Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-17Bitstream added on 2014-06-13T20:41:33Z : No. of bitstreams: 1 coleta_fed_dr_jabo.pdf: 1516429 bytes, checksum: e84a2357867aa696823f7eb1c4532adc (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Considerando a importância da origem celular do linfoma e as alteragOes decorrentes da evolugäo desta neoplasia e aquelas ocorridas corn o emprego da quimioterapia, avaliaram-se 27 câes corn diagnOstico de linfoma, que foram submetidos indugäo da remiss5o, corn o protocolo de Madison-Wisconsin. No momento do diagnOstico e uma semana apOs cada uma das oito sessOes quimioterapicas, realizou-se hemograma e analise citomètrica das subpopulagOes linfocitarias CD5+CD4+, CD5+CD8+ e CD45+CD21+ no sangue periferico e, na medula Ossea as avaliagOes foram realizadas antes e apOs o tratamento. Observou-se um major nOmero de animais machos, das ragas Rottweiler e sem raga definida, de meia idade e grande porte, que apresentaram com major freqUéricia, linfoma multicêntrico em estadio Vb. Com relagäo a origem celular do linfoma, notou-se predominancian de linfoma B. No eritrograma, observou-se anemia normocitca normocrOmica na maioria dos animais durante todo o tratamento. No leucograma, notou-se em alguns animais, no momento do diagnOstico, a presenga de leucocitose por neutrofilia. Alem disso, houve uma consideravel deplegâo de linfOcitos no sangue circulante, assim como das subpopulagOes CD5+CD8+ e CD45+CD21+, durante todo o tratamento e, observou¬se tambem, com menor intensidade, uma deplegäo da subpopulagâo CD5+CD4+. Na medula Ossea observou-se deplegâo da subpopulagäo CD45+CD21+. Assim, a imunidade humoral e imunidade mediada por calulas ficam prejudicadas corn a evolugao do linfoma e corn o emprego da quimioterapia. / Considering the importance of the lymphoma cellular origin and the decurrent alterations of the evolution of this neoplasia and those occured ones with the chemotherapy, was evaluated 27 dogs with diagnosis of lymphoma. that they were submitted to the induction of remission, with the protocol of Madison-Wisconsin. At the moment of the diagnosis and one week after each one of the eight chemotherapic sessions, became fullfilled hemogram and citometric analysis of CD5+CD4+, CD5+CD8+ e CD45+CD21+ lymphocyte subpopulations in peripheral blood and, bone marrow evaluations were carried through before and after the treatment. Was observed a bigger number of male animals, Rottweiler breeder and without defined race, of half age and big tall, that had presented more frequently, multicentric lymphoma in Vb stage. With regard to the lymphoma cellular origin, the B cell lymphoma was noticed. In the eritrogram, was observed in the majority of the animals anemia normocitic normocromic during the treatment. In the leucogram, was noticed in some animals, at the moment of the diagnosis, the presence of leukocitosis with neutrofilia. Moreover, had a considerable depletion of lymphocytes in circulating blood, as well as of CD5+CD8+ e CD45+CD21+ subpopulations, during all the treatment and, it was also observed , with lesser intensity, a depletion of CD5+CD4+ subpopulation. In the bone marrow was observed depletion of CD45 +CD21+ subpopulation. Thus, the humoral immunity and immunity mediated for cells are harmed with the evolution of lymphoma and the use of chemotherapy.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-13Bitstream added on 2014-06-13T21:03:41Z : No. of bitstreams: 1 000738029.pdf: 1190698 bytes, checksum: 404f1d7a805177183b19eed97178743a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / hjkhjkhjk / CAPES: 2011/ / FAPESP: 12/00334-3

Regenerative medicine and cell therapies hold great potential to treat a variety of medical conditions. Product characterisation of these therapies is particularly difficult as they pose regulatory challenges due to donor heterogeneity and the lack of standardised lot release tests that can reliably predict in vivo function. Human mesenchymal stem cells (hMSCs), also called multipotent stem cells or mesenchymal stromal cells, are a viable option in cell therapies due to their immunosuppressive and pro-angiogenic functions. Currently there are no standardised methods or potency assays to quantify these properties. To address this, five individual hMSCs lines from different donors were created and characterised based upon growth rate, differentiation capability and extracellular surface protein expression. A novel multiparameter flow cytometry method to characterise the cells based upon extracellular surface markers was developed that supports high-throughput and high-content analyses. Three candidate lines were taken forward and assessed in multiple in vitro bioassays that examined the hMSC immunosuppressive response to a defined inflammatory environment, effect on T-cell proliferation, and effect on a mixed lymphocyte population. Next, the angiogenic properties were assessed using human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) tube formation as a model for cardiac regeneration. This involved utilising automated time lapse microscopy techniques coupled with image analysis software to quantify endothelial to tube formation. Further analysis of the hMSC secretome revealed differences in the levels of pro-angiogenic cytokines such as vascular endothelial growth factor, hepatocyte growth factor and IL-8. Significant differences in angiogenic potency were found between the hMSC lines. This thesis highlights the need to develop specific assays that reflect the intended clinical action. Taken together, these quantitative approaches provide valuable tools to measure hMSC quality and potency, and supports continued efforts to improve characterisation strategies for cellular therapies.

Orientador: Aureo Evangelista Santana / Banca: Andrigo Barboza de Nardi / Banca: Ana Paula Massae Nakage Canesin / Banca: Paola Castro Moraes / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Resumo: O presente estudo teve como objetivos avaliar seqüencial e temporalmente o quadro leucocitário de dez cães portadores de linfoma em remissão, submetidos à alta dose de ciclofosfamida, durante o uso do estimulador de colônia de granulócitos (GCSF, filgrastine) seguido ou não do transplante autólogo de medula óssea (TMO), bem como quantificar células CD34+ no sangue periférico dos referidos cães. Para tal avaliação foram utilizados três grupos experimentais, sendo o grupo 1 (G1) formado por cinco animais em remissão de linfoma que passaram por alta dose de ciclofosfamida e TMO seguido do uso de G-CSF; o grupo 2 (G2) formado por cinco animais em remissão de linfoma que sofreram alta dose de ciclofosfamida seguida do uso de G-CSF e o grupo 3 (G3) formado por dez animais saudáveis que receberam apenas o G-CSF. O transplante consistiu na colheita de medula óssea, preparo e congelamento da bolsa que continha células medulares em suspensão, condicionamento do paciente com 500mg/m2 de ciclofosfamida, infusão das células hematopoéticas e aplicação do G-CSF. Para avaliar a recuperação hematopoética pós-transplante foi realizado leucograma e análise citométrica do sangue nos dias 7, 8, 9, 10 e 11 após condicionamento. O nadir médio dos neutrófilos segmentados (NS) no grupo com transplante de medula óssea (G1) foi 425 NS/mL, e no grupo sem TMO (G2) foi 637,4 NS/μL e ocorreu sete dias após alta-dose de quimioterápico em ambos os grupos. A duração média da neutropenia foi de três dias. Nenhum animal apresentou febre ou sepse após a alta dose de ciclofosfamida. A dose de 5μg/kg/dia durante quatro dias de filgrastine foi insuficiente na mobilização adequada de células CD34+ nos três grupos estudados, sendo necessários novos estudos para este propósito. Desta maneira, pode-se comprovar o fato de que o uso do G-CSF leva a reduções significativas na incidência... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aims of this research were to provide an analysis of several counts of leucocytes values in dogs with lymphoma in remission phase, undergone to high-dose chemotherapy with cyclophosphamide, during treatment with granulocyte colonystimulating factor (G-CSF, filgrastine), followed or not by autologous bone marrow transplantation (BMT), as well to quantify CD34+ cells of peripheral blood from that dogs. For this purpose, three experimental groups were considered. Five dogs in clinical remission undergone to high-dose chemotherapy with cyclophosphamide and BMT, followed by G-CSF use were included in group 1 (G1), while group 2 (G2) was consisted by five dogs undergone to high-dose chemotherapy with cyclophosphamide, followed by G-CSF. Group 3 (G3) was composed of ten healthy dogs undergone to GCSF only. Transplantation consisted of bone marrow harvest, managing and freezing bags containing lifted marrow cells, cyclophosphamide conditioning (500mg/m2), hematopoietic cells infusion and treatment with G-CSF. After transplantation, hematopoietic recovery was evaluated by means of leukograms and flow cytofluorimetrical analysis on days 7, 8, 9, 10 and 11 after conditioning. Mean nadir neutrophil (NS) counts in group undergone transplantation (G1) was 425 NS/mL versus 637,4 NS/μL in group without BMT (G2). Nadir was observed on the seventh day after high-dose chemotherapy in both groups and neutropenia mean time was three days. Fever or sepsis was not observed in any dog after high-dose cyclophosphamide. Four days of filgrastine treatment in dose of 5μg/Kg, daily, was not enough to mobilize CD34+ cells appropriately in three groups analyzed, requiring new studies for this purpose. Considering these results, it is possible to conclude that G-CSF significantly reduces the incidence, severity and duration of neutropenia / Doutor

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A piometra é uma condição mórbida caracterizada pela inflamação do útero com acúmulo de exsudatos, resultante de ações hormonais e geralmente associada à presença de bactérias no lúmen uterino. A anemia é a alteração hematológica mais frequentemente observada em cadelas com piometra e está associada à cronicidade da doença, diminuição da eritropoiese, devido ao efeito toxêmico na medula óssea, diminuição da disponibilidade de ferro ou perda de sangue para o útero. Adicionalmente, o efeito das toxinas bacterianas e os radicais livres gerados pelo metabolismo oxidativo dos neutrófilos podem resultar na modificação da estrutura antigênica da membrana do eritrócito, permitindo a ligação de imunoglobulinas em sua superfície e acelerando a destruição eritrocitária. Essa hipótese pode ser comprovada pela detecção de imunocomplexos na superfície eritrocitária de cadelas com piometra. O diagnóstico de piometra foi estabelecido em 33 cadelas atendidas no Serviço de Obstetrícia/Ginecologia do Hospital Veterinário da Universidade de São Paulo com base na anamnese, exame físico e exames subsidiários (ultrassonografia, hemograma e concentrações séricas de ureia e creatinina). As amostras sanguíneas foram coletadas em dois momentos. A primeira anterior a ovariosalpingohisterectomia (OSH) e a segunda, sete a dez dias após a OSH. A quantificação de hemácias com deposição de imunocomplexos IgG e IgM foi realizada utilizando-se anticorpos anti-IgG e anti-IgM (Bethyl®Laboratories) conjugadas a fluoresceína de isotiocianato (FITC), e a leitura realizada com citômetro de fluxo (FACS Calibur; Becton, Dickinson and Company© 2007 BD), sendo os resultados expressos em percentual de hemácias marcadas. Foram utilizados o Teste de Shapiro-Wilk para a avaliação da distribuição de dados e a comparação entre os grupos controle, pré e pós-OSH foi realizada valendo-se do Teste t ou Teste t pareado e Correlação de Pearson, e do Teste U de Mann-Whitney e Correlação de Spearman, para as variáveis com distribuição normal e não-normal, respectivamente. O valor de alfa estipulado foi de 0,05. Analisando os valores hematológicos de cada um dos cães incluídos no estudo, observa-se que 19 (57,6%) apresentavam anemia normocítica normocrômica não regenerativa no momento pré-OSH e cinco (15,2%) no momento pós-OSH. Em cães do grupo controle foram observadas 0,14 - 0,77% (0,43±0,18%) de hemácias marcadas com anticorpos anti-IgG FITC e 0,29 - 9,58% (0,68±0,29%) para anticorpos anti-IgM FITC. Já nos cães com piometra, foram encontradas 0,14 - 4,19% (0,96±0,86%) de hemácias marcadas com anticorpos anti-IgG FITC e 0,29 - 9,58% (1,37±1,71%) com anticorpos anti-IgM FITC, antecedendo a OSH. No momento pós-OSH observou-se 0,18 - 16,2% (2,77±3,67%) de hemácias marcadas para anticorpos anti-IgG FITC e 0,15 - 19,8% (4,01±4,46%) para anticorpos anti-IgM FITC. O percentual de hemácias marcadas com anticorpos anti-IgG FITC diferiu entre os grupos controle e piometra, pré-OSH (p<0,001) e pós-OSH (p<0,001). Em relação a anticorpos anti-IgM FITC, não foram observadas diferenças entre os grupos controle e pré-OSH (p=0,09), porém, após a OSH houve aumento na marcação de hemácias, quando comparado ao grupo controle (p<0,001). Apenas alguns animais apresentaram mais de 5% de hemácias marcadas, e isto ocorreu, principalmente, no momento pós-OSH. Entretanto, não resultou no agravamento da anemia, indicando que a piometra em cadelas está associada à deposição de imunoglobulinas G ou M na superfície das hemácias, sem, no entanto, promover hemólise ou agravamento da anemia / The pyometra is a morbid condition characterized by inflammation of the uterus with exudates accumulation resulting from hormonal action and usually associated with the presence of bacteria in the uterine lumen. Anemia is the hematologic changes most frequently observed in bitches with pyometra and is associated with chronic disease, diminished erythropoiesis due to toxemic effect on the bone marrow, decreased iron availability or loss of blood to the uterus. Additionally, the effect of bacterial toxins and free radicals generated by neutrophil oxidative metabolism may result in the modification of antigenic structure of the erythrocyte membrane, allowing the binding of immunoglobulins on their surface and accelerating erythrocyte destruction. This hypothesis can be confirmed by detection of immune complexes in the erythrocyte surface dogs with pyometra. The diagnosis of pyometra was established in 33 dogs attended by the Obstetrics Service/Gynecology of Veterinary Hospital of the University of São Paulo based on history, physical examination and additional tests (ultrasound, blood count and serum concentrations of urea and creatinine). Blood samples were collected in two stages. The first prior to ovariohysterectomy (OSH) and the second, seven to ten days after OSH. Quantification of erythrocyte with deposition of IgG and IgM immune complexes was performed using antibodies anti-IgG and anti-IgM (Bethyl® Laboratories) conjugated to fluorescein isothiocyanate (FITC), and the reading performed with flow cytometry (FACS Calibur; Becton, Dickinson and Company© 2007 BD), and the results expressed as a percentage of red blood cells marked. The Shapiro-Wilk test was used to assess the distribution of data and the comparison between the control group, pre- and post-OSH was carried out making use of the t test or paired t test and Pearson correlation, and test U Mann-Whitney and Spearman correlation for the variables with normal and non-normal distribution, respectively. The stipulated alpha value was 0.05. The analysis of the hematological values of each of the dogs enrolled in the study, it was observed that 19 (57.6%) with anemia normocytic normochromic non-regenerative in the pre-OSH moment and 5 (15.2%) in the post-OSH moment. In control group of dogs were observed from 0.14 to 0.77% (0.43± 0.18%) of red blood cells marked with antibodies anti-IgG FITC and 0.29 to 9.58% (0.68± 0.29%) for antibodies anti-IgM FITC. Already in dogs with pyometra were found 0.14 to 4.19% (0.96 ± 0.86%) of red blood cells marked with antibodies anti-IgG FITC and 0.29 to 9.58% (1.37 ± 1.71%) with antibodies anti-IgM FITC, prior to OSH. In the post-OSH time it was observed 0.18 to 16.2% (2.77 ± 3.67%) of red blood cells marked for antibodies anti-IgG FITC and 0.15 to 19.8% (4.01 ± 4.46%) for antibodies anti-IgM FITC. The percentage of red blood cells marked with antibodies anti-IgG FITC differ between groups control and pyometra, pre-OSH (p<0.001) and post-OSH (p<0.001). Regarding the antibodies anti-IgM FITC, no differences were observed between the control and pre-OSH (p=0.09), however, after the OSH was no increase in labeling of red blood cells compared to the control group (p<0.001). Only a few animals have more than 5% of marked red blood cells, and this was mainly in the post-OSH time. However, not result in the worsening of anemia, indicating that pyometra in dogs is related to the deposition of immunoglobulin G or M on the surface of erythrocytes, without, however, promote hemolysis or worsening of anemia

Submitted by Raquel Vasconcelos Guimarães de Castro null (rvgcastro@hotmail.com) on 2016-06-10T17:22:52Z No. of bitstreams: 1 Definitivo v11 VERSÃO IMPRESSA.pdf: 3954271 bytes, checksum: fbf5e7559a791827787906302174080b (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-06-15T17:22:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 castro_rvg_me_jabo.pdf: 3954271 bytes, checksum: fbf5e7559a791827787906302174080b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-15T17:22:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 castro_rvg_me_jabo.pdf: 3954271 bytes, checksum: fbf5e7559a791827787906302174080b (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A pele é um órgão extenso e de fácil acesso, e possui vários tipos celulares diferentes que estão em constante renovação. Dentre estas células, alguns tipos de células-tronco com potencial proliferativo, de autorrenovação e de diferenciação, são responsáveis pela manutenção da homeostase deste órgão e pela cura de feridas. Estudos anteriores sugerem a existência de um nicho de células-tronco presente no “bulge” dos folículos pilosos, que contém populações positivas para CD200 e CD34. Este trabalho foi realizado com o intuito de: 1- Obter tecidos derivados da pele de cães adultos e fetos, isolar e cultivar as células in vitro derivadas destes, empregando um método de isolamento celular através de digestão enzimática simples 2- Comprovar a presença de células do “bulge”, positivas para CD200 e CD34 após cultivo celular in vitro, comparando com a análise do tecido; Uma coloração por hematoxilina e eosina foi realizada da pele de cães adultos e fetos, e biopsias e células cultivadas in vitro foram caracterizadas pela presença das proteínas CD200 e CD34 através de imunofluorescência, imunocitoquímica e citometria de fluxo. Os resultados da imunofluorescência foram negativos para ambos CD200 e CD34 nas peles de feto e adulto. Na imunocitoquímica, as células foram positivas para CD34 e CD200, tanto em fetos quanto adultos. Adicionalmente, o marcador de pluripotência OCT4 foi testado, sendo expresso em células de feto. Por citometria de fluxo, a porcentagem média de células marcadas duplamente por CD200 e CD34 nos adultos foi de 3,1% e nos fetos de 0,33% (n=3). A marcação somente por CD200 foi encontrada somente nos adultos, sendo de 2,8% (n=3). Os resultados sugerem ser possível a obtenção de células-tronco do “bulge” do folículo piloso através do método de digestão enzimática simples, utilizado neste trabalho. Este estudo é o primeiro passo para novas pesquisas que envolvam esse nicho, na pele de cães. / Skin is an extensive and easily accessible organ, possessing various cell types which are in constant renovation. Some stem cell types found in the skin have the potential of self-renewal, proliferation and differentiation, processes which are responsible for the organ’s maintenance of homeostasis and the healing of wounds. Previous studies suggested the presence of a stem cell niche at the bulge region of the hair follicle, which contains cell populations positive for CD200 and CD34. Thus, this work sought to identify these cell populations in canine cultures using the following methods: 1. 1- Collecting samples of adult and fetus canine skin, isolating and culturing these cells in vitro using a method of simple enzymatic digestion; 2- Testing the cell cultures for CD200 and CD34 in vitro, comparing them with analyzed tissue material. Hematoxylin and eosin staining were conducted for the biopsies and analysis of fetal and adult canine skin, with the extracted cell cultures being characterized for the presence of the proteins CD200 and CD34 through immunofluorescence, immunocytochemistry and flow cytometry. In both adult and fetal tissue samples, CD200 and CD34 immunofluorescence results were negative. In immunocytochemistry, both fetal and adult cultures cells tested positive for CD34 and CD200. The pluripotency marker OCT4 was also tested, and was positive for fetal culture cells. Flow cytometer results showed that, for samples with a double staining of CD200 and CD34 the average percentage of marked cells was 3.1% in adults and 0.33% in fetal cells (n=3). For the CD200 marker alone, positive cells were found only in adult cultures, representing 2.8% of the total population (n=3). In conclusion, the results suggest that obtaining bulge stem cells from both fetuses and adults, with use of CD200 and CD34 markers, is validated through the simple enzymatic digestion and cell culture methods utilized in this study. The present work is the first step towards developing new research involving this niche in dogs.

Submitted by Bianca Gerardi null (bi_gerardi@hotmail.com) on 2016-08-04T00:47:26Z No. of bitstreams: 1 Perfil de citocinas séricas e termografia em equinos quarto de milha submetidos à prova de laço em dupla - Bianca Gerardi.pdf: 1625786 bytes, checksum: 2e6e055878a273e0a82f20dbda6fefe2 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-08-09T13:38:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 gerardi_b_dr_araca.pdf: 1625786 bytes, checksum: 2e6e055878a273e0a82f20dbda6fefe2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-09T13:38:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gerardi_b_dr_araca.pdf: 1625786 bytes, checksum: 2e6e055878a273e0a82f20dbda6fefe2 (MD5) Previous issue date: 2016-07-25 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os objetivos do presente estudo foram verificar se existe reação inflamatória no exercício de curta duração e alta intensidade e se a mesma pode ser classificada em Th1, Th2 ou Th17. Além disso, verificar se as temperaturas corpóreas e locais se alteram com exercício este e se treinamentos distintos podem influenciar nestas alterações. Utilizaram-se 12 animais, idade entre 3 e 6 anos e peso médio de 450 kg, participantes de laço em dupla, divididos em: treino regular (GTR) e treino esporádico (GTE). O sangue coletado em tubos de 10 ml sem anticoagulante. Coletas e aferições de temperatura foram realizadas 30 minutos antes, imediatamente depois, uma, duas, seis, e 24 horas após o exercício. Utilizou-se como método de detecção das citocinas a citometria de fluxo. A concentração de IL-10, após uma hora do exercício, foi significativamente maior em GTE do que GTR. Observou-se maior concentração sérica de TNF-, IL-6 e IL-10 entre os grupos, 24 horas após o exercício, mas sem alteração entre os momentos. A temperatura central se restabeleceu dentro de 24 horas. As temperaturas da região dos tendões em membros pélvicos e da garupa mantiveram-se elevadas. O exercício não causou nenhum tipo de resposta imune, animais condicionados, treinados esporadicamente, apresentaram resposta imune mista enquanto que animais condicionados, treinados regularmente, não apresentaram nenhum tipo de resposta imune. O mecanismo de termorregulação foi eficiente em ambos os grupos, o aumento de temperatura local após 24 horas pode ser infleuenciado pela temperatura ambiente ou ser sugestivo de inflamação subclínica. / The aims of this study were to verify if there is inflammation in the exercise of short duration and high intensity and whether it can be classified into Th1, Th2 or Th17. Moreover, check the body temperatures and locations change with exercise of short duration and high intensity and different training can influence these changes. 12 animals were used, 6 female and 6 males, mean age 3 to 6 years and weight ∼ 450 kg. Animals were divided in two groups: regular training (GLTR) and sporadic training (GLTE). 10 mL of Blood were collected in tube without anticoagulant. Blood collections and temperatures were made 30 minutes before, immediately after, and one, two, six and 24 hours after competition. The analyses were made by flow cytometric. The serum concentration of IL-10 was significantly higher in GTE than in GTR. The serum concentrations of TNF-, IL-6 and IL-10 were significantly higher in GTE than in GTR, 24 hours after exercise. The core temperature increased after exercise and returned to baseline after 24 hours. The temperature in the region of the hindlimbs raised immediately after exercise and did not return to baseline after 24 hours. The temperature of the croup (right side) increased immediately after exercise and remained so for more than 24 hours. The exercise did not cause any immune response, conditioned animals, trained sporadically showed mixed immune response while conditioned animals, trained regularly, did not show any immune response. The thermoregulatory mechanism was efficient in both groups, the local temperature increase after 24 hours due to room temperature or suggestive of subclinical inflammation. / FAPESP: 2014/09362-5

Orientador: Regina Maria Barretto Cicarelli / Banca: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Sergio de Albuquerque / Resumo: A tripanosomíase americana ou doença de Chagas é uma doença parasitária causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi. Atualmente a doença é considerada negligenciada devido à falta de investimentos para obtenção de fármacos capazes de tratar e curar a doença com menos efeitos colaterais do que o benzonidazol, utilizado até o momento. Desta forma, a busca por novos agentes terapêuticos contra a doença de Chagas é uma estratégia importante para eliminar ou, pelo menos, diminuir a incidência desta doença debilitante e que afeta aproximadamente 10 milhões de pessoas na América Latina. Neste trabalho foi avaliada a atividade tripanocida do ácido gálico e seus ésteres semi-sintéticos contra formas epimastigotas de Trypanosoma cruzi, assim como a citotoxicidade sobre células de mamíferos (HepG2). Informações adicionais foram obtidas sobre o perfil de produção de citocinas por macrófagos murinos não infectados e tratados com os galatos; também realizou-se o estudo do efeito apoptótico destas substâncias em formas epimastigotas de T. cruzi. Os resultados obtidos foram bastante interessantes e animadores, uma vez que, alguns ésteres de ácido gálico apresentaram atividade tripanocida maior do que aquela observada com benzonidazol e baixa citotoxicidade em células de mamíferos. Além disso, a avaliação do perfil de produção de citocinas, induzido pelas substâncias mostrou resposta favorável à resistência do hospedeiro contra a doença de Chagas. Nos experimentos realizados para avaliar a atividade apoptótica das substâncias em T. cruzi, aquelas que tiveram maior atividade tripanocida apresentaram baixa taxa de apoptose, o que sugere um mecanismo de ação mais relacionado com a característica surfactante destas substâncias; por outro lado, as que apresentaram menor atividade tripanocida, e provocaram apoptose, podem estar atuando como inibidoras da biossíntese de ergosterol / Abstract: The American trypanosomiasis or Chagas disease is a parasitic disease caused by Trypanosoma cruzi protozoan. Currently, it is a neglected disease due to the lack of investments in order to obtain drugs able to treat and cure the disease with fewer side effects than benzonidazole, used until now. Thus, the search for new therapeutic agents against Chagas disease is an important strategy to eliminate or at least reduce the incidence of this debilitating disease that affects approximately 10 million people in Latin America. In this study were evaluated the trypanocidal activity of gallic acid and its semi synthetic esters against epimastigotes forms of Trypanosoma cruzi, as well as, the citotoxicity on mammalian cells (HepG2). Additional information was obtained about the profile of cytokine production by murine macrophages uninfected treated with gallates; also it was studied the apoptotic effect of these substances in epimastigotes forms of T. cruzi. The results obtained were very interesting and encouraging since some esters of gallic acid showed trypanocidal activity greater than that observed with benzonidazole and low citotoxicity in mammalian cells. Moreover, the evaluation of the profile of cytokine production induced by the substances showed a favorable response to the host resistance against Chagas disease. In the experiments performed to evaluate apoptosis activity of the substances in T. cruzi, those who had greater trypanocidal activity, presented a low apoptosis rate, which suggests a mechanism of action based on the surfactant feature of these substances; by the other hand, the substances that showed low trypanocidal activity and caused apoptosis, can act as inhibitors of the ergosterol biosynthesis / Mestre

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: Fabiana Fernandes Bressan / Banca: Áureo Evangelista Santana / Banca: Camila de Paula Freitas Dell'Aqua / Resumo: A pele é um órgão extenso e de fácil acesso, e possui vários tiposcelulares diferentes que estão em constante renovação. Dentre estas células, algunstipos de células-tronco com potencial proliferativo, de autorrenovação e dediferenciação, são responsáveis pela manutenção da homeostase deste órgão epela cura de feridas. Estudos anteriores sugerem a existência de um nicho decélulas-tronco presente no "bulge" dos folículos pilosos, que contém populaçõespositivas para CD200 e CD34. Este trabalho foi realizado com o intuito de: 1- Obtertecidos derivados da pele de cães adultos e fetos, isolar e cultivar as células in vitroderivadas destes, empregando um método de isolamento celular através de digestãoenzimática simples 2- Comprovar a presença de células do "bulge", positivas paraCD200 e CD34 após cultivo celular in vitro, comparando com a análise do tecido;Uma coloração por hematoxilina e eosina foi realizada da pele de cães adultos efetos, e biopsias e células cultivadas in vitro foram caracterizadas pela presença dasproteínas CD200 e CD34 através de imunofluorescência, imunocitoquímica ecitometria de fluxo. Os resultados da imunofluorescência foram negativos paraambos CD200 e CD34 nas peles de feto e adulto. Na imunocitoquímica, as célulasforam positivas para CD34 e CD200, tanto em fetos quanto adultos. Adicionalmente,o marcador de pluripotência OCT4 foi testado, sendo expresso em células de feto.Por citometria de fluxo, a porcentagem média de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Skin is an extensive and easily accessible organ, possessing variouscell types which are in constant renovation. Some stem cell types found in the skinhave the potential of self-renewal, proliferation and differentiation, processes whichare responsible for the organ's maintenance of homeostasis and the healing ofwounds. Previous studies suggested the presence of a stem cell niche at the bulgeregion of the hair follicle, which contains cell populations positive for CD200 andCD34. Thus, this work sought to identify these cell populations in canine culturesusing the following methods: 1. 1- Collecting samples of adult and fetus canine skin,isolating and culturing these cells in vitro using a method of simple enzymaticdigestion; 2- Testing the cell cultures for CD200 and CD34 in vitro, comparing themwith analyzed tissue material. Hematoxylin and eosin staining were conducted for thebiopsies and analysis of fetal and adult canine skin, with the extracted cell culturesbeing characterized for the presence of the proteins CD200 and CD34 throughimmunofluorescence, immunocytochemistry and flow cytometry. In both adult andfetal tissue samples, CD200 and CD34 immunofluorescence results were negative.In immunocytochemistry, both fetal and adult cultures cells tested positive for CD34and CD200. The pluripotency marker OCT4 was also tested, and was positive forfetal culture cells. Flow cytometer results showed that, for samples with a doublestaining of CD... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre