MORANO, Maria Tereza Aguiar Pessoa. Impacto da reabilitação pulmonar nos marcadores inflamatórios pré-operatórios e nas complicações pulmonares pós-operatórias de pacientes com câncer de pulmão candidatos a ressecção pulmonar. 2011. 155 f. Tese (Doutorado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2007. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-24T13:18:48Z No. of bitstreams: 1 2011_tese_mtapmorano.pdf: 1946229 bytes, checksum: b227b5ef4819bfc4f9e34635dcaa7413 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-24T13:19:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_tese_mtapmorano.pdf: 1946229 bytes, checksum: b227b5ef4819bfc4f9e34635dcaa7413 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-24T13:19:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_tese_mtapmorano.pdf: 1946229 bytes, checksum: b227b5ef4819bfc4f9e34635dcaa7413 (MD5) Previous issue date: 2011 / Lung cancer (LC) is a malignant aggression which can be also surgically treated characterized by inflammation and higher mortality rates. Pulmonary complications are still concerning. The choice of studying fibrinogen and albumin is due to the fact that they are active inflammatory markers in LC often associated with chronic obstructive pulmonary disease. Pulmonary complications subsequent to lung resection are still worrying. This study evaluated the impact of Pulmonary Rehabilitation (PR) on preoperative inflammatory markers and postoperative pulmonary complications of LC patients. Controlled clinical trial with 31 patients with moderate to severe obstructive disease, stages IA to IIIA, randomized into Group A (GA) undergone PR and the control group - Group B (GB) undergone respiratory therapy (RT). Pulmonary function, respiratory muscle strength, functional capacity, upper limbs muscle strength, maximum and submaximal exercise capacity, Hospital anxiety and depression scale (HADS), quality of life through Short-form36 (SF36), fibrinogen and albumin were evaluated before and after a 4 weeks of the survey protocols. After surgery pulmonary complications were analyzed. GA performed aerobic physical training, peripheral and respiratory muscle strength training. GB performed lung expansion techniques. Both groups received educational classes and performed the protocols in similar time. The study was approved by the institution’s ethic committee. There was in GA significant improvements in FVC from 65±17 to 76± 15% of its predicted (p=0.003 ), in maximal inspiratory pressure (MIP) from 78±46 to 104± 42cmH2O (p=0.0003 ), in maximal expiratory pressure (MEP) from 78±21 to 93± 25cmH2O (p=0.0009 ); in walked distance from 435±70 to 491±88 m (p<0.0001 ), upper limb maximum load from 1.0 to 2.0 kg (p=0.008 ), in treadmill inclination from 5±3 to 8± 3% (p<0.0001 ) and speed from 4.9 [3.7 -5.5] to 5.2 [4.4 -6] (p=0.002 ), submaximal exercise capacity from 447±179 to 718± 220s (p=0.002 ), in anxiety from 9.9 ±4.9 to 4.9 ±2.7 (p<0.0001 ), and depression from 9.05 ±4.08 to 4.9 ±2.1 (p<0.0001 ), in quality of life with Physical Component Summary (PCS) from 37.5 ±9.07 to 46.15 ± 8.7 % (p=0.004 ) and fibrinogen to 448.3 ±129.9 to 321.6 ± 73.2 mg/dl (p=0.0002 ). Albumin has not showed significant result in both groups. In GB there was significant increase in MIP 50±22 to 70± 35 (p=0.004) and reduction in fibrinogen from 490.7 ± 199.7 to 453.3 ± 177.2 mg/dl (p=0.3). Other variables GB did not show any significant results. When comparing results between groups there was significant difference in the walked distance (p=0,0001), in upper limb strength (p=0,009), in inclination (p=0,0008), in endurance (p=0,005), in anxiety (p=0,0002), in depression (p=0,04), in PCS (p=0,03) and fibrinogen (p=0,04). Out of 31 patients, 10 were not operated. In postoperative pulmonary complications, GA show less greater and lesser relevance morbidity (p=0,002 and p=0,01 respectively) shorter length of hospital stay (p=0,004), less chest tube days(p=0,03), lower percentage of bronchial fistula (p=0,009) and less bronchospasm (p=0,002). When compared to GB. PR had impact on the reduction of serum fibrinogen, on clinical improvements, health related quality of life, anxiety and depression, and also reduced postoperative pulmonary complications. In the absence of PR programs, RT can be an important preoperative strategy. / O câncer de pulmão (CP) é uma agressão maligna com características inflamatórias e muitas vezes ressecáveis. A escolha do fibrinogênio e albumina deve ao fato de serem marcadores inflamatórios e se manifestarem em CP, muitas vezes associado à doença obstrutiva crônica. As complicações pulmonares ainda são preocupações nas ressecções pulmonares. O estudo avaliou o impacto da reabilitação pulmonar nos marcadores inflamatórios pré-operatórios e nas complicações pulmonares pós-operatórias de pacientes com CP. Ensaio clínico, controlado com 31 pacientes, com doença obstrutiva de moderado a grave, estadiamento IA a IIIA, aleatorizados em: Grupo A (GA) submetido à RP e o controle Grupo B (GB) a fisioterapia respiratória (FR). Avaliados antes e após 4 semanas do protocolo do estudo pela função pulmonar, força muscular respiratória, capacidade funcional, força muscular de membros superiores (MMSS), capacidade máxima e submáxima de exercício, ansiedade e depressão (HADS), qualidade de vida pelo Short-Form36 (SF36), fibrinogênio e albumina. Após a cirurgia foram analisadas as complicações pulmonares. O GA realizou treinamento aeróbico, de força muscular periférica e respiratória. O GB executou técnicas para expansão pulmonar. Os grupos receberam aulas educativas e realizaram os protocolos com tempo equânime. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética do Hospital de Messejana. No GA houve melhora significativa da CVF passando de 65±17 para 76±15% previsto (p=0,003), da PImax de 78±46 para 104±42cmH2O (p=0,0003), da PEmax, de 78±21 para 93±25cmH2O (p=0,0009), aumento da distância percorrida de 435±70 para 491±88m (p<0,0001), da carga máxima para MMSS de 1,0 para 2,0kg (p=0,008), da inclinação do teste de MMII de 5±3 para 8±3% (p<0,0001) e velocidade de 4,9 [3,7-5,5] para 5,2 [4,4-6] (p=0,002), da capacidade submáxima de MMII de 447±179 para 718±220s (p=0,002), da HADS-A de 9,9±4,9 para 4,9±2,7 (p<0,0001), do HADS-D de 9,05±4,08 para 4,9±2,1 (p<0,0001), da qualidade de vida com Coeficiente Físico Sumarizado (CFS) de 37,5±9,07 para 46,15±8,7% (p=0,004) e do fibrinogênio de 448,3±129,9 para 321,6±73,2mg/dl (p=0,0002). A albumina não apresentou nenhum resultado significativo nos grupos (p>0,05). No GB houve aumento significativo da PImax 50±22 para 70±35(p=0,004) e redução não significante no fibrinogênio passando de 490,7±199,7 para 453,3±177,2 mg/dl(p=0,3). Nas demais variáveis o GB não apresentou resultados significantes. Quando comparados entre grupos houve diferença significante nas variáveis: teste da caminhada de 6min (p=0,0001), força muscular de MMSS (p=0,009), inclinação (p=0,0008), endurance (p=0,005), HADS-A (p=0,0002), HADS-D (p=0,04), CFS (p=0,03) e fibrinogênio (p=0,04). Dos 31 pacientes, 10 não realizaram cirurgia. Nas complicações pulmonares pós-cirúrgicas o GA relacionados a morbidade de menor e maior relevância apresentou menor percentual (p=0,002 e p=0,01 respectivamente), menor tempo de internação hospitalar (p=0,004) e dreno torácico (p=0,03), percentual menor de fístula broncopleural (p=0,009) e menor presença de broncoespasmo (p=0,002) quando comparado com GB. A RP pré-operatória teve impacto na diminuição dos níveis séricos de fibrinogênio, melhora dos parâmetros clínicos funcionais, qualidade de vida, ansiedade e depressão e reduziu o percentual de complicações pulmonares no pós-operatório. Na ausência de RP a FR pode ser uma estratégia importante no pré-operatório.

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:35:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 debora_silva_ioc_mest_2013.pdf: 3213514 bytes, checksum: 23b0b96b076b7cdac7fa65cff13f886c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A hanseníase é uma doença infecciosa crônica que afeta a pele e os nervos periféricos, causando deformidades e incapacidades físicas devido aos danos nos nervos. A hanseníase é causada pela micobactéria Mycobacterium leprae, um patógeno intracelular obrigatório. A resposta a infecções bacterianas, virais ou parasitárias é acompanhada por diversas alterações relacionadas à hemostasia, como por exemplo, aumento nos níveis de fibrinogênio. Compreender de que modo essas alterações são induzidas nessas condições pode ser relevante para o desenvolvimento de novas ferramentas terapêuticas. Na preparação do soro de pacientes hansênicos observarmos algumas vezes a formação de um sólido coágulo lipídico, que aqui denominamos Coágulo Hansênico. Inicialmente atribuímos a uma exacerbação dos lipídios séricos a formação desse coágulo. Dos cerca de 2000 pacientes que foram atendidos no ambulatório Souza Araújo, entre os anos de 2009 e 2013, 35 apresentaram o coágulo hansênico (1,75%), dos quais 35% estavam em reação tipo II (ENH) na data da coleta. A análise desse coágulo por cromatografia em camada delgada de alta performance (HPTLC), eletroforese e espectrometria de massa, mostrou que além de uma grande concentração de lipídeos, o coágulo hansênico contém alto teor de fibrina/fibrinogênio e de imunoglobulinas Diante disso, o principal objetivo deste trabalho foi realizar a análise proteômica do coágulo hansênico e quantificar, no soro e plasma dos pacientes multibacilares em reação tipo II ou multibacilares não reacionais, moléculas que poderiam estar envolvidas na formação desse coágulo. Verificamos que a presença de coágulo hansênico está associada a níveis elevados de fator de von Willebrand e fator tecidual. Além disso, pacientes multibacilares reacionais apresentaram maiores níveis de fibrinogênio quando comparados aos pacientes multibacilares não reacionais. Acreditamos que nos pacientes multibacilares a alta carga bacilar e a resposta imune à mesma são responsáveis pelo dano tecidual e consequente liberação de moléculas de matriz extracelular, acarretando a exacerbação do processo de coagulação observada nos mesmos / Leprosy is a chronic infectious disease that affects the skin and peripheral nerves, causing deformities and disabilities due to nerve damage. Leprosy is caused by Mycobacterium leprae an obligate intracellular pathogen. Responses to bacterial, viral or parasitic infections ar e accompanied by several changes on hemostasis parameters, such as increased levels of fibrinogen. Understanding how these changes are induced in these conditions may be relevant to the development of new therapeutic tools. In prep aring serum of leprosy pa tients, sometimes it was observed formation of a lipid ic solid clot, here called Leprosum Clot, initially attributed to an exacerbation of serum lipids. Of the approximately 2000 patients treated in Souza Araújo Ambulatory (IOC/Fiocruz), between the years 2009 and 2013, 35 showed the leprosu m clot (1.75%), of w hich about 3 5% were in type II reaction (ENL) on the collect date. The analysis of such clot by high - performance thin layer chromatography (HPTLC), electrophoresis and mass spectrometry showed that in addition a high lipid contents, the leprosum clot conta ins high fibrin/fibrinogen and immunoglobulin levels. Therefore, the aim of this study was to perform a proteomic analysis of leprosum clot and quantify, in serum and plasma from multibacillary type II reactional patients and multibacillary not reactive on es, molecules that could be involved in the generation of this clot. It was observed that formation of leprosum clot is associated to elevated levels of von Willebrand factor and tissue factor. However, reactional multibacillary patients showed fibrinogen higher levels when compared to not reactive ones. We believe that in multibacillary patients the high bacterial load and immune response to it are responsible for tissue damage and subsequent release of extracellular matrix molecules, resulting in the coag ulation exacerbation observed in these patients.

Orientador: José Paes de Oliveira Filho / Resumo: A Trombastenia de Glanzmann (TG) é uma doença hereditária autossômica recessiva caracterizada por alterações na agregação plaquetária, culminando em sinais clínicos como hemorragias e epistaxe. Duas mutações (c.122G>C e g.1456_1466del) no gene Integrin subunit alpha2β (ITGA2B) foram descritas como responsáveis pela ocorrência da TG em equinos de diversas raças, dentre elas: Quarto de Milha, Puro Sangue Inglês, Standardbred, Oldenburg e Passo Fino. Este gene codifica a subunidade αIIb da integrina αIIbβ3, que é receptora de fibrinogênio nas plaquetas. Embora a TG tenha sido diagnosticada nos EUA, Canadá, Japão e Austrália, estudos de prevalência em equinos no Brasil e no mundo são inexistentes. Objetivou-se determinar a prevalência destas mutações em equinos no Brasil. Utilizou-se 1.053 amostras, oriundas do banco de DNA do LBMCV, de equinos Quarto de Milha (n=679) e Warmblood (n=374) clinicamente saudáveis. Segmentos do DNA foram amplificados por PCR e sequenciados. O genótipo de cada animal foi analisado e comparado à sequência de nucleotídeos do gene ITGA2B depositada no GenBankTM. As mutações responsáveis pela TG não estavam presentes na população estudada. Em outras palavras, todos os animais testados apresentaram genótipo wild type. Sendo assim, nas condições em que este estudo foi realizado, pode-se inferir que, apesar de não ser possível afirmar que não existam cavalos carreadores de alelos mutados para a doença no Brasil, a TG parece ser uma doença extremamente rara n... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Glanzmann thrombasthenia (GT) is an autosomal recessive inherited disorder characterized by changes in platelet aggregation, leading to hemorrhage and epistaxis. Two different mutations (c.122G>C and g.1456_1466del) in the Integrin subunit alpha2β gene (ITGA2B) have been identified in different breeds, i.e., Quarter Horse, Thoroughbred, Standarbred, Oldenburg and Paso Fino. ITGA2B codifies the αIIb subunit of the αIIbβ3 integrin, also termed platelet fibrinogen receptor. Horses with GT have been diagnosed in USA, Canada, Japan and Australia. However, there are no studies on prevalence of GT in equines in the world. The aim of this study was to evaluate the prevalence of the mutations responsible for GT in horses in Brazil. A total of 1,053 DNA samples of clinically healthy Quarter Horse (n = 679) and Warmblood horses (n = 374) were used. DNA fragments were amplified by PCR and sequenced. Subsequently, the genotype of each animal was analyzed and compared to the nucleotide sequence of the ITGA2B gene found on GenBankTM. The mutations involved with GT in horses were not prevalent in the cohort of horses assessed. In other words, all animals tested were wild type. Therefore, under the conditions in which this study was carried out, it can be inferred that, although it is not possible to state the absence of mutated allelles in Brazilian horses, GT seems to be extremely rare in the population of Quarter Horse and Warmblood in Brazil. / Mestre

O fibrinogênio é uma glicoproteína presente no plasma composta por duas subunidades idênticas formadas por três pares de cadeias polipeptídicas (A&#945; B&#946; e &#978;), interligadas por pontes dissulfeto. A trombina cliva o fibrinogênio, liberando os fibrinopeptídeos A e B, formando fibrina e, conseqüentemente, o coágulo. Esse trabalho descreve a purificação e caracterização do fibrinogênio a partir do plasma da serpente Bothrops jararaca (B. jararaca). O fibrinogênio purificado foi obtido através de adsorção com cloreto de bário, precipitações com sulfato de amônio e cromatografia de gel filtração. O fibrinogênio de B. jararaca apresentou massa molecular de 370 kDa em condições não reduzidas e, em condições reduzidas, apresentou massas moleculares de 71, 60 e 55 kDa, similares às cadeias A&#945; B&#946; e &#978; dos fibrinogênio humano e bovino (64, 56 e 47 kDa, respectivamente). Através do seqüenciamento da região amino-terminal das cadeias polipeptídicas por degradação de Edman, foram obtidos os oito primeiros aminoácidos de cada cadeia do fibrinogênio de B. jararaca. As seqüências foram: Gly-Asp-Pro-Glu-Asp-Tyr-Leu-Gly para a cadeia A&#945;, Gly-Ser-Asp-His-Asp-Asp-Glu para a cadeia B&#946; e Glu-Ser-X-Leu-Asp-Glu-Glu-Gly para a cadeia &#978; . As seqüências foram então comparadas com a de outros animais já descritos (NCBI-National Center for Biotechnology Information, www.ncbi.nih.gov), mas devido ao pequeno número de aminoácidos obtidos não foi possível observar similaridades. Através de espectrometria de massa (MALDI-TOF) foram observadas algumas seqüências peptídicas, mas não foi possível obter a seqüência completa do fibrinogênio de B. jararaca. Essas seqüências não apresentaram homologia significante com outras seqüências já descritas. O fibrinogênio de B. jararaca foi coagulado pela trombina bovina enquanto que os venenos das serpentes B. jararaca, Crotalus durissus terrificus e Lachesis muta rhombeata não foram capazes de induzir a formação de coágulo. Além disso, os anticorpos anti-fibrinogênio de B. jararaca produzidos em coelho não reconheceram o fibrinogênio humano. Contudo, os anticorpos anti-fibrinogênio humano reconheceram o fibrinogênio de B. jararaca. Assim, mesmo apresentando similaridades entre os fibrinogênios de B. jararaca e de mamíferos, eles possuem comportamentos distintos, podendo sugerir que a B. jararaca apresenta uma molécula de fibrinogênio diferente do humano para evitar um possível auto-envenenamento. / Fibrinogen is a plasma glycoprotein that is composed of two sets of three nonidentical polypeptide chains (A&#945; B&#946; and &#978; ) which are covalently linked by disulfide bonds. Thrombin cleaves fibrinogen to form fibrin and, consequently, the fibrin clot. This work describes the purification and characterization of fibrinogen from Bothrops jararaca (B. jararaca) snake plasma. Purified fibrinogen was obtained by barium chloride adsorption, ammonium sulfate precipitation and gel filtration chromatography. B. jararaca fibrinogen showed a molecular mass of 370 kDa in non-reducing conditions, similar to human and bovine fibrinogen with 340 kDa. Reduced fibrinogen showed three chains of 71, 60 and 55 kDa, which are similar to the molecular masses of human and bovine A&#945; B&#946; and &#978; fibrinogen chains (64, 56 and 47 kDa, respectively). B. jararaca fibrinogen was clotted by bovine thrombin, however, B. jararaca, Crotalus durissus terrificus and Lachesis muta rhombeata venoms were not able to induce fibrin formation. The N-terminal sequence of B. jararaca fibrinogen chains from PVDF membranes showed only the first eight amino acids residues from each chain. The Nterminal sequence was Gly-Asp-Pro-Glu-Asp-Tyr-Leu-Gly for A&#945; chain, Gly-Ser-Asp- His-Asp-Asp-Glu for B&#946; chain, and Glu-Ser-X-Leu-Asp-Glu-Glu-Gly for &#978; chain. The B. jararaca fibrinogen chains N-terminal sequences were compared to other animal Nterminal sequences previously described. However, due to low signal detection during Edman degradation, the sequence results were not sufficient to provide an accurate Blast search identity (NCBI-National Center for Biotechnology Information, www.ncbi.nih.gov). Mass spectrometry (MALDI-TOF) analysis provides some peptide sequences that did not present the complete sequences. Besides, anti-B. jararaca fibrinogen produced in rabbit did not recognize human fibrinogen while anti-human fibrinogen recognized B. jararaca fibrinogen. Thus, despite B. jararaca fibrinogen presents a molecular mass similar to human fibrinogen, the former shows distinctive features, which protect B. jararaca snakes from a fortuitous ingress of snake venom proteins into snake circulation, which could cause a self-envenomation

Trata-se de um estudo randomizado para avaliação de factibilidade conduzido entre dezembro de 2015 a janeiro de 2017 com pacientes de trauma grave (Index of Shock Severity [ISS] >= 15), admitidos na sala de emergência de um grande centro de trauma. À admissão os pacientes selecionados apresentavam hipofibrinogenemia qualitativa (FIBTEM A5 <= 9 mm) além de hipotensão (pressão arterial sistólica [PAs] < 90mmHg) e taquicardia (frequência cardíaca [FC] > 100 bpm). O desfecho primário foi avaliar factibilidade, definida como a proporção dos pacientes que receberam o tratamento alocado em até 60 minutos após a randomização: reposição de concentrado de fibrinogênio (CF) na dose de 50 mg/kg de peso corporal no grupo intervenção e não receber reposição de fibrinogênio no grupo controle. Uma lista de alocação randomizada dos tratamentos foi gerada por estatístico utilizando \"software\" apropriado. A alocação do tratamento foi realizada utilizando-se envelopes opacos lacrados, numerados sequencialmente. Não houve cegamento por inviabilidade de execução logística. Um total de 84 pacientes foram avaliados para elegibilidade, 52 foram excluídos e 32 foram randomizados, sendo alocados dezesseis em cada grupo. A maioria dos pacientes selecionados foram homens (87,5%), na quarta década de vida (42 ± 15,5) e com ISS de 32 ± 7,2. Todos os pacientes incluídos receberam o tratamento conforme alocado em até 60 minutos após a randomização (100%; IC 95%, 86,7% a 100%). O fibrinogênio sérico na sala operatória (SO) foi maior no grupo intervenção em comparação ao grupo controle (190,4 ± 85,5 vs 130,2 ± 51,1; p=0,04), mas não na chegada à UTI (330,8 ± 165,1 vs 280,3 ± 130,3; p=0,43). Houve diferença estatística significativa no desfecho secundário exploratório tempo médio de internação em UTI entre o grupo experimental e grupo controle (mediana 8, intervalo interquartil [IIQ] 5,75 - 10,0 vs mediana 11, IIQ 8,5 - 16,0; p=0,02). Não houve diferença estatística em qualquer outro desfecho clínico avaliado. Não houve danos ou efeitos indesejáveis. Concluiuse que é possível realizar um estudo clínico randomizado em contexto de emergência com reposição precoce de fibrinogênio através do concentrado de fibrinogênio. O estudo foi registrado no ClinicalTrials.gov (NCT02864875) / This is a randomized feasibility trial conducted between December 2015 and January 2017 with severe trauma patients (Index of Shock Severity [ISS] >= 15) admitted to the emergency room of a large trauma center. At admission patients presented qualitative hypofibrinogenemia (FIBTEM A5 <= 9 mm), hypotension (systolic blood pressure < 90 mmHg) and tachycardia (heart rate > 100 bpm). The primary outcome was feasibility assessed by the proportion of patients receiving the allocated treatment up to 60 minutes after randomization meaning receive replacement through fibrinogen concentrate (50mg per kg of body weight) by the intervention group and not to receive an early replacement of fibrinogen by control group. A randomized allocation list of treatments was generated by a statistician using an appropriate software. The treatment allocation was performed using sealed opaque envelopes, numbered sequentially. There was no blindness because it was no feasible in our institution. A total of 84 patients were assessed for eligibility, 52 were excluded and 32 were randomized (16 allocated to each group). The majority of patients selected were men (87,5%), in the fourth decade of life (42 ± 15,5) with ISS of 32 ± 7,2. All randomized patients received treatment as allocated up to 60 minutes after randomization (100%, 95% CI, 86,7% to 100%). Serum fibrinogen was higher in the intervention group on operating room (OR) (190,4 ± 85,5 vs 130,2 ± 51,1; p=0,04) comparing to control group but this difference was not seen on intensive care unit (ICU) (330,8 ± 165,1 vs 280,3 ± 130,3; p=0,43). The length of ICU stay was smaller in the intervention group compared to the control group (median 8, IQR 5,75 - 10,0 vs median 11, IQR 8,5 - 16,0; p=0,02). There was no difference between groups in any other clinical outcomes. We registered no adverse effects related to treatment in both groups. We concluded that it is possible to perform a randomized clinical trial in an emergency setting with early fibrinogen replacement through the fibrinogen concentrate. The study was enrolled in ClinicalTrials.gov (NCT02864875)

Estudamos a ação das proteases bothropasina e Bothrops protease A, do veneno da serpente Bothrops jararaca, sobre o fibrinogênio (FBG), fibronectina (FN) e cininogênio (HK), como ferramenta para geração de peptídeos bioativos. As sequências primárias dos produtos de digestão foram identificadas por espectrometria de massas, com as buscas direcionadas por peptídeos em comum gerados pelas duas proteases. Foram encontradas oito sequências em comum provenientes do FBG e onze, da FN. Apenas a bothropasina clivou o HK, liberando desArg9BK. Foram sintetizados peptídeos derivados do FBG (FBG1-6) e da FN (FN1-4), além de des-Arg9-BK. Oito peptídeos apresentam potencial atividade antiangiogênica predita in silico. Observamos a inibição da elastase (28-20%) causada por FBG1-2-5-6. A melhor inibição da trombina foi de 17%, por FBG1. Contudo, a maioria dos peptídeos intensificou sua atividade. Por fim, este trabalho sugere que as proteases de veneno de serpentes podem ser usadas como ferramentas para processar componentes do plasma, visando à busca por peptídeos bioativos. / We studied the action of the proteases bothropasin and Bothrops protease A purified from the venom of snake Bothrops jararaca upon fibrinogen (FBG), fibronectin (FN) and kininogen (HK), as a tool to generate bioactive peptides. The primary sequences of the digestion products were identified by mass spectrometry and we focused the search for common peptides released by both proteases simultaneously. Sequences in common released by both proteases were found, being eight peptides from FBG, and 11 from FN. Only bothropasin was able to cleave HK releasing des-Arg9-BK. Peptides from fibrinogen (FBG1-6) and from fibronectin (FN1-4), as well as the des-Arg9-BK were synthetized. Eight peptides have potential antiangiogenic predicted in silico. We observed the inhibition of elastase (28-20%) caused by FBG1-2-5-6. The best inhibition of thrombin was 17% by FBG1. However, most of the peptides intensified its activity. Finally, this work suggests that the snake venom protease can be used as tools to process plasma components in order to search for bioactive peptides.

Resumo não disponível

A cola de fibrina tem sido utilizada em diferentes procedimentos cirúrgicos como agente hemostático, selante e de suporte adesivo. No entanto, seu emprego na Veterinária ainda é limitado devido à falta de formulações não dependentes dos componentes de origem humana e de validação baseada em necessidades e condições cirúrgicas de animais. Objetivou-se avaliar a viabilidade da produção de cola de fibrina canina com fibrinogênio obtido por crioprecipitação (crio) e precipitação por protamina a partir de fontes plasmáticas mais disponíveis em bancos de sangue e centros hospitalares. Quatro categorias de plasma pobre em plaquetas foram utilizadas: plasma fresco (FR), congelado dentro de oito horas da colheita e processado em menos de uma semana após congelamento; plasma fresco congelado (FFP), com armazenamento inferior a um ano; plasma fresco congelado que ultrapassou um ano de armazenamento (eFFP), e plasma congelado com período entre colheita e congelamento maior que oito horas e de armazenamento superior a um ano (FP). No estudo in vitro de cada técnica, avaliou-se a concentração de fibrinogênio precipitado por meio do método de Clauss, as propriedades reológicas do gel por tromboelastografia (TEG) e as características estruturais do coágulo por microscopia eletrônica de varredura (SEM). O estudo in vivo consistiu da avaliação da praticidade de aplicação e das propriedades hemostáticas e adesivas das colas de fibrina resultantes em fígado e intestino de coelho (Oryctolagus cuniculus). Em avaliação prévia do protocolo de crio quanto ao uso de bolsas ou tubos, o aproveitamento do material inicial não diferiu, mas os tubos se mostraram mais simples, rápidos e homogêneos para o processamento, além de permitirem aumento da concentração final. O protocolo crio em comparação ao de protamina foi superior na precipitação de fibrinogênio coagulável nas avaliações de Clauss e TEG. Os coágulos formados se mostraram semelhantes entre os dois protocolos na SEM, no modelo de hemostasia hepática e na adesão à serosa intestinal. O uso de aprotinina com o protocolo de protamina não prejudicou a aplicação da cola sobre o intestino. Na crio, plasmas com maior tempo de armazenamento (eFFP, FP) se mostraram significativamente superiores aos mais frescos (FFP, FR) nas análises por Clauss e TEG. Não foi possível identificar diferenças estatísticas entre os tipos de plasma no protocolo protamina em nenhum dos parâmetros avaliados. Estudos adicionais e ajustes nos testes para avaliação de soluções concentradas são necessários para determinação do efeito dos protocolos e tempo de armazenamento do plasma congelado sobre o fibrinogênio precipitado e demais componentes plasmáticos na cola de fibrina. Adequações e pesquisas ainda são necessárias para aproveitamento da precipitação de fibrinogênio por protamina e a partir de plasma fresco com a finalidade de obtenção rápida de cola de fibrina. Bolsas de plasma menos requisitadas em bancos de sangue veterinários representam uma fonte importante de fibrinogênio para a produção de cola de fibrina canina em centros hospitalares apropriadamente equipados, viabilizando seu uso em diferentes aplicações cirúrgicas e pesquisas relacionadas. / Fibrin glue (FG) has been widely used in surgery for hemostatic, adhesive, sealant, and would healing support. In veterinary surgery, however, its use has been hindered by lack of specie-specific formulations and validation of its properties and biological characteristics. This study evaluated methods of fibrinogen precipitation from canine plasma envisioning autologous and allogeneic FG production for surgical use. The efficacy of cryo and protamine fibrinogen precipitation methods in producing canine FG was assessed by analysis on feasibility of each protocol with most available canine plasma sources, rheological and structural characteristics of the resultant FG clot and the hemostatic and adhesive properties of FG during in vivo application. The plasma categories studied included fresh plasma (FR), obtained and frozen within 8 hours from blood collection and processed within a week; fresh frozen plasma (FFP), frozen within 8 hours from blood collection and stored for up to a year; expired fresh frozen plasma (eFFP), plasma frozen within 8 hours from blood collection but stored for more than a year; and, frozen plasma (FP), which was frozen after 8 hours from collection and stored for more than a year. Comparison of cryoprecipitation among plasma types was previously performed in both 120-mL bags and 50-mL tubes and analyzed by Clauss. Total precipitation capacity did not differ significantly between bags and tubes. Nevertheless, the processing was more easily and homogeneously performed in tubes and allowed tailoring the final concentration. Cryoprecipitation generated better results in Clauss and TEG in comparison to protamine protocol. The resultant fibrin glue clots of cryo- and protamine-precipitation showed similar ultrastructure in scanning electron microscopy (SEM) and performance in the in vivo evaluations with the rabbit hepatic and intestinal incision models. The use of aprotinin in the protamine clot seemed beneficial in the intestinal evaluation. With cryoprecipitation, eFFP and FP were superior to FFP in the assessments performed by Clauss and TEG. Fresh plasma performed poorly with cryoprecipitation. Significant differences were not detected among plasma categories processed with protamine precipitation in any of the assays performed. While cryoprecipitation was more reliable regarding homogeneity and capacity to increase final fibrinogen concentration, protamine protocol was faster and simpler considering the equipment required. Although, older plasma units generated significantly more cryoprecipitated and/or clottable fibrinogen, further studies are needed to validate the assays with such high concentrated solutions and to elucidate the effect of freezing storage on precipitation and clottability of fibrinogen intended for FG production. Adjustments on protamine protocol and improvements on fibrinogen precipitation from fresher plasma sources would support the use of autologous or allogeneic plasma for on-site production of canine FG. Veterinary hospitals, blood banks, and patients can benefit from usage of surplus plasma units for FG production aiming surgical and scientific needs.

Base teórica: A obesidade, especialmente a de tronco, está associada com um aumento do risco de doenças cardiovasculares; embora seja controverso se esta associação se deva a outros fatores de risco. Conseqüências conhecidas do sobrepeso, como hipertensão, dislipidemia e diabete, explicam apenas de parte do risco decorrente da obesidade. Um número crescente de evidências sugere que a associação entre obesidade e fatores hemostáticos possa se constituir em um mecanismo adicional pelo qual obesidade confere risco cardiovascular. Nesta tese analisou-se a associação da obesidade, aferida pelo índice de massa corporal (IMC), distribuição de gordura, aferida pela razão cintura quadril (C/Q) com fatores hemostáticos. Métodos: Estudou-se 3230 indivíduos (55% mulheres) com média de 54 anos de idade sem história de doença cardiovascular arrolados no quinto ciclo do Estudo dos Descendentes de Framingham. Amostras de sangue emjejum foram coletadas entre 8 e 9 horas da manhã para a determinação de fibrinogênio, fator VII, fator de von Willebrand (vW), fator ativador do plasminogêriio (tPA), inibidor do ativador do plasminogênio (PAI-I) e viscosidade sangüínea, além de dos níveis de lipídeos e glicose. Resultados: Fibrinogênio, fator VII, fator de von Willebrand, tPA e PAI-l associaram-se com IMC tanto em homens quanto em mulheres (p=0,02 para fator de vW e p<O,OOOI para os demais). A viscosidade plasmática associou-se com IMC em mulheres (p<O,OOOI), mas não em homens (P=O,14). Fibrinogênio, fator VII, fator de von Willebrand, tPA, PAI-1 e viscosidade plasmática associaram-se com W/C tanto em homens quanto em mulheres (p=0,0005 em homens e p=0,01 em mulheres para a viscosidade plasmática e p<O,OOOI para os demais). Todas as associações verificadas para fibrinogênio, fator VII, tPA e PAI-I persistiram após regressão linear múltipl~ controlando-se para as covariáveis idade, tabagismo, uso de antihipertensivos, pressão arterial sistólica, colesterol total e HDL, triglicerídeos e glicose. As associações para o fator de vW permaneceram para o C/Q em homens e para IMC em mulheres. As associações para a viscosidade sangüínea tanto para IMC quanto C/Q persistiram em mulheres mas não em homens. Conclusão: O sobrepeso e o acúmulo de gordura abdominal estão fortemente associados com fatores hemostáticos. Estas associações são independentes de idade, tabagismo e fatores de risco decorrentes da obesidade. Como a associação entre obesidade e doenças vasculares não pode ser completamente explicada por fatores de risco tradicionais, alterações da hemostasia como aumento de fibrinogênio e fatores de coagulação, juntamente com redução do potencial fibrinolítico poderiam se constituir em mecanismos adicionais para explicar o excesso de eventos cardiovasculares em indivíduos obesos. / Background: Obesity, specially truncaI obesity, has been associated with an increased risk for cardiovascuIar disease, aIthough the mechanism ofthe risk has not been fully explained. The consequences of heavy weight, such as hypertension, hyperlipidimia and diabetes, account only for part of the risk attributed to obesity. Since thrombosis is a criticaI component of cardiovascular events, we determined the relationship between obesity, as assessed by body mass index (BMI), fat distribution as assessed by waist-to-hip ratio (W/H) and hemostatic factors. Methods: We studied 3230subjects (55% females) of average age of 54 years without history of cardiovascular disease enrolled in cycle 5 of the Framingham Offspring Study. Fasting bIood samples were obtained between 8-9 am for determination of fibrinogen, plasminogen activator inhibitor (PAI-I) antigen, tissue pIasminogen activator (tPA) antigen, von Willebrand (vW) factor, factor VII antigen and plasma viscosity, as well as lipid and glucose leveIs. Results: Fibrinogen, factor VII, von Willebrand factor, tPA and PAI-1 were associated with body mass index in both men and women.(p<O.OOOI for all except vWfactor in men, p=O.02). Plasma viscosity was associated with body mass index in women (p<O.OOOI) but not in men (p=O.I4). Fibrinogen, viscosity, factor VII, von Willebrand factor, tPA and PAI-1 were associated with waist-to-hip ratio in both men and women (p<O.OOOI for all, except for viscosity, p=O.OOS in men and p=O.OI in women). All the associations found for fibrinogen, PAI-I, tPA, and factor VII persisted afier multiple linear regression, controlling for the covariates of age, smoking, total and HDL cholesterol, triglycerides, blood pressure and glucose level. The associations ofwW fador persisted significant for BMI in women but not for men and for WIH in men but not in women. The association between viscosity and BMI or WIH persisted in women but not in men. Conclusion: Heavy weight and abdominal accumulation of fat are strongly associated with hemostatic factors. These associations are independent of age, smoking and cardiovascuIar risk factors linked to obesity. Since the link between vascular disease and obesity cannot be fully expIained by traditional risk factors, a hypercoaguIabIe state could be one of the mechanisms Ieading to an excess of cardiovascuIar events in obese individuals.

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