Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Las especies reactivas de oxígeno (ROS) y nitrógeno (RNS) generadas por los hospederos mamíferos y vectores triatominos inducen daño oxidativo en el DNA de Trypanosoma cruzi, disminuyendo la viabilidad parasitaria. Para reparar este tipo de daño, este protozoario activa el mecanismo de reparación de escisión de bases del DNA (vía BER). En este proceso juegan un rol fundamental las endonucleasas apurínicas/apirimidínicas (AP). En esta Memoria de Título se determinó la viabilidad de epimastigotes de T. cruzi que sobreexpresan la AP endonucleasa TcAP1 frente a una exposición sostenida a estrés oxidativo, utilizando el sistema glucosa/glucosa oxidasa que origina H2O2. Usando un kit comercial se establecieron las concentraciones de glucosa y glucosa oxidasa necesarias para producir niveles sostenidos y conocidos de H2O2, simulando la exposición sostenida de T. cruzi a agentes oxidantes en ambos hospederos. Este sistema permitió establecer que los epimastigotes que sobreexpresan TcAP1 presentan una mayor viabilidad que parásitos controles, sometidos a estrés oxidativo sostenido. En conclusión, en esta memoria de título se determinó que la endonucleasa TcAP1 participa en la sobrevida de T. cruzi en condiciones que simulan la exposición fisiológica sostenida a agentes oxidantes en ambos hospederos. Estos resultados confirman la participación de la vía BER en la persistencia parasitaria en sus hospederos / Financiemiento: Proyecto Bicentenario Anillo ACT 112, Conicyt, Proyecto Fondecyt 1090124, y Proyecto Fondecyt 11100053

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La enfermedad de Chagas, zoonosis ampliamente difundida en América, es causada por el protozoo hemoflagelado Trypanosoma cruzi. En su transmisión participan animales vertebrados y artrópodos hematófagos pertenecientes a la subfamilia Triatominae. En Chile, el aumento de las interacciones humano-fauna silvestre han permitido que emerja como amenaza la transmisión al ser humano desde los triatominos silvestres Mepraia spinolai y Mepraia gajardoi. En este estudio se investigaron los niveles de infección por T. cruzi en vectores del género Mepraia de localidades silvestres cercanas a Arica, Iquique e Illapel, a través de amplificación del DNA del kinetoplasto, obteniendo un 51% de infección en 75 ejemplares de M. spinolai y un 18% en 244 de M. gajardoi. Luego se realizó la genotipificación de T. cruzi, definiendo el tipo de T. cruzi infectante (TcI, TcII, TcV, TcVI) con sondas de minicírculos que provienen de los T. cruzi indicados. Los genotipos detectados corresponden a los cuatro tipos de T. cruzi mencionados, existiendo algunas infecciones mixtas. Los resultados muestran que, los triatominos M. spinolai y M. gajardoi, presentan una diversidad de T. cruzi, con distintos porcentajes de infección, según donde habiten y sus fuentes de alimentación

Memoria para optar al título Profesional de Médico Veterinario / Mepraia spinolai es una especie silvestre de triatomineo, el cual es vector de la enfermedad de Chagas. Estudios recientes demuestran que este insecto es epidemiológicamente importante en la transmisión de dicha enfermedad, debido a su capacidad potencial para reemplazar a los vectores domiciliarios ocupando el nicho ecológico dejado por éstos después de su eliminación. Se ha observado que el roedor Octodon degus puede llegar a jugar un rol significativo en la trasmisión de esta enfermedad, ya que, por su alta tasa de infección, es considerado un reservorio de la misma. La evaluación de la respuesta inmune del roedor O. degus a la picada de M. spinolai puede ser una útil herramienta inmuno epidemiológica para evaluar la exposición de estos animales a la enfermedad de Chagas. Las proteínas provenientes de las glándulas salivales de insectos triatomineos pueden inducir reacciones de hipersensibilidad, tanto locales como sistémicas en sus hospederos. En este estudio, se evaluó la respuesta de anticuerpos isotipo IgG contra la saliva de M. spinolai en O. degus. Para ello se establecieron dos grupos de estudio: uno de ellos sólo fue picado de manera reiterada por especímenes de M. spinolai (grupo A) y el otro, además de ser picado reiteradamente, se inoculó de manera previa con extracto toráxico que contenía glándula salival de M. spinolai (grupo B). Se realizó test ELISA al suero preinmune y postinmune para detectar la presencia de anticuerpos IgG contra proteínas de la glándula salival de M. spinolai. Sólo se detectaron anticuerpos IgG en el suero postinmune de animales del grupo B. En este estudio se concluye que O. degus puede generar respuesta inmune humoral contra los antígenos contenidos en el extracto toráxico y eventualmente esta respuesta podría incluir anticuerpos IgG contra las proteínas de la saliva de M. spinolai. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt no. 1040711

Determina la efectividad de un programa educativo en el incremento de conocimiento sobre la enfermedad coronaria en los pacientes que acuden al programa de hipertensión del Hospital. Brinda al establecimiento y personal de salud, información actualizada; a fin de elaborar estrategias para la implementación de programas educativos, y de esta manera fortalecer el rol docente del personal de enfermería mejorando el proceso de enseñanza - aprendizaje. / Trabajo académico

título profesional de Biólogo con Mención en Medio Ambiente. / La vinchuca endémica, Mepraia spinolai, es el principal vector silvestre de la enfermedad de Chagas en Chile, cuyo agente causante es el parásito protozoo Trypanosoma cruzi. Mepriaia spinolai es un insecto hematófago que habita las zonas semiáridas-mediterráneas de Chile central, donde sus principales presas son vertebrados terrestres. En algunos sectores, las poblaciones de vinchucas presentan elevados niveles de infección con T. cruzi, aumentando el riesgo de transmisión de esta enfermedad a la población humana, sin embargo, tanto las abundancias poblacionales como los niveles de infección varían espacialmente. Con el objetivo de identificar los factores ecológicos que determinan el tamaño poblacional de M. spinolai y el nivel de infección con T. cruzi, se recolectaron datos de la cobertura vegetacional, abundancia de vertebrados terrestres (mamíferos, aves y reptiles), precipitación y temperatura de 18 poblaciones del vector, cubriendo un rango latitudinal de 506 km (29°S – 33°S). Posteriormente, se agruparon los estadios ninfales en tres categorías: 1) ninfas de estadio I, II y III; 2) ninfas IV, V y adultas y 3) población total, con los cuales se realizaron modelos lineales para ambas variables respuestas en función de las características bióticas y abióticas de cada localidad. Los resultados permitieron detectar la influencia de los factores para cada grupo. Para las abundancias poblacionales de M. spinolai se identificaron relaciones positivas con la cobertura vegetacional, la temperatura mínima y la abundancia de Oryctolagus cuniculus (conejo) y una relación negativa con la precipitación. En el caso de los niveles de infección con el protozoo, se obtuvieron relaciones positivas con la cobertura vegetacional, temperatura mínima, abundancia de reptiles y la precipitación, y relaciones negativas con la abundancia de mamíferos nativos (excluyendo las dos especies más 2 abundantes) y la abundancia de mamíferos introducidos (excluyendo conejo). Adicionalmente, se analizaron las relaciones entre las abundancias poblacionales de M. spinolai y los niveles de infección con T. cruzi entre los distintos grupos, encontrando asociaciones positivas y significativas entre los niveles de infección de estadios primarios (ninfas I, II y III) y la abundancia de los más cercanos al adulto (IV, V y adulto). Con estos resultados se enfatiza la importancia que puede tener la estructura comunitaria y las condiciones ambientales en la mantención del ciclo silvestre de transmisión de T. cruzi en Chile semiárido-mediterráneo. / The endemic kissing bug, Mepraia spinolai, is the main wild vector of Chagas disease in Chile, whose causative agent is the protozoan parasite Trypanosoma cruzi. Mepriaia spinolai is an hematophagous insect that inhabits the Semi-arid and Mediterranean zones of central Chile, where its main prey are terrestrial vertebrates. In some areas, populations of kissing bug exhibit high levels of infection with T. cruzi, increasing the risk of disease transmission to the human population; however, both population abundance and levels of infection vary spatially. In order to identify the ecological factors that determine M. spinolai population size and the level of infection with T. cruzi, we collected data on vegetation cover, abundance of terrestrial vertebrates (mammals, birds and reptiles), precipitation and temperature of 18 vector populations, covering a latitudinal range of 506 km (29°S - 33°S). Subsequently, nymphal stages were grouped into three categories: 1) nymphal stage I, II and III; 2) nymphal stage IV, V and adult and 3) the total population, to construct linear models for both response variables according to the biotic and abiotic characteristics of each locality. The results allowed to detect the influence of factors for each group. For M. spinolai population abundances, positive relationships were identified with vegetation cover, minimum temperature and abundance of Oryctolagus cuniculus (rabbit) and a negative relationship with precipitation. In the case of infection levels with the protozoan, positive relationships were obtained with vegetation cover, minimum temperature, abundance of reptiles and precipitation, and negative relationships with abundance of native mammals (excluding the two most abundant species) and abundance of introduced mammals (excluding rabbit). Additionally, the relationships between the population abundance of M. spinolai and levels of T. cruzi infection between the different groups were analyzed, finding 4 positive and significant associations between the levels of infection of primary stages (nymphs I, II and III) and the abundance of those closest to the adult (IV, V and adult). These results emphasize the importance of the community structure and environmental conditions in the maintenance of the wild transmission cycle of T. cruzi in Semi-arid and Mediterranean Chile.

Memoria de título para optar al Título Profesional de Bioquímica / La pérdida de homeostasis proteica (proteostasis) es una de las características principales de la enfermedad de Alzheimer (EA), asociada con la generación de estrés del retículo endoplásmico (RE) y la agregación anormal de proteínas. El estrés de RE activa una vía de señalización conocida como la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR), la cual disminuye el estrés de RE mediante programas adaptativos, que restauran la proteostasis, o pro-apoptóticos, que eliminan las células dañadas permanentemente. IRE1α es un sensor de estrés de RE que media estos programas bajo condiciones de estrés de RE activando a XBP1, un factor de transcripción descrito como relevante en la patología de la EA. Para definir su importancia en la EA, investigamos el impacto de la expresión de XBP1s en un modelo murino transgénico de la EA conocido como 5xFAD, evaluando las principales características de la enfermedad: el deterioro cognitivo y la agregación proteica de depósitos de péptido β-amiloide (βA). Observamos que la sobreexpresión de XBP1 en el cerebro reduce el deterioro cognitivo y la agregación proteica de βA. Por otro lado, al entregar localmente XBP1s en el cerebro a través de virus adeno-asociados (AAVs), observamos también una mejora cognitiva pero no una reducción en la carga de βA, sugiriendo que la expresión ectópica de este factor tiene efectos neuroprotectores a través de mecanismos independientes de la UPR. Nuestros resultados sugieren un rol importante de XBP1s en la patogénesis de la EA, ofreciendo un posible nuevo blanco terapéutico para la intervención de la enfermedad / The loss of protein homeostasis (proteostasis) is a salient feature of Alzheimer´s disease (AD), associated with the generation of endoplasmic reticulum (ER) stress and the abnormal protein aggregation. ER stress activates a signaling pathway known as the unfolded protein response (UPR), which alleviates ER stress through adaptive programs, that restore proteostasis, or pro-apoptotic programs, which eliminate terminally damaged cells. IRE1α is an ER stress sensor mediating both programs under ER stress conditions activating XBP1, a transcription factor described as relevant in the AD’s pathology. To define its importance in AD, we investigated the impact of XBP1 expression in a transgenic mouse model of AD known as 5xFAD, evaluating the salient features of the disease: the cognitive impairment and the protein aggregation of amyloid-β (Aβ) peptide deposits. We observed that the overexpression of XBP1s in the brain reduces the cognitive impairment and the Aβ protein aggregation. The local delivery of XBP1s in the brain through adeno-associated viruses (AAVs) also shows a cognitive improvement, but not a reduction in Aβ protein load, suggesting that the ectopic expression of this factor has neuroprotective effects through UPR independent mechanisms. Our results suggest an important role of XBP1 in the pathogenesis of AD, offering a possible novel therapeutic target for disease intervention

Tesis para optar al grado de Doctora en Ciencias Farmacéuticas / Las nanobarras de oro son nanomateriales muy interesantes para su uso en la terapia de diferentes patologías como cáncer o la enfermedad de Alzheimer, ya que poseen la capacidad de absorber gran cantidad de energía en la región del infrarrojo cercano, en la cual los tejidos biológicos son transparentes a la radiación, y disiparla en forma de calor. No obstante para una eventual terapia, estos nanomateriales deben llegar a su blanco terapéutico que en el caso de la enfermedad de Alzheimer son los agregados tóxicos de la proteína β amiloide presentes en el cerebro. Uno de los grandes desafíos de la nanomedicina para la terapia de enfermedades neurodegenerativas es el de lograr que los nanomateriales lleguen al sistema nervioso central. Para estos propósitos, en esta tesis se multifuncionalizaron las Nanobarras de oro con el péptido Angiopep-2, que se utiliza como lanzadera de fármacos para favorecer el paso a través de la barrera hematoencefálica, y además con el péptido qshyrhispaqv (D1), el cual posee una afinidad en el rango sub-micromolar in vitro por los agregados del péptido β amiloide. Asimismo, las NR se conjugaron con dos tipos de polietilenglicol: Metoxi-Polietilenglicol tiolado que evita las interacciones inespecíficas, y Carboxi-Polietilenglicol tiolado que contiene un grupo carboxílico que permite la unión con un grupo amino terminal correspondiente a los péptidos, empleando agentes acoplantes. Las nanopartículas obtenidas fueron caracterizadas por Microscopia Electrónica de Transmisión, Espectrofotometría UV-Visible, Potencial Zeta y Dispersión Dinámica de la luz. Adicionalmente fue evaluada la citotoxicidad, estabilidad y la penetración in vitro de Nanobarras modificadas en células endoteliales microvasculares de rata bEnd.3 y RBEMC, observándose la capacidad de ingresar al medio intracelular. La capacidad de las Nanobarras modificadas de reconocer fibras de péptido β amiloide fue ensayada mediante una incubación con dichas fibras, y su posterior visualización por Microscopía electrónica de Transmisión. Por otra parte, se observó en cerebro de rata ex vivo la llegada al cerebro por fluorescencia, y se comprobó mediante cuantificación de oro. Como resultado de esta tesis se puede concluir que el conjugado propuesto de Nanobarras de oro modificadas con los péptidos Angiopep-2 y D1, no presenta toxicidad celular, y además es capaz de llegar al cerebro en mayor proporción que su control, que corresponde a Nanobarras de oro no modificadas. Además, en ensayos in vitro se confirmó la capacidad de reconocer agregados de fibras de péptido β-amiloide. De esta forma se espera poder contribuir al desarrollo de una estrategia para mejorar la llegada de las nanopartículas de oro al Sistema Nervioso Central, lo que representará un gran avance para una posible terapia de la enfermedad de Alzheimer / Gold Nanorods are very interesting nanomaterials for use in the therapy of different pathologies such as cancer or Alzheimer's disease, since they have the capacity to absorb large amounts of energy and to dissipate it in the form of heat in the near infrared region, in which biological tissues are transparent to radiation. However for a possible therapy, these nanomaterials must reach their therapeutic target, which in the case of Alzheimer's disease are the toxic aggregates of the β amyloid protein present in the brain. One of the bigger challenges of nanomedicine for neurodegenerative disease therapy is that nanomaterials reach the central nervous system. For this purpose, Gold Nanorods were multifunctionalized with the peptide Angiopep-2, which is used as a drug shuttle to promote passage through the blood-brain barrier, and also with the peptide qshyrhispaqv (D1), which has an affinity in the sub-micromolar range in vitro by the amyloid aggregates. Also, the Gold Nanorods were conjugated to two types of polyethylene glycol: thiolated Metoxy-Polyethylene glycol avoiding non-specific interactions, and Carboxy-Polyethylene glycol containing a carboxylic group which allows attachment to a terminal amino group corresponding to the peptides using coupling agents. The nanoparticles obtained were characterized by Transmission Electron Microscopy, UV-Visible Spectrophotometry, Zeta Potential and Dynamic Light Scattering. In addition, cytotoxicity, stability and in vitro penetration in microvascular endothelial cells of rat bEnd.3 and RBMVEC were evaluated, and the capacity to enter the intracellular medium was observed. The ability of the multifunctionalized Gold Nanorods to recognize β amyloid peptide fibers were assayed by incubation with said peptide and visualization by Transmission Electron Microscopy. On the other hand, the arrival to the brain was observed ex vivo by fluorescence, and was checked by quantification of gold. As a result of this thesis it can be concluded that the proposed conjugate does not present cytotoxicity, and is also able to reach the brain in a greater proportion than its control. In addition, the ability to recognize aggregates of β amyloid peptide fibers was confirmed in in vitro assays. In this way it is hoped to contribute to the development of a strategy to improve the arrival of gold nanoparticles to the Central Nervous System, which will represent a great advance for a possible therapy of Alzheimer's disease

Magíster en farmacología / El carcinoma escamoso de laringe es una enfermedad altamente invalidante ya que puede afectar la capacidad del habla, respiración y deglución del paciente que lo sufre. Los principales factores causales identificados son cigarro y alcohol. Las vías de respuesta inflamatoria, proliferativa y de reparación de ADN pueden contribuir al riesgo de cáncer de laringe. El objetivo de este estudio es determinar asociaciones entre variantes genéticas COX-2 rs20417, COX-2 rs689466, EGF rs4444903, EGFR rs2227983, P53 rs1042522 y el riesgo de cáncer de laringe en la población chilena. Se realizó un estudio casos y controles, con 100 pacientes con cáncer escamoso de laringe y 139 voluntarios adultos sin cáncer. La genotipificación se realizó mediante PCR-RLFP. Se observa que estos polimorfismos son capaces de incrementar el riesgo de cáncer de laringe asociado a la combinación de consumo de tabaco y alcohol en una razón de 0,34 veces para COX-2 rs20417, 0,5 veces para EGF rs4444903, 0,56 veces para P53 rs1042522, 1,72 veces para EGFR rs2227983 y 4,7 veces para COX-2 rs689466. Esto sugiere que las variantes COX-2 rs20417, COX-2 rs689466, EGF rs4444903, EGFR rs2227983 y P53 rs1042522 actúan como modificadores de riesgo de cáncer de laringe. / Laryngeal squamous cell carcinoma is a kind of cancer that can be highly disabling to the patient, affecting speech, swallowing and respiratory skills, and leading to impaired quality of life. Smoking and alcohol abuse are principal risk factors linked to this disease. Inflammation signaling pathways, mitogens and DNA repair genes are factors that can be involved in carcinogenesis. The aim of this research is to assess the effect of COX-2 rs20417, COX-2 rs689466, EGF rs4444903, EGFR rs2227983, P53 rs1042522 single nucleotide polymorphisms in the risk of laryngeal cancer development in Chilean population. For this case control study, we recruited 100 cancer patients and 139 healthy volunteers. SNP genotype was analyzed from genomic DNA by PCR-RFLP. We observed that these SNPs are capable of increase the smoking plus alcohol risk of laryngeal cancer in a ratio of 0,34 fold for COX-2 rs20417 SNP, 0,5 fold for EGF rs4444903 SNP, 0,56 fold for P53 rs1042522 SNP, 1,72 fold for EGFR rs2227983 SNP and 4,7 fold for COX-2 rs689466 SNP. These findings suggest that COX-2 rs20417, COX-2 rs689466, EGF rs4444903, EGFR rs2227983 and P53 rs1042522 single nucleotide polymorphisms acts as risk modifier factors for laryngeal cancer.

Instituto de Cultura Juan Gil-Albert (Diputación Provincial de Alicante)

El presente estudio explora el contenido de las representaciones del VIH/SIDA y la percepción de riesgo en un grupo de adolescentes de nivel socioeconómico bajo de Lima (n=20). Los sujetos fueron evaluados utilizando una entrevista semiestructurada diseñada para los propósitos de la investigación y un cuestionario adaptado sobre percepción de riesgo (Bayés et al 1995-1996) De manera general, hemos encontrado que las representaciones del VIH/SIDA están plagadas de una afectividad negativa y asociadas permanentemente a la muerte y al sexo y que la percepción de riesgo a la enfermedad es baja en el grupo. Asimismo, existen algunas variables sociales, culturales y situacionales que ejercen una influencia importante en el desarrollo de prácticas de riesgo / The aim of this investigation is to describe the mental representations surrounding HIV/AIDS and the perception of risk towards the disease in a group of adolescents living in a deprived socio-economical district of Lima (n=20). The subjects were assessed using a semi-structured interview, designed specially for the purposes of this investigation, and were also assessed using the Risk Perception Questionnaire (Bayés et. al., 1995, 1996). HIV/AIDS representations includes negate affectivity and are associated with death and sex. Self-perception of being at risk is low. There are some psychological variables, social and cultural factors that influence the development of unsafe sex. / Tesis