradiol (17β-E2) estimula a expressão de receptores de estradiol (ER) e ocitocina (OXTR) no endométrio. A ativação de OXTR induz a ativação de uma complexa cascata que resulta na síntese de PGF2α. A hipótese é que o tratamento com 17β-E2, 15 dias após o estro (D15), modula a expressão gênica das proteínas quinase (PKC) e fosfolipase A2 (PLA2), ambas envolvidas na síntese de PGF2α e dependentes de cálcio. Objetivou-se neste estudo determinar os efeitos do 17β-E2 na abundância de trancritos (PKCα, PKCβ, PLA2G4, AKR1B1, AKR1C4 e PTGS2) diretamente envolvidos na síntese de PGF2α. Novilhas (N=50), não prenhes, cíclicas, foram sincronizadas pela inserção de um dispositivo de liberação intravaginal contendo 0,558g de progesterona (P4), pela administração de 1 mg de benzoato de estradiol e 0,075 mg de D-Cloprostenol, ambos intramuscular (IM). Após 6 dias, foi injetado 0,075 mg de D-Cloprostenol, IM. Após 48 horas, o dispositivo contendo P4 foi removido e 0,150 mg de D-Cloprostenol foi administrado IM. Nesta ocasião, um adesivo foi inserido na base da cauda para a identificação dos estros (Boviflag Red Estrus Detector - ABS Pecplan) e observações de estro foram realizadas nos próximos 4 dias. Participaram do experimento somente novilhas identificadas em estro (D0 = dia do estro) e que ovularam (N=46). Entre D14 e D23, a área do corpo lúteo (CL; cm2), fluxo sanguíneo (%) e as concentrações plasmáticas de progesterona (P4) foram avaliadas diariamente. No D15, as novi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In cattle, 17β-estradiol (17β-E2) stimulates expression of estradiol (ER) and oxytocin receptor (OXTR) in the endometrium. The activation of OXTR leads to the induction of a complex cascade of molecular activation resulting in PGF2α synthesis. The hypothesis was that 17β-E2 treatment on day 15 (D15) after estrus modulates the gene expression of protein kinase (PKC) and phospholipase A2 (PLA2), both directly involved in the synthesis of PGF2α and calcium dependent. The aim of this study was to determine the effects of 17β-E2 on the abundance of key transcripts (PKCα, PKCβ, PLA2G4, AKR1B1, AKR1C4 and PTGS2) involved in PGF2α signaling and synthesis. Nelore heifers (N=50), don't pregnant, cyclic were synchronized by insertion an intravaginal release device containing 0.558g of progesterone (P4), and by the administration of 1 mg of estradiol benzoate and 0.075 mg de D-Cloprostenol, both intramuscularly (IM). After 6 days, 0.075 mg D-Cloprostenol was injected, IM. After 48 hours the P4 device was removed and 0.150 mg D-Cloprostenol was administered IM. On this occasion, an adhesive was inserted at the base of the tail for the identification of estrus (Boviflag Red Estrus Detector - ABS Pecplan) and estrous observation were made in the next 4 days. Participated in the experiment only the heifers identified in estrus (D0 = day of estrus) that ovulated (N=46). Between D14 and D23, corpus luteum (CL) area (cm2), blood flow (%), and progesterone (P4) plasmatic concentrations were eval... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Agnaldo Lopes da Silva Filho / Resumo: Introdução: O câncer de endométrio (CE) é a neoplasia ginecológica mais comum em países desenvolvidos, e tem um comportamento heterogêneo sob o aspecto clínico, biológico, e morfológico, com taxas de recorrência de 15 a 20% após a cirurgia. Este estudo avaliou, a associação entre a proteína 3 de ligação ao mRNA com fator de crescimento insulina símile II (IMP3), e fatores prognósticos e morfológicos do CE. Métodos: Realizou-se um estudo retrospectivo tipo transversal analítico, com avaliação anátomo-clínica em 79 pacientes com CE, com 70 casos de adenocarcinoma-endometrióide (ACEE) e 9 casos de carcinoma seroso, entre 1992 e 2010. Setenta e quatro amostras de endométrio benigno, obtidas de pacientes com patologias benignas (mioma e pólipo), foram utilizadas como controle. A expressão da IMP3 foi avaliada por imunohistoquímica e quantificada em intensidade e extensão, e então associada a fatores morfológicos e prognósticos, e claudinas (CLDNs) 3 e 4, receptor de estrogênio (ER) e receptores de progesterona (PR), p53 e KI-67. Resultados: Foi evidenciada associação entre a expressão da IMP3 no carcinoma seroso, em comparação com o ACEE, tanto em intensidade (p=0,044) quanto em extensão (p<0,001), bem como nos seguintes fatores prognósticos: grau de diferenciação (p =0,024; p<0,010), estadiamento (p<0,001; p<0,001), metástase (p=0,002; p<0,001). A expressão de IMP3 foi significativa em extensão (p=0,002), nos tumores de endométrio quando comparados aos controles. Houve associação... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Orientador: José Luiz Morais Vasconcelos / Banca: Ciro Moraes Barros / Banca: José Buratini Junior / Banca: Mario Binelli / Banca: Paula de Carvalho Papa / Resumo: O objetivo desse experimento foi avaliar a histomorfometria uterina, a expressão gênica endometrial de ER, PR, OTR, COX-1 e COX-2, e a expressão protéica de ER e PR (porcentagem de núcleos positivos e intensidade de coloração dos núcleos positivos, em unidades arbitrárias [UA], à imunohistoquímica) em vacas em anestro ao longo do desenvolvimento da onda folicular. Vacas Nelore primíparas em anestro pós-parto foram avaliadas diariamente por ultrassonografia ovariana, visando acompanhar o desenvolvimento folicular, e submetidas à histerectomia quando o folículo dominante atingiu o diâmetro de 7,0 mm (FP; n = 4), 8,5 mm (FM; n = 4) ou 10,0 mm (FG; n = 4). Um grupo adicional (PRO; n = 4) consistiu em vacas submetidas a remoção de bezerros (RB; 48 h) quando o folículo dominante atingiu o diâmetro de 9,5 mm e histerectomizadas ao final da RB. Os dados foram analisados pelo PROC GLM do programa SAS. A concentração sérica de estradiol no dia da histerectomia foi maior nas vacas do grupo PRO em relação aos demais grupos (FP: 0,7 pg/mL; FM: 0,8 pg/mL; FG: 1,1 pg/mL; PRO: 2,9 pg/mL; P < 0,05). Não houve efeito de grupo (P > 0,1) nas variáveis histomorfométricas e na expressão gênica endometrial de ER, PR, OTR, COX-1 e COX-2. As vacas do grupo PRO apresentaram maior intensidade de coloração dos núcleos positivos para ER nas células epiteliais glandulares superficiais (FP: 75,9 UA; FM: 75,2 UA; FG: 71,5 UA; PRO: 88,5 UA), intensidade de coloração dos núcleos positivos para PR nas células epiteliais glandulares profundas (FP: 70,2 UA; FM: 73,1 UA; FG: 69,2 UA; PRO: 85,7 UA) e porcentagem de núcleos positivos para PR no estroma subepitelial superficial (FP: 58,2%; FM: 58,0%; FG: 57,3%; PRO: 63,4) em relação às vacas dos demais grupos (P < 0,05). As vacas dos grupos FG e PRO apresentaram maior porcentagem de núcleos positivos para ER no estroma... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to evaluate the uterine histomorphometry, gene expression of ER, PR, OTR, COX-1 and COX-2, and protein expressions of ER and PR (percentage of positive nuclei and staining intensity of positive nuclei, in arbitrary units [AU], at immunohistochemistry) in anestrous cows throughout the development of a follicular wave. Primiparous postpartum anestrous Nelore cows were evaluated daily by ovarian ultrasonography and submitted to hysterectomy when the dominant follicle reached the diameter of 7.0 mm (FP; n = 4), 8.5 mm (FM; n = 4), or 10.0 mm (FG; n = 4). An additional group (PRO; n = 4) consisted in cows submitted to temporary weaning (TW; 48 h) when the dominant follicle reached 9.5 mm and hysterectomized at the end of TW. Data were analyzed by PROC GLM of SAS. Serum concentration of estradiol at the day of hysterectomy was greater in cows from PRO group than in cows from the other groups (FP: 0.7 pg/mL; FM: 0.8 pg/mL; FG: 1.1 pg/mL; PRO: 2.9 pg/mL; P < 0.05). There were no effects of group (P > 0.1) on histomorphometrical variables and on endometrial gene expression of ER, PR, OTR, COX-1, and COX-2. Cows from PRO group had greater staining intensity of ER-positive nuclei in shallow glandular epithelium (FP: 75.9 AU; FM: 75.2 AU; FG: 71.5 AU; PRO: 88.5 AU), staining intensity of PR-positive nuclei in deep glandular epithelium (FP: 70.2 AU; FM: 73.1 AU; FG: 69.2 AU; PRO: 85.7 AU), and greater percentage of PR-positive nuclei in shallow subepithelial stroma (FP: 58.2%; FM: 58.0%; FG: 57.3%; PRO: 63.4%) than cows from the other groups (P < 0.05). Cows from FG and PRO groups had a greater percentage of ER-positive nuclei in deep subepithelial stroma than cows from the other groups (FP: 76.0%; FM: 76.4%; FG: 83.6%; PRO: 86.1%; P < 0.05). In the other endometrial areas, the protein expressions of ER and PR were similar among groups. We concluded that in anestrous... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Julio Lopes Sequeira / Banca: Alessandre Hataka / Banca: Noeme Sousa Rocha / Resumo: O presente trabalho teve por objetivos avaliar os graus de fibrose endometrial das éguas, especificando por técnicas histoquímicas os tipos de colágeno e sua proporção nas lesões crônicas, além de verificar por método imunoistoquímico a expressão e distribuição das metaloproteinases (MMP) 2 e 9 e um dos seus inibidores - TIMP-1 - nos processos crônicos endometriais. Foram utilizadas 82 biópsias endometriais classificadas histologicamente de acordo com Kenney e Doig (1986) e segundo as definições de Ricketts & Alonso (1991) para endometrite crônica infiltrativa e endometrose. A avaliação do colágeno foi realizada pelos métodos histoquímicos Tricrômico de Masson, Reticulina e Picrosirius Red. Estudo morfométrico da fibrose periglandular foi realizado utilizando-se a técnica histoquímica do Picrosirius Red. Os resultados mostraram que nos endométrios portadores de endometrite severa há deposição de colágeno do tipo III e do tipo I, sendo este predominante. Não houve diferença significativa na extensão da fibrose periglandular entre as endometrites crônicas infiltrativas e endometroses. Tanto no endométrio hígido como nas endometrites crônicas foi observada imuno-reatividade para as enzimas estudadas. A reação imunoistoquímica para MMP-2 foi localizada no epitélio luminal, glandular, parede vascular e células estromais. MMP-9 e TIMP-1 mostraram marcação mais difusa, sendo também observadas nas células inflamatórias e endoteliais. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the degrees of endometrial fibrosis in mares, specifying the types of collagen in the chronical lesions and its ratio by histochemical analysis and, the expression and distribution of matrix metalloproteinases (MMP) 2, -9 and one of its inhibitors - TIMP-1 - in the endometrial chronic processes by means of immunohistochemistry. Eighty-two biopsies of chronic endometritis were classified according to Kenney and Doig (1986) and definitions of Ricketts & Alonso (1991) for chronic infiltrative endometritis and endometrosis. The collagen evaluation was made by Massonþs trichrome, Reticulin and Picrosirius Red staining methods. The endometrial periglandular fibrosis morfometric analysis was carried out by using Picrosirius Red stained slides. Deposition of type III collagen and type I collagen was seen in severe endometritis with type I predominance. The chronic infiltrative endometritis and endometrosis didn't show significant difference in the extension of periglandular fibrosis. Immunoreactivity of MMP-2, MMP-9 and TIMP-1 was detected in healthy endometrium as in severe chronic endometritis. The luminal epithelium, glandular epithelium, vascular wall and stromal cells expressed MMP-2. MMP-9 and TIMP-1 had shown diffuser marking, and were as well observed in the inflammatory cells and the endothelium. / Mestre

INTRODUÇÃO: A endometriose é doença ginecológica prevalente, com intervalo de tempo longo entre o início dos sintomas e o diagnóstico definitivo. A endometriose profunda intestinal se apresenta com sintomas mais severos, e maior morbidade cirúrgica. Um método minimamente invasivo para o diagnóstico precoce se faz necessário, e impediria a progressão para as formas mais profundas da doença. Estudos de biomarcadores com técnicas em proteômica podem trazer melhor entendimento das bases moleculares da doença, possibilidade de diagnóstico precoce, e do desenvolvimento de terapias-alvo. OBJETIVO: Comparar o perfil de expressão de proteínas do endométrio tópico entre pacientes saudáveis e com endometriose profunda intestinal, por técnica de espectrometria de massas shotgun. MÉTODOS: Estudo caso-controle exploratório, com total de 24 pacientes divididas em dois grupos: pacientes com endometriose profunda intestinal com comprovação cirúrgica, e pacientes do grupo controle saúdavel submetidas a cirurgia de laqueadura tubárea. Amostras de endométrio tópico foram obtidas por meio de auxílio de catéter de aspiração. As amostras foram submetidas a extração, digestão, dessalinização peptídica, e analisadas seguindo uma abordagem de espectrometria de massas shotgun, label-free de DDA (aquisição dependente de dados), utilizando o instrumento Orbitrap Elite (Thermo Fisher, EUA). RESULTADOS: a análise proteômica dos resultados foi realizada através do software Progenesis QI (Nonlinear Dynamics, Newcastle upon Tyne, UK), e resultou em um painel de 595 proteínas diferencialmente expressas entre os grupos controle e endometriose. Os resultados revelaram diferentes moléculas de acordo com a fase do ciclo menstrual, e o estádio da doença. As principais proteínas com expressão aumentada no grupo de pacientes com endometriose incluíram SETSIP, SRRM2, CAPS, H2AFV e SAFB, enquanto moléculas reguladas negativamente incluíram BPIFB1, FAM184A, SLPI, PIGR, JCHAÍNA, HLA-A e LTF. As proteínas diferenciais entre os grupos apresentaram o câncer como principal doença associada (p - valor de 4,14E-02 - 3,91E-08), de acordo com as análises realizadas pelo software IPA (Ingenuity Pathway Analysis System; Ingenuity Systems, Redwood City, CA, USA). As principais proteínas com expressão aumentada nos estádios mais avançados da doença foram CHMP4B, DES, EIF3I, CDH13, LIMS1, HSPA4, HSP90AB1, TUBB, NPM1, MYL6, e foram descritas relacionadas a metástases e pior prognóstico de diversos tipos de cânceres. CONCLUSÃO: CHMP4B, DES, EIF3I, CDH13, LIMS1, HSPA4, HSP90AB1, TUBB, NPM1, MYL6 são proteínas com expressão aumentada no endométrio das pacientes portadoras de endometriose profunda intestinal em estádios avançados. O presente estudo revelou proteínas diferencialmente expressas na endometriose em associação com diversos tipos de cânceres. Os achados constituem possíveis marcadores para o desenvolvimento de técnicas para o diagnóstico minimamente invasivo, e potenciais alvos terapêuticos para a doença / INTRODUCTION: Endometriosis is a prevalent gynecological disease, with a long time elapsed from onset of symptoms to definitive diagnosis. Deep intestinal endometriosis presents with more severe symptoms, and greater surgical morbidity. A minimally invasive method for early diagnosis becomes necessary and would prevent progression to the deeper presentations of the disease. Studies of biomarkers with proteomics techniques can provide a better understanding of the molecular basis of the disease, the possibility of early diagnosis, and the development of targeted therapies. OBJECTIVE: To compare the expression of eutopic endometrial proteins between healthy and deep intestinal endometriosis patients, using a shotgun mass spectrometry technique. METHODS: An exploratory case-control study with a total of 24 patients divided in two groups: patients with intestinal deep endometriosis with surgical confirmation, and patients in the healthy control group submitted to tubal ligation surgery. Eutopic endometrial samples were obtained by aspiration catheter. The samples were submitted to extraction, digestion, peptide desalting and analyzed using a DDA (data-dependent acquisition) label-free mass spectrometry approach by the Orbitrap Elite instrument (Thermo Fisher, USA). RESULTS: Proteomic analysis was performed using the Progenesis QI software (Nonlinear Dynamics, Newcastle upon Tyne, UK) to profile 595 differentially expressed proteins between the control and endometriosis groups. The results revealed different molecules according to the phase of the menstrual cycle and stage of disease. Top upregulated molecules included SETSIP, SRRM2, CAPS, H2AFV, and SAFB, whereas downregulated molecules included BPIFB1, FAM184A, SLPI, PIGR, JCHAIN, HLA-A, and LTF. Among top diseases associated molecules between groups were related to cancer (p - value of 4.14E-02 - 3.91E-08), according to the analysis performed by IPA software (Ingenuity Pathway Analysis System, Ingenuity Systems, Redwood City, CA, USA). Top upregulated proteins among patientes with advanced stage of endomeriosis were CHMP4B, DES, EIF3I, CDH13, LIMS1, HSPA4, HSP90AB1, TUBB, NPM1, MYL6. Those proteins were related to metastasis and poor survival of several cancer types. CONCLUSION: CHMP4B, DES, EIF3I, CDH13, LIMS1, HSPA4, HSP90AB1, TUBB, NPM1, MYL6 are among the top upregulated proteins in patients with advanced stage of deep intestinal endomeriosis. The present study revealed proteins differentially expressed in endometriosis as potential biomarkers for the development of techniques for minimally invasive diagnosis, and potential therapeutic targets for the disease

O estradiol (E2) exerce papel fundamental no desencadeamento da luteólise nos ruminantes. A redução das concentrações de E2 que se segue a ablação dos folículos retarda a luteólise enquanto que aplicações de E2 no final da fase luteínica estimulam a secreção de prostaglandina-F2&alpha; (PGF2&alpha;), induzindo a luteólise. O E2 pode preparar bioquimicamente o endométrio de forma que a progesterona (P4) possa estimular a secreção de PGF2&alpha;. Para esse trabalho foi utilizado um antagonista de P4 (RU486) no intuito de se estudar efeitos da P4 em associação com o E2 na produção de PGF2&alpha;. Foram conduzidos 2 experimentos com vacas holandesas em final da fase luteínica. No primeiro experimento, 2 grupos (n=4) receberam respectivamente RU486 (3mg/kg)+E2 (3mg) e placebo+E2. O uso do RU486 não inibiu a produção de PGFM (metabólito da PGF2&alpha;) e sim aumentou-a. O E2 estimulou a produção de PGFM. Verificou-se também que o etanol (ETOH) utilizado como solvente para o RU486 provocou forte pico de liberação de PGFM. No experimento 2 fez-se necessário checar a efetividade da ação do ETOH nos resultados obtidos. Animais foram divididos em 3 grupos (n=3) que receberam 0,00; 0,03 e 0,06mL de ETOH/kg de peso vivo. Uma hora após a aplicação do ETOH todos receberam E2 (3mg). O ETOH e o E2 voltaram a estimular a produção de PGFM. A baixa especificidade do RU486, a possível ativação de receptores de P4 pelo próprio RU486 e/ou ação do LH associado ao E2 podem ter estimulado a liberação de PGFM. Porém pouco pôde-se concluir sobre o pico de PGFM ocasionado pelo ETOH. / Estradiol (E2) is essential for triggering luteolysis in ruminants. The low E2 concentrations after follicular ablation prolongs luteolysis instead of E2 injections in late luteal phase stimulate prostaglandin F2&alpha; (PGF2&alpha;) and luteolysis. The E2 could act in endometrium avoiding progesterone (P4 ) to stimulate PGF 2&alpha; secretion. A P4 antagonist (RU486) was used for it. Holstein cows in late luteal phase where used for those 2 experiments. First experiment, 2 groups (n=4) received respectively RU486 (3mg/kg)+E2 (3mg) and placebo+E2 Ru486 increased PGFM (PGF2&alpha; metabolite). E2 stimulated PGFM production. Ethanol (ETOH) used as a RU486 vehicle strongly stimulated PGFM. In experiment 2 the effectivity of ETOH was studied. Animals were share into 3 groups (n=3) receiving 0,00; 0,03 e 0,06mL of ETOH/kg. All animals received E2 (3mg) 1hour after ETOH injection. Once more, both ETOH and E2 stimulated PGFM releasing. The low RU486 specificity, the possible P4 receptor activation by the RU486 itself and/or the LH/E2 association could be able to stimulate PGFM release. The PGFM stimulus by the ETOH injection is not well understood.

A ultra-sonografia é essencial para a condução de casos que irão ser submetidos aos tratamentos de reprodução assistida. Apesar de inúmeras pesquisas, não se mostrou capaz de predizer o sucesso do procedimento e apenas a medida da espessura endometrial tem algum valor prognóstico. Com a introdução da ultra-sonografia tridimensional, cresceu o interesse no assunto, na esperança que a possibilidade de uma avaliação espacial mais exata dos tecidos e da vascularização pudesse melhorar nossa habilidade de predizer a resposta à estimulação ovariana ou determinar a receptividade do meio endometrial. Objetivamos nesta revisão apresentar os resultados dos trabalhos envolvendo a ultra-sonografia tridimensional e a reprodução assistida, e suas possíveis aplicações nestes procedimentos. / Ultrasonography is essential to guide the cases that will be submitted to assisted reproduction. In spite of the great amount of researchs, it is not able to predict the sucess of the treatment and only the endometrial thicknesshas some prognostic value. With the introduction of three-dimensional ultrasound, therewas a new curiosity incoming, in the expectancy that the possibility of volume assessment of tissues and its vascularization could improve our ability to determine endometrial receptivity or to predict the patient response to ovarian stimulation. In this review we intend to present the results of researchs about three-dimensional ultrasound and assisted reproduction as well as its possible clinical aplications.

Introdução: A CALPAIN5faz parte da família das cisteínas proteases e está relacionada com a regulação de inúmeras funções celulares, entre elas a diferenciação e a apoptose. Estudos com microarrays identificaram a CALPAIN5como um alvo da açãotranscripcional do HOXA10em úteros de camundongos. Objetivos: No presente estudo avaliou-se a regulação da CALPAIN5pelo HOXA10 em células endometriais, a expressão da CALPAIN5no endométrio durante todo o ciclo menstrual, e na decídua do primeiro e terceiro trimestres de gestações normais, e o padrão de expressão anormal desse gene na pré-eclampsia e endometriose. Material e Métodos: Foram obtidas dez biópsias endometriais (cinco na fase proliferativa e cinco na fase secretora) depacientes férteis. Biópsias de lesões de endometriose, confirmadas por histopatologia,foram retiradas de dez mulheres durante procedimento vídeo-laparoscópico. Amostras de decídua foram coletadas em três diferentes ocasiões: três amostras do primeiro trimestre,cinco amostras no terceiro trimestre e cinco amostras de pacientes com pré-clâmpsia no terceiro trimestre. Identificou-se a proteína da CALPAIN5utilizando imunohistoquimica (IHC) no endométrio eutópico, ectópico e na decídua. Os resultados da IHC foram quantificados, a partir dedois diferentes observadores, utilizando-se Hscorepara células estromais, epiteliais e deciduais. Transfeccionou-se 4,0µg de pcDNA/HOXA10e 20µM siRNA/HOXA10em cultura de células estromais endometriais humanas (HESC) e células epiteliais endometriais humanas (Ishikawa), assim como os seus respectivos controles. A transfecção foi realizada em quadruplicata quando a cultura de células apresentava confluência de 60-70%. Após 48 horas do procedimento o RNA foi extraído, que deu origem a DNA complementar e após uma reação de cadeia da polimerase em tempo real (PCR em tempo real) foi realizada, em triplicata, para determinar o padrão de expressão do HOXA10e CALPAIN5. A análise estatística foi realizada utilizando-se os testes ANOVA com test pos-hocpara o Hscoree teste tpara os resultados da PCR em tempo real. Resultados: CALPAIN5 é expressadurante todo o ciclo menstrual tanto nas células estromais como epiteliais glandulares, e está mais expressa na decídua do primeiro trimestre. Na endometriose CALPAIN5 se mostrou pouco evidente em ambas as células endometriais (estromais e glandulares), quando comparadas de forma geral com as células endometriais eutópicas das pacientes controles, sendo que sua expressão reduziu em 50% (p<0,05). Nas decíduas de pacientes com pré-eclampsia CALPAIN5 apresentou-se mais expressa que no grupo controle (p<0,05). Nas célulasestromais endometriais o pcDNA/HOXA10aumentou a expressão da CALPAIN5em 11 vezes (p<0,05) e a transfecção com siRNA/HOXA10reduziu a expressão da CALPAIN5em 23 vezes (p<0,05). Conclusão: O HOXA10regula a expressão genética da CALPAIN5nas células endometriais. CALPAIN5 é expressa no endométrio normal e tem sua expressão aumentada nas células deciduais do primeiro trimestre em relação àsfases do ciclo menstrual. CALPAIN5 está pouco expressa no endométrio ectópico na endometriose e mais expressa nas células deciduais na pré-eclampsia grave quando comparados com seus respectivos controles. / BACKGROUND: CALPAIN5is member of the calpain-like cystein protease family and has been implicated in the regulation of a variety of cellular functions, including differentiation and apoptosis. Research with microarray screen identified CALPAIN5as target of HOXA10 transcriptional control in murine endometrium. OBJECTIVES: We propose in this study to demonstrate regulated CALPAIN5expression in endometrium, and 3rd trimester deciduas and an abnormal expression pattern of this gene in pre eclampsia and endometriosis . MATERIALS & METHODS: Ten endometrial biopsies (5 proliferative phase and 5 secretory phase) were obtained from fertile controls. Histologically confirmed biopsies of endometriosis were obtained from 10 women atthe time of laparoscopy. Five third trimester decidual samples and 3 first trimester deciduas samples from controls, and five 3rd trimester decidual samples from women with pre-eclampsia were obtained at the time of labor. Immunohistochemistry (IHC) was used to identify CALPAIN5protein in eutopic and ectopic endometrium as well as in decidua. IHC was performed with CALPAIN5polyclonal antibody. IHC results were assessed by 2 evaluators blinded to the study groups, and H-SCORES were determined for the stroma, glands and decidua. The human endometrial stromal cell line, HESC, the human endometrial epithelial cell line, Ishikawa were transfected with either 4.0µg pcDNA/HOXA10or 20µM HOXA10siRNA; transfection with empty pcDNA vector or nonspecific siRNA served as respective controls. Cells were transfected in quadruplicate at 60-70% confluence. Forty eight hours after the transfection total RNA was isolated. qRT-PCR was performed in duplicated to determine expression levels of HOXA10and CALPAIN5in each group. Statistical analysis was performed with ANOVA test pos-hocto Hscoreand ttest for real time PCRRESULTS: CALPAIN5was expressed in endometrial stromal and glandular cells throughout the menstrual cycle, and increased expression was noted in the first trimester decidua phase. There was a decrease in CALPAIN5expression in both stromal and glandular cells in endometriosis to 50% ofthat seen in fertile controls (p<0.05). CALPAIN 5 was also expressed in 3rd trimester decidua obtained from pre-eclamptics at higher levels than 3rd trimester control decidua (p<0.05). The regulatory relationship between HOXA10 and CALPAIN5was established by transient transfection analysis. CALPAIN5 gene expression increased 11-fold (p<0.05) after pcDNA/HOXA10transfection of the HESC, and decreased 23-fold (p<0.05) after HOXA10siRNA treatment. CONCLUSIONS: CALPAIN5 expression is regulated by HOXA10. CALPAIN5is expressed in normal endometrium and at upregulated in the decidua ofwomen with pre-eclampsia. CALPAIN5 expression is decreased in endometriosis compared to eutopic endometrium.

Introdução: As células tronco podem contribuir na patogênese da endometriose. Os objetivos deste estudo foram avaliar e comparar a expressão de genes relacionados à atividade das células tronco no endométrio tópico (Et), peritônio normal (PN) e nos implantes de endometriose peritoneal superficial e profunda (EPS/EPP) de mulheres inférteis com endometriose. Métodos: Vinte e quatro amostras de Et, PN, EPS e EPP foram obtidas durante laparoscopia de seis pacientes. A expressão de 84 genes relacionados à atividade de células tronco foi avaliada pela técnica de transcrição reversa e reação em cadeia de polimerase (RT-PCR). Resultados: Todos os genes foram expressos no Et, PN, EPS e EPP. Não houve diferença entre o PN, EPS e EPP. Não houve diferença quando as lesões de EPS e EPP foram comparadas entre si. Comparados ao Et, 24, 49 e 45 genes foram diferencialmente expressos no PN, EPS e EPP, respectivamente. Destes genes diferencialmente expressos 23 eram comuns. A análise funcional dos 23 genes evidenciou 5 genes comumente superexpressos (genes reguladores do ciclo celular; comunicação celular e marcador de células embrionárias) e 18 subexpressos (fatores de crescimento; marcadores de células neurais; marcador de auto-renovação; marcador de células embrionárias; divisão celular simétrica e assimétrica; marcadores de células hematopoiéticas; comunicação celular, via de sinalização Notch; via de sinalização Wnt; marcador de células mesenquimais; marcador metabólico e moduladores do cromossomo e da cromatina). Conclusões: Os genes relacionados à atividade de células tronco estavam expressos no endométrio tópico, nas lesões de endometriose peritoneal superficial e profunda e no peritônio normal. A expressão gênica foi mais semelhante no peritônio normal e nas lesões de endometriose peritoneal superficial e profunda, comparadas ao endométrio tópico. Não se observaram diferenças significantes na expressão gênica entre as lesões de endometriose peritoneal superficial e profunda / Introduction: Stem/progenitor cells may contribute to the pathogenesis of endometriosis. The objective of this study was to identify and compare expression of genes regulating SPCs function in eutopic endometrium (EuE), normal peritoneum (NP) and peritonea superficial and deep infiltrative endometriosis (SE/DIE) of women with pelvic endometriosis. Methods: Twenty-four biopsies from EuE, NP, SE and DIE were obtained during laparoscopy from 6 patients. The expression of 84 stem cell-related genes was performed using a RT-PCR-based analysis. Results: All genes analyzed were expressed in the EuE, NP, SE and DIE. No difference was shown between SE, DIE and NP. There was no difference when the SE and DIE were compared to each other. Compared to EuE, 24, 49 and 49 genes were differentially expressed in the NP, SE, and DIE, respectively. Of these differentially expressed genes 23 were the same. Funcional analisis demonstrated that 5 genes were commonly overexpressed (cell cycle regulators; cell communication and embryonic cell marker) and 18 underexpressed (growth regulators; neural cell markers; self-renewal marker; embryonic cell marker; symmetric and asymmetric stem cell division; hematopoietic cell markers; cell communication; Wnt pathway; Notch pathway; mesenchymal cell marker; metabolic marker; chromosome and chromatin modulators). Conclusions: Stem cell related genes were expressed in the human endometrium, peritoneal superficial and deep endometriosis lesions and in the normal peritoneum. There was no difference when superficial and deep endometriosis were compared to each other.