Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:07Z : No. of bitstreams: 1 Publico-12659.pdf: 1883382 bytes, checksum: 33bb0f719078a000b15563f9e2debf90 (MD5) / A familia de genes Wnt esta envolvida na carcinogenese de diversos tecidos e na embriogenese. Para avaliar as vias Wnt canonica e nao-canonica no endometrio atrofico e no cancer de endometrio, avaliamos a expressao imuno-histoquimica do Wnt1, Frizzled-1 (FZD1), Wnt5a, Frizzled-5 (FZD5) e ƒÀ-catenina. O tecido endometrial foi retirado de pecas cirurgicas de pacientes operadas entre 1995 e 2005 na Escola Paulista de Medicina . UNIFESP e foram divididas em dois grupos: grupo A, endometrio atrofico (n=15) e grupo B, adenocarcinoma de endometrio (n=45). A imunorreacao do Wnt1, FZD1, Wnt5a, FZD5 and ƒÀ-catenina foi analisada em escores em cada grupo, individualmente. A expressao do Wnt1, FZD1 e Wnt5a nao teve associacao significante entre os grupos. Associacao significante foi observada entre os grupos para a expressao do FZD5 (p = 0,001). A proporcao do FZD5 positivo foi significativamente maior no grupo A (80,0%) comparado ao grupo B (31,1%). Analisando a curva de sobrevida para o FZD5 no grupo B, nao encontramos associacao significante entre as mulheres positivas e negativas. A expressao da scatenina nao foi significante, sendo a expressao para os grupos A e B 100% e 95.6%, respectivamente (p = 1,000). FZD5 tem menor expressao no adenocarcinoma de endometrio tipo I quando comparado ao endometrio atrofico. / The Wnt family is involved in tumorigenesis of several tissues as well in embriogenesis. In order to analize the canonical and noncanonical Wnt pathway in atrophic endometrium and endometrial adenocarcinoma, we evaluated the immunohistochemical expression of Wnt1, Frizzled-1 (FZD1), Wnt5a, Frizzled-5 (FZD5) and ƒÀ-catenin. Endometrial specimens were obtained from surgeries performed between 1995 and 2005 and the patients were divided in two groups: Group A, atrophic endometrium (N = 15); Group B, endometrial adenocarcinoma (N = 45). Immunoreactivity for Wnt1, FZD1, Wnt5a, FZD5 and ƒÀ-catenin was scored for each group. For the expression of Wnt1, FZD1 and Wnt5a, no significant association was observed between the groups. A significant association was observed between the groups for the FZD5 expression (p = 0.001). The proportion of FZD5 positive women was significantly higher for group A (80.0%) compared to group B (31.1%). Regarding the survival curve for FZD5 at group B, we found no significant association between positive and negative women. No significant association was observed between s-catenin expression and the patient group since the expression for groups A and B were 100% and 95.6%, respectively (p = 1.000). FZD5 is downregulated in type I endometrial adenocarcinoma when compared to atrophic endometrium. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-15Bitstream added on 2014-06-13T19:43:00Z : No. of bitstreams: 1 abrao_f_me_botfm_prot.pdf: 3819021 bytes, checksum: 286b7ab59b9920e305887bd1c6365981 (MD5) / Fundação para o Desenvolvimento Médico e Hospitalar (Famesp) / Validar a polipectomia por vídeo-endoscopia como método terapêutico para pacientes com esterilidade, com sangramento uterino anormal e assintomáticas com pólipos endometriais. Pacientes e Métodos:Trabalho analítico e retrospectivo, cujos dados foram obtidos através de consultas aos prontuários de pacientes já submetidas a histeroscopias diagnósticas e cirúrgicas, no Setor de Endoscopia Ginecológica da Disciplina de Ginecologia da Faculdade de Medicina de Botucatu (UNESP) e da Clínica de Ginecologia Dr. Feres Abrão de Marília, atendidas entre o período de 2004 a 2005. Foram estudadas 208 mulheres submetidas ao exame histeroscópico com diagnóstico de pólipo endometrial. As pacientes foram distribuídas em 3 grupos, assim denominados: Grupo I (n=54), pacientes com queixa de esterilidade, Grupo II (n=59), pacientes com queixa de sangramento uterino anormal, Grupo III (n=95), pacientes assintomáticas com ultrassom vaginal anormal. Resultados: Pacientes do grupo I (Esterilidade), a faixa etária situou-se com maior incidência entre 31 e 35 anos, o peso situou-se entre 66,0 e 70,0 kg, o IMC de 20-25 (normal) em 50% dos casos, predominou a raça branca em 88,88%, não fumantes em 98,10%, hipertensão arterial em 1,85%, gestação 0 (G0) em 77,77%, associação de pólipo cervical e endometrial em 40%. A localização dos pólipos endometriais foi em 61,10% na parede anterior e posterior do útero. A biópsia orientada encontrou 11,11% de pólipos endometriais, sendo 100% benignos e o anátomo patológico, após polipectomia, encontrou 98,14% de pólipo endometriais benignos e pólipos endometriais com atipias em 1,85%. A esterilidade (1ª) ocorreu em 77,77% e secundária (2ª) em 33,33%, a gravidez ocorreu em 31,4% das pacientes no primeiro ano após a polipectomia e o ultrassom vaginal apresentou normalidade em 24% dos casos... / To evaluate polypectomy by video-endoscopy as a method of treating patients with abnormal uterine bleeding and asymptomatic endometrial polyps. Patients and Methods: Retrospective analysis of data obtained from medical records of patients who had already undergone diagnostic and surgical endoscopies at The Gynaecology Discipline of Botucatu Medical School (UNESP), Botucatu, and The Dr. Feres Abrão Gynaecology Clinic, Marilia, SP, Brazil in 2004 and 2005. We studied 208 women submitted to hysteroscopy exam with a diagnosis of endometrial polyp. They were distributed into three groups: Group I (n=54) sterility; Group II (n=59) abnormal uterine bleeding; and Group III (n=95) asymptomatic with abnormal vaginal ultrasound. Results: In Group I (sterility) the most common age group was 31-35 years and weight between 66.0 and 70.0kg; 50% had BMI of 20-25 (normal), 88.88% were white, 98.10% were non-smokers, and 1.85% had arterial hypertension. Number of gestations was zero (G0) in 77.77%, 40% had associated cervical and endometrial polyps. In 61.10% of cases endometrial polyps were on the anterior and posterior uterine walls; guided biopsy found 11.11% of endometrial polyps which were all benign, and after polypectomy, anatomic pathology found benign polyps in 98.14% and atypical polyps in 1.85%. Primary sterility occurred in 77.77% and secondary in 33.33%, pregnancy in the first year after polypectomy occurred in 31.4%, and ultrasound was normal in 24% of cases. In Group II (abnormal uterine bleeding) the most common age group was 41-45 years and weight between 66.0 and 70.0kg; 49.15% had BMI 26-30 (overweight), 88.19% were white, 91.52% were non-smokers, and 10.16% had systemic arterial hypertension...(Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Rogério Dias / Banca: Jorge Nahas / Banca: Reginaldo Guedes / Resumo: Validar a polipectomia por vídeo-endoscopia como método terapêutico para pacientes com esterilidade, com sangramento uterino anormal e assintomáticas com pólipos endometriais. Pacientes e Métodos:Trabalho analítico e retrospectivo, cujos dados foram obtidos através de consultas aos prontuários de pacientes já submetidas a histeroscopias diagnósticas e cirúrgicas, no Setor de Endoscopia Ginecológica da Disciplina de Ginecologia da Faculdade de Medicina de Botucatu (UNESP) e da Clínica de Ginecologia Dr. Feres Abrão de Marília, atendidas entre o período de 2004 a 2005. Foram estudadas 208 mulheres submetidas ao exame histeroscópico com diagnóstico de pólipo endometrial. As pacientes foram distribuídas em 3 grupos, assim denominados: Grupo I (n=54), pacientes com queixa de esterilidade, Grupo II (n=59), pacientes com queixa de sangramento uterino anormal, Grupo III (n=95), pacientes assintomáticas com ultrassom vaginal anormal. Resultados: Pacientes do grupo I (Esterilidade), a faixa etária situou-se com maior incidência entre 31 e 35 anos, o peso situou-se entre 66,0 e 70,0 kg, o IMC de 20-25 (normal) em 50% dos casos, predominou a raça branca em 88,88%, não fumantes em 98,10%, hipertensão arterial em 1,85%, gestação 0 (G0) em 77,77%, associação de pólipo cervical e endometrial em 40%. A localização dos pólipos endometriais foi em 61,10% na parede anterior e posterior do útero. A biópsia orientada encontrou 11,11% de pólipos endometriais, sendo 100% benignos e o anátomo patológico, após polipectomia, encontrou 98,14% de pólipo endometriais benignos e pólipos endometriais com atipias em 1,85%. A esterilidade (1ª) ocorreu em 77,77% e secundária (2ª) em 33,33%, a gravidez ocorreu em 31,4% das pacientes no primeiro ano após a polipectomia e o ultrassom vaginal apresentou normalidade em 24% dos casos...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: To evaluate polypectomy by video-endoscopy as a method of treating patients with abnormal uterine bleeding and asymptomatic endometrial polyps. Patients and Methods: Retrospective analysis of data obtained from medical records of patients who had already undergone diagnostic and surgical endoscopies at The Gynaecology Discipline of Botucatu Medical School (UNESP), Botucatu, and The Dr. Feres Abrão Gynaecology Clinic, Marilia, SP, Brazil in 2004 and 2005. We studied 208 women submitted to hysteroscopy exam with a diagnosis of endometrial polyp. They were distributed into three groups: Group I (n=54) sterility; Group II (n=59) abnormal uterine bleeding; and Group III (n=95) asymptomatic with abnormal vaginal ultrasound. Results: In Group I (sterility) the most common age group was 31-35 years and weight between 66.0 and 70.0kg; 50% had BMI of 20-25 (normal), 88.88% were white, 98.10% were non-smokers, and 1.85% had arterial hypertension. Number of gestations was zero (G0) in 77.77%, 40% had associated cervical and endometrial polyps. In 61.10% of cases endometrial polyps were on the anterior and posterior uterine walls; guided biopsy found 11.11% of endometrial polyps which were all benign, and after polypectomy, anatomic pathology found benign polyps in 98.14% and atypical polyps in 1.85%. Primary sterility occurred in 77.77% and secondary in 33.33%, pregnancy in the first year after polypectomy occurred in 31.4%, and ultrasound was normal in 24% of cases. In Group II (abnormal uterine bleeding) the most common age group was 41-45 years and weight between 66.0 and 70.0kg; 49.15% had BMI 26-30 (overweight), 88.19% were white, 91.52% were non-smokers, and 10.16% had systemic arterial hypertension...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-01-24Bitstream added on 2014-06-13T20:59:33Z : No. of bitstreams: 1 reghini_mfs_me_botfmvz.pdf: 448724 bytes, checksum: aab02e07ff9da14fae416999c62b6198 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A endometrite persistente pós-cobertura (EPPC) é uma das principais causas da redução de fertilidade em éguas. Recentes estudos têm demonstrado a importância da imunomodulação da inflamação após a cobertura. O objetivo deste trabalho foi verificar o estímulo do sêmen na resposta inflamatória uterina de éguas resistentes e susceptíveis à endometrite após a inseminação artificial (IA) e propor um novo tratamento a fim de debelar a resposta inflamatória uterina exacerbada, com o uso do plasma rico em plaquetas (PRP), que vem sendo muito utilizado devido à sua ação anti-inflamatória. Foram selecionadas 15 éguas resistentes e 8 susceptíveis à EPPC com base nos seus índices reprodutivos e exames ultrassonográficos e citológicos. A concentração de neutrófilos e de óxido nítrico (ON) no fluido uterino, a citologia exfoliativa uterina e o acúmulo de fluido uterino verificado no exame ultrassonográfico foram analisados nos dois grupos de animais (1) 24 horas antes da IA e (2) 24 horas após a IA com sêmen fresco. No primeiro experimento não houve intervenção medicamentosa, e no segundo as éguas foram tratadas com 20 mL de PRP infundido no útero 4 horas após a IA. As dosagens de ON foram realizadas por reação colorimétrica de Griess em espectrofotômetro, os neutrófilos na secreção uterina foram quantificados com o uso da câmara de Neubauer e a leitura das amostras de citologia foi feita por microscopia óptica utilizando imersão, considerando a porcentagem de neutrófilos/100 células de forma aleatória. Os resultados demonstraram que o sêmen estimula uma resposta inflamatória exacerbada no ambiente uterino das éguas susceptíveis, e que o tratamento local com PRP foi clinicamente efetivo na redução da inflamação uterina nas éguas susceptíveis à endometrite após a IA, observado por meio da redução... / Post breeding endometritis (PBE) is one of the major causes of fertility reduction in mares. Recent reports have been demonstrating the importance of immunomodulation of inflammation after mating. The aim of this study was to verify semen’s stimulus on inflammatory response in mares resistant and susceptible to PBE, and to propose a new treatment to quell the exacerbated uterine inflammatory response against semen, using platelet rich plasma (PRP), which has been widely used due to its anti-inflammatory properties. 15 mares susceptible to PBE and 8 mares resistant to PBE were selected based on their reproductive index, ultrasonographic and cytological examination. The concentration of neutrophils and nitric oxide (NO) in the uterine fluid, exfoliative cytology of the uterus and uterine fluid accumulation observed by ultrasonography were analyzed in both group of animals (1) 24 hours before artificial insemination (AI) and (2) 24 hours after AI with fresh semen. In the first cycle, there was no drug intervention, and in the second cycle mares were treated with 20 mL of platelet rich plasma, infused in uterus 4 hours after AI. NO dosage were performed by colorimetric reaction of Griess with spectrophotometer, neutrophils in uterine fluid were quantified by the use of Neubauer chamber and the lecture of endometrial cytology samples were analyzed by optical microscopy using immersion, considering the percentage of neutrophils/100 cells in an alleatory form. The results showed that semen can stimulate a major inflammatory response inside the uterine environment in susceptible mares, and that the local treatment with PRP was clinically effective in reduction of inflammation on mares susceptible to PBE, by the reduction of uterine fluid examined by ultrasonography, decrease in percentual of... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Marco Antônio Alvarenga / Banca: Regina Kiomi Takahira / Banca: Marcio Teoro do Carmo / Resumo: A endometrite persistente pós-cobertura (EPPC) é uma das principais causas da redução de fertilidade em éguas. Recentes estudos têm demonstrado a importância da imunomodulação da inflamação após a cobertura. O objetivo deste trabalho foi verificar o estímulo do sêmen na resposta inflamatória uterina de éguas resistentes e susceptíveis à endometrite após a inseminação artificial (IA) e propor um novo tratamento a fim de debelar a resposta inflamatória uterina exacerbada, com o uso do plasma rico em plaquetas (PRP), que vem sendo muito utilizado devido à sua ação anti-inflamatória. Foram selecionadas 15 éguas resistentes e 8 susceptíveis à EPPC com base nos seus índices reprodutivos e exames ultrassonográficos e citológicos. A concentração de neutrófilos e de óxido nítrico (ON) no fluido uterino, a citologia exfoliativa uterina e o acúmulo de fluido uterino verificado no exame ultrassonográfico foram analisados nos dois grupos de animais (1) 24 horas antes da IA e (2) 24 horas após a IA com sêmen fresco. No primeiro experimento não houve intervenção medicamentosa, e no segundo as éguas foram tratadas com 20 mL de PRP infundido no útero 4 horas após a IA. As dosagens de ON foram realizadas por reação colorimétrica de Griess em espectrofotômetro, os neutrófilos na secreção uterina foram quantificados com o uso da câmara de Neubauer e a leitura das amostras de citologia foi feita por microscopia óptica utilizando imersão, considerando a porcentagem de neutrófilos/100 células de forma aleatória. Os resultados demonstraram que o sêmen estimula uma resposta inflamatória exacerbada no ambiente uterino das éguas susceptíveis, e que o tratamento local com PRP foi clinicamente efetivo na redução da inflamação uterina nas éguas susceptíveis à endometrite após a IA, observado por meio da redução... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Post breeding endometritis (PBE) is one of the major causes of fertility reduction in mares. Recent reports have been demonstrating the importance of immunomodulation of inflammation after mating. The aim of this study was to verify semen's stimulus on inflammatory response in mares resistant and susceptible to PBE, and to propose a new treatment to quell the exacerbated uterine inflammatory response against semen, using platelet rich plasma (PRP), which has been widely used due to its anti-inflammatory properties. 15 mares susceptible to PBE and 8 mares resistant to PBE were selected based on their reproductive index, ultrasonographic and cytological examination. The concentration of neutrophils and nitric oxide (NO) in the uterine fluid, exfoliative cytology of the uterus and uterine fluid accumulation observed by ultrasonography were analyzed in both group of animals (1) 24 hours before artificial insemination (AI) and (2) 24 hours after AI with fresh semen. In the first cycle, there was no drug intervention, and in the second cycle mares were treated with 20 mL of platelet rich plasma, infused in uterus 4 hours after AI. NO dosage were performed by colorimetric reaction of Griess with spectrophotometer, neutrophils in uterine fluid were quantified by the use of Neubauer chamber and the lecture of endometrial cytology samples were analyzed by optical microscopy using immersion, considering the percentage of neutrophils/100 cells in an alleatory form. The results showed that semen can stimulate a major inflammatory response inside the uterine environment in susceptible mares, and that the local treatment with PRP was clinically effective in reduction of inflammation on mares susceptible to PBE, by the reduction of uterine fluid examined by ultrasonography, decrease in percentual of... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A compreensão dos mecanismos que regulam o endométrio e suas implicações clínicas podem contribuir para melhorar as taxas de implantação do embrião humano. Apesar de muitas proteínas e moléculas influenciarem a receptividade endometrial, sua contribuição coordenada para o processo de implantação do embrião ainda é pouco compreendida. Dentre a complexa rede que guia este processo em direção à preparação de um endométrio receptivo se encontram as citocinas, das quais a interleucina-11 (IL-11) e o fator inibidor de leucemia (LIF) desempenham papel essencial. Estudos demonstram que a interrupção das vias de sinalização celular dessas citocinas prejudica ou mesmo impede a implantação, implicando diretamente na fertilidade feminina. Além disso, a hiperinsulinemia afeta negativamente a fertilidade da mulher. Dentro desse contexto, a metformina, fármaco antidiabético, pode exercer efeitos positivos sobre a expressão da IL-11 e LIF, revertendo o possível prejuízo do excesso de insulina sobre a secreção dessas citocinas. Para avaliar esse efeito, utilizou-se um modelo de cultura primária de células estromais de endométrio humano expostas aos hormônios sexuais femininos estrogênio e progesterona, divididas em grupos: controle, metformina, insulina, e associação insulina e metformina. Utilizando RT-qPCR e ensaio imunoenzimático de ELISA, foram avaliadas a expressão gênica e proteica, respectivamente, das duas citocinas. Não foram observadas diferenças entre os grupos. O ensaio de MTT para avaliar a proliferação celular permitiu a verificação da ação antiproliferativa da metformina sobre o grupo hiperinsulinêmico. Embora as hipóteses formuladas nesse estudo encontrem forte sustentação na literatura, no modelo proposto não foi possível encontrar diferenças na expressão da IL-11 e LIF. Dada a complexa regulação de todos os fatores considerados nessa pesquisa e suas múltiplas inter-relações, mais estudos são necessários para esclarecer os mecanismos que orquestram essa complexa rede. / The understanding of the endometrium regulation and its clinical implications can help to improve implantation rates of the human embryo. Although many proteins and molecules influence the endometrial receptivity, their coordinated contribution to embryo implantation process is still poorly understood. Among the complex pathways involved in this process toward the preparation to a receptive endometrium are the cytokines, including interleukin -11 (IL- 11) and leukemia inhibitory factor (LIF) that play an essential role. It has been shown that disruption of cellular signaling pathways of these cytokines impairs or even prevents implantation, direct implications on fertility. Moreover, the hyperinsulinemia can negatively affected women's fertility. Within this context, metformin, an antidiabetic drug, may exert positive effects on the expression of IL-11 and LIF, reversing the possible effects insulin excess. To evaluate this effect, a model of primary culture of human endometrial stromal cells exposed to female sex hormones estrogen and progesterone was used. Cells were divided in groups: control, metformin, insulin, association insulin and metformin. From qRT-PCR and ELISA immunoenzymatic assay gene expression and protein, respectively, of the two cytokines were evaluated. No differences were observed between groups. Additionally, the assay to evaluate cell proliferation MTT found the important antiproliferative action of metformin on hyperinsulinemic group. In the proposed model could not find differences in the expression of IL-11 and LIF. Given the complex regulation of all factors considered in this study and their multiple interrelationships, more studies are required to unravel the mechanisms that orchestrate this complex network.

A esclerose múltipla é uma doença inflamatória crônica desencadeada por células T autorreativas contra antígenos proteicos da mielina. A encefalomielite experimental autoimune é o modelo murino mais utilizado para o estudo da EM. As tubas uterinas e o útero de camundongos fêmeas são órgãos ricos em células mesenquimais que são pouco utilizadas em estudos. Dessa forma, no presente projeto, caracterizamos a obtenção dessa população e avaliamos sua capacidade imunossupressora utilizando o modelo de EAE. Observamos que o tratamento é capaz de modular o perfil de linfócitos T CD4+ durante sua ativação nos linfonodos, induzindo o direcionamento para a subpopulação Tr1 e atenuando as Th1 e Th17. Assim, houve uma diminuição do número de células infiltrantes no SNC associado a uma menor ativação de células da microglia. Em conjunto, demostraramos que as meMSC utilizadas como tratamento são capazes de atrasar o desenvolvimento da EAE e, portanto, evidenciando o caráter imunomodulador das MSCs derivadas do endométrio, chamando a atenção para seu potencial terapêutico. / Multiple sclerosis is a chronic inflammatory disease triggered by autoreactive T cells against myelin protein. Experimental Autoimmune Encephalomyelitis is the most commonly used murine model for the study of MS. The uterine tubes and uterus of female mice are organs rich in mesenchymal cells which are rarely used. Thus, in the present work, we characterized the extraction of this population and evaluated its immunosuppressive capacity using the EAE model. We observed that the meMSC treatment is capable of modulating the CD4 T lymphocyte profile during its activation in the lymph nodes, inducing the expansion of the Tr1 subpopulation and attenuating Th1 and Th17. Consequently, there was a decrease in the number of infiltrating cells in the CNS associated with a reduction of microglial activation. Taken together, our results demonstrated that the meMSCs used as treatment are capable of delaying the development of EAE, therefore, evidencing its immunomodulatory features drawing attention to its therapeutic potential.

Esta investigação experimental teve como finalidade de avaliar os efeitos do ultra-som pulsado de baixa intensidade sobre a regeneração do miométrio e do endométrio de ratas submetidas à uterotomia. Foram utilizadas neste experimento 20 ratas adultas da raça Wistar, submetidas a uma uterotomia mediante incisão longitudinal de 1,5 cm total de uma das paredes do corno uterino. As ratas foram divididas em 2 grupos de 10 animais cada, sendo que um grupo foi submetido à estimulação ultra-sônica por 10 dias durante 15 minutos diários e outro grupo, chamado controle, foi submetido à estimulação fictícia pelo mesmo tempo e período. Seis horas antes do sacrifício, os animais receberam via intramuscular 0,10 mg de colchicina para cada 100 g de peso corporal com a finalidade de bloquear as mitoses em metáfase. A avaliação dos tecidos baseou-se na análise comparativa entre a contagem de células em mitose do endométrio e do miométrio de animais estimulados com o de animais controle. Os achados morfológicos foram analisados estatisticamente e são sugestivos de que o U.S.P. estimula a regeneração do miométrio bem como do endométrio de ratas. / This experimental investigation had the purpose to evaluate the low-intensity pulsed ultrasound effects under the regeneration of the myometrium and the endometrium of the rats that were submitted to uterotomia. It was used, in this experiment, twenty adult rats of the Wistar race, submitted to uterotomia beyond the longitudinal incision of total 1, 5 cm of one of the uterine horn walls. The rats were divided in two groups of ten animals each, the first group went trough fifteen daily minutes ultra-sound stimulation during ten days, and the second group, called control, went through fictional stimulation by the same time and period of the first group. Six hours before the sacrifice, the animals received, by intra muscular, 0, 10 mg of colchicine for each 100 g of body weight, with the intention to block the mitosis in metaphase. The evaluation of the tissue was based on the comparative analysis between the mitosis cell count of the stimulated animals\' endometric tissue and the control animals\' one. The morphologic findings were statistically analyzed.

O objetivo do presente trabalho foi comparar os efeitos dos distintos ambientes endócrinos peri-ovulatórios na proliferação celular, no metabolismo das poliaminas e no ambiente redox do útero bovino durante o diestro inicial. Para isso, controlou-se farmacologicamente o crescimento do folículo objetivando induzir a ovulação de folículos de maior diâmetro (grupo folículo grande-CL grande, FG-CLG) ou de menor diâmetro (grupo folículo pequeno-CL pequeno, FP-CLP). Trinta vacas multíparas Nelore, foram pré-sincronizadas, metade destes animais foram destinados para o grupo FG-CLG e receberam uma dose de prostaglandina F2&#945; (PGF) e um dispositivo de progesterona, juntamente com benzoato de estradiol no D10. No momento da retirada dos dispositivos de progesterona (entre D1,75 e D2,5) todos os animas receberam uma dose de PGF. A ovulação foi induzida com acetato de buserelina (D0). O que diferiu entre os tratamentos foi que os animais do grupo FP-CLP não receberam uma dose de PGF no D10 e o momento da retirada dos dispositivos foi entre D1,25 e o D1,5. No D7 um subgrupo dos animais foi abatido e amostras de endométrio e lavado uterino foram coletadas para as análises laboratoriais. Os animais do grupo FG-CLG apresentaram no D0 um folículo 1,2 vezes maior e estradiol 2,3 vezes maior em relação ao FP-CLP. Consequentemente, as vacas do FG-CLG desenvolveram CL maiores (1,6 vezes) e mais pesados (1,4 vezes) o que proporcionou no D7 concentrações de P4 1,5 vezes maior em relação ao FP-CLP. Primeiramente, uma análise do transcriptoma endometrial foi realizada e indicou que processos celulares como proliferação, composição de matrix extracelular, processos metabólicos e processos de oxirredução foram afetados pelo modelo experimental. Para avaliar a condição proliferativa e/ou apoptótica endometrial análises de imunomarcação foram realizadas (Ki-67, marcador de proliferação e caspase 3 ativada, marcador de apoptose). O número de células positivas para Ki-67 no epitélio luminal foi 4,1 vezes maior no FP-CLP, porém não houve diferença na marcação da caspase 3 ativada. No epitélio glandular tanto o ki-67 (1,4 vezes) como a caspase 3 ativada (2,6) estavam aumentados no grupo FG-CLG. Em relação à síntese das poliaminas não houve diferença entre os grupos nas concentrações das poliaminas e abundância dos transcritos e proteína das enzimas de síntese. Por outro lado, foi detectada uma forte associação entre a expressão do gene SAT1 com o gene ODC1 (r2: 0,73; P<0,01) e também entre os genes AZIN1 e AMD1 (r2: 0,61; P<0,01). Quanto ao ambiente redox não houve diferença entre os tratamentos no lavado uterino mas no endométrio, no grupo FP-CLP, houve redução da atividade das enzimas Catalase (0,5 vs 0,79 U/mg proteína; P<0,01), glutationa peroxidase (2,0 vs 2,43 nmol NADPH/min/mg proteína; P<0,01), aumento da atividade da Superóxido dismutase (44,77 vs 37,76 U; P=0,04) e da peroxidação lipídica (28,5 vs 17,43 nmol/MDA/mg proteína; P<0,001), mas sem alterar as quantidades da espécies reativas. De acordo com os resultados obtidos, pode-se concluir que o ambiente endócrino peri-ovulatório regula a proliferação endometrial mas sem alterar a via de síntese das poliaminas e modula também o ambiente redox uterino / This work aimed to compare the effects of the different periovulatory endocrine milieu on the several molecular pathways: as cellular proliferation, polyamine metabolism and redox environment of the bovine uterus during the early diestrus. For this, we controlled pharmacologically the follicular growth to induce the ovulation of larger follicle (Large Follicle-Large Corpus lutem group LF-LCL) or smaller follicle (Small follicle-Small Corpus luteum group SF-SCL). Thirty multiparous Nelore cows were synchronized. Fifteen cows were assigned for each group. On the LF-LCL, the cows received a dose of prostaglandin F2&#945; (PGF), a progesterone device and an estradiol benzoate on D10. On the time of progesterone device was withdraw (between D1.75 e D2.5) all the animals received a dose of PGF. The ovulation was induced with buserelin acetate (D0). The unique difference between the groups was that animals of SF-SCL did not received a dose of PGF on D10 and the progesterone device withdraw was between D1.25 e o D1.5. On D7 a subset of animals was slaughtered and the endometrial and uterine washings samples were collected for laboratorial analyses. On D0 the animals of LF-LCL had a 1.2 times larger follicles and 2.3 times higher levels of estradiol than animals of SF-SCL. Firstly, an endometrial transcriptome analyses was realized and suggested that several cellular processes as proliferation, metabolic processes and oxi-reduction processes were affected by experimental model. To evaluate the proliferative and/or apoptotic condition, endometrial immunohistochemistry analyses were realized (ki-67, proliferation marker and caspase 3 activated, apoptose marker). The number of Ki-67 positive cells in the luminal epithelium was 4.1 times higher on SF-SCL. However, there was no difference in caspase 3 activated analyses. On the glandular epithelium both ki-67 (1.4) and caspase 3 activated (2.6) were increased on LF-LCL. About polyamine synthesis pathway there was no difference in polyamines levels and gene and protein expression of synthesis enzymes between the groups. In other hand, it was detected a strong association between SAT1 gene expression and ODC1 gene expression (r2: 0.73; P<0.01) and also between AZIN1 and AMD1 gene expression (r2: 0.61; P<0.01). On the redox environment analysis there was no difference between the groups on the uterine washings but the SF-SCL group had lower endometrial catalase (0.5 vs. 0.79 U/mg protein, P<0.001) and glutathione peroxidase (GPx; 2.0 vs. 2.43 nmol NADPH/min/mg protein, P=0.04) activity, as well as higher lipid peroxidation (28.5 vs. 17.43 nmol MDA/mg of protein, P < 0.001) and superoxide dismutase (SOD) activity (44.77 vs. 37.76 U; P=0.04). There were no differences in the endometrial reactive species (RS) between the groups. In conclusion, the periovulatory endocrine milieu regulates the endometrial proliferation but without alterations in polyamine metabolism and also modulates the uterine redox environment in beef cattle

Perdas gestacionais podem ser determinadas por vários fatores, dentre eles a endometriose, doença ginecológica comum caracterizada pela presença e crescimento de glândulas e estroma endometrial fora da cavidade uterina. Os principais sintomas da doença envolvem, além de problemas de fertilidade, dismenorréia, dispaneuria, dor pélvica crônica e irregularidades menstruais. Os locais mais freqüentes das lesões endometrióticas são o peritônio e os órgãos pélvicos, principalmente ovários. A incidência da endometriose é difícil de ser determinada devido à grande variabilidade de sintomas e à dificuldade para confirmação diagnóstica, que requer método cirúrgico. Estima-se que 15% da população feminina em idade reprodutiva seja afetada pela doença, sendo sua patogênese pouco conhecida. A hipótese mais aceita é a da menstruação retrógrada, onde os fragmentos endometriais descamados durante a fase menstrual seriam transportados através das tubas uterinas até a cavidade peritonial com implantação, crescimento e invasão local e de órgãos adjacentes. No entanto, apenas o refluxo não é suficiente para o estabelecimento da doença, sendo necessário que as células endometriais possuam certas características moleculares que favoreçam o aparecimento e a progressão da implantação ectópica. Vários estudos na literatura evidenciam que as principais divergências moleculares entre portadoras e não portadoras de endometriose estão relacionadas a processos envolvidos na apoptose, adesão celular, angiogênese, biosíntese de estrógeno, sistema imune, além de fatores de crescimento e metaloproteinases. Sendo assim, as pesquisas buscam a investigação de genes que se expressem diferencialmente (maior ou menor expressão) nas células de lesões endometrióticas por meio de várias técnicas. A hibridação subtrativa é uma metodologia de screening gênico que compara dois grupos celulares distintos, permitindo isolar moléculas de cDNA representantes do genoma de somente um dos dois grupos, pois remove as seqüências comuns entre eles. A técnica de hibridação subtrativa rápida (RaSH) simplifica e torna mais eficiente esse processo de subtração, identificando grande quantidade de seqüências diferencialmente expressas. Com objetivo de determinar possíveis marcadores moleculares para diagnóstico e tratamento da doença, aplicamos a técnica de RaSH para identificação de genes com expressão diferencial em 11 amostras de lesões endometrióticas (cinco de origem ovariana e seis de origem peritonial) e em 11 amostras de tecido endometrial tópico de mulheres sem a doença. Após análise dos dados referentes a 166 sequências de referência, os genes HTRA1, LOXL1, SPARC e SSAT foram selecionados para validação por meio da técnica de RT-PCR quantitativa em tempo real, sendo que apenas os dois primeiros mostraram diferença significativa entre os dois grupos estudados. Os genes HTRA1 e LOXL1 apresentaram expressão aumentada em lesões endometrióticas de pacientes afetadas, quando comparada aos níveis de expressão no tecido endometrial de mulheres não afetadas. Os resultados obtidos sugerem que os genes HTRA1 e LOXL1 podem ser considerados candidatos a marcadores moleculares para o diagnóstico. / Gestational losses can be determined by a number of factors including endometriosis, a common gynecological disease characterized by endometrial tissue found outside the uterine cavity. The main symptoms of the disease involve dysmenorrhea, dyspaneuria, chronic pelvic pain and menstrual irregularities, besides fertility problems. Endometriotic lesions are more frequently found in the peritoneum and in pelvic organs, mainly ovaries. Endometriosis incidence is difficult to be determined due to the wide variability of the symptoms and the difficult diagnostic confirmation, which requires a surgical method. Nevertheless, it is believed that around 15% of the female population in reproductive age is affected by the disease, although its pathogenesis remains unclear. The most accepted hypothesis is the retrograde menstruation, where endometrial fragments from the menstrual phase are transported through the uterine tubes to the peritoneal cavity, where they undergo implantation, growth, and adjacent tissues invasion. However, only reflux is not enough for the disease establishment, and it is necessary that endometrial cells present molecular characteristics favoring rise and progression of ectopic implantation. In the literature, a number of studies highlight that the main molecular divergences between women with and without endometriosis are related to processes involved in apoptosis, cellular adhesion, angiogenesis, estrogen biosynthesis, immunological system, growth factors and metalloproteinases. In doing so, a number of researches seek for the investigation of genes differently expressed (up or down regulated) in endometriotic lesions cells using a variety of methodologies. The subtractive hybridization is a gene screening methodology that compares two distinct cellular groups, allowing the isolation of cDNA molecules representative from the genome of only one of the two groups, because it removes common sequences among them. The rapid subtractive hybridization methodology (RaSH) makes the process of subtraction easier and more efficient, identifying a large amount of differently expressed sequences. In this study, RaSH was used to identify differently expressed genes in 11 samples of endometriotic lesions (five from ovarian origin and six from peritoneum origin), and in 11 samples from topic endometrial tissue from women without the disease to determine possible molecular markers for diagnosis and treatment. After data analysis related to 166 reference sequences, genes HTRA1, LOXL1, SPARC and SSAT were selected for validation using real time quantitative RT-PCR. Only HTRA1 and LOXL1 presented significant difference between the two studied groups. Genes HTRA1 and LOXL1 were up regulated in endometriotic lesions from affected patients when compared with the expression levels in the endometrial tissue of non-affected women. Our results suggest that the genes HTRA1 and LOXL1 can be considered candidate molecular markers for the diagnosis of endometriosis.