Thesis (Ph. D.)--University of Wisconsin--Madison, 1994. / Typescript. eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-03Bitstream added on 2014-06-13T19:46:49Z : No. of bitstreams: 1 marque_jm_dr_botfca.pdf: 404215 bytes, checksum: f934dbbcca84c44e4bc67cbd5b6af157 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O pimentão (Capsicum annuum) é uma hortaliça de grande consumo no Brasil, e a murchadeira, causada por Phytophthora capsici, é uma das principais doenças da cultura, podendo causar perdas de até 100%. Este trabalho visou a avaliação de diversas características do patógeno: agressividade, nível de resistência dos genótipos de pimentão cultivados no estado de São Paulo, sensibilidade a fungicidas, oxigenação para produção de esporângios e caracterização molecular. A determinação destas variáveis tem importância prática para o produtor, na escolha correta de genótipo de pimentão e estratégia de controle; e, para instituições de pesquisa, na otimização da produção de inóculo para programas de melhoramento. Concluiu-se que a agressividade não depende do grupo de compatibilidade; assim como a sensibilidade a fungicidas e o comportamento em relação à oxigenação. Entre os genótipos escolhidos para o teste de resistência o híbrido Nathalie foi o que apresentou o melhor nível. A idade das plantas influenciou a manifestação da resistência. O balanço O2/CO2 influenciou diretamente na esporulação do patógeno. Em P. capsici marcadores de RAPD não foram consistentes na separação de grupos de compatibilidade. / The sweet pepper (Capsicum annuum) is a vegetable well consumed in Brazil, and the blight, caused by Phytophthora capsici, is the main disease of the culture, and can cause losses up to 100%. This work sought the evaluation of several characteristics of the pathogen: aggressiveness, level of resistance of pepper genotypes cultivated in the state of São Paulo, sensibility to fungicides, aeration for sporangia production and molecular characterization. The determination of these characteristics have practical importance to the grower, for the correct choice of pepper genotype and control strategy; and, to research institutions, for the correct inoculum production in breeding programs. It was concluded that the aggressiveness doesn't depend of the mating type; as well as the sensibility to fungicides and the behaviour in relation to the aeration. Among the genotypes in the resistance test, the hybrid Nathalie was the one that presented the best level. The age of the plants influenced the manifestation of the resistance. The O2/CO2 balance had direst influence on the sporulation of the pathogen. In P. capsici RAPD markers are not consistent in the separation of mating types.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-06Bitstream added on 2014-06-13T18:58:00Z : No. of bitstreams: 1 sartori_je_me_botfca.pdf: 257358 bytes, checksum: b22cbf58843b34a23ad0f632bb89f4e0 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Colletotrichum lindemuthianum (Sacc. & Magn.) Scrib. e o agente causal da antracnose do feijoeiro (Phaseolus vulgaris L.), doenca fungica de grande importancia para a cultura, pois pode causar perdas de ate 100% na producao, quando sao utilizadas cultivares suscetiveis e sementes infectadas, sob condicoes ambientais favoraveis ao desenvolvimento de epidemias. O presente trabalho objetivou avaliar a sensibilidade in vitro de 20 isolados de Colletotrichum lindemuthianum, provenientes de diferentes regioes do pais, a cinco fungicidas de diferentes principios ativos e algumas misturas (carbendazin, chlorothalonil, tiofanato metilico, chlorothalonil + tiofanato metilico, trifloxystrobin, propiconazol, trifloxystrobin + propiconazol), em cinco diferentes concentracoes (0, 1, 10, 100 e 1000 -Êg.mL-1) adicionados em meio de cultura batata-dextrose-agar (BDA). Os isolados cresceram por sete dias a 25 -C no meio de cultura BDA e apos esse periodo, discos de 0,5 cm de micelio do fungo, foram transferidos para placas de Petri com o meio BDA contendo as diferentes concentracoes de fungicidas. As placas foram incubadas por sete dias a 25 -C, avaliado o crescimento medio do diametro das colonias (em cm) e calculado os valores de porcentagem de inibicao do crescimento micelial dos isolados em relacao ao tratamento testemunha. Os resultados mostraram que para os fungicidas carbendazin e tiofanato metilico, 11 isolados fungicos foram totalmente ou parcialmente inibidos na concentracao de 1 ou 10 -Êg.mL-1. Chlorothalonil mostrou-se menos eficiente que os demais produtos pelo fato de inibir o crescimento micelial de apenas tres isolados na concentracao de 1000 -Êg.mL-1. A mistura de chlorothalonil e tiofanato metilico mostrou a inibicao total do crescimento micelial de quatro isolados a 1 -Êg.mL-1, e, a 1000 -Êg.mL-1, oito isolados mostraram-se sensiveis a mistura desses produtos... / Colletotrichum lindemuthianum (Sacc. & Magn.) Scrib. is the causal agent of anthracnose in bean (Phaseolus vulgaris L.). This fungal disease has great importance in the crop, since it may cause yield losses of up to 100% when susceptible cultivars and infected seeds are used under environmental conditions that favor the development of epidemics. The aim of this work was to evaluate the in vitro sensitivity of 20 isolates of Colletotrichum lindemuthianum from different regions of the country, to five fungicides with different active principles and some mixtures (carbendazim, chlorothalonil, methyl thyophanate, chlorothalonil + methyl thyophanate, trifloxystrobin, propiconazole, trifloxystrobin + propiconazole), at five different concentrations (0, 1, 10, 100, and 1000 ìg.mL-1), added to potato-dextrose-agar (PDA) culture medium. The isolates were cultured for seven days at 25 °C in PDA medium, after which 0.5 cm disks of fungal mycelium were transferred to Petri dishes containing PDA medium and the various concentrations of fungicides. The Petri dishes were incubated for seven days at 25 °C. We evaluated the mean growth in diameter of the colonies (in cm) and calculated percentage values for mycelial growth inhibition of the isolates in relation to the control treatment. The results showed that 11 fungal isolates were completely or partially inhibited by the fungicides carbendazim and methyl thyophanate at concentrations of 1 or 10 ìg.mL-1. Chlorothalonil proved less effective than the other products, as it inhibited mycelial growth in only three isolates, at the concentration of 1000 ìg.mL-1. The chlorothalonil and methyl thyophanate mixture showed complete mycelial growth inhibition in four isolates at 1 ìg.mL-1, while eight isolates were sensitive to the mixture of these products at 1000 ìg.mL-1. The propiconazole and trifloxystrobin mixture was the most effective and inhibited growth... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001-10Bitstream added on 2014-06-13T19:37:30Z : No. of bitstreams: 1 buzeto_al_me_botfca.pdf: 500408 bytes, checksum: c4806a453d209bba8b3c3db4cc072c79 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Rhizoctonia spp. caracterizam-se por serem patógenos muito importantes em hortaliças, principalmente se cultivadas sucessivamente na mesma área de produção. As hortaliças testadas foram tomate, espinafre, melão, alface, brócolos e couve-manteiga. Estabeleceu-se uma coleção de isolados de Rhizoctonia spp. destas hortaliças, e foram avaliados as características citológicas, através da contagem de núcleos, as características quanto ao grupo de anastomose, através de anastomose de hifas, RAPD e através do teste de patogenicidade. Na contagem de núcleos, verificou-se que os isolados de tomate, espinafre, alface, melão e brócolos foram caracterizados como sendo Rhizoctonia solani, enquanto que os isolados de couve-manteiga foram caracterizados como sendo de Rhizoctonia sp. binucleada. Quanto ao grupamento de anastomose, verificou-se que os isolados de espinafre e tomateiro pertenciam ao grupo AG 4 HGI, os isolados de melão e brócolos paertenciam ao AG 4 HGII, os de alface pertenciam ao AG 1 IA, sendo corroborada através da técnica de RAPD, enquanto os de couve-manteiga ao AG G. No teste de patogenicidade, todos os isolados foram patogênicos nas hortaliças dos quais foram isolados. O presente trabalho teve como objetivo principal a caracterização de isolados de Rhizoctonia spp. de hortaliças. As hortaliças testadas foram tomate, espinafre, alface, melão, brócolos e couve-manteiga. / Rhizoctonia spp. are characterized for being of the very important pathogens on vegetables, mainly in their sucessive cultivation on the same production area. The main objective of the present study was the characterization of isolates of Rhizoctonia spp. from vegetables. The vegetables tested were tomato, lettuce, broccoli, spinach, melon, and kale. A collection of isolates of Rhizoctonia spp. of those vegetables was obtained, and each isolate was characterized by the nuclei number, hiphal anastomosis reactinon, RAPD techinique, and by pathogenicity tests. Isolates from tomato, spinach, lettuce, melon and broccoli were characterized as Rhizoctonia solani, while the isolates of kale were characterized as binucleate Rhizoctonia sp. Through anastomosis reaction, it was determined that the isolates from tomato and spinach belong to the group AG 4 HGI, the isolates from melon and broccoli belong to AG 4 HGII, the isolates from lettuce belong to AG-1-IA, by RAPD thecnique and, isolates from kale belong to AG-G. All isolates were pathogenic to their respectives hosts.

Orientador: Nilce Maria Martinez Rossi / Resumo: A bactéria Xanthomonas axonopodis pv. citri é um fitopatógeno causador do cancro cítrico que compromete parte da produção de laranjas do Estado de São Paulo, com reflexos negativos para a economia do Estado e do País. Para que haja um controle futuro do cancro cítrico, vários pesquisadores se empenharam no Projeto Genoma-Xanthomonas visando desvendar o conjunto gênico desta bactéria e fornecer subsídios para a identificação dos genes envolvidos com a sua patogenicidade. Neste sentido, o atual trabalho visa o monitoramento da expressão gênica do patógeno quando submetido a diferentes condições ambientais, tais como variações no pH extracelular e antibacterianos utilizando o Differential Display RT - PCR. Deste modo, obtivemos a expressão de genes importantes quando o microrganismo foi submetido ao pH 8.0 tais como: um gene relacionado a um transportador MFS, valina - piruvato aminotransferase, glucano 1,4--glucosidase e uma proteína hipotética conservada. Quando submetida à agentes inibidores como a ampicilina, a Xanthomonas expressou proteínas como a integrase, proteína de virulência e uma fosforibosilformilglicinamida ciclo ligase. Quando em meio de cultura contendo penicilina, a bactéria expressou o gene da tirosil t-RNA sintetase. Há um grande interesse em desvendar os mecanismos de ataque da Xanthomonas axonopodis pv. citri, na sua interação com o vegetal e também suas estratégias para inibir o sistema de defesa do hospedeiro, promovendo o surgimento da doença. Neste sentido, espera-se que estes resultados, adicionados a outros projetos funcionais, possam fornecer informações quanto ao mecanismo de defesa da Xanthomonas, bem como da interação planta-bactéria e conseqüentemente auxiliar no controle do cancro cítrico. / Abstract: The bacterium Xanthomonas axonopodis pv. citri is a pathogen causing citric canker that compromises part of the orange production in the State of São Paulo, with negative consequences for the economy of the State and the Country. For the future control of citric canker, several investigators participated in the Xanthomonas Genome Project in order to determine the gene set of this bacterium and to contribute to the identification of the genes involved in its pathogenicity. In this respect, the objective of the current study was to monitor the gene expression of the pathogen when submitted to different environmental conditions such as variation in extracellular pH, and to different antibacterial agents using Differential Display RT-PCR. Using this method we obtained the expression of important genes when the bacteria were submitted to pH 8.0, such as a gene related to an MFS transporter, valine-pyruvate aminotransferase, glucan 1,4--glucosidase and a conserved hypothetical protein. When submitted to the action of inhibitory agents such as ampicillin, Xanthomonas expressed various proteins, i.e., integrase, virulence protein and a phosphoribosylformylglycinamide cycloligase. In a culture containing penicillin, the bacteria expressed the gene of tyrosyl t-RNA synthetase. There is great interest in determining the mechanisms of attack of Xanthomonas axonopodis pv. citri, its interaction with plants and also the strategies it uses to inhibit the defense system of the host, promoting the onset of the disease. In this respect, the present results, added to those obtained in other functional projects, are expected to provide information about the defense mechanism of Xanthomonas and about the plant-bacterium interaction in order to contribute to the control of citric canker / Mestre

Orientador: Edson Luiz Furtado / Banca: Martha Maria Passador / Banca: Christiane Ceriani Aparecido / Banca: Luiz Alberto Blanco Jorge / Banca: Waldir Cintra de Jesus Junior / Resumo: A cultura do eucalipto é uma das mais importantes do Brasil, constituindo-se em fonte de energia e madeira renovável, suportando importantes processos agroindustriais, dentre eles, a produção de celulose, papel e essências. O eucalipto, como outras espécies vegetais, é infectado por diversos patógenos, principalmente fungos, desde o viveiro até plantios adultos. Neste trabalho, será estudado o agente causador do cancro basal, Chrysoporthe cubensis. Esta doença possui ampla distribuição geográfica, ocorrendo desde o extremo sul do Estado de São Paulo até a Amazônia, observando-se prejuízos em regiões de baixa altitude de Espírito Santo, do Vale do rio Doce em Minas Gerais e Recôncavo Baiano. Sua sintomatologia é bastante variada, podendo atacar plantas de cinco meses de idade até o final da rotação. As plantas jovens, por apresentarem diâmetros reduzidos, podem ser aneladas na sua base pelo cancro, sendo levadas à morte. Do ataque em plantas mais velhas resultam lesões com pouco ou abundante trincamento até cancros típicos, podendo ser encontrados a diversas alturas do tronco. O local escolhido para a realização do trabalho, foi a área do projeto EUCFLUX, onde estão implantadas parcelas experimentais com 16 materiais genéticos, em diferentes condições de solo e altitude. Os estudos sobre a influência de doenças no acúmulo de biomassa e fixação de carbono são escassos, sendo assim, os objetivos desse trabalho foram: a) verificar a suscetibilidade ao cancro basal dos seis clones com maior produtividade utilizados nas parcelas experimentais do EUCFLUX; b) proceder o estudo espaço-temporal da doença e c) verificar a influência do cancro basal no acúmulo de biomassa e fixação de carbono das plantas atacadas. Foram avaliadas três repetições quanto à incidência da doença, sendo que tais dados formaram a base para a análise espaço-temporal... / Abstract: Eucalyptus' culture is one of the most important in Brazil being a source of renewable energy and wood. In addition, it supports important agro-industrial processes for the production of pulp, paper and essences. Eucalyptus, like any other plant species, can be infected by many pathogens, especially fungi, from nurseries to adult plantations. In this work, the causal agent of basal canker, Chrysoporthe cubensis, were studied. This disease has a wide geographical distribution, occurring from the southern end of São Paulo State to the Amazon, observing sensitive damages in low-lying regions of Espírito Santo State, Rio Doce Valley in Minas Gerais State and Reconcavo Baiano. Its symptons are quite varied and the fungi can attack plants from five months of age until the end of forest rotation. Young plants with small diameters may be girdled at their base by canker, being put to death. Attack in older plants may result in low or heavy typical cankers, that can be found at different heights of the trunk. The work was conducted in the area of EUCFLUX project, which were established with 16 clones in 10 experimental plots with different soil conditions and elevation. Studies of disease influence in carbon fixation and biomass accumulation are scarce, therefore, the objectives of this work were: a) verify the susceptibility to basal canker of the six clones with higher productivity used in experimental plots of EUCFLUX; b) conduct the spatiotemporal study of the disease and; c) verify the influence of basal canker in the accumulation of biomass and carbon fixation of the attacked plants. Incidence of the disease were evaluated in three plots and these data were the basis for spatiotemporal analysis. To determine biomass parameters, inventory was done in the same three plots and volume and biomass equations were adjusted. In addition, specific gravity of the wood and bark were calculated to healthy ... / Doutor

Orientador: Eiko Eurya Kuramae / Resumo: Rhizoctonia spp. caracterizam-se por serem patógenos muito importantes em hortaliças, principalmente se cultivadas sucessivamente na mesma área de produção. As hortaliças testadas foram tomate, espinafre, melão, alface, brócolos e couve-manteiga. Estabeleceu-se uma coleção de isolados de Rhizoctonia spp. destas hortaliças, e foram avaliados as características citológicas, através da contagem de núcleos, as características quanto ao grupo de anastomose, através de anastomose de hifas, RAPD e através do teste de patogenicidade. Na contagem de núcleos, verificou-se que os isolados de tomate, espinafre, alface, melão e brócolos foram caracterizados como sendo Rhizoctonia solani, enquanto que os isolados de couve-manteiga foram caracterizados como sendo de Rhizoctonia sp. binucleada. Quanto ao grupamento de anastomose, verificou-se que os isolados de espinafre e tomateiro pertenciam ao grupo AG 4 HGI, os isolados de melão e brócolos paertenciam ao AG 4 HGII, os de alface pertenciam ao AG 1 IA, sendo corroborada através da técnica de RAPD, enquanto os de couve-manteiga ao AG G. No teste de patogenicidade, todos os isolados foram patogênicos nas hortaliças dos quais foram isolados. O presente trabalho teve como objetivo principal a caracterização de isolados de Rhizoctonia spp. de hortaliças. As hortaliças testadas foram tomate, espinafre, alface, melão, brócolos e couve-manteiga. / Abstract: Rhizoctonia spp. are characterized for being of the very important pathogens on vegetables, mainly in their sucessive cultivation on the same production area. The main objective of the present study was the characterization of isolates of Rhizoctonia spp. from vegetables. The vegetables tested were tomato, lettuce, broccoli, spinach, melon, and kale. A collection of isolates of Rhizoctonia spp. of those vegetables was obtained, and each isolate was characterized by the nuclei number, hiphal anastomosis reactinon, RAPD techinique, and by pathogenicity tests. Isolates from tomato, spinach, lettuce, melon and broccoli were characterized as Rhizoctonia solani, while the isolates of kale were characterized as binucleate Rhizoctonia sp. Through anastomosis reaction, it was determined that the isolates from tomato and spinach belong to the group AG 4 HGI, the isolates from melon and broccoli belong to AG 4 HGII, the isolates from lettuce belong to AG-1-IA, by RAPD thecnique and, isolates from kale belong to AG-G. All isolates were pathogenic to their respectives hosts. / Mestre

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2008. / Submitted by Diogo Trindade Fóis (diogo_fois@hotmail.com) on 2009-09-17T16:39:22Z No. of bitstreams: 1 2008_DjairSantosLimaSouza_reduzida.pdf: 6987076 bytes, checksum: e14061f98574481be7fb23d93326a740 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2010-01-29T14:15:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_DjairSantosLimaSouza_reduzida.pdf: 6987076 bytes, checksum: e14061f98574481be7fb23d93326a740 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-29T14:15:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_DjairSantosLimaSouza_reduzida.pdf: 6987076 bytes, checksum: e14061f98574481be7fb23d93326a740 (MD5) Previous issue date: 2008-11 / A cultura do algodão (Gossypium hirsutum) sofre perdas significativas na sua produção, devido ao ataque de fitonematóides, especialmente o nematóide de galhas M. incognita. Visando estudar os mecanismos envolvidos na resistência, foram construídas bibliotecas de ESTs de raiz de algodão resistente e susceptível a esse nematóide. As variedades de algodão resistente (IAC 96/414) e susceptível (IAC 98/708), cedidas pelo Institituto Agronômico de Campinas em São Paulo, foram desafiadas com o nematóide de galhas com o objetivo de identificar genes expressos diferencialmente nas plantas resistente e susceptível, durante a presença do nematóide. Cada planta foi inoculada com 1.200 J2s de M. incognita, depositados homogêneamente com a pipeta ao redor da base da raiz. As raízes das plantas de cada variedade foram coletadas após 2, 4 e 18 dias após a inoculação. Essas raízes foram acondicionadas imediatamente em nitrogênio líquido e mantidas em freezer a -80 ºC até o momento da extração dos RNAs. Para a construção das bibliotecas, foi determinada a reunião dos RNAs extraídos das plantas coletadas com 2, 4, 18 dias. Ambas as bibliotecas foram desenvolvidas com o kit "Superscript Plasmid System with Gateway Technology for cDNAs synthesis and Cloning". Os cDNAs foram então seqüênciados, e a montagem das seqüências das duas bibliotecas foi realizada em conjunto, de forma a se buscar genes que estivessem sendo diferencialmente expressos. Os dados gerados resultaram em 2.262 seqüências para as bibliotecas de raíz de algodão resistente e susceptível. A montagem resultou em 1.827 grupos, sendo 234 contigs e 1.593 singlets. No presente estudo, foram identificados vários genes que podem estar associados com defesa a nematóides, outros patógenos, além de proteínas envolvidas com resposta a estresse abiótico. Esse efeito pode ser produzido pela ação do nematóide que ativa rotas de defesa no hospedeiro que levam à expressão de diversos genes de resistência (Giebel 1976; Potenza, Thomas et al. 2001; Johnk, Hietala et al. 2005). A ativação de rotas que levam à resistência do algodão ao nematóide de galhas pode ser sinalizada pela expressão de genes relacionados à resposta de hipersensibilidade (HR) no hospedeiro. Dentre essess genes, destacaram-se a chaperona Hsp90 (FL684416), superóxido dismutase (FL684415), proteína indutora de resposta de hipersensibilidade (FL684432), proteina com domínio LRR (FL684418). Esses genes já foram relacionados com o mecanismo de resistência a patógenos, que leva a ativação da resposta de hipersensibilidade nas plantas atacadas. As respectivas atividades das proteínas codificadas por esses genes serão comentadas a seguir. No início, quando a célula vegetal entra em contato com moléculas elicitoras (Avr) produzidas pelo patógeno ou pela ação do mesmo, ocorre a ativação de enzimas como NADPH-oxidases que promovem a transformação do oxigênio (O2) em íons superóxido (O-) uma espécie reativa de oxigênio, em seguida ocorre o formação e o acúmulo de peróxido de hidrogênio (H2O2) por dismutação espontânea do O- a H2O2 ou quando essa dismutação é catalisada pela enzima superóxido dismutase (SOD). Essa enzima promove a produção do H2O2 numa velocidade 1010 vezes maior que na reação espontânea. Na presença de certos íons, o H2O2 pode ser convertido em espécies de oxigênio ainda mais reativas (ROS), que se ligam a proteínas, inibem a ação de enzimas e causam danos ao DNA. Exemplo disso é a conversão do H2O2, na presença de Fe2+, para OH-, altamente tóxico. Apesar da morte celular que ocorre nas imediações das injúrias, o peróxido de hidrogênio tem um importante papel na ativação de genes de resistência vegetal que inibem a propagação na planta, da necrose provocada pela resposta de hipersensibilidade. Em seguida, à ativação dos genes de resistência ocorre a resposta sistêmica adquirida (SAR), onde várias outras microexplosões oxidativas ocorrem longe do sítio de infecção pelo patógeno, levando à propagação da expressão dos genes de resistência (Resende, Salgado et al., 2003). Relatos também indicam que a morte celular não depende apenas do peróxido de hidrogênio, mas sim da sua interação sinergistica com o oxido nítrico (Iakimova, Michalczuk et al., 2005). Sendo assim, a enzima superóxido dismutase, identificada no presente estudo, pode estar relacionada tanto com a produção da HR em combate ao patógeno, quanto à ativação de outros genes que podem ou não estar associados à resistência a M. incognita no algodão. A quinase dependente de cálcio (FL684434) é também relatada como proteína de defesa de plantas contra patógenos, pois quando ocorre um influxo de cálcio na célula vegetal, provocado por um stress, as quinases dependentes de cálcio podem iniciar uma cascata de transdução de sinal que levam a resposta de hipersensibilidade (Romeis, Piedras et al. 2000). A chaperona Hsp90 participa no dobramento de proteínas R, que atuam na defesa em resposta ao ataque de patógenos (De la Fuente van Bentem, Vossen et al. 2005). Como exemplo, a Hsp90 é essencial na resistência do tomate a M. incognita, por interação com a proteína codificada pelo gene Mi-1 (Bhattarai, Li et al. 2007). Já é sabido que os domínios LRR são freqüentes em proteínas de sinalização que atuam em mecanismos de defesa de plantas (Diévart and Clark 2004). É comum para muitos genes de resistência a nematóides o aparecimento de domínios LRR que são associados com a interação proteína proteína para o reconhecimento de moléculas Avr ou de membros da cascata de transdução de sinal que leva à resistência (Williamson and Kumar, 2006; Mehta, Magalhães et al., 2008; Fuller, Lilley et al., 2008). A proteína indutora de resposta de resposta de hipersensibilidade atua no reconhecimento do patógeno que, por fim, irá disparar o mecanismo da resposta de hipersensibilidade na planta (Rostoks, Schmierer et al. 2003). Outros genes que foram expressos na biblioteca de algodão resistente podem estar ligados à resistência a outros stresses bióticos ou abióticos, e não necessariamente estão relacionados com a resistência à nematóides. Como exemplo, podemos citar os polipeptídios reversivelmente glicosilados (FL684417) cuja função não é bem conhecida. Entretanto, um peptídeo dessa família, chamado de S1UPRG1 encontrado em plantas de tomate, interage com a proteína V1 do capsídio do geminivirus TLCV, podendo estar relacionada com uma nova via onde o polipeptídio do hospedeiro interage com a proteína V1, levando a uma interação compatível entre a planta e o patógeno (Selth, Dogra et al. 2006). As proteínas com domínios de dedos de zinco, como a seqüência encontrada na biblioteca do algodão resistente (FL684423), são fatores de transcrição que atuam na via de resposta a patógenos em diversas plantas (Park, Kim et al. 2007). A expressão do gene para a isoflavorna redutase (FL684412), pode estar relacionada com a síntese de metabólitos secundários em resposta ao patógeno. Resultados similares de expressão foram obtidos para uma cultivar resistente de alfafa (Potenza, Thomas et al. 2001). Com relação à peroxiredoxina (FL684425) esta já é uma proteína conhecida, que atua na defesa contra patógenos (Rouhier, Gelhaye et al. 2004). A proteína de resistência Brassinazole (FL684426) participa da síntese do hormônio brassinolídeo, que participa na indução da resistência em plantas (Nakashita, Yasuda et al. 2003). A proteína Skp1 (FL684427) é um componente do sistema de ubiquitina ligases que mediam a degradação de proteínas pela unidade 26S do proteossomo. A participação dessa proteína em processos de resistência de plantas já foi documentada (Kottapalli, Sarla et al. 2006). A proteína conhecida como ciclofilina (FL684428) participa no processo de sinalização para a ativação das defesas de Arabidopsis contra Pseudomonas syringae (Coaker, Falick et al. 2005). Além disso, uma ciclofilina isolada de repolho chines Brassica campestris demonstrou efeito anti-fúngico contra diversos patógenos, mas principalmente na inibição do crescimento de Botrytis cinerea (Lee, Park et al. 2007). As proteínas V-SNARE (FL684429) são proteínas de membranas que participam no processo de liberação extracelular por exocitose, de proteínas relacionadas com a resistência das plantas (Robatzek 2007). Quitinases são enzimas que atuam na hidrólise da quitina e podem estar relacionadas em processos de resistência a patógenos quitinosos, em uma série de organismos, ou no metabolismo da quitina no próprio organismo. A biblioteca do algodão resistente apresentou uma quitinase de classe IV (FL684430). Essas enzimas pertencem ao grupo das PR3, que são proteínas relacionadas à patogênese em plantas (Kasprzewska 2003). O fator despolimerizante de actina (FL684431) pode estar relacionado com o mecanismo de defesa do hospedeiro contra fungos fitopatogênicos. Esse efeito foi observado para o fator despolimerizante de actina encontrado em cevada (Miklis, Consonni et al. 2007). As enzimas do tipo endo-1,3-D-glucosidases já foram relatadas como proteínas de defesa vegetal no controle de fungos (Okinaka, Mimori et al. 1995) e de fitonematóides (Giebel 1976). A proteína dirigente de expressão já foi relacionada com mecanismos de defesa vegetal em resposta a injúrias (Ralph, Park et al. 2006). Cinnamoyl- CoA redutase (FL684435) foi apontada como uma proteína de defesa via sinalização em arroz (Kawasaki, Koita et al. 2006). Em duas recentes revisões, nos indentificamos diversas proteínas produzidas diferencialmente em plantas infectadas por nematóides (Mehta, Brasileiro et al., 2008; Mehta, Magalhães et al., 2008). As seqüências correspondentes a genes com potencial de expressão diferencial estão sendo analisadas e serão amplificadas para utilização em experimentos de Northern blotting, a fim de confirmar seus níveis de expressão experimentalmente. Posteriormente, essas seqüências poderão ser utilizadas na transformação de plantas com o intuito de produzir variedades de interesse agronômico resistentes ao nematóide. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Meloidogyne incognita is a destructive nematode responsible for heavy damage to economically important plants, including cotton (Gossypium hirsutum) the most important fiber crop worldwide. The control of this pathogen is heavily centered on chemical nematicides, which are toxic to humans and the environment, harmful to non-target organisms and expensive. Alternatively, resistant varieties of cotton obtained from conventional breeding programs represent an attractive strategy for the control of M. incognita. In this context, the aim of the work reported here was to analyze the gene expression profile of cotton plants infected with M. incognita in order to understand the mechanisms involved with resistance. EST libraries of cotton genotypes resistant to or susceptible to infection by M. incognita were constructed and sequenced, generating 2,262 sequences that were assembled into 1,827 groups (234 contigs and 1,593 singlets). The results showed genes differentially expressed in both resistant and susceptible cotton. After manual annotation, 20 genes were found to be expressed exclusively in the resistant cotton genotype, with functions related to pathogen recognition (1), signal transduction (7), defense mechanisms (10) and protein transport and activation (2). The functions of these genes acting coordinately could indicate the existence of a cotton defense pathway against 25 nematode attack. These data show the complexity in plant defense responses, and indicate some candidate genes for validation and use through transformation in other agronomically important plants.

170 f. / Submitted by Cynthia Nascimento (cyngabe@ufba.br) on 2013-02-27T13:14:01Z No. of bitstreams: 1 Paula Bacelar Leite.pdf: 1832443 bytes, checksum: 9905ca3e73155cecd6489273fc00880a (MD5) / Approved for entry into archive by Alda Lima da Silva(sivalda@ufba.br) on 2013-03-01T17:56:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Paula Bacelar Leite.pdf: 1832443 bytes, checksum: 9905ca3e73155cecd6489273fc00880a (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-01T17:56:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paula Bacelar Leite.pdf: 1832443 bytes, checksum: 9905ca3e73155cecd6489273fc00880a (MD5) / FAPESB / A partir de 1989, com o primeiro relato, na região cacaueira baiana do fungo Moniliophthora perniciosa, causador da doença vassoura-de-bruxa, iniciou-se nessa região um processo de empobrecimento provocado pela redução de até 100% da produção de cacau, em diversas propriedades rurais. A vassoura de bruxa representa uma das mais importantes doenças do cacaueiro por sua grande capacidade destrutiva e pela grande velocidade com a qual se espalha. A planta do cacau é uma espécie nativa da floresta tropical úmida americana, provavelmente originária das bacias do Amazonas e Orinoco. É uma árvore que desenvolve em clima quente e úmido numa faixa geográfica compreendida entre os paralelos 20ºN e 20ºS. Entre os esforços encontrados no controle da vassoura de bruxa destacam-se as pesquisas sobre novas variedades de cacau resistentes, produtivas e que originem matérias primas de qualidade industrial. O chocolate é o produto obtido a partir da mistura de derivados de cacau (Theobroma cacao L.), massa (ou pasta ou liquor) de cacau, cacau em pó e ou manteiga de cacau, com outros ingredientes, contendo, no mínimo, 25 % (g/100 g) de sólidos totais de cacau. A qualidade do chocolate é avaliada por meio de suas características químicas, físicas, físico-químicas e sensoriais. Com o objetivo de colaborar com o Programa Brasileiro de Melhoramento Genético foram caracterizadas amostras de cacau monitoradas durante o processo de fermentação e secagem das variedades resistentes à vassoura de bruxa denominadas SR162 e PH16 e uma amostra susceptível a doença denominado de cacau convencional. Foram processadas e caracterizadas as massa de cacau, manteiga de cacau e os chocolates quanto à composição físico-química e química, assim como a avaliação física através do estudo da estrutura dos chocolates e a avaliação sensorial através do teste de aceitação e análise descritiva quantitativa (ADQ®). Os resultados das análises físico-químicas realizadas mostraram que independente da resistência ou não à vassoura de bruxa as variedades estudadas apresentam características próprias. Entre as amostras dos materiais em estudo, não foram identificadas diferenças significativas nas análises de pontos de fusão e na composição de ácidos graxos. As análises colorimétricas mostraram que cada chocolate produzido possui uma cor específica, o que foi confirmado pelos provadores treinados na avaliação sensorial. No estudo das estruturas dos chocolates o menor conteúdo de gordura e o maior tamanho de partículas, encontrados na amostra da variedade PH16, levaram a um maior valor de tensão inicial e maior área de histerese. Para a viscosidade a variação da gordura e o tamanho das partículas não são interferentes. Na Análise Descritiva Quantitativa® realizada, as amostras de chocolates apresentaram diferenças significativas entre si (p<0,05), com referência aos termos descritores. No teste de aceitação os consumidores avaliaram os chocolates com notas que variaram de gostei muito a gostei moderadamente. Através das analises realizadas, verificou-se que as amostras de cacau resistentes à vassoura de bruxa, SR162 e PH16, e o cacau convencional apresentaram características particulares. / Universidade Federal da Bahia.Faculdade de Farmácia. Salvador-Ba, 2012.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-24T11:15:46Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 389658 bytes, checksum: d01e4f8e75c1bc6e7531f77722009e37 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T11:15:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 389658 bytes, checksum: d01e4f8e75c1bc6e7531f77722009e37 (MD5) Previous issue date: 2003-05-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O Tomato rugose mosaic virus (ToRMV) é um begomovírus descrito como parte de um complexo viral causando mosaico dourado e deformação (rugosidade) foliar em tomateiro na região do Triângulo Mineiro, Minas Gerais. Os dois componentes genômicos encontram-se completamente sequenciados, e a análise das seqüências de nucleotídeos do DNA-A indicou a presença de uma ORF adicional denominada AC5, presente apenas em algumas espécies de begomovírus. Esta ORF está quase totalmente inserida na sequência do gene cp, porém em orientação inversa e em outra fase de leitura. A ORF AC5 do ToRMV tem o potencial de codificar uma proteína com aproximadamente 27 kDa. A função do produto potencial da ORF AC5 foi estudada apenas para o Watermelon chlorotic stunt virus (WmCSV), não sendo encontrado nenhum indício da expressão da ORF. Entretanto, a seqüência de aminoácidos da proteína potencialmente codificada pela ORF AC5 do ToRMV possui apenas 41% de identidade com a AC5 do WmCSV. É possível que a ORF AC5 do ToRMV seja expressa, e que a proteína desempenhe alguma função no ciclo de infecção viral. Este trabalho teve por objetivo a clonagem e a expressão in vitro da ORF AC5 do ToRMV e a producão de anti-soro específico. Oligonucleotídeos específicos foram utilizados para a amplificação da região codificadora da ORF AC5 via PCR. O fragmento amplificado foi clonado no vetor de expressão pRSET-C. Plasmídeos recombinantes foram utilizados para a expressão da proteína AC5 em E. coli BL21::DE3. A proteína foi purificada a partir das células de E. coli e utilizada para a produção de anti-soro policlonal em coelhos. A especificidade do anti-soro policlonal obtido foi confirmada por Western blot. Esse anti-soro poderá ser utilizado em ensaios de imunolocalização da proteína AC5 em tecidos infectados pelo ToRMV. / Tomato rugose mosaic virus (ToRMV) is a typical bipartite begomovirus described as part of a viral complex inducing golden mosaic and leaf distortion (rugosity) in tomatoes at Triângulo Mineiro, Minas Gerais. Both genomic components have been completely sequenced, and the DNA-A sequence analysis indicated the presence of an additional open ready frame (ORF), named AC5, present in only a number of begomovirus species. This ORF is almost fully inserted into the cp gene, but in opposite orientation and in a different reading frame. The AC5 ORF of ToRMV has the potential to encode for a 27 kDa protein. The function of a putative AC5 protein has only been studied for Watermelon chlorotic stunt virus (WmCSV), but no evidence of its expression was found. However, the amino acid sequence of the putative AC5 protein from ToRMV is only 41% identical to the WmCSV AC5. It is thus conceivable that the ToRMV AC5 is expressed and plays a role in the viral infection cycle. The objective of this work was to clone and express the ToRMV AC5 ORF in vitro, and to raise an AC5-specific antiserum. Specific primers were used to direct the PCR-based amplification of the ToRMV AC5 ORF. The amplified fragment was cloned into the expression vector pRSET-C. Recombinant plasmids were used for protein expression in E. coli BL21::DE3. The AC5 protein was purified from E. coli cells by affinity chromatography and used for the immunization of rabbits. The specificity of the polyclonal antiserum obtained was assayed by Western blot. This antiserum can now be used in immunolocalization studies attempting to detect the AC5 protein in ToRMV-infected tissues. / Dissertação importada do Alexandria