Amostras espermáticas provenientes do epidídimo podem ser utilizadas com diversas finalidades tais como: modelo experimental para pesquisa com sêmen, aproveitamento do sêmen de animais de alto valor genético que vierem a óbito e possibilidade da coleta e aproveitamento do sêmen de animais em perigo de extinção. No entanto, para a utilização desta técnica é necessário o estudo de diversos fatores que poderiam influenciar sua eficiência, como por exemplo, as formas de armazenamento dos testículos, efeitos da criopreservação, diluidores utilizados, entre outros. O presente estudo teve como objetivos: 1- determinar a temperatura mais adequada para o armazenamento do testículo após o abate do animal (4 ou 34ºC) levando-se em consideração testes funcionais e fecundação in vitro; 2- avaliar o efeito desta temperatura de armazenamento no sêmen epididimário fresco e criopreservado e; 3- verificar a eficiência do tratamento com ácido decosaexanóico (DHA) e antioxidantes adicionados ao diluidor. Para isso, amostras espermáticas foram coletadas da cauda do epidídimo de touros provenientes de abatedouros. Para testar o efeito da temperatura de acondicionamento dos testículos, os mesmos foram armazenados entre 2 e 4 horas após o abate, à temperatura de 4 ou 34º C. O sêmen foi então coletado da cauda do epidídimo, submetido ou não à criopreservação e avaliado quanto a análise computadorizada da motilidade espermática (CASA), integridade de membrana e potencial mitocondrial (iodeto de propídeo, SYBR e JC1), fertilização in vitro e susceptibilidade ao estresse oxidativo (TBARS). Visto que os resultados deste experimento indicaram que a temperatura de 4ºC era a mais indicada, a mesma foi utilizada para a avaliação do efeito da suplementação com DHA e antioxidantes adicionados ao diluidor. Nesta fase, o sêmen foi avaliado quanto à integridade de membrana e acrossomo (eosina/nigrosina e fast green/rosa bengala, respectivamente), atividade mitocondrial (diaminobenzidina), integridade do DNA (ensaio da estrutura da cromatina espermática SCSA) e susceptibilidade ao estresse oxidativo (TBARS). Os resultados do presente estudo indicam que o tratamento com o DHA tornou os espermatozóides mais susceptíveis aos danos causados pelo estresse oxidativo. Por outro lado, resultados diversos foram encontrados com a associação entre DHA e antioxidantes. A associação entre DHA e superóxido dismutase (SOD) e DHA e glutationa reduzida (GSH) apresentaram os melhores resultados em relação à motilidade espermática e à integridade de membrana, respectivamente. No entanto, o DHA, quando associado à Vitamina E, apresentou resultados negativos para a atividade mitocondrial. Os resultados do presente estudo indicam que o tratamento com DHA e SOD ou DHA e GSH em amostras espermáticas coletadas de epidídimos armazenados a 4ºC por até 4 horas, pode melhorar a qualidade espermática pós criopreservação. / Sperm recovery from the cauda epididymis can be very advantageous, for example: in case of the unexpected death of a genetically highly valuable animal, as an experimental model for research on semen and for the use in endangered species. However, the efficiency of this technique demands the study of several issues such as the storage conditions of the testicles prior semen collection, the effects of cryopreservation and semen extenders, among others. The objective of the present study was: 1- to evaluate the ideal temperature for testicles storage after slaughter (4 or 34ºC) based on functional tests and on in vitro fertility; 2- to evaluate the effect of storage temperature on fresh and cryopreserved semen samples, and; 3- to test the addition of decosaexanoic acid (DHA) and antioxidants to the semen extender. Sperm samples were collected from the caudae epididymides of testicles collected from abattoirs. To test the effect of temperature of storage, testicles were kept under 4 or 34ºC, between two to four hours after slaughter. Semen was then collected from the caudae epididymides and cryopreserved or not. Samples were then evaluated for computer assisted sperm analysis (CASA), membrane integrity and mitochondrial potential (propidium iodide, SYBR and JC1), in vitro fertilization outcomes, and susceptibility to the oxidative stress (TBARS). Results of this study indicated that, with no doubt, storage of testicles under 4ºC is the most appropriate in order to improve post-thaw sperm quality and in vitro fertility. Therefore, this temperature was used in the rest of the study to test the effect of DHA and antioxidant treatments to the semen extender. In this part of the study, semen was evaluated for membrane and acrosome integrities (eosin/nigrosin and fast green/bengal rose stain, respectively), mitochondrial activity (diaminobenzidine stain), DNA integrity (sperm chromatin structure assay SCSA) and, sperm susceptibility to the oxidative stress (TBARS). Results of the present study indicate that due to the treatment with DHA, epididymal sperm became more susceptible to the oxidative stress. On the other hand, different results were found regarding the association between DHA and antioxidant. The association between DHA and superoxide dismutase (SOD) and between DHA and reduced glutathione (GSH) showed better results on sperm motility and membrane integrity, respectively. On the other hand, when associated to the Vitamin E, the DHA showed poor results on mitochondrial activity. Results of the present study indicate that the treatment with DHA and SOD or GSH to epididymal sperm samples collected from testicles stored at 4ºC for up to 4 hours, may improve post-thaw sperm quality.

Orientador: Raquel Fantin Domeniconi / Resumo: O estado nutricional materno desempenha papel crucial na saúde e no bem-estar do feto. Alterações testiculares, prostáticas e espermáticas foram observadas em animais adultos, cujas mães sofreram restrição de proteína. No entanto, não há trabalhos com este modelo experimental que enfoquem o desenvolvimento, padrão de vascularização e seus reflexos na expressão de proteínas no epidídimo. O objetivo deste estudo é investigar o padrão das respostas morfológicas, imuno-histoquímicas e expressão de proteínas do epidídimo da prole de ratos Wistar de mães submetidas à restrição proteica no período de gestação e de lactação. Fêmeas prenhes foram alocadas nos grupos experimentais normoproteico (NP) e hipoproteico (HP) que receberam, respectivamente, dietas contendo 17% e 6% de proteínas durante gestação e lactação. Após o desmame, os ratos receberam dieta padrão para roedores até as idades de 21, 44 e 120 dias pós-natais (DPN) quando foram eutanasiados. Os epidídimos foram coletados e processados segundo técnicas histológicas, imuno-histoquímicas e de western blotting. Nos filhotes HP, o tamanho reduzido e baixo peso observados ao nascimento se mantiveram até o DPN 120, acompanhados da redução dos órgãos do sistema genital masculino para todas as idades analisadas. A dieta hipoproteica materna diminuiu os níveis séricos de testosterona nos animais no DPN 44, aumentou os níveis de aldosterona nos animais no DPN 21 e não alterou os níveis de estradiol em nenhuma das idades. Nos animais ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Maternal nutrition status plays a crucial role in the health and well-being of the fetus. Changes of testes and prostate as well as spermatic disorders were observed in adult animals whose mothers were subjected to protein restriction. However, there are no studies with this experimental model that focus the development and the vascular pattern of epididymis, as well as their reflexes in the expression of proteins of the epididymis. The aim of this study is to investigate the pattern of morphometric, immunohistochemical and protein expression of the epididymis of the Wistar rat offspring whose mothers were subjected to a low-protein diet during gestation and lactation. Pregnant females were divided into normoprotein (NP) group and low-protein (LP) group that received, respectively, diets containing 17% and 6% of protein during gestation and lactation. After weaning, the LP and NP male pups received the standard diet for rodents until the ages of 21, 44 and 120 days (PND), when they were euthanized. The epididymides were collected and processed according to histological, immunohistochemical and western blotting techniques. In the LP offspring, the smaller body size and low weight observed at birth remained until the PND 120, as well as the reduction of the male genital system organs weight for all analyzed ages. Maternal low-protein diet decreased testosterone serum levels in animals at PND 44, increased aldosterone serum levels in animals at PND 21 and did not altered estradi... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Fabiana Ferreira Souza / Resumo: As proteínas dos fluido e células do sitema reprodutor são constantes objetos de estudo, a fim de elucidar eventos fisiológicos e buscar biomarcadores das funções reprodutivas, facilitando a escolha de reprodutores. Em vista disso, este estudo objetivou caracterizar as proteínas dos espermatozoides do ejaculado e da cauda do epidídimo, do plasma seminal e do fluido epididimário de touros. Foram utilizados 10 touros adultos da raça Brangus. O sêmen foi colhido por eletroejaculação e, posteriormente os machos foram orquiectomizados para a colheita dos espermatozoides e fluido do epidídimo. As células do ejaculado e da cauda do epidídimo foram analisadas subjetivamente após a colheita, e o plasma seminal e fluido do epidídimo foram separados por centrifugação. Então, as amostras foram preparadas para a espectrometria de massas (ESI-QTof MS/MS), com um pool de cada grupo. A concentração de proteínas totais não diferiu entre os grupos. Foram encontradas 67 e 66 proteínas nos espermatozoides do ejaculado e da cauda do epidídimo, e 20 e 16 no plasma seminal e líquido epididimário, respectivamente. Além disso, 52 proteínas foram comuns entre os espermatozoides obtidos do ejaculado e epidídimo, e 9 entre o plasma seminal e fluido epididimário. Atividade catalítica foi a principal função molecular nas células espermáticas; já no plasma seminal foi de ligação e no fluido epididimário, atividade catalítica. As proteínas que se destacaram foram: 14-3-3 protein zeta/delta, A-kinase anchor ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-07-06T18:35:03Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2607465 bytes, checksum: 3b40f68f4d4225bf615db6cabfb8d333 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-06T18:35:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2607465 bytes, checksum: 3b40f68f4d4225bf615db6cabfb8d333 (MD5) Previous issue date: 2016-04-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Existem poucos estudos sobre a caracterização do sistema reprodutor masculino, especialmente o epidídimo, em morcegos neotropicais. Estudos prévios em morcegos, Molossus molossus e Eumops glaucinus, mostraram que o epitélio epididimário apresenta características similares a de outros mamíferos, quando analisados sob microscopia de luz. Porém, não foi encontrado nenhum trabalho caracterizando o epidídimo do morcego vampiro comum, Desmodus rotundus. O epidídimo exerce diversas funções como concentração, maturação, transporte e estocagem do espermatozoide. Esse órgão é composto por epitélio pseudoestratificado, podendo ser dividido em quatro regiões, segmento inicial, cabeça, corpo e cauda. Assim, o objetivo desse trabalho foi caracterizar o epidídimo do morcego vampiro comum com base nos aspectos morfológicos, histomorfométricos e ultraestruturais, através do uso de microscopia de luz, epifluorescência e eletrônica. Para a imunohistoquímica, foram usados marcadores de diferentes tipos celulares, como aquaporina 9, citoqueratina 5 e H + V-ATPase, e proteínas de tight junction, como claudina 1, claudina 3, claudina 4 e zônula de oclusão 1. No presente estudo foi possível identificar a região proximal do epidídimo, segmento inicial e cabeça, e a região distal, corpo e cauda. Todas as regiões apresentaram epitélio pseudoestratificado composto por células principais, basais e claras. A altura do epitélio epididimário diminuiu a partir da região proximal para a distal, enquanto o diâmetro do ducto e o de interducto aumentaram. O compartimento do ducto foi o principal componente do epidídimo do morcego vampiro comum. Células principais apresentaram formato colunar com estereocílio na membrana apical da célula em contato com o lúmen e foram as mais frequentes.Ao longo de todo o epidídimo, foi observado marcação PAS- positiva, formando o glicocálice, e expressão da proteína aquaporina 9 no estereocílio. Em todas as regiões observamos grânulos PAS-positivo no citpolasma, além de características ultraestruturais relacionadas às funções de absorção e secreção. O segundo tipo celular mais observado foi a célula basal. Essas foram identificadas pela posição do núcleo, localizado na porção basal do epitélio, adjacente à membrana basal. Em todas as regiões do epidídimo as células basais expressaram citoqueratina 5 e formaram uma rede de comunicação, através de prolongamentos citoplasmáticos laterais, na base do epitélio. Células claras foram as células menos observadas no epitélio epididimário do morcego vampiro comum. Essas apresentaram formato caliciforme, com núcleo na região apical da célula, baixa frequência na região da cauda e expressaram H + V-ATPase. Ultraestruturalmente, os tipos celulares mostraram características similares ao longo do epidídimo. No morcego vampiro comum, observamos a expressão de proteínas de tight junction, claudinas e zônula de oclusão 1, na porção apical das membranas laterais das células adjacentes que compõem o epitélio epididimário. Entretanto, enquanto zônula de oclusão 1 foi observada somente em tight junction, as claudinas foram observadas na região de tight junction, e na membrana basolateral das células adjacentes, incluindo células basais. Houve diferença na distribuição das claudinas quando comparado o epitélio das regiões proximais com as distais do epidídimo e entre as estações de chuva e seca. Conclui-se que o conhecimento das características do epitélio epididimário do morcego comum aumenta as informações sobre o aparelho reprodutor masculino de espécies de morcegos neotropicais, uma vez que o epidídimo de animais dessa espécie apresenta algumas peculiaridades, como o formato caliciforme das células claras em todas as regiões e baixa quantidade dessas na região da cauda, e a ausência de prolongamento citoplasmático em direção ao lúmen das células basais. Entretanto, mais estudos são necessários para o entendimento de como ocorre a maturação espermática nessa espécie, e se variações hormonais e sazonais podem interferir de alguma forma nesse órgão. / There are few studies about the characterization of the male reproductive system, especially the epididymis, in neotropical bats. Previous studies in bats, Molossus molossus and Eumops glaucinus, showed that the epididymal epithelium presents similar characteristics to the other mammals, when analyzed by light microscopy. However, there is not any study focused on the morphological features of the epididymis in common vampire bat Desmodus rotundus. The epididymis is responsible for several functions such as concentration, maturation, transport and storage of sperm. This organ is composed of pseudostratified epithelium and may be divided into four regions, initial segment, caput, corpus and cauda. Therefore, the aim of this study was to characterize the common vampire bat’s epididymis based in morphological, histomorphometric and ultrastructural aspects using light, epifluorescence and electron microscopy. For the immunohistochemistry, were used different cell types markers, such as aquaporin 9, cytokeratin 5 and H + V-ATPase, and tight junction proteins, as claudin 1, claudin 3, claudin 4 and zonula occludens 1. In this current study, we observed the proximal region of the epididymis, initial segment and caput, and the distal region, corpus and cauda. All the regions showed a pseudostratified epithelium composed of principal, basal and clear cells. The epithelium height decreased from the proximal to the distal region, while the duct and interduct diameter increased. The duct compartment was the main component of the common vampire bat epididymis. Principal cells showed a columnar shape with stereocilia in the cell apical membrane in contact with the lumen, and were the most frequent cell type. Along the epididymis, was observed PAS-positive staining, forming the glycocalix, and expression of aquaporin 9 in the stereocilia. In all regions, we observed PAS-positive granules in the cytoplasm, besides of ultrastructural characteristics related to absorption and secretion functions. The second most frequent cell type was basal cells. These cells were identified by the nuclei position, located in the basal portion of the epithelium, adjacent to the basement membrane. In all epididymal regions, the basal cells expressed cytokeratin 5, and formed a dense network, through cytoplasmatic lateral extensions, at the basal portion of the epithelium. Clear cells were the less frequent cell type observed in the epididymal epithelium of common vampire bat. These cells showed a goblet-shaped body, with nuclei in the apical region, low frequency in the cauda region, and expressed H + V-ATPase. Ultrastructurally, the cell types showed the same cellular characteristics along the epididymis. In the common vampire bat, we observed expression of tight junction proteins, claudins and zonula occludens 1, at the apical portion of lateral membranes of the adjacent epididymis epithelial cells. However, only zonula occludens 1 was observed in the tight junction, while the claudins were observed in the tight junction and in the basolateral membrane of adjacent epithelial cells, including basal cell. There was difference in the claudins distribution when compared the epithelium of the proximal with the distal regions, and between rainy and dry seasons. In conclusion, the knowledge of the epididymal epithelium of the common vampire bat increases the information about the male reproductive system in neotropical bat species, since the epididymis of this specie shows peculiarities, as the shape of clear cells in all regions and low frequency in the cauda, and absence of the luminal-reaching body into the lumen in basal cells. Moreover, more studies are necessary to understand the process of sperm maturation in this species, and if hormonal and seasonality variations could interfere in this organ.

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-09-12Bitstream added on 2015-05-14T16:59:09Z : No. of bitstreams: 1 000829527.pdf: 1234844 bytes, checksum: fdf8d9c9df35ace5d3b743bfdda86df3 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As dioxinas são subprodutos orgânicos policlorados provenientes de vários processos industriais e têm como forma mais tóxica o 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina (TCDD). O homem está propenso à exposição ao TCDD, principalmente, devido à ingestão de alimentos contaminados e em períodos críticos de desenvolvimento, sobretudo, durante a vida intrauterina e pós-natal. A exposição ao TCDD promove disfunções no sistema genital masculino, como redução dos pesos dos órgãos reprodutores, atraso no início da maturação sexual, diminuição do número de espermátides no testículo, queda nos níveis séricos de testosterona, estresse oxidativo no epidídimo, queda na concentração espermática, alterações da motilidade e no tempo de trânsito dos espermatozoides. Considerando-se que na literatura os trabalhos acerca dos efeitos do TCDD na saúde reprodutiva da descendência masculina são escassos e precisam ser confirmados e elucidados, tanto em animais de experimentação como em humanos, principalmente, sua ação sobre as funções reprodutivas e na qualidade espermática. Deste modo, avaliou-se os efeitos transgeracionais da exposição in utero ao TCDD no sistema genital masculino da prole quando adulta, com ênfase nas funções epididimárias e na qualidade espermática. Para isso, ratas prenhes foram expostas a baixas doses de TCDD (0,1; 0,5 e 1,0μg), no dia gestacional 15, sendo feitas, na prole masculina adulta, análises espermáticas e investigação da fertilidade após inseminação artificial in utero (IA). Além disso, foram realizadas dosagens dos hormônios testosterona, folículo estimulante (FSH) e luteinizante (LH). A exposição intrauterina ao TCDD ocasionou, na prole masculina adulta, alterações nos níveis séricos hormonais de testosterona, morfologia espermática e diminuição no tempo de trânsito espermático na cauda do epidídimo. Além disso, houve redução da proporção de ... / Dioxins are organic polychlorinated byproducts derived from several industrial processes whose most toxic form is 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD), which persists in the environment due to its cumulative character. Humans are prone to TCDD exposure, principally by ingesting contaminated foods and during critical periods of development, especially during intrauterine and postnatal life. It is known that exposure to TCDD promotes dysfunctions of the male genital system such as reduced weights of reproductive organs, delayed initiation of sexual maturation, diminished number of testicular spermatids, diminished serum testosterone levels, oxidative stress in the epididymis, decreased sperm concentration, alterations in motility and in sperm transit time. Considering the scarcity in the literature of works on the effects of TCDD on the reproductive health of male offspring, its action on reproductive functions and sperm quality should be confirmed and elucidated in both humans and experimental animals. Thus, we evaluated the effect transgenerational of in utero exposure to TCDD about genital system of adult male offspring, with emphasizing the epididymal functions and sperm quality. For this, pregnant rats were exposed to low doses of TCDD (0.1; 0.5 and 1.0μg), on gestational day 15 and subsequently their adult male offspring were investigated for fertility after artificial insemination in utero (AI). The hormones testosterone, follicle stimulating (FSH) and luteinizing (LH) were also measured. Intrauterine exposure to TCDD provoked, in adult male offspring, alterations in serum testosterone levels and sperm morphology, and diminution in sperm transit time in the cauda epididymis. Furthermore, there was reduction in the proportion of implants per corpus luteum after in utero artificial insemination, such that these alterations occurred under at least one of the doses tested in the three generations. Nevertheless, there was no ... / FAPESP: 2012/00365-6

Orientador: Wilma de Grava kempinas / Banca: João Lauro Viana de Carmargo / Banca: Janete Aparecida Anselmo Franci / Banca: Flávia Karina Delella / Banca: Andrei Moroz / Resumo: As dioxinas são subprodutos orgânicos policlorados provenientes de vários processos industriais e têm como forma mais tóxica o 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina (TCDD). O homem está propenso à exposição ao TCDD, principalmente, devido à ingestão de alimentos contaminados e em períodos críticos de desenvolvimento, sobretudo, durante a vida intrauterina e pós-natal. A exposição ao TCDD promove disfunções no sistema genital masculino, como redução dos pesos dos órgãos reprodutores, atraso no início da maturação sexual, diminuição do número de espermátides no testículo, queda nos níveis séricos de testosterona, estresse oxidativo no epidídimo, queda na concentração espermática, alterações da motilidade e no tempo de trânsito dos espermatozoides. Considerando-se que na literatura os trabalhos acerca dos efeitos do TCDD na saúde reprodutiva da descendência masculina são escassos e precisam ser confirmados e elucidados, tanto em animais de experimentação como em humanos, principalmente, sua ação sobre as funções reprodutivas e na qualidade espermática. Deste modo, avaliou-se os efeitos transgeracionais da exposição in utero ao TCDD no sistema genital masculino da prole quando adulta, com ênfase nas funções epididimárias e na qualidade espermática. Para isso, ratas prenhes foram expostas a baixas doses de TCDD (0,1; 0,5 e 1,0μg), no dia gestacional 15, sendo feitas, na prole masculina adulta, análises espermáticas e investigação da fertilidade após inseminação artificial in utero (IA). Além disso, foram realizadas dosagens dos hormônios testosterona, folículo estimulante (FSH) e luteinizante (LH). A exposição intrauterina ao TCDD ocasionou, na prole masculina adulta, alterações nos níveis séricos hormonais de testosterona, morfologia espermática e diminuição no tempo de trânsito espermático na cauda do epidídimo. Além disso, houve redução da proporção de ... / Abstract: Dioxins are organic polychlorinated byproducts derived from several industrial processes whose most toxic form is 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD), which persists in the environment due to its cumulative character. Humans are prone to TCDD exposure, principally by ingesting contaminated foods and during critical periods of development, especially during intrauterine and postnatal life. It is known that exposure to TCDD promotes dysfunctions of the male genital system such as reduced weights of reproductive organs, delayed initiation of sexual maturation, diminished number of testicular spermatids, diminished serum testosterone levels, oxidative stress in the epididymis, decreased sperm concentration, alterations in motility and in sperm transit time. Considering the scarcity in the literature of works on the effects of TCDD on the reproductive health of male offspring, its action on reproductive functions and sperm quality should be confirmed and elucidated in both humans and experimental animals. Thus, we evaluated the effect transgenerational of in utero exposure to TCDD about genital system of adult male offspring, with emphasizing the epididymal functions and sperm quality. For this, pregnant rats were exposed to low doses of TCDD (0.1; 0.5 and 1.0μg), on gestational day 15 and subsequently their adult male offspring were investigated for fertility after artificial insemination in utero (AI). The hormones testosterone, follicle stimulating (FSH) and luteinizing (LH) were also measured. Intrauterine exposure to TCDD provoked, in adult male offspring, alterations in serum testosterone levels and sperm morphology, and diminution in sperm transit time in the cauda epididymis. Furthermore, there was reduction in the proportion of implants per corpus luteum after in utero artificial insemination, such that these alterations occurred under at least one of the doses tested in the three generations. Nevertheless, there was no ... / Doutor

Foram utilizados dez jacarés - do - Pantanal (Caiman crocodylus yacare), machos de faixa etária juvenil; sete espécimes foram destinados ao estudo macroscópico e os outros três foram utilizados para o estudo microscópico de luz. Após a abertura da cavidade pleuroperitoneal foi observado e identificado que os testículos são em pares e apresentam-se aderidos a parede dorsal da cavidade pleuroperitoneal. O epidídimo é alongado e muito enovelado, encontra-se na extremidade cranial do testículo, seguindo medialmente até sua extremidade caudal, onde inicia-se com o ducto deferente e posterior abertura na cloaca. O falo tem um formato tubular de aspecto cônico, mostrando ser um órgão com breve resistência, porém é flexível e possuem características de tecido cartilaginoso. Na microscopia de luz foi observada que, o testículo é limitado pela túnica albugínea. Os túbulos seminíferos são extremamente contorcidos e em seus espaços estão preenchidos por tecido intersticial e células de Leydig. Encontram-se na rede testicular túbulos revestidos por epitélio cubóide. Os ductos do epidídimo são revestidos pelo epitélio pseudo-estratificado não ciliado que variam entre células cúbicas e prismáticas. Os ductos deferentes caracterizam-se por apresentar uma luz estreita revestida pelo epitélio pseudo-estratificado prismático não ciliado. O falo é revestido pelo epitélio estratificado escamoso não queratinizado e envolto por tecido conjuntivo. / Ten Young-aged male Pantanal alligators (Caiman crocodylus yacare) were used; seven specimes were destinated to macroscopic study and the other three were used in the study of light microscopy. After the opening of the pleuroperitoneal cavity, we observed and identified that testes are in pairs and adhered to the dorsal wall of the pleuroperitoneal cavity. The epididymis is long and very convoluted. It is found in the cranial extremity of the testis, following medially until its caudal extremity, where it is initiated with ductus deferens and posterior opening in the phallus. Phallus has a tubular shape in conic aspect showing to be an organ with little resistence, but it is flexible and has features of cartilaginous tissue. In the light microscopy we observed that the testis is limited by the tunica albuginea. The seminiferous tubules are extremely convoluted and its spaces are filled with intersticial tissue and Leydig cells. Tubule lined with cuboidal epithelium are found in the rete testis. The ductus epididymus are lined with by non-ciliated pseudostratified epithelium to columnar cells. Ductus deferens show a very narrow light lined by the non-ciliated columnar pseudostratified epithelium. Phallus is lined by the non-keratinized stratified squamous epithelium and connective tissue.

Orientador: Mary Anne Heidi Dolder, Mary Ann Foglio / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T05:43:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Predes_FabriciadeSouza_D.pdf: 13931501 bytes, checksum: 9f0c73633072b7d78c9288cbb9e889be (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Cádmio (Cd) é um metal pesado associado a graves danos em vários órgãos, incluindo órgãos reprodutivos e fígado. Estudos farmacológicos indicam que Arctium lappa possue atividade hepatoprotetora, sequestradora de radicais livres e antiproliferativa. O objetivo deste trabalho foi avaliar: (1) as modificações nos túbulos seminíferos causadas por pequenas doses de Cd, (2) as propriedades antioxidantes de diferentes extratos de A. lappa, (3) a capacidade de A. lappa em atenuar os danos induzidos por cádmio no testículo, epidídimo e fígado. A capacidade sequestradora de radicais livres e quantidade de compostos fenólicos totais foram analisados nos extratos da raiz de A. lappa para determinação da capacidade antioxidante. A propriedade antiproliferativa in vitro de cada extrato foi avaliada em células tumorais. O extrato hidroetanólico apresentou alto rendimento e capacidade sequestradora de radicais livres, e juntamente com os diclorometânicos, maior teor de compostos fenólicos. Somente os extratos diclorometânicos apresentaram atividade antiproliferativa contra células tumorais. espectroscopia de massa revelou a presença dos compostos arctigenina, quercetina, ácido clorogênico e ácido caféico no extrato hidroetanólico. O extrato hidroetanólico liofilizado foi escolhido para os estudos in vivo. Para estudar os efeitos de Cd e A. lappa, ratos Wistar adultos foram distribuídos em quatro grupos: controle (C), extrato de A. lappa (Al), cádmio (Cd) e cádmio e extrato de Al (CdAl). Os animais receberam água ou extrato de Al (300 mg/Kg BW) por gavagem e dose única i.p. de salina ou 1,2 mg/kg de cloreto de cádmio. Os animais foram sacrificados após 7 e 56 dias. O Cd causou redução do peso do testículo, epidídimo e vesícula seminal, na proporção dos túbulos seminíferos (TS), no comprimento total dos TS e no diâmetro dos TS. Células germinativas degeneradas e células gigantes multinucleadas foram observadas nos TS e os danos progressivos resultaram em túbulos preenchidos apenas com células de Sertoli. Nos grupos Cd e CdAl, houve diminuição da proporção tubular e aumento da altura do epitélio no epidídimo após 56 dias. Cd causou aumento no nível plasmático de TGO e TGP após 56 dias, mas o extrato de A. lappa amenizou estes efeitos. Nenhuma alteração relevante foi observada para as transaminases hepáticas. No grupo Cd 7 dias, a proporção de hepatócitos diminuiu, a de sinusóides aumentou e o número de núcleo de hepatócito reduziu, entretanto após 56 apenas o número de núcleos de hepatócitos diminuíram. Após 7 dias, nos grupos Al e CdAl, a proporção nuclear aumentou e a citoplasmática diminuiu, sem alteração dos capilares sinusóides. Após 56 dias, nos grupos Al e CdAl, a proporção nuclear aumentou e a proporção dos capilares sinusóides reduziu. Houve aumento na densidade de núcleos nos grupos Al e CdAl. Conclui-se que doses baixas de Cd causam alterações morfológicas e morfométricas no testículo e que o Cd tem sutil limiar tóxico. Os extratos diclorometânicos apresentaram atividade antiproliferativa contra as linhagens tumorais K562, MCF-7 e 786-0. O extrato hidroetanólico apresentou alto conteúdo fenólico e atividade antioxidante, portanto foi escolhido para os estudos in vivo. O extrato de A. lappa foi ineficaz na proteção do testículo e epidídimo contra danos induzidos pelo Cd, porém protegeu o tecido hepático. / Abstract: Cadmium (Cd) is a heavy metal associated with severe damage in various organs, including male reproductive organs and liver. Arctium lappa is widely used in popular medicine for treating hypertension, gout, hepatitis and other inflammatory disorders. Pharmacological studies indicated that A. lappa roots have hepatoprotective, free radical scavenging and antiproliferative activities. The objectives of this work were evaluate: (1) histomorphometrically the threshold modifications of seminiferous tubules caused by single acute low doses of Cd, (2) antioxidant properties of different A. lappa extracts to choose the best one for "in vivo" study, (3) the ability of A. lappa to attenuate cadmium-induced damage to the testis, epididymis and liver of male rats. Dichloromethanic, ethanolic, aqueous extracts, hydroethanolic and total aqueous extract of A. lappa roots were investigated regarding radical scavenging activity and the total phenolic content. The extracts were tested for their antiproliferative activity in vitro using human cancer cell lines. The higher radical scavenging activity and yield were found in the hydroethanolic extract. Higher phenolic contents were found in the dichloromethanic and hydroethanolic extracts. Only the dichloromethanic extracts exhibited activity against cancer cell lines. Highresolution electrospray ionization mass spectroscopy for the hydroethanolic extract demonstrated the presence of: arctigenin, quercetin, chlorogenic acid and caffeic acid. The hydroalcoholic lyophilized extract was chosen for the experiments in vivo. To study the association of Cd and A. lappa, adult Wistar rats were assigned to four groups: control (C), A.lappa extract (Al), cadmium (Cd) and cadmium plus A. lappa (CdAl). The animals received water or A. lappa hydroethanolic extract (300 mg/Kg BW) by gavage and i.p. injections of saline or 1.2 mg/Kg BW of cadmium chloride. The animals were sacrificed after 7 and 56 days of treatment. The Cd caused reduction in testis, epididymis and seminal vesicle weights, seminiferous tubule (ST) proportion, total length of ST and ST diameter. Degenerated germ cells and multinucleated aggregates were observed in ST and progressive damage resulted in tubules lined only with Sertoli cells. There was a decreased in tubular proportion and increased epithelial height in epididymis after 56 days. Cd caused an increase in plasma GOT and GPT levels after 56 days, but A. lappa extract improved these levels. No relevant alteration was observed in liver transaminase levels. After 7 days, the Cd group showed decrease in hepatocyte proportion and increase sinusoid capillary proportion, also the nuclear density decrease. However, after 56 days, only the hepatocyte nuclear density decreased. In Al and CdAl groups, after 7 days, the hepatocyte nuclear proportion increased and the cytoplasmic decreased, with no alteration in capillary sinusoid proportion. In Al and CdAl groups, after 56 days, hepatocyte nuclear proportion increased and the sinusoid capillary proportion decreased. Also, an increase of hepatocyte nuclear density was observed in Al and CdAl groups. This study revealed that low doses of Cd cause progressive morphological and morphometrical alterations on rat testis and that Cd has a subtle toxic threshold. The dichloromethanic extracts showed antiproliferative activity against K562, MCF-7 and 786-0 human cancer cell lines. The hydroethanolic extract showed higher free radical scavenger activity and higher phenolic content, and was chosen as the best extract for the "in vivo" studies. A. lappa hydroethanolic extract was ineffective in protecting the testis and epididymis against Cd-induced damage, however effectively protected liver tissue. / Doutorado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Luis Antonio Violin Pereira, Suzana de Fatima Paccola Mesquita / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T21:14:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Garcia_PatrickVianna_M.pdf: 2397318 bytes, checksum: 8b518ea012a3a11e92ce5775536bee0f (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O epidídimo de mamíferos, através da secreção de proteínas andrógeno-dependentes, é responsável pela maturação dos espermatozóides visando o processo de fecundação, alterando-os em características morfológicas e bioquímicas. O criptorquidismo é uma condição patológica congênita na qual os testículos e epidídimos permanecem alojados na cavidade abdominal do organismo, causando a interrupção da espermatogênese e a ausência de espermatozóides no epidídimo, bem como atrofia e alterações histológicas que comprometem a função do epitélio germinativo do testículo e do epitélio secretor do epidídimo. A orquidopexia consiste no posicionamento dos testículos e epidídimos à topologia normal, contudo há ainda relatos de casos de infertilidade pós-orquidopexia. Alterações no epidídimo não revertidas pela orquidopexia poderiam ser co-responsabilizadas pelo baixo índice de fertilidade em indivíduos pós-orquidopexia. O objetivo deste estudo foi descrever em camundongos C57BL/6 as alterações histológicas e estereológicas causadas pelo criptorquidismo experimental e a possível reversibilidade destas alterações pela orquidopexia. Adicionalmente, foram determinadas e comparadas as concentrações séricas de testosterona e o número e o volume do núcleo das células de Leydig em camundongos controles, submetidos à condição de criptorquidismo experimental e à orquidopexia. A condição criptorquídica causou reduções significativas nos parâmetros estereológicos avaliados, contudo as alterações epididimárias foram menos acentuadas do que as verificadas para testículos. Após a orquidopexia, os valores de todos os parâmetros no epidídimo atingiram valores significativamente semelhantes aos controles. A dosagem sérica de testosterona não foi significativamente diferente em nenhum grupo analisado. A persistência da redução no número de células de Leydig na condição criptorquídica associada à não variação dos níveis de testosterona sugerem um mecanismo compensatório da atividade das células de Leydig. Os resultados demonstram que as alterações epididimárias causadas pelo criptorquidismo podem ser revertidas pela orquidopexia. Assim, a orquidopexia pode ser considerada um método eficaz para restauração da espermatogênese e alterações histológicas da cabeça do epidídimo causadas pelo criptorquidismo e, desta forma, sugere-se que a infertilidade, pós-orquidopexia, não deve ser correlacionada às alterações sofridas pela cabeça do epidídimo / Abstract: The mammalian epididymis, through secretion of androgen-dependents proteins, is responsible for maturation of the sperm aiming fecundation process, modifying the sperm in theirs morphological and biochemical features. Cryptorchidism is a pathological condition in which testis and epididymis are retained in the abdominal cavity, resulting in interruption of the spermatogenesis and absence of sperm in the epididymis as well as atrophy and histological alterations that compromise the function of germinative epithelium of the testicle and secretor epithelium of epididymis. Orquidopexy restored the normal topology of testis and epididymis, however there are relates of cases of infertility pos-orchidopexy. Epididymis alterations not reverted by orchidopexy could be coresponsable for decrease fertility potential pos-orchidopexy. The aim of this study was to describe in mice (C57BL/6) by histology and stereological parameters the alterations induced by experimental cryptorchidism in epididymis and testis and the possible reversibility of these alterations by orchidopexy. Additionally were determined and compared serum levels of testosterone, number and nuclear volume of Leydig cells in mice controls and mice submitted to experimental cryptorchidism and orchidopexy. The cryptorchidic conditions caused significantly reduction of stereological parameters that were analyzed, however the epididymal alterations were less decreased than testicular alterations. After orchidopexy, the values of all parameters in the epididymis were significantly similar to controls. The serum testosterone levels were not significantly different among the groups analyzed. The decreased number and nuclear volume of Leydig cells in cryptorquidic conditions not associated with variations of the serum testosterone levels suggest a compensatory mechanism of the Leydig cells activity. The results showed that alterations in caput of epididymis and interruption of spermatogenesis caused by cryptorchidism can be reverted by orchidopexy, suggesting that the infertility, pos-orchidopexy, does not have to be correlated to the alterations suffered by the caput of the epididymis / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Antonio Marcos Orsi, Sergio Luis Felisbino / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T10:45:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Domeniconi_RaquelFantin_D.pdf: 10868266 bytes, checksum: 8bdfe8a912508f6afd1b6131f9f8934e (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Estudos recentes têm identificado família de proteínas denominadas aquaporinas (AQP), relacionadas à alta permeabilidade de água em várias membranas biológicas. As AQP1, AQP2, AQP7, AQP8 e AQP9 são as principais AQPs identificadas no sistema genital masculino, sendo a sua localização espécie-específica e região-específica. Em vista da importância do fluido luminal na via espermática para a integridade morfofuncional dos espermatozóides, bem como dos componentes que os constituem, tais como a água e proteínas, é importante estudar a distribuição das AQPs ao longo da via espermática. Assim, este trabalho teve como objetivos principais estudar no cão as AQP1, AQP2, AQP7, AQP8 e AQP9, visando identificá-las e localizá-las, através de imuno-histoquímica e ¿Western blotting¿ na via espermática. No cão, a AQP1 foi notada na rede testicular, ductos eferentes e em vasos, sugerindo sua importância na rápida absorção de fluido testicular. Pela primeira vez a AQP2 foi detectada na rede testicular, ductos eferentes e epidídimo, e a AQP7 no epitélio epididimário e ducto deferente em mamíferos. Porém, o papel funcional dessas AQPs no sistema genital masculino do cão permanece desconhecido. A AQP8 não foi detectada ao longo dos ductos extratesticulares do cão. A AQP9 foi abundantemente expressada ao longo da via espermática do cão, que representa um importante caminho apical para o fluxo transmembrana de água e solutos. Portanto, os resultados confirmam o padrão de expressão espécie-específica e região-específica das AQPs, sugerindo variações de atividades de absorção de fluidos e solutos ao longo da via espermática. O conhecimento destas variações torna-se relevante para estudos clínicos de infertilidade, bem como para tecnologias de reprodução assistida / Abstract: Recent studies have identified proteins called aquaporins (AQP) related to the fast water permeability in some biological membranes. AQPs are small, intrinsic membrane proteins that are present in many cell types involved in fluid transport. AQP1, AQP2, AQP7, AQP8 and AQP9 had been the main AQPs identified in the male reproductive tract, being their localization species-specific and region-specific. In view of the importance of the luminal fluid to sperm maturation and integrity of the spermatozoa, it is important to study the distribution of the AQPs throughout the spermatic way. Thus, the aim of this study was to examine the expression of AQP1, AQP2, AQP7, AQP8 e AQP9 in epithelial cells in the adult dog efferent ducts, epididymis and vas deferens, using immunohistochemistry and estern blotting methods to characterize the aquaporins in male reproductive tract. In dog, AQP1 was noted in rete testis, efferent ducts and in vessels in intertubular space, suggesting that AQP1 is important for rapid absorption of testicular fluid. For the first time the AQP2 was detected in rete testis, efferent ducts and epididymis and the AQP7 was expressed in the epithelium epididymidis and in vas deferens in mammals. But its functional role in the male dog reproductive tract, remain unknown. No specific staining for AQP8 was detected in epithelial cells of excurrent ducts in dog testis. AQP9 was abundantly expressed in dog male reproductive tract, in which it is an important apical pathway for transmembrane flow of water and neutral solutes. Thus the results confirm that the AQPs are species-specific and region-specific, suggesting activity variations related with the fluid and solute absorption throughout male excurrent ducts. Investigations of AQP biology could be relevant to clinical studies of the male reproductive tract, as well as to technologies for assisted procreation / Doutorado / Anatomia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural