Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-29Bitstream added on 2014-08-13T17:59:53Z : No. of bitstreams: 1 000770166.pdf: 4471991 bytes, checksum: d06f7bf044c47db0420eecb64e0086d9 (MD5) / A esquistossomose é uma das principais doenças parasitárias nos trópicos e subtrópicos, causada pelo Schistosoma mansoni. Uma alternativa para o tratamento desta doença é a quimioterapia, especialmente com praziquantel (PZQ), o qual é altamente permeável, porém apresenta baixa solubilidade em água, o que interfere na sua biodisponibilidade. Muitas estratégias utilizam polímeros no desenvolvimento de sistemas de liberação de fármacos com intuito de modificar as propriedades farmacotécnicas e biofarmacêuticas. Dentre elas, destacam-se os hidrogéis de dextrano, que apresenta várias propriedades vantajosas, algumas delas são: baixa toxicidade, biocompatibilidade e biodegradabilidade. Em trabalho anterior, foram desenvolvidos hidrogéis de dextrano 70 (DEX-70) e 148kDa (DEX-148) contendo praziquantel por um método simples, econômico, de fácil execução, sem a utilização de reticulantes químicos, o que gerou perfis de liberação diferentes do fármaco incorporado, graças a capacidade de intumescimento dos hidrogéis formados com cada um dos polímeros. Com base no observado neste trabalho avaliamos a utilização de blendas, que pode apresentar uma vantagem tecnológica importante, desenvolvendo novos materiais com propriedades diferentes, sem perder suas características e agregando suas propriedades vantajosas que podem ser usadas no desenvolvimento de sistemas de liberação, para a modulação das propriedades farmacotécnicas e biofarmacêuticas, de forma a desenvolver uma nova plataforma tecnológica em termos de Sistemas de liberação de fármacos. Os hidrogéis foram caracterizados, empregando o RMN-H1, o qual constatou um interação entre dextrano e praziquantel no hidrogel 1:1:1 (PZQ:DEX-70:DEX-148). A difração de Raios-X, juntamente com o DSC, mostrou que parte do fármaco está disperso na matriz polimérica na forma de cristalitos, ajudando a melhorar sua solubilidade, como comprovado pelo estudo de ... / Schistosomiasis is a major parasitic diseases in the tropics and subtropics, caused by Schistosoma mansoni. An alternative treatment for this condition is chemotherapy, especially with praziquantel (PZQ), which is highly permeable, but has a very low solubility in water, which interferes with its bioavailability. Many strategies have been use polymers in the development of systems for controlled drug release in order to modify pharmacotechnical and biopharmaceutical properties. Amongst them, highlight the dextran hydrogels, which present various advantageous properties, some of them are: low toxicity, biocompatibility and biodegradability. In previous studies, dextran 70 (DEX-70) and 148kDa (DEX-148) hydrogels containing praziquantel had been developed by a simple, economical, of easy execution, without the use of chemical crosslinking, which generated different release profiles of drug incorporated, due swelling capacity of the hydrogels formed from each one of polymers. Based on observed in this study, the utilization of blends, which can present a major technological advantage by developing new materials with different properties, without losing its characteristics and adding their advantageous properties that can be used in the development of delivery systems, was evaluated, to provide a modulation of its pharmacotechnical and biopharmaceutical propertiesin order to develop a new technological platform in terms of systems for drug delivery. Hidrogels were characterized, employing 1H-NMR, which found an interaction between dextran and praziquantel into 1:1:1 (PZQ:DEX-70:DEX-148) hydrogel. The X-ray diffraction along with DSC showed that part of drug is dispersed in the polymer matrix in the form of crystallites, helping to improve its solubility, as evidenced by solubility studies. In in vivo studies, the sample 1:2:1 and 1:2:2, were the ones that were more effective. Finally, it was found that preparation of dextran blends containing ...

Orientador : Maria Palmira Daflon Gremião / Banca: Clovis Augusto Ribeiro / Banca: Silmara Marques Allegretti / Banca: Mara Cristina Pinto / Banca: Adélia Emília de Almeida / Resumo: A esquistossomose é uma das principais doenças parasitárias nos trópicos e subtrópicos, causada pelo Schistosoma mansoni. Uma alternativa para o tratamento desta doença é a quimioterapia, especialmente com praziquantel (PZQ), o qual é altamente permeável, porém apresenta baixa solubilidade em água, o que interfere na sua biodisponibilidade. Muitas estratégias utilizam polímeros no desenvolvimento de sistemas de liberação de fármacos com intuito de modificar as propriedades farmacotécnicas e biofarmacêuticas. Dentre elas, destacam-se os hidrogéis de dextrano, que apresenta várias propriedades vantajosas, algumas delas são: baixa toxicidade, biocompatibilidade e biodegradabilidade. Em trabalho anterior, foram desenvolvidos hidrogéis de dextrano 70 (DEX-70) e 148kDa (DEX-148) contendo praziquantel por um método simples, econômico, de fácil execução, sem a utilização de reticulantes químicos, o que gerou perfis de liberação diferentes do fármaco incorporado, graças a capacidade de intumescimento dos hidrogéis formados com cada um dos polímeros. Com base no observado neste trabalho avaliamos a utilização de blendas, que pode apresentar uma vantagem tecnológica importante, desenvolvendo novos materiais com propriedades diferentes, sem perder suas características e agregando suas propriedades vantajosas que podem ser usadas no desenvolvimento de sistemas de liberação, para a modulação das propriedades farmacotécnicas e biofarmacêuticas, de forma a desenvolver uma nova plataforma tecnológica em termos de Sistemas de liberação de fármacos. Os hidrogéis foram caracterizados, empregando o RMN-H1, o qual constatou um interação entre dextrano e praziquantel no hidrogel 1:1:1 (PZQ:DEX-70:DEX-148). A difração de Raios-X, juntamente com o DSC, mostrou que parte do fármaco está disperso na matriz polimérica na forma de cristalitos, ajudando a melhorar sua solubilidade, como comprovado pelo estudo de ... / Abstract: Schistosomiasis is a major parasitic diseases in the tropics and subtropics, caused by Schistosoma mansoni. An alternative treatment for this condition is chemotherapy, especially with praziquantel (PZQ), which is highly permeable, but has a very low solubility in water, which interferes with its bioavailability. Many strategies have been use polymers in the development of systems for controlled drug release in order to modify pharmacotechnical and biopharmaceutical properties. Amongst them, highlight the dextran hydrogels, which present various advantageous properties, some of them are: low toxicity, biocompatibility and biodegradability. In previous studies, dextran 70 (DEX-70) and 148kDa (DEX-148) hydrogels containing praziquantel had been developed by a simple, economical, of easy execution, without the use of chemical crosslinking, which generated different release profiles of drug incorporated, due swelling capacity of the hydrogels formed from each one of polymers. Based on observed in this study, the utilization of blends, which can present a major technological advantage by developing new materials with different properties, without losing its characteristics and adding their advantageous properties that can be used in the development of delivery systems, was evaluated, to provide a modulation of its pharmacotechnical and biopharmaceutical propertiesin order to develop a new technological platform in terms of systems for drug delivery. Hidrogels were characterized, employing 1H-NMR, which found an interaction between dextran and praziquantel into 1:1:1 (PZQ:DEX-70:DEX-148) hydrogel. The X-ray diffraction along with DSC showed that part of drug is dispersed in the polymer matrix in the form of crystallites, helping to improve its solubility, as evidenced by solubility studies. In in vivo studies, the sample 1:2:1 and 1:2:2, were the ones that were more effective. Finally, it was found that preparation of dextran blends containing ... / Doutor

Resumo: O praziquantel (PZQ) é o fármaco de escolha para o tratamento da esquistossomose, sendo ativo contra todas as espécies de Schistosoma. Devido à sua baixa solubilidade em água e o risco de resistência ou tolerância do parasita a este fármaco, é importante desenvolver alternativas terapêuticas que possam aumentar sua eficácia e melhorar sua biodisponibilidade. As nanopartículas lipídicas sólidas (SLN) combinam as vantagens de diferentes carreadores coloidais tais como emulsões, lipossomas e nanopartículas poliméricas, e também evitam algumas das suas desvantagens em relação à estabilidade e dificuldade de produção em larga escala. Assim, o objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento e caracterização de SLN contendo PZQ (SLN-PZQ) a fim de melhorar as propriedades biofarmacêuticas deste fármaco. O ácido esteárico foi selecionado como fase lipídica para o desenvolvimento das SLN devido à capacidade de solubilização do PZQ e baixo custo. As SLN foram preparadas por um método modificado de microemulsão óleoem- água sob homogeneização a alta velocidade de cisalhamento utilizando Poloxamer 188 como tensoativo. O diâmetro médio e potencial zeta das SLN-PZQ foram 505,6 nm ± 27,2 nm e -34,0 mV ± 1,1 mV, respectivamente. As nanopartículas foram observadas por microscopia eletrônica de varredura revelando a presença de partículas esféricas. Os resultados obtidos por calorimetria exploratória diferencial indicam que as SLN se apresentam no estado sólido e o fármaco está molecularmente disperso na matriz lipídica. A eficiência de encapsulação e capacidade de carga do PZQ determinadas por cromatografia líquida de alta eficiência foram 99,06 % ± 0,3 % e 17,48 % ± 0,05 %, respectivamente. A formação das SLN foi confirmada por espalhamento de raio-X a baixo ângulo revelando a presença de uma estrutura lamelar com efetiva incorporação do PZQ nas partículas / Abstract: Praziquantel (PZQ) is a drug of choice for the treatment of schistosomiasis, being active against all species of Schistosoma. Due to its low water solubility and risk of parasite resistance or tolerance to this drug, it is would be useful to develop therapeutical alternatives that can increase its efficacy and improve the bioavailability. Solid lipid nanoparticles (SLN) combine the advantages of different colloidal carriers such as emulsions, liposomes, and polymeric nanoparticles, and also avoid some of their disadvantages in relation to the stability and difficulty of large scale production. Thus, the aim of this research was the development and characterization of PZQ-loaded SLN (SLN-PZQ) to improve the biopharmaceuticals properties of this drug. The stearic acid was selected as lipid phase to development of SLN due to solubilization capacity of the PZQ and low cost. The SLN were prepared by a modified oil-in-water microemulsion method under high-shear homogenization using Poloxamer 188 as surfactant. The mean particle size and zeta potential to PZQ-loaded SLN were 505.6 nm ± 27.2 nm and -34.0 mV ± 1.1 mV, respectively. The nanoparticles were observed by scanning electron microscopy (SEM) revealing the presence of spherical particles. The results obtained by differential scanning calorimetry indicate that the SLN are presented in the solid state and the drug is molecularly dispersed in the lipid matrix. The entrapment efficiency and loading capacity of PZQ determined by high performance liquid chromatography were 99.06 % ± 0.3 % and 17.48 % ± 0.05 %, respectively. The SLN formation was confirmed by small angle X-ray scattering revealing the presence of a lipid lamellar structure with effective incorporation of the PZQ into particles. The stability of PZQloaded SLN stored at room temperature and at 4 ºC was investigated concerning particle size, zeta potential and entrapment efficiency / Orientador: Maria Palmira Daflon Gremião / Coorientador: Victor Hugo Vitorino Sarmento / Banca: Clovis Augusto Ribeiro / Banca: Silmara Marques Alegretti / Banca: Marco Vinicius Chaud / Banca: Marlus Chorilli / Doutor

Orientador: Maria Palmira Daflon Gremião / Banca: Beatriz Stringhetti Ferreira Cury / Banca: Silmara Marques Alegretti / Resumo: A esquistossomose é uma doença que atinge cerca de 200 milhões de pessoas no mundo todo. A alta incidência desta doença está ligada à falta de condições sanitárias, ao diagnóstico tardio e, principalmente, à falta de tratamento medicamentoso eficiente. O praziquantel é o fármaco de primeira escolha para o tratamento da esquistossomose. No entanto, falhas no tratamento com este fármaco e relatos de isolamento de S. mansoni tolerantes podem comprometer a eficiência do PZQ. Assim, o PZQ representa um fármaco em que pesquisas para melhorar as suas propriedades biofarmacêuticas são necessárias, pois apresenta baixa solubilidade em meio aquoso e biodisponibilidade baixa ou errática. O presente trabalho vê como finalidade desenvolver carreadores lipídicos nanoestruturados (NLC) contendo praziquantel empregando como sistema lipídico o monoestearato de glicerila (GMS) e o ácido oléico (AO) e como sistema tensoativo a associações de monoestearato de polioxietileno sorbitano 60 (TWEEN60), fosfatidilcolina, Poloxamer (Pluronic F-127 PLU). Os NLCs foram preparados através de dois diferentes métodos, de sonicação e alta velocidade de cisalhamento a quente. Os sistemas foram caracterizados através da avaliação dos parâmetros de distribuição de tamanho, potencial zeta, índice de polidispersidade e eficiência de encapsulação. O transporte intestinal do fármaco foi avaliado através do modelo do saco intestinal invertido. Ambos os métodos de obtenção empregados mostraram-se eficazes para o preparo dos NLCs em escala nanometrica, com índice de polidispersidade homogeneo e um... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Schistosomiasis is a debilitating disease with high misfit in the quality of people life reached about 200 million people worldwide. The high incidence of this disease is linked to poor sanitary conditions, late diagnosis, and especially the lack of effective drug treatment. Praziquantel is the drug of first choice for treatment of schistosomiasis. However, treatment failures with this drug and reports of isolation of S. mansoni tolerance may compromise the efficiency of PZQ. Thus, the PZQ represents an example in which surveys to improve the biopharmaceutical properties are needed, since it has low solubility in aqueous and low or erratic bioavailability. This work aims to develop nanostructured lipid carriers (NLC) containing praziquantel employing as lipid system the glycerin monostearate (GMS) and oleic acid (OA) as a surfactant system and some combination of polyoxyethylene sorbitan monostearate 60 (TWEEN60), phosphatidylcholine and Poloxamer (Pluronic F-127 PLU) as a surfactant system. NLCs were prepared by two different methodologies, the sonication and high shear rates to warm. The systems were characterized by determination of size distribution, zeta potential, polydispersity index and encapsulation efficiency. The intestinal transport of the drug was evaluate by using the model of inverted intestinal sac. Both methods were effective for the preparation of NLCs with an average diameter in the nanometer range, the polydispersity index indicating homogeneity of particle size and a zeta... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:13:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000424923-Texto+Completo-0.pdf: 645382 bytes, checksum: 25070e3ec621e54c54f5013c978ddf8d (MD5) Previous issue date: 2010 / Schistosomiasis mansoni is an endemic chronic parasitic infection that occurs in countries in Africa, South America, the Caribbean and the eastern Mediterranean. The main pathology is the granuloma, an immune response against the antigens secreted by the parasite eggs primarily in the liver and intestines. Those antigens are crucially involved in the modulation of the humoral and cellular immunological responses of the host and may be involved in the strategy of the egg passage through intestinal mucosal. This work had its origin in the results of an experiment realized by Candida Fagundes Teixeira of the PUCRS Biomedical Parasitology Group, which the attempts to obtain egg antibodies that could make interaction with paramagnetic particles revealed some difficulty in obtaining high levels of antibodies against the egg surface. The main goal of the present work was to verify the production of antibodies against the egg surface of Schistosoma mansoni. S. mansoni, Esteio isolated, was maintained in laboratory through passages in Biomphalaria glabrata and Swiss strain mice. The worms were recovered, washed in buffer and used for production of adults worm soluble membrane antigens. The eggs were collected from human infected feces and used for mice immunization and production of secreted egg antigens (SEA). The experimental groups were separated in 4 groups with 6 mice each, as follow: group 1 immunized with saline solution 0,9%; group 2 immunized with sonicated eggs and adjuvant; group 3 immunized with sonicated eggs without adjuvant and group 4 immunized with whole intact eggs. Through the ELISA and immunofluorescence techniques it was verified reactivity in immunization with sonicated eggs and it was not verified reactivity in immunization with whole intact eggs.The systemic and complex approach of the parasite-host interaction is an interesting study proposal and remains open for future investigations which may assist in the comprehension and treatment of the pathogenesis. / A esquistossomose mansônica é uma infecção parasitária crônica endêmica que ocorre em países na África, América do Sul, no Caribe e no Mediterrâneo Oriental. A principal patologia é o granuloma, uma resposta imune contra os antígenos secretados pelos ovos do parasito principalmente no fígado e intestinos. Estes antígenos estão crucialmente envolvidos na modulação das respostas imunológica celular e humoral do hospedeiro e podem estar envolvidos na estratégia de passagem do ovo através da mucosa intestinal. Este trabalho teve origem nos resultados de um experimento realizado por Candida Fagundes Teixeira do Grupo de Parasitologia Biomédica da PUCRS, cujas tentativas de se obter anticorpos do ovo que interagissem com partículas paramagnéticas, revelaram alguma dificuldade em obter níveis elevados de anticorpos contra a superfície do ovo. O objetivo principal do presente trabalho foi verificar a produção de anticorpos contra a superfície do ovo de Schistosoma mansoni. O S. mansoni, isolado Esteio, foi mantido em laboratório através de passagens em Biomphalaria glabrata e camundongos da cepa Swiss. Os vermes foram recuperados, lavados com tampão e utilizados para a produção de antígeno solúvel de membrana de vermes adultos. Os ovos foram coletados de fezes humanas infectadas e utilizados para a imunização de camundongos e produção de antígenos secretados pelo ovo (SEA). Os grupos experimentais foram divididos em 4 grupos com 6 camundongos cada, da seguinte forma: grupo 1 imunizado com solução salina 0,9%; grupo 2 imunizado com ovos sonicados e adjuvante; grupo 3 imunizado com ovos sonicados sem adjuvante e grupo 4 imunizado com ovos inteiros. Através da técnica de ELISA e imunofluorescência indireta foi verificada reatividade na imunização com ovos sonicados, e não foi verificada reatividade na imunização com ovos inteiros.A abordagem sistêmica e complexa da interação parasito-hospedeiro é uma proposta interessante de estudo e permanece aberta para futuras investigações que poderão auxiliar na compreensão e tratamento da patogenia.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:13:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000341115-Texto+Completo-0.pdf: 850841 bytes, checksum: fc50feef6db1a22bda86f5ef243d4f44 (MD5) Previous issue date: 2005 / Intestinal schistosomiasis was detected in Rio Grande do Sul for the first time in 1997, becoming the southernmost focus in the Americas. Starting from that date, several investigations were undertaken for the epidemiological characterization of this transmission focus of very low endemicity and recent introduction. The objective is to describe the parasite morphology and to analyze the population structure using microsatellite markers, comparing field isolates with laboratory strains, LE and MAP. Two isolates called “Esteio” and “JV” were obtained respectively, from feces and mollusks naturally infected and from a single patient. The adult worms, obtained from the experimental infection of mice were fastened, clarified and stained for the measurements taken with an optical microscope. Molecular analysis was performed with 4 microsatellite markers. The morphological data of adult worms did not differ from those reported in the literature. The small variance in measurements can be attributed to phenotypic plasticity of the populations of that trematode. The use of 4 microsatellite markers allowed the detection of a smaller number of alleles in the field strains when compared to the findings with the laboratory strains. There is a great genetic divergence found (RST<0,253) when compared isolates and laboratory strains. / A esquistossomose mansônica foi detectada no Rio Grande do Sul pela primeira vez em 1997, constituindo o foco mais meridional das Américas. A partir daquela data, vários trabalhos foram desenvolvidos para caracterizar epidemiologicamente este foco de transmissão de ultra baixa endemicidade e de recente introdução. O objetivo desse trabalho é caracterizar morfologicamente o parasito e analisar a estrutura populacional através de marcadores microssatélites, comparando com as cepas de laboratório LE e MAP. Dois isolados de campo chamados de “Esteio” e “JV” foram obtidos, respectivamente, a partir de fezes e moluscos naturalmente infectados e de um paciente. Os vermes adultos, obtidos de camundongos experimentalmente infectados, foram fixados, clarificados e corados para as mensurações com auxílio de um microscópio óptico. A análise molecular foi realizada com 4 marcadores microssatélites. Morfologicamente, o parasito, quando comparado com dados obtidos da bibliografia, não apresentou diferenças notáveis. As pequenas variações observadas podem ser atribuídas à plasticidade fenotípica das populações desse trematódeo. O uso de 4 marcadores microssatélites nos permitiu encontrar um número menor de alelos nos isolados de campo quando comparado com as cepas de laboratório. Há uma grande divergência genética encontrada (RST<0,253) quando comparados os isolados de campo e as cepas de laboratório.

Made available in DSpace on 2015-04-30T14:03:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000467370-Texto+Completo-0.pdf: 6072599 bytes, checksum: 169f7ff123882c0b088732b04ad1956d (MD5) Previous issue date: 2014 / Schistososmiasis is a chronic endemic infection caused by parasites of the genus Schistosoma, and it occurs in 74 countries in Africa, South America and Asia. The three main agents of this infection in humans are: Schistosoma mansoni and Schistosoma japonicum, that cause the hepatic-intestinal disease, and Schistosoma haematobium, responsible for the genitourinary infection. Despite the effective treatment like praziquantel, schistososmiasis remains as the second most prevalent parasitic disease in the world. Diagnosis of the intestinal schistososmiasis is achieved through the direct visualization of the eggs in fecal samples. The current method recommended by the World Health Organization in epidemiological studies is the Kato-Katz method. Despite it being simple and cheap, in areas of low endemicity this technique loose sensibility, leading to the occurrence of false-negative cases and underestimation of the prevalence in the studied area. Helmintex™ is a coproparasitological method highly sensitive that allows the isolation of Schistosoma eggs from 30 grams of feces, based in the interaction between the eggs and paramagnetic microspheres in a magnetic field. However, this method demands time and specialized equipment, being of difficult manipulation in work field. The mechanism that promotes the interaction between the paramagnetic spheres with the Schistosoma eggs is not known. Considering the necessity of sensitive diagnostic tools of easy applicability in epidemiological studies in low endemicity areas, this work has the purpose to study the surface physical-chemical characteristics of S. mansoni and S. japonicum eggs, in order to enhance the efficiency of the Helmintex™ method. S. mansoni and S. japonicum eggs were isolated from livers of experimentally infected mice. The eggs were submitted to morphological and structural analysis using Scanning and Transmission Electron Microscopy and elemental analysis using Energy Disperssion Spectroscopy. The magnetic susceptibility was determined using SQUID (Superconducting Quantum Interference Device) and the concentration of the chemical elements was determined through Atomic Emission Spectroscopy. Experiments to elucidate the interaction properties of the eggs of the eggs and the microspheres were conducted incubating the eggs from both species with different paramagnetic microspheres. The results show that the egg surface of both species is recovered by a dense layer of microspines, being those shorter and less spaced in S. mansoni. The eggs spontaneously bind the particles, with a greater preference for magnetic material. S. japonicum eggs have a higher affinity for paramagnetic microspheres than S. mansoni eggs. The presence of streptavidin in the surface of the microspheres enhances the affinity of both species for non-magnetic material, however it decreases the affinity for paramagnetic microspheres. Despite the presence of iron in the eggshell of S. mansoni and S. japonicum, the origin of the interaction does not seem to be magnetic, but, based in the difference of electrostatic charges present in the surface of the eggs and the microspheres. The continuity of this study is important to determine the physical-chemical characteristics of eggs from human feces, and it can lead to the upgrading and optimization of the Helmintex™ method. Studies using Atomic Force Microscopy are in progress. / A esquistossomose é uma infecção crônica endêmica causada por parasitos do gênero Schistosoma, e ocorre em países 74 países na África, América do Sul e Ásia. Os três principais agentes desta infecção em humanos são: Schistosoma mansoni e Schistosoma japonicum, causadores da doença hepato-intestinal, e Schistosoma haematobium, responsável pela infecção genitourinária. Apesar de haver tratamento efetivo como o praziquantel, a esquistossomose permanece como a segunda infecção parasitária mais prevalente no mundo. O diagnóstico da esquistossomose intestinal é feito através da direta visualização dos ovos em amostras fecais. O método atualmente recomendado pela Organização Mundial de Saúde em estudos epidemiológicos é o método de Kato-Katz. Apesar de simples e barato, em áreas de baixa endemicidade esta técnica perde sensibilidade, levando à ocorrência de casos falso-negativos e subestimação da prevalência da área estudada. O Helmintex® é um método coproparasitológico altamente sensível que permite o isolamento de ovos de Schistosoma à partir de 30 gramas de fezes, baseado na interação entre os ovos e esferas paramagnéticas em um campo magnético. Entretanto, este método demanda tempo e equipamentos especializados, sendo de difícil manipulação em estudos de campo.O mecanismo que promove a interação das esferas paramagnéticas com os ovos de Schistosoma não é conhecido. Tendo em vista a necessidade de ferramentas diagnósticas sensíveis e de fácil aplicabilidade em estudos epidemiológicos em áreas de baixa transmissão, este trabalho tem por objetivo estudar características físico-químicas da superfície dos ovos de S. mansoni e S. japonicum, afim de aprimorar a eficiência do método Helmintex®. Ovos de S. mansoni e S. japonicum foram isolados de fígados de camundongos experimentalmente infectados. Os ovos foram submetidos à analise morfológica e estrutural utilizando Microscopia Eletrônica de Varredura e Transmissão e análise elementar utilizando Espectroscopia por Dispersão de Energia. A susceptibilidade magnética foi determinada utilizando-se o SQUID (Superconducting Quantum Interference Device) e a concentração dos elementos químicos foi determinada através de Espectroscopia por Emissão Atômica. Experimentos para elucidar as propriedades de interação dos ovos e das microesferas foram conduzidos incubando ovos de ambas as espécies com diferentes microesferas paramagnéticas. Os resultados mostram que a superfície do ovo de ambas as espécies é recoberta por uma camada densa de microespinhos, sendo estes mais curtos e menos espaçados em S. mansoni. Os ovos espontaneamente ligam-se às partículas, com maior preferência por material magnético. Os ovos de S. japonicum possuem maior afinidade pelas microsesferas paramagnéticas do que os ovos de S. mansoni. A presença de estreptavidina na superfície das microesferas aumenta a afinidade de ambas as espécies por microesferas não-magnéticas, porém diminui a afinidade por microesferas paramagnéticas. Apesar da presença de ferro na casca do ovo tanto de S. mansoni quanto de S. japonicum, a origem da interação não parece ser magnética, e sim, baseada na diferença de cargas eletrostáticas presentes na superfície dos ovos e das microesferas. A continuidade deste estudo é importante para determinar as características físico-químicas de ovos provenientes de fezes humanas, e pode levar ao aprimoramento e otimização do método Helmintex®. Estudos utilizando-se Microscopia de Força Atômica encontram-se em andamento.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Núcleo de Medicina Tropical, Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-07-05T12:05:44Z No. of bitstreams: 1 2013_GilmaraLimaNascimento.pdf: 903143 bytes, checksum: fee40ff91054136401a749166ccfe45e (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-07-05T12:33:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_GilmaraLimaNascimento.pdf: 903143 bytes, checksum: fee40ff91054136401a749166ccfe45e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-05T12:33:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_GilmaraLimaNascimento.pdf: 903143 bytes, checksum: fee40ff91054136401a749166ccfe45e (MD5) / As esquistossomoses são doenças cujo agente etiológico são trematódeos do gênero Schistosoma que têm como hospedeiros intermediários caramujos de água doce do gênero Biomphalaria. A fase inicial das esquistossomoses é, em geral, assintomática. Entretanto, se não tratada a infecção inicial pode evoluir para formas clínicas extremamente graves, podendo chegar ao óbito. É uma das parasitoses mais disseminadas no mudo e segundo a Organização Mundial da Saúde ocupa o segundo lugar em importância e repercussão, após a malária, estimando que afete 200 milhões de pessoas. No Brasil estima-se que 25 milhões de pessoas estejam expostas ao risco de contrair a doença e 2,5 a 6 milhões encontrem-se infectadas. As áreas endêmicas e focais abrangem 19 Unidades Federadas. A esquistossomose ocorre de forma endêmica nos Estados de Alagoas, Maranhão, Bahia, Pernambuco, Rio Grande do Norte, Paraíba, Sergipe, Espírito Santo e Minas Gerais. Mesmo diante da importância epidemiológica da esquistossomose, da sua capacidade de produzir formas graves e contribuir para a relação doença e pobreza, estudos sobre a distribuição das formas graves e do impacto econômico da doença ainda são escassos na literatura. Os objetivos deste estudo foram: estimar a carga epidemiológica e os custos das formas graves da esquistossomose no Brasil em 2010; descrever as formas graves de esquistossomose por pessoa, tempo e lugar; estimar a mortalidade por esquistossomos; estimar os Anos Potenciais de Vida Perdidos em decorrência da esquistossomose e estimar os custos diretos sanitários e não sanitários das formas graves da doença. No ano de 2010 houve 389 notificações de formas graves da esquistossomose no Sinan, 410 internações registradas no SIH/SUS e 541 óbitos registrados no SIM. O coeficiente de mortalidade por esquistossomose foi 0,28 óbitos por 100 mil hab., o que representou 1,1% dos óbitos por doenças infecciosas no país e para o Estado de Pernambuco os óbitos por esquistossomose representaram 8,7% dos óbitos por doenças infecciosas. No estudo foram calculados 6.419 Anos Potenciais de Vida Perdidos por esquistossomose. Dos 6.419 APVP, 93% foram em idades economicamente ativas. Os custos estimados com internação somaram R$ 1.010.278,70 com média de R$ 2.464,09 por internação. Formas graves, internações e óbitos por uma doença parasitária, negligenciada, prevenível e sensível à atenção primária devem ser consideradas como expressão de inequidade tanto nas ações de saúde como de inequidade social. O presente estudo fornece informações que contribuem para o planejamento e tomada de decisão em saúde, aliando-se aos esforços atuais de enfrentamento das doenças intimamente relacionadas com a pobreza extrema. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Schistosomiasis is a disease which etiological agents are trematodes of the genus Schistosoma and that have freshwater snails as intermediate hosts of the genus Biomphalaria. In general, the initial stage of schistosomiasis is asymptomatic. However, if left untreated, the initial infection can develop severe clinical forms and lead to death. Schistosomiasis is one of the most widespread parasites in the world, and according to the World Health Organization, the disease holds second place in scale and response, after malaria, with an estimate of affecting 200 million people. There is an estimate of 25 million people in Brazil that are exposed to the risk of contracting the disease and that 2.5 to 6 million are already infected. The endemic and focal areas of the disease cover 19 States. Schistosomiasis is endemic in the states of Alagoas, Maranhão, Bahia, Pernambuco, Rio Grande do Norte, Paraíba, Sergipe, Espírito Santo and Minas Gerais. Even in face of the epidemiological significance of schistosomiasis, its capacity of leading to severe stages and contributing to the relation poverty and disease, the studies regarding the disease's distribution, its severe forms and economic impact are still vague in literature. The objectives of this study were: to estimate the epidemiological burden and the costs of the schistosomiasis' severe stages in Brazil, 2010; to describe the severe forms of schistosomiasis by person, time and place; to estimate mortality by schistosomes; to estimate the Potential Years of Life Lost due to schistosomiasis and the direct medical and non-medical costs of the disease's severe forms. In 2010, Sinan identified 389 notifications of severe forms of schistosomiasis, 410 hospitalizations registered at SIH/SUS and 541 registered deaths at SIM. The mortality rate by schistosomiasis was of 0.28 deaths per 100,000 inhabitants, which represented 1.1% of the deaths by infectious diseases in the country, and for the State of Pernambuco the deaths by schistosomiasis represented 8.7% of the deaths by infectious diseases. It has been calculated in the study 6,419 Potential Years of Life Lost (PYLL) by schistosomiasis, and 93% of that number was related to active economical ages. The estimated costs on hospitalizations totaled R$1,010,278.70 with an average of R$2,464.09 per hospitalization. Severe forms, hospitalizations and deaths due to a parasitic disease, neglected, preventable and perceptible to the primary care must be considered as an inequity expression both for health and social actions. This study gives information which contributes to health planning and decision-making, joining current efforts for fighting against diseases closely related to extreme poverty.

Submitted by Heitor Rapela Medeiros (heitor.rapela@ufpe.br) on 2015-03-06T12:30:01Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Carlos Weber.pdf: 4500309 bytes, checksum: 645a1c21d8d8f1539c1003ea4837f83d (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-06T12:30:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Carlos Weber.pdf: 4500309 bytes, checksum: 645a1c21d8d8f1539c1003ea4837f83d (MD5) Previous issue date: 2012-06-12 / Os helmintos são amplamente reconhecidos como organismos reguladores da resposta imune do seu hospedeiro. Um imunomodulador e potente indutor da resposta Th2 é o Trematódeo Schistosoma mansoni que no Brasil, é a espécie que apresenta as taxas mais alarmantes de infecção, principalmente no Nordeste do País. É de amplo conhecimento que a esquistossomose é um fator promotor de bacterioses, sendo descrita também a interação do S. mansoni com bactérias gram-positivas e bactérias anaeróbias. Alguns estudos estabelecem que mesmo com a realização da esplenectomia, os doentes não desenvolvem quadros sépticos graves nos primeiros dias de pós-operatório, assim como não há registro de tais complicações, de forma significativa, durante a história de sua afecção. Outros verificaram a ocorrência de infecção severa pós-esplenectomia (OPSI) caracterizando-as como sepse fulminante, meningite ou pneumonia, ocasionada, na maioria dos episódios, por S. pneumoniae, N. meningitidis e H. influenzae tipo B. Desta forma, não se sabe ao certo se a esquistossomose favorece a translocação microbiana e sepse ou se, em virtude de sua resposta imunológica característica, existe uma proteção do hospedeiro vertebrado contra esse processo e suas consequências. Assim, o objetivo do presente estudo foi analisar o desenvolvimento de sepse através de alterações dos níveis de citocinas do perfil Th1 e Th2, comparando camundongos esquistossomóticos na fase crônica e sem infecção, submetidos ou não a esplenectomia. MATERIAIS E MÉTODO: 24 camundongos Swiss webster fêmeas (Mus musculus) com 35 dias de nascidos foram infectados por suspensão com aproximadamente 50 cercarias e a mesma quantidade de indivíduos foi selecionada para o grupo controle. Noventa dias após a exposição cercariana, 08 camundongos esquistossomóticos e 08 controles foram submetidos à esplenectomia total convencional, assim como 08 outros camundongos de ambos os grupos foram submetidos a cirurgia controle (Sham). Foram realizadas avaliações de contagem de ovos pelo método kato-katz 45 e 97 dias após infecção cercariana. Foram eutanasiados após 100 dias de infecção. Para estudo da Translocação bacteriana (TB), foi coletado sangue periférico, fragmentos de linfonodos mesentéricos, baço e fígado. Para a investigação da microbiota, as fezes foram coletadas da região média do intestino delgado. Foi realizado ensaio multiplex com sangue coletado por punção cardíaca para dosar os níveis séricos de IL-1β, IL-2, IL-4, Il-5, IL-10, IL-12 INF-γ, TNF-α, GM-CSF. RESULTADOS: No grupo esplenectomizado, todas as unidades amostrais tiveram sepse. O micro-organismo de maior frequência nas fezes e com TB foi a E. coli. Micro-organismos no baço, fígado e sangue foram encontrados em todos os indivíduos infectados do grupo esplenectomizados e em 62,5% dos infectados do grupo controle, sendo estes apenas no baço. A média do número de ovos por g/fezes foi maior no 45º dia que no 97º dia da infecção (p=0,005) em todos os subgrupos. Entretanto, a diferença foi encontrada apenas no subgrupo de Esplenectomizados (p<0,05), sendo a diferença na ovoposição antes e depois da esplenectomia de aproximadamente 79%. Em relação aos níveis médio de IL-2 e IL-4, não houve diferença nas comparações inter e intra-grupos, ou seja, não há efeito do procedimento nem da infecção. Observa-se que os níveis médios de IL-5 se diferenciam entre os grupos infectados e na análise intra-grupo há um aumento da IL-5 sob a condição da infecção. Diferença significativa na IL-10 foi observada quando comparados os infectados entre os três grupos, onde a média do IL-10 foi maior no grupo sem procedimento e Sham. Na avaliação dos níveis de IL-12, não foram observadas diferenças quando comparados os infectados entre grupos esplenectomizados, sham e sem procedimento. Na análise do TNF foi observada diferença quando comparados os infectados entre os grupos controle e Sham, onde a média do TNFα entre os controles foi maior. Na análise do INF observa-se grande variabilidade nos grupos infectados submetidos a esplenectomia e estresse cirúrgico, o que explica a não diferença entre eles quando comparados ao controle. Diferença no nível sérico de GM-CSF foi observada entre os infectados e não infectados do grupo Sham onde o grupo infectado apresentou concentração média maior. CONCLUSÃO: Esquistossomose crônica modifica a resposta imune e pode favorecer translocação, migração e sepse em camundongos fêmeas. Além disso, a asplênia aumenta a suscetibilidade a TB e doenças de origem séptica, por altera mesmo de maneira sutil o perfil imunológico. A polarização do perfil de resposta CD4+ influencia tais fenômenos.

Submitted by Milena Dias (milena.dias@ufpe.br) on 2015-03-11T18:45:04Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Nascimento.pdf: 1454020 bytes, checksum: 73cd5ca8b0b7ae1ddc1a673abfd7e2d9 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-11T18:45:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Nascimento.pdf: 1454020 bytes, checksum: 73cd5ca8b0b7ae1ddc1a673abfd7e2d9 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / CAPES / A inflamação granulomatosa na esquistossomose mansônica acontece quando o ovo fica retido no tecido vivo e não consegue amadurecer ou ser expulso, promovendo alterações patológicas severas no indivíduo infectado. O objetivo deste trabalho foi avaliar quantitativamente as lesões granulomatosas de tecido hepático de camundongos infectados com esquistossomose mansônica, através do uso de lectinas conjugadas a um composto quimiluminescente, o éster de acridina (EA). As lectinas Concanavalina A (Con A), Wheat Germ Agglutin (WGA) e Sambucus Nigra Agglutin (SNA) foram conjugadas ao éster de acridina e incubadas no tecido hepático de camundongos esquistossomóticos. A quimiluminescência foi expressa em Unidades Relativas de Luz (RLU). Fragmentos do tecido hepático infectado e de tecido normal foram incubados com ConA-EA, WGA-EA e SNA-EA e ficou evidenciado que houve um aumento da expressão de α-D-glicose/manose e N-acetilglicosamina nos tecidos infectados em relação ao tecido normal, enquanto que não houve significativa diferença entre os valores de α-NeuNAc-[2→6]-Gal/GalNAc dos fígados infectados e não infectados. Assim, a histoquímica quimiluminescente mostrou-se uma ferramenta eficaz na avaliação de mudanças patológicas causadas por esquistossomose mansônica.