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Silenciamento gênico de TGF-β1 e determinantes precoces de área de infarto em modelo experimentalVietta, Giovanna Grünewald January 2012 (has links)
Resumo não disponível
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Efeito da Quimiocina CXCL10 na infecção por Leishmania infantum/chagasi em camundongos BALB/C / Effect of chemokine CXCL10 in Leishmania infantum chagasi infection in BALB/c miceFigueiredo, Webertty Mayk Eufrásio de January 2012 (has links)
FIGUEIREDO, Webertty Mayk Eufrásio de. Efeito da quimiocina CXCL10 na infecção por Leishmania infantum chagasi em camundongos BALB/c. 2012. 65 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-05-10T14:16:18Z
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Previous issue date: 2012 / Visceral leishmaniasis caused by Leishmania infantum chagasi is characterized by the loss of the ability of host to generate an effective immune response. In this study it was investigated the role of CXCL10 chemokine in controlling L. infantum chagasi infection in vivo. Groups of BALB/c mice were treated or not with recombinant CXCL10 chemokine (5 μg/kg) with 1, 3 and 7 days of infection and after 1, 7 and 23 days of treatment, some parameters were evaluated: parasite load, levels of IFN-g, IL-4, TGF-β and IL-10, and the histopathological alterations in the liver. After 23 days of treatment, CXCL10 induced in the spleen a significant reduction on the number of parasites as compared to control group. In the liver, parasite load decreased in treated group between the 7th and 23th day post treatment. However, the antileishmanial effect of CXCL10, in this work, does not seem to be mediated by NO, since there was no difference in the NO production among the groups. IFN-γ was induced most significantly in treated group than in controls, and reached its maximum production (100 pg/mL) on day 23 after treatment, correlating with the reduction in parasite burden in target organs. IL-4 was produced in low doses, in both groups, although treated animals had shown higher levels than control group. Regarding to anti-inflammatory cytokines, after the 23th day of treatment, IL-10 levels in treated animals were smaller than in control group. Production of TGF-β after 7 days of treatment was 2 times lower in treated group when compared to control, and after the 23th day of treatment, this cytokine remained with lower levels than those observed in control. In the histopathological analysis of the liver after the 1st day of treatment, were found in both groups more immature granulomas (GI) than non-granulomatous infiltrate (NG), and some few mature granulomas (GM) were only observed in treated group. After 7 days of treatment, the amount of NG infiltrates was lower, and GI were still the most frequent in both groups, besides a slight increase of GM was observed in treated group. In summary, at the light of the found results, it is possible to suggest an important leishmanicidal role to CXCL10 in BALB/c mice infected by L. infantum chagasi, which seems to be mediated by a significant IFN-g production, and suppression of immunoregulatory cytokines, IL-10 and TGF-β, opening the hypothesis that this would be associated to a decrease in the frequency of regulatory T cells induced by CXCL10 in these animals. / A leishmaniose visceral causada por Leishmania infantum chagasi é caracterizada pela perda da habilidade do hospedeiro gerar uma resposta imunológica eficaz. Neste estudo, foi investigado o papel da quimiocina CXCL10 no controle da infecção por L. infantum chagasi in vivo. Grupos de camundongos BALB/c foram tratados ou não com CXCL10 (5 μg/kg) com 1, 3 e 7 dias de infecção e após 1, 7 e 23 dias do tratamento, alguns parâmetros foram avaliados: a carga parasitária, os níveis de IFN-, IL-4, TGF-β e IL-10, e as alterações histopatológicas no fígado. Após 23 dias de tratamento, CXCL10 induziu, no baço, uma redução expressiva no número de parasitos, quando comparado ao grupo controle. No fígado, a carga parasitária mostrou uma queda no grupo tratado, entre o 7º e 23º dia após o tratamento. Entretanto, o efeito leishmanicida de CXCL10, neste trabalho, não parece ser mediado por NO, uma vez que não houve diferença na produção de NO entre os grupos. IFN-γ foi induzida de maneira mais significativa no grupo tratado do que nos controles, e atingiu sua produção máxima (100 pg/mL) no 23º dia após o tratamento, correlacionando-se com a queda da carga parasitária nos órgãos-alvo. IL-4 foi produzida em baixas concentrações, em ambos os grupos, embora os animais tratados com CXCL10 tenham mostrado níveis mais elevados do que os controles. Em relação às citocinas antiinflamatórias, após 23 dias do tratamento, os níveis de IL-10 nos animais tratados foram menores do que os do controle. A produção de TGF-β após 7 dias do tratamento foi 2 vezes menor no grupo tratado quando comparado ao controle, e após 23 dias do tratamento, essa citocina continuou com níveis mais baixos do que aqueles observados no controle. Na análise histopatológica do fígado após o 1º dia do tratamento, foram encontrados, em ambos os grupos, mais granulomas imaturos (GI), do que infiltrados não granulomatosos (NG) e alguns poucos granulomas maduros (GM) apenas no grupo tratado. Após 7 dias do tratamento, a quantidade de infiltrados NG estava menor e os GI ainda foram os mais encontrados, em ambos os grupos, além disso, foi observado um pequeno aumento de GM no grupo tratado. Em resumo, diante dos resultados encontrados, é possível sugerir um importante papel leishmanicida de CXCL10 em camundongos BALB/c infectados por L. infantum chagasi, que parece ser mediado por uma expressiva produção de IFN-g e supressão das citocinas imunorreguladoras, IL-10 e TGF-β, abrindo a hipótese se isto não estaria associado a uma diminuição na frequência de células T regulatórias, induzida por CXCL10, nesses animais.
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Silenciamento gênico de TGF-β1 e determinantes precoces de área de infarto em modelo experimentalVietta, Giovanna Grünewald January 2012 (has links)
Resumo não disponível
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Silenciamento gênico de TGF-β1 e determinantes precoces de área de infarto em modelo experimentalVietta, Giovanna Grünewald January 2012 (has links)
Resumo não disponível
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Níveis urinários de TGF-B1 em pacientes com diabetes mellitus tipo 2 : impacto da hipertensão arterial sistêmicaFracalossi, Vânia January 2004 (has links)
Resumo não disponível.
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Tratamento da fibrose induzida pela infecção por Trypanosoma cruzi com composto inibidor da via de TGF-\03B2 em modelo tridimensional de cultivo de células cardíacasFerrão, Patrícia Mello January 2014 (has links)
Made available in DSpace on 2015-11-11T12:09:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2
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Previous issue date: 2015-04-14 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A doença de Chagas é a principal causa de lesões cardíacas em jovens adultos economicamente produtivos em áreas endêmicas da América Latina. A cardiopatia chagásica (CC) se caracteriza como uma doença progressivamente debilitante, na qual o TGF-\03B2 desempenha papel fundamental para o desenvolvimento da fibrose e hipertrofia cardíacas, através da regulação de componentes da matriz extracelular (MEC), tais como a fibronectina, as metaloproteases (MMPs) e os inibidores teciduais das MMPs (TIMPs). No presente estudo, foi verificada a capacidade do inibidor farmacológico da via de TGF-\03B2, SB-431542, em restaurar o equilíbrio da MEC, rompido pela infecção por T. cruzi, e os prováveis mecanismos envolvidos neste processo. Para tal, utilizamos um modelo tridimensional (3D) de cultivo de células cardíacas (denominados esferóides cardíacos), capaz de mimetizar aspectos da arquitetura e fisiologia do tecido cardíaco. O tratamento dos esferóides cardíacos infectados por T. cruzi com SB-431542 resultou na redução parcial da hipertrofia e fibrose dos esferóides cardíacos, por mecanismos envolvendo a redução na expressão de TIMP-1, o aumento na atividade das MMPs 2 e 9, a redução na expressão da fibronectina e a redução da carga parasitária
Através de uma abordagem proteômica, conseguimos ainda identificar outras proteínas possivelmente envolvidas no processo de reversão da fibrose e hipertrofia dos esferóides cardíacos a partir do tratamento com SB-431542, como as integrinas, fibulinas, proteínas de ligação ao selênio, a titina, entre outras. Além disso, as análises proteômicas nos permitiram identificar alguns dos componentes moleculares envolvidos no processo de remodelamento do tecido cardíaco disparado pela infecção por T. cruzi, auxiliando assim, na compreensão dos mecanismos associados à progressão da hipertrofia e da fibrose ao longo do desenvolvimento da CC. Dessa forma, nosso estudo fornece novas perspectivas sobre os mecanismos moleculares através dos quais o composto SB-431542 é capaz de reverter a fibrose e a hipertrofia gerada pelo T. cruzi durante a CC, além de validar o modelo 3D de cultivo de células cardíacas como uma ferramenta eficaz para a avaliação in vitro de compostos anti-fibróticos e agentes tripanossomicidas / Chagas disease represents the leading cause of cardiac lesions in economically
productive adults in endemic areas of Latin America. Chagasic cardiomyopathy (CC)
is a progressive dysfunctional illness, in which TGF
-
β plays a central role in
development of f
ibrosis and hypertrophy through regulation of extracellular matrix
(ECM) components, such as fibronectin, matrix metalloproteinases (MMPs) and tissue
inhibitors of metalloproteinases (TIMPs). In the present study we tested the efficacy of
a pharmacological
inhibitor of TGF
-
β signaling pathway, SB
-
431542, in restoring ECM
balance disrupted by
T. cruzi
infection and the possible mechanisms involved in this
process. For that, we used a three
-
dimensional (3D) model of cardiac cells culture
(named cardiac sphero
ids) that can mimic aspects of architecture and physiology of
living cardiac tissues better than conventional two
-
dimensional (2D) models.
Treatment of
T. cruzi
-
infected
-
cardiac spheroids with SB
-
431542 resulted in a
reduction of spheroids hypertrophy and
fibrosis by mechanisms involving a
decrease
in the
expression of TIMP
-
1, an increase in the activities of MMP
-
2 and MMP
-
9, a
reduction in the expression of fibronectin and a reduction of parasite load. Moreover,
we identified through a proteomic
approach
,
other proteins possibly involved in
reversion of fibrosis and hypertrophy of cardiac spheroids after treatment with SB
-
431542, such as integrins, fibulins, selenium binding proteins and titin, among others.
In addition, the proteomic analysis allowed us to
identify molecular components
involved in tissue remodeling generated by
T. cruzi
infection, assisting in the
comprehension of mechanisms related to fibrosis and hypertrophy progression during
CC’s development.
Thus, our study provides new insights over t
he molecular
mechanisms by which SB
-
431542 reverts fibrosis and hypertrophy generated by
T.
cruzi
during CC and also validates the 3D model of cardiac cells culture as a powerful
tool to evaluate
in vitro
the effect of anti
-
fibrotic and trypanocidal agents
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Papel regulatório do TGF-\03B2 na matriz extracelular em diversos tipos celulares e seu efeito após infecção pelo Trypanosoma cruziSilva, Tatiana Araújo January 2015 (has links)
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Previous issue date: 2016-02-23 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / As manifestações mais severas da doença de Chagas são a cardiomiopatia e fibrose cardíaca, mas o tecido muscular esquelético também é afetado pela infecção pelo T. cruzi, resultando em necrose e miosite. O acúmulo de matriz extracelular (MEC) durante o processo de fibrose está envolvido com a patogenia da doença de Chagas, mas seus mecanismos de regulação durante a infecção ainda não estão elucidados. Assim, nos propomos a comparar a resposta de cardiomiócitos (CM), fibroblastos cardíacos (FC) e mioblastos esqueléticos (L6E9) infectados pelo T. cruzi frente ao estímulo de TGF-\03B2, importante citocina fibrogênica envolvida no desenvolvimento da cardiomiopatia chagásica, analisando também os mecanismos de sinalização envolvidos neste processo. FC foram purificados a partir de culturas de CM. Purificação adequada de FC foi obtida somente a partir da 5ª dissociação de culturas de CM, revelada pela baixa detecção de desmina, proteína específica de cardiomiócitos. Culturas de CM, FC e L6E9 normais e infectados pelo T. cruzi (cepa Y) foram tratadas por 1h ou 48h com TGF-\03B2 (1-10 ng/ml). A expressão de FN, SMAD 2 fosforilada (PS2), fosfo-p38 e fosfo-c-Jun foram avaliadas por Western blot (WB) após 1h e 48h de tratamento com TGF-\03B2 (1-10 ng/ml). Análises de WB revelaram que mioblastos L6E9 e FC apresentam aumento de FN já a partir de 1ng/ml de TGF-\03B2, em contraste com CM, em que só foi observado aumento de MEC com 15ng/mL. A infecção pelo T. cruzi induziu uma diminuição da expressão deste componente de MEC em L6E9. FC, por sua vez, apresentam modulação de FN de acordo com o grau de infecção da cultura, com culturas com baixo grau de infecção apresentando redução de FN e culturas altamente infectadas mostrando aumento desta proteína de MEC. A distribuição de fibronectina (FN) também foi analisada por imunofluorescência indireta
FC e L6E9 apresentaram um aumento na expressão de FN a partir de 1ng/ml de TGF-\03B2, confirmando o WB. Após infecção pelo T. cruzi, foi observada uma desorganização e redução na expressão de FN em CM, FC e L6E9 infectados, enquanto células não infectadas adjacentes apresentaram perfis de FN similares ao controle. A resposta diferencial entre os tipos celulares frente ao estímulo com TGF-\03B2 resulta de mecanismos distintos de sinalização intracelular, uma vez que FC e L6E9 apresentam maior disparo da via de SMADs que CM, enquanto a via de p38 (independente de SMADS) é menos estimulada em FC quando comparados com CM e L6E9. Também foi avaliado o perfil de expressão de proteínas das vias de sinalização clássica e alternativa do TGF-\03B2 em culturas de FC normais e infectados com T. cruzi e tratados com 10ng/ml da citocina. Culturas infectadas e tratadas com TGF-\03B2 (10ng/ml) apresentaram uma redução nos níveis de fosforilação de SMAD 2 quando comparados com células normais tratadas. Culturas de FC infectadas não apresentaram aumento de fosfo-p38MAPK, mas disparo na via foi observado após tratamento com 10ng/ml de TGF-\03B2 em FC infectados. Aumento na fosforilação de c-Jun após a infecção e após tratamento com 10ng/ml de TGF-\03B2 também foi detectado em FC. Em conjunto, nossos dados sugerem que a expressão de FN é modulada diferencialmente por TGF-\03B2 em mioblastos L6E9, FC e CM, e que as vias moduladas por SMADS, p38 MAPK e c-Jun possam estar participando no processo de regulação de fibrose mediado pela citocina TGF-\03B2 após infecção pelo T. cruzi / The most severe manifestations of Chagas disease are cardiomyopathy and cardiac
fibrosis,
but the skeletal muscle tissue is also affected by
T. cruzi
infection, resulting in
necrosis and myositis. The accumulation of extracellular matrix (ECM) during the fibrosis
process is involved in the pathogenesis of Chagas disease, but the mechanisms of
its
regulation during infection are not clear yet. Therefore, we propose to compare the response
of cardiomyocytes (CM), cardiac fibroblasts (CF) and skeletal myoblasts (L6E9) infected with
T. cruzi
after TGF
-
β
stimulation, which is an important fibrogenic
cytokine involved in the
development of Chagas cardiomyopathy, also analyzing the signaling mechanisms involved
in this process. CF were purified from CM cultures
. Adequate
purification
was obtained after
the 5th dissociation
of CM cultures
,
as revealed b
y
low detection of desmin, a
cardiomyocyte
-
specific protein. Cultures of normal and
T. cruzi
(Y strain) infected CM, CF
and L6E9 were treated for
1h or
48 hs with TGF
-
β
(1
-
10 ng/ml)
. The expression of FN
,
phosphorylated
SMAD
2 (PS2), phospho
-
p38, and phospho
-
c
-
Jun were also evaluated by
Western blot (WB) after 1h and 48h treatment with TGF
-
β
(1
-
10 ng / ml). WB analysis
revealed that CF and L6E9 showed an increase in FN
expression from 1ng/ml of TGF
-
β
,
contrasting to CM, in which an increased in ECM was only o
bserved after 15ng/ml treatment
.
T. cruzi
infection induced a decrease in the expression of this
ECM
component in L6E9.
CF
presented FN modulation according to the d
egree of infection of the culture, with cultures
containing
a low degree of infection presenting a reduction of FN and highly infected cultures
showing an increase of this ECM protein.
T
he distribution of fibronectin (FN) was
also
analyzed by indirect immu
nofluorescence.
CF and L6E9 displayed a raise in FN expression
rfom 1 ng/mL, confirming WB.
After
T. cruzi
infection, disorganization and reduced FN
expression was observed in infected CM
, CF
and L6E9, while adjacent uninfected cells
showed similar FN prof
iles as controls. The differential response between cellular types
facing TGF
-
β
stimulation results from distinct intracellular signaling mechanisms, since CF
and L6E9 have higher
activation
of
SMAD
s pathway than CM, while p38 pathway
(independent of
SMAD
S
) is less stimulated in CF when compared to CM and L6E9. We also
evaluated the protein expression profile of classical and alternative TGF
-
β
signaling
pathways in normal and
T. cruzi
infected CF cultures, treated with 10 ng/ml of the cytokine.
Infected CF
cultures treated with TGF
-
β
(10ng/ml) showed a reduction in the levels of
phosphorylation of
SMAD
2 when compared with normal and treated controls. CF infected
cultures
did not
show increased phosphorylation of p38MAPK,
but activation in the pathway
was ob
served
after treatment with 10 ng/ml TGF
-
β
.
An increase in phosphorylation of c
-
Jun
after infection and after treatment with 10 ng/ml TGF
-
β
was also detected in CF.
When
considered together, o
ur data suggest that
FN expression is differentially modulated b
y TGF
-
β
in L6E9 mioblasts, CF and CM, and
pathways
modulated by
SMAD
S,
p38 MAPK
and c
-
Jun
may be participating in fibrosis regulatory process mediated by with TGF
-
β
cytokine after
T. cruzi
infection
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Estudo da modulação de proteínas de Trypanosoma cruzi em resposta ao estímulo de TGF-ßuma abordagem proteômicaFerrão, Patrícia Mello January 2009 (has links)
Made available in DSpace on 2016-03-28T12:39:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2
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Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Estudos recentes mostraram que TGF-\03B2 esta envolvido na cardiopatia chagásica aguda e crônica. O aumento de seus níveis plasmáticos e a ativação da sua via de sinalização celular são aspectos peculiares da doença chagásica crônica. Além do seu relevante papel na patologia chagásica, também se observou que esta citocina está intimamente associada ao T. cruzi como um regulador de diferentes etapas de seus ciclo de vida. Trabalhos anteriores demostraram que T. cruzi é capaz de ativar TGT-\03B2 latente, utilizando-o na invação às células hospedeiras e que amastigotas de T. cruzi se ligam e internalizam TGF-\03B2 recombinante, estando este evento relacionado à capacidade de proliferação de amastigotas e sua diferenciação em tripomastigotas no final do ciclo intracelular. Este conjunto de informações nos levou ao questionamento de quais moléculas de T. cruzi poderiam estar envolvidas nos processos de proliferação e diferenciação celular frente ao estímulo por TGF-\03B2. Neste sentido, o presente projeto tem por principal objetivo a caracterização de moléculas responsivas ao estimulo de TGF-\03B2 através de uma abordagem fosfoproteômica. Para tal, extratos de proteínas totais de epimastigotas de T. cruzi (cepa Y), incubadas ou não com TGF-\03B2, foram preparados durante a fase exponencial de crescimento do parasito. Evidenciamos que a dose ótima de TGF-\03B2 para maior indução de fosforilação seria de 5 ng/ml. em seguida, o tempo ótimo de indução com TGF-\03B2 (1,5,15,30 e 60 minutos) foi testado e concluímos que as diferenças entre os padrões de fosforilação são muitos sutis em géis unidimensionais, nos fazendo optar pela análise exclusiava dos perfins em géis bidimensionais de 7 cm com faiza de PH 3-10 não-linear. A avaliação dos perfis bidimensionais demonstrou diferenças nos padrões de fosforilação entre os tempos estudados, nos levando a manter um estudo de cinética de tempo.
As imagens dos géis foram analisadas e algumas das proteínas consideradas responsivas a TGF-\03B2 foram identificadas por espectrometria de massas. Observamos que as proteínas de choque térmico, tubulinas, desidrogenases, enolases, ciclofilina A, GrpE, cruzipaína, fator de elongamento 1-\03B1, fator de iniciação eucariótica 5a, entre outras, têm sua fosforilação e/ou expressão moduladas em resposta a TGF-\03B2. Buscamos correlacionar a função já descrita na literatura para cada proteína com seu possível papel na sinalização intracelular dsparada por TGF-\03B2, em concordância com o comportamento de fosforilação e/ou expressão apresentado em novas análises. Por último, foi avaliado se a adição de TGF-\03B2 a culturas de epimastigotas teria algum efeito sobre a proliferação dos parasitos. Verificamos que a adição de TGF-\03B2 promoveu um aumento de até 73% no crescimento dos parasitos nas primeiras 24 horas de estudo. O conjunto de dados obtidos contribui para a elucidação dos mecanismos moleculares relacionados à sinalização de TGF-\03B2, proporcionando uma fonte para detecção de novos alvos terapêuticos para a doença de Chagas / Recent studies show that TGF
-
β
is involved in the acute and chronic chagasic
cardiopathy. High levels of TGF
-
β
and the activation of its signaling pathway were
shown to be peculiar aspects of patients with chron
ic Chagas disease. Besides its
relevant role in the pathology of Chagas dis
ease, this cytokine was also observed to
be intimately associated with
Trypanosoma cruzi
as a regulator of different stages of
the parasite ́s life cycle. Previous works have show
n that
T. cruzi
, using it in the process of h
ost cell invasion. In addition, amastigote
forms are able to bind and internalize recombinant
TGF
-
β
, and this event is related to
their capacity to proliferate and differentiate int
o trypomastigote forms at the end of
the intracellular cycle. Taken togethe
r, this set of information raises the question as
molecules are involved in the processe of cellular
proliferation and
differentiation stimulated by TGF
-
β
. Therefore, this work aims to characterize TGF
responsive molecules through a pho
sphoproteomic approach. For this purpose, total
T. cruzi
epimastigotes (Y strain), incubated or not with TGF
were prepared from parasites in the exponential gro
wth phase. We determined that 5
was the dose that induce
d the highest number of phosphorylation
events. Next, the optimal induction time (1, 5, 15,
30 and 60 minutes) was evaluated
and we concluded that the phosphorylation patterns
from the studied times showed
only subtle differences using 1
-DE analysis, leadi
ng us to evaluate these profiles
DE gels (7cm pH 3
-10 non-
linear). The profiles obtained
showed differences in phosphorylation patterns duri
ng the time
-
which led us to maintain a time
-
kinetics study. Gel images wer
responsive proteins were identified by mass spectr
ometry. We
observed that heat shock proteins, tubulins, dehydr
ogenases, enolases, cyclophilin
A, GrpE, cruzipain, elongation factor
-
1
α
, eukaryotic initiation factor
their phosphorylation and/or expression levels modu
lated by TGF
correlate the function already described in the lit
erature for each protein with their
possible role in intracellular signaling triggered
by TGF
-
β
, in agreement with thei
phosphorylation and/or expression behavior shown in
our analysis. Finally, we
assessed whether the addition of TGF
-
β
to epimastigotes cultures would have some
effect on parasite proliferation. We found that TGF
-
β
addition led to an increase of up
in parasite growth in the first 24 hours of culture
. The data presented here
contributes to the elucidation of the molecular mec
hanisms related to TGF
, providing a source of new potential therapeutic t
argets against
in response to TGF
-
β
is involved in the acute and chronic chagasic
and the activation of its signaling pathway were
shown to be peculiar aspects of patients with chron
ic Chagas disease. Besides its
ease, this cytokine was also observed to
as a regulator of different stages of
T. cruzi
is able to activate
ost cell invasion. In addition, amastigote
, and this event is related to
their capacity to proliferate and differentiate int
o trypomastigote forms at the end of
r, this set of information raises the question as
molecules are involved in the processe of cellular
proliferation and
. Therefore, this work aims to characterize TGF
-
β
sphoproteomic approach. For this purpose, total
epimastigotes (Y strain), incubated or not with TGF
-
β
,
were prepared from parasites in the exponential gro
wth phase. We determined that 5
d the highest number of phosphorylation
events. Next, the optimal induction time (1, 5, 15,
30 and 60 minutes) was evaluated
and we concluded that the phosphorylation patterns
from the studied times showed
ng us to evaluate these profiles
linear). The profiles obtained
-
course under study,
kinetics study. Gel images wer
e analyzed and
responsive proteins were identified by mass spectr
ometry. We
observed that heat shock proteins, tubulins, dehydr
ogenases, enolases, cyclophilin
, eukaryotic initiation factor
-5a and others had
their phosphorylation and/or expression levels modu
lated by TGF
-
β
. We tried to
correlate the function already described in the lit
erature for each protein with their
, in agreement with thei
r
phosphorylation and/or expression behavior shown in
our analysis. Finally, we
to epimastigotes cultures would have some
addition led to an increase of up
in parasite growth in the first 24 hours of culture
. The data presented here
contributes to the elucidation of the molecular mec
hanisms related to TGF
-
β
, providing a source of new potential therapeutic t
argets against Chagas disease
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Efeito do inibidor de TGF-B, GW-788388, sobre a infecção aguda experimental por Trypanosoma cruziOliveira, Fabiane Loiola de January 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O fator de crescimento de transformação beta (TGF-\03B2) é uma citocina multifuncional envolvida na modulação de diversos processos celulares, como proliferação celular, formação e degradação de matriz extracelular, tanto em eventos fisiológicos como patológicos. Nosso grupo tem demonstrado o papel regulador de TGF-\03B2 na invasão, crescimento e diferenciação do Trypanosoma cruzi (T. cruzi), o agente etiológico da doença de Chagas, uma importante causa de mortalidade e morbidade em países endêmicos na América latina. Haja vista que o remodelamento da matriz extracelular está diretamente relacionado à extensa fibrose observada no curso da doença de Chagas, nosso objetivo foi avaliar a ação terapêutica de um inibidor da via de sinalização de TGF-\03B2 (GW-788388) sobre a infecção aguda experimental pelo T. cruzi. Para essa análise foi utilizado o modelo de infecção pelo T. cruzi (cepa Y) em camundongos suíços submetidos ao tratamento oral com o composto em diferentes dias pós-infecção (3º, 13º e 20º dpi). Nossos dados revelaram diferentes respostas terapêuticas de acordo com o dia pós-infecção no qual o composto foi administrado. Quando administrado no 3º dpi, GW-788388 foi capaz de reduzir: (i) o parasitismo tissular e inflamação no coração e fígado; (ii) os níveis plasmáticos de AST, ALT e uréia e; (iii) a deposição de colágeno I e fibronectina no coração dos animais infectados.
Neste esquema de tratamento, GW-788388 reverteu ainda a queda na expressão de conexina-43 e os danos de condução elétrica, sugerindo um papel protetor contra os danos cardíaco, hepático e renal, induzidos na infecção por este parasito. Interessantemente, o tratamento no 13º dpi com GW-788388, apesar de não alterar os parâmetros parasitológicos e clínicos avaliados em relação ao grupo não tratado, aumentou a mortalidade, sugerindo a relevância da via de TGF-\03B2 neste período da infecção em que os camundongos estão em choque sistêmico. No entanto, quando a administração do composto foi realizada no 20º dpi, os resultados revelaram uma significativa diminuição na expressão de colágeno I, indicando a eficiência deste tratamento em promover a degradação dos elementos de matriz no tecido cardíaco infectado. Em resumo, a inibição da via de sinalização de TGF-\03B2 reduziu a infecção pelo T. cruzi, previniu os danos cardíacos e reverteu a deposição de componentes de matriz extracelular, observados durante esta infecção in vivo. O conjunto dos resultados apresentados sugere que o bloqueio da atividade de TGF-\03B2 pode representar uma importante intervenção terapêutica a ser investigada em modelos de infecção aguda e crônica pelo T. cruzi. / Transforming growth factor beta (TGF
-
β
) is a multifunctional cytokine involved in
modulating many cellular processes such as cell prolife
ration, formation and
degradation of extracellular matrix in physiological and pathological events. Our
group has demonstrated the regulatory role of TGF
-
β
in parasite host
-
cell invasion,
growth and differentiation of
Trypanosoma cruzi
(
T. cruzi
), the eti
ologic agent of
Chagas disease, an important cause of morbidity and mortality in endemic countries
in Latin America. Considering that the extracellular matrix remodeling is directly
related to the extensive fibrosis observed in Chagas disease outcome, our
objective
was to evaluate the therapeutic action of an inhibitor of the signaling pathway of
TGF
-
β
(GW
-
788388) during acute experimental
T. cruzi
infection. For this analysis
we used the model of
T. cruzi
infection (Y strain) in Swiss mice subjected to oral
treatment with the compound at different days post
-
infection (3
rd
, 13
th
and 20
th
dpi).
Our data
revealed different therapeutic responses according to the day post
-
infection in which the compound was administered. When administered in the 3
rd
dpi, GW
-
788388 was able to reduce: (i) the tissue parasitism and inflammation in
heart and liver, (ii) the pl
asma levels of AST, ALT and urea, and (iii) collagen I and
fibronectin deposition in the hearts of infected animals. In this treatment scheme,
GW
-
788388 reversed the decrease of connexin
-
43 expression and electrical
conduction damages, suggesting a protect
ive role of this compound in the heart,
kidney and liver damage, induced by this parasitic infection. Interestingly, treatment
in the 13
th
dpi with GW
-
788388, although presented similar parasitological
parameters in relation to the untreated group, an incr
eased mortality was observed,
suggesting the relevance of TGF
-
β
pathway in this period of the infection, in which
mice were in systemic shock. However, when the compound administration was
performed at the 20
th
dpi, the results revealed a significant collagen I expression
decrease, indicating the effectiveness of thi
s treatment in promoting the degradation
of extracellular matrix elements in the infected cardiac tissue. In summary, TGF
-
β
signaling pathway inhibition reduced the infection by
T. cruzi
, prevented heart
damage and reversed the extracellular matrix compone
nts deposition, observed
during this infection
in vivo
. The combined results suggest that blocking the activity
of TGF
-
β
may represent an important therapeutic intervention to be investigated in
acute and chronic models of
T. cruzi
infection.
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Níveis urinários de TGF-B1 em pacientes com diabetes mellitus tipo 2 : impacto da hipertensão arterial sistêmicaFracalossi, Vânia January 2004 (has links)
Resumo não disponível.
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