Orientador: Ricardo Andrade Reis / Banca: Izabelle Auxiliadora Molina de Almeida Teixeira / Banca: Simone de Carvalho Peixoto Nogueira / Resumo: O presente trabalho avaliou a produção de enzimas fibroliticas exógenas obtidas a partir da fermentação fúngica e sua aplicação em diferentes doses na ensilagem de milho. Para isso, o projeto foi dividido em dois experimentos, sendo o primeiro caracterizado pela produção de enzimas e sua estabilidade em condições ruminais. Cinco amostras de diferentes locais foram coletadas e 45 fungos foram isolados e avaliados quanto a produção de xilanases e celulases. O micro-organismo selecionado como o melhor produtor foi um Aspergillus niger, capaz de produzir significativas quantidades das enzimas de interesse neste estudo (7,04 e 0,09 U/mL de xilanases e celulases, respectivamente). Após, seguiu-se um ensaio de otimização das condições de cultivo do fungo e avaliação da atividade enzimática buscando a máxima produção das enzimas de interesse. As condições ótimas de pH e temperatura de reação das enzimas em estudo corresponderam a 4,6 e 3,6 para as xilanases e celulases, respectivamente, com temperatura ótima de 60ºC em ambas as enzimas. A maior produção de xilanases ocorreu com 96 e 168 horas na fermentação submersa com ou sem agitação, respectivamente. Na produção de celulases os maiores níveis enzimáticos foram observados com 120 horas de cultivo nas duas condições de crescimento (submersa com ou sem agitação). A concentração ideal de esporos a ser inoculado no meio foi de 1,5x107 e 5x107 esporos/mL nas xilanases e celulases, especificamente. O teste de estabilidade das enzimas no rúmen mostrou maior atividade de xilanases nos animais que receberam o extrato enzimático via cânula até 7 horas após a aplicação. O segundo experimento avaliou a aplicação de diferentes doses enzimáticas sobre o perfil fermentativo, composição química e estabilidade aeróbia de silagem de milho. A planta de milho foi colhida quando apresentou 27% de matéria seca ... / Abstract: The objective of this study was to evaluate the exogenous fibrolytic enzymes production by fungal fermentation and the application in different doses at ensiling of maize. The project was divided into two sub projects, the first was characterized by enzymes production and their stability in rumen conditions. Five samples were collected from different locations and 45 fungi were isolated and evaluated for xylanases and cellulases production. Among the micro-organism selected as the best producer was a Aspergillus niger, capable to produce significant quantities of interest enzymes in this study (7,04U/mL and 0,088U/mL of xylanases and cellulases, respectivamente, respectively). After, followed by a test optimization of cultive conditions the fungus and enzymatic activity seeking maximum production of the interest enzymes. Optimal conditions of pH and temperature to enzymes reaction in this study corresponded to 4.6 and 3.6 for xylanase and cellulase, respectively, with optimum temperature of 60 ° C for both enzymes. The highest xylanases production occurred at 96 and 168 hours by submerged fermentation with or without agitation, respectively. Higher cellulase production was observed in 120 hours of cultive in two growth conditions (submerged with or without agitation). Optimal concentration of spores in the medium to be inoculated was 1.5 x107 and 5x107 spores / ml for xylanases and cellulases, specifically. Stability test of the enzymes in the rumen showed a greater xylanase activity in animals that received the enzyme extract via cannula until 7 hours after application. The second experiment evaluated the application of different levels of enzymes at ensiling of maize on the fermentation characteristics, chemical composition and aerobic stability of corn silage. The plant corn was harvested with 27% of dry matter and divided into four treatments (control - without enzymes, E5 - Silage ... / Mestre

Orientador: Elizabeth Orika Ono / Banca: João Dominhos Rodrigues / Banca: Amanda Cristina Esteves Amaro / Resumo: O tomateiro (Solanum lycopersicum L.) é uma dicotiledônea pertencente à família Solanaceae e devido a sua amplitude de cultivo, essa hortaliça já é considerada cosmopolita, sendo a segunda maior cultura mundial, depois da batata. A produtividade de qualquer cultura, principalmente a do tomate, está diretamente ligada à forma de cultivo, utilização de produtos e a variação ambiental. Dentre estas, a utilização de produtos químicos sintéticos tem aumentado ao longo dos anos e, atualmente, pode ser considerada essencial para o bom desenvolvimento da cultura.Exemplo dessa pratica é a utilização de compostos bioquímicos sintéticos, como os reguladores vegetais, que incrementam o crescimento e desenvolvimento da cultura. Dessa forma, o presente trabalho teve o objetivo de avaliar o efeito da aplicação de reguladores vegetais e nutrientes em plantas de tomate híbrido 'Pizzadoro' pé franco e enxertada em portaenxerto Guardião no desenvolvimento das plantas e na produtividade da cultura. O delineamento experimental foi fatorial de 7x2, sendo sete tratamentos e dois tipos de plantas. Foram avaliadas as atividades de enzimas antioxidantes (superóxido dismutase, peroxidase, catalase); a peroxidação de lipídios; caracterização física e química do fruto; e produtividade final.Para a avaliação enzimática foram feitas três coletas: aos 60, 74 e 88 dias após o transplante (DAT). Para a qualidade do fruto, foi selecionado a colheita referente ao quarto cacho de frutos. Observou-se interaçãoentre os tratamentos e entre o tipo de planta para atividade enzimática e peroxidação de lipídios, mostrando que houve pouco estresse oxidativo nas plantas enxertadas comparadas com as nãoenxertadas.Para pH, acidez titulável, sólidos solúveis totais e ácido ascórbiconão houve diferença entre os tratamentos e também com o tipo de planta. A produtividade final, ... / Abstract: The tomato (Solanum lycopersicum L.) is a dicotyledonous belongs to the Solanaceae family and due to their range of cultivation, this vegetable is already considered cosmopolitan, being the world's second largest crop after the potato. The productivity of any culture, especially the tomato, is directly linked to the way of farming, use of products and environmental variation. Among these, the use of synthetic chemicals has increased over the years and currently can be considered essential for the proper development of culture. An example of this practice is the use of synthetic biochemical compounds, such as plant growth regulators, which enhance the growth and development of culture. Thus, the present study was to evaluate the effect of plant growth regulators and nutrients in hybrid tomato plants 'Pizzadoro' ungrafted and grafted onto rootstock Guardian in plant development and crop productivity. The experimental design was factorial 7x2, with seven treatments and two types of plants. The activities of antioxidant enzymes (superoxide dismutase, peroxidase, catalase) were evaluated; lipid peroxidation; physical characterization and fruit of chemistry; and final yield. For the enzymatic evaluation were made three collections: at 60, 74 and 88 days after transplanting (DAT). For the quality of the fruit was selected referring to the fourth harvest fruit bunch. There was interaction between treatments and between the type of plant for enzyme activity and lipid peroxidation, showing that there was little oxidative stress in grafted plants compared to non-grafted. For pH, titratable acidity, soluble solids and ascorbic acid did not differ between treatments and also to the type of plant. The final yield for both total and marketable fruit fruits was higher in grafted plants / Mestre

Resumo: A introdução de moléculas xenobióticas no ambiente muitas vezes ocorre sem que sejam conhecidos muitos de seus aspectos bioquímicos e toxicológicos fundamentais. A presença anéis aromáticos na estrutura molecular muitas vezes é o fator determinante da toxicidade, recalcitrância e propriedades mutagênicas associadas e muitos destes compostos. O papel dos insumos agrícolas neste processo é de particular relevância, devido ao seu caráter de liberação intencional no ambiente e dos crescentes volumes aplicados em todo o mundo. Neste trabalho, foram selecionadas linhagens de basidiomicetos com base na sua tolerância aos herbicidas atrazina e diurom, para estudo detalhado do potencial de degradação e do papel desempenhado pelas enzimas ligninolíticas no processo. A tolerância não se mostrou relacionada à degradação dos xenobióticos; esta foi muito eficiente para algumas linhagens estudadas, chegando a 38% da atrazina e 96% do diurom, por MCA 17 agaricales e SXS 320 P. cubensis, respectivamente, após 20 dias de cultivo. As linhagens mais tolerantes à atrazina, Pluteus cubensis SXS 320 e Polyporus tenuiculus MCA 11, e ao diurom, Pycnoporus sanguineus MCA 16 e Dacryopinax elegans SXS 323, foram empregadas em ensaios mais detalhados para a degradação e produção de enzimas. Os efeitos de diferentes concentrações do diurom e da atrazina como única fonte de carbono ou em presença de fontes alternativas como glicose ou bagaço de cana (1%), foram determinados para os microrganismos tolerantes. Apenas Pycnoporus sanguineus MCA 16 e Polyporus tenuiculus MCA 11 produziram lacases, única enzima do sistema ligninolítico detectada nas culturas. No caso de Pycnoporus sanguineus, as lacases foram constitutivamente produzidas em meio contendo glicose, atingindo 283 U.l-1. A lacase de P. tenuiculus, por sua vez, foi produzida apenas em presença de constituintes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The introduction of xenobiotic molecules in the environment often occurs without the knowledge about many basic aspects related to biochemistry and toxicology. The aromatic ring presence in their molecular structure many times is the determinant feature for toxicity, recalcitrance and mutagenic properties associated with those compounds. The role of agricultural chemicals in this process has particular relevance, due to their intentional release on environment and the crescent volumes employed worldwide. In this work, basidiomycete strains were chosen based on their tolerance to herbicides atrazine and diuron, for detailed study of the fungi's degradative potential and the role developed by ligninolytic enzymes in this process. The tolerance was not related to xenobiotic's degradation, which was very efficient for many strains, reaching 38% for atrazine and 96% for diuron, by MCA 17 Agaricales and SXS 320 Pluteus cubensis, respectively, after 20 days in culture. Those ones more tolerant to atrazine, Pluteus cubensis SXS 320 and Polyporus tenuiculus MCA 11, and for diuron, Pycnoporus sanguineus MCA 16 and Dacryopinax elegans SXS 323, were employed in assays focusing on degradation and enzyme production. The effect of different concentrations of diuron and atrazine as sole carbon source or in presence of alternative sources, like glucose and sugarcane bagasse (1%), were determined for tolerant microorganisms. Only Pycnoporus sanguineus MCA 16 and Polyporus tenuiculus MCA 11 have produced laccases, the unique enzyme of ligninolytic system detected in cultures. For Pycnoporus sanguineus, the laccases were constitutively produced in medium containing glucose, reaching 238 U.l-1. The laccase from P. tenuiculus was released only with the presence of lignocellulosic constituents in culture medium, resulting in 1,219 U.l-1 in medium containing wheat bran. The biochemical properties... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Eleni gomes / Coorientador: Mauricio Boscolo / Banca: Lucia Regina Durrant / Banca: Caroline Henn / Mestre

Orientador: Paulo Cezar Ceresini / Banca: Daniel Augusto Schurt / Banca: Alessandra Alvez de Souza / Banca: Antonio de Goes / Banca: Tiago Santana Balbuena / Resumo: No início dos anos 90, o fungo Rhizoctonia solani AG-1 IA emergiu como um patógeno importante associado à queima foliar e podridão do coleto em pastagens do gênero braquiária (Urochloa spp.), na América do Sul. Este fungo surgiu pela primeira vez na Colômbia em áreas onde o cultivo de arroz (um hospedeiro altamente suscetível ao fungo) foi substituído por Urochloa, em resposta ao aumento da demanda por pecuária extensiva. Urochloa é uma forrageira de extrema importância para a pecuária da América Latina tropical. Descrito na primeira parte de nosso estudo, um amplo levantamento foi realizado na Amazônia nos estados do Pará, Rondônia, Roraima, e nos Cerrados de Mato Grosso e em áreas de várzeas do Vale do Paraíba, em São Paulo, entre 2012 e 2013. Nossas descobertas revelaram que Rhizoctonia solani AG-1 IA predominou como patógeno associado à queima-da-folha da braquiária no bioma Amazônico Brasileiro, especialmente em Rondônia. Na segunda parte de nosso estudo, descrevendo a estrutura genética de populações de R. solani AG-1 IA que infectam braquiária, arroz ou soja, testou-se a hipótese de que a emergência desse patógeno ocorreu devido a troca ou pulo de hospedeiros, dada a sobreposição geográfica de espécies hospedeiras. Para estudar a estrutura genética das populações, um total de 335 isolados de R. solani AG-1 IA foram coletados de campos de U. brizantha, de Urochloa híbrido Mulato, de arroz ou de soja, na Colômbia ou no Brasil. Esses isolados foram genotipados usando nove loci microssatélites. Padrões históricos de migração entre populações hospedeiro-distintas indicaram a origem provável das populações atuais que infectam braquiária na Colômbia, a partir de população que originalmente infectava o arroz. No Brasil, em contraste, não foi possível estabelecer o mesmo padrão claro assimétrico de migração histórica, uma vez que a migração entre as populações brasileiras de... / Abstract: The fungus Rhizoctonia solani AG-1 IA emerged in the early 1990s as an important pathogen causing leaf blight and collar rot on pastures of the genus Urochloa (signalgrass) in South America. This pathogen first emerged in Colombia in areas where rice, a host highly susceptible to the fungus, was replaced with Urochloa in response to increased demand for extensive livestock farming. Urochloa is an extremely important forage grass crop for livestock farming in tropical Latin America. Described in the first part of our study, a broad survey was conducted in the Amazon in Pará, Rondônia, Roraima states and in Mato Grosso Cerrado areas, and paddy plains in the Paraíba Valley, in São Paulo, between 2012 and 2013. Our findings revealed that R. solani AG-1 IA was the predominant pathogen associated with the leaf blight on Urochloa in the Brazilian Amazon biome, especially in Rondônia. In the second part of our study, describing the population genetic structure of different host and regional populations of R. solani AG-1 IA infecting Urochloa, rice and soybean, we tested the hypothesis that the emergence of this pathogen occurred due to host shift or jump as a result of geographical overlapping of the host species. To study the genetic structure of populations, a total of 335 R. solani AG-1 IA isolates were sampled from fields of U. brizantha, Urochloa hybrid Mulato, rice and soybeans in Colombia and Brazil. These isolates were genotyped using nine microsatellite loci. The historical patterns of migration of populations from different hosts indicated that the populations currently infecting Urochloa in Colombia most likely originated from a population that originally infected rice. In contrast, in Brazil a similar clear asymmetric pattern of historical migration was not established because the migration rates among Brazilian R. solani AG-1 IA populations from Urochloa, soybean and rice were all symmetric in magnitude (average 20 migrants ... / Doutor

Orientador: Leila Trevisan Braz / Coorientador: Durvalina Maria Mathias dos Santos / Banca: Rogério Falleiros Carvalho / Banca: Hamilton César de Oliveira Charlo / Resumo: A adoção de técnicas adequadas de manejo da cultura é uma das formas de melhoria da qualidade e produção do tomateiro, destacando-se entre estas práticas, o uso da enxertia e o método de condução das plantas. Contudo, no Brasil, há falta de informações que estimulem tais práticas. Assim, o presente trabalho teve por objetivos avaliar a compatibilidade, atividade enzimática, produção e qualidade de frutos de tomateiro, conduzido com quatro hastes, sob ambiente protegido. Para tanto, foi instalado experimento, realizado em três etapas experimentais, utilizando como porta-enxerto os hibridos „Maxifort‟, „Multifort‟, e „Alambra‟. As plantas foram conduzidas em vasos de 13 dm3 contendo substrato de fibra da casca de coco. As caracteristicas avaliadas foram: atividade enzimática das peroxidases (PODs) e polifenoloxidase (PPO) na etapa 1, avaliações de produção e qualidade, estado nutricional e composição química do substrato na etapa 2 e atividade enzimática antioxidante (PODs e SOD) na etapa 3. Durante a cicatrização das enxertias observou-se aumento na atividade das PODs e PPO, devido ao processo de lignificação e cicatrização dos enxertos. Para as caracteristicas de produção e qualidade dos frutos não houve efeito significativo. Na avaliação do estado nutricional houve diferenças para os teores de P, Mg e Ca em plantas enxertadas, enquanto que na composição química do substrato não se observou diferenças. Provavelmente esta resposta esteja aliada isto está aliado ao fornecimento de condições propícias de cultivo às plantas (cultivo fertirrigado em substrato) as quais proporcionaram condições ideais para o desenvolvimento. A maior atividade enzimática antioxidante da SOD e das PODs ocorreu aos 120 dias após o transplante (DAT) para o porta-enxerto „Multifort‟, sendo estas atividades atribuídas à intensificação do metabolismo durante ... / Abstract: The adoption of appropriate crop management is one way of improving the quality and production of tomato, foremost among these practices, the use of grafting and conduct method of the plants. However, in Brazil, there is a lack of information that encourage such practices. Thus, the present study aimed to assess the compatibility, enzyme activity, production and fruit quality of tomato, conducted with four stems, under protected environment. Therefore, an experiment was arranged, performed in three experimental steps, using as the hybrid rootstock 'Maxifort', 'Multifort' and 'Alambra'. The plants were cultivated in pots containing 13 dm3 substrate of coconut fiber. The characteristics evaluated were: enzymatic activity of peroxidases (PODs) and polyphenol oxidase (PPO) in step 1, ratings and production quality, nutritional status and chemical composition of the substrate in step 2, and antioxidant enzyme activity (SOD and PODs) in step 3. During the healing of grafts showed an increase in the activity of PODs and PPO, due to the lignification process and graft healing. For the characteristics of production and fruit quality no significant effect. In the assessment of nutritional status were no differences in the levels of P, Mg and Ca in plants grafted, while in the chemical composition of the substrate was not observed differences. Probably this answer is that ally is allied to providing conditions conducive to the cultivation of plants (crop fertilized substrate) which provided optimal conditions for development. The increased activity of antioxidant enzymes SOD and PODs occurred at 120 days after transplanting (DAT) for the rootstock 'Multifort', these being activities attributed to the intensification of metabolism during the production phase. We conclude, that the rootstocks 'Maxifort' and 'Multifort' not provided increases in production and quality of tomato fruits 'Alambra', the use ... / Mestre

Orientador: Lúcia Maria Carareto Alves / Banca: Rodrigo Matheus Pereira / Banca: Celso Antônio Jardim / Resumo: O processo de compostagem é executado por diferentes populações microbiológicas e é um sistema rico para a análise da diversidade o para o uso biotecnológico. A Fundação Parque Zoológico de São Paulo possui uma estrutura para a reciclagem e aproveitamento da água e de resíduos sólidos que gera para produzir composto orgânico utilizado em sua Fazenda para a produção de alimento para os animais. Foram obtidos amostras de DNA metagenômico de uma área de horta e de produção de capim-forrageiro, submetidas ao uso de composto orgânico, e uma terceira área de mata nativa. Além disso obteve-se 42 isolados a partir das mesmas áreas. Foi analisado a capacidade de produção de enzimas, solubilização de fosfato e produção de hormônio de crescimento vegetal. Observou-se, após sequenciamento do gene 16s rRNA, tanto dos isolados quando do DNA metagenômico (realizado em Illumina Miseq), que esses microrganismos compreendem uma população de diversos gêneros e espécies bacterianas. Os isolados apresentaram características bioquímicas de grande auxílio para uso agroindustrial, considerando que foram observadas capacidades diversas da produção de enzimas como amilases, celulases e proteases, além de a maioria ser capaz de solubilizar fosfato. Ao analisar o DNA total das 3 áreas verificou-se uma maior diversidade microbiana na área de mata nativa, enquanto nas áreas submetidas ao uso de composto orgânico e ao cultivo exaustivo houve uma menor diversidade e inclusive o desaparecimento de espécies destas áreas, quando comparadas a mata nativa. Porém ao avaliar as capacidades das bactérias em participar de ciclos biogeoquímicos úteis agronomicamente, as áreas submetidas ao composto orgânico apresentaram maior capacidade principalmente em solubilizar fosfato, o que não ocorreu na área de solo nativo / Abstract: The composting process is performed by different microbiological populations and is a rich system for the analysis of diversity for the biotechnological use. The Park Foundation Sao Paulo Zoo has a structure for recycling and use of water and solid waste generated to produce organic compound used in your farm for the production of food for animals. Metagenomic DNA samples were extracted of a garden area, a grass forage production, both subject to the use of organic compound, and a third area of native forest. Furthermore there was obtained 42 microbian isolates from the same areas. The ability to produce enzymes, phosphate solubilization and production of plant growth hormone was analyzed. There was, after sequencing of the gene 16s rRNA, both isolated when the metagenomic DNA (held in Illumina Miseq), that these microorganisms comprise a population of several genera and species of bacteria. The isolates showed biochemical characteristics of great assistance to agro-industrial use, considering they were subject to several production capabilities of enzymes such as amylase, cellulase and protease, and most are able to solubilize phosphate. When analyzing the total DNA of the 3 areas there was a higher microbial diversity in native forest, while in areas subjected to the use of organic compost and cultivation, there was less diversity and species including the disappearance of these areas when compared to native forest. But when assessing the capacity of bacteria to participate in biogeochemical cycles and agronomically useful activities, the areas subjected to organic compound showed higher capacity mainly in phosphate solubilizing, which did not occur in native soil area / Mestre

Orientadora: Lara Durães Sette / Coorientador: Henrique Ferreira / Banca: Mauricio Bacci Junior / Banca: Paula Maria Moreira Martins / Resumo: As lacases pertencem ao grupo das multicobre oxidases e o interesse biotecnológico por essas enzimas se deve ao fato delas catalisarem reações envolvendo diferentes compostos fenólicos e amínicos. A utilização diversificada dessas enzimas na indústria estimula a busca por lacases capazes de se adaptar aos diferentes processos industriais visando encontrar a relação de ótimo custo-benefício. O basidiomiceto de origem marinha Peniophora sp. CBMAI 1063, já demonstrou capacidade de secretar quantidades significativas de lacase sob condições otimizadas (salinas) para produção da enzima. As lacases desse organismo podem apresentar características diferenciadas devido a origem marinha do basidiomiceto. Nesse sentido, o presente trabalho teve como objetivo a obtenção das sequências de lacase do fungo Peniophora sp. CBMAI 1063 através da análise do transcriptoma, afim de realizar a caracterização in silico dessas sequências, análises filogenéticas, clonagem e expressão heteróloga. Foram obtidas 13 isoformas de lacase correspondente a 8 genes putativos para a enzima, das 13 isoformas, 11 foram referentes a lacases extracelulares e 2 intracelulares. Todas as isoformas apresentaram-se ricas em conteúdo GC (> 52 %) sendo os aminoácidos Valina, Leucina, Serina, Ácido aspártico e Treonina os mais representativos na composição polipeptídica. A massa das lacases variou entre 53,5 e 64,6 kDa. Nove isoformas apresentaram o aminoácido Leucina e 4 isoformas apresentaram o aminoácido Fenilalanina na posição variável ligado ao cobre tipo 1 que possui atividade regulatória sobre a enzima. Nenhuma das isoformas apresentou similaridade maior a 57% em relação à outras sequências de lacases depositadas no NCBI e, portanto, demonstraram ser potencialmente diferentes das lacases ... (Resumo completo clicaracesso eletrônico abaixo) / Abstract: Laccases belong to the group of multicobre oxidases and the biotechnological interest in these enzymes is due to the fact that they catalyze reactions involving different phenolic and amine compounds. The diverse use of these enzymes in the industry stimulates the search for laccases able to adapt to different industrial processes seeking to find the optimum cost-benefit ratio. The marine-derived basidiomycete Peniophora sp. CBMAI 1063, has demonstrated ability to secrete significant amounts of laccase under optimized conditions (salt) for the enzyme production. Laccases from this organism could present different characteristics due to its marine origin. The present study aimed to obtain the laccase sequences from the fungus Peniophora sp. CBMAI 1063 by transcriptome analysis in order to perform characterization of these sequences in silico, phylogenetic analysis, cloning and heterologous expression. A total of 13 laccase isoforms were obtained corresponding to eight putative genes for the enzyme. Among the 13 isoforms, eleven were related to extracellular laccases and two to intracellular. All isoforms showed abundance in GC content (> 52 %) with the amino acid Valine, Leucine, Serine, Threonine Aspartic Acid as the most representative in the polypeptide composition. The mass of laccases varied between 53.5 and 64.6 kDa. Nine isoforms showed the amino acid Leucine and four isoforms showed the amino acid Phenylalanine in the variable position on the copper type 1 which has regulatory activity on the enzyme. None of the isoforms showed a similarity over to 57% compared to other laccases sequences deposited in the NCBI and therefore shown to be potentially different from laccases from other marine and terrestrial basidiomycetes. The cloning of a DNA fragment that encodes laccase from Peniophora sp. 1063 CBMAI allowed ... (Complete abstract click electronic below) / Mestre

Magíster en Ciencias de la Ingeniería, Mención Química / La producción de azúcares desde lignocelulosa para producir biocombustibles y otros productos de valor, ha sido un desafío de los últimos tiempos. Debido a la estructura recalcitrante del material lignocelulósico, su degradación demanda gran cantidad de enzimas, lo que encarece el proceso. Uno de los métodos más económicos estudiados consiste en usar extractos enzimáticos crudos. Estos extractos pueden obtenerse cultivando, en medio líquido, hongos de pudrición de la madera y luego utilizar el sobrenadante en una reacción de hidrólisis de lignocelulosa. Sin embargo, para estos hongos, los rendimientos han sido bajos, por debajo del 20%. Con el objetivo de mejorar esos rendimientos desde los hongos de pudrición de la madera Gloeophyllum trabeum, Phanerochaete chrysosporium y Trametes versicolor, se evaluaron dos estrategias para la obtención de enzimas, en donde se utilizaron extractos extracelulares crudos (EEC) con los cuales hidrolizar paja de trigo pretratada (PTP). Una estrategia consistió en cultivar los hongos individualmente y de cada cultivo obtener un EEC. Estos EEC se mezclaron en proporciones 5:2, 1:1 y 2:5 para ser usados en las hidrólisis de PTP. En la segunda estrategia se cultivó más de un hongo en el mismo medio, y de cada uno de estos co-cultivos se obtuvo un EEC que se usó en hidrólisis de PTP. Los resultados mostraron que los cultivos y co-cultivos con P. chrysosporium tuvieron muy baja producción de enzimas, alrededor de 20 veces menos, comparado con los otros hongos, por lo que se trabajó con EECs de G. trabeum, T. versicolor y con EEC del co-cultivo de estos. Los resultados de la hidrólisis de PTP mostraron que al mezclar los EEC de los hongos se produce un incremento en la producción de glucosa en comparación con la producción por los EEC en reacciones individuales. Según el análisis de actividad enzimática de los EEC se observó sinergia entre enzimas de ambos extractos. Se postula que esta sinergia es debido a un enriquecimiento enzimático o complementariedad funcional entre enzimas, ya que el EEC de un hongo presenta alta actividad enzimática donde el EEC de otro hongo presenta baja. Con respecto al co-cultivo se observó incremento en la producción de glucosa, posiblemente debido a la presencia de proteínas auxiliares que se habrían expresado en mayor cantidad en el co-cultivo. Se concluye que existe sinergia al mezclar los EEC de G. trabeum y T. versicolor para hidrolizar PTP y que se puede obtener un EEC mejorado desde un co-cultivo de estos hongos, siendo este último más ventajoso por su facilidad de obtención. Con respecto a los rendimientos de conversión a azúcares, éstos son relativamente bajos (14%) en comparación con la literatura (entre 36% y 74%) por lo que se recomienda optimizar los medios de cultivo, modificando su composición, hacia un máximo de producción de enzimas. / Este trabajo ha sido financiado por una beca de maestría de la Secretaría de Educación Superior, Ciencia y Tecnología e Innovación (SENESCYT) de la República de Ecuador y por el proyecto FONDECYT 1121088 de la Comisión Nacional de Investigación Científica y Tecnológica (CONICYT) de la República de Chile

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Ethanol is one of the most used substance in different societies. This study was performed in order to clarify the acute and chronic effects of ethanol on biochemical and behavioral parameters in male Wistar rats. The acute treatment consisted of oral administration by gavage of 0.8, 2.0, 4.0, 6.0 and 8.0 g ethanol/kg. All rats were sacrificed one hour and thirty minutes post treatment. The results showed that acute treatment induced a biphasic or hormetic effect in platelet NTPDase and 5'-nucleotidase activities. The activity of the enzyme acetylcholinesterase was inhibited in cerebral cortex, cerebellum, hypothalamus, hippocampus and striatum in 6.0g/kg and 8.0g/kg treated-groups. Moreover the acute treatment increased lipid peroxidation in the blood serum, liver, kidney and brain structures. The open-field and elevated plus-maze behavior was few altered by acute treatment. The chronic treatment consisted of oral administration of 20% ethanol solution during 31 weeks as only source of fluid. Rats were sacrificed 48 hours after the end of the treatment. The results showed reduction of the weight of treated group and initial hepatic injury in histological evaluation. There was a reduction in platelet NTPDase activity with ATP or ADP as substrate, while the 5'-nucleotidase activity was increased. The activity of the enzyme acetylcholinesterase was increased in cerebellum, hypothalamus, hippocampus and striatum. Lipid peroxidation was increased in the blood serum, liver and kidney. Besides we observed that interruption of the treatment for 48 hours elicited an anxiogenic effect in open-field and elevated plus-maze. / O etanol é uma das substâncias mais utilizadas nas diferentes sociedades. Esse estudo foi realizado com a finalidade de se esclarecerem os efeitos agudos e crônicos do etanol sobre parâmetros bioquímicos e comportamentais em ratos machos Wistar. O tratamento agudo consistiu na administração oral por gavagem de 0.8, 2.0, 4.0, 6.0 e 8.0 gramas de etanol/kg de peso corporal. Todos os ratos foram sacrificados uma hora e meia pós-tratamento. Os resultados demonstraram que o tratamento agudo com etanol induziu um efeito bifásico ou hormético sobre a atividade das enzimas NTPDase e 5'-nucleotidase de plaquetas. A atividade da enzima acetilcolinesterase foi inibida em córtex cerebral, cerebelo, hipotálamo, hipocampo e estriado nos grupos tratados com 6.0 g/kg e 8.0 g/kg. Além disso, o tratamento agudo aumentou a peroxidação lipídica em soro, fígado, rim e estruturas cerebrais. O comportamento em campo-aberto e no labirinto em cruz elevado foi pouco alterado pelo tratamento agudo. O tratamento crônico consistiu na administração de uma solução alcoólica 20% durante 31 semanas de tratamento, como única fonte de líquido. Os ratos foram sacrificados após 48 horas de interrupção do tratamento. Os resultados demonstraram redução do peso do grupo tratado e ocorrência de injúria hepática inicial na avaliação histológica. Houve uma diminuição da atividade da NTPDase, com os substratos ATP e ADP, enquanto que a atividade da 5'-nucleotidase foi aumentada. A atividade da enzima acetilcolinesterase aumentou em cerebelo, hipotálamo, hipocampo e estriado. A peroxidação lipídica aumentou em soro, fígado e rim. Além disso, observou-se que a interrupção por 48 horas induziu uma resposta ansiogênica evidenciada no campo-aberto e no labirinto em cruz elevado.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-24Bitstream added on 2014-06-13T18:55:47Z : No. of bitstreams: 1 claudio_lg_me_jabo.pdf: 621876 bytes, checksum: 43fabe51d0fff33b92529f62c44fff3f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho teve como objetivo relacionar elementos qualitativos e quantitativos do pré-abate e abate de bovinos que pudessem caracterizar situação ou evolução desses, visando às boas práticas agropecuárias e as condições de bem-estar animal e suas possíveis consequências. Para isso foram monitorados os seguintes aspectos: lesões musculares visíveis nas carcaças quanto a sua localização e seu grau de severidade; atividade de enzimas séricas músculo específicas indicativas de lesão (CK, AST, LDH) e, finalmente, a evolução do pH post mortem das carcaças. Esses parâmetros foram avaliados em diferentes sistemas de terminação de bovinos (animais oriundos de pasto ou confinamento) e classes sexuais (machos ou fêmeas). Foi constatada ao menos uma contusão em 58,1% das carcaças, sendo 96,11% de grau I, sendo o grupo das fêmeas o mais afetado, com 81,3%. De maneira geral, as enzimas séricas mostraram-se elevadas quando comparadas aos valores de referência utilizados, principalmente CK e LDH. Os animais de pasto apresentaram valores de enzimas significativamente maiores que os de confinamento e as fêmeas maiores valores de CK comparadas aos machos. O pH mostrou-se comparativamente maior nos animais de pasto e nos machos / This study aimed to relate qualitative and quantitative elements of the preslaughter and slaughter of cattle that could characterize the situation and evolution of these in order to good farming practices and the conditions of animal welfare and its possible consequences. For this it was monitored the following: muscle injuries visible on the carcasses as its location and its severity; activity of specific serum enzymes indicative of muscle damage (CK, AST, LDH) and, finally, the evolution of post mortem pH of carcasses . These parameters were evaluated in different cattle feeding production systems (cattle from pasture or feedlot) and sex classes (male or female). It has been found at least one injury in 58.1% of the carcasses, and 96.11% grade I, being the group most affected females, with 81.3%. In general, the serum enzymes were high compared to the reference values are used, primarily CK and LDH. Animals from pasture showed significantly higher values of enzymes that feedlot and higher values of CK in females compared to males. The pH was found to be comparatively higher in grazing animals and in males