Thesis (MTech (Biomedical Technology))--Cape Peninsula University of Technology, 2015. / Cancer is the leading cause of death in both developed and developing countries. In particular, breast cancer is regarded as the most common neoplastic disease in females and accounts for the high mortality rates in women. Increased mortality rates could be attributed to ineffective current cancer treatment modalities that have been implicated to cause multidrug resistance, high toxicity and induction of several side effects. In addition, oxidative stress appears to play a role in the development of breast cancer. Therefore, current cancer research aims to search for plant based anticancer compounds with less side effects and toxicity towards the human body. An example of such a plant is Hibiscus sabdariffa also known as roselle and is reported to have bioactive compounds that exhibit anticancer and antioxidant effects. However, the effects of Hibiscus sabdariffa on breast cancer in relation to oxidative stress and apoptosis have not been investigated. In this research study, the aim was to evaluate the cytotoxic and antioxidant effects of water and methanolic extracts of Hibiscus sabdariffa (HS) on cancerous MCF7 and non-cancerous MCF12A breast cell lines with special reference to oxidative stress and apoptosis. This was done based on the fact that HS has been documented for its traditional use against cancer and other ailments.

Orientador: Áureo Evangelista Santana / Banca: Mirela Tinucci Costa / Banca: Raimundo Souza Lopes / Resumo: O linfoma é o tumor de tecido hematopoético mais comum nos cães e um dos tumores malignos de maior ocorrência nesta espécie. É um ótimo modelo experimental para estudo devido a sua semelhança com o linfoma não-Hodgkin em humanos. Considerando a importância das alterações decorrentes da evolução desta neoplasia e aquelas ocorridas com o emprego da poliquimioterapia, avaliou-se a fórmula leucocitária absoluta e a contagem de células CD45+, no sangue de 25 cães linfomatosos, contrastando-as a partir do diagnóstico, uma vez por semana, durante as primeiras oito sessões quimioterápicas do protocolo de Madison-Wisconsin, e também foi comparada as contagens totais dos granulócitos, linfócitos e monócitos, obtidas em contador automático convencional e por intermédio da citometria de fluxo. Observou-se um maior número de animais com linfoma multicêntrico em estadio Vb. No leucograma, as principais alterações foram observadas no momento do diagnóstico e quando analisado o tratamento poliquimioterápico, ao longo do tempo, a maior mielosupressão foi imposta pela vincristina e suas associações. Cães linfomatosos podem ser avaliados tanto por intermédio de contadores eletrônicos como por meio da citometria de fluxo / Abstract: Lymphoma is the most common hematopoietic tumor in dogs and one of the malignant tumors with highest occurrence in that species. It is a great experimental model to study since it has a great resemblance with the non-Hodgkin lymphoma in humans. Considering the importance of the alterations due to the evolution of this malignancy and the ones due to the use of polichemothearpy this work aimed to evaluate the absolute leucocyte count and the counts of CD45+ type cells in the blood of 25 lymphomatic dogs counterpointing them since diagnose, once a week, during the first eight chemotherapic sessions with the Madison-Wisconsin protocol. Furthermore the total counts of granulocytes, lymphocytes and monocytes obtained by conventional automatic counter and by flow cytometry were compared. It was observed a greater number of animals with multicentric lymphoma in stage Vb. The main alterations in the leukon were the ones observed at the moment of diagnose. When analyzing the polichemotherapy treatment the highest myelosupression was caused by vincristine and its associations. It is concluded that dogs with lymphoma can be evaluated by electronic counters as well as by flow cytometry / Mestre

Introdução: A doação de plaquetas por aférese é um método de coleta que vem aumentando em relevância. Sabe-se que esta técnica apresenta inúmeras vantagens em comparação à doação de sangue total. Observamos que há uma preocupação na qualidade dos hemocomponentes enviados ao paciente, no entanto, não se observam muitas pesquisas em busca do cuidado com o doador. Órgãos como o Food and Drug Administration (FDA) já publicaram normas mais restritivas em relação à doação de plaquetas por aférese, pois pesquisas apontaram uma diminuição de algumas células e proteínas do sistema imunológico em doadores de repetição. Objetivos: Analisar doadores de plaquetas de repetição quanto a parâmetros hematimétricos e quantificação de subpopulações linfocitárias comparando-os com um grupo controle composto por doadores de sangue total que não doam há no mínimo um ano ou doando pela primeira vez e, ainda avaliar se a frequência de doações, o tempo de procedimento e o número de plaquetas doadas influenciam na contagem de leucócitos totais e nas subpopulações de linfócitos. Metodologia: Foram analisados 88 indivíduos em um estudo caso-controle, sendo que o grupo controle (CO) incluído foi de doadores de sangue total que haviam doado pela primeira vez ou haviam doado sangue total há mais de um ano. Os casos (CA) incluídos foram os doadores de repetição de plaquetaférese (quatro ou mais doações no último ano). O pareamento foi feito por sexo e idade. As amostras de sangue periférico foram coletadas em tubos contendo EDTA e analisadas em até 6 horas por citometria de fluxo, através da utilização de anticorpos monoclonais anti-CD3, CD4, CD8, HLADR, CD19 e CD56. Resultados: Foram avaliados 44 pares de doadores (caso vs controle). Destes, 81,8% eram homens, a média de idade dos grupos foi de 46 ±13 anos nos casos e 47 ±11 nos controles. Comparando os dois grupos, observou-se diferença estatisticamente significativa (p<0,05) na média de quantificação de leucócitos absolutos CA= 6476,6/μL vs CO=7115,4/μL (p=0,017), na média de linfócitos absolutos CA= 1862,6/μL vs CO= 2239,2/μL (p=0,007) e nos marcadores: CD3+/CD8+ (absoluto) CA= 437/μL vs CO= 597/μL (p=0,01), CD3+/CD4+(%) CA= 47,3/μL vs CO= 42,77/μL (p=0,007). Conclusões: Neste estudo foi possível observar que há uma diminuição em algumas células linfoides dos doadores de repetição em relação aos doadores convencionais, no entanto essa diferença não tem relevância clínica, demonstrando que os intervalos de doações que estes doadores estão sendo submetidos é adequado. A contagem de plaquetas dos doadores de repetição se mantiveram no decorrer do ano, este dado nos auxilia para mantermos um banco de dados de doadores de repetição com uma quantificação de plaquetas adequada, podendo ser convocado sem risco de ser bloqueado por contagem inferior ao preconizado. / Introduction: The donation of platelets by apheresis as a collection method has lately grown in relevance. This technique presents several advantages when compared to total blood donation. We understand there is a concern about the quality of the hemocomponents that are administered to the patients; however, there are not many researches concerned with caring for the donor. Entities such as the Food and Drug Administration (FDA) have published more restricting regulations regarding the donation of platelets by apheresis, since researches indicate a decrease in some cells and proteins present in the immunological systems of repeat donors. Objectives: To analyze repeat donors of platelets with regards to hematimetric parameters and quantification of lymphocyte sub-populations by comparing them with a control group consisting of total blood donors that have not donated blood for the past year at least or that are donating for the first time. Additionally, to evaluate if the frequency of donations, the duration of the procedure, and the donated platelet counts influence in the total leukocyte counts and in the sub-populations of lymphocytes. Methodology: We analyzed 88 individuals in a control case study. The control group (CG) consisted of total blood donors in their first donation or that had donated for the last time more than a year before. The cases (CA) included were the repeat donors by platelet apheresis (four or more donations in the past year). We matched the individuals by gender and age. Peripheral blood samples were collected in tubes containing EDTA and analyzed up until 6 hours later by flow cytometry, through monoclonal antibodies anti-CD3, CD4, CD8, HLADR, CD19, and CD56. Results: 44 pairs of donor were evaluated (case vs control). Among them, 81.8% were men, the average age of the groups was 46 (±13) years in the cases and 47 (±11) in the controls. When comparing the two groups, we observed a statistically significant difference (p<0,05) in the average of the quantification of absolute leukocytes CA= 6476.6/μL vs CG=7115.4/μL (p=0.017), in the average of absolute lymphocytes CA= 1862.6/μL vs CG= 2239.2/μL (p=0.007), and in the markers: CD3+/CD8+ (absolute) CA= 437/μL vs CG= 597/μL (p=0,01), CD3+/CD4+(%) CA= 47.3/μL vs CG= 42.77/μL (p=0.007). Conclusions: We were able to note in this study that there is a significant decrease in some lymphoid cells of repeat donors when compared to conventional donors. This difference, however, is not clinically relevant, which demonstrates that the donation intervals to which the donors are subject are appropriate. Platelet numbers of repeat donors remained the same throughout the year. This piece of data helps us keep a database of repeat donors with an adequate platelet number. These donors can be called for without risking of their being blocked in the screening for a number lower than the recommended.

Introdução: as doenças linfoproliferativas de células B maduras correspondem a cerca de 80% das neoplasias linfoides, são caracterizadas pela proliferação clonal de uma célula B precursora em diferentes estágios de diferenciação. A semelhança imunofenotípica a um dado estágio maturativo é relevante para o diagnóstico diferencial através da imunofenotipagem por citometria de fluxo, embora a sobreposição de expressões possa dificultar a identificação correta de cada linfoproliferação. Alguns marcadores são pouco conhecidos nas diferentes linfoproliferações B e há pouca literatura analisando os dados quantitativamente, sendo grande parte qualitativa. Objetivos: este trabalho avalia a expressão quantitativa em intensidade de fluorescência média (IFM) dos anticorpos CD200, CD43, CD52 e CD123 no diagnóstico diferencial das doenças linfoproliferativas B crônicas. Métodos: estudo transversal, com 124 amostras de pacientes em investigação diagnóstica de doenças linfoproliferativas que realizaram imunofenotipagem em um centro de referência em neoplasias hematológicas no período de outubro de 2014 a junho de 2015. Foram analisadas as IFMs de cada marcador nas onze diferentes doenças diagnosticadas. Resultados: as neoplasias dos 124 pacientes analisados foram: 81 leucemias linfocíticas crônicas (LLC), 17 linfomas de zona marginal (LZM), 9 linfomas linfoplasmocíticos (LLPL), 6 linfomas do manto (LM), 2 tricoleucemias (TRL), 2 tricoleucemias variantes (TRLv), 5 linfomas foliculares (LF), 1 linfoma de Burkitt e 1 linfoma difuso de grandes células B (LDGCB). A expressão mediana do CD200 foi de 46,8 (intervalo: 1,5-334). A expressão mediana de CD200 foi maior na TRL (incluindo a TRLv) e na LLC (85 e 61,2, respectivamente). A expressão de IFM do CD200 na TRLv diferiu quando comparado à TRL na sua forma clássica (mediana: 36,1 versus 220,3). A mesma diferença foi observada na expressão do CD123 quando comparada a TRL à TRLv. Verificamos, que casos de LZM demonstraram IFM medianas de CD43 de 7,1 (intervalo: 1,1-106), em comparação a casos de LM e LLC, nos quais as medianas de IFM do CD43 foram 90 e 176, respectivamente. A comparação da intensidade de CD52 entre amostras demostrou diferença estatisticamente significativa entre LLC e LZM com medianas de IFM de 775,5 versus 1297,0 (P=0,04). Conclusões: nossos resultados sugerem que a citometria de fluxo quantitativa desses marcadores pode ser uma ferramenta adicional útil na identificação de alguns tipos de DLPCBs. / Background: lymphoproliferative disorders of mature B cells account for about 80% of the lymphoid malignancies. They are characterized by the clonal proliferation of a B cell precursor at different stages of differentiation. The similarity of a given phenotypical maturation stage is relevant for the differential diagnosis by immunophenotyping, however overlap in cell morphology and immunologic features may difficult the correct identification of each pathology. Some markers are not well known in different B lymphoproliferative neoplasms and there is little literature analyzing the data quantitatively. Objectives: this study evaluated the expression of CD200, CD43, CD52 and CD123 by flow cytometry on B-cell chronic lymphoproliferative disorders (BCLDs) differential diagnosis. Methods: cross-sectional study, of 124 samples from patients for diagnostic investigation of lymphoproliferative disorders who underwent immunophenotyping in a referral center for hematologic malignancies from October 2014 to June 2015. MFIs were analyzed for each marker in eleven different diagnosed pathologies. Results: the diseases of the 124 patients investigated comprised: 81 chronic lymphocytic leukemia (CLL), 17 marginal zone lymphoma (MZL), 9 lymphoplasmacytic lymphoma (LPL), 6 mantle cell lymphoma (MCL), 2 hairy cell leukemia (HCL), 2 hairy cell leukemia variant (HCLv), 5 folicular lymphoma (FL), 1 Burkitt lymphoma (BL) e 1 diffuse large B cell lymphoma (DLBCL). The CD200 median MFI expression was 46,8 (range: 1,5-334). CD200 was higher in HCL (including HCLv) and CLL cells (85 and 61,2 respectively). HCLv difference in CD200 MFI, when compared to classical HCL (median 36,1 versus 220,3). The same difference in CD123 expression was observed when comparing HCL versus HCLv. We found that cases of MZL exhibited CD43 median MFI of 7,1 (range: 1,1-106), in contrast to cases of MCL and CLL, which had median MFIs for CD43 of 90 and 176, respectively. The comparison of CD52 intensity between CLL and MZL samples showed statistically significant difference with a median MFI of 777,5 versus 1297,0 (P=0,04). Conclusion: our results suggest that quantitative flow cytometry of these markers may be a useful additional tool to better identify some types of BCLDs.

Esta tese de doutoramento relata estudos sobre a interação de nanotubos de carbono com nanomateriais, biomoléculas e células, com o propósito de obter informações relevantes para o desenvolvimento de biossensores e para o campo da nanotoxicologia. No primeiro estudo, foram produzidos e caracterizados três tipos de eletrodos modificados com filmes multicamadas obtidos através da técnica de automontagem. Estes filmes continham nanotubos de carbono de parede simples (SWNT), ftalocianina tetrasulfonada de níquel (NiTsPc) e o dendrímero poli(amidoamina) de geração 2 (PAMAM G2), e estes polieletrólitos foram organizados nos seguintes sistemas: (PAMAM G2/NiTsPc), (PAMAM G2/SWNT) e (nanocompósito SWNT/PAMAM G2 / NiTsPc). Medidas de voltametria cíclica com a sonda ferrocianeto de potássio revelaram que os três sistemas podem ser aplicados como eletrodos descartáveis por serem instáveis e que os dois sistemas com NiTsPc apresentam um amplo intervalo de potencial para detecção de analitos sem a interferência dos picos redox da Pc. Também foram conduzidos ensaios de citometria de fluxo para avaliação da toxicidade de nanocompósitos contendo nanotubos de carbono e poli(amidoamina) de gerações 2, 4 e 6 em células F C3H, correspondentes a fibroblastos saudáveis de fígado humano. Os resultados mostraram que o contato com os nanomateriais provoca uma queda significativa na viabilidade deste tipo de célula, e apontam para a necessidade de aprofundar a investigação sobre os efeitos biológicos deste nanocompósito para que ele seja aplicado com segurança como um vetor de drogas e material genético. A última parte da tese é dedicada a explorar ferramentas computacionais para elucidar os mecanismos de formação do nanocompósito SWNT/PAMAM G2 e sua interação com modelos de membrana celular. Simulações por dinâmica molecular revelaram que a estabilidade do nanocompósito é mantida por interações entre as paredes apolares dos nanotubos e as cadeias internas não polares do dendrímero. O estudo envolvendo bicamadas lipídicas sugeriu que a presença de espécies aniônicas, como as fosfatidilserinas, é crucial para iniciar a ligação desta nanopartícula à membrana celular. O contato do nanocompósito com a bicamada resultou na extração destrutiva de lipídeos da membrana, um efeito deletério que pode causar danos às células. / This thesis describes the interaction between carbon nanotubes and nanomaterials, biomolecules and cells, to obtain relevant information for the development of biosensors and the progress of the nanotoxicology field. In a first study, we produced and characterized three types of modified electrodes made from layer-by-layer films. These nanostructures had single-walled carbon nanotubes (SWNT), nickel tetrasulfonated phthalocyanine (NiTsPc) and poly(amidoamine) dendrimer, generation 2 (PAMAM G2). These polyelectrolytes were organized in the following multilayers: (PAMAM G2/NiTsPc), (PAMAM G2/SWNT) and (SWNT/PAMAM G2 nanocomposite / NiTsPc). Cyclic voltammetry measurements with a potassium ferrocyanide probe revealed that the three systems can be used as disposable electrodes for being unstable and that the two systems with NiTsPc exhibit a wide useful potential interval for detection without the interference of the Pc redox peaks. We also performed flow cytometry experiments to evaluate the toxicity of nanocomposites containing carbon nanotubes and poly(amidoamine) generations 2, 4 and 6 in F C3H cells, derived from healthy human liver fibroblasts. The results showed that the contact with these nanomaterials decreases the viability of this type of cell and point to the need to further determine the biological effects of this nanocomposite before it can be safely applied as a vector for drugs and genetic material. The last part of the thesis explores computational tools to unravel the mechanisms behind the formation of the nanocomposite SWNT/PAMAM G2 and its interaction with cell membrane models. Molecular dynamics simulations revealed that the stability of the nanocomposite is kept mainly by interactions between the apolar nanotube walls and the inner non polar chains of the dendrimer. The study involving lipid bilayers suggested that the presence of anionic species, such as phosphatidylserines, is crucial to trigger the binding of this nanoparticle to the cell membrane. The contact of the nanocomposite with the bilayer resulted in the destructive extraction of lipids from the membrane, an effect that ultimately causes cell damage.

A hansenÃase à uma doenÃa infecciosa crÃnica causada pelo Mycobacterium leprae, um bacilo Ãlcool-Ãcido resistente. Tem alta infectividade, porÃm baixa patogenicidade, e quando se manifesta, apresenta-se sob uma grande diversidade de formas clÃnicas. Essa diversidade depende, em grande parte, da resposta imunolÃgica do hospedeiro, sendo os linfÃcitos, em sua plasticidade, componentes essenciais no desenvolvimento da imunidade. Assim, este trabalho teve como objetivo descrever as subpopulaÃÃes linfocitÃrias: linfÃcitos T totais (CD3+), T auxiliares (CD4+), T citotÃxicos (CD8+), T CD4+CD8+, B (CD19+), Natural killers-NK (CD3- CD16+ CD56+) e T Natural killers - NKT (CD3+ CD16+ CD56+) no sangue perifÃrico de pacientes portadores de hansenÃase, antes e apÃs uso da multidrogaterapia. Os pacientes foram selecionados no Centro de Dermatologia D. LibÃnia, Fortaleza-CE, Brasil. A determinaÃÃo de linfÃcitos em cada subpopulaÃÃo foi realizada por citÃmetria de fluxo e anÃlise estatÃstica pelo programa GraphPad Prism 5.0 para Windows. A significÃncia foi estabelecida para valores de p<0,05. Um total de 133 amostras foram utilizadas para as comparaÃÃes, sendo 79 (59,4%) do gÃnero masculino e 54 (40,6%) do gÃnero feminino. A mediana da idade dos pacientes foi de 43 anos no grupo prÃ-tratamento e de 46 anos no pÃs-tratamento. Nove pacientes foram incluÃdos na forma paucibacilar e 124, na multibacilar. As medianas das contagens (cÃlulas/mm3) de linfÃcitos NK (CD3-CD16+ CD56+) nos grupos antes e apÃs tratamento foram 142,0 [15,0â463,0] e 189,5 [18,0 â 1037,0], respectivamente (p=0,0484), enquanto nÃo houve diferenÃas quando foram comparados os grupos pauci e multibacilar. As contagens de linfÃcitos T totais (CD3+), T auxiliares (CD4+), T citotÃxicos (CD8+), T (CD4+CD8+), B (CD19+), e NKT(CD3+CD16+CD56+) mantiveram-se inalteradas nos grupos antes e pÃs-tratamento, assim como nos grupos pauci e multibacilar. Em conclusÃo, os resultados deste estudo apontam para uma reduÃÃo na populaÃÃo de cÃlulas NK (CD3-CD16+CD56+) em indivÃduos com hansenÃase antes de qualquer intervenÃÃo terapÃutica. ApÃs o tratamento, hà uma recuperaÃÃo na contagem desta populaÃÃo celular. / Leprosy is a chronic infectious disease caused by the Mycobacterium leprae, a resistant alcohol-acid bacillus. It has a high infectivity, although the pathogenicity is low. Clinical manifestations present a great diversity. Host immune response is an important determinant of this clinical diversity, whilst lymphocytes collaborate to it. Thus, the present study aimed to describe lymphocyte subpopulations: T lymphocytes (CD3+), T helper lymphocytes (CD4+), T cytotoxic (CD8+), T CD4+CD8+, B (CD19+), Natural killers-NK (CD3- CD16+ CD56+) and T Natural killers - NKT (CD3+CD16+ CD56+) in peripheral blood samples from patients with leprosy, before and after the treatment with multidrugtherapy. Patients were selected at the Dona Libania Dermatology Center, at Fortaleza-CE, Brazil. The determination in each subpopulation of lymphocytes was done by flow-cytometer and statistical analysis by GraphPad Prism 5.0 for Windows. Significance was established at p values of <0.05. A total of 133 samples were studied, while 79 (59,4%) were males and 54 (40,6%)females. Median age of patients was 43 years old for the group before treatment and 46 years old for the group after treatment. Nine patients presented with paucibacillary and 124 with multibacillary form. NK (CD3-CD16+ CD56+) lymphocytes medians cells/mmÂ) were 142.0 [15,0â463,0] and 189,5 [18,0 â 1037,0], respectively for the groups before and after treatment, with a p value of 0.0484. On the other hand, no differences were observed when pauci and multibacillary groups were compared. T lymphocytes (CD3+), T helper lymphocytes (CD4+), T cytotoxic lymphocytes (CD8+), T (CD4+CD8+), B lymphocytes (CD19+) and NKT lymphocytes (CD3+CD16+CD56+)were similar at the groups before and after treatment and also at pauci and multibacillary. In conclusion, data from this study shows a reduction at NK lymphocytes (CD3-CD16+CD56+) populations in leprosy before any therapeutical intervention. After leprosy treatment, a recovery of this cell population occurs.

Orientador: Irene Lorand-Metze / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T07:46:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mello_MarianaRezendeBandeirade_M.pdf: 649822 bytes, checksum: e4b6cfab44c011f4863c0df41c725ca1 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A Leucemia Linfóide Aguda (LLA) representa 75-80% dos casos de leucemia em crianças e apenas 20% das leucemias do adulto. Certas características clínicas e laboratoriais têm valor prognóstico e servem para estratificá-los em grupos de risco para tratamento. O diagnóstico da LLA é baseado principalmente nas suas características fenotípicas que permitem definir a linhagem, o grau de maturação, bem com, assincronismos de maturação que permitem diferenciar blastos leucêmicos de precursores linfóides normais, o que é muito útil na detecção de doença residual mínima. Nosso objetivo foi estudar as características biológicas da LLA (características fenotípicas, moleculares e ploidia) em pacientes (adultos e crianças) atendidos na Fundação Remope. Foram utilizados um painel de triagem de anticorpos monoclonais e 2 secundários (para LLA-B e LLA- T). Todos os casos foram analisados no Paint-a-Gate para estudo da intensidade média de ~uorescência (IMF). Pesquisamos os rearranjos BCR/ABL p190 e p210, AF4/MLL, E2A/PBXl e TEL/AMLl. Foram analisados 49 pacientes onde 18 eram crianças (:S 18 anos) e 31 adultos (> 18 anos). Dos casos estudados 11 foram LLA- T (6 préT e 5 LLA-T) com mediana de idade de 19 anos. E 38 foram LLA-B (7 pré-pré-B, 15 B comum e 13 pré B e 3 sem classificação) com mediana de idade de 29 anos. O rearranjo BCR/ABL foi encontrado em 5 pacientes, sendo 4 BCR/ABL p190 e 1 BCR/ABL p210. Dois pacientes apresentaram o rearranjo E2A/fBXI e 2 o AF4/MLL. Não foi encontrado nenhum caso com o rearranjo TEL/AMLI. Quanto ao índice de DNA, 5 pacientes foram hiperdiplóides e 42 diplóides. A porcentagem de células em Fase S não variou entre crianças e adultos nem entre as LLAs B e T. Concluímos que os anticorpos utilizados foram suficientes para classificar imunologicamente os casos. A análise quantitativa expôs mais os assincronismos de maturação. A freqüência encontrada de casos hiperdiplóides foi semelhante à literatura. A taxa de proliferação foi muito variável, mas não teve relação com a idade, nem com o tipo de LLA. Os rearranjos encontrados apresentaram associação com os subtipos de LLA conforme descrito na literatura. Embora, a freqüência de adultos com BCR/ABL tenha sido abaixo da relatada / Abstract: Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL) is a disease that occurs primarily in children (75-80%) and represents only 20% of adults' leukemia. Some c1inical and laboratorial research have focused on stratifying patients into various risk groups based on known prognostic features that play a critical role in directing therapy for ALL. We have studied biological characteristics of ALL (adults and children) of patients attended on Hemope Foundation from March 2004 to March 2006. The immunophenotyping at diagnosis was perfonned by a dual color two stage protocol. Expression of each antigen studied was measured by mean fluorescence intensity (MFI) by flow cytometry using the Paint-a-gate software. RT-PCR was perfonned to detect specific molecular alterations. We analyzed 49 patients: 18 children (:S 18 years old) and 31 adults. Eleven were T ALL with median age of 19 years and 38 were B ALL (7 pre-pre B, 15 common, 13 pre B and 3 without c1assification) :with median age of 29 years. Concerning gene rearrangements, BCR/ABL was detected in 5 patients (4 BCR/ABL p190 and 1 BCR/ABL p210), E2A/PBXl in 2 patients and AF4/MLL in 2 patients. TEL/AML1 couldn't be found in any case examined. Hyperdiploidy was observed in 5 patients. The percentage of cells in phase S showed a large variation, but did not differ in children or adults nor between B ALL and T ALL. Our results show that the antibodies used were sufficient to c1assify the cases. The quantitative approach was able to disclose better the maturation abnonnalities of the leukemic blasts. The frequency of hyperdiploid cases was similar to that found in the literature. The proliferation rate was variable but had no relationship with age and ALL type. The molecular aberrations were associated with specific ALL subtypes, as already described in the literature. Even so, the frequency of BCR/ABL in adults was diminished. / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

A invasão de eritrócitos por merozoítas de Plasmodium é um processo bastante complexo em que várias proteínas do parasita interagem com receptores presentes na célula hospedeira. É nossa hipótese que o Antígeno 1 de Membrana Apical (AMA-1) e a Proteína 1 da Superfície do Merozoíta (MSP1) estejam envolvidas na adesão ao eritrócito, no momento da invasão. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade de ligação de proteínas de merozoítas de P. vivax a eritrócitos humanos utilizando um novo ensaio de citometria de fluxo e o clássico ensaio de citoaderência. Para tanto, a ligação das proteínas recombinantes correspondentes à região C-terminal de 19 kDa da MSP1 (PvMSP119), ao ectodomínio (PvAMA-1E) e aos domínios I-II e II de AMA-1 (PvAMA-1DI-II e PvAMA-1DII) foi avaliada por citometria de fluxo utilizando anticorpo fluorescente contra cauda de histidina. A proteína recombinante baseada na região II da Proteína Ligante de Duffy (PvDBP-RII) foi utilizada como controle positivo e a tioredoxina humana como controle negativo. Os dados foram expressos pela média da intensidade de fluorescência (MIF). Os resultados dos ensaios de citometria de fluxo confirmaram a ligação de PvDBP-RII a eritrocitos Duffy A (MIF=1997&#177;405) e Duffy B (MIF= 5760&#177;303). No entanto, não foi possível detectar a ligação de PvMSP119 (MIF=201&#177;47), de PvAMA-1E (MIF=536&#177;99) e dos domínios PvAMA- 1DI-II (MIF=120&#177;12) e PvAMA-1DII (MIF=179&#177;30). Soro policlonal de camundongos BALB/c imunizados com PvDBP-RII foi capaz de inibir a ligação da proteína aos eritrócitos em até 66%. Tais resultados foram confirmados pelo ensaio clássico de citoaderência. Para tanto, células COS-7 foram transfectadas com plasmídeos recombinantes codificando as proteínas PvDBPRII, PvMSP119, PvAMA-1DI-II e PvAMA-1DIII em fusão com GFP. A eficiência de transfecção e a expressão destas proteínas na superfície das células foram confirmadas por citometria de fluxo, utilizando anticorpos policlonais produzidos em camundongos. A ligação foi avaliada pela formação de rosetas entre as células transfectadas e eritrócitos humanos por microscopia de fluorescência. Observamos que as células transfectadas expressando PvDBP-RII foram capazes de se ligar a eritrócitos humanos Duffy A (274&#177;144 rosetas/25 campos) e Duffy B (356&#177;129 rosetas/25 campos). No entanto, não foram visualizadas rosetas nos ensaios realizados com células expressando PvMSP119, PvAMA-1E, PvAMA-1DI-II e PvAMA-1DIII, indicando a ausência de ligação destas proteínas a eritrócitos humanos. Soro de camundongos imunizados com PvDBP-RII foi capaz de inibir a ligação aos eritrócitos em até 99%. Os resultados obtidos nesse trabalho demonstram que fomos capazes de desenvolver um ensaio baseado em citometria de fluxo para avaliação da ligação de proteínas a eritrócitos humanos, cujos resultados foram confirmados pelo ensaio clássico de citoaderência. No entanto, não foi possível detectar a ligação das proteínas PvMSP119 e PvAMA-1 a eritrócitos humanos. / The invasion of erythrocytes is a complex process in which the Merozoite Surface Proteins (MSPs) are responsible for initial adhesion and the P. vivax Duffy Binding Protein (PvDBP) is involved on junction formation. In addition, there are evidences that the Apical Membrane Antigen (AMA-1) plays a fundamental role on invasion; however, the exact mechanism is still being investigated. The aim of the present study was to evaluate the ability of P. vivax merozoite antigens to bind to human erythrocytes using a new flow cytometry assay and the classical cytoaherence assay. The binding assay was performed by flow cytometry using fluorescent antibody against histidine tag present on recombinant proteins based on 19 kDa C-terminal fragment of MSP1 (PvMSP119), the ectodomain (PvAMA-1E) and domains I-II and II of AMA-1 (PvAMA-1DI-II and PvAMA-1DII). The recombinant protein based on the region II of DBP (PvDBP-RII) was used as positive control and human thioredoxin as negative control. Data were expressed as mean of fluorescent intensity (MFI). The results of flow cytometry assays confirmed the binding of PvDBP-RII to human Duffy A (MFI=1997&#177;405) and Duffy B (MFI= 5760&#177;303) erythrocytes. However, we were not able to detect the binding of PvMSP119 (MFI=201&#177;47), PvAMA-1E (MFI=536&#177;99), PvAMA-1DI-II (MFI=120&#177;12) or PvAMA-1DII (MFI=179&#177;30). Sera from BALB/c mice immunized with PvDBP-RII inhibited binding up to 66%. These results were confirmed by classic cytoadherence assay. COS-7 cells were transfected with plasmids encoding the proteins PvDBP-RII, PvMSP119, PvAMA-1DI-II or PvAMA-1DIII fused to GFP. The transfection efficiency and expression of proteins on cell surface were confirmed by flow cytometry using polyclonal antibodies raised on mice. The binding was evaluated by the number of rosettes formed between transfected cells and human erythrocytes using fluorescent microscope. The cells expressing PvDBP-RII were able to bind Duffy A (274&#177;144 rosettes/25 fields) and Duffy B (356&#177;129 rosettes/25 fields) human erythrocytes. On the other hand, PvMSP119, PvAMA1E, PvAMA-1DI-II and PvAMA-1DIII failed to bind human erythrocytes and specific rosettes were not observed. Sera from immunized mice inhibited binding of PvDBP-RII up to 99%. In conclusion, we developed a binding assay using flow cytometry which can be extremely useful to evaluate the binding of proteins to erythrocytes whose results were confirmed by classic cytoadherence assays, as observed the binding of PvDBP-RII to human erythrocytes. Using both biding assays, we were not able to determine the binding of PvMSP119, nor PvAMA-1 and their domains to human erythrocytes.

Os bovinos são considerados a maior fonte de proteína animal para o homem, razão pela qual se fazem imprescindíveis pesquisas em diversas áreas de produção desses animais com o intuito de minimizar problemas que possam interferir no desenvolvimento e produtividade dos rebanhos. Nesse cenário, o estudo da placenta e placentação tem por objetivo conhecer o desenvolvimento embrionário e suas interações fisiológicas entre o feto e o organismo materno, caracterizado pela íntima união entre eles. O estudo da placenta e placentação tem por objetivo conhecer o desenvolvimento embrionário e suas interações fisiológicas entre o feto e o organismo materno, caracterizado pela íntima união entre eles. Além disso, a falta de marcadores específicos para células placentárias bovinas e as alterações que essas células sofrem durante o progresso da gestação são as principais barreiras para a determinação do perfil morfológico celular presente na interface materno-fetal, razão pela qual seu monitoramento torna-se importante. Buscando melhor compreender essas mudanças, o presente trabalho estudou a dinâmica populacional de células de placenta bovina a fresco e em cultivo. Foram utilizadas 30 amostras de placentônios, divididos em três grupos, de acordo com o desenvolvimento da gestação, quais sejam: primeiro, segundo e terceiro trimestres (n:10 para cada terço). Células oriundas de placentônios foram examinadas a fresco e pós-cultivo durante dez dias, pela microscopia óptica, microscopia eletrônica de transmissão e citometria de fluxo. Os resultados deste trabalho demonstraram a presença de tipos morfológicos celulares distintos na dependência do progresso da gestação: células gigantes trofoblásticas binucleadas, células gigantes trofoblásticas trinucleadas, células gigantes trofoblásticas mononucleadas, células mononucleadas maiores, células mononucleadas menores e células que apresentam citoplasma amplo, contendo inúmeras vesículas em seu interior. Com a utilização da citometria de fluxo, foi possível identificar nas amostras a fresco três populações distintas em tamanho (FSC) e complexidade (SSC) no primeiro terço, cinco populações no segundo terço e duas populações no terceiro terço gestacional. As células placentárias bovinas apresentaram freqüências variáveis de acordo com o trimestre gestacional e seu tempo de cultivo. / There is a great diversity of cell types in the bovine placenta like mononucleate trophoblast giant cells, binucleate trophoblast giant cells, specialized leucocytes (uterine natural killer, uterine macrophages, etc.) and part of their characterization and function remains unknown or controversial. Besides that, some of these cells change as pregnancy progresses; thus their monitoring is very important. The lack of specific markers to bovine placental cells is a main barrier for the development of an efficient cell tracing. Alternative techniques are being used to study these cells, as well as morphologic observation by optical and electron microscopy methods. The study was carried out to establish a populational kinetics of fresh and cultured bovine placental cells by optical microscopy, by electron microscopy and flow cytometry. Bovine placentomas were sampled at the slaughterhouse from cows with different trimesters of pregnancy (n:10 each). Fragments from the cotiledonary/caruncular interface were collected and cells were mechanically dissociated and their viability was estimated by Trypan Blue exclusion. After that they were incubated (2,5x107 cells per 2 mL) in Dulbecco´s Modified Eagle Medium with 10% FBS. First of all, fresh bovine placental cells analyzed by flow cytometry in order to identity the profiles of populational cells. At the same time, smear of fresh cells was made, fixed by methanol, stained with Giemsa for optical microscopy morphologic analisys and differential counting. After this, cells were analised by flow cytometry and optical microscopy .This process was repeated on the first, fifth and tenth days of the culture. We found seven types of cell: mononucleate trophoblast giant cells, binucleate trophoblast giant cells, trinucleate trophoblast giant cells, large mononucleate cells and small mononucleate cells. The placental cells displayed different frequencies according to the gestation period and culture time length.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-05-09T15:36:26Z No. of bitstreams: 1 Ney Braulio de Oliveira Lins.pdf: 535128 bytes, checksum: bf7b656b16605ec0590fcb36feaac735 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-09T15:36:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ney Braulio de Oliveira Lins.pdf: 535128 bytes, checksum: bf7b656b16605ec0590fcb36feaac735 (MD5) Previous issue date: 2013-07-01 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / High somatic cell counts and high bacteria counts are related to health problems of the mammary gland and milking hygiene, what can bring harm to the industry, as well as to public health. The lactoperoxidase system acts directly on the mammary gland health generating hypothiocyanate ions, a bactericidal compound, wich concentrations depend, among other factors, on the presence of plants in the diet rich in cyanogenic glycosides. The objective of this study was to evaluate the quality of the milk in lactating Saanen goats fed maniçoba hay. Seven Saanen goats were used, with 39 ± 2,9 days of lactation and body weight 43,3 ± 7,6 kg in an statistical Latin square design 4 x 4. The treatments consisted of the replacement of the Tifton hay by maniçoba hay (0; 33,3; 66,7 and 100%). The concentrations of thiocyanate ions, fat, protein, lactose, total solids and dry extract in milk were not affected (P <0,05) neither by the substitution of tifton hay for maniçoba nor by the preservative. The SCC was lower (P <0,05) in samples without preservative and was quadratic affected of (P<0,0001) by the substitution of tifton hay for maniçoba. The total bacteria count increased significantly in milk samples without preservative, but was not affected by the substitution of tifton hay for the maniçoba hay. / Altas contagens de células somáticas e altas contagens bacterianas estão relacionadas com problemas de saúde da glândula mamária e de higiene na ordenha, e podem trazer prejuízos para indústria, assim como para a saúde pública. O sistema lactoperoxidase atua diretamente sobre a saúde da glândula mamária gerando íons hipotiocianato, composto de ação bactericida, cujas concentrações dependem, entre outros fatores, da presença na dieta de plantas ricas em glicosídeos cianogênicos. Objetiva-se com o presente trabalho avaliar a qualidade do leite de cabras Saanen em lactação alimentadas com feno de maniçoba. Foram utilizadas sete cabras Saanen, com 39 ± 2,9 dias de lactação e peso corporal médio de 43,3 ± 7,6 kg em um delineamento estatístico quadrado latino 4 x 4. Os tratamentos consistiram da substituição do feno do capim tífton por feno de maniçoba (0; 33,3; 66,7 e 100%). As concentrações de íons tiocianato, gordura, proteína, lactose, sólidos totais e extrato desengordurado no leite não foram influenciadas (P < 0,05) pela substituição do feno de tifton por feno de maniçoba nem pelo conservante. A CCS foi menor (P < 0,05) nas amostras sem conservante e foi influenciada de forma quadrática (P < 0,0001) pela substituição do feno de tifton por feno de maniçoba. A contagem de bactérias totais aumentou significativamente nas amostras de leite sem conservante, mas não foi influenciada pela substituição do feno de tifton por feno de maniçoba.