O objetivo do presente estudo foi avaliar a influência do laser em baixa intensidade (LLLT) como coadjuvante ao tratamento não cirúrgico da doença periodontal (DP) experimentalmente induzida em ratos tratados ou não com Sinvastatina. Setenta e oito ratos foram divididos em 2 grupos de 36 animais cada. Os do Grupo Controle (C) receberam administração via oral de polietileno glicol 400; os do Grupo Sinvastatina (S) receberam administração via oral de Sinvastatina, realizada uma vez ao dia e iniciadas 1 dia antes da indução da DP, continuando pós tratamento periodontal até os respectivos períodos de eutanásias. A DP foi induzida através da colocação de ligadura com fio de algodão na região dento - gengival. Após 7 dias da indução, a ligadura foi removida e, os animais dos grupos C e S foram divididos em subgrupos de acordo com os seguintes tratamentos locais: Raspagem, alisamento radicular e irrigação com soro fisiológico (R); R seguido da aplicação do LLLT (GaAlAs, 660 nm, 4J) (RL). Seis animais de cada subgrupo foram eutanasiados aos 7, 15 e 30 dias pós-tratamentos locais. Amostras de biópsias gengivais da região com ligadura foram processadas para mensuração de danos oxidativos teciduais, analisando o teor do tripeptídeo glutationa (GSH) e malondialdeído (MDA), produto final da lipoperoxidação, através de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e, a ocorrência de proteínas carboniladas (CPO), estimada através de reação com dinitrofenilhidrazina. As mandíbulas foram seccionadas para análise radiográfica. O efeito antioxidante da Sinvastatina foi melhor observado na mensuração dos níveis de glutationa reduzida (GSH). O malondialdeído (MDA) não funcionou como um bom marcador de estresse oxidativo neste modelo experimental, o teor de proteínas carboniladas (CPO) aumentaram significativamente (p<0,05) no grupo controle. Além disso, observou-se na análise radiográfica que a associação com laserterapia diminui (p<0,01) o nível de perda óssea na superfície mesial dos dentes com periodontite experimental. Dentro dos limites deste estudo, pode-se concluir que o RL e a Sinvastatina foram efetivos como tratamentos coadjuvantes à R, protegendo a ocorrência de danos oxidativo teciduais, e reduzindo a perda óssea em periodontite experimentalmente induzida em ratos. / The aim of this study was to evaluate the influence of low intensity laser (LLLT) as an adjunct to non-surgical treatment of periodontal disease (PD) experimentally induced in rats treated or not with simvastatin. Seventy-eight rats were divided into 2 groups of 36 animals each. Control group (C) received oral administration of polyethylene glycol 400, whiles sinvastatin group (S) received oral administration of sinvastatin. Both treatments started once a day before the induction of DP, continuing until respective periods of euthanasia. The DP was induced by placing cotton ligature in the supragingival region. After 7 days, the ligature was removed, the animals from both groups were divided into subgroups according to the following local treatments: Scaling and root planning (SRP) and irrigation with saline (R); R followed by application of LLLT (GaAlAs, 660 nm, 4J) (RL). Six animals of each group were euthanized at 7, 15 and 30 days post treatment. Samples of gingival tissues from ligature regions were processed for measurement of oxidative tissue damage by analyzing the content of the tripeptide glutathione (GSH) and malondialdehyde (MDA), the end product of lipoperoxidation by means of high performance liquid chromatography (HPLC), and the occurrence of protein carbonyls content (PCO), estimated by reaction with dinitrophenylhydrazine. The mandibles were sectioned for radiographic analysis. The antioxidant effect of Simvastatin was best observed in the measurement of reduced glutathione (GSH) levels. The malondialdehyde (MDA) does not work as a good marker of oxidative stress in this experimental model, the content of carbonylated protein (PCO) increased significantly (p <0,05) in the control group. In addition, it was observed during radiographic analysis that combination with laser therapy decreases (p <0,01) the bone loss level on the mesial surface of teeth with experimental periodontitis. Restricted to these experimental conditions, the results pointed out to major efficacy of RL and simvastatin concerning to minimize oxidative damage to gingival tissue, and to reducing periodontitisassociated bone loss in rats. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de 4-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidine-1-oxil (Tempol), um antioxidante sintético da classe dos nitróxidos, como coadjuvante ao tratamento mecânico de raspagem e alisamento radicular (RAR) da doença periodontal (DP) experimentalmente induzida em ratos. Sessenta ratos (machos, linhagem Wistar) foram divididos em três grupos de dezoito animais: Grupo T recebeu administração do nitróxido (1mg/Kg de peso corpóreo, via oral) realizada uma vez ao dia, iniciada um dia antes da indução da DP até os respectivos períodos de eutanásia, o Grupo C recebeu administração do veículo e o Grupo T1 começou a receber Tempol somente após o tratamento de RAR até os respectivos períodos de eutanásia. A doença periodontal (DP) foi induzida por meio de ligadura com fio de algodão na região dento-gengival do primeiro molar inferior esquerdo. Decorridos 7 dias, a ligadura foi removida e todos os animais foram tratados com raspagem e alisamento radicular (RAR) seguida de irrigação local com soro fisiológico. Após 7, 15 ou 30 dias, os animais foram eutanasiados e amostras de biópsias gengivais da região com ligadura foram processadas para mensuração dos danos oxidativos teciduais. Os marcadores deste processo, teor do tripeptídeo glutationa em sua forma reduzida (GSH), os níveis de malondialdeído (MDA), um produto final de lipoperoxidação e a ocorrência de proteínas carboniladas (CPO) foram quantificadas através de cromatografia líquida de alta eficiência e espectrofotometricamente (CLAE). As mandíbulas foram seccionadas para análise radiográfica. O modelo experimental induziu danos oxidativos significativos associados à indução de DP, causando queda de GSH e aumento de CPO e MDA (p<0,05) em relação ao grupo controle e ao índice basal destes metabólitos. O tratamento com Tempol foi eficaz na prevenção e tratamento dessas lesões oxidativas, de forma tempo-dependente, notoriamente na diminuição de CPO e na preservação de GSH tissular. Na análise radiográfica pode-se observar que Tempol administrado antes da indução da DP foi capaz de diminuir a reabsorção óssea em relação ao grupo C e ao grupo T1, principalmente aos 30 dias (p<0,05). Os resultados indicam que a administração oral de Tempol pode ser uma estratégia farmacológica a ser utilizada como adjuvante ao tratamento de periodontite, aumentando a eficácia de procedimentos terapêuticos por meio do controle do estresse oxidativo. / This study focused the effect of oral nitroxide administration on gingival oxidative stress markers and alveolar bone loss associated to periodontitis. Two different strategies of oral treatment with the nitroxide: preventive or therapeutic, were employed to establish the efficiency of the piperidine compound as a adjuvant to scaling and root planing mechanical treatment. Cotton ligatures were placed around the cervical area of the left mandibular first molars of male rats. Nitroxide Tempol (1 mg/kg/daily) or vehicle alone was orally administrated to animals before or post ligature-induced periodontitis. The animals were subject to mechanical treatment simultaneously to ligature removal. At different experimental periods (7, 15 or 30 days), gingival oxidative markers (reduced glutathione, malondialdehyde and protein carbonyl content) were measured in sample homogenates from animals. Bone loss was assessed by radiographyc assay. There was a greater increase in gingival oxidative markers and alveolar bone loss due to induced periodontitis. Nitroxide treatment in a preventive manner was more efficient to partially prevent both periodontitis-associated events them that therapeutic nitroxide administration after induction of experimental periodontitis. Oral nitroxide administration showed beneficial effects on periodontal structures during and after induction of experimental periodontitis. Within the limits of this study, it can be concluded that piperidine nitroxide, which is proposed for different inflammatory processes treatment, can also be used as a protective and therapeutic agent for periodontal disease in an adjunctive manner to mechanical non-surgical treatment.

O antantreno é um hidrocarboneto hexacíclico aromático (HPA) bastante difundido no meio ambiente e que não apresenta as regiões de baía ou fjord, que em geral, conferem alta reatividade a esses compostos após oxidação. Entretanto, sua mutagenicidade em bactérias após ativação metabólica é comparável à do Benzopireno (BP) e, com base na sensibilidade das linhagens de S. typhimurium utilizadas, os metabólitos do antantreno causam substituições de pares de base, trocas de fita e possivelmente dano oxidativo ao DNA. Alguns dos metabólitos que apresentam ação genotóxica em bactérias foram recentemente identificados, mas uma investigação mais ampla considerando a ligação desses e outros possíveis metabólitos a biomoléculas, com a identificação dos adutos formados, pode contribuir para um melhor esclarecimento das vias envolvidas em sua genotoxicidade. Neste trabalho investigamos a reação do antantreno (oxidado quimicamente e pelo sistema HRP/H2O2) com dG e DNA in vitro, tendo sido observada a formação de possíveis adutos nas análises por HPLC/ESI/MS, HPLC/UV/Fluorescência e espectrofluorimetria. Células de carcinoma hepatocelular humano (HepG2) e hepatócitos de fígado humano normal (THLE-2) foram incubadas com antantreno e seus produtos de oxidação (quinonas e hidroquinonas acetiladas), verificando-se citotoxicidade dose dependente em diferentes condições de cultura. Uma vez que a sobrevivência relativa das células THLE-2 cultivadas sobre filme de colágeno e em meio PFMR-4 se assemelhou à sobrevivência relativa das células HepG2 cultivadas em meio DME e sem filme de colágeno, utilizamos as células HepG2 para análise de dano oxidativo. Produtos de oxidação do antantreno (quinonas e hidroquinonas acetiladas) induziram a formação de 8-oxodGuo no DNA celular. Os dados obtidos nos indicam que duas vias podem estar envolvidas na genotoxicidade do antantreno observada nos estudos com S.typhimurium realizados por Platt et al. (2002): indução de dano oxidativo e formação de adutos com o DNA. / Anthanthrene is a polycyclic aromatic hydrocarbon (PAH) widely spread in the environment and does not have the bay or fjord regions, which in general provide high reactivity to these compounds after oxidation. However, its mutagenic activity to bacteria after metabolic activation is comparable to that of benzopyrene (BP) and, based on the sensitivity of the S. typhimurium strains used, anthanthrene metabolites cause base pair substitutions, DNA strand exchanges, and possibly DNA oxidative damage. Some of the metabolites that are genotoxic to bacteria have been recently identified, but a better investigation on how these and other possible metabolites react with biomolecules, identifying the generated adducts, can contribute to clarify the ways involved in its genotoxicity. In the present work we investigated the reaction of anthanthrene (chemically oxidized or oxidized by the HRP/H2O2 system) with dG and DNA in vitro. The formation of possible adducts was observed in the analyses by HPLC/ESI/MS, HPLC/UV/Fluorescence and spectrofluorimetry. Human hepatocelular carcinoma cell line (HepG2) and normal human liver hepatocytes (THLE-2) were incubated with anthanthrene and its oxidation products (quinones and acetyladet hidroquinones). Dose dependent cytotoxity was observed under different culture conditions. As the relative survival of the THLE-2 cells grown on a film of collagen in PFMR-4 medium was very close to the relative survival of the HepG2 cells grown in DME medium, without the collagen film, we used the HepG2 cells for analysis of oxidative damage. Anthanthrene oxidation products (quinones and acetylated hidroquinones) induced 8-oxodGuo formation in the cellular DNA. Data obtained indicate that two ways may be involved in the genotoxicity of anthanthrene observed in the S. typhimurium studies conducted by Platt et al. (2002): DNA oxidative damage and adducts formation.

Orientador: Lenice do Rosario de Souza / Resumo: Ao analisar as atuais causas dos óbitos das pessoas que vivem com HIV/aids (PVHA), diferentemente da era pré-cART (terapia antirretroviral combinada), destacam-se doenças típicas do envelhecimento, tais como dislipidemias, doenças cardiovasculares, diabetes mellitus, entre outras, que aparecem de forma muito precoce nesta população. Tal fenômeno ocorre devido às persistentes ativação imune e inflamação crônica em PVHA, que são favorecidas pela interação da HMGB1 - high mobility group box protein-1 - e dos produtos finais de glicação avançada (AGEs), com seu receptor (RAGE), presente na superfície da membrana celular. Em sua forma solúvel, sRAGE é uma provável supressora da ativação imune por sequestrar os ligantes e evitar a interação deles com a forma transmembrana, anulando assim, seus efeitos. Além disso, a translocação microbiana e o estresse oxidativo têm sido estudados como potencializadores dessa cascata inflamatória e, em PVHA, níveis de sCD14 e de produtos de peroxidação lipídica, tais como o malondialdeído (MDA) e 8-isoprostano, estão elevados em relação aos indivíduos não-infectados, enquanto que o sistema antioxidante dos portadores do vírus, incluindo a capacidade antioxidante total (CAT), vitaminas e seus precursores, também é considerada deficiente. Portanto, esses marcadores estão relacionados, tanto com a própria evolução para a doença, quanto com o aparecimento e gravidade das comorbidades não-associadas a aids. Objetivos: avaliar a influência da cART e das... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Analyzing the current causes of deaths of people living with HIV/AIDS (PLWHA), it turns out that, unlike the pre-cART era (combination antiretroviral therapy), the highlights are typical manifestations of aging, such as dyslipidemia, cardiovascular disease and diabetes mellitus, which appear early in this population. This phenomenon occurs because of persistent immune activation and chronic inflammation in PLWHA, which are favored by the interaction of HMGB1 (high mobility group box protein-1) and AGEs (advanced glycation end-products), with the receptor RAGE, present in surface of the cell membrane. In its soluble form, sRAGE competes with the transmembrane receptor sequestering its ligands and preventing the activation of proinflammatory pathways. Furthermore, microbial translocation and oxidative stress have been studied as enhancers of this inflammatory cascade. Compared to the non-infected individuals, in PVHA the sCD14 and product levels of lipid peroxidation, such as malondialdehyde (MDA) and 8-isoprostane are increased, while their antioxidant system, including the total antioxidant capacity (TAC), vitamins and their precursors are deficient. Therefore, these markers are related both to the evolution of the disease itself, as with the onset and severity of non-AIDS comorbidities. Objectives: to evaluate the influence of cART and CD4+ T cells counts on plasma levels of sRAGE, AGEs, HMGB1, sCD14, cytokines, MDA, 8-isoprostane, TAC, vitamins, C-reactive protein (CRP) an... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Cristina Antoniali Silva / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre os níveis de biomarcadores de estresse/ dano oxidativo na saliva de crianças e a severidade de cárie dentária classificada pelo Sistema Internacional de Classificação e Gerenciamento de Cárie (ICCMS™, termo em inglês International Caries Classification and Management System). Amostras de saliva não estimuladas foram coletadas de pacientes de 1-3 anos de idade, após 2 horas de jejum, no período da manhã, em uma creche do município de Birigui, SP, Brasil. As crianças foram divididas em 4 grupos (n=30/grupo), de acordo com a severidade de cárie, sendo livre de cárie (grupo A), lesão de cárie em estágio inicial (grupo B), lesão de cárie intermediaria (grupo C) e lesão de cárie em estágio avançado (grupo D). Foram avaliados os seguintes biomarcadores salivares de estresse oxidativo: dano oxidativo ou malonaldeído (MDA), mensurado pelo método de TBARS; capacidade antioxidante total (TAC), medida pelo ensaio do poder antioxidante férrico redutor; atividade antioxidante enzimática da superóxido dismutase (SOD) e atividade antioxidante não enzimática do ácido úrico (UA). Os dados foram analisados por ANOVA, seguido do teste de Student-Newman-Keuls, coeficientes de correlação de Pearson e Spearman, e regressão linear multivariada (p <0,05). Os resultados demonstraram que a quantidade de proteína total, TAC, atividade antioxidante enzimática e não-enzimática salivar aumentaram de acordo com a severidade das lesões de cárie, levando a r... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to evaluate the relationship between the levels of biomarkers of oxidative stress / oxidative damage in children's saliva and the severity of dent al caries classified by the International Caries Classification and Management System (ICCMS TM ) . Unstimulated saliva samples were collected from patients 0 - 3 years old after 2 hours of fasting in the morning in a day care center in Birigui municipality. Th e children were divided into 4 groups (n = 30 / group), according to caries severity, being caries free (group A), early caries lesion (group B), inte rmediate caries lesion (group C ) and advanced carious lesion (group D). The following salivary biomarkers of oxidative stress were evaluated: oxidative or malonaldehyde damage (MDA), measured by the TBARS method; total antioxidant capacity (TAC), as measured by the ferric reducing antioxidant power test; enzymatic antioxidant activity of superoxide dismutase ( SOD) and non - enzymatic antioxidant activity of uric acid (UA). Data were analyzed by ANOVA, followed by Student - Newman - Keuls test, Pearson and Spearman correlation coefficients, and multivariate linear regression (p <0.05). The results sh owed that the conc entration of total protein, TAC, enzymatic antioxidant and non - enzymatic salivary activity increased according to the severity of caries lesions, leading to reduction of salivary oxidative damage. We can conclude that the greater the severity of caries les ions, the greater the... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Francine Silva (francine.silva@unipampa.edu.br) on 2016-09-28T21:17:01Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Potencial protetor do Extrato de Psidium guajava frente à toxicidade induzida pelo organofosforato Clorpirifós em Drosophila melanogaster.pdf: 1278673 bytes, checksum: fb86ba9285bb81b1327ca36aa998f903 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-28T21:17:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Potencial protetor do Extrato de Psidium guajava frente à toxicidade induzida pelo organofosforato Clorpirifós em Drosophila melanogaster.pdf: 1278673 bytes, checksum: fb86ba9285bb81b1327ca36aa998f903 (MD5) Previous issue date: 2015-05-20 / Clorpirifós (CP) é um inseticida organofosforado amplamente utilizado no controle de pragas agrícolas e domésticas. O principal dano causado pelo CP é a neurotoxicidade induzida pela inibição da enzima acetilcolinesterase, o que ocasiona um aumento no neurotransmissor acetilcolina e promove uma hiperexitação no sistema nervoso central e junções musculares, levando a perturbações do funcionamento fisiológico. A exposição ocupacional é uma das principais formas de intoxicação humana por organofosforados e as terapias atuais para estes compostos não são totalmente eficientes. Nesse sentido a procura por compostos capazes de reverter esses danos tem se intensificado e alguns estudos têm focado seus esforços sobre os efeitos de proteção de plantas ou compostos naturais em várias condições neuropatológicas. Psidium guajava é uma planta amplamente utilizada na medicina popular e a sua atividade antioxidante foi descrita, no Brasil as folhas e os frutos são utilizados para a anorexia, cólera, diarréia, problemas digestivos, disenteria, insuficiência gástrica, inflamação das membranas mucosas, laringite, problemas de pele, dor de garganta, úlceras, entre outros. Neste estudo foi avaliado o potencial antioxidante e protetor do extrato hidroalcoólico de P. guajava (HEPG) contra a toxicidade induzida por CP na mosca da fruta Drosophila melanogaster. A atividade antioxidante de HEPG in vitro foi confirmada pelos ensaios de ABTS, DPPH, fenóis totais e FRAP. A exposição das moscas ao CP causou aumento da mortalidade, deficiências locomotoras e inibição da acetilcolinesterase. Moscas expostas ao CP apresentaram aumento de ROS e peroxidação lipídica, acompanhado por uma diminuição significativa na viabilidade mitocondrial. Como resposta ao aumento do estresse oxidativo, moscas expostas ao CP mostraram aumento da atividade da GST e nos níveis de GSH. A expressão de mRNA de NRF2 e MPK2 (que codifica p38MAPK em D. melanogaster) também foram significativamente super regulados. HEPG foi capaz de restaurar todos os danos e alterações bioquímicas/moleculares causados pelo CP. Os nossos resultados mostram pela primeira vez o potencial efeito protetor de P. guajava contra a toxicidade causada por clorpirifós, sugerindo a Psidium guajava como um tratamento alternativo adjunto para o envenenamento por compostos organofosforados. / Chlorpyrifos (CP) is an organophosphate insecticide widely used for control agricultural and household pests. The main damage caused by the CP is the neurotoxicity induced by inhibition of the enzyme acetylcholinesterase, which causes an increase in the neurotransmitter acetylcholine and promotes hiperexitação the central nervous system and muscle junctions, leading to disruption of physiologic function. Occupational exposure is a major form of human poisoning by organophosphates and current therapies for these compounds are not fully efficient. In this sense the search for compounds that can reverse this damage has intensified and some studies have focused their efforts on plants protection purposes or natural compounds in various neuropathological conditions. Psidium guajava is a plant widely used in popular medicine and its antioxidant activity was described in Brazil leaves and fruit are used for anorexia, cholera, diarrhea, digestive problems, dysentery, gastric insufficiency, inflammation of mucous membranes, laryngitis, skin problems, neck pain, ulcers, among others. In this study we evaluated the antioxidant and protective potential of the hydroalcoholic extract of P. guajava (HEPG) against CP induced toxicity in the fruit fly Drosophila melanogaster. HEPG in vitro antioxidant activity was confirmed by ABTS, DPPH, Total Phenolics and FRAP assays. The exposure of flies to CP caused increased mortality, locomotor deficits and inhibition of acetylcholinesterase. Flies exposed to CP presented elevated ROS and lipid peroxidation which was accompanied by a significant decrease in mitochondrial viability. As a response to increased oxidative stress, CP exposed flies showed increased in GST activity and GSH levels. The mRNA expression of NRF2 and MPK2 (which encodes D. melanogaster p38MAPK) were also significantly up-regulated. HEPG was able to restore all the damage and biochemical/molecular alterations caused by CP. Our results show for the first time the potential of P. guajava protective effect against the toxicity caused by Chlorpyrifos, suggesting Psidium guajava as an adjunct alternative treatment for poisoning by organophosphorus compounds.

Orientador: Marina Politi Okoshi / Resumo: Alterações da musculatura esquelética estão envolvidas na diminuição da capacidade física que ocorre após infarto do miocárdio (IM). Diversos mecanismos podem participar das anormalidades musculares como aumento do estresse oxidativo, alterações da expressão de proteínas quinases ativadas por mitógeno (MAPKs) e do fator nuclear (NF)-κB, desequilíbrio entre processos anabólicos e catabólicos, e alterações metabólicas. Embora exercícios têm sido preconizados para pacientes estáveis, os efeitos do exercício resistido após IM e os mecanismos envolvidos em seus efeitos ainda não estão completamente esclarecidos. O exercício resistido modula o trofismo por meio de ativação de células satélites. Neste estudo, comparamos os efeitos de dois tipos de exercício, aeróbio e resistido, iniciados durante a fase de remodelação cardíaca compensada, sobre alterações fenotípicas e moleculares do músculo gastrocnêmio de ratos com IM. Métodos: Três meses após indução de IM, ratos Wistar foram divididos nos grupos Sham (n=20); IM sedentário (IM-S, n=9); IM submetido a exercício aeróbico (IM-A, n=9); e IM submetido a exercício resistido (IM-R, n=13). Os ratos foram treinados três vezes por semana, durante três meses, em esteira ou escada. Avaliação cardíaca foi realizada por ecocardiograma, antes e após o treinamento. A produção de espécies reativas de oxigênio foi avaliada por imunofluorescência e a expressão de proteínas oxidadas por Western blot. Marcadores do estresse oxidativo e do metabolismo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Skeletal muscle changes contribute to reduced physical performance after myocardial infarction (MI). Exercise has been recommended to stable patients. However, the effects of resistance exercise after MI are not clear. We compared the effects of two types of exercise, aerobic and resistance, initiated during compensated cardiac remodeling, in gastrocnemius muscle of infarcted rats. Methods: Three months after MI induction, Wistar rats were divided into four groups: Sham (n=20); sedentary MI (MI-S; n=9); aerobic exercised MI (MI-A; n=9); and resistance exercised MI (MI-R; n=13). Exercised rats trained three times a week for 12 weeks on treadmill or vertical ladder. Energy metabolism, oxidative stress markers, and antioxidant enzyme activities were assessed by spectrophotometry. Markers of satellite cells activation (MyoD, NCAM, and myosin heavy chain neonatal isoform) were assessed by immunofluorescence or Western blot (Pax-7). Statistical analyzes: ANOVA or Mann Whitney. Results: Aerobic physical capacity was greater in MI-A group and maximum carrying load higher in MI-R. Cardiac structures and left ventricular function evaluated by echocardiogram did not differ between the infarcted groups. Histological analyzes showed that MI size and gastrocnemius cross sectional area did not differ between infarcted groups. Oxygen reactive species production was higher in MI-S than Sham and lipid hydroperoxide concentration was lower in MI-A than the other groups. Catalase activity was hi... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-05-22T12:04:56Z No. of bitstreams: 1 469226 - Texto Completo.pdf: 1935172 bytes, checksum: ed87439b55bcfab4db835f100fcb8202 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-22T12:04:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 469226 - Texto Completo.pdf: 1935172 bytes, checksum: ed87439b55bcfab4db835f100fcb8202 (MD5) Previous issue date: 2015-03-19 / Agrochemicals are water contaminants, resulting from anthropogenic activities, having as main objective the elimination of some form of life and, therefore, being harmful even to non-target species. It is utmost importance the standardization and the use of bioindicators, especially of native organisms, besides the development of toxicity tests or bioassays to assess the impacts of the agroindustrial activities. Thus, it was sought to identify possible biochemical changes, to evaluate the oxidative balance and the survival of individuals of catfish Rhamdia quelen, in two aged groups, facing acute toxicity tests with different concentrations of Roundup? (glyphosate: 18, 36, 72 and 144?g/L), Primoleo? (atrazine: 2.5, 5, 10 and 15?g/L) and Facet? (quinclorac: 1.75, 3.5, 7 and 14?g/L). The procedures were performed with fingerlings (individuals with total length between 6 and 8 cm) and sexually newly matured individuals, called young-adult (with total length of more than 18 cm). All the animals were purchased from a farm and were kept for 7 days in a period called Acclimatization. After, agrochemicals were applied individually, at concentrations similar to those reported for the natural environment and allowed by law in our country. After 7 days of exposuring to the agrochemical, the animals were euthanized by cervical spinal cord section and the gill, liver, kidney and muscle tissues were separated and frozen at -20?C. In fingerlings, pools were performed, grouping the tissue from three individuals, due to their low weight; the tissues from young-adult were analyzed individually. It was estimated the effect of this agrochemicals on intermidiate metabolism, by determining the glycogen levels, total proteins, total lipids and triacylglycerols, on the two length ranges. It was also evaluated the effect of this agrochemicals on the oxidative status determining the activity of superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT), and levels of lipid peroxidation (TBARS) in all the tissues from the animals on the two length ranges. The experimental procedures and the biochemical readings were performed in triplicate. It was also observed the effect of this agrochemicals on the survival of the individuals in experimental culture conditions, in both aged groups, searching for confirmation of sublethallity of determined concentrations for testing. The results are organized into three articles. The first is entitled Metabolic parameters and oxidative balance Rhamdia quelen changed after exposure to herbicides of rice crops (Roundup?, Primoleo? and Facet?), for submission to the journal Archives of Environmental Contamination and Toxicology, which presents the results obtained for the metabolism and the oxidative balance of fingerlings, which seem to have been able to modulate their enzymes as not to suffer oxidative damage front to Roundup? herbicide (by increasing CAT) and Primoleo? (without changes in SOD and CAT). The Facet? led to the increase of lipid peroxidation, especially in the gill, kidney and muscle tissues, despite the higher SOD, prejudicing the species significantly. The biochemical composition tissue of juveniles of R. quelen changed significantly, which may cause damages, mainly in the gill tissue, leading to a loss of homeostasis and it may result the death of the animals and/or the decrease of the reproductive success, when chronically exposed to these substances and concentrations. The second article entitled Metabolic changes in silver catfish exposed to herbicide of rice crop Roundup?, Primoleo? and Facet?, is concerned to the young-adult metabolism, for submission to the journal Environmental Pollution. There were changes in the metabolic profile of all sampled tissues, showing a differentiated tissue responsiveness, being the gills and the kidneys the most affected organs by the exposure to agrochemicals. The herbicide Facet? changed the gill tissue significantly, and it was suggested that the relevant Brazilian agencies regulate its use in protective standards for the environment. Finally, the third manuscript Article Oxidative status and lipid peroxidation determined by the exposure to agrochemicals Roundup?, Primoleo? and Facet? in Rhamdia quelen approaches the oxidative stress suffered by young-adults to be submitted to the journal Ecotoxicology and Environmental Safety. In this work the liver and kidney tissues were the most affected, and it can be infered that the Facet? (quinclorac) was the most toxic herbicide to the sexually newly matured individuals, followed by Primoleo? (atrazine) and after by Roundup? (glyphosate). One can suggest, from this set of results, a review of the current legislation in our country, to include products with the quinclorac active principle into the toxic list to be controlled in the natural environment. / Os agroqu?micos s?o contaminantes aqu?ticos decorrentes das atividades antropog?nicas, tendo como principal objetivo a elimina??o de alguma forma de vida, sendo, portanto, lesivos inclusive ? esp?cies n?o-alvo. ? de extrema import?ncia a padroniza??o e a utiliza??o de esp?cies bioindicadoras, em especial de organismos aut?ctones, al?m do desenvolvimento de testes de toxicidade ou bioensaios para avalia??o dos impactos decorrentes das atividades agroindustriais. Assim, buscou-se verificar poss?veis altera??es bioqu?micas, avaliar o balan?o oxidativo e a sobreviv?ncia de indiv?duos do jundi? Rhamdia quelen, em duas faixas et?rias, frente a testes de toxicidade aguda com diferentes concentra??es de Roundup? (glifosato: 18, 36, 72 e 144?g/L), Primoleo? (atrazina: 2,5, 5, 10 e 15?g/L) e Facet? (quinclorac: 1,75, 3,5, 7 e 14?g/L). Foram realizados os procedimentos com alevinos (indiv?duos com comprimento total entre 6 e 8 cm) e indiv?duos rec?m-maturados sexualmente, chamados alevin?es (com comprimento total superior a 18 cm). Todos os animais foram comprados de uma piscicultura e permaneceram por 7 dias em um per?odo denominado Aclimata??o. Ap?s, os agroqu?micos foram aplicados individualmente, em concentra??es semelhantes ?s relatadas para o ambiente natural e permitido pela legisla??o vigente em nosso pa?s. Ap?s 7 dias de exposi??o ao agroqu?mico, os animais foram eutanasiados por sec??o de medula cervical, e foram separados os tecidos branquial, hep?tico, renal e muscular, sendo congelados a -20?C. Nos alevinos, foram realizados agrupamentos dos tecidos de tr?s indiv?duos, devido seu baixo peso; os tecidos dos alevin?es foram analisados individualmente. Estimou-se o efeito destes agroqu?micos sobre o metabolismo intermedi?rio, atrav?s da determina??o dos n?veis de glicog?nio, prote?nas totais, lip?deos totais e triacilglicer?is, nas duas faixas de comprimento. Avaliouse tamb?m o efeito destes agroqu?micos sobre o status oxidativo determinando a atividade das enzimas super?xido dismutase (SOD) e catalase (CAT), al?m dos n?veis de lipoperoxida??o (TBARS) nos quatro tecidos dos animais, das duas faixas de comprimento. Os procedimentos experimentais e as leituras biqu?micas foram realizados em triplicata. Ainda observou-se o efeito destes sobre a sobreviv?ncia dos indiv?duos em condi??es de cultivo experimental, nas duas faixas et?rias, buscando a confirma??o da subletalidade das concentra??es determinadas para os testes. Os resultados est?o organizados em tr?s artigos, sendo o primeiro intitulado Par?metros metab?licos e balan?o oxidativo de Rhamdia quelen alterado frente ? exposi??o a herbicidas de lavoura de arroz (Roundup?, Primoleo? e Facet?), para a submiss?o ? Revista Archives of Environmental Contamination and Toxicology, onde s?o apresentados os resultados obtidos para o metabolismo e o balan?o oxidativo dos alevinos, que parecem ter conseguido modular suas enzimas a ponto de n?o sofrerem dano oxidativo frente aos herbicidas Roundup? (pelo aumento da CAT) e Primoleo? (sem altera??es nas enzimas SOD e CAT). O Facet? provocou o aumento da lipoperoxida??o, principalmente nos tecidos branquial, renal e muscular, apesar da eleva??o da SOD, agredindo significativamente a esp?cie. A composi??o bioqu?mica tecidual dos juvenis de R. quelen sofreu altera??es significativas, podendo acarretar a danos principalmente no tecido branquial, conduzindo ? perda da homeostase e podendo acarretar na morte dos animais e/ou a diminui??o do sucesso reprodutivo, quando expostos cronicamente a estas subst?ncias e nestas concentra??es. O 2? artigo, intitulado Altera??es metab?licas em jundi?s expostos aos herbicidas de lavoura de arroz Roundup?, Primoleo? e Facet?, versa sobre o metabolismo de alevin?es, para submiss?o ? Revista Environmental Pollution. Houve altera??es no perfil metab?lico de todos os tecidos amostrados, evidenciando uma responsividade tecidual diferenciada, sendo as br?nquias e os rins os ?rg?os mais afetados com a exposi??o aos agroqu?micos. O herbicida Facet? alterou significativamente o tecido branquial, sendo sugerido que os ?rg?os brasileiros competentes regulamentem o seu uso em normas protetivas ao meio ambiente. Por fim, o manuscrito do artigo Status oxidativo e lipoperoxida??o determinados pela exposi??o aos agroqu?micos Roundup?, Primoleo? e Facet? em Rhamdia quelen, aborda o estresse oxidativo sofrido pelos alevin?es, a ser submetido ? Revista Ecotoxicology and Environmental Safety. Neste trabalho os tecidos hep?tico e renal foram os mais afetados, e podemos inferir que o Facet? (quinclorac) foi o agroqu?mico mais t?xico aos indiv?duos rec?m-maturados sexualmente, seguido do Primoleo? (atrazina) e ap?s o Roundup? (glifosato). Podese, a partir deste conjunto de resultados, sugerir uma revis?o na legisla??o vigente em nosso pa?s, a fim de incluir produtos com o princ?pio ativo quinclorac na lista de t?xicos a serem controlados no ambiente natural.

A ovariectomia bilateral em ratas é um dos modelos experimentais utilizados para se analisar a menopausa e as possíveis estratégias para amenizar os efeitos deletérios desta condição. A suplementação da dieta com antioxidantes vem sendo utilizada para diminuir o risco de estresse oxidativo, que está aumentado na menopausa. Nesse estudo, foram analisados os efeitos do ácido lipoico (AL) e dos ômegas-3 (ácido docosahexaenóico (DHA) e ácido eicosapentaenóico (EPA)) no fígado, através da suplementação da dieta de ratas ovariectomizadas. O ácido lipoico foi escolhido em virtude da sua capacidade antioxidante, pela conhecida característica de ser cofator de enzimas chave no metabolismo celular e por inibir alguns mecanismos pró- inflamatórios. Essas características são importantes em virtude da disfunção mitocondrial e do aumento dos níveis de citocinas inflamatórias, que estão presentes após a menopausa. Os demais ácidos graxos poli-insaturados foram utilizados por possuírem alta capacidade antioxidante e estarem bem estabelecidos como protetores endoteliais. Além disso, também exercem efeitos anti-inflamatórios e são capazes de normalizar os níveis de lipídios na circulação sanguínea. Os resultados demonstram que o ácido lipoico é capaz de atuar no fígado e recuperar a atividade da enzima fumarase e a atividade das enzimas antioxidantes superóxido dismutase mitocondrial (MnSOD) e glutationa peroxidase (GPx), além de diminuir o dano oxidativo em proteínas e manter os níveis de malondialdeído (MDA) semelhantes ao grupo controle. No entanto, não exerceu influência na atividade da superóxido dismutase citosólica (CuZnSOD). A suplementação com DHA e EPA restaurou os níveis das duas classes de superóxidos dismutase, mas, não conseguiu restaurar a atividade da GPx e da fumarase. Os níveis de proteínas danificadas foram menores em todos os animais suplementados com ômega-3 em relação ao grupo controle e ao grupo ovariectomizado sem suplementação. Além disso, os suplementos também atuaram na redução dos níveis de nitritos e nitratos pois possuem propriedades anti-inflamatórias, sobretudo o ácido lipoico, que inibe a oxido nítrico sintase induzível (ONi) de macrófagos. Os níveis de vitamina C não apresentaram diferença entre os grupos SHAM, OVX, AL e DHA. Mas, o grupo EPA apresentou níveis de vitamina C inferiores aos dos grupos SHAM e OVX. Além disso, os níveis de vitamina E se mostraram inferiores nos grupos suplementados com os ácidos graxos poli-insaturados de cadeia longa. Neste trabalho, os antioxidantes assumiram um papel importante na diminuição do dano oxidativo e na recuperação da atividade de enzimas importantes na homeostase celular, alterações essas, causadas pela diminuição drástica dos níveis de estrogênio no modelo de menopausa. / The bilateral ovariectomy in rats is one of the experimental models used to analyze the menopause and possible strategies to mitigate the deleterious effects of this condition. Dietary supplementation with antioxidants has been used to decrease the risk of oxidative stress, which is increased in menopause. In this study, it was analyzed the effects of lipoic acid (LA) and the omega -3 (docosahexaenoic acid (DHA) and eicosapentaenoic acid (EPA)) in the liver, through dietary supplementation of ovariectomized rats. The lipoic acid was chosen because of its antioxidant capacity, its known characteristic of being cofactor for key enzymes in cellular metabolism, and inhibition of some proinflammatory mechanisms. These characteristics are important because of mitochondrial dysfunction and increased levels of inflammatory cytokines, that are present after menopause. The other polyunsaturated fatty acids were used due to their high antioxidant capacity and well established endothelial protective role. Furthermore, they also exert anti-inflammatory effects and are able to normalize the lipid levels in the bloodstream. The results showed that lipoic acid is capable of acting in the liver and recover the activities of the fumarase enzyme and the antioxidant enzymes mitochondrial superoxide dismutase (MnSOD) and glutathione peroxidase (GPx), and reducing oxidative damage of proteins and maintaining the levels of malondialdehyde (MDA) similar to the control group. However, lipoic acid had no influence on the activity of cytosolic superoxide dismutase (CuZnSOD). Supplementation with DHA and EPA restored the levels of both classes of superoxide dismutase, but was unable to restore the activity of GPx and fumarase. The levels of damaged proteins were lower in all animals supplemented with omega -3 when compared to the sham and ovariectomized groups without supplementation. Also, the supplements were active in reducing levels of nitrites and nitrates, since they have anti -inflammatory properties, especially lipoic acid, which inhibits nitric oxide synthase inducible (iNOS) of macrophages. Vitamin C levels did not differ between the SHAM, LA, OVX and DHA groups. But the EPA group presented lower levels of vitamin C than those of SHAM and OVX groups. Nonetheless, levels of vitamin E was inferior in the groups supplemented with long chain polyunsaturated fatty acids. In this work, antioxidants played an important role in reducing oxidative damage and assists recovery of the activity of important enzymes in cellular homeostasis, changes caused by the drastic decrease in estrogen levels in menopausal model.

A ascorbato peroxidase (APX) é uma das principais enzimas do sistema de detoxificação de espécies reativas de oxigênio (ERO) em plantas, catalisando a conversão do peróxido de hidrogênio em água usando o ascorbato como doador de elétrons. No arroz, oito genes codificam APX. O presente estudo teve como objetivo avaliar o papel das enzimas de APXs em arroz, através da determinação das localizações subcelulares das diferentes isoformas, do estudo da expressão gênica e da caracterização detalhada do efeito do silenciamento das isoformas cloroplastídicas (chlAPXs) no metabolismo da planta, em condições normais e na resposta à estresses abióticos. A expressão diferencial das diferentes isoformas de APXs em condições de estresses abióticos varia entre as espécies e com a intensidade e duração do estresse. A localização subcelular de OsAPX1 e OsAPX2 no citosol, OsAPX3 e OsAPX4 nos peroxissomos, OsAPX5 no cloroplasto/mitocôndria, OsAPX6 na mitocôndria e OsAPX7 no cloroplasto foram confirmadas em protoplastos de arroz. Plantas duplamente silenciadas para os genes OsAPX7/OsAPX8 não apresentam alterações fenotípicas, no entanto possuem alterações no metabolismo antioxidante sob condições normais de crescimento. Análises proteômicas dessas plantas revelaram que várias rotas importantes foram afetadas, especialmente proteínas envolvidas com processos fotossintéticos. Plantas silenciadas submetidas a estresse de alta luz (HL) e metil viologênio (MV) mostraram que as chlAPXs são importantes na proteção antioxidante em arroz. Alterações como fotodanos, fotoinibição e bloqueio do transporte de elétrons foram observadas nas plantas silenciadas submetidas a estresses abióticos, gerando grandes distúrbios na atividade fotoquímica. No entanto, sob alta luz as chlAPXs parecem não serem essenciais para a proteção de fotodanos, fotoinibição e danos oxidativos dirigidos pela alta luz no fotossistema II. Plantas silenciadas e não-transformadas (NT) exibem diferenças na fotossíntese sob condições normais de crescimento, bem como quando submetidas a estresses abióticos. / Ascorbate peroxidase (APX) is a major enzyme of the Reactive Oxygen Species (ROS) detoxification system in plants, catalyzing the conversion of hydrogen peroxide into water using ascorbate as electron donor. In rice eight genes encode APX. This study aimed to evaluate the role of APX enzymes in rice, through subcellular localization of the different isoforms, the study of gene expression and detailed characterization of chloroplastic APXs (chlAPXs) silencing in plant metabolism under normal conditions and in response to abiotic stresses. The differential expression of the different isoforms of APXs under abiotic stress conditions varies among species, and depends on the intensity and duration of stress. The subcellular localization of OsAPX1 and OsAPX2 in cytosol, OsAPX3 and OsAPX4 in peroxisomes, OsAPX5 in cloroplast/mitochondria, OsAPX6 in mitochondria and OsAPX7 in chloroplast were confirmed in rice protoplasts. Double silenced plants in OsAPX7/OsAPX8 genes did not show phenotypic changes; however presented alterations in the antioxidant metabolism under normal growth conditions. Proteomic analysis revealed that in theses plants several important pathways were affected, especially proteins involved with photosynthetic process. Silenced plants subjected to high light (HL) and methyl viologen (MV) stresses show that the chlAPXs are important in the antioxidant protection in rice. Alterations such photodamage, photoinhibition and obstruction of the electron transport were observed in silenced plants subjected to abiotic stresses, generating great disturbances in photochemical activity. However, under high light the chlAPXs appear not be essential to the protection of photodamage, photoinhibition and oxidative damage triggered by HL in photosystem II (PSII). Silenced and non-transformed (NT) plants exhibit differences in photosynthesis under normal growth conditions, as well as, when subjected to abiotic stress.