The glycine riboswitch is a structured RNA found upstream of genes in mRNA transcripts in many bacteria, functioning as a biofeedback gene regulator. Upon binding glycine, a complete RNA transcript including gene sequences is transcribed, effectively turning on gene expression. In an effort to understand the intricacies of its functioning, many mutants of the riboswitch were made and characterized during Ph. D. work, resulting in discovery of a P0 duplex/kink-turn motif involving a few nucleotides upstream of the established glycine riboswitch sequence which changed its ligand binding characteristics (Chapter 1). Previously, the two aptamers of the riboswitch were thought to cooperatively bind glycine, but with the inclusion of this leader sequence which forms a kink turn motif with the linker between the two aptamers, glycine binding in one aptamer no longer requires glycine binding in the other. Furthermore, the Kd from three species tested are now a similar, lower value of about 5 µM, indicating authenticity of this new consensus sequence. Glycine binding and interaptamer interaction both enhanced one another in trans aptamer assays. Another discovery from this was a shortened construct including all of aptamer II but only part of aptamer I in which a few specific nucleotides prevented glycine binding in aptamer II (Chapter 2). This may provide insight into the nature of interaptamer interactions in the full switch; addition of an oligonucleotide complimentary to these nucleotides restored glycine binding ability to aptamer II. With future development, this could also be a useful molecular biology tool, using two signals, glycine and an oligonucleotide, to allow gene expression. To precisely understand how any macromolecule functions, a 3D structure, obtainable by x-ray crystallography, is vital. A new technique to accomplish that for RNA, precedented in the protein world, is Fab chaperoned crystallography, which has advantages compared to RNA alone. A phage displayed library of Fabs with reduced codon diversity designed for RNA was created, the YSGR Min library (Chapter 3). Its Fabs had specificities and affinities equal to or greater than previous libraries which were originally created for phage displayed selection against proteins. Fab chaperoned RNA crystallography is currently in progress for the glycine riboswitch; the best resolution thus far is 5.3 … (Chapter 4). In addition to providing molecular insight into its gene regulation mechanism, a structure of the glycine riboswitch could be applied for use in structure based drug design of novel antibiotics targeting the riboswitch to disrupt important downstream carbon cycle genes in pathogenic bacteria.

L’humanité fait l’expérience d’une période de crise systémique. En effet, la crise sanitaire du printemps 2020 soulève beaucoup d’incertitude dans la conduite à projet et remet en question les paradigmes existants. Pour répondre à ce contexte de crise, de nouvelles postures et pratiques sont nécessaires dans tous les domaines tels que le design. Dans l’optique d’explorer les dynamiques de réponse en contexte de crise, la réflexion porte sur le rôle du design dans la conduite à projet en de telles circonstances. La compétence du design mise de l’avant est la compétence de pouvoir agir/réagir à tout évènement, nouvelle situation lors de la réalisation d’un projet en contexte de crise La question à laquelle la présente recherche se propose de répondre est la suivante : « Comment et à quel niveau est-ce que le design intervient dans la conduite à projet en contexte de crise ? ». Pour répondre à cette question, le cadre théorique s’appuie sur les notions de design stratégique, de la conduite à projet et des dynamiques sociales de la collaboration et de la confiance. L’objectif principal de la recherche est d’identifier et de comprendre la compétence du design dynamisant la conduite d’un projet en contexte de crise et les pratiques associées. La présente recherche propose de répondre à cette question avec une approche méthodologique de l’étude du transitoire. L’approche méthodologique vise à observer, par l’entremise d’entretiens semi-dirigés et des observations participantes, la conduite du projet Visières. Le projet Visières est une réponse à la pénurie de visières médicales vécues lors de la crise du printemps 2020. Le parcours du projet et son évolution à la suite des différents problèmes rencontrés agissent à titre de vitrine sur le rôle du design dans la conduite à projet en contexte de crise. Les résultats de la présente recherche sur la compétence d’action et de réaction du design en contexte de crise avancent que la pratique de design du bricolage est la plus adaptée à la conduite à projet en temps de crise. De plus, pour favoriser le succès de la conduite à projet, la pratique du bricolage s’insère dans un cadre organisationnel agile et une conduite agile du projet. / Humanity is experiencing a period of systemic crisis. The crisis of spring 2020 revealed many disfunctions and established a climat of uncertainty over different sector of activity. To respond to this climat of crisis, new postures and practices are required; and design is no exception. In order to explore the dynamics of response to a crisis and the role of design, this research project is investigating the role of design in the conduct of project in a context of crisis. The key ability of design to act and react to any events, situations, actions that emerges during the conduct of a project in a time of crisis. This research is looking into answering the question: “How does design dynamize the conduct of project in a context of crisis and at which level?” In order to answer this question, theories of strategic design, project management and the dynamics of trust and cooperation are presented. The main objective of this research is to identify and understand the competency of design intervenes the conduct of project and the associated practices. This research looks to answer those questions through the case study of a crisis. Interviews and observations were conducted through the participation in the project Visières. The project Visières is a self-organizing response to the shortage of protective medical visor during the spring crisis of 2020. The course and the evolution of the project act as a showcase of the role of design in the conduct of project in times of crisis. The strategic design perspective is used to explore the position of design and its competency of adaptation as a key actor in societal transformation and emergency relief. The results of this research on the specific competency of design to act and react to events of a project promotes that the design practice of « bricolage » is the most suited to conduct a project in a context of crisis. Also, to support the success of the project, the practice of « bricolage » requires an agile environment, an agile organization and agile organizational practices.

La 1-β-D-arabinofuranosylcytosine (ara-C) demeure l’agent anticancéreux principalement utilisé dans le traitement de la leucémie myéloblastique aiguë (LMA), malgré sa dégradation et son élimination rapide après une administration parentérale. Son encapsulation dans des vecteurs pharmaceutiques, majoritairement des liposomes, a permis de surmonter ces inconvénients. L’objectif général de ce projet de doctorat était de développer deux systèmes à libération prolongée, à base de phospholipides, de cholestérol et de poly(éthylène glycol) (PEG) afin d’encapsuler l’ara-C et ultimement, d’améliorer son efficacité dans le traitement de la LMA. Des Sphérulites® (vésicules multilamellaires d’un type particulier) ont d’abord été étudiées pour leur forte capacité d’encapsulation, due à leur mode de préparation. Par la suite, une formulation liposomale capable, d’une part de cibler spécifiquement les cellules leucémiques et, d’autre part, de promouvoir la libération intracellulaire de l’ara-C grâce à sa sensibilité au pH, a été mise au point. Les deux formulations se devaient d’avoir un faible diamètre, une stabilité en présence de fluides biologiques et des temps de circulation prolongés chez l’animal. Une préparation de Sphérulites®, composée de Phospholipon 90G, de Solutol HS15 et de cholestérol, a permis d’obtenir des vésicules de 300 nm de diamètre. Un dérivé lipidique de PEG a pu être fixé à leur surface, sans modifier la disposition concentrique des lamelles, ni changer leur stabilité. Les Sphérulites® PEGylées ont été chargées d’ara-C et injectées chez le rat par la voie intraveineuse. Elles ont démontré des temps de circulation significativement prolongés comparativement aux Sphérulites® sans PEG. Cependant, l’ara-C s’est retrouvée éliminée de la circulation sanguine très rapidement, révélant une libération précoce du principe actif à partir de ces vésicules. Les liposomes sensibles au pH (~150 nm) ont été obtenus suite à l’insertion d’un copolymère à base de dioctadécyle, de N-isopropylacrylamide (NIPAM) et d’acide méthacrylique. L’anticorps anti-CD33, soit complet soit son fragment Fab’, a été fixé à la surface des liposomes afin de cibler les cellules leucémiques. Les essais in vitro ont démontré la spécificité de la formulation pour différentes cellules leucémiques (CD33+), sa stabilité en présence de protéines plasmatiques et la libération intracellulaire d’un marqueur fluorescent et de l’ara-C. Enfin, des études menées chez la souris saine et immunodéprimée inoculée de cellules HL60 ont montré que la formulation exposant le fragment Fab’ possédait un profil pharmacocinétique et une biodistribution semblables à ceux des liposomes contrôles non-ciblés. L’encapsulation de l’ara-C a permis d’améliorer grandement ses temps de circulation après une administration intraveineuse. Cependant, bien que les immunoliposomes ont permis de prolonger la survie des souris leucémiques comparativement à l’ara-C libre, l’addition du polymère sensible au pH n’a pas permis d’apporter de réel avantage à la formulation lorsque administrée in vivo. Les résultats obtenus dans ce travail de thèse ont, dans un premier temps, mis en évidence que les Sphérulites® pourraient s’avérer utiles dans la vectorisation d’agents anticancéreux si leur capacité à retenir le principe actif in vivo était améliorée. Dans un second temps, les données présentées avec les immunoliposomes suggèrent qu’ils pourraient apporter un bénéfice notable dans le traitement de la LMA. / Despite its rapid degradation and fast elimination in vivo, 1-β-D-arabinofuranosylcytosine (ara-C) is the main anticancer agent used in the treatment of acute myeloid leukemia (AML). The encapsulation of this drug into nanocarriers such as liposomes has been shown to improve its stability, pharmacokinetic profile and, consequently, the treatment efficacy. The purpose of this doctoral work was to develop two nanocarriers employing phospholipids, cholesterol and poly(ethylene glycol) (PEG) to encapsulate ara-C, with the ultimate goal of developing more efficient treatments for AML. The first formulation relied on Spherulites®, which are multilamellar vesicles possessing high entrapment yields due to their fabrication method. In a second part, pH-sensitive immunoliposomes were optimized to target specifically the leukemia cells and promote the release of the loaded ara-C at the desired intracellular site. Both formulations required a small diameter, stability in the presence of biological fluids and long circulation time properties when injected intravenously. An optimized formulation of Spherulites® was developed. It was composed of Phospholipon 90G, Solutol HS15 and cholesterol. The vesicles (300 nm) were able to accommodate PEG-lipid derivatives at their surface without altering their concentric lamellar shape and their in vitro stability. The PEGylated Spherulites® were loaded with ara-C and injected intravenously into rats. The surface-modified vesicles exhibited longer circulation times compared to uncoated Spherulites®. However, most of the loaded-drug was cleared from the systemic circulation very rapidly, reflecting rapid leakage of ara-C from the vesicles. The pH-sensitive immunoliposomes (~150 nm) were obtained by including a terminally-alkylated copolymer made of dioctadecyl, N-isopropylacrylamide (NIPAM) and methacrylic acid in the liposome bilayer. The whole monoclonal antibody anti-CD33 or its Fab’ fragment were grafted on liposomes to target leukemic cells. In vitro assays revealed that this formulation was really specific for the various CD33+ leukemic cell lines, stable in presence of blood proteins, and able to promote the intracellular release of an encapsulated fluorescent probe as well as ara-C. In vivo studies in naïve Balb/c and immunodeprimed (SCID) mice inoculated with HL60 cells confirmed that the anti-CD33 Fab’ targeted formulation possessed pharmacokinetic and biodistribution profiles similar to those of the non-targeted liposomes. The encapsulation of ara-C in this formulation improved substantially its circulation time after intravenous injection. However, although ara-C-loaded immunoliposomes were able to prolong the survival of leukemic mice compared to the free drug, the addition of pH-sensitive polymer did not add any benefit to the formulation. Although these formulations require some optimization, the first part of this work pointed out that Spherulites® could be used to deliver anticancer agents provided that leakage is reduced in vivo. On the other hand, the data obtained with the targeted immunoliposomes suggest that these carriers could be beneficial in the treatment of AML.

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本研究探討台灣IC設計業者與FAB廠間技術知識連結之影響，主要的研究問題包括：(1)IC設計業者內部技術知識連結與知識流通之影響？(2)技術知識特性與IC設計業者跟FAB廠技術知識連結之影響？(3)IC設計業者跟FAB廠技術知識連結與知識流通之影響？ 本研究採個案研究法，共訪問六家IC設計業者及兩家FAB廠，主要的研究結論如下： 壹、IC設計業者內部技術知識連結對其知識流通之影響 一、本研究發現當專案組織結構的不同，IC設計業者知識的蓄積有所不同。 當專案組織結構採重量型團隊時，IC設計業者主要將知識蓄積在人員身上，例如：個案A公司、個案C公司、個案F公司。 當專案組織結構採自主性團隊時，IC設計業者除了主要將知識蓄積在人員身上外，還將知識蓄積在文件上，例如：個案B公司、個案D公司、個案E公司。 二、本研究發現當團隊成員解決問題透過面對面(包括正式或非正式)溝通方式、分享經驗，有助於IC設計業者知識在共同化過程中創造，例如：個案A公司、個案B公司、個案C公司、個案D公司、個案E公司。 貳、技術知識特性對其IC設計業者跟FAB廠技術知識連結之影響 一、本研究發現當技術知識路徑相依度不同之產品開發專案，IC設計業者與FAB廠間之互動方式有所不同。 當技術知識路徑相依度低之產品開發專案，IC設計業者與FAB廠間的互動方式採共同開發模式，例如：個案A公司、個案D公司、個案E公司。當技術知識路徑相依度高之產品開發專案，IC設計業者與FAB廠間的互動方式採早期投入模式，例如：個案B公司、個案C公司、個案F公司。 二、本研究發現當技術知識路徑相依度不同之產品開發專案，IC設計業者對FAB廠服務經驗的要求有所不同。 當技術知識路徑相依度低之產品開發專案，IC設計業者對FAB廠服務經驗的要求高，例如：個案A公司、個案D公司、個案E公司。 當技術知識路徑相依度高之產品開發專案，IC設計業者對FAB廠服務經驗的要求低，例如：個案B公司、個案C公司、個案F公司。 三、技術知識路徑相依度不同之產品開發專案，不會影響IC設計業者在設計初期搭便車搭便車(Shuttle Bus)，其在驗證最新的設計，例如：個案A公司、個案B公司、個案C公司、個案D公司、個案E公司。 四、本研究發現當技術路徑相依度不同之產品開發專案，IC設計業者與FAB廠間良率管理有所不同。 當技術知識路徑相依度低之產品開發專案，IC設計業者與FAB廠間採系統式良率管理，例如：個案A公司、個案D公司。 當技術知識路徑相依度高之產品開發專案，IC設計業者與FAB廠間採隨機式良率管理，例如：個案B公司、個案C公司、個案E公司、個案F公司。E公司由於只是採成熟的製程技術，技術複雜度不高，而且良率比較高，所以不需要系統式的良率管理。 參、IC設計業者跟FAB廠技術知識連結對其知識流通之影響 一、本研究發現當FAB廠提供豐富的服務經驗時，有助於IC設計業者技術知識的創造上有效的整合，例如：個案A公司、個案B公司、個案C公司、個案D公司、個案E公司、個案F公司。 二、本研究發現當IC設計業者在設計初期時搭便車(Shuttle Bus)時，有助於IC設計業者建立知識創造上的原型，例如：個案A公司、個案B公司、個案C公司、個案D公司、個案E公司。 三、本研究發現當IC設計業者與FAB廠間良率管理採系統式時，有助於IC設計業者知識的吸收上培養跨越疆界者，例如：個案A公司、個案D公司。

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