O peptídeo liberador da gastrina (GRP), pertencente à família dos peptídeos semelhantes à bombesina, e seus receptores (GRPR) estão presentes em todo o sistema nervoso central, em particular em áreas límbicas cerebrais como o hipocampo e a amídala, as quais estão envolvidas de forma importante na regulação emocional, na função cognitiva e, possivelmente, em transtornos neuropsiquiátricos e neurodegenerativos. Crescentes evidências indicam que o receptor do peptídeo liberador de gastrina (GRPR) está envolvido na regulação da plasticidade sináptica e formação da memória no hipocampo e em outras áreas cerebrais. Entretanto, o mecanismo molecular do efeito prejudicial da memória do antagonismo do GRPR não está claro. O fator de crescimento de fibroblasto básico (bFGF/FGF-2), é um peptídeo que possui efeitos estimulatórios na proliferação, diferenciação e motilidade de diferentes tipos celulares. Em neurônios atua como um fator neurotrófico que estimula a sobrevida neuronal e neurogênese. Evidências de interações entre o bFGF e o GRPR foram dadas por estudos que mostraram que antagonistas do GRPR inibiam a expressão do bFGF em tumores. Neste trabalho mostramos que o fator de crescimento de fibroblasto básico (bFGF/FGF-2) recupera o prejuízo da memória induzida pelo antagonismo do GRPR no hipocampo dorsal de ratos. O antagonista [D-Tpi6, Leu13 psi(CH2NH)-Leu14] bombesin (6–14) (RC- 3095) na dose de 1.0 Tg prejudica, enquanto o bFGF na dose de 0,25 Tg aumenta a retenção da esquiva inibitória (um tipo de tarefa de condicionamento aversivo) quando infundidos imediatamente após o treino, na área CA1 do hipocampo dorsal em ratos machos. A coinfusão com uma dose sem efeito de bFGF bloqueou o efeito amnésico do RC- 3095. Estes achados sugerem que o efeito prejudicial dos antagonistas do GRPR devem ser parcialmente mediados pela inibição da função e/ou expressão do bFGF neuronal e pela diminuição da ativação das cascatas de proteína cinases intracelulares associadas com a sinalização do bFGF. / Gastrin-releasing peptide (GRP), a bombesin-like peptide, and its receptor, GRP receptor (GRPR) are found throughout the central nervous system (CNS), including limbic areas such as the hippocampus and amygdala, which are significantly involved in emotional responses, cognitive function, and, possibly, neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Increasing evidence indicates that the gastrin releasing peptide receptor (GRPR) is implicated in regulating synaptic plasticity and memory formation in the hippocampus and other brain areas. However, the molecular mechanisms underlying the memory-impairing effects of GRPR antagonism have remained unclear. bFGF is a polypeptide displaying stimulatory actions on proliferation, differentiation and motility of different cell types. In neurons, bFGF acts as neurotrophic factor that stimulates neuronal survival, and neurogenesis. Evidence of functional interactions between bFGF and the GRPR was provided by studies showing that GRPR antagonists inhibit the expression of bFGF in tumours. Here we report that basic fibroblast growth factor (bFGF/FGF-2) rescues the memory impairment induced by GRPR antagonism in the rat dorsal hippocampus. The GRPR antagonist [D-Tpi6, Leu13 psi(CH2NH)-Leu14] bombesin (6–14) (RC-3095) at 1.0g impaired, whereas bFGF at 0.25g enhanced, 24 h retention of inhibitory avoidance (IA) when infused immediately after training into the CA1 hippocampal area in male rats. Coinfusion with an otherwise ineffective dose of bFGF blocked the memory-impairing effect of RC-3095. These findings suggest that the memory-impairing effects of GRPR antagonists might be partially mediated by an inhibition in the function and/or expression of neuronal bFGF or diminished activation of intracellular protein kinase pathways associated with bFGF signaling.

O objetivo deste estudo foi investigar in vitro a influência do tratamento de superfícies radiculares na adesão e proliferação de fibroblastos gengivais e de ligamento periodontal humano em fragmentos radiculares de dentes humanos extraídos por razões periodontais. Todos os fragmentos receberam raspagem e alisamento radicular (RAR), e em seguida aleatoriamente divididos em grupos, de acordo com a substância utilizada no tratamento de superfície (n= 15/grupo): ácido fosfórico 37% aplicado por 90s (AF90) ou 180s (AF180) (RAR); EDTA 24% aplicado por 90s (EDTA90) ou 180s (EDTA180); ácido cítrico pH 1.0 a 10% aplicado por 90s (AC90) ou 180s (AC180); ácido cítrico pH 1.0 a 10% associado à tetraciclina 50% por 90s (ACTC90) ou 180s (ACTC180); tetraciclina hidroclorídrica (50mg/ml) aplicada por 90s (TC90) ou 180s (TC180). O grupo controle foi composto por fragmentos tratados por meio de RAR seguido de lavagem em soro fisiológico. Após a realização dos tratamentos, os espécimes (n=3/grupo) foram preparados para análise em MEV com o objetivo de avaliar a descontaminação das superfícies radiculares por meio dos índices de rugosidade superficial (IRS), cálculo residual (ICR), perda de substância dentária (IPSD), presença de restos teciduais (IPRT), remoção de smear layer (IRSL), abertura dos túbulos dentinário (ATD) e smear layer remanescente (SLR) em fotomicrografias em aumentos de 500x e 1000x. Em 6 espécimes de cada grupo, foram plaqueados 104 fibroblastos gengivais (FGH-1), e em outros 6, 104 fibroblastos de ligamento periodontal humano (FLP-1). Após 24h foram fixados 6 espécimes por grupo (n=3/grupo) e após 48h os outros 6 espécimes (n=3/grupo), para análise em microscópio eletrônico de varredura. Para determinar a adesão e proliferação celular, o número de células aderidas à superfície nos dois períodos de avaliação foi determinado em triplicatas por um examinador independente A comparação entre os grupos foi realizada pelo método Kruskal-Wallis complementado pelo teste de Dunn para variáveis não lineares, e por meio de análise de variância múltipla (ANOVA) complementado pelo teste de Tukey para as variáveis lineares. A comparação entre os pares nos períodos de 24 e 48 horas foi realizada por meio do método ANOVA pósteste Sidak para variáveis lineares, e Kruskal Wallis pós-teste Dunn para variáveis não lineares. Foi adotado nível de significância de 5% em todos os testes. Não houve diferença estatisticamente significante para IRS, IPSD, IPRT, IRSL, ATD e SLR. Houve maior quantidade de cálculo residual nos grupos TC90 (3,66 ± 0,57; mediana = 4) e AF180 (3,66 ± 0,57; mediana = 4), enquanto que o grupo AC90 (1,33 ± 0,57; mediana = 1) mostrou quantidade significativamente menor de cálculo residual. Encontrou-se uma adesão significativamente maior de células FGH-1, no grupo EDTA180 (170 ± 77,99) no período de 24 horas, e maior efeito proliferativo (48 horas) no grupo TC90 (172,90 ± 65,38). Para células FLP-1, observou-se uma adesão significativamente maior no grupo ACTC90 (74,67 ± 98,84) no período de 24 horas e maior efeito proliferativo (48 horas) no grupo AC90 (173,8 ± 139,6). A partir dos resultados obtidos, sugere-se que a substância a ser utilizada para o condicionamento das superfícies radiculares seja escolhida de acordo com os objetivos do tratamento periodontal: quando se objetiva a formação de nova inserção conjuntiva o uso do EDTA ou AF por 180s ou da tetraciclina por 90s; para regeneração dos tecidos periodontais, sugere-se o uso de AC por 90s. / The aim of this study was to evaluate in vitro the influence of root surface conditioning on adhesion and proliferation of gingival and periodontal ligament fibroblasts on human root fragments of teeth extracted for periodontal reasons. Fragments received scaling and root planning (SRP), and were then randomly allocated into groups according to the substance used for root surface treatment (n= 15/grupo): phosphoric acid 37% applied for 90s (PA90) or 180s (PA180); EDTA 24% applied for 90s (EDTA90) or 180s (EDTA180); 10% citric acid pH 1.0 applied for 90s (CA90) or 180s (CA180); 10% citric acid pH 1.0 associated to tetracycline HCL 50% applied for 90s (CATC90) or 180s (CATC180); tetracycline hydrocloride (50mg/ml) applied for 90s (TC90) or 180s (TC180). Control group was composed by SRP treated root fragments, followed by saline solution washing. After treatment completion, specimens (n=3/grupo) were prepared for scanning electronmicroscopy (SEM) analysis, aiming at evaluation of its surfaces according to the following indexes: superficial roughness (SR); residual calculus (RC); loss of tooth substance (LT); tissue residual (TS), smear layer removal (SLR), dentin tubules opening (DTO) and smear layer residual (SLR) in photomicrographs on 500x and 1000x magnifications. In 6 specimens of each group 104 gingival fibroblasts (HGF-1) were plated; and over another 6 specimens, 104 periodontal ligament fibroblasts (PLF-1). After MEV evaluation, the number of cells adhered to the root surfaces over 24h and 48h were assessed by a calibrated examiner in triplicates. Groups comparison were analyzed through Kruskal-Wallis post-test Dunn for comparisons for non-linear variables, and ANOVA post-test Tuckey for linear variables. Comparison between pairs over 24 and 48 hours was accessed through Kruskal-Wallis post-test Dunn for non-linear variables, and ANOVA post-test Sidak for linear variables. Significance level of 5% was adopted in all tests. There was no statistical difference for SR, LT, TS, SLR, DTO and SLR. Although there was higher amounts of residual calculus on groups TC90 (3,66 ± 0,57; median = 4) and FA180 (3,66 ± 0,57; median = 4) while group CA90 (1,33 ± 0,57; median = 1) showed statistically less residual calculus. A singnificantlly higher HGF-1 cell count was found on EDTA180 (170 ± 77,99) on 24-hour period and a higher proliferative effect (48 hours) on group TTC90 (172,90 ± 65,38). A significantly higher cell adhesion for (PLF-1) was found on group ACTC90 (74,67 ± 98,84) at 24-hour assessment, and higher proliferative effect (48 hours) for AC90 (173,8 ± 139,6). From the data here exposed, it is suggested that the substance election for root surface conditioning should be based on the treatment primary goal: when a new connective tissue adhesion is aimed, EDTA or PA for 180s or TTC for 90s should be chosen; on the other hand, for periodontal regeneration, CA for 90s should be the best option.

A obturação do canal radicular é uma etapa fundamental para o sucesso do tratamento endodôntico. É desejável que os materiais empregados nesta fase não interferiram negativamente com o reparo tecidual, mas preferencialmente estimulem a regeneração dos tecidos periapicais. Recentemente, cones de guta-percha combinados com material biocerâmico foram desenvolvidos com esta finalidade. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi investigar o potencial citotóxico e biomodulador de cones de guta-percha convencionais, de cones de guta-percha contendo biocerâmica e de cones de polímero sobre células de ligamento periodontal in vitro. Cultura de fibroblastos de ligamento periodontal foi estabelecida a partir de terceiro molar humano. As células foram estimuladas com extratos de cones de guta-percha convencional, de cones de guta-percha contendo biocerâmica e de cones de polímero em diluição seriada para teste de viabilidade celular por meio do método MTT (Brometo de Difeniltetrazólio 3-(4,5-Dimetiltiazol-2-yl) após 72 h. Em seguida, a diluição de 1/5 foi empregada para estimulação das células por 72 h para detecção da expressão gênica de colágeno tipo I e proteína cementária 1 (CEMP-1) por RT-qPCR. Os dados foram estatisticamente analizados por meio de ANOVA sendo considerados significativos valores de p < 0,05. Os resultados observados de forma que, em extrato puro em extrato puro 1:1, houve comprometimento da viabilidade celular tanto para o extrato de cone de guta-percha quanto para o extrato do cone Cpoint podendo ser considerados citotóxicos. Nas outras diluições não houve diferença significativa neste parâmetro. Em relação à expressão gênica de colágeno, não foram observadas diferenças significativas quando da presença dos extratos. Para CEMP-1, significativa indução da expressão gênica foi observada para o cone de guta-percha. Conclui-se, através da análise dos resultados, que o cone de guta-percha e o cone de polímero são os mais citotóxicos em extrato puro, porém a guta-percha foi o único material que induziu uma expressão significativa de CEMP-1 que auxilia no reparo tecidual. O Col1 não foi induzido em nenhuma das amostras, porém também não foi inibido que indica que nenhum dos 3 tipos de cone interfere no reparo tecidual. / Root canal obturation is a fundamental step for successful endodontic treatment. It is desirable that the materials employed at this stage did not adversely interfere with tissue repair but rather stimulate the regeneration of the periapical tissues. Recently, gutta-percha points combined with bioceramic materials were developed for this purpose. Thus, the objective of this study was to investigate the cytotoxic and biomodulatory potential of conventional gutta-percha points, gutta-percha points containing bioceramics and polymer points on periodontal ligament cells in vitro. Culture of periodontal ligament fibroblasts was established from one human third molar. The cells were stimulated with extracts of cones of conventional gutta-percha points, gutta-percha containing bioceramics and polymer points in serial dilution for cell viability test using the MTT assay [Diphenyltetrazolium Bromide 3- (4,5)]. Next, the 1/5 dilution was used to stimulate the cells for 72 h to detect the gene expression of type I collagen and cement protein 1 (CEMP-1) by RT-qPCR. Data were statistically analyzed by means of ANOVA being considered significant values of p <0.05. The results observed was that in a pure 1: 1 extract, there was impairment of cell viability for both the guta-percha cone extract and the Cpoint cone extract and could be considered cytotoxic. At the other dilutions, no significant difference on this parameter was observed. Regarding the gene expression of collagen, no significant differences were observed at the presence of extracts. For CEMP-1, significant induction of gene expression was observed for gutta-percha points. In conclusion, the analysis of the results showed that the gutta-percha and polymer points are the most cytotoxic at pure extract, however gutta-percha was the only material that induced a significant expression of CEMP-1 which assists the tissue repair. Col1 was not induced in any of the samples but was also not inhibited indicating that none of the 3 cone types interfere in tissue repair.

Orientador: Sandra Helena Penha de Oliveira / Resumo: Na presença de Diabetes Mellitus, a doença periodontal (DP) pode acentuar o aparecimento de complicações e aumentar sua prevalência. O objetivo desta pesquisa foi avaliar se o Fator de Crescimento Transformador -β do tipo 1 (TGF-β1, sigla em inglês) e Metaloproteinase de matriz -9 (MMP-9, sigla em ingês) estão modulando a formação de componentes de matriz extracelular em fibroblastos gengivais (FG) de camundongos diabéticos e com DP. Os 24 animais foram separados em 4 grupos, e então foram tratados com estreptozotocina para indução de diabetes e foi realizado indução da DP através de ligadura com fio de seda. Após a eutanásia e coleta da gengiva, FG dos camundongos foram cultivados. A expressão gênica de RNAm e produção de proteína para MMP-9, TGF-β1 e colágeno tipo 1 (Col1a1) foram avaliadas. Eles também foram tratados com inibidores de MMP-9 e TGF-β1, e dexametasona (Dexa) por 24h. FG de animais normais e diabéticos com DP induzida tiveram expressão aumentada de MMP-9 e TGF-β1 em 6 e 24h, diminuindo em 48h. Expressão gênica de Col1a1 foi diminuída em FG com DP em 6, 24 e 48h. Inibidor de MMP-9 (MMP-9i) bloqueou a expressão gênica de MMP-9 e de TGF-β1 em FG normais e diabéticos em 24h. A expressão de col1a1 foi inibida pelo MMP-9i somente em FG normais, mas não em diabéticos. A expressão de receptor de TGF-β do tipo 1 (TGF-β R1) foi aumentada em FG normais e diabéticos, porém MMP-9i diminuiu esta expressão somente em FG diabéticos. Inibidor de TGF-β (SB431542) e Dexa interro... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In presence of Diabetes Mellitus, periodontal disease (PD) can accentuate complication appearance and increase prevalence. The aim of this study was to evaluate whether Transforming Growth factor-β 1 (TGF-β1) and Matrix Metaloproteinase-9 (MMP-9) are modulating the extracellular matrix components in gingival fibroblasts (GF) from diabetic mice (D) with PD. 24 animals were divided in 4 groups then they were treated with streptozotocin to diabetes induction and DP was inducted through a ligature with silk thread. After euthanasia and gingiva harvest, mice GF were cultured. MMP-9, TGF- β1, and type 1 Collagen (col1a1) mRNA expression and protein production were evaluated. They were also treated with MMP-9 and TGF-β inhibitors, and dexamethasone (Dexa) for 24h. Normal and diabetic GF from PD-induced mice had increased MMP-9 and TGF-β1 expression at 6 and 24 h decreasing at 48 h. Col1a1 gene expression was decreased in normal GF with PD at 6, 24 and 48 h. In diabetic GF col1a1 expression was inhibited at 6, 24 and 48 h. MMP-9 inhibitor (MMP-9i) blocked the MMP-9 expression, and TGF-β1 gene expression in normal and diabetic GF at 24 h. The col1a1 gene expression was inhibited by MMP-9i only in normal GF but not in diabetic. TGF-β R1 was increased in normal and diabetic GF with PD, but MMP-9i decreased this expression only in diabetic GF. TGF-β inhibitor (SB431542) and Dexa abrogated MMP-9, TGF-β1 and col1a1 expression in normal and diabetic GF with PD at 24 h. TGF-β R1 was also inh... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000437015-Texto+Completo-0.pdf: 2405577 bytes, checksum: 64fe8d7f54de71f570c0f7a29d9c6838 (MD5) Previous issue date: 2011 / Cellular therapy represent a new frontier for the treatment of several diseases, including diseases related to central nervous system. Human umbilical cord blood is an attractive source of stem cells; however, it has a heterogeneous population with a small amount of mesenchymal stem cells. Currently, cell reprogramming induced by different methodologies can confer pluripotency to differentiated adult cells. The objective of the study was to evaluate the reprogramming potential of fibroblasts and neural differentiation after co-culture with umbilical cord blood mononuclear cells. This study was approved by the Ethics Committee of PUCRS (CEP 11/05504). Cells were obtained from four human umbilical cord blood. Cell suspensions were fractionated at gradient of density 1077. The mononuclear cells of each sample were cultured for 7 days and later, the culture was infected with 105 cells of mouse fibroblast cell line NIH 3T3 and co-cultured for 6 days. To evaluate the pluripotency it was performed RNA extraction and later, amplification using primers specific for pluripotency genes. The differentiation was also confirmed by the adipogenic and osteogenic differentiation. Neural differentiation of the reprogrammed cells was obtained by the method described by Song et. al (2008) and evaluated by immunofluorescence. Population growth was quantified by hemocytometer. All co-cultured cells showed adipogenic and osteogenic differentiation capacity. After co-cultivation cells began transcribing the pluripotency gene KLF4. Statistically significant differences in the parameters area, diameter, optical density and fractal dimension were observed by confocal microscopy in reprogrammed and neural differentiated cells. The population of reprogrammed cells doubled every three days until the addition of the last medium of neural differentiation, when cultures became quiescent until the end of the neural differentiation. The contact in form of co-cultivation of fibroblasts with umbilical cord blood mononuclear fraction for six days promoted the reprogramming of these cells to a indifferentiation stage, allowing the induction of neural differentiation later. / As terapias celulares representam uma nova fronteira para o tratamento de diversas doenças, inclusive patologias relacionadas ao sistema nervoso central. O sangue de cordão umbilical humano é uma atrativa fonte de células-tronco, porém, apresenta uma população heterogênea com pouca quantidade de células-tronco mesenquimais. Atualmente, a reprogramação celular induzida através de metodologias distintas, pode conferir pluripotência às células adultas diferenciadas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de reprogramação de fibroblastos e a diferenciação neural após co-cultivo com fração mononuclear de sangue de cordão umbilical. Foram obtidas células da fração mononuclear de quatro cordões umbilicais humanos de pacientes atendidas no Centro Obstétrico do Hospital São Lucas da PUCRS. As suspensões celulares foram fracionadas em gradiente de densidade 1077. A fração mononuclear de cada amostra foi cultivada por sete dias e após, contaminada com 105 células da linhagem de fibroblasto de camundongos NIH 3T3 e co-cultivadas por 6 dias. Para avaliação da pluripotência, foi realizada extração de RNA e posterior amplificação utilizando oligonulceotídeos específicos para os genes de pluripotência Oct3/4, Sox2 e KLF4. O fenótipo mesenquimal foi confirmado pela diferenciação adipogênica e osteogênica. A neurodiferenciação das células reprogramadas seguiu o método descrito por Song et. al (2008) e foi avaliada por imunofluorescência. O crescimento populacional foi quantificado em hemocitômetro. Todas as células co-cultivadas mostraram capacidade de diferenciação adipogênica e osteogênica. Após o co-cultivo, as células passaram a transcrever o gene de pluripotência KLF4. Diferenças estatisticamente significativas nos parâmetros área, diâmetro, densidade óptica e dimensão fractal foram observadas por microscopia confocal nas células reprogramadas e neurodiferenciadas. A população de células reprogramadas duplicou a cada três dias até o momento da adição do ultimo meio de neurodiferenciação, quando as culturas tornaram-se quiescentes até o final do período de neurodifereciação. O contato em forma de co-cultivo dos fibroblastos com a fração mononuclear de cordão umbilical por seis dias promoveu a reprogramação dessas células a um estágio com certa plasticidade, permitindo a indução posterior de neurodiferenciação.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000424905-Texto+Completo-0.pdf: 1635393 bytes, checksum: 130e114aa7e9842c1d462f5f400791c9 (MD5) Previous issue date: 2010 / Introduction: Peritoneal membrane continuous exposition to conventional peritoneal dialysis solutions is an important risk factor related to structural and functional alterations. Objective: To compare in vitro cell viability in mice fibroblast NIH/3T3 after exposition to a neutral pH dialysis solution in comparison to cells exposed to a standard solution. Methods: Experimental study. In order to evaluate cellular viability, mice fibroblast NIH/3T3 cell culture were used in media containing conventional peritoneal dialysis solution or a neutral pH peritoneal dialysis fluid. Both solutions were tested in all the commercially available glucose concentrations. Results: Cell viability was evaluated with tetrazolium salt colorimetric assay. Fibroblast viability was significantly superior in the neutral pH solution in comparison to control, in all three glucose concentrations (Optical density - means ± SD: 1. 5%control 0. 295±0. 047 vs 1. 5%neutral pH 0. 372±0. 042 P<0. 001; 2. 3%control 0. 270±0. 036 vs 2. 3%neutral pH 0. 337±0. 051 P<0. 001; 4. 25%control 0. 284±0. 037 vs 4. 25%neutral pH 0,332 ± 0,032 P<0. 001; control vs neutral pH respectively, Student t Test). There was no significant difference in cell viability between the three concentrations of glucose when standard solution was used (ANOVA P=0. 218), although cell viability was higher after exposition to neutral pH peritoneal dialysis fluid at 1. 5% in comparison to 2. 3 and 4. 25% glucose concentrations (ANOVA P=0. 008: Bonferroni 1. 5%vs2. 3% P=0. 033, 1. 5%vs4. 25% P=0. 014, 2. 3%vs4. 25% P=1. 00). Conclusion: Cell viability was higher in the neutral pH dialysis solution, especially in the lower glucose concentration. A more physiological pH and lower glucose degradation products may be responsible for such results. / Introdução: A contínua exposição da membrana peritoneal às soluções de diálise peritoneal convencionais, consideradas não fisiológicas, é um dos fatores de risco para o desenvolvimento de alterações morfológicas e funcionais do peritônio. Objetivo: Comparar a viabilidade celular in vitro de fibroblastos de camundongos NIH/3T3 expostos a diferentes soluções de diálise peritoneal. Materiais e Métodos: Estudo experimental; onde foram realizadas culturas de fibroblastos empregando meios de cultura contendo diferentes soluções de diálise (padrão e pH-neutro) nas 3 concentrações de glicose disponíveis. A viabilidade celular foi avaliada pelo método do sal de tetrazólio. Resultados: A viabilidade celular foi significativamente superior na solução com pH neutro em comparação a solução controle, nas três concentrações de glicose (Densidade óptica-média ± dp: 1. 5%controle 0,295±0,047 vs 1,5%pH neutro 0,372±0,042 P<0,001; 2,3%controle 0,270±0,036 vs 2,3% pH neutro 0,337±0,051 P<0,001; 4,25%controle 0,284±0,037 vs 4,25%pH neutro 0,332 ± 0,032 P<0,001). Não ocorreu diferença significativa na viabilidade celular entre as três concentrações de glicose quando se usou a solução de diálise peritoneal padrão (ANOVA P=0,218), embora a viabilidade celular foi maior após a exposição à solução com pH neutro na concentração de glicose de 1,5% em comparação com 2,3 e 4,25% (ANOVA P=0,008: Bonferroni 1,5% vs 2,3% P=0,033, 1,5% vs 4,25% P=0,014, 2,3% vs 4,25% P=1,00). Conclusão: A viabilidade celular foi maior nos fibroblastos expostos a solução de diálise peritoneal com pH neutro, especialmente nas menores concentrações de glicose. É possível que o pH mais fisiológico e a menor quantidade de produtos de degradação da glicose possam ser responsáveis pelos resultados.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:42:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000399015-Texto+Parcial-0.pdf: 142110 bytes, checksum: c5ffb33c81a7c9cbade03c8428376c8e (MD5) Previous issue date: 2008 / A estable connection between the titanium surface and the surrounding tissue is the most important prerequisites for the long-term success of implants. Therefore, a strong adhesion of the cells on biomaterial surface is required. The objective of this study was to evaluate fibroblast adhesion stimulated by basic Fibrobast Growth Factor (bFGF) on titanium discs. For this study 30 titanium discs with smooth surface were produced. These discs were placed on culture plates with NIH3T3 fibroblasts, stimulated by bFGF, on test group and without the growth factor on control group. The samples were obtained after 3 hours, 24 hours and 48 hours. Using SEM, 10 images were obtained from each disc, totalizing 300 micrografies. The test showed that there are more fibroblasts attached to titanium discs, with a significative difference, at all experimental analysed periods of this experiment, when bFGF was administrated. / Uma conexão estável entre a superfície de titânio e os tecidos a sua volta é um dos mais importantes pré-requisitos para o sucesso a longo prazo dos implantes. Para isso, uma forte e efetiva adesão das células na superfície do biomaterial é requerida. O objetivo desse estudo foi o de avaliar a adesão de fibroblastos estimulados por Fator de Crescimento de Fibroblastos básico (bFGF) em discos de titânio. Para esse estudo foram produzidos 30 discos de titânio com superfície lisa. Esses discos foram colocados em placas de cultura e sobre eles foi inserido meio com fibroblastos NIH3T3, estimulados por bFGF, no grupo teste e sem este fator de crescimento no controle. As amostras foram obtidas em 3 horas, 24 horas e 48 horas. Foram feitas 10 imagens com Microscópio Eletrônico de Varredura em cada disco, totalizando 300 micrografias. Como resultado foi encontrado que existe uma diferença significativa no crescimento de fibroblastos nos três tempos deste experimento, do grupo onde o bFGF foi administrado.

A relação entre bacteriófagos e virulência bacteriana é um modelo muito intrigante e pouco estudado na patogênese periodontal, uma vez que um patógeno periodontal pode ser lisogênico. O objetivo do nosso estudo é determinar a capacidade de fibroblastos gengivais humanos de induzir as cepas lisogênicas de Aggregatibacter actinomycetemcomitans. Dois experimentos foram realizados seguidos da titulação de fago. Os experimentos consistiram da co-cultura com fibroblastos gengivais humanos e três cepas de Aa [Aa29524, Aa2112, Aa29524(Ø2112)], não lisogênica, lisogênica e lisogênica induzida em laboratório, respectivamente. Em três momentos distintos (no experimento 1: 0, 2 e 4 horas; e no experimento 2: 2, 4 e 6 horas), o sobrenadante da co-cultura foi filtrado e cultivado overnight com a bactéria indicadora (Aa29524) e analisado para a capacidade de lisar a célula indicadora. Em ambos os experimentos, o sobrenadante da co-cultura de fibroblastos gengivais humanos com Aa lisogênico e Aa lisogênico induzido em laboratório, ao ser cultivado com a bactéria indicadora, promoveu lise da mesma, resultando no aumento da produção de fago. Pode-se concluir que, nesse estudo os fibroblastos gengivais humanos foram capazes de induzir cepas lisogênicas de Aggregatibacter actinomycetemcomitans. / The relationship between bacteriophages and bacterial virulence is a very intriguing, but rarely studied model in periodontal pathogenesis, as a periodontal pathogens can be lysogenic. The aim of our study is to determine the ability of human gingival fibroblasts to induce lysogenic strains of Aggregatibacter actinomycetemcomitans. Two experiments were performed followed by titration of phage. The experiments consisted of co-culture with human gingival fibroblasts and three strains of Aa [Aa29524, Aa2112, Aa29524 (Ø2112)], not lysogenic, lysogenic and lysogenic induced in the laboratory, respectively. In three different times (in experiment 1: 0, 2 and 4 hours, and in experiment 2: 2, 4 and 6 hours), the co-culture supernatant was filtered and cultured overnight with the indicator strain (Aa29524) and analyzed for ability to lyse the cell indicator. In both experiments, the supernatant of the co-culture of human gingival fibroblasts with Aa lysogenic and Aa lysogenic induced in the laboratory to be cultured with the indicator bacteria, caused lysis of the same, resulting an increased phage production. It can be concluded that in this study, human gingival fibroblasts were able to induce lysogenic strains of Aggregatibacter actinomycetemcomitans.

Orientador: Elenice Deffune / Banca: Marcos Andrey Cipriani Frade / Banca: Luciana Patrícia Abbade / Resumo: O hemocomponente gerador da cola de fibrina home made é a fração do plasma fresco congelado. Neste os fatores I (fibrinogênio), VIII, XIII, von Wilebrand e fibronectina estão presentes em elevada concentração. O fibrinogênio, fator I da coagulação sangüínea, sofre ativação nos processos de injúria tecidual onde são desencadeados os fenômenos hemostáticos que culminam com a formação de uma rede resistente de fibrina na qual existem leucócitos, hemácias e plaquetas. O gel de plaquetas é um hemocomponente obtido a partir de concentrado de plaquetas ou de plaquetaféres com adição de gluconato de cálcio e trombina e tem sido alvo de muitos estudos na última década sua participação no processo de cicatrização, especialmente porque libera fatores de crescimento no leito de feridas promovendo a reparação fisiológica tecidual. Neste estudo avaliou a ação de curativos bioativos home made: células tronco mesenquimais incorporadas ao gel de plaquetas laminares com laserterapia, no processo de cicatrização de feridas crônicas. Foram avaliados feridas crônicas em membros inferiores, de 5 pacientes, sendo predominantemente feridas decorrentes de seqüelas de hanseníase. O gel laminar de plaquetas mostrou-se ser um promissor meio de microencapsulação de células tronco mesenquimais, fibroblastos e queratinócitos. Nas feridas tratadas com células tronco mesenquimais, incorporadas ao gel laminar de plaquetas, foi observada melhora clínica considerável, tanto na cicatrização, quanto na redução das manifestações inflamatórias e dolorosas, nos 5 pacientes / Abstract: The blood components of fibrin glue generator home made is the fraction of fresh frozen plasma. In the factors I (fibrinogen), VIII, XIII, von Wilebrand and fibronectin are present in high concentration. Fibrinogen, blood coagulation factor I, undergoes activation in the processes of tissue injury where the phenomena are triggered hemostatic culminating in the formation of a strong fibrin network in which there are leukocytes, red blood cells and platelets. The platelet gel is a blood components obtained from platelet concentrate with the addition of calcium gluconate and thrombin and has been the subject of many studies over the last decade due to their involvement in the healing process, especially because it releases factors growth in the wound bed to promote the physiological tissue repair. This study evaluated the action of bioactive dressings home made: mesenchymal stem cells embedded in the laminar platelet gel with laser therapy in the healing of chronic woundsChronic wounds were evaluated in the lower limbs of five patients, predominantly due to wounds sequelae of leprosy. The laminar platelet gel showed to be a promising be means of microencapsulation of mesenchymal stem cells, fibroblasts and keratinocytes. In wounds treated with mesenchymal stem cells embedded in the laminar platelet gel, significant clinical improvement was observed both in healing and in reducing inflammatory and painful manifestations in 5 patients / Mestre

Orientador: Sandra Helena Penha de Oliveira / Banca: Edson Antunes / Banca: Lucia Helena Faccioli / Resumo: A quimiocina C-X-X motif ligand 12 (CXCL12) e seu receptor de quimiocina 4 (CXCR4) desenvolvem um papel crítico na inflamação das vias aéreas. No entanto, os efeitos da ativação da via CXCL12/CXCR4 sobre fibroblastos pulmonares ainda são desconhecidos. Neste estudo, investigamos o efeito da via CXCL12/CXCR4 sobre a quimiocina (C-C motif) ligante 3 (CCL3) e (C-X-C motif) ligante 2 (CXCL2) e sobre os mediadores lipídicos leucotrienos B4 (LTB4) e C4 (LTC4) por fibroblastos pulmonares e a sinalização intracelular envolvida neste processo. CXCL12 foi capaz de induzir a produção de CCL3, CXCL2, LTB4 e LTC4; a produção de CCL3 não é dependente da produção de CXCL2, mas a produção de CXCL2 é dependente da produção de CCL3. A produção de LTB4 pode ser parcialmente regulada por CXCL2 e CCL3 e a produção de LTC4 é dependente da produção de CCL3 e CXCL2. Fibroblastos pulmonares constitutivamente expressam CXCR4 e a estimulação com CXCL12 induz sua expressão. Análises de Western blot mostraram que CXCL12 aumenta a expressão proteica de CXCR4 e induz a fosforilação da S339 do CXCR4. A expressão gênica constitutiva e induzida de CXCR4 foram inibidas pelo anticorpo anti-CXCL2. No entanto, o anticorpo anti-CCL3 e o inibidor farmacológico MK886 foram capazes de diminuir a expressão gênica induzida de CXCR4. Os fibroblastos pulmonares foram pré-tratados com MK886, dexametasona (Dexa) e/ou loratadina (Lor). MK886 e Lor promoveram a diminuição da produção de LTC4 e LTB4, mas não a de CCL3 e CXCL2. Dexa diminuiu níveis de CCL3, CXCL2, LTB4 e LTC4, e quando associado com Lor esta diminuição foi mais eficaz. Identificamos... / Abstract: C-X-X motif ligand 12 (CXCL12) and its specific receptor Chemokine receptor 4 (CXCR4) play a critical role in airway inflammation. However, the effects of CXCL12/CXCR4 axis on pulmonary fibroblast activation are unknown. In this study, we investigated the effect of CXCL12/CXCR4 axis on chemokine (C-C motif) ligand 3 (CCL3), chemokine (C-X-C motif) ligand 2 (CXCL2), leukotrienes B4 (LTB4) and C4 (LTC4) production by pulmonary fibroblasts and the intracellular signaling involved in the process. CXCL12 induced CCL3, CXCL2, LTB4 and LTC4 production, and CCL3 production is not dependent on CXCL2; but CXCL2 production is dependent on CCL3 production. LTB4 production can be partially down-regulated by CXCL2 and CCL3 production and LTC4 production is dependent on CCL3 and CXCL2 production. Pulmonary fibroblasts constitutively expressed CXCR4, and CXCL12 stimulation up-regulated its expression. Western blot analysis showed that CXCL12 increased protein expression of CXCR4 and induced phosphorylation at S339 of CXCR4. Constitutive CXCR4 expression was decreased by anti-CCL3 antibody or MK 886. Inducible CXCR4 was inhibited by anti-CXCL2 antibody. Indeed pulmonary fibroblasts were pretreated with MK886, dexamethasone (Dexa) and loratadine (Lor). MK886 and loratadine was able to reduced LTB4 and LTC4 production but not CCL3 and CXCL2. Dexa decreased CCL3, CXCL2, LTB4 and LTC4 production, and when associated with Lor this decrease was more effective. We found that PI-3K and JNK intracellular signaling play a role in CCL3 production; p38, MEK1/2, PI-3K and JNK are involved in CXCL2 production and p38 and MEK1/2 pathways are involved in LTB4 production by... / Mestre