Orientador : Iracema de Oliveira Moraes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:08:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DelBianchi_VanildoLuiz_M.pdf: 2713030 bytes, checksum: 375c6183b3def05ca13b3c497e1aa0e6 (MD5) Previous issue date: 1990 / Resumo: Foram examinadas vinte linhagens de fungos (dez já cadastradas e dez isoladas da natureza) com o intuito de se obter a que produzisse um extrato enzimático proteolítico de melhor atuação em meio ácido através de uma fermentação semi-sólida, verificando-se que Aspergillus awamori NRRL 3112 produz alta atividade enzimática em pH ácido ao ser comparado às demais linhagens. A produção do extrato bruto extracelular foi obtida em erlenmeyers de 250 mL, a 37°C, utilizando-se 2,0g de farinha de soja enriquecida com 10% de sacarose ou 5% de extrato de levedura, umedecida em solução-tampão acetato pH 7,9, à proporção de 1:1 (sólido/liquido). Nestas condições, o extrato enzimático é obtido em 32 horas. Este extrato enzimático apresenta uma atividade máxima a pH 3 e a 50°C, uma estabilidade térmica entre 20 a 60°C quando incubado por 10 horas a essas temperaturas, e uma estabilidade entre os pH 2 e 8. Apresentaram pequena redução na atividade enzimática os íons cálcio, zinco, ferro e lítio, enquanto que os íons magnésio, bário, cobre, manganês e potássio, além de EDTA, mostraram ter uma influência positiva na atividade da enzima. / Abstract: Twenty strains of molds were examined in order to obtain the one that produces proteolytic enzymatic extract of better performance in acid medium from a semi-solid fermentation. Aspergillus awamori NRRL 3112 produced high enzymatic activity compared with other strains. The extracelular raw extract production was obtained in 250 mL erlenmeyers, at 37°C, with 2,0g of soybean flour enriched with 10% of sucrose or 5% of yeast extract, moistened with buffer acetate solution pH 7.9 at rate of 1:1 (w/v). Under these conditions, the enzymatic extract is obtained in 32 hours. The enzymatic extract presents the highest activity at pH 3 and at 50°C, a thermic stability between 20 and 60°C, when incubated during 10 hours, and a pH stability between 2 and 8. Ions calcium, zinc, lithium and iron presented a little reduction in the enzymatic activity whereas ions magnesium, barium, copper, potassium, manganese, besides EDTA, proved to have a positive influence. / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientador: Iracema de Oliveira Moraes / Tese (doutorado) - Universidade Estadualde Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:13:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Salva_TerezinhadeJesusGarcia_D.pdf: 3434520 bytes, checksum: 42346678dc764c2c750200be2f53e52d (MD5) Previous issue date: 1990 / Resumo: Foram estudados os efeitos de diferentes concentrações de glicose, amido solúvel, dextrina, lactose, peptona e extrato de levedura sobre a síntese de a-amilase por Bacillus subtilis ATCC 601B por processo em batelada, em meio de cultura básico composto de (KH4)2SO4, MgSO4 * 7H20, KC1, K2HPO4 e CaCl2. Foram estudados os efeitos do pH inicial do meio de cultura e da temperatura de incubação sobre a produção da enzima, e o perfil da síntese enzimática apenas no meio de cultura contendo glicose como fonte de carbono. Os resultados foram discutidos relacionando o crescimento microbiano com a síntese da enzima. Foi observado que a maior produção de a-amilase ocorreu nos meios de cultura contendo glicose a 0,1g/l e 30,0g/l ou dextrina a 10,0g/l. As atividades enzimáticas específicas globais (Emax / Xmax) mostraram que esses resultados se devem a um maior estímulo do crescimento celular em meio de cultura contendo glicose e a um maior estímulo da síntese enzimática em meio de cultura contendo dextrina. Os quatro carboidratos inicialmente adicionados ao meio de cultura causaram inibição catabólita da síntese da enzima. O aumento das atividades enzimáticas específicas globais, observadas em determinadas faixas de concentração inicial dos açúcares, indicam que durante o processo fermentativo há estímulo da síntese de a-amilase devido a formação de metabólitos ou de produtos de degradação do carboidrato. Para a faixa de concentração compreendida entre l,0g/l e 20,0g/l. O estímulo da síntese enzimática foi mais acentuada em meio de cultura contendo dextrina, seguida de amido solúvel, lactose e glicose. Os resultados obtidos para a produtividade global em 72 horas de fermentação também revelaram que a dextrina e a fonte de carbono mais adequada para a produção de a-amilase. Foi observado que as concentrações de peptona e de extrato de levedura mais adequadas para a produção de a-amilase são 10,0g/l e 5,0g/l respectivamente. Os resultados obtidos para as atividades enzimáticas específicas globais mostraram, no entanto, que a peptona afeta basicamente o desenvolvimento microbiano enquanto que o extrato de levedura afeta diretamente a síntese da enzima. Das condições estudadas, a maior produção de enzima é obtida quando o pH inicial do meio de cultura é ajustado a 7,0 e a temperatura de incubação é 37°C. Nessas condições foram obtidas as maiores atividades enzimáticas específicas globais e produtividades globais. O perfil da síntese da a-amilase revelou que houve produção da enzima mesmo na fase logarítmica de crescimento, ocorrendo, porém, com maior intensidade na fase estacionária e de lise celular. Estudos complementares mostraram que a enzima é uma a-amilase com pH ótimo ao redor de 6,4 em solução tampão ácido cítrico - fosfato de sódio, e com temperatura ótima ao redor de 50°C. Além disso, foi observado que ela mantém 100% da sua atividade inicial em solução não dialisada após 25 horas de aquecimento a 37°C. A enzima se mostrou pouco estável a 80°C, tendo sido totalmente inativada após 10 minutos de aquecimento a essa temperatura. O cálcio e o amido estabilizaram a enzima acentuadamente e a sua ação hidrolítica sobre o amido produz polímeros de glicose com duas ou mais unidades do açúcar / Abstract: It was studied the effect of concentrations of glucose, soluble starch, dextrin, lactose, peptone and yeast extract in a basic medium containing (KH4)2SO4, MgSO4 * 7H20, KC1, K2HPO4 and CaCl2 on the a-amylase production by Bacillus subtilis, ATCC 601B in batch process. The effect of medium pH and of the incubation temperature were also studied. It was investigated the profile of enzyme synthesis in a medium containing glucose as carbon source. The cell growth and a-amylase synthesis relationship were analyzed. It was shown that higher enzyme production was attained when glucose 0,lg/l and 30,0g/l or dextrin 10,0g/l were used as carbon source. The overall specific enzyme activity (Emax / Xmax) showed that while the medium containing glucose stimulates the microbial growth, the medium containing dextrin stimulates the enzyme synthesis mainly. All four carboydrates used in the medium caused catabolite repression of the enzyme synthesis. The overall specific enzyme activities in some carbohydrate concentrations showed that there was an estimulation of the enzyme synthesis during the fermentative process due to metabolites or degradation products formation. In the range of 1,0g/l to 20,0g/1 of carbohydrate concentrations this estimulation was higher in dextrin containing medium followed by soluble starch, lactose and glucose. The overall productivity in 72 hours of fermentation also revealed that dextrin is the best carbon source for a-amylase production by the microbial strain. It was found that the best peptone and yeast extract concentrations for enzyme production are 10,0g/1 and 5,0g/1, respectively. The overall specific enzyme activities showed, however, that peptone affects the microbial growth, while yeast extract affects the enzyme synthesis directly. Among the conditions studied, the best one for a-amylase production were medium pH 7,0 and incubation temperature 37°C. At that conditions it were obtained higher overall specific enzyme activity and overall productivity. The profile of enzyme synthesis showed that the enzyme is synthesized yet in the logarithmic growth phase, but more intensively during stationary phase and with cell lyses. Further studies showed that the enzyme was an a-amylase with optimal pH around 6,4 and optimal temperature around 50°C in citric acid - sodium phosphate buffer. It was observed that 100% of initial enzyme activity was maintained, in non-dialised solution, after 25 hours at 37°C. The enzyme stability was lower at 80°C. At this temperature the enzyme lost completely its activity after 10 minutes. Calcium and starch stabilized the enzyme and the hydrolyses of starch produces glucose polymers with two or more units / Doutorado / Doutor em Engenharia de Alimentos

Orientador : Jaime Amaya-Farfan / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-18T00:26:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Benedet_HonorioDomingos_D.pdf: 3710174 bytes, checksum: 9bc147c05a655042ff45c3cbf6bc1c84 (MD5) Previous issue date: 1985 / Resumo: Dezesseis coalhos comerciais, obtidos nas regiões centro sul e sul do Brasil, foram estudados, objetivando caracterizar os mesmos em termos das enzimas coagulantes neles contidas. Perfis de aminoácidos livres nos soros resultantes da ação das diferentes enzimas (renina, pepsina bovina, pepsina porcina e dos fungos Endothia parasitica, Mucor miehei e Mucor pusillus) em leite desnatado mostraram diferenças quantitativas entre os mesmos. Não houve, porém, relação clara entre as atividades proteolíticas das enzimas e o nível de aminoácidos liberados. Todavia, foi observado que a enzima da Endothia parasitica liberou seis vezes mais fenilalanina que o encontrado no soro após precipitação ácida, enquanto que a enzima do Mucor pusillus promoveu a liberação de quantidade considerável de carnosina. A aplicação do método de difusão de enzimas coagulantes em gel de ágar-caseína, capaz de distinguir entre si os seis tipos de enzimas, revelou que a maioria dos coalhos amostrados possui atividade de pepsina bovina. 0 único coalho rotulado como sendo de vitelo apresentou a difusão característica da renina. As frações dos coalhos comerciais com atividade coagulante, obtidas por filtração era gel Sephadex G-1Q0, foram submetidas à eletroforese em gel normal de poliacrilamida e as bandas resultantes comparadas com as dos padrões. Todas as frações apresentaram uma banda principal, cuja mobilidade e aspecto coincidiram com as da pepsina bovina, menos uma, que exibiu duas bandas, uma intensa, comparada à da renina, e outra tênue, com mobilidade semelhante ã da pepsina bovina. Partindo das enzimas coagulantes cromatograficamente homogêneas, estudou-se a influência da concentração do íon cálcio na velocidade de coagulação. A concentração de cálcio que forneceu a velocidade máxima de coagulação foi 58 e 68 mM para as duas pepsinas e para as outras enzimas, respectivamente, a pH 5,0 e 35°C. Estudou-se também o comportamento das enzimas frente ao cloro ativo. As experiências mostraram que todas sofreram inativação quando a concentração atingiu 100 ppm. Mo caso da renina, o efeito foi notável, sendo esta enzima completamente inativada com apenas 10 ppm de cloro ativo. / Abstract: Sixteen commercial rennets sampled in Brazil's middle southern and southern regions were characterized in terms of their constituting enzymes. Free amino acid profiles of the whey¿s resulting from the action of the enzymes rennin, bovine pepsin, and porcine pepsin, arid these of the fungi Endothia parasitica, Mucor miehei and Mucor pusillus on defatted milk revealed that quantitative differences associated with the type of enzyme used are likely to occur. No clear relationship was found, however, between the photolytic activity of each enzyme and the level of free amino acids released. On the other hand, it was observed that the Endothia parasitica¿s enzyme liberated six times more phenylalanine and that of Mucor pusillus enzyme liberated considerately more carnosine than found in the acid produced whey. Testing all the enzyme standards and the rennet samples by the method of difusion in agar-casein gel it was possible to distinguish among the six different enzymes and to ascertain that all but one of the rennets were of the bovine pepsin type. The only exception, rennet labeled as being from calf origin, showed, upon analysis, the typical pattern of rennin. The rennets were fractionated in Sephadex G-100 columns and the fractions with coagulating activity were compared by normal polyacrylamide-gel electrophoresis (PAGE) with the standard enzymes. Such fractions showed one main band which coincided with that of bovine pepsin for all the rennets, except for one which had the same mobility of rennin: the rennet of calf origin. This latter rennet exhibited a PAGE pattern which also suggested the presence of minor amounts of bovine pepsin. Influence of the calcium ion concentration on the rate of coagulation was studied on the chromatographically homogeneous coagulating enzymes. Optimal rates were obtained at 58 and 68 mM of Ca++ for the two pepsins and the other enzymes, respectively, at pH 5,0 and 35°C. The effect of active chlorine on the enzyme activity was also studied. The results showed that all enzymes underwent inactivation when the active chlorine concentration reached 100 ppm. Rennin was particulary sensitive an enzyme to this type of treatment since it was completely inactivated with 10 ppm of chlorine. / Doutorado / Mestre em Ciência de Alimentos

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, 2014. / Submitted by Ruthléa Nascimento (ruthleanascimento@bce.unb.br) on 2014-05-21T10:35:09Z No. of bitstreams: 1 2014_AntonielleVieiraMonclaro.pdf: 1778681 bytes, checksum: 1798a65b4d7d75d27b16ed6a3a3d7e4f (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-05-22T10:50:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_AntonielleVieiraMonclaro.pdf: 1778681 bytes, checksum: 1798a65b4d7d75d27b16ed6a3a3d7e4f (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-22T10:50:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_AntonielleVieiraMonclaro.pdf: 1778681 bytes, checksum: 1798a65b4d7d75d27b16ed6a3a3d7e4f (MD5) / No presente estudo, multi-formas de xilanases, produzidas pelo fungo A. oryzae crescido em quatro resíduos têxteis – piolho de algodão limpo tratado e não tratado, e pó de filtro tratado e não tratado - foram purificadas e caracterizadas. A curva de indução enzimática do fungo nos resíduos indicou alta atividade xilanolítica a partir do segundo dia, mantendo-se constante ao longo de 14 dias. A suplementação com sulfato de amônio como fonte de nitrogênio, e utilização dos resíduos pré-tratados, aumentou a atividade das xilanases. Como os ultrafiltrados apresentaram maior atividade específica xilanolítica, deu-se continuidade com a purificação a partir destas frações. A xilanase xyl-1 foi purificada em apenas uma etapa cromatográfica, identificada por espectrometria de massa como endo-β-1,4-xilanase de tamanho 35,55 kDa. As outras xilanases foram parcialmente purificadas em uma etapa cromatográfica e por SDS-PAGE apresentaram massa molecular estimada entre 35 kDa e 22 kDa. O espalhamento de luz dinâmico (ELD) se apresentou como uma ferramenta eficaz em avaliar o grau de pureza das amostras, a presença de agregações e tamanho das enzimas. Como as leituras de ELD mostraram agregações enzimáticas, foi adicionado Tween-80 0,1%, que foi eficaz em desagregar as xilanases, além de não influenciar na atividade enzimática. Xyl-1 apresentou atividade catalítica máxima em pH 6,0, 50ºC, retendo 50% de sua atividade enzimática na faixa de pH 3,5-9,0. Xyl-1 também obteve maior afinidade ao substrato (fração solúvel de xilana de aveia) em comparação às outras estudadas (KM 4,45 mg/mL; VMáx 0,240 UI/mL). Além disso, as xilanases foram incubadas na presença de inibidores fenólicos provenientes da lignina e apresentaram ativação no lugar da inibição. E na presença do licor de auto-hidrólise de sabugo de milho também apresentaram ativação. Os resultados indicam que essas multi-formas de xilanase de A. oryzae possuem potencial para várias aplicações biotecnológicas. __________________________________________________________________________________ ABSTRACT / In this study, multiple-forms of xylanases produced by A. oryzae when grown in four textile wastes were purified and characterized. Wastes comprised–pre treated and untreated clean cotton and filter dust. The fungus displayed high amounts of xylanolytic activity from the second day onward, remaining constant up to 14 days. Growth media supplemented with ammonium sulfate as nitrogen source and with pre-treated residues increased the xylanase activity. Xylanase xyl-1 was purified in a single chromatographic step and identified as endo-β-1,4-xylanase by mass spectrometry with a molecular mass of 35.55 kDa. Other xylanases were partially purified in one chromatographic step. Based on zymograme, xyl-8 and xyl-9 presented a molecular mass of 35 kDa whilst xyl-6, xyl-7, xyl-9 and xyl-11 presented a mass of 22 kDa. Dynamic light scattering (DLS) was effective in evaluating the degree of purity of the samples, the presence of aggregations and size of the enzymes. As DLS showed enzyme aggregates, Tween-80 0.1% was added, which proved to be an efficient disintegrator agent and did not influence enzyme activity. Xyl-1 presented the highest catalytic activity at pH 6.0, 50°C, and retaining 50% of its enzymatic activity at pH 3,5-9,0. Xyl-1 also showed higher affinity to the substrate (soluble fraction of xylan oatspelt) compared to the others (KM 4,45 mg/mL; VMáx 0,240 UI/mL). Furthermore, the xylanases were incubated with phenolic inhibitors from lignin and displayed activation. The presence of an auto-hydrolysis liquor of corncob also showed activation. These findings indicate that multiple-forms of xylanases from A. oryzae offer potential in different biotechnological applications.

Orientador: Cesar Francisco Ciocco / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-16T17:16:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Re_Rosamariada_M.pdf: 3998071 bytes, checksum: 7b44757460cf2a4676e0f37ba337f380 (MD5) Previous issue date: 1989 / Resumo: A alfa-amilase, enzima amilolítica presente no grão de trigo, representa um papel fundamental na qualidade final dos produtos de panificação. No processo de panificação, a alfa-amílase presente na farinha de trigo deve apresentar uma atividade adequada pois, se presente em excesso, devido principalmente à germinação indesejada dos grãos, deve ser diluída e, se em quantidade insuficiente, requer suplementação cora fontes externas. Dessa forma, para garantir um suprimento adequado de alfa-amilase em farinhas para panificação, é necessário um controle eficiente da atividade da enzima. Neste trabalho, procurou-se pesquisar um equipamento que possibilitasse o desenvolvimento de um método simples, rápido e econômico para quantificação da atividade da alfa-amilase em farinha de trigo. O principio para construção do equipamento está baseado na mudança, devido à ação da alfa-amilase, das características viscosimétricas de suspensões de farinhas aquecidas. Um protótipo de equipamento, denominado equipamento-teste, foi idealizado, construído e utilizado para realização dos experimentos. Foram estudadas as condições ótimas de operação do equipamento-teste e estabelecidas as relações entre as determinações do equipamento-teste e a atividade da alfa-amilase naturalmente presente ou adicionada à farinha testada. Além disso, foram estabelecidas as relações entre os resultados desse método e os de outros dois métodos viseosimétricos, quais sejam o método amilográfico e o de " fallíng number A partir destas relações, foram calculados os valores de resposta do equipamento-teste correspondentes às faixas ótimas de atívidade enaimát iea em farinhas para panificação. O método proposto apresentou relações altamente significantes com os métodos amilográfico e de "falling number". Os resultados do trabalho demonstraram que o equipamento- teste possibilita determinar adequadamente a atividade da alfa-amilase naturalmente presente ou adicionada à farinha de trigo para panificação / Abstract: Alpha-amylase, one of the amyolitic enzymes occurring in wheat, plays a fundamental role in the quality of baking products. This enzyme must show an adequate activity in the breadmaking process because, if present in excess, due to sprouting or germination caused by preharvest weather conditions, it must be diluted and, if present in insufficient quantities, must be supplemented by external sources. Thus, in order to guarantee an adequate supply of alpha-amylase in breadmaking flours, an effective control of the enzyme activity must be maintained. The objective of this work, was to develop an equipment in which the quantification of the alpha-amylase was fast, economic and simple. The method studied was based on the increasing fluidity of heated wheat flour suspensions under the action of alpha-amylase action. It was assumed that the volume of an incubated wheat flour suspension passing through an orifice was related to the alpha- amylase activity. A prototype of an equipment, called test-equipment, was idealized, constructed and employed in the experiments. The optimal operating conditions of the test equipment were studied and the relation between the flowed volume of the suspension after a fixed time and the activity of the enzyme naturally occurring in or added to the tested flour was established. Equations relating the proposed method with the Amylograph and the Falling Number methods were established. From these relations, the response values of the test-equipment corresponding to the optimal ranges of enzymatic activity m breadmaking flours were determined. The proposed method was highly related to the Amylograph and the Falling Number methods. The results obtained showed that the test-equipment allowed an adequate evaluation of the activity of the alpha-amylase naturally present in or added to breadmaking wheat flour / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Orientador: Pilar Rodriguez de Massaguer / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-18T03:45:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Magalhaes_MargaridaMariadosAnjos_D.pdf: 3931228 bytes, checksum: f14e095c1833c5dd16bbce85a86e7830 (MD5) Previous issue date: 1992 / Resumo: Com a finalidade de se estabelecer o processo térmico requerido pela polpa de mamão "formosa" (Carica papaya L.) acidificada (pH 3,8) (processada em latas de 1 kg, 99,5 x 118 mm), foi feito inicialmente o estudo cinético de inativacão térmica das enzimas termorresistentes presentes na polpa. Como não foi detectada atividade da peroxidase o estudo se concentrou na pectinesterase. As curvas de inativacão térmica à 75°, 77° e 80°C apresentaram uma mudança na inclinação, indicando a existência de duas porções da enzima, uma termolábil e outra termorresistente. Os tempos de redução decimal à 75°, 77° e 80°C da porção termolábil foram 0,8; 0,3 e 0,2 minutos, respectivamente e da porção termorresistente foram 16,7; 7,2; e 3,7 minutos respectivamente. 0 coeficiente térmico para a porção termolábil foi 9,21°C e para a porção termorresistente 7,82°C. A energia de ativação, na faixa de temperatura estudada, para as porções termolábil e termorresistente da pectinesterase foram 61,73 e 72,71 Kcal/mol, respectivamente, estando dentro da faixa (40-100 Kcal/mol) de energia de ativação reportada para o processo de inativacão térmica de enzimas. Foi realizado também, o estudo da influência da sacarose na cinética de inativação térmica da pectinesterase na polpa de mamão "formosa" acidificada (pH 3,8) à 75° e 80°C. A sacarose foi adicionada de maneira a se obter concentrações finais de 20° e 30° Brix. Para cada temperatura foram feitos ensaios com 3 lotes diferentes de mamão. Os tempos de redução decimal aumentaram em média de 3 vezes para a polpa com 20° Brix e de 5 vezes para a polpa com 30° Brix, indicando que a sacarose exerce um efeito protetor na enzima contra o calor. Devido a este fato, optou-se pela não adição de sacarose na polpa a ser processada. Como o Clastridiam pastearianuis é um dos indicadores do processo térmico de alimentos ácidos, foi feito o estudo da sua cinética de destruição térmica na polpa de mamão "formosa" acidificada (pH 3,8), nas mesmas temperaturas usadas para a pectinesterase. Este microrganismo cresceu e produziu gás nesta polpa. Os tempos de redução decimal à 75°, 77° e 80°C foram 9,7; 7,1 e 2,7 minutos respectivamente e o coeficiente térmico foi 8,8°C. Os resultados mostraram que a porção termorresistente da pectinesterase apresentou uma resistência térmica maior que o Cl pastarianum. Baseado nestes resultados, foi determinado um de 12,3 minutos, equivalente a 1,7 reduções decimais, usando-se a porção termorresistente da pectinesterase como alvo do processo (98% inativacão). Usando-se a relação empírica de SHIGA (1976) estabeleceu-se um tempo de aquecimento de 12,9 minutos, em banho de água à 97°C. Foram feitos três ensaios nestas condições, com 6 latas/ensaio. Os valores de pasteurização variaram de 12,33 a 12,75 minutos equivalentes à 77°C. A análise estatística dos dados indicaram não haver diferença significativa entre ensaios e entre latas de um mesmo ensaio, a nível de ? igual a 0,05 e 0,01. No exame das latas de px)lpa de mamão "formosa" acidificada (pH 3,8), após o processamento térmico, não se verificou gelatinização, atividade remanescente da pectinesterase e crescimento de microrganismo em nenhuma das amostras. Este processamento térmico equivalente a 1,7 reduções decimais foi suficiente para inativar a porção termorresistente da pectinesterase e destruir a flora naturalmente presente. Para se ter uma margem de segurança devido a variação da atividade inicial da pectinesterase, o ensaio de embalagens inoculadas foi feito usando-se um valor F de 16,7 minutos equivalentes à 77°C, que corresponde a 2,3 reduções decimais da porção termorresistente da pectinesterase. Este processo térmico aplicado ao produto equivale a um tempo de aquecimento de 15 minutos, em banho de água à 97°C. As latas de polpa de mamão "formosa" acidificada (pH 3,8) inoculadas com 1 ml da suspensão de esporos do Cl. pasteurianum (104NMP esporos/ml), após o período de incubação, não apresentaram sinal de estufamento e na sub-cultura não houve crescimento e não foi detectada atividade da pectinesterase. Isto indica que o processo aplicado ao produto é seguro / Abstract: In order to establish the thermal process required by acidified papaya pulp (pH 3,8)(.var. "-Formosa", processed in 99,5 x 118 mm cans), it was initially carried out a study on the kinetics of thermal inactivation of heat resistant enzymes present in the pulp. Since no peroxidase activity was detected the study was focused on pectinesterase. The heat inactivation curves at 75°, 77° and 80°C showed a change in slope indicating the presence of two different portions of the enzyme, one heat labile and the other heat resistant. The decimal reduction time at 75°, 77° and 80°C for the heat labile portion of pectinesterase were 0,8; 0,3 and 0,2 minutes, respectively and for the heat resistant portion was 16,7; 7,2 and 3,7 minutes respectively. The thermal coefficient for the heat labile portions of the enzyme was 9,2°C and for heat resistant was 7,8°C. The activation energy were 61,7 and 72,7 Kcal/mol for the heat labile and heat resistant portions, respectively and these values were within the range of 40-100 Kcal/mol reported in the literature for the thermal inactivation of enzymes. The influence of addition of sucrose on the thermal inactivation kinetics for pectinesterase in papaya pulp was studied at 75° and 80°C. Sucrose was added to the pulp up to 20 and 30°Brix. For each temperature 3 different lots of papaya were tested. The decimal reduction time for pectinesterase increased 3 times for the 20°Brix pulp, and 5 times for the 30°Brix pulp showing that sucrose has a protective effect in mantaining the enzyme activity during heating. Due to this fact, no addition of sucrose was used on the formulation of the final product. Since CI. pasteurianum is one of the indicators organisms for acid foods; its thermal destruction kinetics was determined on acidified papaya pulp (pH 3,8) at the same temperatures used for the enzyme inactivation test. This organism showed growth and gas production when inoculated in the acidified pulp. The decimal reduction times were 9,7; 7,1 and 2,7 minutes at 75°, 77° and 80°C aspectively, and the thermal coefficient was B,8°C. These results showed that the heat resistant portion of pectinesterase presented greater thermal resistance than CI. pasteurianum. Based on these results, and F7,8ºC77ºC value of 12,3 minutes was determined using the heat resistant portion of the pectinesterase as the target for the process, and applying 1,7 decimal reduction of the activity of the heat resistant enzyme (98% inactivation). Using SHIGA (1976) empirical relationship a heating time of 12,9 min. in water bath at 97°C was established for the process. Three processing tests were carried out with this conditions using 6 cans/test. The processing values varied from 12,33 - 12,75 minutes at 77°C.Statistical analysis showed no significant difference among tests and among cans a test at the 0,05 and 0,01- level. Upon analysis of the cans after process no gel atination, no activity of remaining enzyme and no microorganism groweth were detected. Therefore this process was able to inactivate the heat resistant portion of pectinesterase and kill the natural microflora present on the pulp. In order to add a safety factor process, considering the inicial variation of the pectinesterase activity in the pulp, and F7,8ºC77ºC value of 16,7 minutes was applied. This process was equivalent to 15 minutes of heating in water bath at 97°C and corresponds to 2,3 decimal reductions of the ativity of heat resistant portion of pectinesterase. An inoculated pack study was preformed to verify the microbial safety of such process. Each can of papaya pulp was inoculated with 1ml of a 10^ spore/ml suspension of Cl. pasteurianum. No swelling of the cans and no growth after subculturing were observed after incubation, and no pectinesterase was detected showing that the process may be safely applied to the pulp / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Nadia Krieger / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Exatas, Programa de Pós-Graduação em Química / Inclui bibliografia / Resumo: As lipases fazem parte da classe de hidrolases, cuja classificação internacional é "glicerol éster hidrolases E.C. 3.1.1.3 ". De origem bacteriana, fúngica ou de mamíferos e propriedades diversas, estas enzimas podem catalisar a hidrólise e a síntese de um grande número de compostos em diferentes meios e condições reacionais. O objetivo deste trabalho foi estudar a biocatálise em sistemas bifásicos micro-heterogêneos e macro-heterogêneos, utilizando o extrato lipolítico de Penicillium corylophilum (IOC 4211). Para tanto, foram estudadas a reação de hidrólise de ésteres em meio aquoso e em micelas reversas AOT/n-heptano, bem como, a síntese do oleato de n-butila no sistema micro-heterogêneos (micelas reversas) e em sistemas macro-heterogêneos (bifásicos). Foi estudada a eficiência de várias preparações enzimáticas nos sistemas, usando n-heptano como meio reacional, a saber: 1) adição direta da enzima liofilizada; 2) adição direta da enzima co-liofilizada com (3-ciclodextrina e 3) adição da enzima imobilizada em gel hidrofóbico. Inicialmente, investigou-se a produção da enzima e as propriedades do extrato lipolítico, como o efeito do pH e da temperatura na atividade enzimática, e a estabilidade da enzima à temperatura e em presença de solventes orgânicos. Verificou-se que a produção máxima da enzima foi de 6,8 U.mL"1, após 144 h, a 29°C e agitação orbital de 120 rpm, em um meio composto por sais minerais, glucose e 2 % (v/v) de óleo de oliva. O extrato lipolítico apresentou maior atividade na faixa de pH entre 6,0 e 8,0, e na faixa de temperatura entre 45 e 60 °C. As lipases contidas no extrato bruto não são termoestáveis, mas apresentam estabilidade quando incubadas em presença de solventes orgânicos apoiares, de fato, quando o extrato lipolítico foi incubado em n-heptano, a enzima mostrou ativação de 14 e 30 % com atividade de água (aw) inicial no sistema de 0,53 e 0,95, respectivamente. As maiores atividades enzimáticas do extrato bruto de P. corylophilum foram encontradas para o pNPP em meio aquoso e para a trioleína em meio micelar. No meio aquoso foi observada ainda uma ativação da enzima de aproximadamente 7 vezes após a coliofilização com (3-ciclodextrina, e 2 vezes após a imobilização no gel hidrofóbico. Nas reações de esterificação, a reação modelo utilizada foi a síntese do oleato de n-butila. A síntese foi acompanhada por CCD e por CLAE, e os rendimentos foram determinados pelo método de Lowry-Tinsley. O melhor sistema para a síntese do oleato de n-butila foi de micelas reversas com Wo (teor de água) de 10 e 100 % de rendimento (12 h), seguido do sistema onde se adicionou a enzima liofilizada, com 100 % de rendimento (48 h) obtido com a"- inicial no meio reacional de 0,11. Para o sistema onde a enzima foi co-liofilizada com (3-ciclodextrina, o rendimento foi de 63 % (48 h), em aw inicial de 0,11. O sistema menos eficiente foi o que utilizou a enzima imobilizada em gel hidrofóbico, com 14 % (48 h) e aw inicial de 0,11. Os resultados obtidos neste trabalho mostraram que o extrato lipolítico de P. corylophilum, um fiingo isolado localmente, pode ser utilizado em reações de síntese em meios aquo-restritos, e sugerem a importância da continuidade dos estudos no sentido de purificação e caracterização bioquímica das lipases produzidas por P. corylophilum, e uma investigação em profundidade do potencial de uso das enzimas purificadas para a produção de compostos de química fina. Palavras-chave: Lipases, Penicilium corylophilum, biocatálise, sistemas aquo-restritos, micelas reversas. / Abstract: Lipases belong to the class of hydrolases, and are classified as "glycerol ester hydrolases E C 3.1.1.3". This group includes bacterial, fungal and mammalian enzymes with diverse characteristics, united by their ability to catalyze the hydrolysis and the synthesis of a large number of compounds in different reaction media and under different conditions. The objective of this work was to study biocatalysis in macroheterogeneous and micro-heterogeneous biphasic systems, utilizing the lipolytic extract from Penicillium curylophilum (IOC 4211). The following aspects were studied: the hydrolysis of esters in aqueous solution and in AOT/n-heptano reversed micelles, and the synthesis of butyl oleate ester in a micro-heterogeneous system (reversed micelles), and in macro-heterogeneous systems (biphasic) systems. The performance of various enzyme preparations in these systems, using n-heptane as the reaction media, was studied: 1) direct addition of the lyophilized enzyme; 2) direct addition of the enzyme co-lyophilized with P-cyclodextrin and 3) addition of the enzyme immobilized on a hydrophobic support. The initial studies were undertaken to characterize the production of the enzyme and the properties of the lipolytic extract, such as the effect of pH and temperature on enzyme activity and the stability of the enzyme at elevated temperatures and in the presence of organic solvents. The maximum enzyme concentration obtained in the production studies was 6.80 U.mL"1, after 144 h of incubation on a rotary shaker at 29 °C and 120 rpm, in a medium containing mineral salts, glucose e 2 % (v/v) olive oil. The lipolytic extract showed greatest activity in the pH range 6.0-8.0 and in the temperature range 45 - 60 °C. The lipases within the crude extract are not thermostable, but do show stability when incubated in the presence of organic apolar solvents: in fact, when the extract was incubated in n-heptane, the enzyme was activated by 14 to 30 % for an initial water activity of the system (aw) of 0,53 and 0,95, respectively. The highest activities measured for the crude lipolytic extract were for the hydrolysis of pNPP in aqueous solution and for the hydrolysis of triolein in the reversed micelle system. In aqueous solution the enzyme was activated approximately seven-fold after colyophilization with p-cyclodextrin, and approximately 2-fold after immobilization in hydrophobic gel. In the esterification reactions the model reaction used was the synthesis of butyl oleate ester, with the reaction being followed by TLC and HPLC, and the yields being determined by the Lowry-Tinsley method. The best system for the synthesis of butyl oleate ester was the reversed micellar system with a Wo (water content) of 10, which gave a yield of 100 % (12 h), followed by the system in which the enzyme lyophilized was added to the medium, with a yield of 100 % (48 h), obtained at an initial aw of 0.11 in the reaction medium. For the system in which the enzyme was co-lyophilized with P-cyclodextrin, the yield was 63 % (48 h), also obtained at an initial a", of 0.11. The least efficient system was the enzyme immobilized on hydrophobic gel, with a 14 % (48 h) yield, obtained at the same initial aw of 0.11. The results obtained in this study show that the lipolytic extract of P. corylophihim, a locally-isolated fungus, can be used in synthesis reactions in low-water systems, and suggest that the studies should now proceed to the purification of lipases from the crude extract, the biochemical characterization of these lipases and an in-depth investigation of the potential for the use of purified enzymes in biocatalysis, for the production of fine chemicals. Palavras-chave: Lipases, Pemcilium corylophihim, biocatalysis, low-water systems, reversed micelles.

Orientador : Yong Kun Park / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-14T03:29:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Benedet_HonorioDomingos_M.pdf: 2373078 bytes, checksum: 4e69ab4e795b7da8160087e01884d976 (MD5) Previous issue date: 1980 / Resumo: As enzimas coagulantes do Mucor miehei, Endothia parasitica e renina foram estudadas para determinarmos se havia ou não diferenças de ação sobre a caseína ácida e suas frações a, ß e K. Através da diferenciação de enzimas coagulantes em meio gel de agar-caseína, as três apresentaram zonas de difusão bastante diferentes, mostrando, portanto, que suas características físicas são diferentes. Após incubação das mesmas com o substrato, observamos visualmente que a caseína ácida e suas frações a e 3, aparentemente não sofreram alterações, enquanto que a fração K apresentou - floculação bastante intensa com todas as enzimas, deduzindo-se que, aparentemente, tenham as mesmas características. A caseína ácida e suas frações a, ß e K, após o tratamento referido no parágrafo anterior, foram liofilizadas e submetidas a eletroforese em gel de poliacrilamida em presença de íons dodecil sulfato de sódio (SDS) e mercaptoetanol, mostrando-nos que as bandas de proteína da fração K, de peso molecular entre 17.000 e 30.000, foram hidrolisadas pelas três enzimas em bandas de peso molecular 8.000 e 14.000. No caso da fração a , a banda de proteína de peso molecular 34.000 foi hidrolisada por todas as enzimas em bandas de peso molecular 29.000. A enzima da Endothia parasitica hidrolisou também as bandas de proteína de peso molecular 16.000, 22.000 e as situadas entre 34.000 e 91.000, inclusive. Quanto à fração ß, nenhuma das enzimas a hidrolisou. A fração K, após tratamento a diversas temperaturas, incubada com a enzima coagulante do Mucor miehei, foi submetida a eletroforese como citado anteriormente, apresentando diferenças em relação à fração K não aquecida, ou seja, observamos que a não aquecida foi hidrolisada, enquanto que a aquecida, praticamente nada sofreu, concluindo-se que a mesma tenha sido desnaturada. / Abstract: Calf rennin and coagulating enzymes from Mucor miehei, Endothia parasitica were used in tests to compare their actions upon acid casein and its fractions a, ß and K. The three coagulating enzymes showed distinct diffusion bands in casein-agar gel which indicated that they have different physical properties. Incubation of whole acid casein and its fractions a, ß and K with the three different coagulating enzymes showed that only with the K fraction was there an intense floculation and this occurs similary with all three enzymes. After the incubation the treated protein preparations were lyophilized and submitted to gel electrophoresis in poliacrylamide in the presence of sodium dodecyl sulfate and mercaptoethanol. The results indicated that the K fraction of molecular weight from 17,000 to 30,000 was hydrolyzed by the three coagulating enzymes giving rise to bands of molecular weight of 8,000 and 14,000. In the case of the a fraction, all the three enzymes hydrolyzed the 34,000 molecular weight bands to 29,000 molecular weight bands. Furthermore, the enzyme from Endothia parasítica also hydrolyzed the bands of molecular weight of 16,000 and 22,000 and the ones from 34,000 to 91,000. None of the coagulating enzymes hydrolyzed the ß fraction. In the experiment to check the effect of heating upon the K fraction before being treated by the coagulating enzyme from Mucor miehei , it was found that, after heating, the hydrolysis did not occur, suggesting that denaturation of the K fraction protein inhibited the enzyme action. / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Orientador: Francisco Maugeri Filho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-18T04:29:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Curralero_IsabelCristinaBaddini_M.pdf: 4433878 bytes, checksum: 48fdad6d2e18843264780ad57ae74e38 (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: A produção de dextrana de baixo peso molecular através da reação enzimática com dextrana-sacarase bruta de Leuconostoc mesenteroides NRRL B-512 F foi estudada, utilizando várias concentrações de sacarose e maltose como aceptor. Na ausência de maltose, o aumento da concentração de sacarose levou à formação de polissacarideos de baixo peso molecular, além da dextrana nativa. O produto de reação nestes casos é bastante heterogêneo, havendo ainda redução do rendimento de dextranas totais com o aumento da concentração inicial de sacarose. Com a utilização de maltose foi detectado um aumento na produção das dextranas de baixo peso molecular, proporcional ao aumento do coeficiente R ([maltose]/[sacarose]) e da concentração de sacarose, com rendimentos em dextranas totais superiores àqueles obtidos na ausência de maltose. O melhor resultado foi obtido com concentração de sacarose de 300 g/l e de maltose de 6 g/l (R = 0,02). O rendimento alcançado foi de 77% em dextranas totais, com 86% destas correspondendo a uma espécie com peso molecular médio em torno de 4.000 daltons. / Abstract: The production of low molecular weight dextran during enzimatic reaction with raw dextransucrase from Leuconostoc mesenteroides NRRL B-512 F in different concentrations of sucrose and maltose as acceptor was studied. In the absence of maltose, the increase of sucrose concentration resulted both low molecular weight polysaccharide and native dextran formation. The product was very heterogeneous and with the increase of sucrose concentration, the yields of total dextrans decreased. Using maltose as acceptor, it was observed an increase in the production of low molecular weight dextran, proportionally to the increase of the R ratio ([maltose]/[sucrose]) and sucrose concentration. The yields of total dextrans was higher than that obtained in the absence of maltose. The best result was obtained with a sucrose concentration of 300 g/l and 6 g/l of maltose (R = 0,02). The dextran yield was 77%, with 86% of the product misture corresponding to a low molecular weight dextran with an average molecular weight near to 4.000 daltons. / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientador: Nora Marcela Haun Quiros / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-19T11:56:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Milagres_AdrianeMariaFerreira_D.pdf: 12688997 bytes, checksum: 8efdd97a43f2fb8a7a34a2dea35f113e (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: Neste estudo investigou ¿ se a possibilidade de utilização de um hidrolisado hemicelulósico, obtido a partir da hidrólise ácida branda do bagaço de cana-de-açúcar, como meio de cultura para crescimento de fungo Penicillium janthinellum e para produção de xilanases. As condições ótimas para crescimento do fungo e produção de xilanases em incubadoras com movimento rotatório foram: temperatura de 30ºC, pH inicial entre 5,0 e 6,0 e agitação 60 rpm.Sob essas condições, o crescimento celular esteve associado à síntese das enzimas b-xilosidades, b-glaucosidades, endoglucanases e exoglucanases foram pequenos. A produção de xilanases foi também realizada em fermentador de 4 l agitado mecanicamente em meio à base de hidrolisado hemicelulósico, tendo a atividade das xilanases assim produzidas se mostrado menor que a das obtidas em incubadora com movimento rotatório. Uma endoxilanase e uma b-xilosidase foram purificadas do fluido de cultivo do fungo. O estudo da influência do pH revelou um pH ótimo de 5,5 para a atividade da endoxilanase e de 6,0 para a b-xilosidase. Os valores ótimos de temperatura foram 50ºC e 60ºC para endoxilanase e b-xilosidase, respectivamente. Os principais produtos da hidrólise de xilana pela endoxilanase foram xilose, xilobiose e xilotriose. Os pesos moleculares da endoxilanas e b-xilosidade, determinados pó SDS-PAGE, foram 54 kDa e 74,3 kDa, respectivamente... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: This work investigates the possibility of utilizing a hemicellullosic hydrolysate obtained from mild acid hydrolysis of sugar cane bagasse as a culture medium for growing the fungus Penicillium janthinellum and for producing xylanases. The optimum conditions for the growth of fungus and the production of xylanases in a rotary incubator were: temperature of 30ºC, initial pH between 5.0 and 6.0 and agitation at 60 rpm. Under these conditions, cell growth was associated with the induction levels of the enzymes b-xylosidadses, b-glucosidases, endoglucanases and exoglucanases werw small. Xylanase production was also carried out in a 4 L mechanically agitated fermentor, using a hemicellulosic hidrolysate-based medium. The activity of the xylanases produced in this manner was lower than that of the xylanases pçoduced in the rotary incubator. An endoxylanase and a b-xylosidase were purified from the culture filtrate of the fungus. The study of the pH influence revealed an optimum pH 5.5 for endoxylanase activity and 6.0 for b-xylosidase. The optimum values of temperature were 50ºC and 60ºC for endoxylanase and b-xylosidase, respectively. The main products of xylan hydrolysis by endoxylanase were xylose, xylobiose and xylotriose... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Ciências Biológicas