CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Dentre as espÃcies do gÃnero Erythrina (Fabaceae), duas conhecidas popularmente como mulungu, E. velutina e E. mulungu, tem comprovado interesse social e econÃmico para o Brasil. E. mulungu ocorre no Sudeste, pertence à RelaÃÃo Nacional de Plantas de Interesse para o SUS (RENISUS). Jà E. velutina à uma Ãrvore amplamente utilizada no Nordeste, cuja casca do caule à utilizada tradicionalmente no tratamento da ansiedade, agitaÃÃo e insÃnia. Contudo, nÃo existe um produto farmacÃutico com qualidade agregada e estudos farmacolÃgicos dessa espÃcie para justificar seu uso medicinal. Diante do exposto, o objetivo do presente trabalho foi realizar o desenvolvimento e o controle de qualidade do extrato de Erytrhina velutina e investigar as atividades antioxidante e neuroprotetora, visando seu emprego no tratamento de doenÃa neurodegenerativa, como a DoenÃa de Parkinson (DP). Inicialmente, foi validado mÃtodo espectrofotomÃtrico para dosagem de fenÃis totais (FT) em produtos derivados de E. velutina, sendo este especÃfico, linear, preciso, exato e robusto. Foi estabelecido o mÃtodo de preparaÃÃo (estufa com circulaÃÃo e renovaÃÃo de ar â 80ÂC; 24h) e especificaÃÃes para o controle da droga vegetal. O extrato etanÃlico de E. velutina (EEEV) produzido por percolaÃÃo foi caracterizado quando ao teor de FT (155,14  3,31  EAG/mg de extrato) e perfil cromatogrÃfico por CLAE-DAD (FenÃis: hesperidina - Tr: 18,8 min; abssinina - Tr: 22,9 min; homoesperidina Tr: 31,2 min; Ãcido rizÃnico (AR) - Tr: 32,1 min e sigmoidina C - Tr: 38,6 min). O EEEV nÃo mostrou citotoxicidade no teste do MTT, mas aumentou (EEEV: 100 e 200 Âg/mL) a atividade da LDH em neutrÃfilo humano. Em cÃlulas 9L/lacZ, o EEEV (100, 400, 1000 mg/mL) reduziu significativamente a viabilidade celular, teste MTT. EEEV (0,0025 â 1 Âg/mL) e AR (0,0025 â 1 Âg/mL) nÃo foram citotÃxicos e inibiram parcialmente a neurotoxicidade induzida por 6-OHDA em cÃlulas SH-SY5Y, modelo experimental de DP, observada pela reduÃÃo significativa dos nÃveis de nitrito/nitrato. Na avaliaÃÃo do potencial antioxidante, testes DPPH e NBT, o EEEV (10 â 200 Âg/mL) apresentou atividade sequestradora de radicais livres no teste DPPH. Os resultados obtidos no presente estudo permitiram definir as condiÃÃes ideais de preparaÃÃo da droga vegetal e do extrato, os quais foram caracterizados, incluindo validaÃÃo de mÃtodo analÃtico e avaliaÃÃo farmacolÃgica, comprovando o potencial antioxidante e neuroprotetor do EEEV e AR.

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3920642 bytes, checksum: 700cc99c707640a6e78c710c821073b2 (MD5) Previous issue date: 2009-03-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The family Combretaceae comprises of genera with over 600 species, in which Combretum and Terminalia are the two largest genera, with about 250 species each. Aiming to contribute to the chemotaxonomic study of the family Combretaceae and the genus Combretum, the leaves of Combretum duarteanum were subjected to phytochemical and pharmacological study. The essential oil (2.0 mL) was obtained from fresh leaves by steam distillation of the species, and subsequently analyzed by Gas Chromatography coupled to Massass Spectrometry. The extracts and phases obtained were subjected to usual chromatographic methods for the isolation and purification of the chemical constituents. For the identification of the isolated substances, spectroscopic methods such as infrared, uni-dimensional and bidimensional spectroscopic 1H NMR and 13C NMR for mass spectrometry were used in addition to the comparison with published data. Chemical studies of the C. duarteanum leaves resulted in the identification of twelve substances: cycloartane- 24-ene-1α, 3β-diol (Cd-1), isolated for the first time in the investigated family; 2α, 3β- urs-12-en-28-oic acid (Cd-2); 4α-carboxy-3β-hydroxy-24-cycloartenol (Cd-3), isolated for the first time in the genus Combretum; 2α, 3β, 28-trihidroxiurs-12-ene (Cd-4); 2α, 3β acid, 23α-trihidroxiurs-12-ene-28-oic acid and 2α, 3β, 23α-trihydroxyolean-12-ene- 28-oic acid (Cd-5); stigmasterol (Cd-6); stigmasterol and spinasterol (Cd-7); methyl gallate (Cd-8); 3',5,7-trihydroxy-3, 4'- dimethoxyflavone (Cd-9); 5,7,3',4'- tetrahydroxyflavone-3-O-galactopyranoside (Cd-10), catechin (Cd-11) and kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside (Cd-12). The chemical composition of the essential oil showed twenty-eight components, among which spathulenol (15.1%) and β-caryophyllene (14.1%) were the major compounds. Hexane, chloroform, ethyl acetate, methanol extract phases, as well as the Cd-2, Cd-5, and CD-10 substances were tested against bacterial strains of Gram positive and Gram negative, strains of the Candida genera. All phases, extracts and substances tested did not show any significant antibacterial and antifungal activity. Substances Cd-2, Cd-5, Cd-9 and Cd- 10 were tested in vitro during the cytotoxicity assay on Ehrlich ascites carcinoma cells, in order to evaluate antitumor activity. The substances Cd-2 (IC50 = 17.82 μg/mL) and Cd-5 Cd-2 (IC50 = 31.23 μg/mL) showed potent cytotoxic activity. / A família Fabaceae (Leguminosae) possui distribuição cosmopolita, incluindo cerca de 650 gêneros e aproximadamente 18000 espécies. O gênero Erythrina possui cerca de 110 espécies, das quais 70 são nativas das Américas. Erythrina velutina Willd. é uma árvore de porte médio, ornamental e com elevada ocorrência na vegetação da caatinga nordestina. Esta espécie é conhecida popularmente como "mulungu", "suínã" e "bico de papagaio", sendo etnofarmacologicamente reputada como sedativa, calmante e sudorípara. O presente trabalho descreve o isolamento e a identificação estrutural de alguns constituintes químicos das cascas do caule de Erythrina velutina Willd., com o objetivo de ampliar o conhecimento químico sobre o gênero Erythrina, bem como da família Fabaceae. Os constituintes químicos foram identificados através da análise de dados obtidos por métodos espectroscópicos como IV e RMN de 1H e 13C uni e bidimensionais, além de comparação com dados da literatura. O estudo fitoquímico da fase clorofórmica de E. velutina resultou no isolamento de um triterpeno, o 3β-olean-12-ene-3,28-diol, relatado pela primeira vez na espécie; um alcalóide, 3β-1,2,6,7-tetradehidro-3,16-dimetoxi-eritrinan-15-ol, descrito pela primeira vez nas cascas do caule de E. velutina; e os flavonóides, 3,9-dihidroxi-10-prenilpterocarpano e 5,7,3 - trihidroxi-4 -O-metil-5 -prenilflavanona, compostos já descritos anteriormente para esta espécie. O estudo fitoquímico da fase n-butanólica levou ao isolamento do flavonóide glicosilado, 5,7,4 -trihidroxiisoflavona-7-O-[α-ramnopiranosil-β-glicopiranosídeo], sendo este composto inédito no gênero Erythrina. O isolamento de diversas classes de metabólitos na espécie Erythrina velutina evidencia o potencial deste gênero. Portanto, este trabalho é de grande importância por contribuir com uma espécie etnofarmacologicamente bastante utilizada. Palavras-chave: Fabaceae, Erythrina velutina Willd, constituintes químicos.

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1723617 bytes, checksum: 1b2863e0e3517940e6fde2af16d18f12 (MD5) Previous issue date: 2011-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Erythrina velutina Willd., is a plant species native to the caatinga of northeastern Brazil, known popularly as ―mulungu‖. Its leaves are used as a decoction in folk medicine as a remedy for anxiety and as a sedative. The aim of this work was to perform an interdisciplinary study of the species, combining a pharmacobotanical, chemical and pharmacological approach to investigate the basis of its popular use in folk medicine. Morphological and morphodiagnosis studies were performed to estabilish the identity of the species. For anatomical characterization cross section preparations of the blade, petiole and petiolule were performed as well as paradermic preparations on both sides of the blade leaflets. The sections were cleared, stained with safranin and/or safrablue, observed and photographed under an optical microscope. The pharmacological study involved the selection of extracts from the bark and leaves with CNS depressant pharmacological profile using a behavioural screening and further pharmacological tests with emphasis on evaluation of the anxiolytic/sedative activity. To chemically characterize the active methanolic fraction (Fr.MeOH) obtained from the aqueous extract of the leaves, theusing Amberlite XAD-2® further fractionation and preparative purification was done using HPLC and spectroscopicl analysis by 1H and 13C NMR. The pharmacobotanical study showed the presence of distinctive parameters for Erythrina velutina, easily identifiable, and of great importance to its quality control. The pharmacological profile of Fr.MeOH is characteristic of drugs sedative and its chemical characterization revealed the presence of alkaloids that are probably responsible for the sedative effects observed in pharmacological tests of this study. / Erythrina velutina Willd., é uma planta nativa da caatinga do nordeste brasileiro, conhecida pela sinonímia popular de ―mulungu‖. Destaca-se por uso das folhas, cascas e frutos na medicina popular, na qual é indicada como ansiolítica e sedativa. Este trabalho teve como objetivo realizar um estudo interdisciplinar farmacobotânico, químico e farmacológico, como uma contribuição ao maior conhecimento desta espécie de importância etnomedicinal. Estudos morfológicos foram realizados para sua identificação e morfodiagnoses. Para a caracterização anatômica realizou-se secções transversais (lâmina, pecíolo e peciólulo) e paradérmicas em ambas as faces das lâminas folíolares. As secções foram clarificadas, coradas com safranina e/ou safrablue, observadas e fotografadas ao microscópio óptico. O estudo farmacológico compreendeu a seleção dos extratos das cascas e folhas com melhor perfil farmacológico, a partir de uma triagem comportamental e em seguida, a realização de testes específicos com ênfase na avaliação da atividade ansiolítica/sedativa. Para caracterizar quimicamente a Fração Metanólica (FR. MeOH) obtida do extrato aquoso das folhas utilizando Amberlite XAD-2®, realizou-se o isolamento dos constituintes por CLAE e análises espectroscópicas de RMN de 1H e 13C. O estudo farmacobotânico evidenciou a presença de parâmetros distintivos para Erythrina velutina, facilmente identificáveis, e de grande importância ao seu controle de qualidade. A Fração Metanólica apresentou características de droga sedativa e o seu estudo químico, apontou a presença de alcalóides que provavelmente são os responsáveis pelo efeito sedativo observado nos testes farmacológicos do presente estudo.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Florestal, Programa de Pós-Graduação em Ciências Florestais, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-08-18T13:34:19Z No. of bitstreams: 1 2016_DaniloDiasdeAraujo.pdf: 1971079 bytes, checksum: f7ea0a1b55f7b8e954bbf6b8483eef61 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-09-09T11:34:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_DaniloDiasdeAraujo.pdf: 1971079 bytes, checksum: f7ea0a1b55f7b8e954bbf6b8483eef61 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-09T11:34:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_DaniloDiasdeAraujo.pdf: 1971079 bytes, checksum: f7ea0a1b55f7b8e954bbf6b8483eef61 (MD5) / A produção de mudas de qualidade depende de vários fatores, dentre eles o substrato se destaca, por ter um papel de fornecer às mudas as condições químicas, físicas e biológicas, adequadas para um crescimento saudável, oferecendo as condições de transformar seu potencial genético em produtividade. A cadeia de produção de mudas florestais nativas, na tentativa de reduzir o custo final na produção de mudas, tem procurado através da utilização de diferentes resíduos no substrato, buscar por composições que permitam manter a qualidade das mudas. Assim, o presente estudo objetivou avaliar a influência do lodo de esgoto e do biochar de lodo de esgoto no desenvolvimento inicial de mudas de Erythrina velutina Willd. A pesquisa foi conduzida no viveiro florestal da Fazenda Água Limpa (FAL) da Universidade de Brasília - UnB, no período de janeiro a maio de 2015. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado no esquema fatorial diferenciado com três resíduos (lodo de esgoto e biochar de lodo de esgoto produzidos na temperatura de 300ºC e biochar de lodo de esgoto produzidos na temperatura de 500ºC) e cinco incorporações (doses de 10%, 20%, 30% 40% a 50% de cada resíduo) com adicional de um tratamento testemunha (100% de subsolo), com 10 repetições, sendo cada repetição constituída de três plantas, totalizando 480 mudas. Foram avaliadas as propriedades químicas do substratos e das folhas das mudas de E. velutina coletados 100 dias após o a semeadura. Foi avaliado o desenvolvimento inicial das mudas por meio das variáveis morfológicas, de índices de qualidades, da taxa de micorrização e da fixação biológica de nitrogênio. Os teores de nutrientes presentes nos substratos foram crescentes com o aumento das proporções dos resíduos incorporados, com apenas algumas exceções. Quanto à concentração dos nutrientes das folhas, as diferentes proporções dos resíduos não provocaram diferenças significativas nestes teores. Já quando se trata do desenvolvimento inicial das mudas, no geral os melhores resultados para as características morfológicas e para os índices de qualidade de mudas estudados foram obtidos com incorporação de biochar aos substratos, se destacando o biochar 300ºC na dose de 40%. De acordo com os resultados obtidos, o biochar de lodo de esgoto produzido a 300ºC de pirólise pode ser considerado promissor para o uso como substrato de produção de mudas. _________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The production of quality seedlings depends on several factors, among them, the subtract is highlighted due its role as provider of chemical, physical and biological conditions adequate for a healthy growth, being able to transform its genetic potential into productivity. The production chain of forestry seedlings, in order to reduce the final cost of production by using different residues from subtract, has been looking for compositions that allow to keep the seedlings quality. Therefore, this study aimed to evaluate the influence of the sewage sludge and sewage sludge biochar on the initial growth of ErythrinavelutinaWilldseedlings. The research was conducted in a forestry hatchery in the Agua Limpa Farm of the University of Brasilia, from January to May of 2015. The experimental design was completely randomized, under a factorial scheme differenced by three residues (sewage sludge and sewage sludge biochar produced at 300ºC and sewage sludge biochar produced at 500ºC) and five incorporations (doses of 10%, 20%, 30%, 40% and 50% of each residue). A testimony treatment was added, as well (100% of subsoil), with 10 repetitions, being each repetition constituted of three plants, totalizing 480 seedlings. The chemical proprieties of subtracts and E. velutina seedlings leaves were evaluated, these samples were collected 100 days after the seeding. The initial development of the seedlings was evaluated through their morphological variables, quality indexes, mycorrhizalrate and biological nitrogen fixation. The nutrient contents existent in subtracts grew with the increasing of the proportions of residues incorporated, with few exceptions. As for the nutrient concentration in the leaves, the different residues proportions did not cause significant differences on those contents. When it comes to the initial development of the seedlings, generally, the best options for the morphological characteristics and quality indexes of the seedlings studies were the biochar incorporation in the subtract, highlighting the biochar at 300ºC in the 40% dose. According to the results obtained, the biochar from all sewage sludge produced at 300ºC can be considered promising for use as subtract in the seedlings production.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:05:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4753_1.pdf: 450029 bytes, checksum: cdd71201a1e65efd9af8ea429d070b10 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / Erythrina velutina Willd. é uma espécie lenhosa com cerca de 10 m de altura, sementes de coloração vermelha e dispersa por animais. O objetivo deste trabalho foi comparar a biometria de frutos e sementes, o potencial germinativo das sementes sob diferentes potenciais hídricos e a variação de temperatura, além do crescimento inicial em solos dos locais de coleta de duas populações. As populações localizadas em áreas de caatinga (Alagoinha) e brejo de altitude (Poção), a 700 e 950 m, respectivamente, ambas na zona do agreste, da região semi-árida do estado de Pernambuco. Os frutos e as sementes foram avaliados, quanto ao comprimento, largura, espessura (cm) e peso (g), bem como o número de sementes por fruto, e o volume (cm3) das mesmas. Foi verificada a embebição médias das sementes escarificadas com lixa de ferro ou não (intactas). Na germinação, avaliou-se o efeito da luz branca contínua ou ausente e o fotoperíodo de 12 horas a 25ºC; disponibilidade hídrica, com as sementes submetidas a diferentes potenciais hídricos (controle; -0,1; -0,2; -0,4 e 0,8 MPa), à temperaturas constantes de 20º, 25º, 30º e 35ºC e luz branca contínua; e nas temperatura constantes de 10, 15, 20, 25, 30, 35 e 40ºC também sob luz branca contínua. Para todos os tratamentos, semeou-se as sementes em placas de Petri de 9 cm de diâmetro, e a avaliação ocorreu diariamente, durante 15 dias. Foram utilizadas 10 sementes por placa em cinco réplicas cada. No crescimento, 30 plântulas de cada local, foram transplantadas para sacos plásticos pretos em casa de vegetação, contendo 4 Kg de solo dos dois locais de coleta, ambos mantidos na capacidade de campo. O crescimento das plantas da caatinga foi avaliado nos solos de caatinga e de brejo de altitude, o mesmo procedimento para as plantas do brejo. Avaliou-se o crescimento das plantas, no final de 30 dias, quanto ao comprimento das partes aérea e subterrânea (cm), peso de raiz, caule e folha (g), diâmetro do caule e número de folhas e área foliar. Verificou-se que os dados de biometria para os frutos e as sementes coletados na área de brejo de altitude (950 m), foram maiores que os encontrados para a área de caatinga. A velocidade de embebição foi maior nas sementes coletadas em área de caatinga. As duas populações apresentaram-se indiferentes à luz. As sementes coletadas no brejo obtiveram maiores redução na porcentagem de germinação com a diminuição do potencial hídrico que as sementes da caatinga. As melhores temperaturas variaram entre 15 e 25ºC e entre 20 e 25ºC para as sementes coletadas no brejo e na caatinga, respectivamente. As plantas jovens do brejo de altitude, apresentaram os valores de crescimento superiores aos encontrados para a caatinga, exceto, no comprimento da raiz, onde não houve diferença entre as plântulas. Esses resultados indicam que as condições ambientais do brejo de altitude favorecem o desenvolvimento dos frutos e das sementes e, em conseqüência, geraram sementes menos aptas a resistirem às condições ambientais, por não suportarem maior estresse hídrico. Entretanto, as plântulas formadas apresentaram maior vigor nos dois tipos de solo analisados

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:29:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2745_1.pdf: 2335531 bytes, checksum: 46923e28bada0a6739d825d859629a2c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A RDC 10/10, visa à padronização e o aumento da qualidade do uso popular de drogas vegetais, a exemplo da Passiflora edulis e da Erythrina mulungu, que são plantas utilizadas no tratamento da ansiedade. A distribuição granulométrica das drogas vegetais em pós deve ser considerada para caracterização física, química e biológica. O objetivo desse trabalho foi obter e padronizar pós de plantas medicinais com diferentes tamanhos de partículas de P. edulis e E. velutina e compará-los através de ensaios analíticos e bioensaios. Utilizou-se a microscopia eletrônica de varredura (MEV), termogravimetria (TG), análise térmica diferencial (DTA) e pirólise acoplada à cromatografia gasosa/espectrometria de massa (Pir-CG/EM), para caracterizar a morfologia e tamanho de partículas de drogas vegetais, decomposição térmica e análise da impressão digital. Para observar a atividade farmacológica do efeito ansiolítico do pó das drogas em diferentes tamanhos de partícula foi utilizado o ensaio de labirinto em cruz elevado. A citotoxicidade foi avaliada através do teste de vermelho neutro, investigando-se a viabilidade celular da linhagem celular NCTC 929. As imagens obtidas através da MEV detectaram divergências do resultado esperado pelo processo de granulometria. Os valores medianos e os limites inferiores e superiores mostraram a seguinte distribuição de tamanhos de partículas por amostra, MUF 01 (mulungu folha) 573,1 μm, variando de 234,2-1000 μm; MUF03 307,8 μm, variando de 236,2-854,1 μm e MUF05 62,3 μm, variando de 44,3-89,5 μm, respectivamente. Os perfis das curvas TG dinâmicas para MUF01, 03 e 05 foram distintas, para as partículas de diferentes tamanhos em atmosfera de N2 e de ar sintético, decompondo-se em três e quatro etapas, respectivamente. A perda de massa final foi crescente com a diminuição do tamanho das partículas para análises em N2, sendo de 69%, 79% e 82%, para MUF01, MUF03 e MUF05, respectivamente. As amostras MA01 e MA04 apresentaram três etapas de decomposição em atmosfera inerte. A 900 °C em atmosfera de nitrogênio a amostra MA04 manteve o resíduo em um valor maior que MA01. A média das energias obtidas por DTA para MA01 e MA04 foi de 8,7 e 11,5 μV. As temperaturas e as energias observadas por DTA para MUF e MUC foram: 335; 344; 354; 363 e 380 °C, com energias de 8,3; 9,3; 9,7, 10,1 e 9,7 uV para MUF01; 1,8; 2,5; 3,4; 3,7 e 4,15 uV para MUF 03 e 10,2; 11,3; 12,5, 14,0 e 13,4 uV para MUF05. Os pirogramas relativos às diferentes temperaturas e amostras de E. velutina mostraram-se possíveis de identificar cada uma das substâncias através dos seus tempos de retenção, conforme dados a seguir: Limoneno de 4,3-4,3 min; 1-Nonadeceno de 10,5-10,5 min; Neoftadieno 2,6,10- Trimetil, 14 de 11,3-11,3 min e 3- Eicosino de 11,6-11,6 min. As citotoxicidades dos pós das folhas de Passiflora edulis e folhas e cascas de Erythrina velutina demonstraram que as partículas apresentaram DL50 de 62,4; 42,5; 29,9 e 29,7 mg mL-1 para MA01,02,03 e 04, respectivamente. Para MUF 01,03 e 05 a DL50 foi de 50,08; 49,01 e 37,38 mg mL-1; e para MUC (mulungu casca) 02, 04 e 05 foi de 72,5; 66,7 e 53,0 mg mL-1, demonstrando citotoxicidade crescente de acordo com a diminuição do tamanho das partículas do pó. Quanto ao efeito ansiolítico, o ensaio de labirinto em cruz elevado demonstrou diferenças entre as amostras MA01 e MA04, nos tempos de permanência e número de entradas nos braços abertos e fechados. Os dados farmacológicos da E. velutina folhas e cascas mostraram diferentes atividades ansiolíticas para os diferentes tamanhos de partículas. Amostras de drogas vegetais em diferentes granulometrias demonstraram diferenças físicas, químicas e biológicas entre as amostras, de acordo com os parâmetros estudados

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SheylaVL_DISSERT.pdf: 1154692 bytes, checksum: c69fe71ef1d6a77b98930d0442bc2f7e (MD5) Previous issue date: 2010-02-19 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / A chymotrypsin inhibitor was purified from Erythrina velutina seeds by ammonium sulphate fractionation, affinities chromatographies on Trypsin-Sepharose, Quimotrypsin-Sepharose and reversed phase C-18 FPLC/AKTA system. The inhibitor, named EvCI, shown molecular mass of 17 kDa, as determined by SDSPAGE. 2D-PAGE showed four isoinhibitors with pI values of 4,42, 4,63, 4,83 and 5,06, with molecular mass of 17 kDa each. The aminoacid sequence of EvCI was determined by MALDI-TOF-MS and showed a high similarity with other Kunitz-type inhibitor of Erythrina variegata. EvCI competitively inhibited chymotrypsin, with Ki of 4 x10-8 M, but did not inhibited trypsin, pancreatic elastase, bromelain and papain. The inhibitory activity of EvCI was stable over wide pH and temperature ranges. In the presence of DTT 100 mM for 120 min, EvCI lost 50 % of activity. Cytotoxicity was studied in HeLa, MDA, HepG2, K562 and PC3 cells after 72-h incubation period. EvCl inhibited HeLa cells growth with an IC50 value of 50 μg/ml. Subsequent studies in HeLa cells analysis of cell death by annexin V/PI double-staining and cell cycle, using flow cytometry. The results provide evidence for a cytostatic activity of EvCl and support further studies on potential application of this inhibitors as an antiproliferative agent in combined therapy against cervical cancer / Um inibidor de quimotripsina do tipo Kunitz foi purificado de sementes de Erythrina velutina por fracionamento com sulfato de am?nio, cromatografias de afinidade Tripsina-Sepharose, Quimotripsina-Sepharose e cromatografia de Fase Reversa C- 18 no sistema FPLC/AKTA. O inibidor, denominado de EvCI, apresentou uma massa molecular de 17 kDa, determinada por SDS-PAGE. A an?lise por eletroforese bidimensional (2D) revelou quatro isoinibidores (valores de pI: 4,42, 4,63, 4,83 e 5,06). Todos os isoinibidores apresentaram massa molecular de 17 kDa. A sequ?ncia aminoac?dica dos pept?deos oriundos da digest?o enzim?tica de EvCI analisada por MALDI-TOF-MS apresentou 100% de identidade com o inibidor de quimotripsina ECl de Erythrina variegata. EvCI inibiu competitivamente a atividade de quimotripsina com Ki de 4 x10-8 M, mas n?o inibiu tripsina, elastase pancre?tica, bromela?na ou papa?na. Contudo, inibiu elastase de neutr?filos em 35,91 %. A atividade inibit?ria de EvCI sobre quimotripsina foi est?vel em uma ampla faixa de pH e temperatura. Na presen?a de 100 mM de DTT por 120 min, o inibidor perdeu 50% de sua atividade. A citotoxicidade do inibidor foi avaliada nas linhagens de c?lulas HeLa, MDA, HepG2, K562 e PC3 ap?s exposi??o a concentra??es variando de 0,0005 a 200 μg/mL, por 72 horas. O EvCl inibiu o crescimento celular de c?lulas HeLa com um IC 50 de 50 μg/mL. Os resultados obtidos na avalia??o de indu??o de morte celular e efeitos sobre o ciclo celular em c?lulas HeLa, indicam que o principal efeito do inibidor ? a indu??o de parada do ciclo celular, sendo, portanto, citost?tico. Os dados sugerem que o EvCl pode ser um composto promissor para ser estudado no futuro como agente citost?tico na terapia antitumoral combinada

Made available in DSpace on 2016-08-12T19:15:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FranciscoEPD_DISSERT.pdf: 606620 bytes, checksum: 2fdc0311c7bc334a6f2661d688b06bee (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Vigna unguiculata (L.) Walp., known as cowpea beans, is a perishable goods exposed to damages in relatively short time conservation periods, especially in traditional storage system or silo. This work had as its objective to verify physical, physiological and sanitary quality of cowpea beans seeds stored, during 150 days, with juazeiro leaf powder (Ziziphus joazeiro Mart.), jucá (Caesalpinia ferrea Mart.) and mulungu (Erythrina velutina Willd.). Experiments were accomplished Laboratório de Análise Sementes da Universidade Federal do Semi-Árido (UFERSA), Mossoró, RN, from April to September 2013. Cultivars BRS Marataoã e BRS Potiguar, whose seeds were stored in polyethylene bottles, during 150 days, containing leaves powder originated from forest species of Caatinga on the ratio of 10 g kg-1 seed. Statistical design was completely randomized in factorial scheme 4 x 5, consisting of four treatments (control, juazeiro leaf powder, jucá and mulungu) and five storage times (30, 60, 90, 120 and 150 days). The seeds were submitted to the following tests: humidity level, hectoliters weight, one thousand seeds weight, assessment of seeds infested by insects, germination test, emergence speed index, accelerated ageing, electrical conductivity and sanity test. The averages were compared by Scott-Knot test, at 5% probability, analyzed through statistical program SISVAR and fit to regression lines. The powders with leaves of juazeiro, jucá and mulungu did not affect germination and seeds vigor stored during 150 days. Powders of juazeiro and mulungu leaves tended to reduce the infestation of seeds by insects during storage. The use of mulungu leaves powder in ratio10 g kg-1 made it possible low Rhizopus sp. fungal rate in cowpea beans, cultivaras cultivares BRS Marataoã and BRS Potiguar, during 150 days of seeds storage / O Vigna unguiculata (L.) Walp., conhecido popularmente como feijão-caupi, é um produto perecível e sujeito a grandes perdas em períodos relativamente curtos de conservação, principalmente no sistema tradicional de armazenamento em sacas ou silo. Este trabalho teve como objetivo verificar a qualidade física, fisiológica e sanitária de sementes de feijão-caupi armazenadas, por 150 dias, com pós de folhas de juazeiro (Ziziphus joazeiro Mart.), jucá (Caesalpinia ferrea Mart.) e mulungu (Erythrina velutina Willd.). Os experimentos foram conduzidos no Laboratório de Análise Sementes da Universidade Federal do Semi-Árido (UFERSA), Mossoró, RN, no período de abril a setembro de 2013. Para isso, utilizaram-se as cultivares BRS Marataoã e BRS Potiguar, cujas sementes foram armazenadas em garrafas de polietileno, durante 150 dias contendo pós de folhas das espécies florestais da Caatinga na proporção de 10 g kg-1 de semente. O delineamento estatístico utilizado foi o inteiramente casualizado em esquema fatorial 4 x 5, constituídos de quatro tratamentos (controle, pós de folhas de juazeiro, jucá e mulungu) e cinco tempos de armazenamento (30, 60, 90, 120 e 150 dias). As sementes passaram pelas seguintes avaliações: grau de umidade, peso hectolítrico, peso de mil sementes, exame de sementes infestadas por insetos, teste de germinação, índice de velocidade de emergência, envelhecimento acelerado, condutividade elétrica e teste de sanidade. As médias foram comparadas pelo teste de Scott-knott, ao nível de 5% de probabilidade, analisadas por meio do programa estatístico SISVAR e ajustadas às curvas de regressão. Os pós com folhas de juazeiro, jucá e mulungu não afetaram a germinação e vigor das sementes armazenadas por 150 dias. Pós de folhas de juazeiro e mulungu tenderam a reduzir a infestação das sementes por insetos durante o armazenamento. O uso de pó de folhas de mulungu na dosagem de 10 g kg-1 proporcionou baixa incidência de fungos Rhizopus sp. em sementes de feijão-caupi, cultivares BRS Marataoã e BRS Potiguar, durante o armazenamento das sementes por 150 dias

Made available in DSpace on 2016-08-12T19:18:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FranciscoEPD_DISSERT.pdf: 606620 bytes, checksum: 2fdc0311c7bc334a6f2661d688b06bee (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Vigna unguiculata (L.) Walp., known as cowpea beans, is a perishable goods exposed to damages in relatively short time conservation periods, especially in traditional storage system or silo. This work had as its objective to verify physical, physiological and sanitary quality of cowpea beans seeds stored, during 150 days, with juazeiro leaf powder (Ziziphus joazeiro Mart.), jucá (Caesalpinia ferrea Mart.) and mulungu (Erythrina velutina Willd.). Experiments were accomplished Laboratório de Análise Sementes da Universidade Federal do Semi-Árido (UFERSA), Mossoró, RN, from April to September 2013. Cultivars BRS Marataoã e BRS Potiguar, whose seeds were stored in polyethylene bottles, during 150 days, containing leaves powder originated from forest species of Caatinga on the ratio of 10 g kg-1 seed. Statistical design was completely randomized in factorial scheme 4 x 5, consisting of four treatments (control, juazeiro leaf powder, jucá and mulungu) and five storage times (30, 60, 90, 120 and 150 days). The seeds were submitted to the following tests: humidity level, hectoliters weight, one thousand seeds weight, assessment of seeds infested by insects, germination test, emergence speed index, accelerated ageing, electrical conductivity and sanity test. The averages were compared by Scott-Knot test, at 5% probability, analyzed through statistical program SISVAR and fit to regression lines. The powders with leaves of juazeiro, jucá and mulungu did not affect germination and seeds vigor stored during 150 days. Powders of juazeiro and mulungu leaves tended to reduce the infestation of seeds by insects during storage. The use of mulungu leaves powder in ratio10 g kg-1 made it possible low Rhizopus sp. fungal rate in cowpea beans, cultivaras cultivares BRS Marataoã and BRS Potiguar, during 150 days of seeds storage / O Vigna unguiculata (L.) Walp., conhecido popularmente como feijão-caupi, é um produto perecível e sujeito a grandes perdas em períodos relativamente curtos de conservação, principalmente no sistema tradicional de armazenamento em sacas ou silo. Este trabalho teve como objetivo verificar a qualidade física, fisiológica e sanitária de sementes de feijão-caupi armazenadas, por 150 dias, com pós de folhas de juazeiro (Ziziphus joazeiro Mart.), jucá (Caesalpinia ferrea Mart.) e mulungu (Erythrina velutina Willd.). Os experimentos foram conduzidos no Laboratório de Análise Sementes da Universidade Federal do Semi-Árido (UFERSA), Mossoró, RN, no período de abril a setembro de 2013. Para isso, utilizaram-se as cultivares BRS Marataoã e BRS Potiguar, cujas sementes foram armazenadas em garrafas de polietileno, durante 150 dias contendo pós de folhas das espécies florestais da Caatinga na proporção de 10 g kg-1 de semente. O delineamento estatístico utilizado foi o inteiramente casualizado em esquema fatorial 4 x 5, constituídos de quatro tratamentos (controle, pós de folhas de juazeiro, jucá e mulungu) e cinco tempos de armazenamento (30, 60, 90, 120 e 150 dias). As sementes passaram pelas seguintes avaliações: grau de umidade, peso hectolítrico, peso de mil sementes, exame de sementes infestadas por insetos, teste de germinação, índice de velocidade de emergência, envelhecimento acelerado, condutividade elétrica e teste de sanidade. As médias foram comparadas pelo teste de Scott-knott, ao nível de 5% de probabilidade, analisadas por meio do programa estatístico SISVAR e ajustadas às curvas de regressão. Os pós com folhas de juazeiro, jucá e mulungu não afetaram a germinação e vigor das sementes armazenadas por 150 dias. Pós de folhas de juazeiro e mulungu tenderam a reduzir a infestação das sementes por insetos durante o armazenamento. O uso de pó de folhas de mulungu na dosagem de 10 g kg-1 proporcionou baixa incidência de fungos Rhizopus sp. em sementes de feijão-caupi, cultivares BRS Marataoã e BRS Potiguar, durante o armazenamento das sementes por 150 dias

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CleysyvanSM_DISSERT.pdf: 1173359 bytes, checksum: 82a094c436e4d9b81948c390ed5d9ed1 (MD5) Previous issue date: 2010-02-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Chitin-binding vicilins from legume seeds (Erythrina velutina. Canavalia ensiformes and Phaseolus vulgares) were isolated by ammonium sulfate followed by affinity chromatography on a chitin column. Effect of these vicilins on female adults of Ceratitis capitata was examined by bioassay and in a semi-field assay model. Mechanism of action of the vicilins was determined by in vivo digestibility and chitin affinity. Among the tested vicilins, E. velutina when added to diet caused strong effect on mortality at 10% dose. This insecticidal property was tested in a semi-field assay which showed the same effect observed in laboratory conditions, where doses of 10% and 15% were lethal to female adults of C. capitata. These deleterious effects were not only associated to the binding to chitin structures present in peritrophic membrane, but principally to its low digestibility in the C. capitata digestive tract. This fact was confirmed because chiting binding proteins as WGA and the other tested vicilins were not toxic to female adults of C. capitata due susceptibility of these proteins to digestive enzymes of the insects. By other side EvV was more resistant to digestive enzymes, causing deleterious effects on female adults of C. capitata. These results showed that EvV may be part of the pest management programs or an alternative in plant improvement program in the population control of this fruticulture pest / Vicilinas ligantes a quitina de sementes de Erythrina velutina, Canavalia ensiformis e Phaseoulus vulgaris foram isoladas atrav?s de procedimento que consistiu de precipita??o com sulfato de am?nio seguida de cromatografia de afinidade em coluna de quitina. O efeito dessas vicilinas sobre f?meas adultas de Ceratitis capitata foi examinada por bioensaios em condi??es de laborat?rio e por bioensaios em condi??es de semi-campo. O mecanismo de a??o dessas vicilinas foi determinado por um ensaio de digestibilidade in vivo e pela propriedade de liga??o a uma matriz de quitina. Entre as vicilinas testadas, a vicilina de E. velutina foi a ?nica letal, causando mortalidade de 100% quando adicionada ? dieta das moscas das frutas adultas na concentra??o de 10% (p/p). Este efeito inseticida da vicilina de E. velutina foi tamb?m testado em condi??es de semi-campo, onde concentra??es de 10 % e 15% (p/p) de vicilina adicionada ? dieta foram letais para f?meas adultas de C. capitata. Esse efeito delet?rio das prote?nas ligantes ? quitina n?o foi associado somente ? propriedade de liga??o ? quitina, visto que as outras vicilinas, al?m da lectina de g?rmen de trigo (WGA) foram t?xicas quando adicionadas ? dieta das moscas das frutas. Entretanto, a resist?ncia/susceptibilidade dessas prote?nas aos processos digest?rios desses insetos poderia explicar os diferentes efeitos observados. Das prote?nas ligantes ? quitina, apenas aquelas refrat?rias ? a??o das enzimas digestivas nos processos digest?rios teve a??o inseticida. Esses resultados mostraram que vicilina de E. velutina ? um bioinseticida com potencial de uso nos programas de controle de pragas diminuindo a popula??o de moscas das frutas no campo