Made available in DSpace on 2014-10-09T12:52:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:03:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Submitted by Claudinei Pracidelli (cpracide@ipen.br) on 2016-02-03T11:52:39Z No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2016-02-03T11:52:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Orientador: José Maurício Barbanti Duarte / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Banca: Claudio Alvarenga de Oliveira / Resumo: Atualmente, o conhecimento sobre a fisiologia e a biologia reprodutiva de cervos-do-pantanal (Blastocerus dichotomus) é escasso e as lacunas existentes aumentam a vulnerabilidade da espécie à extinção. Neste contexto, os objetivos deste trabalho foram: (1) caracterizar alguns parâmetros relacionados à fisiologia reprodutiva de fêmeas de cervos-do-pantanal e (2) fornecer métodos adequados para o acesso às diferentes fases do ciclo reprodutivo. Para isso, seis fêmeas da espécie foram utilizadas para a caracterização hormonal do ciclo estral, da gestação e do período pós-parto. Amostras fecais foram colhidas diariamente para o monitoramento do ciclo estral, duas vezes por semana durante a gestação e em dias alternados no período pós-parto. As dosagens das progestinas fecais foram feitas por EIA. Foram monitorados 16 ciclos estrais completos, cuja duração média foi de 21,3±1,3 dias (6,4±1,2d fase inter-luteal e 14,8±1,3d fase luteal). As concentrações médias de progestinas fecais para as fases inter-luteal e luteal do ciclo estral foram 834±311ng g-1 e 3979±1611ng g-1, respectivamente, e o valor limite entre elas foi de 1457ng g-1. Quatro fêmeas levaram a gestação a termo, determinando um período de gestação médio de 253±4 dias. Houve um aumento significativo (p<0,05) na concentração de progestinas fecais a partir do quarto mês de gestação, o que pôde direcionar o diagnóstico presuntivo de gestação na espécie. Assim, concentrações de progestinas fecais 15250ng g-1 foram indicativas de gestação. No período de 60 dias pós-parto em que as fêmeas foram monitoradas, 75% (3/4) delas apresentaram estro e/ou retomaram a atividade ovariana. / Abstract: The scarce knowledge about reproductive physiology and biology in marsh deer (Blastocerus dichotomus) increases the vulnerability of this species to the extinction. Thus, the aims of this study were: (1) to characterize some parameters related to the reproductive physiology of females marsh deer and (2) to turn available adequate tools for the assessment of the reproductive cycle's phases. Six females and one male were used to the hormonal characterization of the estrous cycle, pregnancy and post parturition period. Fecal samples were collected daily during the estrous cycle, twice a week during the pregnancy and in alternated days during the post parturition period of monitoring and the amount of fecal progestins was evaluated by enzyme immunoassay. The mean length of the estrous cycle was 21.3±1.3 days (6.4±1.2d interluteal and 14.8±1.3d luteal phase) and the fecal progestins concentrations were 834±311ng g-1 and 3979±1611ng g-1, respectively for the inter-luteal and luteal phase. The limit value between these phases was 1457ng g-1. Four females became pregnant and exposed a mean pregnancy period of 253±4 days. There was a significant increase (p<0,0001) in the fecal progestins excretion since the fourth month of pregnancy, that could provide guidelines for the pregnancy diagnosis in the species. Thus, fecal progestins concentrations 15250ng g-1 were indicative of pregnancy. Seventy five percent (3/4) of the females exhibit estrous and/or restarted the ovarian function during the post parturition period of monitoring. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:43:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:58:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 06500.pdf: 5041467 bytes, checksum: 85575a2b20c2e1b56487851767fef65f (MD5) / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:52:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:03:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A radiação ionizante tem sido empregada com sucesso na modificação das propriedades imunológicas das biomoléculas e tem se mostrado uma potente ferramenta para destoxicar venenos de serpentes sem afetar e, muitas vezes, melhorando suas propriedades imunogênicas. Resultados promissores foram obtidos com o tratamento, tanto de veneno total quanto de frações isoladas, com a radiação gama de 60Co. No presente trabalho, foram avaliados os efeitos da Bothropstoxina-1 (Bthx-1) e do veneno total de Bothrops jararacussu sobre o sistema imune de camundongos B10.PL e BALB/c, visando caracterizar a resposta imune contra proteínas irradiadas. Modificações estruturais foram observadas por meio de técnicas eletroforéticas - SDS-PAGE. Para os ensaios imunológicos, camundongos de diferentes linhagens foram imunizados com ambas as formas da Bthx-1 e os anticorpos circulantes foram isotipados e titulados pelo método de ELISA. Os resultados mostraram que tanto o veneno total como a toxina isolada, mesmo após o processo de irradiação, se mostraram imunogênicos e os anticorpos produzidos reconheciam as formas nativas. Para a caracterização antigênica a técnica de Western Blot permitiu demonstrar que a Bthx-1 irradiada induziu à produção de anticorpos responsivos para ambas as formas da toxina isolada e do veneno total. Os resultados do ensaio de citotoxicidade mostram que a viabilidade dos macrófagos ensaiados com a Bthx-1 ou com o veneno total irradiados foi maior quando comparada com os resultados obtidos para as formas nativas. Analisando-se o resultado do ensaio de LDH, observou-se que a Bthx-1 irradiada promoveu menor dano muscular que a toxina nativa. Conclui-se que a irradiação de proteínas promove modificações estruturais significativas, mantendo, contudo, suas propriedades imunológicas originais, representando uma potencial ferramenta na melhoria do processo de imunização. / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Submitted by Claudinei Pracidelli (cpracide@ipen.br) on 2016-02-03T11:52:39Z No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2016-02-03T11:52:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O soro anti-elapidico brasileiro é produzido com uma mistura de veneno de Micrurus frontalis e de M. corallinus. Estudos indicam que o soro resultante não neutraliza o veneno de algumas espécies de Micrurus. Além disso, o baixo rendimento de veneno e as dificuldades de manutenção destas serpentes em cativeiro dificultam a produção de soro. Assim, um método alternativo para a produção deste soro seria de grande valor. Estudos têm mostrado que os venenos de elapideos brasileiros contêm toxinas com um elevado grau de homologia com as de suas congêneres australianas. O presente trabalho teve como objetivo comparar inicialmente o soro brasileiro e o australiano frente ao veneno de Micrurus frontalis e M. lemniscatus. A reatividade cruzada foi testada por Western-blot e ELISA com veneno de Micrurus frontalis e a capacidade neutralizante por soroneutralização com venenos de M. frontalis, M. lemniscatus, e em parceiria com venenos de M. corallinus, M. altirostris, M. spixii, M. ibiboboca, M. fulvius, M. pyrrhocryptus , M. nigrocinctus, em camundongos. Os dados obtidos indicam nível elevado de reatividade e neutralização cruzada entre os soros. Também comparamos a imunogenicidade do veneno nativo ou irradiado, não observando diferenças nos níveis de anticorpos obtidos. As serpentes australianas utilizadas para a produção de soro são mais fáceis de manusear e produzem maiores quantidades de venenos do que as corais brasileiras. Concluímos que um soro produzido com o veneno de serpentes australianas neutraliza a atividade tóxica das Micrurus estudadas, incluindo espécies que o soro nacional não neutraliza. Assim, o uso de venenos da Austrália como imunógeno constitui alternativa viável para sanar a carência do soro nacional. / Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

O Urso-de-óculos (Tremarctos ornatus), único urso endêmico da América do Sul, é uma espécie severamente ameaçada devido à perda do seu hábitat e à caça. É importante do ponto de vista da conservação pela função que cumpre no ecossistema onde habita e pela sua relação com a cultura Andina. Por estas razões, torna-se necessária a aplicação de alternativas de conservação a espécie. Uma ferramenta alternativa de conservação é a reprodução assistida, porém, existe pouco conhecimento da reprodução desta espécie. A pouca informação sobre os padrões reprodutivos diminui a possibilidade de se estabelecer programas de reprodução bem sucedidos e torna-se mais difícil a criação de planos de conservação. O objetivo deste estudo foi caracterizar o ciclo ovariano na fêmea do Urso-de-óculos. Para tanto foi realizada a monitoração endócrina por meio da extração e dosagem de metabólitos fecais dos esteróides sexuais: estradiol e progesterona. O estudo foi realizado com amostras colhidas de seis fêmeas de T. ornatus mantidas em cativeiro em dois zoológicos da cidade de Lima, Peru, pelo período de treze meses, desde Fevereiro de 2010 até Abril de 2011. As extrações dos metabólitos fecais foram feitas no Laboratorio de Reproducción Animal, FMVUNMSM, em Lima, Peru; e foram quantificados por enzimaimunoensaio (EIE), no Instituto de Bioquímica Médica, Veterinärmedizinische Universität Wien-Áustria. Os resultados indicam que é possível descrever e monitorar a endocrinologia do ciclo ovariano em T. ornatus de forma não-invasiva através do uso de metabólitos fecais de esteroides sexuais; demonstrando que o Urso-de-óculos em cativeiro é uma espécie que conta com uma reprodução não sazonal, com fase folicular e lútea durando em média 08 e 22 dias, respectivamente. Nestas condições, apresenta em média, de três a quatro fases de atividade ovarianas por ano. Os resultados encontrados ajudarão a compreender o ciclo ovariano nos Ursos-de-óculos e facilitar o desenvolvimento de programas de reprodução assistida na espécie. / Spectacled bear (Tremarctos ornatus) is the only bear species that inhabits South America. It is an endangered species due to habitat loss and hunting. For the conservation point of view it is an important species for the ecosystem maintenance and also for their relationship with the Andean culture. For these reasons it is necessary to apply conservation alternatives for this species. Assisted reproduction is an alternative conservation tool; however, there is a lack of knowledge of the Spectacled bear reproduction. Little information about the reproductive parameters diminishes the possibility to establish a successful breeding program and make difficult the implementation of conservation plans for the species. The aim of this study was to characterize the ovarian cycle in the female Spectacled bear with noninvasive techniques for monitoring fecal metabolites of reproductive hormones (estradiol and progesterone). The study was carried out with samples collected by a 13-month period (Feb/10 to April/11), from six captive females T. ornatus kept in two zoological institutions in Lima, Peru. The metabolites extraction was carried out at Laboratory of Animal Reproduction, FMV-UNMSM, in Lima-Peru, and the hormonal analysis was performed in the Institute of Medical Biochemistry, Veterinärmedizinische Universität Wien-Austria. The results show us that it is possible to describe and realize a non-invasive monitoring of ovarian cycles in T. ornatus, with the use of fecal metabolites of sex steroids; and demonstrates that in captive conditions Spectacled bear is a non-seasonal reproduction species, with follicular and luteal phases lasting on average 8 and 22 days, respectively, whereas in captivity has on average three to four stages of ovarian activity per year. These results will help to understand the ovarian cycle in Spectacled Bear and facilitate the development of programs of assisted reproduction in the species.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O objetivo deste estudo foi investigar na saliva de crianças pré-púberes obesas, em comparação com crianças eutróficas, a presença de possíveis diferenças na expressão de mediadores proteicos relacionados à metainflamação através de um estudo observacional transversal. Foram selecionadas 105 crianças pré-púberes com idade entre 5 e 9 anos, sem quaisquer outros comprometimentos sistêmicos ou bucais sendo realizada a mensuração do comprimento da circunferência da cintura (CC), além do peso e estatura para cálculo do IMC e seu escore Z (zscore IMC), de forma a compor 3 grupos: EU - eutrofia (-2SD&#8804; zscore IMC&#8804;1SD), SP - sobrepeso (1SD < zscore IMC < 2SD) e OB obesidade (zscore IMC &#8805; 2SD). Após o exame médico e odontológico foi feita a coleta de sangue e de saliva total não estimulada, de forma protocolada. Amostras séricas e salivares foram analisadas, individualmente, para a dosagem de IL1&#946;, IL6, IL8. IL10, IL12p70, TNF&#945;, MCP1, leptina, grelina e insulina, por Multiplex e adiponectina total e de alto peso molecular (adipoHMW), por ELISA. Além disso, as amostras séricas foram utilizadas para o delineamento hemodinâmico dos pacientes. As amostras salivares de EU e OB foram também analisadas em pools por espectrometria de massa (MS) e a presença de algumas proteínas foi validada por imunoblotting, para a comparação do perfil salivar proteico. As concentrações dos analitos foram comparadas tanto entre os grupos (teste de Kruswall-Wallis), como em relação ao zscore IMC e ao CC (Correlação de Spearman ou Pearson). Dos 12 analitos, somente a adipoHMW não foi detectada em nenhuma das amostras salivares. Na comparação OBxEU houve aumento na concentração total de proteínas salivares, da insulina e leptina sérica e salivar e do MCP1, além de diminuição da adiponectina sérica total e de adipoHMW e uma menor relação adiponectina/leptina (A/L) no grupo OB. As principais correlações obtidas com o zscore IMC foram com as concentrações séricas e salivares de insulina e leptina (positivas) e com a relação A/L (negativa), observando-se também a correlação negativa com a adiponectina total e adipoHMW séricas. Na comparação entre as concentrações séricas e salivares, foi possível detectar correlação positiva entre as dosagens de insulina e leptina, assim como com os valores da relação A/L. Na análise proteômica por MS foram identificadas 670 proteínas, sendo 163 delas com expressão diferenciada na saliva de OB em relação a EU. Dentre estas, encontram-se alteradas proteínas relacionadas à resposta inflamatória humoral, em especial com a via alternativa do sistema complemento e do metabolismo redox. Foram selecionadas três destas proteínas para validação por imunoblotting, que confirmou o aumento do Fator H e a diminuição do Fator B e da tioredoxina na saliva de OB em relação a EU. Considerando os resultados, podemos verificar que embora com menores concentrações absolutas dos mediadores, a saliva mostrou praticamente as mesmas associações observadas no sangue, em especial para a insulina, leptina e relação A/L, sendo possível admitir que a análise salivar venha a ser um bom método diagnóstico não invasivo para a obesidade infantil. / The aim of this study was to investigate possible different expressions of protein mediators related to metaflammation, in normal and obese prepubertal children`s saliva. For this cross-sectional observational study, 105 prepubertal children, between 5 and 9 years old, without oral or systemic disorders were selected. Weight, height and waist circumference (CC) were measured and body mass index (BMI) and BMI zscore were calculated in order to classify the children into the following groups: EU - lean (-2SD &#8804; BMI zscore &#8804; 1SD), SP - overweight (1SD < BMI zscore <2SD) and OB - obese (BMI zscore &#8805; 2SD). Following medical and dental examination, blood and unstimulated whole saliva were sampled. The samples were individually analyzed by immunoassay for IL1&#946;, IL6, IL8, IL10, IL12p70, TNF, MCP1, leptin, insulin and ghrelin, using Multiplex. Total and high molecular weight (adipoHMW) adiponectin were analyzed using ELISA. Additionally, serum samples were used to assess the patients lipid profile. Pools of EU and OB saliva samples were also analyzed by mass spectrometry (MS). The presence of some proteins was validated for by immunoblotting. The concentrations of analytes were compared between the groups EU, SP and OB (Kruswall-Wallis test), and in relation to BMI zscore and CC (Pearson or Spearman correlation). Only adipoHMW was not detected in any saliva sample. In comparison with EU, OB showed an increase in total concentration of salivary proteins, salivary and serum insulin, serum and salivary leptin and serum MCP1. Also, a decreased serum total adiponectin and adipoHMW and a lower A/L ratio were observed in the OB group. BMI zscore was positively correlated with insulin and leptin salivary and serum concentrations. A negative correlation with A/L ratio, serum total adiponectin and adipoHMW was also observed. These correlations were also found with CC. Comparing blood and saliva concentrations, significant associations between the dosages of insulin and leptin, as well as the values of A/L ratio were found. In proteomic analysis, by MS, 670 proteins were identified, and 163 of them with differential expression in saliva of OB in comparison to EU. Proteins related to the inflammatory response, in particular with the alternative pathway of the complement system and of redox metabolism were differently expressed between EU and OB. Three of these proteins were selected for validation by immunoblotting, which confirmed the increase of complement H Factor and reduced thioredoxin and complement B Factor expression in the saliva of OB compared to EU. Considering the results, it can be concluded that, although at lower absolute concentrations, the inflammatory mediators in saliva showed the same associations observed in blood, especially insulin, leptin, and A/L ratio. It is possible to assume that salivary analysis may become a useful noninvasive diagnosis method for childhood obesity.

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:52:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:00:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Submitted by Claudinei Pracidelli (cpracide@ipen.br) on 2015-11-12T10:30:34Z No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2015-11-12T10:30:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP