El objetivo general del presente trabajo de Tesis Doctoral fue la preparación, aislamiento, purificación y estudio de las propiedades, especialmente la estructura molecular, de nuevos exponentes de las familias de compuestos xantatos y xantógenos, compuestos conteniendo el grupo ‒OC(S)S en su estructura, con potenciales aplicaciones farmacológicas. Entre los objetivos específicos pueden mencionarse los siguientes: Preparación de nuevos compuestos de la familia de los xantatos, xantógenos y complejos con metales de transición empleando xantatos como ligandos. Caracterización de los compuestos preparados empleando diferentes técnicas espectroscópicas (IR, Raman, Raman resonante, Raman prerresonante, RMN, UVvisible, MS). Estudios estructurales y conformacionales de las especies obtenidas. Estudios de potencial actividad biológica de los compuestos preparados mediante ensayos biológicos in-vitro. Compuestos de la familia de los xantatos (ROC(S)S-+M) y xantógenos (R1OC(S)SR2), así como sus complejos con metales de transición, han recibido especial atención en los últimos años debido a sus potenciales aplicaciones farmacológicas, como por ejemplo, propiedades antivirales, antibacterianas, antitumorales, antioxidantes. Se han reportado también diferentes estudios mutagénicos, citotóxicos y en el campo de la neurociencia. Es interesante el uso de los complejos de níquel y ligandos xantatos como precursores en la síntesis de nanopartículas de sulfuro de níquel. Los xantógenos tienen una gran importancia industrial, agrícola y medicinal. Presentan aplicaciones comerciales significativas como reguladores para controlar la polimerización en la manufactura de varios cauchos sintéticos. También se utilizan como colectores en la flotación de minerales de sulfuros de cobre y carbón. Algunos de ellos han sido utilizados como pesticidas, fungicidas y herbicidas. También han sido probados en el tratamiento de enfermedades de la piel, para bajar la presión sanguínea, y como anticarcinógenos. Las sales de xantatos con diferentes grupos sustituyentes, por ejemplo grupos alquílicos conteniendo átomos de flúor, son especialmente interesantes debido al crecimiento del número de compuestos con algún átomo de flúor en su fórmula que presentan algún tipo de actividad farmacológica. Además son escasos los reportes de estos tipos de compuestos.

En el presente trabajo de tesis se propone descubrir nuevos agentes terapéuticos aplicables en la farmacoterapia de la Enfermedad de Chagas, mediante Cribado Virtual (CV) (también conocido como screening o tamizado virtual) de grandes bases de datos de compuestos químicos. La diversidad química de las bases de datos utilizadas permitirá encontrar prototipos activos novedosos (nuevos líderes). Se han desarrollado, desde el ligando, modelos computacionales capaces de establecer qué características estructurales fundamentales debe reunir un compuesto químico para poseer actividad inhibitoria sobre la cruzipaína (Cz). La Cz es la principal cisteín proteasa del Trypanosoma cruzi (T. cruzi), involucrada en diversas etapas relacionadas con el ciclo de vida del parásito lo cual la convierte en un interesante blanco terapéutico para el desarrollo de nuevos fármacos antichagásico. Aplicamos el conocimiento teórico generado en la búsqueda racional, mediante CV, de nuevos agentes terapéuticos contra la enfermedad de Chagas, contrastando cada estructura química de la base de datos con los modelos generados, para determinar qué compuestos de la base de datos cumplen con los requisitos estructurales definidos por el modelo. Por último a fin de validar de manera experimental las predicciones de los modelos teóricos adquirimos aquellas estructuras señaladas como más promisorias por los modelos desarrollados y evaluamos experimentalmente sus efectos sobre Cz y su capacidad de inhibir el crecimiento de epimastigotes de T. cruzi. 6 compuestos demostraron un efecto inhibitorio sobre Cz dependiente de la concentración y efectos antiproliferativos en T. cruzi. Se estudiaron posteriormente los efectos sobre amastigotes de tres de ellos, y finalmente se avanzó a ensayos preclínicos (modelo murino de infección aguda) con 2 candidatos obteniéndose resultados positivos los cuales permiten ilustrar el potencial de la estrategia propuesta. Este trabajo integra con éxito la búsqueda racional de fármacos asistida por computadora con la biología molecular, celular y ensayos pre-clínicos, lo cual confirma la utilidad de CV para desarrollar el reposicionamiento de fármacos basados en el conocimiento orientado a enfermedades olvidadas.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Trata sobre la Salvia hispanica L. “chía” es una planta anual de verano perteneciente a la familia Lamiaceae y es considerada un suplemento dietético por la FDA, pero además completa las exigentes regulaciones de contenido de nutrientes alimenticios, establecidas por esta organización, para ser un “Alimento Saludable”. En el presente trabajo se investiga las diferencias en la composición proximal, actividad antioxidante y contenido de fenoles totales de chía introducida procedente de Mollepata, Cuzco y la importada procedente de México, en las variedades blanca y negra. En los análisis se evidencia que la chía blanca introducida resulta poseer las mejores características en contenido de grasas 34,15%, cenizas 4,39%, contenido de mucílagos 0,8 % p/p, actividad antioxidante 69,88% (IC50 = 1,32 mg/mL) y en el contenido de fenoles totales 222,45 mg ácido gálico/100g. Por tales resultados se toma a la chía blanca introducida como materia prima para la elaboración de la bebida. La bebida nutracéutica cumple con los requisitos físicos y microbiológicos exigidos por la legislación vigente. / Tesis

Evalúa la cuantificación de los compuestos polifenólicos y la actividad antioxidante in vitro de los extractos hidroalcohólicos de Anacardium occidentale L (frutos), Muehlenbeckia volcanica (Benth.) Endl. (planta entera) y Gamochaeta purpurea (L.) Cabrera (planta entera). La cuantificación de los compuestos polifenólicos se evaluó según el método espectrofotométrico desarrollado por Folin y Ciocalteau, utilizando el ácido gálico como estándar y la actividad antioxidante se determinó por el método de DPPH● y ABTS●+. Las determinaciones para el contenido de compuestos polifenólicos de A. occidentale L, M. volcanica y G. purpurea se encuentran entre 6,369 ± 0,27; 53,306 ± 0,57 y 68,915 ± 2,93 mg EAG/ g ES, respectivamente; mientras que sobre la actividad antioxidante según el IC50 se obtuvieron 19,29; 17,55; 4,11 y 5,83; 5,43; 5,26 µg/mL para los métodos de DPPH● y ABTS●+, respectivamente. Se concluye que Gamochaeta purpurea (L.) Cabrera presentó mayor contenido de compuestos polifenólicos con 68,916 ± 2,93 mg EAG/g ES, y con respecto la actividad antioxidante por DPPH● y ABTS●+, ésta presentó un TEAC de 0,428 y 0,5 respectivamente. / Tesis

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Diseña un plan de negocio en el sector cosmético que incluye los principios y criterios del Biocomercio, este diseño del plan de negocio empezó mediante un estudio de mercado del rubro cosmético y del Biocomercio, el cual orientó a desarrollar una línea de higiene personal denominada “Mistika”. El primer producto desarrollado en esta línea fue el jabón líquido por ser el más usado, según la encuesta realizada. El producto desarrollado fue hecho a base del aceite de aguaje (Mauritia Flexuosa), el cual se eligió mediante un análisis prospectivo, con el fin de seleccionar al recurso que brinde mayor impacto y beneficio a la cadena de valor. Al producto cosmético desarrollado con los principios y criterios del Biocomercio se propuso la denominación de Bio-cosméticos. Asimismo, la presencia del químico farmacéutico, se hace indispensable no solamente por las características científicas y tecnológicas que posee, sino por su capacidad de poder interrelacionarse con todas las etapas del proceso del plan de negocio presentando habilidades administrativas, comunicativas, manejo de recursos y de marketing. / Tesis

TonEBP, la proteína que se une al elemento regulatorio que responde a tonicidad “TonE” es el único factor transcripcional conocido de eucariontes que responde a cambios de la osmolaridad extracelular. Este factor transcripcional pertenece a la familia Rel, al igual que NFAT1-5 y NFκB. TonEBP también se conoce como NFAT5 y se ha asociado al mecanismo de adaptación celular a condiciones de hiperosmolaridad, regulando la expresión de genes que codifican para aldosa reductasa y para los transportadores de taurina, mio-inositol y betaina. Todas estas proteínas regulan los niveles de osmolitos intracelulares compatibles asociados al control del volumen celular. El corazón es un órgano que normalmente no está sujeto a cambios osmóticos excepto durante isquemia-reperfusión, coma diabético y shock séptico. La capacidad de regular el volumen celular se ha vinculado a la sobrevida celular en condiciones de estrés hiperosmótico. Por lo tanto, la capacidad de las células cardíacas de regular el volumen celular, podría ser un factor de sobrevida en patologías como el infarto al miocardio. En nuestro Laboratorio, se describió previamente que TonEBP está presente en los cardiomiocitos y que responde al estrés hiperosmótico. Además, se demostró que el estrés hiperosmótico induce la masa y la actividad de aldosa reductasa con acumulación intracelular de sorbitol, y que la muerte inducida por estrés hiperosmótico es mediada por esta enzima. La activación de TonEBP induce un aumento de los niveles y actividad de aldosa reductasa que mediaría la muerte de los cardiomiocitos inducida por estrés hiperosmótico. Sin embargo, ratones knock out para TonEBP muestran una severa atrofia de su médula renal, incremento de la sensibilidad de sus timocitos al estrés hiperosmótico e incremento de la fragmentación del DNA en células de la fibra del lente, indicando que TonEBP tendría un efecto protector frente al daño inducido por estrés hiperosmótico. Por lo tanto, de estos resultados se deduce que existiría una contradicción entre los datos descritos en la literatura y nuestros hallazgos sobre el papel de TonEBP en la sobrevida celular. La hipótesis de la presente tesis es “TonEBP media la adaptación del cardiomiocito a la hiperosmolaridad generada por isquemia cardiaca”. Los objetivos específicos son: • Caracterizar el mecanismo de muerte inducida por estrés osmótico. • Determinar si el factor de transcripción TonEBP se activa bajo condiciones de isquemia cardiaca in vivo e in vitro. • Determinar el efecto directo de TonEBP en la viabilidad del cardiomiocito. • Evaluar si TonEBP protege a los cardiomiocitos de la muerte inducida por hiperosmolaridad Como modelo experimental se utilizaron cultivos primarios de cardiomiocitos de ratas neonatas expuestos a estrés hiperosmótico en presencia y en ausencia de la sobreexpresión adenoviral de TonEBP tipo silvestre (wtTonEBP) o TonEBP dominante negativo (dnTonEBP). Además se utilizaron modelos experimentales de infarto al miocardio por ligación de la arteria coronaria descendente anterior y de sobreexpresión in vivo de wtTonEBP y dnTonEBP por transducción intracardíaca de adenovirus. El estrés hiperosmótico indujo muerte de los cardiomiocitos por un mecanismo que involucra aumento entrada de Ca2+ a través de un canal de Ca2+ tipo L, aumento de los niveles citoplasmáticos y mitocondriales de Ca2+, depolarización de la mitocondria y reducción de los niveles intracelulares de ATP. Además se detectó liberación de citocromo c pero no del factor inductor de apoptosis (AIF), desde la mitocondria, con activación secuencial de procaspasa 9 y procaspasa 3. Sin embargo, se determinó que la muerte de los cardiomiocitos inducida por sorbitol 600 mOsm correspondía a una apoptosis independiente de caspasas, ya que el pretratamiento con el inhibidor general de caspasas Z VAD fmk, no previno la muerte inducida por estrés hiperosmótico. En un modelo de infarto al miocardio se detectó un aumento de los niveles proteicos de TonEBP en el sitio vecino al infarto a los 2 días post cirugía. Este mismo aumento se detectó en cultivos in vitro de cardiomiocitos sometidos a 30 o 60 min de isquemia simulada seguida de 4 u 8 h de reperfusión. Estos resultados sugieren que la isquemia induce a TonEBP. Debido a que no existen inhibidores y/o activadores farmacológicos para TonEBP se construyeron adenovirus que sobrexpresaban wtTonEBP (Ad wtTonEBP) y dnTonEBP (Ad dnTonEBP). Determinando los niveles proteicos de aldosa reductasa, un blanco transcripcional de TonEBP, se demostró que ambos adenovirus eran funcionales en cardiomiocitos. Estos experimentos demostraron que la sobreexpresión de wtTonEBP aumentó los niveles proteicos de â-actina en forma dependiente de la dosis viral mientras que disminuyó los niveles de la cadena pesada de la β-miosina (β-MHC). La sobreexpresión del dnTonEBP tuvo un efecto contrario al wtTonEBP en los niveles proteicos de β-actina y β-MHC. El aumento de los niveles proteicos de βctina inducida por la sobreexpresión de wtTonEBP se acompañó de una reorganización del citoesqueleto de actina, visualizada por inmunocitoquímica usando faloidina-rodamina. La sobreexpresión de wtTonEBP, pero no de dnTonEBP, indujo muerte de los cardiomiocitos, principalmente por necrosis. Los niveles de necrosis dependieron del nivel de sobreexpresión de wtTonEBP y del tiempo de transducción adenoviral. La transducción adenoviral por inoculación intracardíaca de Ad wtTonEBP y Ad dnTonEBP mostró que Ad dnTonEBP indujo mortalidad en 3 de los 8 animales transducidos, efecto que no se detectó en ratas transducidas con Ad wtTonEBP y Ad LacZ (control). Este resultado sugiere que TonEBP cumpliría alguna función importante en el corazón. Utilizando una multiplicidad de infección de 1000, dosis viral que no inducía muerte celular, se mostró que la sobreexpresión de tanto de wtTonEBP como del dnTonEBP no protegieron a los cardiomiocitos de la muerte inducida por estrés hiperosmótico. La sobreexpresión de ambas proteínas tampoco indujo un cambio en el mecanismo de muerte, apoptosis o necrosis, inducida por estrés hiperosmótico. Se determinó que la muerte inducida por sobreexpresión de wtTonEBP no dependía de la sobreactivación de aldosa reductasa, ya que un inhibidor específico de aldosa reductasa, zopolrestat, no atenuó la muerte inducida por Ad wtTonEBP. Esta muerte tampoco se asemejó al colapso metabólico detectado al someter a los cardiomiocitos a sorbitol 600 mOsm, ya que no se observó disminución de los niveles intracelulares de ATP. Finalmente, los datos obtenidos en esta tesis permiten concluir que el infarto o la isquemia/reperfusión in vitro induce a TonEBP, pero la sobreexpresión de este factor transcripción no está asociada con la protección de los cardiomiocitos al estrés hiperosmótico, sino más bien es un inductor de muerte celular por necrosis.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Identifica la prevalencia de Paramyxovirus, patógenos emergentes de importancia para la salud pública y animal, en murciélagos capturados a lo largo de los tramos de la CIO sujetos a diferentes grados de perturbación ecológica. Las muestras de murciélagos fueron colectados desde octubre del 2009 a octubre del 2010 en seis lugares ubicados a lo largo de la CIO tres zonas altamente perturbadas y tres zonas con un grado de perturbación moderado a ligero. Un sitio ubicado en la Reserva Nacional de Tambopata sirvió como control de perturbación antropogénica. Las muestras de bazo de murciélagos fueron analizadas para determinar la presencia de Paramyxovirus mediante la técnica de PCR semi-anidado que detectaban las regiones conservadas del gen de la polimerasa. Un total de 436 murciélagos de 24 géneros diferentes fueron colectados, de los cuales 45 (10.32%) fueron positivas a Paramyxovirus. Tres de la muestras positivas provenían de murciélagos adultos de la especie Sturnira lillium colectadas de en el distrito de Iberia. El análisis de secuencia agrupó a estos virus dentro de género Rubulavirus (virus Mapuera). Los virus restantes se relacionaron con un Morbillivirus aún sin clasificar encontrado en muestras de murciélagos en Brasil durante el año 2013. La especie Artibeus planisrostris mostró la más alta frecuencia de infección (37%). La prevalencia a Paramyxovirus estuvo asociada al grado de perturbación del hábitat, siendo mayor en los lugares con mayor grado de perturbación que en las zonas moderadamente perturbadas (16% frente a 6%, de exacta = 0.006 Fisher). Nuestros resultados proporcionan evidencia de que los Paramyxovirus están presentes y se encuentran circulando en los murciélagos de vida silvestre en América de Sur. Este es el primer informe de infecciones por Paramyxovirus en murciélagos en Perú, expandiendo nuestra comprensión de los reservorios y factores ecológicos asociados con la distribución de estos patógenos potencialmente emergentes en el mundo. / Tesis

La resistencia antimicrobiana constituye un problema actual y creciente que tiene un impacto tanto en la economía como en la salud pública. Esta resistencia se ha observado principalmente, según la OMS, en bacterias como Pseudomonas aeruginosa, la cual pertenece al grupo prioritario de patógenos para los cuales se necesita urgentemente nuevos tratamientos efectivos. Busca obtener bacteriófagos de Pseudomonas aeruginosa multidrogo-resistente a partir de muestras de agua de tres ríos de la provincia de Lima – Perú. Se logra aislar dichos bacteriófagos a partir de las muestras de los ríos Rímac, Chillón y Lurín. Estos fueron caracterizados de acuerdo con los parámetros cinéticos de periodo de latencia, tamaño de explosión y tasa de adsorción. Los periodos de latencia oscilaron, en su mayoría, entre 0 y 10 minutos; los tamaños de explosión variaron desde 15 UFP/célula hasta 3688 UFP/célula y las tasas de adsorción oscilaron entre 1,91 x 10-9 mL/min y 1,32 x 10-8 mL/min. Además, se evaluó la estabilidad térmica de los lisados a 50°C, 60°C, 70°C y 80°C, siendo el lisado denominado LR2 el que mostró una mejor estabilidad térmica a 50°C e incluso soportó temperaturas de 60°C y 70°C por un corto periodo de tiempo. Finalmente, evaluó el efecto de la presencia de Ca+2 en la tasa de adsorción de los bacteriófagos; sin embargo, no se logró establecer una relación entre ambos, ya que en uno de los casos la presencia del ion divalente Ca+2 aumentó la tasa de adsorción, en otro la disminuyó, y en un tercer caso no pareció alterarla. / Universidad Nacional Mayor de San Marcos (Lima). Vicerrectorado de Investigación y Posgrado / Tesis

Obtiene fracciones peptídicas con actividad antioxidante y quelante de metales a partir de las semillas de Erythrina edulis utilizando un modelo de digestión gastrointestinal In Vitro. Las fracciones proteicas se obtuvieron a partir de la harina de las semillas de pajuro. La hidrólisis proteica de cada fracción se realizó utilizando el modelo de digestión gastrointestinal utilizando las enzimas digestivas pepsina 0.7 FIP (HP) y pancreatina 350 FIP- U/g (HPP) a una proporción enzima-sustrato 1/50 p/p adicionalmente se utilizó la enzima alcalasa 2.4 U/g proteína (HPPA). La capacidad antioxidante se determinó mediante el método de neutralización de radicales de oxígeno (ORAC-FL). Además, se determinó la actividad quelante de hierro y cobre. Se obtuvieron cuatro fracciones proteicas, siendo en función de abundancia las siguientes: albúmina, glutelina, globulina y prolamina, cada una de las fracciones mostró un perfil electroforético diferente. Los hidrolizados obtenidos después de la actividad de las tres enzimas sobre las albúminas y globulinas fueron las que presentaron una mayor actividad antioxidante, con valores de ORAC-FL de 4957.2 ± 35.1 y 5177.2 ± 23.0 µmol de equivalente de Trólox (ET)/mg de proteína, respectivamente. Además ambos hidrolizados mostraron más del 50% de capacidad quelante de hierro a la concentración de 360 µg/mL. En el caso de la actividad quelante de cobre, los hidrolizados obtenidos con las tres fracciones proteicas mostraron porcentajes superiores al 70% de quelación a 180 µg/mL. Concluye que las albúminas y globulinas del pajuro presentan un importante potencial como fuente de péptidos antioxidantes y quelante de metales después del modelo de digestión gastrointestinal con enzimas digestivas y alcalasa. / Tesis

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Demuestra que la actividad antiinflamatoria de una forma farmacéutica de aplicación tópica a base del extracto etanólico liofilizado de cálices de Physalis peruviana “aguaymanto”. Se realizó una extracción por reflujo con éter de petróleo y se preparó un extracto etanólico por maceración, utilizando cálices de aguaymanto recolectados de una empresa procesadora del departamento de Cuzco. El extracto etanólico liofilizado se incorporó a concentración de 1% en las bases diseñadas para tal fin. Se ensayaron diversas formulaciones en gel base de carboximetilcelulosa sódica (CMC), poliacrilamida y carbómero, seleccionando aquellas preparaciones que presentaron mejor compatibilidad física; adicionalmente se sometieron a estabilidad preliminar. Se evaluó su actividad antiinflamatoria siendo 14,83; 39,10 y 48,86% de eficacia antiinflamatoria para el extracto liofilizado, gel de preparación reciente y gel envejecido a 15 días, frente a 56,79% y 24,49% para gel de diclofenaco 1% y crema de clobetasol 0,05%, respectivamente. Los resultados evidenciaron que la formulación de gel de poliacrilamida 3% con extracto liofilizado de cálices de Physalis peruviana evaluada posee actividad antiinflamatoria. / Tesis