O enfezamento vermelho do milho, associado a um fitoplasma, é uma doença de expressiva importância econômica para a cultura, sendo disseminada através da cigarrinha do milho Dalbulus maidis (DeLong & Wolcott). Recentemente, altas incidências da doença, resultando em sérios prejuízos, foram registradas nas regiões produtoras, principalmente no sudeste e centro-oeste do Brasil, onde se realizam plantios tardios e consecutivos de milho. Em condições de campo, o enfezamento vermelho normalmente ocorre associado ao enfezamento pálido, causado por espiroplasma, formando um complexo de doenças, uma vez que ambos agentes são transmissíveis pelo mesmo vetor. No presente trabalho, foi investigado o efeito isolado do fitoplasma sobre a sintomatologia e a produção de dez híbridos de milho, bem como o efeito da população infectiva do vetor sobre o desenvolvimento de sintomas e as alterações sobre os componentes de produção da planta de milho. Para isto, plantas do híbrido XLX 520 foram experimentalmente inoculadas com fitoplasma por meio de 1, 3, 6 e 9 insetos infectivos/planta. Numa segunda etapa, os híbridos XLX 520, Z 8452, C 909, P 3063, P 3081, AG 3010, FT 9006, FT 9043, DO 02 e D 766 foram inoculados por meio de 10 insetos infectivos/planta. Os ensaios foram conduzidos sob condições de telado no período de setembro/1999 a abril/2000. Os resultados obtidos revelaram que a incidência da doença, resultando em severas perdas, foi proporcionalmente maior à medida em que se elevou o número de insetos infectivos/planta. Maiores freqüências de grãos miúdos, espigas pequenas, número reduzido de fileiras e de grãos, foram verificados para os níveis mais altos de infestação. A germinação de semente foi afetada negativamente em função da densidade da população infectiva. Os resultados obtidos na inoculação de híbridos revelaram o aparecimento de sintomas típicos de avermelhamento, proliferação de espigas e enfezamento de plantas, em graus variados em função dos híbridos utilizados. Para aqueles mais suscetíveis, além da alta proporção de grãos miúdos, foram registradas reduções de até 35% na altura de plantas, 98% na produção de grãos, 89% no tamanho de espigas, 50% no número de fileiras de grãos, 98% no número de grãos e 18% na germinação de sementes. Estes resultados confirmaram a importância do enfezamento vermelho para a cultura do milho / not available

O enfezamento vermelho do milho, associado a um fitoplasma, é uma doença de expressiva importância econômica para a cultura, sendo disseminada através da cigarrinha do milho Dalbulus maidis (DeLong & Wolcott). Recentemente, altas incidências da doença, resultando em sérios prejuízos, foram registradas nas regiões produtoras, principalmente no sudeste e centro-oeste do Brasil, onde se realizam plantios tardios e consecutivos de milho. Em condições de campo, o enfezamento vermelho normalmente ocorre associado ao enfezamento pálido, causado por espiroplasma, formando um complexo de doenças, uma vez que ambos agentes são transmissíveis pelo mesmo vetor. No presente trabalho, foi investigado o efeito isolado do fitoplasma sobre a sintomatologia e a produção de dez híbridos de milho, bem como o efeito da população infectiva do vetor sobre o desenvolvimento de sintomas e as alterações sobre os componentes de produção da planta de milho. Para isto, plantas do híbrido XLX 520 foram experimentalmente inoculadas com fitoplasma por meio de 1, 3, 6 e 9 insetos infectivos/planta. Numa segunda etapa, os híbridos XLX 520, Z 8452, C 909, P 3063, P 3081, AG 3010, FT 9006, FT 9043, DO 02 e D 766 foram inoculados por meio de 10 insetos infectivos/planta. Os ensaios foram conduzidos sob condições de telado no período de setembro/1999 a abril/2000. Os resultados obtidos revelaram que a incidência da doença, resultando em severas perdas, foi proporcionalmente maior à medida em que se elevou o número de insetos infectivos/planta. Maiores freqüências de grãos miúdos, espigas pequenas, número reduzido de fileiras e de grãos, foram verificados para os níveis mais altos de infestação. A germinação de semente foi afetada negativamente em função da densidade da população infectiva. Os resultados obtidos na inoculação de híbridos revelaram o aparecimento de sintomas típicos de avermelhamento, proliferação de espigas e enfezamento de plantas, em graus variados em função dos híbridos utilizados. Para aqueles mais suscetíveis, além da alta proporção de grãos miúdos, foram registradas reduções de até 35% na altura de plantas, 98% na produção de grãos, 89% no tamanho de espigas, 50% no número de fileiras de grãos, 98% no número de grãos e 18% na germinação de sementes. Estes resultados confirmaram a importância do enfezamento vermelho para a cultura do milho / not available

Plantas de crista-de-galo (Celosia argentea) e pluma-de-flamingo (Celosia spicata) são ornamentais de flores exuberantes muito apreciadas. Recentemente, em logradouros públicos de Piracicaba (SP) foi observado que plantas de ambas as espécies exibiam sintomas típicos de doenças causadas por fitoplasmas, como redução foliar, superbrotamento de ramos laterais, enfezamento da parte aérea e filodia. Com o objetivo de demonstrar que tais organismos estavam associados à doença, o presente trabalho foi conduzido. Vinte e quatro amostras de folhas e ramos obtidas de plantas sintomáticas foram submetidas à extração do DNA total, o qual foi empregado para a detecção de fitoplasmas, conduzida por duplo PCR com os iniciadores P1/P7 ou P1/Tint e 16F2n/16R2. Plantas assintomáticas de celosia foram usadas como controle negativo, enquanto plantas de vinca experimentalmente infectadas por fitoplasmas serviram como controles positivos. Fitoplasmas foram detectados em 50% das plantas sintomáticas analisadas, através da amplificação de um fragmento genômico de 1,2 Kb, visualizado na forma de banda, em gel de agarose. Amplificações foram observadas para o controle positivo, porém nenhuma banda foi visualizada quando DNA de plantas assintomáticas foi usado na reação de PCR. O emprego de iniciadores específicos revelou que todos os fitoplasmas encontrados eram pertencentes ao grupo 16SrIII. Análises de RFLP, usando as enzimas HinfI, HpaII, TaqI, RsaI, KpnI, HaeIII, MseI, HhaI e Bsh 1236I e análises filogenéticas, baseadas na seqüência nucleotídica do 16S rDNA, confirmaram que o fitoplasma encontrados era afiliado ao grupo 16SrIII, subgrupo J. A transmissão experimental, via cuscuta, do fitoplasma presente em planta de crista-de-galo para planta de vinca evidenciou a natureza infecciosa da doença e que seu agente é, provavelmente, um fitoplasma. / Plants belonging to the species Celosia argentea and Celosia spicata are appreciated as ornamentals due to their colorful flowers. Recently, plants of both species exhibiting typical symptoms induced by phytoplasmas, characterized by deformed leaves, proliferation of axillary shoots, stunt and phyllody were found in public places in Piracicaba, SP, Brazil. The present study was done to demonstrate that phytoplasmas were associated with these diseased plants. Twenty four samples composed by leaves and young shoots were obtained from symptomatic plants. Total DNA was extracted and used as template in nested PCR primed by P1/P7 or P1/Tint and 16F2n/16R2. Total DNA extracted from asymptomatic plants of celosia was used as negative control and plants of periwinkle experimentally infected with phytoplasmas were used as positive control. Phytoplasmas were detected in 50% of the symptomatic plants through the amplification of a genomic fragment of 1.2kb visualized as band in agarose gel. Amplification were also obtained for the positive control, but no band was visualized when DNA from asymptomatic plants was used in the PCR reactions. Nested PCR performed with specific primers pair revealed that the phytoplasmas found in all samples belonged to group 16SrIII. RFLP analyses conducted with the restriction enzymes HinfI, HpaII, TaqI, RsaI, KpnI, HaeIII, MseI, HhaI and Bsh 1236I, plus phylogenetic analysis based on the 16S rRNA gene sequences confirmed that the phytoplasma detected in diseased plants was affiliated to group 16SrIII, subgroup J. Positive experimental transmission of the phytoplasma from celosia to periwinkle, using Cuscuta subinclusa, indicated that the disease is infectious and that phytoplasma is, probably, the causal agent.

A videira (Vitis spp.) é uma das frutíferas mais cultivadas no mundo, tendo grande importância sócio-econômica no Brasil, principalmente na Região Serrana do Rio Grande do Sul. Inúmeras doenças acometem a videira afetando a produção vitícola e gerando prejuízos econômicos nas regiões produtoras. Uma destas doenças é o amarelo da videira, que tem associação com fitoplasmas. Esses procariotos, desprovidos de parede celular habitam e se multiplicam nos vasos do floema das plantas e na hemolinfa dos insetos vetores. No Brasil, há relatos da presença de fitoplasmas infectando videiras nos estados de São Paulo e Paraná. No Rio Grande do Sul, já foi verificado infectando macieiras, bem como a presença de seus possíveis insetos vetores, cigarrinhas do grupo Cicadellidae como parte da entomofauna vitícola. Nos últimos ciclos de produção, videiras apresentando sintomas de fitoplasmose vem sendo observadas nos vinhedos da Serra Gaúcha. O objetivo do presente estudo foi confirmar a presença de fitoplasmas infectando videiras na Região Serrana do Rio Grande do Sul, bem como classificar os fitoplasmas encontrados quanto ao grupo e subgrupo ao qual pertencem. Foram coletados, nos anos de 2014 e 2015, ramos e raízes de plantas que apresentavam sintomas como avermelhamento ou clorose das folhas em videiras tintas e brancas, respectivamente, enrolamento dos bordos foliares, superbrotamento de ramos, encurtamento de entrenós, necrose de nervuras e definhamento. O DNA total foi extraído e utilizado para detecção de fitoplasmas por meio de Nested-PCR com os primers R16 mF2/R16 R1, P/P7 ou P1/Tint na primeira reação e R16 F2n /R16 R2 na segunda reação. Para identificação molecular os produtos da segunda reação, fragmentos correspondentes à região 16S rDNA, foram sequenciados e as sequências geradas foram alinhadas entre si. Uma seqüência representativa dos fitoplasmas encontrados foi utilizada para análise de RFLP in silico, com 17 enzimas de restrição, e análise filogenética. Fitoplasmas foram verificados em quatro amostras oriundas de três videiras sintomáticas. As sequências alinhadas apresentavam 99% de similaridade com sequencias de fitoplasmas depositadas no GeneBank. A partir da avaliação dos perfis de restrição gerados pelo RFLP in silico e a análise filogenética, pode-se concluir que os fitoplasmas encontrados pertencem ao grupo 16SrIII, e ao subgrupo 16SrIII-J. Dessa forma, o presente estudo confirma a presença de fitoplasmas infectando videiras na Região Serrana do Rio Grande do Sul, indicando a ocorrência do amarelo da videira, doença até então não diagnosticada na região. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2016-02-22T12:41:30Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Ronize Rohr dos Santos.pdf: 2096147 bytes, checksum: 52d3fdc210d2e34e4fcc1976c0c4920e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-22T12:41:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Ronize Rohr dos Santos.pdf: 2096147 bytes, checksum: 52d3fdc210d2e34e4fcc1976c0c4920e (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico. / The grapevine is one of the most cultivated fruit trees in the world, having great socio-economic importance in Brazil, particularly in the highlands of Rio Grande do Sul. Numerous diseases affect grapevine worldwide, interfering in grape production and generating economic losses. One of these diseases is the grapevine yellow, whose etiologic agent is a phytoplasma. These wall-less prokaryotes live and multiply in phloem vessels of plants and hemolymph of insect vectors. In Brazil, there are reports of the presence of phytoplasma infecting grapevines in the states of São Paulo and Paraná. In Rio Grande do Sul has been found infecting apple trees, causing the apple rubbery wood disease, as well as the presence of their possible insect vectors in vineyards, leafhoppers of the Cicadellidae group. In recent cycles of production, grapevines showing typical symptoms of phytoplasma infection had been observed in the vineyards of the highlands of Rio Grande do Sul. This study aimed to confirm the presence of phytoplasma infecting grapevines in vineyards of the highlands of Rio Grande do Sul and rank the phytoplasmas on the group and subgroup to which they belong. Branches and roots of plants showing symptoms such as, reddening or yellowing of leaves on red or white cultivars respectively, leaf downwards rolling, proliferation of axillary buds resulting in a witches’ broom behavior, abnormal internodes elongation, phloem necrosis and stunting, were sampled during the years 2014 and 2015 vintage. Total DNA was extracted and used for phytoplasmas detection by nested PCR with primers mF2 R16/R16 R1, P1/P7 and P1/Tint in the first reaction and F2n R16/R16 R2 in the second reaction. For molecular identification the second reaction product, corresponding to the region 16S rDNA fragments were sequenced and generated sequences were aligned. A representative sequence of grapevine phytoplasma was used for RFLP analysis in silico, with 17 restriction enzymes, and phylogenetic analysis. Phytoplasmas were detected in four samples deriving from three symptomatic vines. The aligned sequences showed 99% similarity with phytoplasma sequences deposited in GeneBank. The RFLP patters and the phylogenetic analysis, allowed concluding that the phytoplasmas found belongs to the group16SrIII, and 16SrIII- J subgroup. Thus, this study confirms the presence of phytoplasma infecting grapevines in the highlands of Rio Grande do Sul, indicating the occurrence of grapevine yellow disease hitherto none diagnosed in the region.

A videira (Vitis spp.) é uma das frutíferas mais cultivadas no mundo, tendo grande importância sócio-econômica no Brasil, principalmente na Região Serrana do Rio Grande do Sul. Inúmeras doenças acometem a videira afetando a produção vitícola e gerando prejuízos econômicos nas regiões produtoras. Uma destas doenças é o amarelo da videira, que tem associação com fitoplasmas. Esses procariotos, desprovidos de parede celular habitam e se multiplicam nos vasos do floema das plantas e na hemolinfa dos insetos vetores. No Brasil, há relatos da presença de fitoplasmas infectando videiras nos estados de São Paulo e Paraná. No Rio Grande do Sul, já foi verificado infectando macieiras, bem como a presença de seus possíveis insetos vetores, cigarrinhas do grupo Cicadellidae como parte da entomofauna vitícola. Nos últimos ciclos de produção, videiras apresentando sintomas de fitoplasmose vem sendo observadas nos vinhedos da Serra Gaúcha. O objetivo do presente estudo foi confirmar a presença de fitoplasmas infectando videiras na Região Serrana do Rio Grande do Sul, bem como classificar os fitoplasmas encontrados quanto ao grupo e subgrupo ao qual pertencem. Foram coletados, nos anos de 2014 e 2015, ramos e raízes de plantas que apresentavam sintomas como avermelhamento ou clorose das folhas em videiras tintas e brancas, respectivamente, enrolamento dos bordos foliares, superbrotamento de ramos, encurtamento de entrenós, necrose de nervuras e definhamento. O DNA total foi extraído e utilizado para detecção de fitoplasmas por meio de Nested-PCR com os primers R16 mF2/R16 R1, P/P7 ou P1/Tint na primeira reação e R16 F2n /R16 R2 na segunda reação. Para identificação molecular os produtos da segunda reação, fragmentos correspondentes à região 16S rDNA, foram sequenciados e as sequências geradas foram alinhadas entre si. Uma seqüência representativa dos fitoplasmas encontrados foi utilizada para análise de RFLP in silico, com 17 enzimas de restrição, e análise filogenética. Fitoplasmas foram verificados em quatro amostras oriundas de três videiras sintomáticas. As sequências alinhadas apresentavam 99% de similaridade com sequencias de fitoplasmas depositadas no GeneBank. A partir da avaliação dos perfis de restrição gerados pelo RFLP in silico e a análise filogenética, pode-se concluir que os fitoplasmas encontrados pertencem ao grupo 16SrIII, e ao subgrupo 16SrIII-J. Dessa forma, o presente estudo confirma a presença de fitoplasmas infectando videiras na Região Serrana do Rio Grande do Sul, indicando a ocorrência do amarelo da videira, doença até então não diagnosticada na região. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico. / The grapevine is one of the most cultivated fruit trees in the world, having great socio-economic importance in Brazil, particularly in the highlands of Rio Grande do Sul. Numerous diseases affect grapevine worldwide, interfering in grape production and generating economic losses. One of these diseases is the grapevine yellow, whose etiologic agent is a phytoplasma. These wall-less prokaryotes live and multiply in phloem vessels of plants and hemolymph of insect vectors. In Brazil, there are reports of the presence of phytoplasma infecting grapevines in the states of São Paulo and Paraná. In Rio Grande do Sul has been found infecting apple trees, causing the apple rubbery wood disease, as well as the presence of their possible insect vectors in vineyards, leafhoppers of the Cicadellidae group. In recent cycles of production, grapevines showing typical symptoms of phytoplasma infection had been observed in the vineyards of the highlands of Rio Grande do Sul. This study aimed to confirm the presence of phytoplasma infecting grapevines in vineyards of the highlands of Rio Grande do Sul and rank the phytoplasmas on the group and subgroup to which they belong. Branches and roots of plants showing symptoms such as, reddening or yellowing of leaves on red or white cultivars respectively, leaf downwards rolling, proliferation of axillary buds resulting in a witches’ broom behavior, abnormal internodes elongation, phloem necrosis and stunting, were sampled during the years 2014 and 2015 vintage. Total DNA was extracted and used for phytoplasmas detection by nested PCR with primers mF2 R16/R16 R1, P1/P7 and P1/Tint in the first reaction and F2n R16/R16 R2 in the second reaction. For molecular identification the second reaction product, corresponding to the region 16S rDNA fragments were sequenced and generated sequences were aligned. A representative sequence of grapevine phytoplasma was used for RFLP analysis in silico, with 17 restriction enzymes, and phylogenetic analysis. Phytoplasmas were detected in four samples deriving from three symptomatic vines. The aligned sequences showed 99% similarity with phytoplasma sequences deposited in GeneBank. The RFLP patters and the phylogenetic analysis, allowed concluding that the phytoplasmas found belongs to the group16SrIII, and 16SrIII- J subgroup. Thus, this study confirms the presence of phytoplasma infecting grapevines in the highlands of Rio Grande do Sul, indicating the occurrence of grapevine yellow disease hitherto none diagnosed in the region.

Plantas de crista-de-galo (Celosia argentea) e pluma-de-flamingo (Celosia spicata) são ornamentais de flores exuberantes muito apreciadas. Recentemente, em logradouros públicos de Piracicaba (SP) foi observado que plantas de ambas as espécies exibiam sintomas típicos de doenças causadas por fitoplasmas, como redução foliar, superbrotamento de ramos laterais, enfezamento da parte aérea e filodia. Com o objetivo de demonstrar que tais organismos estavam associados à doença, o presente trabalho foi conduzido. Vinte e quatro amostras de folhas e ramos obtidas de plantas sintomáticas foram submetidas à extração do DNA total, o qual foi empregado para a detecção de fitoplasmas, conduzida por duplo PCR com os iniciadores P1/P7 ou P1/Tint e 16F2n/16R2. Plantas assintomáticas de celosia foram usadas como controle negativo, enquanto plantas de vinca experimentalmente infectadas por fitoplasmas serviram como controles positivos. Fitoplasmas foram detectados em 50% das plantas sintomáticas analisadas, através da amplificação de um fragmento genômico de 1,2 Kb, visualizado na forma de banda, em gel de agarose. Amplificações foram observadas para o controle positivo, porém nenhuma banda foi visualizada quando DNA de plantas assintomáticas foi usado na reação de PCR. O emprego de iniciadores específicos revelou que todos os fitoplasmas encontrados eram pertencentes ao grupo 16SrIII. Análises de RFLP, usando as enzimas HinfI, HpaII, TaqI, RsaI, KpnI, HaeIII, MseI, HhaI e Bsh 1236I e análises filogenéticas, baseadas na seqüência nucleotídica do 16S rDNA, confirmaram que o fitoplasma encontrados era afiliado ao grupo 16SrIII, subgrupo J. A transmissão experimental, via cuscuta, do fitoplasma presente em planta de crista-de-galo para planta de vinca evidenciou a natureza infecciosa da doença e que seu agente é, provavelmente, um fitoplasma. / Plants belonging to the species Celosia argentea and Celosia spicata are appreciated as ornamentals due to their colorful flowers. Recently, plants of both species exhibiting typical symptoms induced by phytoplasmas, characterized by deformed leaves, proliferation of axillary shoots, stunt and phyllody were found in public places in Piracicaba, SP, Brazil. The present study was done to demonstrate that phytoplasmas were associated with these diseased plants. Twenty four samples composed by leaves and young shoots were obtained from symptomatic plants. Total DNA was extracted and used as template in nested PCR primed by P1/P7 or P1/Tint and 16F2n/16R2. Total DNA extracted from asymptomatic plants of celosia was used as negative control and plants of periwinkle experimentally infected with phytoplasmas were used as positive control. Phytoplasmas were detected in 50% of the symptomatic plants through the amplification of a genomic fragment of 1.2kb visualized as band in agarose gel. Amplification were also obtained for the positive control, but no band was visualized when DNA from asymptomatic plants was used in the PCR reactions. Nested PCR performed with specific primers pair revealed that the phytoplasmas found in all samples belonged to group 16SrIII. RFLP analyses conducted with the restriction enzymes HinfI, HpaII, TaqI, RsaI, KpnI, HaeIII, MseI, HhaI and Bsh 1236I, plus phylogenetic analysis based on the 16S rRNA gene sequences confirmed that the phytoplasma detected in diseased plants was affiliated to group 16SrIII, subgroup J. Positive experimental transmission of the phytoplasma from celosia to periwinkle, using Cuscuta subinclusa, indicated that the disease is infectious and that phytoplasma is, probably, the causal agent.

O brócolis (Brassica oleraceae var. italica) é uma das hortaliças mais importantes do país, cujo volume de comercialização na CEAGESP é de aproximadamente 13 mil toneladas por ano. Recentemente, uma nova doença tem causado perdas relevantes para as culturas instaladas na maior região produtora do Estado de São Paulo. Os sintomas característicos da doença são expressos pelo enfezamento da planta e necrose dos vasos de floema. Devido ao fato destes sintomas indicarem a presença de fitoplasmas nas culturas de repolho e couve-flor, localizadas na mesma região geográfica onde foi observada esta nova doença, levantou-se a suspeita de que estes mesmos agentes patogênicos pudessem estar associados com as plantas doentes de brócolis. Assim, o DNA total de plantas de brócolis sintomáticas foi analisado por PCR com primers específicos para a região 16S rDNA de fitoplasmas. Os resultados revelaram que estes patógenos estavam associados com as plantas doentes. Através das técnicas de RFLP do sequenciamento de nucleotídeos desta mesma região genômica, os fitoplasmas foram identificados como pertencentes aos grupos 16SrI, 16SrIII e 16SrXIII. Através de análise de RFLP, fitoplasmas também foram identificados em diversas espécies de plantas daninhas e em cigarrinhas da família Cicadellidae coletadas em áreas adjacentes a campos de produção de brócolis. Fitoplasmas do grupo 16SrIII foram identificados em plantas daninhas das espécies Agetarum conyzoides (mentrasto), Crotalaria lanceolata (crotalária), Lepidium virginicum (mentruz), Nicandra physalodes (juá-de-capote), Paulicourea marcgravii (erva-de-rato), Ricinus communis (mamona), Sida rhombifolia (guanxuma), Sonchus oleraceae (serralha amarela), Bidens pilosa (picão preto), Erigeron bonariensis (buva), Emilia sonchifolia (falsa serralha), Leonorus sibiricus (rubim), enquanto que fitoplasmas do grupo 16SrVII foram encontrados as últimas quatro espécies citadas. Com relação aos insetos, fitoplasmas foram detectados em indivíduos das subfamílias Deltocephalinae, Agalliinae e Typhlocybinae. Dentro da subfamília Deltocephalinae, a cigarrinha Balclutha hebe portava fitoplasma do grupo 16SrI, enquanto que cigarrinhas das espécies Atanus nitidus, Planicephalus flavicosta e Schapytopius fuliginosus abrigavam fitoplasmas do grupo 16SrIII. Nos tecidos de duas cigarrinhas da subfamília Agalliinae e uma da Typhlocybinae, as quais não foram identificadas quanto a espécie, foram encontrados fitoplasmas do grupo 16SrIII. As análises epidemiológicas revelaram um padrão espacial agregado de plantas doentes e a ocorrência de um maior progresso da doença nos bordos dos campos de cultivo de brócolis, que estão localizados nas proximidades de áreas com a presença de plantas daninhas. / Broccoli (Brassica oleraceae var. italica) is one of the most important vegetables in Brazil, whose trading volume in CEAGESP is approximately 13 000 tons per year. Recently, a new disease has caused significant losses in this crop cultivated in the largest producing region of the São Paulo State. The characteristic symptoms of the disease are expressed by plant stunting and necrosis of phloem vessels. Because these symptoms indicate the presence of phytoplasmas in cabbage and cauliflower crops, grown in the same geographical region, it was suspected that the same pathogens could be associated with the affected broccoli plants. Therefore, the total DNA from symptomatic plants of broccoli was analyzed by PCR with specific primers for the 16S rDNA of phytoplasmas. Through the techniques of RFLP and nucleotide sequencing of the same genomic region, the phytoplasmas were identified as belonging to the groups 16SrI, 16SrIII and 16SrXIII. Through RFLP analysis, phytoplasmas were also identified in several species of weeds and leafhoppers in the family Cicadellidae collected in adjacent areas of broccoli fields. Phytoplasmas belonging of the 16SrIII group were identified in the weeds belonging to the species Agetarum conyzoides, Crotalaria lanceolata, Lepidium virginicum, Nicandra physalodes, Paulicourea marcgravii, Ricinus communis, Sida rhombifolia, Sonchus oleraceae, Bidens pilosa, Erigeron bonariensis, Emilia sonchifolia, Leonorus sibiricus, while phytoplasmas of the 16SrVII group were found in the last four mentioned species. In respect to insects, phytoplasmas were detected in individuals from subfamilies Deltocephalinae, Agalliinae and Typhlocybinae. Within the subfamily Deltocephalinae, the leafhopper Balclutha hebe carried phytoplasmas of the 16SrI group, while that of the species Atanus nitidus, Planicephalus flavicosta e Schapytopius fuliginosus harbored phytoplasmas of the 16SrIII group. In the tissues of two leafhoppers of the subfamily Agalliinae and one of the Typhlocybinae, which were not identified as specie, were found phytoplasmas of the 16SrIII group. The epidemiological analysis revelead an aggregated pattern of the diseased plants and a higher progress of the diseased in the border of the broccoli fields, whitch were located nearby areas where the presence of weeds was abundant.

Sintomas típicos de infecção por fitoplasmas foram encontrados em plantas de gergelim cultivadas comercialmente. Estes sintomas se caracterizavam pela intensa proliferação de ramos, presença abundante de folhas levemente cloróticas e de tamanho menor que as normais, além de pétalas de coloração verde. A partir de plantas afetadas foi extraído o DNA total, o qual foi usado em reações de duplo PCR, visando detectar fitoplasmas nos tecidos vegetais. Fragmentos genômicos de 1,2 Kb da região do 16S rDNA foram amplificados demonstrando a constante associação entre fitoplasmas e plantas doentes. Através de duplo PCR usando primers específicos, foi identificado um fitoplasma pertencente ao grupo 16SrI em todas as amostras sintomáticas analisadas. Com base no sequenciamento desta região genômica e na digestão in sílico, as análises virtuais de RFLP revelaram que um dos fitoplasmas presentes nas amostras de gergelim era afiliado ao subgrupo 16SrI-B. No entanto, os padrões de restrição apresentados pelo outro fitoplasma mostraram que o mesmo era distinto dos demais representantes dos subgrupos que constituem o grupo 16SrI. Os valores calculados de coeficientes de similaridade e os mapas putativos de restrição confirmaram os resultados da análise de RFLP, indicando que este fitoplasma era representante de um novo subgrupo. A árvore filogenética, construída a partir das sequências nucleotídicas do 16S rDNA de diversos fitoplasmas evidenciou que este novo fitoplasma emergia de um ramo distinto, considerando as ramificações dentro do grupo 16SrI. A filodia do gergelim foi anteriormente relatada em vários países, sendo associada com fitoplasmas dos grupos 16SrI, 16SrII e 16SrVI. O presente trabalho revelou a ocorrência de dois fitoplasmas associados à filodia, sendo um deles pertencente ao subgrupo 16SrI-B e outro caracterizado como representante de um novo subgrupo, aqui denominado 16SrI-X. / Typical symptoms commonly induced by phytoplasmas were found in sesame plants grown in commercial fields. These symptoms were characterized by shoot proliferation, leaves of reduced size exhibiting light chlorosis, and green petals. Total DNA extracts were obtained from diseased plants and used as template in nested PCR, in order to detect phytoplasmas in the tissues of the hosts. Genomic fragments of 1.2 kb corresponding to the 16S rDNA region were amplified demonstrating the association of phytoplasmas and diseased plants. Using nested PCR with specific primers, a phytoplasma belonging to group 16SrI was identified in all symptomatic samples. Based on the sequencing of 16S rDNA and in silico digestion, the virtual RFLP analysis allowed identify the presence of a phytoplasma affiliated with the subgroup 16SrI-B. This analysis also revealed a second phytoplasma distinct of all representatives of the subgroups within the group 16SrI. Similarity coefficients values and analysis of putative restriction sites confirmed the results obtained from virtual RFLP analysis indicating that this phytoplasma was representative of a new subgroup. A phylogenetic tree generated by the 16S rDNA sequences belonging to diverse phytoplasmas evidenced that this new phytoplasma emerged from a distinct branch, within of the 16SrI group. The sesame phyllody was previously reported in various countries in association with phytoplasmas belonging to 16SrI, 16SrII, and 16SrVI groups. The present study revealed the association of the phyllody with a phytoplasma affiliated with 16SrI-B and a phytoplasma representative of a new subgroup here named 16SrI-X.

No Brasil, o cultivo de ameixeira tem atingido significativa importância econômica em termos de rentabilidade. Embora rentável, a cultura exige cuidados constantes em relação aos danos provocados por doenças. Entre elas, o \'amarelo\', causado por fitoplasmas, tem se mostrado como uma doença de relevância nos países produtores desta fruta. Em pomares comerciais localizados em Paranapanema-SP, foram observadas ameixeiras (Prunus salicina) exibindo sintomas típicos de \'amarelos\', caracterizados por superbrotamento de ramos, redução no comprimento de entrenós, além de amarelecimento, deformação e redução do limbo foliar. Com objetivo de identificar o fitoplasma e determinar o modelo de colonização do hospedeiro pelo patógeno foi desenvolvido o presente estudo. Para isto, em três pomares, foram amostradas plantas sintomáticas, assintomáticas e sadias, pertencentes às variedades Gulfblaze e Azteca. O DNA total foi extraído de folhas e ramos e usado em duplo PCR com os iniciadores R16mF2/mR1 e R16F2n/R2, visando a detecção do fitoplasma. Os resultados confirmaram a presença de fitoplasma pela amplificação de fragmentos de DNA de 1,2 kb do gene 16S rRNA. Os produtos de PCR gerados por dez isolados de fitoplasmas de cada variedade foram clonados e três clones de cada isolado foram sequenciados. Uma vez que nenhum polimorfismo foi encontrado, uma sequência consenso foi selecionada para cada isolado e um isolado foi escolhido como representativo para cada variedade. Estas sequências foram designadas por PlY-BR01 e PlY-BR02, com 1.246 pb, e depositadas no GenBank sob os números de acesso KF499086 e KF499087, respectivamente. A sequência do 16S rRNA do fitoplasma da ameixeira apresentou 100% de identidade com o fitoplasma representante do grupo 16SrI-B (AY265208). A análise de RFLP virtual e o cálculo do coeficiente de similaridade, permitiram classificar o fitoplasma da ameixeira no grupo 16SrI-B. A análise filogenética revelou que o mesmo está estritamente relacionado ao subgrupo 16SrI-B. No estudo da colonização das plantas pelo patógeno, amostras da copa e raiz foram coletadas mensalmente, durante um ano, de plantas infectadas das variedades Gulfblaze e Azteca. O DNA total foi extraído e submetido ao PCR em Tempo Real com os iniciadores UniRNAForward/UniRNAReverse, para quantificar o fitoplasma nos tecidos do hospedeiro. O fitoplasma foi detectado tanto em amostras de copa como de raiz, em todas as árvores infectadas de ambas as variedades. A concentração do mesmo nos tecidos vegetais variou de 5,77x105 a 1,93x109 e 6,18x105 a 3,92x109 N°cópias/100 ng de DNA total, na copa e na raiz, respectivamente. O experimento mostrou uma flutuação sazonal na concentração do fitoplasma, sendo as maiores concentrações encontradas no verão, embora o fitoplasma tenha permanecido na parte aérea do hospedeiro mesmo no período mais frio, que compreende a fase de dormência da planta. Com base nestes resultados, ficou evidente que as amostras retiradas da copa e coletadas durante o período mais quente do ano são as mais adequadas para os procedimentos de detecção do fitoplasma, visando confirmar a diagnose feita com base na sintomatologia. / In Brazil, the cultivation of plum trees has achieved significant economic importance in terms of profitability. Although profitable, the culture demands attention in relation to damages provoked by diseases. Among them, the \'yellow\', caused by phytoplasmas, is a relevant disease present in the plum producing countries. In commercial orchards located in Paranapanema-SP region, were observed plum trees (Prunus salicina) exhibiting typical symptoms of \'yellow\', characterized by intense shoot proliferation, shortened internodes, generalized yellowing, leaf malformation and small leaves. The present study was conducted in order to identify the phytoplasma associated with symptomatic plants and determine the pattern of host colonization by the pathogen. Therefore, were sampled symptomatic, asymptomatic and healthy plants of the varieties Gulfblaze and Azteca, grown in three commercial orchards. Total DNA was extracted from leaves and shoots and submitted to nested PCR primed with R16mF2/mR1 and R16F2n/R2, in order to detect phytoplasma. The results confirmed the presence of phytoplasma by amplification of DNA fragments of 1.2 kb from 16S rRNA gene. The PCR products generated by ten phytoplasma isolates of each variety were cloned and three clones of each isolate were sequenced. Since no polymorphism was found, a consensus sequence was selected for each isolate and an isolate was chosen as representative for each variety. These sequences were designated by PlYBR01 and PlY-BR02, with 1,246 bp, and deposited in GenBank under the accession numbers KF499086 and KF499087, respectively. The sequence of the 16S rRNA of the phytoplasma founded in plum trees showed 100% identity with the phytoplasma representative of 16SrI-B group (AY265208). The virtual RFLP analysis and the calculation of the similarity coefficient, allowed classify the phytoplasma present in plum trees as a member of 16SrI-B group. Phylogenetic analysis supported that this phytoplasma is closed related to the 16SrI-B subgroup. In the study about plant colonization, the samples from leaves, shoots and root were monthly collected, for one year, from the infected plants of the varieties Gulfblaze and Azteca. Total DNA was extracted and submitted to the Real Time PCR with primers UniRNAForward/UniRNAReverse, in order to quantify phytoplasma in host tissues. The phytoplasma was detected in both aerial parts and roots in all infected trees of the two varieties. The concentration of the pathogen in plant tissues ranged from 5.77 x105 to 1.93 x109 and 6.18 x105 to 3.92 x109 N°copies/100ng total DNA in aerial parts and roots, respectively. The experiment showed a seasonal fluctuation in the concentration of the phytoplasma in plants, with the highest concentrations found in summer, although the phytoplasma have remained in the shoots of the host even in the coldest period, comprising the dormant phase of the plant. Based on these results, it was evident that the samples collected from the aerial parts and during the hottest period of the year are the most appropriate for detection of phytoplasma to confirm the diagnosis based on symptomatology.

Uma doença, denominada de enfezamento, de etiologia desconhecida, tem sido observada nos campos de cultivo de repolho da região do cinturão verde de São Paulo. A doença tem causado sérios danos à cultura nos últimos anos. A sintomatologia apresentada pelas plantas afetadas tem sido caracterizada por clorose foliar, avermelhamento das nervuras e do limbo, enfezamento generalizado, proliferação de brotos e má formação da cabeça, de folhas e órgãos florais. A presença destes sintomas levou à suspeita da ocorrência de fitoplasma associado à doença. Com o objetivo de investigar o possível agente etiológico, plantas de repolho naturalmente infectadas foram coletadas em São Paulo e também nos Estados do Paraná e Rio Grande do Sul, onde a doença, recentemente, tem ocorrido com alta intensidade. Cigarrinhas que ocorrem em cultivos comerciais também foram amostradas em campos de Ibiúna/SP. Após a extração, o DNA total foi submetido ao teste de duplo PCR empregando-se os pares de primers universais P1/Tint e R16F2n/R2 e os pares específicos para identificação de fitoplasmas. Análises de PCR mostraram a amplificação consistente de fragmentos de DNA de 1,2 kb, evidenciando a associação constante de fitoplasma com tecidos das plantas sintomáticas e de insetos. O uso de primers específicos para identificação demonstrou a ocorrência de fitoplasmas afiliados ao grupos 16SrI e 16SrIII, tanto em repolho como nas cigarrinhas. Análises de RFLP, usando as enzimas de restrição AluI, Bsh 12361, HhaI HpaII, KpnI, MboI, MseI e RsaI confirmaram a ocorrência de fitoplasmas pertencentes aos referidos grupos no material vegetal e nos insetos. O padrão espacial de plantas sintomáticas no campo foi do tipo agregado e não houve evidência da disseminação planta a planta, indicando um papel mais importante do comportamento do vetor no arranjo espacial da doença do que de influências do patógeno ou do hospedeiro. / A disease called stunt, of unknown etiology, has occurred in cabbage crops located in the green belt region of the São Paulo State (Brazil). The disease has caused serious yield losses in the last years. The symptomatology exhibited by the affected plants has been characterized by foliar chlorosis, intense red coloration of leafs, general stunt, shoot proliferation and malformation of heads, leaves and floral parts. The presence of those symptoms suggested the occurrence of phytoplasma associated with the disease. In order to investigate the possible agent of the disease, naturally infected cabbage plants were collected from the States of São Paulo, and also from Paraná and Rio Grande do Sul, where the disease has occurred recently with level of intensity. Leafhoppers present in cabbage fields were sampled from Ibiúna, in São Paulo State. Total DNA was extracted and submitted to nested PCR with the universal primer pairs P1/Tint and R16 F2n/R2 and specific primers for phytoplasmas identification. PCR assays revealed the amplification of DNA fragments of 1.2kb, demonstrating consistently the presence of phytoplasma in the tissues from symptomatic plants and insects. Specific primers revealed the occurrence of phytoplasmas affiliated with the groups 16SrI and 16SrIII, both cabbage plants and leafhoppers. RFLP analyses using the restriction enzymes AluI, Bsh 12361, HhaI, HpaII, KpnI, MboI, MseI and RsaI confirmed the occurrence of phytoplasmas belonging to the same groups in plants and insects. Spatial pattern of symptomatic plants in the field was aggregated and there was no evidence of the spread plant-to-plant. This indicates a more important role of the vector behavior on spatial pattern than influences of the pathogen or host.