Orientador: Iracema de Oliveira Moraes / Tese (doutorado) - Universidade Estadualde Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:13:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Salva_TerezinhadeJesusGarcia_D.pdf: 3434520 bytes, checksum: 42346678dc764c2c750200be2f53e52d (MD5) Previous issue date: 1990 / Resumo: Foram estudados os efeitos de diferentes concentrações de glicose, amido solúvel, dextrina, lactose, peptona e extrato de levedura sobre a síntese de a-amilase por Bacillus subtilis ATCC 601B por processo em batelada, em meio de cultura básico composto de (KH4)2SO4, MgSO4 * 7H20, KC1, K2HPO4 e CaCl2. Foram estudados os efeitos do pH inicial do meio de cultura e da temperatura de incubação sobre a produção da enzima, e o perfil da síntese enzimática apenas no meio de cultura contendo glicose como fonte de carbono. Os resultados foram discutidos relacionando o crescimento microbiano com a síntese da enzima. Foi observado que a maior produção de a-amilase ocorreu nos meios de cultura contendo glicose a 0,1g/l e 30,0g/l ou dextrina a 10,0g/l. As atividades enzimáticas específicas globais (Emax / Xmax) mostraram que esses resultados se devem a um maior estímulo do crescimento celular em meio de cultura contendo glicose e a um maior estímulo da síntese enzimática em meio de cultura contendo dextrina. Os quatro carboidratos inicialmente adicionados ao meio de cultura causaram inibição catabólita da síntese da enzima. O aumento das atividades enzimáticas específicas globais, observadas em determinadas faixas de concentração inicial dos açúcares, indicam que durante o processo fermentativo há estímulo da síntese de a-amilase devido a formação de metabólitos ou de produtos de degradação do carboidrato. Para a faixa de concentração compreendida entre l,0g/l e 20,0g/l. O estímulo da síntese enzimática foi mais acentuada em meio de cultura contendo dextrina, seguida de amido solúvel, lactose e glicose. Os resultados obtidos para a produtividade global em 72 horas de fermentação também revelaram que a dextrina e a fonte de carbono mais adequada para a produção de a-amilase. Foi observado que as concentrações de peptona e de extrato de levedura mais adequadas para a produção de a-amilase são 10,0g/l e 5,0g/l respectivamente. Os resultados obtidos para as atividades enzimáticas específicas globais mostraram, no entanto, que a peptona afeta basicamente o desenvolvimento microbiano enquanto que o extrato de levedura afeta diretamente a síntese da enzima. Das condições estudadas, a maior produção de enzima é obtida quando o pH inicial do meio de cultura é ajustado a 7,0 e a temperatura de incubação é 37°C. Nessas condições foram obtidas as maiores atividades enzimáticas específicas globais e produtividades globais. O perfil da síntese da a-amilase revelou que houve produção da enzima mesmo na fase logarítmica de crescimento, ocorrendo, porém, com maior intensidade na fase estacionária e de lise celular. Estudos complementares mostraram que a enzima é uma a-amilase com pH ótimo ao redor de 6,4 em solução tampão ácido cítrico - fosfato de sódio, e com temperatura ótima ao redor de 50°C. Além disso, foi observado que ela mantém 100% da sua atividade inicial em solução não dialisada após 25 horas de aquecimento a 37°C. A enzima se mostrou pouco estável a 80°C, tendo sido totalmente inativada após 10 minutos de aquecimento a essa temperatura. O cálcio e o amido estabilizaram a enzima acentuadamente e a sua ação hidrolítica sobre o amido produz polímeros de glicose com duas ou mais unidades do açúcar / Abstract: It was studied the effect of concentrations of glucose, soluble starch, dextrin, lactose, peptone and yeast extract in a basic medium containing (KH4)2SO4, MgSO4 * 7H20, KC1, K2HPO4 and CaCl2 on the a-amylase production by Bacillus subtilis, ATCC 601B in batch process. The effect of medium pH and of the incubation temperature were also studied. It was investigated the profile of enzyme synthesis in a medium containing glucose as carbon source. The cell growth and a-amylase synthesis relationship were analyzed. It was shown that higher enzyme production was attained when glucose 0,lg/l and 30,0g/l or dextrin 10,0g/l were used as carbon source. The overall specific enzyme activity (Emax / Xmax) showed that while the medium containing glucose stimulates the microbial growth, the medium containing dextrin stimulates the enzyme synthesis mainly. All four carboydrates used in the medium caused catabolite repression of the enzyme synthesis. The overall specific enzyme activities in some carbohydrate concentrations showed that there was an estimulation of the enzyme synthesis during the fermentative process due to metabolites or degradation products formation. In the range of 1,0g/l to 20,0g/1 of carbohydrate concentrations this estimulation was higher in dextrin containing medium followed by soluble starch, lactose and glucose. The overall productivity in 72 hours of fermentation also revealed that dextrin is the best carbon source for a-amylase production by the microbial strain. It was found that the best peptone and yeast extract concentrations for enzyme production are 10,0g/1 and 5,0g/1, respectively. The overall specific enzyme activities showed, however, that peptone affects the microbial growth, while yeast extract affects the enzyme synthesis directly. Among the conditions studied, the best one for a-amylase production were medium pH 7,0 and incubation temperature 37°C. At that conditions it were obtained higher overall specific enzyme activity and overall productivity. The profile of enzyme synthesis showed that the enzyme is synthesized yet in the logarithmic growth phase, but more intensively during stationary phase and with cell lyses. Further studies showed that the enzyme was an a-amylase with optimal pH around 6,4 and optimal temperature around 50°C in citric acid - sodium phosphate buffer. It was observed that 100% of initial enzyme activity was maintained, in non-dialised solution, after 25 hours at 37°C. The enzyme stability was lower at 80°C. At this temperature the enzyme lost completely its activity after 10 minutes. Calcium and starch stabilized the enzyme and the hydrolyses of starch produces glucose polymers with two or more units / Doutorado / Doutor em Engenharia de Alimentos

Orientador: Lucia Helena Innocentini Mei / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:07:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Trevisan_HenriqueCelso_M.pdf: 3069100 bytes, checksum: 37bda574fc53a1d35ce349d22fa4fd1c (MD5) Previous issue date: 1990 / Resumo: Silica gel macroporosa foi obtida pelo tratamento hidrotérmico da silica gel microporosa, preparada a partir de silicato de sódio e ácido cloridrico, a temperatura ambiente. A silica porosa, classificada em diferentes tamanhos de particula, e um tipo de terra de diatomáceas (celite 545) foram analisados em termos de tamanho de poros pelo método de introdução de mercúrio por pressão. A silica gel com diferentes tamanhos de particula, celite 545 e vidro não poroso foram examinados quanto à possibilidade de serem utilizados como suportes para imobilização de glicose oxidase (EC 1.1.3.4). catalisando a oxidação de glicose para glicolactona. A enzima foi ligada a derivados alquilamino dos suportes utilizando-se glutaraldeido e a efetividade do método foi comparada em relação ao tamanho das particulas e dos poros. A performance da enzima imobilizada foi estudada em reator de leito fluidizado, utilizando ar como fonte de oxigênio / Abstract: Macroporous silica gel was obtained by hydrothermal treatment of a microporous silica gel, prepared from sodium silicate and hydrochloric acid at room temperature. The macroporous silica sieved in differents particle sizes, and one grade of diatomaceous earth (celite 545) were analysed in terms of pore sizes by the mercury intrusion pressure method. Silica gel of different particle sizes celite 545 and nonporous glass were examined for their suitabilty as support materials for glucose oxidase ( EC 1.1. 3. 4) immobilization catalysing the oxidation of glucose to glucolact one. The enzyme was coupled to the alkilamine derivatives of the supports by glutaraldehyde and the effectiveness of the method was compared in relation to the particle and pore sizes. The performance of the immobilized enzyme was studied in a fluidized bed reactor using air as oxigen source / Mestrado / Mestre em Engenharia Química

Orientador : Francisco Maugeri Filho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-15T10:55:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_FatimaAparecidadeAlmeida_M.pdf: 4204639 bytes, checksum: 9ba83fef6bd25a4e9b0f4e84284cc051 (MD5) Previous issue date: 1986 / Resumo: O resumo podera ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The abstract is available with the full electronic digital document / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientador : Nelson Duran / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-15T15:06:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RodriguezGutierrez_JaimePatricio_M.pdf: 2042701 bytes, checksum: 7eb3cc45a72a9c78d0c55cd9ef489165 (MD5) Previous issue date: 1987 / Mestrado

Orientador : Paulo Jose S. Moran / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-15T21:10:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_Marciade_M.pdf: 3328708 bytes, checksum: 93c5ac429d1c25f0c31933235fe94559 (MD5) Previous issue date: 1992 / Mestrado

Orientador: Yong K. Park / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos e Agricola / Made available in DSpace on 2018-07-16T06:21:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Wosiacki_Gilvan_D.pdf: 2667471 bytes, checksum: f550fbc060e66ce43df02c0dce1813db (MD5) Previous issue date: 1977 / Resumo: Microrganismos isolados de frutos de café cereja foram testados no que diz respeito a sua capacidade pectinolítica e maceração de tecidos vegetais. Fusarium oxysporum Schlecht.ex Pr., crescido em meio constituído de farelo -úmido, demonstrou produzir enzimas extracelulares capazes de despolimerizar rapidamente polissacarídeos vegetais, como celulose, amido, xilano e arabano, além de substâncias pecticas. 0 sistema pectinolítico foi fracionado por técnicas de troca iônica e filtração em gel, demonstrando ser constituído de três endopoligalacturonases, com atividade ótima em torno de pH 6,0. Não foram constatadas as atividades pectinesterase nem pectina transeliminase. As enzimas pectinolíticas purificadas demonstraram Km 0,12%, 0,022% e 0,019% e como produto de hidrolise foram constata dos oligossacarídeos ácidos em todos os casos. A hidrólise de ácido péctico foi inibida pela presença de cátions divalentes no meio de reação e agentes quelantes de metais foram eficientes em proporcionar melhores condições para a atividade enzimática. Tanto enzimas purificadas quanto a preparação bruta foram capazes de hidrolisar substâncias pécticas isoladas de limão e de frutos de café / Abstract: The pectinolytic and cell-dissolving ability of microorganisms isolated from coffee cherries was studied. The fungus Fusarium oxysporum Schlecht.ex Fr., when grown on moistened bran, developed enzymes capable of rapidly depolymerizing such vegetable polysaccharides as celulose starch, xylan and araban besides pectic substances. This pectinolytic enzyme system was fractionated by ion exchange chromatography and gel filtration into three polygalacturonases with optimal activity at a pH around 6,0. No pectinesterase and pectintranseliminase activity were detected. Michaelis-Menten constants (Km) measured for the three enzymes were 0,12 , 0,022 e 0,019% while acid oligosaccharides were the end products in all cases. Pectic acid hydrolysis was inhibited by the presence of divalent cations in the reaction mixture while chelating agents were effective adjuvants, sometimes accelerating the reaction. The crude extract as well as the purified enzymes obtained from this fungus were effective in hydrolysis of pectic substances isolated from lemon and coffee fruits / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador : Yong Kun Park / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-16T11:58:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MarancenbaumAguilera_DemetrioEdgar_D.pdf: 3155672 bytes, checksum: 5cad8bef84f273ac33af1efa8132c733 (MD5) Previous issue date: 1978 / Resumo: De 695 microrganismos isolados do solo e de material clínico, foram encontrados quatro produtores da enzima penicilina amidase , sendo o maior produtor destenzima, uma linhagem de E.coli FEA 30. Verificou-se que esta enzima intracelular, e que o ácido fenil acético induz sua produção. Encontrou-se que o melhor meio de cultura, na produção da enzima penicilina amidase, por E.colí FEA 30 foi: l% de peptona, 0,5 % de extrato de levedura e 0,15% de áicido fenil acético, com pH de 7,0 antes de autoclavagem. A melhor temperatura de incubação, na produção da enzima foi de 23ºC. Um meio de cultura na produção da enzima penicilina amidase com possibilidades de ser usado, a nível industrial foi: 2% de farelo de soja desengordurado, 1% de extrato preparado pela autólise de Saccharomyces cerevisiae, da Fleischmanne, 0,15% de ácido fenil acético, com pH de 7,.0 antes da autoclavagem. Depois de colocar uma suspensão de E.coli FEA por 50 minutos em uma solução de N-metil-N¿-nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG), foram isoladas 800 linhagens, das quais foi obtida uma mutante denotada como E.coli FEA 30 MQI. Esta mutante produz duas vezes mais penicilina amidase do que a linhagem selvagem, à temperatura de incubação de 25°C. Com esta linhagem mutante E.coli FEA 30 MQl, foi feita novamente indução de mutação e dentre 1.000 linhagens isoladas após a exposição de 50 minutos em MNNG, foi encontrada uma linhagem E.coli FEA 30 MQ2, que produz 120% a mais enzima que a selvagem. Tanto E.coli FEA 30 MQl como E.coli 30 de MQ2. quando inoculadas tem meio infimo de: 15g de KH2PO4' 10 g de glicose, Z g de sulfato de amonia, 0,2 g de sulfato de magnisio, com pH ajustado a 7 com hidróxido de sódio, não apresentaram divisão celular, cresccendo em forma filamentosa às temperaturas de incubaçio de 25°C a 37ºC. Com a indução de mutação com raios ultravioletas, não foi possível. encontrar mutante hiperprodutiva, ainda que nestas condições foram conseguidas mutantes auxotrofos e outras a ß galactosidase-negativas. A enzima penicilina amidase de E. coli apresentou atividade máxima a temperatura de 40ºC, sendo pH ótimo entre 8,0 e 8,5, seu valor da constante de Michaelis Km foi 37 mM e Vm foi l µmol/min/ml. Na produção de 6APA, por penicilina amidase e penicilina G, à temperatura de incubação de 40°C, usando-se uma concentração de 7% de penicilina G, contendo 0,83 unidades de enzima por mililitro, conseguiu-se uma conversão de 90% em 20 horas de incubação, obtendo-se posteriormente uma recuperação de 70% do 6APA produzido. / Abstract: Of 695 microorganisms isolated from soil and clinical material, four were proved to be producers of penicillin amidase, the principal producer of the above enzyme being a lineage of E.coli FEA 30. It was verified that the enzyme was intracellular and that its production is induced by phenylacetic acid. The best culture medium for the production of penicillin amidase by E.coli FEA 30 was found to be: 1% of peptone, 0,5% of yeast extract and 0,15% of phenylacetic acid, with pH 7,0 before autoclaving. The optimal temperature of incubation for the production of the enzyme was 23°C. For industrial purposes an appropiate culture medium would be: 2\ of defatted soybean meal, 1% of an extract prepared by autolysis of Saccharomyces cerevisae of Fleischmann and 0,15% of phenylacetic acid with pH 7,0 before autoclaving. After placing a suspension of E.coli FEA 30 for 50 minutes in a solution of N-methyl-N'-nitro-N-nitroguanidine (MNNG), there were isolated about 800 lineages from which there was obtained a mutant denoted as E.coli FEA 30 MQ1. This mutant produces twice as much penicillin amidase than does the wild lineage at an incubation temperature of 25°C. The mutant E.colí FEA 30 MQl, was subjected again to a mutation process and of the 1.000 lineages isolated after 50 minutes immersion in MNNG solution there was encountered amutant lineage denoted as E.coli FEA 30 MQ2 which produces 120% more of the enzyme than the wild one. Both E.coli FEA MQl and E.coli FEA MQ2 when inoculated in minimal medium of: l5g of KH2PO4, 10 g of glucose, 2 g of (NH4)2SO4 and 0,2 g af MgSO4, with pH adjusted to 7,0 with sodium hydroxide, did not show cellular division, but grew of in a filament form at an incubation temperature 25°C to 37°C. When inducing the mutation with ultraviolet rays it was not possible to obtain a penicillin amidase hyperproductive mutants even if under these conditions mutants such as auxotrophic and others with negative ß-galactosidase were encountered. The penicillin amidase of E.colí showed maxirnum activity 40°C, the optimal pH being between 8,0 and 8,5. The value at of its Michaelis constant Km was 37 mM and its Vm was l µmol/min/ml. When employing an incubation temperature of 40°C and a penicillin G concentration of 7% with 0.83 enzymes units per ml, a conversion of 90% of the penicil1in into 6APA in 20 hours of incubatian was achieved. Seventy % of the above yield was recuperated. / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Iracema de Oliveira Moraes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-16T18:19:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_EloizioJulio_M.pdf: 2711439 bytes, checksum: 9ecc4cfd3ad82ca7450375252df1160f (MD5) Previous issue date: 1983 / Resumo: Invertase de levedura foi imobilizada ionicamente, usando como suportes Duolite S-761, Amberlite, IRA-400, Rexyn101(H) e Dowex 1 - X4. Foi estudada a influência do pH do meio na ligação da enzima ao suporte, bem como tempo de imobilização e proporção da enzima em relação a resina. Foram determinados os parâmetros cinéticos Km e Vm e estudados os fatores temperatura e pH, para a enzima livre imobilizada. A cinética de hidrólise de sacarose foi estudada, usando um reator de leito fixo com invertase imobilizada e testado o modelo proposto para o reator tubular ideal. A resina que apresentou maior retenção de atividade foi Duolite S-761, com 70,43%, a um pH do meio de imobilização igual a 3,0. Os parâmetros cinéticos da invertase imobilizada diferiram daqueles da enzima livre.. Em operação continua, se mostraram dependentes da velocidade linear de fluxo na coluna / Abstract: Yeast invertase was ionically immobilized on carriers of Duolite S-761, Amberlite IRA-400, Rexyn101(H) e Dowex 1 - X4. The Ph of the medium influence on enzyme ¿ carrier linkage, as well as the time of immobilization and the ratio enzyme/resin were studied. ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientador: Yong Kun Park / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-16T20:34:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zenin_CeliaTaeko_M.pdf: 1850173 bytes, checksum: d0a12c92198da3f4c96f812926d3ce69 (MD5) Previous issue date: 1978 / Resumo: De duzentos e quarenta e nove linhagens de microrganismos isolados do solo foi encontrado quatro linhagens produtoras de tirosinase, das quais escolheu-se a linhagem que produziu maior atividade de tirosinase. Esta, foi classificada como Bacillus subtilis e verificada que produz a enzima intracelularmente. Dentre vários meios de cultura testados, o microrganismo crescido no meio constituído de 1% de peptona, 1% de levedura e 2% de glicose, a pH 7,0 , apresentou melhor rendimento na produção de tirosinase. O estudo da produção de tirosinase por B.subtilis foi realizado no minifermentador da New Brunswick modelo M-1000, à 30°C e 1 vvm de aeração, com o meio de cultura acima descrito. No decurso da fermentação foi verificado que o valor de pH do meio de cultura cai durante a fase exponencial de crescimento, retornando ao nível ligeiramente acima do inicial no fim dessa fase. A produção da enzima foi verificada no fim da fase exponencial de crescimento, atingindo o máximo de produção ã 48 horas de incubação, com uma atividade 5,7 x 102 unidades de tirosinase por mililitro de suspensão celular. Algumas características enzimáticas da tirosinase intracelular e B.subtilis foram estudadas na forma semipurificada e na forma de enzima imobilizada natural (cell-bound enzyme).A enzima emipuríficada pelo fracionamento com sulfato de amônio apresentou pH ótimo 7,0 , temperatura ótima de 25°C e estabilidade em pH na faixa de 6,0 a 7,5. A sua atividade não foi alterada na presença de ions metálicos como Al2(SO4)3, MgSO4, MnSO4, CuSO4, BaSO4, CaCl4, CoCl2 e KCl, porém foi inibida na presença dos agentes quelantes KCN, tiouréia, dietilditiocarbamato de sódio e cisteina. A eletroforese da tirosinase semipurifiçada mostrou que a enzima move em direção ao cátodo à pH 4,0. O estudo cine tico da enzima apresentou respectivamente para os valores de Km e Vmax 7,5 x 10-4M de L-tirosina e 13,5 x 10-3 umoles de L-DOPA/min/mg de proteína. A tirosinase na forma de enzima imobilizada natural apresentou características semelhantes à tirosinase na forma semipurificada, exceto na cinética de enzima , sendo obtido os valores de 9,0 x 10-4 M de L-tirosina e 7,1 x 10-4 ?moles de L-DOPA/min/mg de massa celular, respectivamente para Km e Vmax. A conversão de L-tirosina ã L-DOPA pela tirosinase de B.subtilis foi realizada com suspensão de células intactas contendo 11 x 10-4 unidades de tirosinase por mililitro e substrato L-tirosina em três diferentes concentrações. Estes foram incubados ã 30 C, pH 7,0, por 40 horas, adicionando-se periodicamente ácido ascórbico para prevenir a oxidação do produto formado. O máximo de conversão de L-tirosina para L-DOPA foi obtido quando a concentração do substrato foi de 12mM / Abstract: Two hundred forty nine strains of microorganisms were isolated from soil, and four strains were to be producers of tyrosine. One o£ strains, wich is classified as Bacillus subtilis , was best producer of tyrosinase, and the enzyme was produced intracellulary. The best culture medium for the production of tyrosine by B. subtilis was found to be: 1% peptone, 1% yeast and 2% glucose, at pH 7,0. The study on the enzyme production by the strain was done with the culture medium, described above in a minifermentor (New Brunswick model M-1000) at 30°C with aeration (one volume / volume/minute). Time course of fermentation by B.subtilis demonstrated that the pH has fallen during exponential cell growth and elevated at the end of the phase.Enzyme production has begun at end of the exponential cell growth and achieved maximum enzyme production at 48 hours of incubation with an activity of 5,7 x 10 units of tyrosinase per milliliter of cell suspension. Characterization for both, cell bound and semipurified tyrosinase from B.subtilis were studied. The semipurified enzyme with ammonium sulfate fractionation showed as following. Optimum pH and temperature were around 7,0 and 25°C. The enzyme was stable at pH between 6,0 and 7,5. Metal ions such as Al2(SO4)3, MgSO4, MnSO4, CuSO4, BaSO4, CaCl4, CoCl2 and KCl not influenced on tyrosinase activity. KCN, thiourea, sodium diethildithiocarbamate and cysteine have inhibited the enzyme activity. Eletrophoretic behavior of tyrosinase showed that the enzyme moved forward cathod at pH 4,0. Kinetic study of the enzyme showed that values of both Km and Vmax were 7.5 x 10-4 M of L-tyrosine and 13.5 x 10-3 ?moles of L-DGPA/min/mg of protein, respectively Cell bound tyrosinase exhibited similar characteristics except enzyme kinetics and values for both Km and Vmax were 9.0 x 10-4 M of L-tyrosine and 7.1 x 10~4 ?moles of L-DOPA/min/mg of cell suspension. Conversion of L-tyrosine to L-DOPA by B.subtilis tyrosinase was performed by cell bound tyrosinase containing 11 x 10 * units of enzyme activity per ml and substrate (L-tyrosine) of three différents concentrations, at 30°C, pH 7,0 for 40 hours, and periodicaly ,ascorbic acid was added to reaction mixture to prevent further oxidation of the product.The maximum conversion of L-tyrosine to L-DOPA was obtained when the substrate concentration was 12 mM / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador : Renato Bonatelli Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-17T01:59:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vialta_Airton_M.pdf: 5894822 bytes, checksum: 4493787d6f88a9c0cd04c4bbaac32710 (MD5) Previous issue date: 1987 / Resumo: O presente trabalho teve como objetivos principais, verificar a ocorrência do ciclo parassexual em Aspergillus awamori, testar a produção de amiloglicosidase dos derivativos, mutantes e diplóides obtidos e realizar o cruzamento interespecífico com A. niger. Além desses, estudos foram desenvolvidos com a instabilidade apresentada por A. awamori.. A linhagem NRRL 3112 segrega conídios pro e forma setores espontaneamente. Este comportamento não seria o esperado para um clone e sugere a existência de heterozigose para as características estudadas, a qual poderia estar contida numa duplicação parcial ou total de genoma. Mutantes auxotróficos e morfológicos de Á. awamori foram conseguidos utilizando-se os métodos de isolamento total e de enriquecimento por filtração. Este último mostrou freqüências de isolamento 12 vezes maiores. Mutantes resistentes ao Brometo de Etídio também foram isolados, mas somente após indução com luz ultravioleta. Os mutantes foram utilizados em cruzamentos que permitiram verificar a ocorrência do ciclo parassexual. Através da análise dos segregantes, pode ser evidenciada ligação entre os genes etbl, grel bwnl; morl, arg2 e leul, mor2. O gene pabl segregou independentemente e, assim, foi possível sugerir 4 como o numero mínimo de grupos de ligação nessa espécie. Entre os critérios não geneticos utilizados na caracterização, o diâmetro de conídios e o tratamento com Benlate mostraram-se eficientes para separar haplóides de diplóides. O método de extração e quantificação de DNA por núcleo também foi adequado para esse fim. Com relação ã enzima, o primeiro passo foi averiguar se o método empregado estava medindo a atividade da amiloglicosidase, fato que foi confirmado fazendo o teste com o inibidor e a dextrina limite. Foi constatada uma relação inversamente proporcional entre a porcentagem de segregação de conídios pro e a produção de amiloglicosidase. Só foi possível obter o cruzamento entre A. awamori e Á. niger através de fu são de protoplastos. A freqüência de formação de colônias prototróficas foi relativamente baixa, situando-se na faixa de 0,6%, possivelmente devido ao pequeno número de protoplastos utilizados para a fusão e a um provável efeito tóxico diferencial do agente fusogênico utilizado. As colônias prototróficas isoladas inicialmente puderam ser classificadas como heterocarióticas. A partir destas, o produto de fusão híbrido foi obtido na forma de setores que exibiam complementação entre as marcas genéticas das parentais. Através da análise do híbrido, pode ser evidenciada ligação entre os genes nicl, 0lv2, bwnl, amy, pro. Houve distribuição ao acaso dos grupos de ligação, semelhante ao esperado para um diplóide intra - específico sugerindo alto grau de homologia cromossômica entre as duas espécies. Os mesmos critérios de caracterização utilizados com sucesso para separar linhagens haplóides de diplóides. nos cruzamentos intra-específicos foram adotados e também nesse caso mostraram resultados satisfatórios / Abstract: The present work with Aspergillus was done aiming to study the following: 1- Occurrence of the parasexual cycle;2- Occurrence of interspecific hybridization with A. niger.3- Amyloglucosidase production of the parental and derived strains, including auxotrophic mutants, diploids and the interspecific hybrid. During the first stage of the work, it was observed that the NRRL 3112 strain of A. awamori is unstable because it spontaneously segregates pro conidia (deficient for proline synthesis) and produces sectors. The last characteristic is also observed in pro derivatives and it was supposed that it is independent from pro conidia segregation. These characteristics are not expected from a clone and together with other evidences (Benlate segregation, differential susceptibility to acetone, variation in number of nuclei per conidia and conidial diameter), it was suggested that there is a partial or total duplication of the genome. Auxotrophic and morphological mutants of A. awamori were induced by ultraviolet light and selected by using total isolation and filtration enrichment methods. An increase of 12 times in the mutant frequency was observed when the last method was employed. Ethidium bromide resistant mutants were also isolated only after ultraviolet induction. Diploid strains were readily obtained and could easily be' separated from haploid strains by conidia diameter, Benlate segregation and nuclear DNA content. Segregation analysis indicated linkage between etb1 gre1 bwn1, mor1, arg1 and leu1, mor2. Because pab1 marker segregated independently from all others it was suggested at least 4 linkage groups for A. awamori. Only heterokaryotic colonies were detected when A. awamori and A. niger protoplasts were fused and plated in selective medium. The low frequency (0,6%) and the heterokaryotic nature of the colonies could probably be attributed to: 1) low protoplasts number and 2) toxic effect to the fusogenic agent to A. niger protoplasts. Hybrid colonies were isolated after several transfers in selective medium. The hybrid nature of these colonies was established by the same criteria used in the intraspecies crossing. Segregation analysis indicated a high level of chromosomal homology between the 2 species and it was possible to suggest linkage between nic1 olv2 genes of niger and bwn, amy, pro of awamori. As it was evident from the use of limit dextrin and a specific inhibitor. glucoamylase is the main enzyme activity detected by the usual assay procedure. It has also been detected that high. frequency of pro conidia in A. awamori is correlated with the low level of enzyme production / Mestrado / Mestre em Genetica