Orientador: Edson Antunes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T20:19:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Morganti_RafaelPrada_D.pdf: 740260 bytes, checksum: c6b0779cd2f8af7471aefb0da921a0a6 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A sepsis é a segunda causa de morte em pacientes internados em unidades de tratamento intensivo não coronariano. Pacientes com sepsis apresentam anormalidades plaquetárias como trombocitopenia, prolongamento do tempo de coagulação, coagulação intravascular disseminada, trombose microvascular maciça e sangramentos. Entretanto, os mecanismos envolvidos nestas alterações plaquetárias ainda são mal compreendidos. O objetivo deste trabalho foi investigar as ações do lipopolissacarídeo (LPS) de E. coli, e de enterotoxinas de Staphylococcus aureus (SEA e SEB), na adesão e na agregação de plaquetas humanas, bem como os mecanismos envolvidos nesses fenômenos. As plaquetas foram expostas ao LPS, SEA ou SEB em diferentes concentrações e tempos de incubação para avaliação in vitro da adesão ou agregação. Além disso, realizou-se experimentos para verificar o papel do óxido nítrico (NO) e de espécies reativas de oxigênio nas ações induzidas pelo LPS, SEA e SEB, assim como a sinalização intracelular (mobilização de Ca+2) e ativação do receptor do fibrinogênio glicoproteína IIb/IIIa (GPIIb/IIIa). A incubação de plaquetas com LPS, SEA e SEB por períodos 5 a 120 min inibiu a adesão espontânea das plaquetas ao fibrinogênio, sendo esta inibição dependente da concentração e do tempo de incubação. A adesão de plaquetas ativadas com trombina também foi inibida após incubação com LPS, SEA ou SEB por 5 a 120 min. Porém, a inibição em plaquetas ativadas foi menor quando comparada à inibição da adesão espontânea. Esta inibição ocorreu de forma independente de aumentos intraplaquetários de GMPc e AMPc. Com o objetivo de se entender o mecanismo de ação envolvido na inibição da adesão plaquetária pelo LPS, SEA e SEB as plaquetas foram pré-tratadas com os seguintes agentes farmacológicos: superóxido dismutase (seqüestrador de ânion superóxido), polietilino glicol superóxido dismutase (seqüestrador de ânion superóxido intracelular), polietileno glicol catalase (degrada peróxido de hidrogênio), puromicina e ciclohexamida (inibidores de síntese protéica). Em conjunto, nossos dados mostraram que o efeito inibitório do LPS não envolve aumento de anion superóxido (O2 -) e de peróxido de hidrogênio (H2O2), nem a formação de proteínas neo-sintetizadas, e alterações na ativação da GPIIb/IIIa. Por outro lado, o LPS reduziu significativamente o influxo externo de cálcio, sem afetar a mobilização intracelular deste cátion. Em relação às enterotoxinas estafilocócicas, a síntese de neo-proteínas e aumento de O2 - não tem papel direto sobre a inibição plaquetária, embora um aumento nas concentrações de H2O2 intracelulares esteja ligado a esta resposta. Em conclusão, a exposição ao LPS inibiu a adesão a agregação plaquetária, dosee tempo-dependente, inibindo a influxo de cálcio; da mesma forma, a incubação com SEA ou SEB inibiu a adesão de plaquetas ao fibrinogênio, por um mecanismo que envolveria a formação de H2O2 / Abstract: Sepsis is the second major cause of death in intensive care unit. Septic patients show abnormalities in platelet like thrombocytopenia, prolongation in coagulation time, disseminated intravascular coagulation, deep venous thrombosis and bleedings. However, the mechanisms involved in these platelet alterations are not totally clear. The objective of this work was investigate the actions of lipopolysaccharide (LPS) from E. coli and enterotoxins from Staphylococcus aureus (SEA and SEB), in human platelet adhesion and aggregation, likewise the mechanism involved in these phenomenon. The platelets were exposed to LPS, SEA or SEB in different concentrations and times of incubation in vitro evaluations of adhesion and aggregation. Moreover, experiments to elucidate the participation of nitric oxide (NO) and reactive oxygen species in the actions of LPS, SEA and SEB, likewise the intracellular sinalization (calcium mobilization) and activation of fibrinogen receptor glycoprotein IIb/IIIa (GPIIb/IIIa) were carry out. The platelets incubation with LPS, SEA and SEB for 5 to 120 min, inhibited the spontaneous adhesion to fibrinogen and this inhibition was dependent of concentration and time of incubation. The thrombin activated adhesion of platelets was concentration and time dependently also inhibited after incubation with LPS, SEA and SEB for 5 to 120 min. However, the activated platelets inhibition was lower when compared to spontaneous adhesion inhibition. This inhibition was not dependent of intracellular levels increase of cGMP and cAMP. To understand the mechanism of action involved in the platelet adhesion inhibition by LPS, SEA and SEB, the platelets were previously treated with pharmacological agents like: superoxide dismutase (superoxide anion scavenger), superoxide dismutase-polyethylene glycol (superoxide anion intracellular scavenger), catalase-polyethylene glycol (Hydrogen peroxide intracellular scavenger), puromycin and cyclohexamide (protein synthesis inhibitors). Our data suggests that the inhibitory effect of LPS neither involve superoxide anion (O2 -) and hydrogen peroxide (H2O2) increase, nor the formation of neo-proteins, and alterations on activation of glycoprotein IIb/IIIa. In contrast, LPS significantly reduce the external calcium influx, without effecting calcium internal mobilization. With regard to staphylococcal enterotoxin, the protein synthesis and rise in O2 - do not play a role in the platelet inhibition; however the increase of H2O2 intracellular concentration was involved in this response. In conclusion, platelet aggregation and adhesion was inhibited after addition of LPS, concentration and time-dependently, inhibiting calcium influx; similary, incubation with SEA or SEB inhibited platelets adhesion to fibrinogen, by a mechanism involving H2O2 formation / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-08-24T13:48:45Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Paloma I.S. Dantas.pdf: 4741082 bytes, checksum: e499e75b7a77189538a9f8be0d6be226 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-08-24T13:48:59Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Paloma I.S. Dantas.pdf: 4741082 bytes, checksum: e499e75b7a77189538a9f8be0d6be226 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-24T13:48:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Paloma I.S. Dantas.pdf: 4741082 bytes, checksum: e499e75b7a77189538a9f8be0d6be226 (MD5) Previous issue date: 2016-11-18 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Shigella is a gram-negative and intracellular bacterium responsible for triggering Shigellosis, a diarrheal disease characterized by the presence of mucus and blood. . In an epidemiological study conducted by our group in the city of Manaus-Amazonas with children with severe diarrhea from 2007 to 2009, the genus Shigella was the fifth most isolated pathogen (2.2%). Based on the clinical data we observed a heterogenous symptomatology among patients with shigellosis, since then, our group has been investigating the genotypic and phenotypic characteristics of these isolates. Shigella is a highly virulent bacterium, its mechanisms of pathogenesis is due to the presence of plasmidial and chromosomal genes. Among the genes responsible for its virulence are the Ipas genes that promote the invasion of Shigella in epithelial cells and the death of macrophages, the IpaHs genes, which modulate the host's immune response and the enterotoxins Shet1 and Shet2. In the present study, our main objective was to verify the genetic variability of the main virulence factors in clinical samples of Shigella flexneri. The virulence genes were amplified with specific primers developed in the study, the obtained amplicons were sequenced and analyzed. The Ipa, IpaH, Set1A, Se1B and Sen genes were successfully amplified. A total of 474 sequences referring to the 19 virulence genes of Shigella were sequenced, however, only 12 genes, a total of 154 sequences were analyzed for the presence of polymorphism. In this study 9 point mutations were identified in 5 Shigella virulence genes, being the IpaD, SenA, IpaH3, IpaH2.5 and IpaH6 gene. The study of the identification of specific genetic determinants is essential to understand the mechanism of pathogenesis and the propagation of virulent variants in the population of Shigella. Our work is based on previous studies conducted by our group, since the initial amplification of the virulence genes of these isolates was ineffective. Although few genes are analyzed, nucleotide variations have been found in different isolates, which may or may not interfere in the expression of the virulence phenotype. A new sequencing will be required to confirm the variations found in the study, as well as in vitro and in vivo studies, to verify if these changes may interfere with the virulence phenotype of the Shigella clinical samples. / A Shigella é uma bactéria gram-negativa e intracelular, responsável pelo desencadeamento da Shigelose, uma doença diarreica caracterizada pela presença de muco e sangue. Em um estudo epidemiológico realizado por nosso grupo na cidade de Manaus-Amazonas com crianças que apresentavam diarreia severa nos anos de 2007 a 2009, o gênero Shigella foi o quinto patógeno mais isolado (2,2%). A partir dos dados clínicos observamos uma sintomatologia heterogênia entre os pacientes com shigelose, desde então, nosso grupo vem investigando as características genotípicas e fenotípicas desses isolados. Shigella é uma bactéria altamente virulenta, seus mecanismos de patogenicidade se deve a presença de genes plasmidiais e cromossomais. Entre os genes responsáveis pela sua virulência temos, os genes Ipas que promovem a invasão de Shigella nas células epiteliais e a morte dos macrófagos, os genes IpaHs, que modulam a resposta imunológica do hospedeiro e as enterotoxinas Shet1 e Shet2. No presente estudo, nosso principal objetivo foi verificar a variabilidade genética dos principais fatores de virulência em amostras clínicas de Shigella flexneri. Os genes de virulência foram amplificados com iniciadores específicos desenvolvidos no estudo, os amplicons obtidos foram sequenciados e analisados. Os genes Ipa, IpaH, Set1A, Se1B e Sen foram amplificados com sucesso. Um total de 474 sequências referentes aos 19 genes de virulência de Shigella foi sequenciado, no entanto, apenas 12 genes, num total de 154 sequências foram analisadas quanto à presença de polimorfismo. Neste estudo foram identificadas 9 mutações de ponto em 5 genes de virulência de Shigella, sendo eles, o gene IpaD, SenA, IpaH3, IpaH2.5 e IpaH6. O estudo da identificação de determinantes genéticos específicos é essencial para compreender o mecanismo de patogênese e a propagação de variantes virulentas na população de Shigella. Nosso trabalho se baseia em estudos anteriores realizados por nosso grupo, uma vez que a amplificação inicial dos genes de virulência desses isolados foi ineficaz. Apesar de poucos genes serem analisados, variações de nucleotídeos foram encontradas em isolados diferentes, que podem interferir na expressão do fenótipo de virulência. Um novo sequenciamento será necessário para confirmar as variações encontradas no estudo, assim como estudos in vitro e in vivo, para verificar se essas alterações podem interferir no fenótipo de virulência das amostras clinicas de Shigella.

Orientador: Pedro Eduardo de Felicio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-01T09:05:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Saiki_MargaretYuriko_M.pdf: 14197745 bytes, checksum: bdec19916d272db95beac0a2c6aa3cbc (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Produtos cárneos com baixo teor de sal e alta atividade de água têm vida de prateleira reduzida à temperatura ambiente. A carne de sol, um produto tipicamente brasileiro, é elaborada de forma artesanal e tem uma duração média de três a cinco dias. Os princípios de boas práticas de fabricação, associados ao armazenamento refrigerado adequado e à embalagem a vácuo, permitem a conservação de produtos cárneos tradicionais de baixo teor de sal, por um tempo maior, para a comercialização a longas distâncias. O presente trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar a segurança microbiológica de uma carne bovina salgada e levemente dessecada, com características físico-químicas similares à carne-de-sol, com teor de sal compatível ao paladar humano, sem necessidade de dessalga e acondicionada em dois tipos de embalagem a vácuo, de acordo com suas permeabilidades ao oxigênio (9,6cc02/m2/dia vs 40,Occ02/m2/dia). No processamento utilizou-se o coxão-mole bovino, cortado em fatias de 5,Ocm de espessura, salgadas com 4% de sal e mantidas a 0°C por quatro horas. Ems eguida, foi realizada a secagem em câmara climatizada durante quatro horas a uma temperatura média de 24,5°e e umidade relativa do ar de 52,3% ...Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. / Abstract: Meat products with low salt content and high water activity have a short shelf-life at ambient temperature. A typical Brazilian beef product, "carne-de-sol", is traditionally made in small quantities at local markets and has an average time for consumption of three to five days. Principies of good manufacturing practices associated with proper cold storage and vacuum packaging could allow the preservation of low salt traditional meat products for longer time to make possible their marketing to distant areas. However, it is important to take into account the potential hazard of toxin formation in these products at abusive temperatures. This research work was carried out to evaluate the microbiological safety of a beef product with physico-chemical characteristics similar to "carne-de-sol", having salt levei compatible to consumers acceptance without desalting, vacuum packaged in two types of packaging films according to their oxygen barrier (9.6ccO2/m2/diavs. 40.0ccO2/m2/dia).Boxed beef top round wholesale cuts were sliced in 5 cm thick steaks, added of 4% salt and kept in the cooler (O°C ] for four hours ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations. / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Orientador : Pedro Eduardo de Felicio / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-02T11:34:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CarvalhoJunior_BentodaCosta_D.pdf: 61843726 bytes, checksum: 83faa4c62dc2650872017cd235b1de94 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A primeira etapa da presente pesquisa abrangeu a evolução das carnes bovinas salgadas e dessecadas elaboradas no Brasil, charque e jerked beef, e as técnicas tradicionais utilizadas na elaboração da carne-de-sol, uma carne bovina levemente salgada e dessecada, muito popular no Nordeste. Nessa etapa foram levantados fatos sobre a origem e a evolução do charque e da carne-de-sol, produtos que surgiram no Brasil do século XVII, e do jerked-beef, um produto curado derivado do charque, com menos de 30 anos de existência. Foram feitas, também, considerações sobre o futuro desses produtos...Observação: O resumo, na integra, podera ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The first part of this research has examined the evolution of salted and dried beef produced in Brazil, charque and jerked beef, and the traditional techniques used in the production of carne-de-so/, a lightly salted and partially dehydrated meat product, very popular in the Northeast. Facts are presented on the origin and evolution of charque and carne-de-so/, products that first appeared in Brazil in the seventeenth century, and of jerked beef, a cured product derived from charque, which has been in the market for the last 30 years. Considerations about the future of these products are also made....Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Doutor em Tecnologia de Alimentos

Orientadores: Tomomasa Yano, Gleize Villela Carbonell / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:30:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Simi_Silvia_D.pdf: 1868819 bytes, checksum: 9a81841182a9a5aad432040a917e03f8 (MD5) Previous issue date: 2004 / Doutorado

En el presente estudio se han aislado Staphylococcus aureus de quesos, embutidos y cremas chantilly, recolectados en la Ciudad de Lima, con el objetivo de identificar la presencia de enterotoxinas estafilocócicas a través de la técnica de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). Mediante el método de la Comisión Internacional de Especificaciones Microbiológicas para Alimentos (ICMSF) se determinó que Staphylococcus aureus estaban presentes en 75% de las muestras de quesos, 44% de muestras de embutidos y ausente en cremas chantilly. El 46% de las muestras de queso presentaron recuentos de S. aureus mayores a 105 UFC/ g. Mediante la técnica de PCR multiplex para identificación de enterotoxinas SEA, SEB, SEC, SED, SEE, se encontró que el 5% de cepas portaban el gen sea, 5% gen seb, y el 5% gen sec, y el 85% resultaron negativas a algún tipo de enterotoxina clásica, se concluye que los quesos y embutidos comercializados en la ciudad de Lima se encuentran contaminados con S. aureus y algunos de ellos con cepas enterotoxigénicas. / In this study we have isolated Staphylococcus aureus in cheese, salami and whipped cream, gathered in the city of Lima, with the aim of identifying the presence of enterotoxins through the technique of the Polymerase Chain Reaction (PCR). Via the method of the International Commission on Microbiological Specifications for Foods (ICMSF) we found that Staphylococcus aureus were present in 75% of cheese samples, 44% of sausage samples but absent in whipped cream samples. 46% of cheese samples showed counts of S. aureus greater than 105 CFU / g. Using the technique of multiplex PCR for identification of staphylococcal enterotoxins SEA, SEB, SEC, SED, SEE, we found that 5% of the strains were carrying the gene sea, 5% were carrying the gene seb and 5% were carrying the gene sec, and 85% test negative of any classical enterotoxin, we can conclud that cold meats and cheeses sold in Lima are contaminated with S. aureus and some with enterotoxigenic strains. / Tesis

Determina la frecuencia de portadores sanos de Staphylococcus aureus enterotoxigénico en manipuladores de alimentos de la Ciudad Universitaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. El estudio es observacional, descriptivo y de corte transversal. Se realizaron hisopados nasales y enjuague de manos de 80 manipuladores de alimentos de la Ciudad Universitaria de la UNMSM. Los aislamientos de S. aureus se realizaron en los laboratorios del Instituto de Medicina Tropical “Daniel Alcides Carrión”, se determinó la resistencia antimicrobiana del S. aureus a determinados antibióticos utilizados en la práctica clínica y se identificaron sus enterotoxinas mediante Elisa y PCR convencional. Se analizaron 160 muestras (hisopado nasal y enjuague de manos) de 80 manipuladores de alimentos. Se aislaron 146 cepas de Staphylococcus, 2,7% (4/146) fueron S. aureus y 97,3% (142/146) resultaron Staphylococcus coagulasa negativo. El análisis de sensibilidad antibiótica del S. aureus determinó 100% de sensibilidad a eritromicina, clindamicina y meticilina. La resistencia a la penicilina fue del 100% y un 25% de resistencia al trimetropim/sulfametoxazol. Se identificaron mediante ELISA las enterotoxinas A, E en una cepa aislada de una muestra de hisopado nasal 25,0% (1/4), y mediante la PCR convencional los aislamientos encontrados de la misma muestra de hisopado nasal mostraron que un 25,0% (1/4) portaba en el gen sea. Se concluye que la frecuencia de portadores sanos de S. aureus enterotoxigénico en manipuladores de alimentos de la Ciudad Universitaria de la Universidad Nacional de San Marcos es baja (1,3%) con respecto a otros estudios realizados en Latinoamérica. / Tesis

Orientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Resumo: A mastite é considerada um grande problema na pecuária leiteira e o uso frequente de antimicrobianos contribui para o aumento da pressão seletiva de micro-organismos resistentes aos principais fármacos. A Organização Mundial da Saúde Animal tem alertado para o risco da resistência antimicrobiana resultante do uso indevido de antimicrobianos no tratamento de animais doentes. O presente trabalho tem como objetivos identificar e caracterizar o perfil clonal, bem como os fatores de virulência e de resistência aos antimicrobianos em Staphylococcus spp. isolados do leite de bovinos com mastite subclínica de várias regiões do Brasil. As amostras foram concedidas pela Embrapa Gado de Leite, provenientes de 6 estados brasileiros, incluindo Paraná, Santa Catarina, Rio Grande do Sul, Minas Gerais, São Paulo e Pernambuco. Foram incluídas 181 amostras de Staphylococcus spp. no estudo. A identificação fenotípica revelou um total de 82 (45,3%) Staphylococcus aureus e 99 (54,7%) Staphylococcus coagulase negativa (CoNS). Destes, a espécie mais isolada foi S. chromogenes com 27 (14,9%) amostras, seguido de S. epidermidis com 26 (14,3%). Realizou-se a confirmação genotípica utilizando a técnica Internal Transcribed Spacer - PCR (ITS-PCR) de todas as amostras, demonstrando um total de 98% de concordância com o teste fenotípico. Quanto à determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM), S. aureus revelou 99% de sensibilidade à oxacilina, enquanto os CoNS apresentaram 32% de resistência à esse... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Mastitis is considered a major problem in dairy farming and the frequent use of antimicrobials contributes to increased selection pressure of resistant micro-organisms to the main drugs. The World Organisation for Animal Health are aimed at the protection of animal and human health against the risk of antimicrobial resistance resulting from the treatment of sick animals. This study aims to identify and characterize the clonal profile and the virulence as well as the virulence factors and the antimicrobial resistance to Staphylococcus spp. isolated from bovine milk with subclinical mastitis from several regions of Brazil. The samples were provided by Embrapa Gado de Leite (Embrapa Dairy Cattle), from 6 Brazilian states, including Paraná, Santa Catarina, Rio Grande do Sul, Minas Gerais, São Paulo and Pernambuco. A total of 181 samples of Staphylococcus spp. were included in the study. Phenotypic identification revealed a total of 82 (45.3%) Staphylococcus aureus and 99 (54.7%) Coagulase-Negative Staphylococci (CoNS) and, of these, the most isolated species was S. chromogenes with 27 (14.9%) samples, followed by S. epidermidis with 26 (14.3%). We realized the genotypic confirmation by using the technique Internal Transcribed Spacer - PCR (ITS-PCR) of all samples, demonstrating a total of 98% of concordance with the phenotypic test. As for the determination of Minimum Inhibitory Concentration (MIC), S. aureus showed 99% of susceptibility to oxacillin, while CoNS showed 32% resist... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Fernando Antônio de Ávila / Banca: Karina Paes Bürger / Banca: Hélio José Montassier / Banca: Luciano Menezes Ferreira / Banca: Adilson César Abreu Bernardi / Resumo: Assim como nos bovinos, a búfala pode ter mastite, sendo o Staphylococcus aureus o principal causador desta enfermidade. No entanto, é possível que sua prevalência possa estar superestimada. Este estudo objetivou comparar métodos fenotípico e genotípico na identificação de S. aureus em amostras de leite bubalino e ambiente de ordenha bem como propor uma nova PCR quantitativa em tempo real para identificação do mesmo. Para isso, de um total de 408 amostras obtidas de leite de búfalo, ambiente de ordenha e mãos de ordenhadores, 32 cepas presuntivas de S. aureus foram identificadas com base em seu crescimento fenotípico característico em ágar Baird Parker, reações positivas de Gram e catalase, capacidade de coagular plasma de coelho, e resultado positivo no ensaio de PCR Sa442 específico para a espécies. No entanto, testes adicionais revelaram que destas 32 estirpes, apenas 10 isolados apresentaram resultado positivo na aglutinação em látex, incluindo um S. chromogenes e um S. agentis. A análise de MALDI-TOF MS revelou que oito das 32 cepas eram S. aureus, 19 S. chromogenes, três S. agnetis e uma S. xylosus. Todas as oito cepas identificadas como S. aureus pela análise de MALDI-TOF e confirmadas pelo sequenciamento do 16S rRNA foram positivas na PCR do gene cydB específico para S. aureus. Além disso, foi encontrada uma cepa positiva para o gene sea, nove para o gene cna, uma para o gene sei, duas para o gene sem, uma para o gene seg, seis para o gene seh, 15 para o gene eno 11 p... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Like cattle, buffalo may have mastitis, with Staphylococcus aureus being its main cause. However, it is possible that its prevalence may be overestimated. This study aimed to compare phenotypic and genotypic methods for S. aureus identification in samples of buffalo milk and milking environment as well as to propose a new quantitative real time PCR for its identification. For this, a total of 408 samples obtained from buffalo milk, milking environment and milkers hand, 32 presumed S. aureus strains were identified based on their characteristic phenotypic growth in Baird Parker agar, positive reactions of Gram and catalase, ability to coagulate rabbit plasma, and positive result in the species-specific Sa442 PCR assay. However, additional tests revealed that of these 32 strains, only 10 isolates tested positive for latex agglutination, including a S. chromogenes and a S. agentis. Analysis of MALDI-TOF MS revealed that eight of the 32 strains were S. aureus, 19 were S. chromogenes, three were S. agnetis and one was S. xylosus. All eight strains identified as S. aureus by MALDI-TOF analysis and confirmed by 16S rRNA sequencing were positive in S. aureus specific cydB gene PCR. In addition, a positive strain was found for the sea gene, nine for the cna gene, one for the sei gene, two for the sem, one for the seg gene, six for the seh gene, 15 for the eno 11 gene for the gene ebps two for the fib gene and 14 for the fnbA gene. Of the isolates, only one showed resistance to clindam... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-10-07T19:33:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 149.pdf: 1418757 bytes, checksum: 9e2293dafb51492c111f140ed6ce8560 (MD5) Previous issue date: 2005 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / As enterotoxinas estafilocócicas são um grupo de proteínas de baixo peso molecular, de cadeia única, termoestáveis, pirogênicas, com característica em ética e efeitos nas células do sistema imune. A ingestão de toxinas pré-formadas em alimentos produz diarréia e vômito após 2 a 8 horas, mas a quantidade de enterotoxina necessária para acarretar doença depende da susceptibilidade, do peso e da saúde da pessoa afetada. Os leites crus ou pasteurizados e os queijos têm sido freqúentemente implicados como veículos de transmissão de bactérias patogênicas e com surtos de intoxicações estafilocócicas relatados em todo o mundo. Este trabalho teve como objetivos a pesquisa de estafilococos coagulase-positiva isolados de queijos minas frescal de algumas regiões do Rio de Janeiro e a padronização de um protocolo de M-PCR para a detecção de genes de S. aureus que codificam para as suas enterotoxinas. Para a padronização da M-PCR foram utilizadas cinco cepas controle de S. aureuy. Das 30 amostras de queijo minas frescal analisadas em nosso trabalho, 12 (40 por cento) apresentaram contagens de estafilococos coagulase positiva acima de 5 x 102 UFC/g, valor este estabelecido como limite permitido pela ANVISA para o queijo minas frescal. Dez por cento de nossas amostras apresentaram valores acima de 10s UFC/g, o que é preocupante principalmente pelo fato destes valores estarem muito próximos dos requeridos (IOs UFC/g a 109 UFC/g) pelas cepas enterotoxigênicas para a produção de enterotoxinas; e para a ocorrência de surtos de intoxicação alimentar estafilocócica. Os resultados mostraram que na detecção direta dos genes das enterotoxinas A, B, C, D, E nos queijos minas frescal a multiplex PCR foi negativa, sendo necessário o isolamento de colônias estafilococos coagulase-positiva. Das 231 colônias isoladas foram selecionadas 111 colônias coagulase-positiva e coagulase- negativa.para o teste da multiplex PCR. Trinta e quatro colônias (30,62 por cento) foram positivas para algum dos cinco genes de enterotoxinas pesquisados. Os produtos da reação foram separados por eletroforese em gel de agarose (1,5 por cento), marcado com brometo de etídio e fotografado sob luz UV .Os resultados deste trabalho revelam que os queijos minas frescal obtidos e comercializados na área geográfica deste estudo estão em desacordo com o padrão legal vigente.