Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2007. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-12-10T18:55:43Z No. of bitstreams: 1 2007_EderMarques.pdf: 3507588 bytes, checksum: 041b04ae51be60c2b687d29df8c79ff6 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-01-07T22:54:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_EderMarques.pdf: 3507588 bytes, checksum: 041b04ae51be60c2b687d29df8c79ff6 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-07T22:54:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_EderMarques.pdf: 3507588 bytes, checksum: 041b04ae51be60c2b687d29df8c79ff6 (MD5) Previous issue date: 2007 / O cultivo de uvas de mesa no Brasil tem se intensificado principalmente em áreas próximas ao Submédio do Vale do São Francisco. Essa região é responsável por 15 % da produção de uvas de mesa finas do país, correspondendo a cerca de 98 % das exportações brasileiras anuais de uva, tanto em volume quanto em valores de produção. Entretanto, muitos são os problemas fitossanitários que ocorrem nessa cultura. Dentre as doenças de etiologia bacteriana apenas o cancro bacteriano, causado por Xanthomonas campestris pv. viticola (Xcv), apresenta hoje incidência expressiva e importância econômica em videira. Embora tenha sido relatada em 1998, acredita-se que a bacteriose já estivesse presente na região desde 1996, sem ter sido detectada. Assim torna-se importante monitorar a variabilidade das populações bacterianas ao longo dos anos, o que pode ser conseguido de maneira eficiente utilizando marcadores moleculares. Outro fator a ser considerado é o uso contínuo e muitas vezes indiscriminado de compostos cúpricos na agricultura o que pode levar a ocorrência de bactérias fitopatogênicas ou saprofíticas resistentes ao cobre. Considerando a importância do cancro bacteriano para a viticultura no Brasil e buscando maior conhecimento sobre variabilidade do patógeno e seu comportamento quanto a tolerância aos cúpricos, foram objetivos deste trabalho: (1) Caracterizar a diversidade genética, através de rep-PCR, de isolados de Xcv coletados no Vale do São Francisco, entre os anos de 2003 e 2006, comparando-os aos isolados já caracterizados, coletados entre 1998 e 2001; (2) Determinar níveis de tolerância ao cobre em isolados de Xcv representativos de diferentes épocas (1998 a 2006) e áreas de coleta; (3) Detectar e caracterizar em Xcv a presença de regiões homólogas ao gene copA que confere resistência ao cobre em Xanthomonas spp. Os “fingerprints” gerados por rep-PCR, a partir do DNA purificado de Xcv coletados em diferentes anos, áreas e variedades de Vitis vinifera L. foram eficientes e reprodutíveis, constituindo-se em uma importante ferramenta no estudo da genética populacional deste patógeno. Os resultados indicaram ter ocorrido uma possível estabilização da população heterogênea observada por Trindade et al. (2005), além de permitir a observação de bandas comuns e perfis homogêneos entre os isolados que podem ser utilizados para o diagnóstico. Entretanto, não foi possível correlacionar, através dos estudos das seqüências repetitivas, a origem geográfica, a época de coleta ou a cultivar de origem dos isolados com os perfis genômicos. Nos testes de tolerância in vitro aos íons de cobre, de uma forma geral observou-se uma evolução no crescimento da tolerância ao cobre ao longo dos anos, em que isolados de Xcv foram coletados nas áreas de ocorrência do cancro bacteriano de 1998 a 2006. Os resultados do presente estudo confirmam aqueles já relatados anteriormente, de que as estirpes brasileiras apresentaram variabilidade na tolerância ao cobre e que esta tolerância ocorre naturalmente nas regiões produtoras. Araújo (2001) mostrou que essas estirpes mais tolerantes ocorrem na região de Petrolina, e no presente trabalho, demonstrou-se que também ocorrem em outras áreas como Bahia e Piauí. Amplificações com os “primers” desenhados a partir de seqüências do gene copA de X. axonopodis pv. citri e X. campestris. pv. campestris foram observadas para todos os isolados de Xcv testados. A alta homologia entre os produtos das amplificações com os “primers” copAR e copAL a partir do DNA dos isolados de Xcv com o gene cop A, confirmou a existência do gene em Xcv. A árvore filogenética gerada com alta reprodutibilidade mostrou maior distância de Xcv em relação a X. oryzae pv. oryzae e X. campestris pv. campestris e maior proximidade com X. axonopodis pv. citri. Este fato pode ser um indicativo de maior afinidade de X. campestris pv. viticola com a espécie X. axonopodis do que com X. campestris, confirmando as observações de Takita et al. (2004) em trabalho analisando a região rpf. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The production of table grapes (Vitis vinifera L.) in Brazil has increased mainly in the irrigated areas of the “Submédio” of the São Francisco valley, northeastern Brazil. This region is responsible for 15 % of the grape production of the country, corresponding to nearly 98 % of the annual exports. Among the many phytosanitary problems that affect grape production, bacterial canker is the most important bacterial disease affecting several V. vinifera cultivars in that region. The disease is caused by Xanthomonas campestris pv. viticola (Xcv). Although it was reported in 1998, it is believed that it has been present in the region since 1996, without being detected. It is important to monitor the population variability through time, which can be achieved by using molecular markers. Another relevant fact is the continuous, excessive and frequently inadequate use of copper-based fungicides that can lead to resistance in bacteria. Considering the importance of bacterial canker for grape production in Brazil and the lack of information on pathogen variability and its behavior regarding copper tolerance, the objectives of this work were: (1) to characterize the genetic diversity, using rep-PCR, among Xcv strains collected from 2003 to 2006, comparing them to a population already characterized, collected between 1998 and 2001; (2) to determine tolerance levels to copper in Xcv strains, selected to represent different collection years (1998 to 2006) and collection sites; and (3) to detect and characterize in Xcv the presence of homologous regions to the copA gene, which is involved in copper resistance in Xanthomonas spp. The fingerprints generated by rep-PCR using bacterial purified DNA from isolates collected in different years, areas and from different grape cultivars were reproducible and the results indicated lower levels of polymorphism among the isolates collected from 2003- 2006 than among the isolates previously characterized by Trindade et al. (2005). The profiles were generally very homogeneous and several common bands among isolates were detected. However, it was not possible to correlate geographic origin, collection year or cultivar with the rep-PCR genomic patterns. In vitro tests were conducted to assess tolerance to copper ions in Xcv. The results showed a general increase in copper tolerance from 1998 through 2006 and also showed variation in the minimum inhibitory concentration among the isolates. Previous studies demonstrated that this tolerance occurs naturally in the Petrolina region (Pernambuco state). Here we observed variation in tolerance also in isolates from Bahia and Piauí states. PCR- amplifications with primers (copAR and copAL) selected from the copA sequences of X. axonopodis pv. citri and X. campestris pv. campestris were observed for all Xcv isolates. After sequencing of the 925-bp PCR product, high sequence homology between Xcv sequences and those from X. axonopodis citri and X. campestris pv. campestris was observed, thus confirming the presence of the copA gene in Xcv. The phylogenetic analysis showed a closer relationship between Xcv and X. axonopodis pv. citri than with X. oryzae pv. oryzae or X. campestris pv. campestris. This suggests a closer proximity with the species X. axonopodis than with X. campestris, confirming the observations of Takita et al. (2004) when analyzing the rpf gene region.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-29T18:28:40Z No. of bitstreams: 1 2009_LeandroNogueiraRamos.pdf: 1947338 bytes, checksum: b0d1d970d899c30989e722fb6a263700 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-04-06T19:43:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_LeandroNogueiraRamos.pdf: 1947338 bytes, checksum: b0d1d970d899c30989e722fb6a263700 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-04-06T19:43:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_LeandroNogueiraRamos.pdf: 1947338 bytes, checksum: b0d1d970d899c30989e722fb6a263700 (MD5) Previous issue date: 2009 / O arroz (Oryza sativa L.) é um dos principais cereais cultivados no Brasil, desempenhando um papel social e econômico de grande importância para as mais diversas regiões do país. Esse cereal é conduzido no Brasil sob dois principais sistemas de cultivo, o irrigado, tipicamente utilizado nos estados da região Sul do país e o de sequeiro, tradicional na abertura de novas áreas e nas regiões Centro, Norte e Nordeste do Brasil. Para cada sistema de cultivo são utilizados grupos de cultivares adaptadas a condições específicas, principalmente quanto ao fornecimento de água. (sem parágrafo) A brusone, causada pelo fungo Pyricularia grisea (Cooke) Sacc. cuja fase teleomórfica corresponde a Magnaporthe grisea (Barr), é um dos principais fatores limitantes para a cultura do arroz no Brasil e no mundo. O controle é feito, principalmente, pelo uso de cultivares resistentes e fungidas. No entanto, o controle químico através de fungicidas específicos, além de elevar o custo de produção do cereal, causa vários danos ao meio ambiente, e deve ser utilizado integrado a outras técnicas de manejo. Programas de melhoramento genético de arroz são conduzidos no país por diferentes instituições, gerando, a cada ano, novas cultivares de arroz com resistência vertical a brusone. A estreita base genética dos programas de melhoramento tem contribuído para a quebra de resistência das novas cultivares lançadas por estes programas em apenas 1 ou 2 anos após o lançamento, especialmente no Estado do Tocantins. Quebras de resistência em período tão curto apontam para a necessidade busca de fontes de resistência duráveis à brusone, especialmente nas regiões tropicais de cultivo de arroz, onde a variabilidade genética do patógeno é alta. Para tanto, é de suma importância o conhecimento sobre as populações do patógeno e de suas interações com as plantas hospedeiras. O conhecimento mais aprofundado das características das populações de Magnaporthe grisea da região Centro-Norte do Brasil é condição fundamental na orientação dos programas de melhoramento do hospedeiro. O patossistema arroz/brusone é estudado há muito tempo em várias partes do mundo. Porém, no Brasil ainda foi pouco explorado, havendo necessidade de pesquisas em regiões com alto potencial produtivo, como os Estados do Pará, Rondônia, Acre, Tocantins e Maranhão, especialmente em virtude da expansão da fronteira agrícola do arroz de sequeiro. Objetivou-se, a partir do presente trabalho, identificar a estabilidade da cultivar Oryzica Llanos 5 (modelo de cultivar com resistência durável, oriunda da Colômbia) quando inoculada com isolados de M. grisea coletados na região Centro-Norte do Brasil, mediante avaliações de parâmetros epidemiológicos como período de incubação, latência, severidade e agressividade da doença. Além disso, objetivou-se detectar, a partir de estudos moleculares, a variabilidade genética e a estrutura populacional de isolados coletados no Tocantins, Goiás e Pará. No capítulo 1 desta dissertação descreve-se a ocorrência de isolados de M. grisea, coletados nos estados do Centro-Norte do Brasil, capazes de quebrar a resistência genética na cultivar Oryzica Llanos 5, padrão de resistência à doença, e examinam-se possíveis interações entre a virulência a esta cultivar e alguns parâmetros monocíclicos das epidemias de brusone. Para tanto, foram avaliados 35 isolados monospóricos de M. grisea obtidos nos municípios de Lagoa da Confusão, Dueré, Formoso do Araguaia (Tocantins), Luiz Alves do Araguaia (Goiás) e Paragominas (Pará). Objetivando-se a quantificação do desenvolvimento micelial dos isolados in vitro, calculou-se, a cada 3 dias, a área da colônia, a partir da qual obteve-se a área sob a curva de crescimento micelial (ASCCM) para cada um dos isolados. Os parâmetros epidemiológicos (período de incubação, período de latência, severidade da doença e área sob a curva de progresso da doença ASCPD), foram determinados em casa de vegetação, para todos os 35 isolados em três variedades de arroz (Caloro e Fanny suscetíveis; Oryzica Llanos 5 resistente). As plantas foram avaliadas a cada três dias através de análise visual baseada em uma escala de notas de sete classes (0, 1, 3, 4, 5, 7 e 9). No estudo in vitro, houve diferença significativa (p0,05) da ASCCM entre os isolados, independente do local de coleta. Nos experimentos de casa de vegetação, o período de incubação nas cultivares suscetíveis variou entre 1,00 dia (isolado F-2) e 5,75 dias (isolado LA-2) em Caloro; e entre 1,00 dia (isolado F- 2) e 6,25 dias (isolado LA-2) em Fanny. Quando os isolados monospóricos foram inoculados na cultivar resistente Oryzica Llanos 5, observou-se que 34% dos isolados estudados apresentaram quebra de resistência (F-1, F-2, F-5, F-9, F-10, LC-1, LC-2, LC-4, D-2, P-2 e P- 6). Os isolados que quebraram resistência apresentaram os menores períodos de incubação (ex. isolado D-1, 2,0 dias), enquanto que os isolados que não quebraram resistência apresentaram os maiores períodos de incubação (ex. isolado LA-2, 6,25 dias). Isolados que quebraram resistência apresentaram também o menor período de latência. Observou-se forte correlação positiva entre a severidade da doença aos 6, 9 e 12 DAI e a ASCPD, e uma significativa correlação negativa entre período de incubação ou de latência e a ASCPD. As ASCPDs nas cultivares suscetíveis foram maiores que no padrão de resistência. É importante ressaltar a quebra de resistência genética da cultivar Oryzica Llanos 5, até o momento considerada como padrão de resistência, por isolados de M. grisea coletados no Centro-Norte do Brasil. O resultado desses estudos demonstra claramente a alta diversidade genética do patógeno nesta região. No capítulo 2, objetivou-se identificar a diversidade genética e a estrutura de população de isolados monospóricos coletados em lavouras comerciais de arroz nos Estados de Tocantins, Goiás e Pará. Para tanto, conduziram-se ensaios na Embrapa-CENARGEN, onde foram avaliados 140 isolados monospóricos de M. grisea obtidos nos municípios de Lagoa da Confusão, Dueré e Formoso do Araguaia (Tocantins), Luiz Alves do Araguaia (Goiás) e Paragominas (Pará). Neste estudo, 34 marcadores microssatélites marcados com fluorocromo foram utilizados para a genotipagem automática em sequenciador de DNA. Quatorze marcadores microssatélites mostraram-se altamente eficientes para estimar a diversidade genética e detectar estruturação em população de isolados monospóricos de M. grisea. Alguns deles apresentaram um conteúdo informativo elevado, facilitando a genotipagem em escala e propiciando alta eficiência na análise de polimorfismo de DNA. A média do número de alelos por loco foi 6,35, variando de 2 alelos para os marcadores ms 109 - 110, ms 115 - 116, ms 61 - 62 a 16 alelos para o marcador PG 27. Os índices de diversidade genética (DG), conteúdo polimórfico informativo (PIC) e probabilidade de identidade (PI), confirmaram a eficiência destes marcadores. A população de isolados de M. grisea do Centro Norte do Brasil apresentou substruturação em três sub-populações (K=3). Os isolados de Goiás (Luiz Alves) em sua maioria foram observados no Grupo 1, os isolados de Tocantins (Formoso, Dueré e Lagoa da Confusão) em sua maioria foram observados no Grupo 2 e os isolados do Pará (Paragominas) foram observados no Grupo 3. Os isolados do Pará são os mais distantes geneticamente em relação aos isolados de Goiás e Tocantins. A alta diversidade genética observada na metapopulação de M. grisea do Centro-Norte brasileiro, assim como a evidência de estruturação, sugerem a necessidade de monitoramento específico e emprego de estratégias adequadas pelos programas de melhoramento genético para as sub-populações detectadas. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Rice (Oryza sativa L.) is one of the main cereals cultivated in Brazil, carrying an important social and economical role in several geographical regions. Rice is cultivated in Brazil in two main cropping systems, irrigated, typical of the Southern region and dry land (sequeiro), tradicionally used for opening new areas in the Center, Northern and Northeastern parts of Brazil. For each cultivation system, a group of cultivars, especially adapted to each condition, are used. Rice blast, caused by the fungus Pyricularia grisea (Cooke) Sacc. teleomorph Magnaporthe grisea (Barr), is one of the main limiting factors to rice production in Brazil and elsewhere. Control is mainly by a combination of resistant cultivars and fungicides. However, the use of fungicides increases production costs and may be damaging to the environment, and should be used integrated with other disease management techniques. Several rice breeding programs are conducted in Brazil by a number of different research institutions, every year offering new rice cultivars with vertical resistance to blast to growers. Unfortunately, the narrow genetic basis of the breeding programs has contributed to resistance breakdown of these new rice cultivars just 1 or 2 years after release, as has been observed in the State of Tocantins. Resistance breakdown in such a short period of time points towards the need to find and select durable sources of resistance, especially in the tropical regions, where genetic variability of the pathogen is seemingly very high. However, before beginning the search of sources of host resistance, knowledge of the pathogen population variability is very important, as well as of its interactions with its plant host. Deeper knowledge of the populations of Magnaporthe grisea from Central-North Brazil is a fundamental condition for the orientation of rice breeding programs. The rice blast pathosystem has been studied for some time in other geographic regions, but is still hardly explored in Brazil. Therefore, there is a pressing need to conduct prospective diversity research of the pathogen in regions with high yielding potential, such as the States of Pará, Rondônia, Acre, Tocantins and Maranhão, especially taking into account the expansion of dry land rice. This study aimed to describe the stability of rice cultivar Oryzica Llanos 5 (standard of durable resistance, originated in Colômbia) when inoculated with M. grisea isolates of collected in the Center-Northern Brazil, by estimations of epidemiological parameters, such as period of incubation, latent period, severity and pathogen aggressiveness. In addition, the genetic variability and the populational structure of M. grisea isolates collected in the States of Tocantins, Goiás and Pará were examined by molecular studies. Chapter 1 describes the discovery of isolates of M. grisea from the States of Tocantins (TO), Goiás (GO) and Pará (PA), capable of breaking the resistance of cv. Oryzica Llanos 5, the standard of genetic resistance to rice blast, and examines possible interactions between virulence and some monocyclic components of rice blast epidemics. Towards that end, thirtyfive monosporic isolates of M. grisea from the counties of Lagoa da Confusão, Dueré, Formoso do Araguaia (TO), Luiz Alves do Araguaia (GO) and Paragominas (PA) were studied. Radial mycelial growth was determined in vitro, every third day, and the area under the curve of mycelial growth (AUCMG) of each isolate was compared. Epidemiological parameters (period of incubation, latent period, disease severity and the area under disease progress curve AUDPC) were estimated in the greenhouse, for each of the thirty-four isolates in three rice cultivars (Caloro and Fanny susceptible; Oryzica Llanos 5 resistant). Plants were evaluated visually every third day, with the aid of a diagrammatic scale of seven classes (0, 1, 3, 4, 5, 7 and 9). In the in vitro study, the AUCMG was significantly different among isolates (p0,05), irrespective of geographical origin. Period of incubation in susceptible cultivars varied from 1.00 day (isolate F-2) to 5.75 days (isolate LA-2) on Caloro; and between 1.00 day (isolate F-2) to 6.25 days (isolate LA-2) on Fanny. When the monosporic isolates were inoculated on resistant cv. Oryzica Llanos 5, 34% broke its resistance (F-1, F-2, F-5, F-9, F-10, LC-1, LC-2, LC-4, D-2, P-2 e P-6). The isolates that broke Oryzica Llanos 5 resistance also had the shortest incubation periods (e.g. isolate D-1, 2.0 days), while the isolates that did not show resistance breakdown, generally had the longest incubation periods (e.g. isolate LA-2, 6.25 days). Isolates virulent on Oryzica Llanos also had the shortest latent periods. A significant and positive correlation was observed between disease severity at 6, 9 and 12 days after inoculation and the AUDPC, and a significant and negative correlation was generally observed between period of incubation or latent period and the AUDPC. The AUDPCs of susceptible cultivars were larger than in the resistant cultivar. The resistance breakdown of cv. Oryzica Llanos 5, so far the resistant standard, by isolates of M. grisea from the Brazilian Central-North region is reported here for the first time and is a clear indication of the high genetic diversity of the pathogen in this region, which therefore poses a great threat to rice production in Brazil. In chapter 2, monosporic isolates collected at commercial rice farming at the states of Tocantins, Goiás and Pará were examined for genetic diversity and population structure. In order to examine the diversity, essays were conducted at Embrapa-CENARGEN, where 140 M. grisea monosporic isolates obtained from the counties of Lagoa da Confusão, Dueré and Formoso do Araguaia (Tocantins), Luiz Alves do Araguaia (Goiás) and Paragominas (Pará) were evaluated. For this study, 34 microsatelite markers marked with fluorochrome were used for automatic genotyping in DNA sequencing. Fourteen microsatelites markers appeared highly efficient to estimate genetic diversity and to detect structuration in the M. grisea metapopulation from Central-North Brazil. Some of them had high informative content, facilitating genotyping in scale and DNA polymorphism analysis. The medium number of alleles per loco was 6.35, varying from 2 alleles by markers ms 109 110, ms 115 - 116, ms 61 62 to 16 alleles by marker PG 27. Genetic diversity index (GD), informative polymorphic content (IPC) and identity portability (IP), confirmed these markers efficiency. M. grisea metapopulation from Central-North Brazil was substructured in three sub-populations (K=3). Goiás (Luiz Alves) isolates were mostly observed in Group 1, Tocantins (Formoso, Dueré and Lagoa da Confusão) isolates were mainly observed in Group 2 and Pará (Paragominas) isolates were all observed in Group 3. Group 3 isolates (Pará) were the most genetically distant in relation to isolates of Goiás and Tocantins. The high genetic diversity observed in the M. grisea metapopulation, as well as the evidence of populational sub-structures, suggest the need of specific monitoring and the use of adequate strategies by genetic improvement programs to each of the sub-populations identified.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2009. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-06-02T18:47:05Z No. of bitstreams: 1 2009_AngelaSathikoKudo.pdf: 689847 bytes, checksum: e807c36cd632ca13f6a343e5a20aa7bf (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-07-01T15:59:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_AngelaSathikoKudo.pdf: 689847 bytes, checksum: e807c36cd632ca13f6a343e5a20aa7bf (MD5) / Made available in DSpace on 2010-07-01T15:59:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_AngelaSathikoKudo.pdf: 689847 bytes, checksum: e807c36cd632ca13f6a343e5a20aa7bf (MD5) Previous issue date: 2009 / O crestamento foliar de cercospora (Cercospora kikuchii) e a mancha olho-de-rã (C. sojina) são duas importantes doenças da soja. Devido à alta variabilidade apresentada pelos dois patógenos, a busca constante por novas fontes de resistência por métodos de controle eficientes se faz necessária. Assim, este trabalho, subdividido em cinco capítulos, teve como objetivos gerais: (a) a avaliação da reação de genótipos de soja às duas doenças; (b) o efeito de aplicações de fungicidas no controle destas; e (c) o monitoramento da quantidade aérea de conídios de C. kikuchii presentes no ar. Os capítulos 1 e 2 tiveram como objetivos específicos a reação de genótipos de soja convencional e transgênica (Roundup Ready) ao crestamento foliar e à mancha olho-de-rã, respectivamente, e o efeito da aplicação de fungicidas sobre as duas doenças em campo. Para isso foram realizados sete experimentos nas safras de 2005/06, 2006/07 e 2007/08, e foram avaliados 116 genótipos quanto a reação às doenças. Nos capítulos 3 e 4 os trabalhos tiveram como objetivos específicos a avaliação de concentrações de inóculo, a virulência de isolados e a reação de genótipos de soja em condições de casa de vegetação a C. kikuchii e a C. sojina, respectivamente. No capítulo 5 o objetivo específico foi a quantificação de conídios de C. kikuchii e sua relação com a intensidade da doença e com os fatores climáticos temperatura, umidade relativa do ar (UR), precipitação e molhamento foliar em dois períodos de safra. Para tanto, foi instalada uma armadilha coletora de esporos Burkard de sete dias e uma estação meteorológica em campo experimental com soja. No capítulo 1 houve diferença significativa entre genótipos quanto a incidência em folíolos (INC) de crestamento foliar nos experimentos 1 e 2, e quanto a porcentagem de área foliar lesionada (AFL) e área abaixo da curva de progresso da doença (AACPD) no experimento 7. Nos experimentos 3, 4, 5 e 6 não houve diferença significativa entre os genótipos. No experimento 7, duas ou três aplicações de fungicida (tetraconazole) reduziram a doença. A severidade do crestamento no diversos experimentos foi baixa (AFL 0 a 1,5%), mas é interessante informar que os genótipos convencionais GT04-7439 e GT04-8114 (experimentos 1 e 4) apresentaram pouco ou não apresentaram sintomas aparentes da doença no campo. No capítulo 2 houve diferença entre genótipos no experimento 1 nas variáveis AFL, INC, NLF (número de lesões por folíolo) e AACPD, com destaque para o genótipo GT04-7470, que apresentou os menores níveis de mancha olho-de-rã. No experimento 2 houve diferença entre genótipos quanto a INC e NLF. Os genótipos GT04-7310, GT04-7781, Msoy 8866 (experimento 3) e GT04-7606 (experimento 4) não apresentaram sintomas. No experimento 6 houve diferença entre genótipos quanto a NLF, e Msoy 8787 RR apresentou os menores níveis de doença. Não houve diferença entre genótipos nos experimentos 5 e 7. Nos experimentos 3, 4, 6 e 7 os tratamentos com fungicida não diferiram entre si, embora o tratamento com três aplicações (experimento 7) tenha diferido da testemunha (sem aplicação). A intensidade da doença em todos os experimentos foi baixa (AFL inferior a 1%), indicando que os genótipos avaliados apresentaram resistência à mancha olho-de-rã. No capítulo 3 houve diferença entre as concentrações de inóculo de C. kikuchii testadas, e foi selecionada a concentração 10g de micélio/100mL. No teste de virulência houve diferença entre isolados quanto a AFL e INC (Cerc 211 e Cerc 212 mais virulentos) quando inoculados na variedade Emgopa 313, embora todos os isolados tenham apresentado algum grau de virulência. Houve diferença de reação entre os 10 genótipos nos experimentos 1 e 2 de acordo com o isolado inoculado. A variação de AFL foi de 0,231 a 1,275%, e de INC foi de 3,078 e 37,028%. No capítulo 4 houve diferença significativa entre as concentrações de inóculo testadas, e foi selecionada a concentração de 105 conídios/mL. Também houve diferença significativa entre os isolados de C. sojina no teste de virulência quanto a AFL e INC e NLF. Os isolados Cerc 214 (raça 15), Cerc 210 (raça 4) e Cerc 217 (raça 24) foram os mais virulentos quanto na AFL, INC e NLF. Houve diferença significativa entre genótipos nos experimentos 1 e 2 sobre reação de genótipos à mancha olho-de-rã nas quatro variáveis. O genótipo GT04-8901 foi o que apresentou maior resistência e diferiu significativamente de Msoy 8001, que apresentou menor resistência à ação dos isolados das raças 15 e 4 nos dois experimentos. A AFL dos 10 genótipos foi inferior a 1% nos experimentos realizados. No capítulo 5 houve maior concentração de captura de conídios no período diurno, com mais de 60% dos esporos coletados entre 8 e 15h nas duas safras. Os dados climáticos variaram de acordo com a safra, mas de modo geral em ambos os experimentos o período de maior coleta de esporos ocorreu quando houve redução da precipitação e do molhamento foliar. A UR acima de 80% e temperatura entre 20 e 24ºC foram mais favoráveis para captura de conídios e intensidade do crestamento foliar. Nos dois anos de avaliação a maior quantidade de esporos capturados ocorreu quando as plantas se apresentavam no estádio R6-R7, assim como a intensidade da doença foi maior após o início do estágio reprodutivo da soja. Apesar da quantidade de conídios capturados na safra 2006/07 ter sido maior que na safra seguinte, a variação da flutuação de destes durante o ciclo da cultura ocorreu de modo semelhante. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The cercospora leaf blight and the frogeye leaf spot are two important diseases of soybean culture. Due to the high variability of both pathogens, the search for new sources of resistance and for efficient control methods is necessary. Therefore, this work, divided into five chapters, had as general objectives: (a) the evaluation of soybean genotypes reaction to both diseases; (b) the effect of fungicide treatments on control of the diseases; and (c) the monitoring of airborne spores of C. kikuchii. On chapters 1 and 2 the specific objectives were the evaluation of the reaction of soybean genotypes (conventional and transgenic – Roundup Ready) to cercospora leaf blight and to frogeye leaf spot, respectively, and the effect of fungicide applications on the diseases in field conditions. For these purposes, seven experiments were conducted during the crop periods of 2005/06, 2006/07 and 2007/08, and a total of 116 genotypes was evaluated. On chapters 3 and 4 the studies had as specific objectives the evaluation of inoculum concentrations, the virulence of isolates and the reaction of soybean genotypes under greenhouse conditions to C. kikuchii and C. sojina, respectively. On chapter 5 the specific objective of the study was the quantification of spores of C. kikuchii and its relation to the disease intensity and to the environmental factors temperature, relative air humidity (RH), precipitation and leaf wetness period in two crop periods. To quantify the airborne conidia, a Burkard’s seven-day volumetric spore trap and a weather station were set in an experimental field with soybean culture. On chapter 1 there was significant difference among genotype reactions for the variable INC (% of foliar incidence) in the experiments 1 and 2, and for the variables AFL (% of foliar diseased area) and AUDPC (Area under the disease progress curve) in the experiment 7. On experiments 3, 4, 5 and 6 there were no significant differences among the genotypes. The cercospora leaf blight intensity was low on the experiments (AFL 0 to 1.5%), but it is interesting to report that GT04-7439 GT04-8114 (experiments 1 and 4) presented less or did not present any apparent disease symptoms. On chapter 2 there was difference among genotypes in experiment 1 using the variables AFL, INC, NLL (number of lesions by leaf) and AUDPC, and GT04-7470 showed lesser levels of frogeye leaf spot than the other genotypes. In the experiment 2 difference among genotypes was observed in INC and NLL. The genotypes GT04-7310, GT04- 7781, Msoy 8866 (experiment 3) and GT04-7606 (experiment 4) did not show any symptoms. On experiment 6 the genotypes differed among each other using NLL, and Msoy 8787 RR showed the lowest levels of disease. There was no differences among genotypes on experiments 5 and 7. On experiments 3, 4, 6 and 7 the fungicide treatments did not show difference among each other, although the three application treatment (experiment 7) was different from control (no fungicide). The disease intensity in all experiments was considered low (AFL under 1%), which may indicate that the genotypes showed resistance to the frogeye leaf spot. On chapter 3 there was difference among inoculums concentrations, and the 10g of mycelium/100mL was selected. In the virulence assay difference among isolates was verified in AFL and INC (Cerc 211 and Cerc 212 more virulent) when isolates were inoculated in the cultivar Emgopa 313, although all isolates showed some virulence degree. There was difference among the 10 genotypes reactions in the trials 1 and 2 to the isolates inoculated. The AFL variation was of 0,231 to 1,275% and INC variation was of 3,078 to 37,028%. On chapter 4 there was difference between the inoculums concentrations, and it was selected the concentration of 105 conidia/mL. There was significant difference among all C. sojina isolates on the virulence trial on the variables AFL, INC and NLF. The isolates Cerc 214 (race 15), Cerc 210 (race 4) and Cerc 217 (race 24) were the most virulent using the variables AFL, INC and NLF. To evaluate the reaction of genotypes to C. sojina, it was carried out two trials. There was significant difference among genotypes on experiments 1 and 2 to all four variables and on both isolates (Cerc 214 and Cerc 210). Genotype GT04-8901 showed lower levels of the disease and differed significantly from Msoy 8001, which showed more symptoms caused by isolates of races 15 and 4 in both trials. AFL of 10 genotypes was under 1%. On chapter 5 it was verified that most of the conidia were collected during the day, with over 60% of the spores collected between 8 and 15h in both crop periods. Climatic data varied according to the crop period, but in general in both experiments the major collection of spores occurred with reduction of precipitation and leaf wetness period. RH above 80% and temperature between 20 and 24ºC were more favorable to capture of conidia and disease intensity. In the two years of evaluation the major amount of spores were collected when plant stage was R6-R7, as well as disease intensity increased after beginning of reproductive stage of soybean. Although the number of captured conidia in the 2006/07 crop period was higher than the next year, the variation of fluctuation of spores during culture cicle occurred similarly.

Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2006. / Submitted by Mariana Fonseca Xavier Nunes (nanarteira@hotmail.com) on 2010-09-26T00:53:13Z No. of bitstreams: 1 2006-Reinaldo Jos+® de Miranda Filho.pdf: 1584391 bytes, checksum: 9b6a7c2c28be958f4c5d0329ca9425de (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-10-09T01:07:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006-Reinaldo Jos+® de Miranda Filho.pdf: 1584391 bytes, checksum: 9b6a7c2c28be958f4c5d0329ca9425de (MD5) / Made available in DSpace on 2010-10-09T01:07:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006-Reinaldo Jos+® de Miranda Filho.pdf: 1584391 bytes, checksum: 9b6a7c2c28be958f4c5d0329ca9425de (MD5) / Foram conduzidos dois experimentos em campo com o objetivo de avaliar a influência dos níveis de inóculo inicial de Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens na produção de feijão da cultivar Pérola. Os níveis de inóculo utilizados foram de 0%; 5%; 10%; 15%; 20%; 25% e 30% de plantas infectadas com C. flaccumfaciens pv. flaccumfaciens. A partir da suspensão 2 x 107 ufc/ml foram feitas inoculações, proporcionais para atingir a percentagem desejada, em plantas com dez dias de emergência. O primeiro experimento foi semeado em 12/11/2004 e colhido em 21/02/2005 denominado A, o segundo experimento foi semeado em 16/12/2004 e colhido em 23/03/2005 denominado B. Foram utilizados blocos inteiramente casualizados com três repetições, cada bloco continha sete tratamentos com 3 três repetições. Cada tratamento foi composto por três linhas de cinco metros com espaçamento de 0,5 m entre si e uma densidade de plantio de 12 sementes por metro linear. Os resultados foram analisados ao final do ciclo da cultura comparando a produtividade apresentada em cada nível de inóculo com a produtividade do controle (0% C. flaccumfaciens pv. flaccumfaciens). De acordo com os resultados obtidos no experimento A, foram constatadas as produções médias para cada tratamento de 1170,0 g; 1118,9 g; 1054,0 g; 1053,3 g; 1032,2 g; 976,7 g e 892,2 g para 0%; 5%; 10%; 15%; 20%; 25% e 30% de plantas infectadas, correspondendo uma redução de 0%; 4,4%; 5%; 9,9%; 11,8%; 16,6% e 23,8% respectivamente. No experimento B foram constatadas as produções médias para cada tratamento de 658,9 g; 581,1 g; 515,5 g; 492,2 g; 462,2 g; 417,8 g; 351,1 g para as mesmas taxas de infecção anteriores e com redução de produção da ordem de 11,8%; 21,8%; 25,30%; 29,98%; 36,6% e 46,7% respectivamente. 7 Levantamentos realizados nos anos de 2004 e 2005 em cultivos comerciais no Distrito Federal (PAD DF), Goiás (Cabeceiras) e Minas Gerais (Buritis) em um raio de ação de aproximadamente 200 km de Brasília foi constatada a presença da bactéria em 100% das propriedades visitadas. Dois experimentos (B1 e B2) foram realizados em casa de vegetação utilizando sementes coletadas em lavoura de feijão contaminadas com C. flaccumfaciens pv. flaccumfaciens com o objetivo de se avaliar a sanidade das mesmas ao longo de 60 dias, observou-se nos dois experimentos, respectivamente, 80,7% e 76,6% das plantas com algum tipo de sintoma causado por C. flaccumfaciens pv. flaccumfaciens. Avaliação da persistência e viabilidade de C. flaccumfaciens pv. flaccumfaciens em solo coletado em uma área de cultivo de feijão sob pivô central com ocorrência da murcha do feijoeiro e altos níveis de infecção indicou que, pelo menos durante dez meses, a bactéria se manteve viável e capaz de infectar as plantas do feijoeiro. Com base nos resultados é possível afirmar que a murcha de Curtobacterium está largamente disseminada na região do Distrito Federal e Entorno e pode causar perdas significativas de produtividade na cultura de feijão e persistir no solo e em restos de cultura por pelo menos dez meses. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Two experiments in the field were carried out to evaluate the influence of the initial inoculums levels of Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens in the production of bean of the cultivar Pérola. The levels of inocula utilized were of 0%; 5%; 10%; 15%; 20%; 25% and 30% of plants infected with C. flaccumfaciens pv. flaccumfaciens. From a suspension of 2 x 107 ufc/ml inoculations. Were made to reach the desired percentage of infection, in plants after ten days of emergency. The first experiment was sown on 12/11/2004 and harvested on 21/02/2005 named A; the second experiment was sown on 16/12/2004 and harvested on 23/03/2005 named B. It was utilized entirely randomized blocks with three repetitions, each block had seven treatments with three repetitions. Each treatment was composed of three lines of five meters with 0,5 m between them and a density of plantation of 12 seeds per linear meter. The results were analyzed at the end of the cycle of the culture, comparing the productivity presented in each level of inoculum with the productivity of the control (0% C. flaccumfaciens pv. flaccumfaciens). According to the results obtained in the experiment A, the average bean production for each treatment was 1170,0 g; 1118,9 g; 1054,0 g; 1053,3 g; 1032,2 g; 976,7 g; 892,2; for 0%; 5%; 10%; 15%; 20%; 25% and 30% of plants infected, corresponding a reduction of 0%; 4,4%; 5%; 9,9%; 11,8%; 16,6% and 23,8% respectively. In the experiment B the average bean production for each treatment was 658,9 g; 581,1 g; 515,5 g; 492,2 g; 462,2 g; 417,8 g; 351,1 g for the same rates of infection and with a reduction of 11,8%; 21,8%; 25,30%; 29,98%; 36,6% and 46,7% respectively. A survey was carried out in the years of 2004 and 2005 in commercial plantations in the Federal District (PAD DF), Goiás (Cabeceiras) and Minas Gerais 9 (Buritis) in a range of approximately 200 km from Brasilia, and the presence of the bacterium was detected in 100% of the visited farms. Two experiments (B1 and B2) were carried out in the greenhouse utilizing seeds from a bean field C. flaccumfaciens pv. Flaccumfaciens, with the objective of evaluate the sanity during 60 days. The experiments showed 80,7% and 76,6% respectively of the plants with some kind of symptom caused by Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens. Persistence and viability of C. flaccumfaciens pv. flaccumfaciens was evaluated in soil collected in a bean field area under central pivot with occurrence of high levels of infection bacterial wilt in and the results indicated that, at least during ten months, period of duration of the experiment, the bacterium remained viable and able to infect beans plants. Based on the results it is possible to affirm that the Curtobacterium wilt is widely disseminated in the region of the Federal District and vicinity, can cause significant losses of productivity in the culture of bean and persists in the soil and crop debris for at least ten months.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2010. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2011-04-14T13:09:02Z No. of bitstreams: 1 2010_DinaMarciaMenezesFerraz.pdf: 668889 bytes, checksum: 104f5f84e9ec5a1c9284441b717180cc (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2011-04-15T01:07:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_DinaMarciaMenezesFerraz.pdf: 668889 bytes, checksum: 104f5f84e9ec5a1c9284441b717180cc (MD5) / Made available in DSpace on 2011-04-15T01:07:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_DinaMarciaMenezesFerraz.pdf: 668889 bytes, checksum: 104f5f84e9ec5a1c9284441b717180cc (MD5) / A antracnose [Colletotrichum gloeosporioides (Penz). Sacc.] é um dos problemas mais importantes na pós-colheita de goiabas (Psidium guajava L.). O controle desta doença, na maioria das vezes, é feito com a aplicação de fungicidas. Visando reduzir o uso de fungicidas em pós-colheita de goiaba, avaliou-se o efeito de fosfitos, hidrotermia, cloreto de cálcio (CaCl2) e a combinação destes métodos sobre a antracnose e na perda de massa fresca (PMF), pH, sólidos solúveis totais (SST), acidez titulável (AT) e maturação dos frutos oriundos de produção convencional e orgânica. O patógeno foi isolado de frutos com antracnose oriundos de Brazlândia, DF, de onde também foram coletados os frutos para realização do estudo. Inicialmente, foi feita a assepsia dos frutos (Estágio de maturação 3-4) em álcool 10% por 1 minuto, seguido de hipoclorito de sódio 1,0% por 1 minuto e em água destilada e esterilizada por 1 minuto. Os frutos foram perfurados em três pontos eqüidistantes nos quais foram inoculados 50μl de suspensão 105 conídios/mL e mantidos em câmara úmida (24h; 23ºC; 12h de luz). Em seguida os tratamentos foram aplicados e os frutos foram mantidos em incubador (23ºC; 12h luz) por cinco a 10 dias. As avaliações foram feitas diariamente medindo-se o diâmetro das lesões, o grau de maturação e a freqüência de aparecimento de lesões naturais. Ao final das avaliações realizou-se a análise físico-química dos frutos (PMF, pH, SST, AT). Nos testes com fosfitos foram usados produtos nas doses recomendadas pelos fabricantes e o fungicida Carbendazim (Derosal 1mL p.c./L) imergindo os frutos nas soluções dos produtos por 20 minutos. O tratamento testemunha recebeu água destilada esterilizada por igual período. Os resultados obtidos demonstraram que o diâmetro das lesões obtidas na inoculação do patógeno em frutos de cultivo convencional foi reduzido com a aplicação dos fosfitos. E em fruto de cultivo orgânico a redução se deu com a aplicação do fosfito Zn e do fosfito K. O número de lesões naturais nos frutos de cultivo convencional inoculados foi reduzido com a aplicação dos fosfitos Mg, fosfito Zn e fosfito K. Já o número de lesões naturais em frutos de cultivo convencional não inoculado, foi menor naqueles tratados com o fosfito K, fosfito Zn e o fosfito Ca. No experimento em que se avaliou o fosfito K quanto ao diâmetro das lesões em frutos inoculados todas as doses testadas diferiram da testemunha em frutos de cultivo convencional e orgânico. O resultado apresentado com CaCl2 mostrou redução no diâmetro de lesões inoculadas com as doses de 1, 2 e 2,5% (cultivo convencional) e 1, 1,5 e 2,5% (cultivo orgânico). Com o tratamento hidrotérmico utilizando-se diferentes temperaturas a média do diâmetro das lesões inoculadas diferiu da testemunha em todos os tratamentos. O número de lesões naturais em cultivo orgânico foi reduzido em fruto tratado a 47º, 49° e 51ºC. No experimento envolvendo diferentes tempos de exposição, o tratamento com duração de 10 min (47ºC) mostrou-se mais eficiente no controle da doença. As características físico-químicas e o desenvolvimento fisiológico dos frutos foram afetados por alguns dos tratamentos. Tratamentos de frutos com fosfito, CaCl2 e hidrotérmico retardaram a maturação. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Anthracnose [Colletotrichum gloeosporioides (Penz). Sacc.] is one of the most important post-harvest diseases on guava fruits (Psidium guajava L.). Fungicides are constantly used to control this disease. Willing to reduce fungicide use on post-harvest fruits, the main objective of this study was the evaluation of phosphites, hot water, calcium chloride (CaCl2) and the combination of these methods on disease and on fruit quality [fresh mass loss (FML), pH, total of soluble solids (TSS), and titrable acidity (TA)] from conventional and organic system of production. The pathogen was isolated from infected field from Brazlândia/DF/Brazil, the same country, all experimental were harvested. Before the application of treatments in experiments, the fruit (stage 3-4 of maturation) were decontaminated in 10% alcohol (1 min), 1,0% sodium hypochlorite (1 min) and sterilized distilled water (1 min). The fruits were marked on three equidistant points in the median region and in the center of each mark an injury was made (2mm). Then, the fruits were inoculated (50μl of suspension 105 conidia / ml) and placed in humid chamber (23ºC; 24h; light 12h). Then, the treatments were applied and the fruit stored in incubator (23ºC; light 12h) for five to 10 days. Daily, the diameter of lesions, number of lesions and fruit maturity stage were evaluated. At the end of the evaluations, it was carried out a chemical and physical analysis of the fruits FML, TSS, pH, and TA. In the experiments performed with phosphite products the doses recommended by the manufacturers were applied: Phosphite Zn; Phosphite K; Phosphite Mg; Phosphite Ca and fungicide Carbendazim (Derosal 1mL/L). The fruits were dipped the in solutions of these products for 20minutes. Fruits used as test control were dipped in sterile distilled water for an equal period. Phosphite K was also tested in four doses (0.5; 1.0; 1.5; 2.0mL/L). In the tests with CaCl2, also, it was used four doses (1.0; 1.5; 2.0; 2.5%) of the product. Trials with hydrothermal treatments were performed in water at 43, 45, 47, 49 and 51°C (6 min), and for 2, 4, 6, 8 and 10 min (47°C). Combinations of methods were also tested: phosphite K, hydrothermal (47ºC/10min) and CaCl2 (2.0%). Results showed that when phosphites were applied the diameter of lesions, on conventional fruits, was smaller compared to control. In organic fruits the reduction on diameter occurred with applications of phosphite Zn and phosphite K. On inoculated conventional fruits the number of naturally occurring was reduced with application of phosphite Mg, phosphite Zn and phosphite K. Nevertheless, the number of naturally occurring lesions conventional non-inoculated fruits was reduced in fruits treated with phosphite K, posphite Zn and phosphite Ca. All tested doses of phosphite K reduced the diameter of lesions on conventional and organic fruits when compared to the non-treated control. Treatments with CaCl2 (1 to 2,5%) showed reduction on diameter of lesions. Hydrothermal treatments reduced the size of lesions when compared to non-treated control. The number of lesions was reduced with water at 47º, 49° and 51ºC. Ten minutes (47oC) in hot water was the best time to reduce disease on fruit. Some treatments modified the analyzed fruit quality properties. Fruit treatments with phosphite, CaCl2 and hot water retarded fruit maturation.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2011. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2012-03-30T14:58:08Z No. of bitstreams: 0 / Rejected by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br), reason: on 2012-03-30T15:50:43Z (GMT) / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2012-04-02T12:55:14Z No. of bitstreams: 1 2011_JessicaMataSantosMonteiro_Parcial.pdf: 4640261 bytes, checksum: 5d31f934882fee4d9f8a9c238b813383 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2012-04-17T15:55:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_JessicaMataSantosMonteiro_Parcial.pdf: 4640261 bytes, checksum: 5d31f934882fee4d9f8a9c238b813383 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-04-17T15:55:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_JessicaMataSantosMonteiro_Parcial.pdf: 4640261 bytes, checksum: 5d31f934882fee4d9f8a9c238b813383 (MD5) / A banana é a segunda fruta mais produzida no Brasil e corresponde a 15,7% de toda a fruta produzida no país, superado apenas pela laranja em 44,1%. É uma fruta de grande importância econômica e social no mundo inteiro e o Brasil é o quarto maior produtor mundial onde esta é cultivada do Norte ao Sul do país. Entre os principais fatores bióticos que afetam a produtividade da bananeira estão os fitonematoides, Radopholus similis, Meloidogyne incognita, M. javanica, M. arenaria, Helicotylenchus multicinctus, Rotylenchulus reniformis e Pratylenchus coffeae, sendo o nematoide cavernícola (Radopholus similis) considerado o mais nocivo. O parasitismo desses nematoides causa perdas diretas (danos na planta e redução da produtividade) e indiretas (aumento de gastos com insumos, mão de obra e fertilizantes). O manejo desses nematoides através da aplicação de nematicidas tem se tornado uma prática cada vez mais prejudicial não só ao ambiente e ao homem, como ineficaz e não proporciona ao longo do tempo uma erradicação completa desses organismos. A resistência genética é entre todas as medidas de controle a mais viável de controle dos nematoides. Vários genótipos de bananeira têm sido introduzidos e/ou desenvolvidos no Brasil pelo Programa de Melhoramento da Embrapa Mandioca e Fruticultura, em Cruz das Almas, Bahia. Avaliações em campo desses genótipos quanto à incidência e severidade das doenças fúngicas e bacterianas de importância para a cultura têm sido realizadas, entretanto, para os nematoides fitoparasitas tais informações são inexistentes, sobretudo sobre resistência a R. similis. Com base no exposto, este estudo teve por objetivos detectar e identificar a associação em campo, de fitonematoides com diferentes genótipos de Musa triploides (AAA e AAB) e tetraploides (AAAA e AAAB) melhorados e/ou recomendados, cultivados em cinco áreas experimentais do Programa de Melhoramento de Banana da Embrapa Mandioca e Fruticultura, localizadas nas regiões geográficas do Brasil: Norte (Acre), Nordeste (Pernambuco), Centro Oeste (Distrito Federal), Sudeste (São Paulo) e Sul (Santa Catarina) e; avaliar em casa de vegetação o comportamento de 22 genótipos triploides e tetraploides introduzidos e/ou melhorados pela Embrapa Mandioca e Fruticultura frente a R. similis. Para detecção e identificação de fitonematoides em associação com raízes e solo de bananeiras, foram amostrados solos e raízes de cerca de 25 genótipos de cada região, sendo as amostras de raízes divididas em duas partes de 250 g, sendo uma delas trituradas e inoculadas em tomateiros „Santa Cruz„, com o objetivo de multiplicar as espécies de Meloidogyne presentes nas mesmas com base nos perfis de esterase. A outra parte, assim como o solo, foram submetidos à extração. Os nematoides foram mortos e fixados, para posterior preparo de lâminas semipermanentes e identificação do gênero e espécies presentes nas amostras. Para avaliação do comportamento dos genótipos em casa de vegetação, mudas micropropagadas de 22 genótipos aclimatadas em casa de vegetação durante dois meses foram inoculadas com uma suspensão de 300 nematoides (juvenis e adultos)/planta, distribuídas em experimento inteiramente casualizado com 4 repetições. Sessenta dias após a inoculação, foram avaliadas quanto ao número de nematoides nas raízes e no solo, sendo determinado o fator de reprodução (FR=Pf/Pi). O genótipo que permitiu a maior multiplicação dos nematoides, foi considerado padrão de suscetibilidade. Com base na percentagem de redução do fator de reprodução em relação ao padrão de suscetibilidade, foi feita a classificação da reação de resistência. Também foi realizada uma análise prévia dos perfis proteicos de quatro genótipos contrastantes. Observou-se a predominância de Meloidogyne javanica e M. incognita na maioria dos genótipos de todas as áreas amostradas, seguidos de Helicotylenchus spp., Rotylenchulus reniformis, Radopholus similis, Scutellonema sp. e Criconemoides sp. Os resultados do ensaio de resistência destacaram as cultivares Enxerto 33, Thap Maeo, Calypso, Caipira, Tropical e Maçã como moderadamente resistentes, ao contrario das cultivares Preciosa, Maravilha e Prata Anã, classificadas como altamente suscetíveis. As demais cultivares comportaram-se como suscetíveis. Análise de proteína de raízes por SDS-PAGE mostraram diferenças entre o perfil proteico de cultivares moderadamente resistentes e suscetíveis. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Banana is the second fruit most produced in Brazil, accounting for 15.7% of all fruit produced in the country, surpassed only by orange with 44.1%. It is a fruit of great economic and social importance worldwide, and Brazil is the fourth largest world producer, where it is cultivated from North through South. Among major biotic factors affecting yield of banana, are the nematodes Radopholus similis, Meloidogyne incognita, M. javanica, M. arenaria, Helicotylenchus multicinctus, Rotylenchulus reniformis and Pratylenchus coffeae, and the burrowing nematode (R. similis) is considered the most damaging to banana. Parasitism of nematodes leads to direct (plant damage and decreased yield) and indirect losses (increased spending on supplies, labor and fertilizer). The management of these nematodes through the application of nematicides has become a practice increasingly harmful not only for the environment and man, as ineffective to provide over time a complete eradication of these organisms. Genetic resistance is among all measures the most feasible to control of plant-parasitic nematodes. Several genotypes of banana have been introduced and/or developed in Brazil by The Banana Breeding Program of Embrapa Mandioca e Fruticultura, in Cruz das Almas, Bahia. Evaluation under field conditions of these genotypes on the incidence and severity of fungal and bacterial infections of importance to the culture have been carried out, however, for plant-parasites nematodes, information are not available, especially on resistance to R. similis. Based on the foregoing, this study aimed to detect and identify field association of nematodes with different triploid (AAA and AAB) and tetraploid (AAAB and AAAA) genotypes of Musa, developed and/or recommended, for growing in five experimental areas of the Banana Breeding Program of Embrapa Mandioca e Fruticultura, located in five geographic regions of Brazil: Northern (State of Acre), Northeast (State of Pernambuco), Central west (Distrito Federal), Southeast (State of São Paulo) and South (State of Santa Catarina); and, to assess under greenhouse conditions resistance reaction of 22 triploid and tetraploid genotypes introduced and/or developed by Embrapa Mandioca e Fruticultura to R. similis. For detection of nematodes associated with banana roots and rhizosphere soils of approximately 25 genotypes had been sampled in each region, and the root samples divided into two parts of 250 g each, one of them was crushed and inoculated on tomato plants „Santa Cruz‟ in order to increase the number of specimens of Meloidogyne spp. present in the same genotype to be identified by using profiles of esterase. The second part of roots, and the soil sample were submitted to extraction of nematodes, and the nematodes were gently killed and fixed for subsequent preparation of semi-permanent slides for identification at genus and species levels, of all plant parasitic nematodes detected. To evaluate the resistance reaction of banana genotypes under greenhouse, plantlets of 22 genotypes acclimated in a greenhouse during two months were inoculated with a suspension of 300 nematodes (juveniles and adults) / plant, distributed in completely randomized design with four replications. Sixty days after inoculation, the plants were removed form soil, and the experiment evaluated on the number of nematodes in roots and soil, and determined the reproduction factor (RF = Pf / Pi), and based on the percentage reduction of the factor of reproduction in relation to the most susceptible genotype, the resistance reaction was ranked. Finally, there was a preliminary analysis of protein profiles of four contrasting genotypes. We observed a dominance of Meloidogyne javanica and M. incognita in most genotypes of all areas sampled, followed by Helicotylenchus spp., Rotylenchulus reniformis, Radopholus similis, Scutellonema sp. and Criconemoides sp. The results highlight cultivars Enxerto 33, Thap Maeo, Calypso, Caipira, and Tropical as moderately resistant to R. similis, unlike the cultivars Preciosa, Maravilha and Prata Anã, classified as highly susceptible. The other cultivars proved to be susceptible. Analysis of root proteins by SDS-PAGE showed differences between the protein profile of moderately resistant and susceptible cultivars.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-09-25T14:21:10Z No. of bitstreams: 1 2013_MagnoRodriguesdeCarvalhoFilho.pdf: 3266869 bytes, checksum: af4ff8325e1cec5ab19c33e4b2982369 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2013-10-03T13:11:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_MagnoRodriguesdeCarvalhoFilho.pdf: 3266869 bytes, checksum: af4ff8325e1cec5ab19c33e4b2982369 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-03T13:11:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_MagnoRodriguesdeCarvalhoFilho.pdf: 3266869 bytes, checksum: af4ff8325e1cec5ab19c33e4b2982369 (MD5) / Trichoderma constitui um gênero de microfungos mundialmente distribuído na natureza. Nos solos, estão presentes como microorganismos de vida livre ou colonizando raízes de plantas. Podem também colonizar endofiticamente os tecidos vegetais, como simbiontes. Por apresentarem ação antagonista contra fitopatógenos, linhagens de diversas espécies desse gênero vem sendo estudadas como agentes de biocontrole de doenças de plantas, dentre as quais, o mofo branco, causado por Sclerotinia sclerotiorum, em diversas espécies vegetais. A caracterização molecular desse grupo de antagonistas tem grande importância, tanto em estudos de biodiversidade e distribuição das espécies, como na identificação de potenciais agentes de biocontrole, e de possíveis patógenos oportunistas a humanos, a exemplo de Trichoderma longibrachiatum. O objetivo desse trabalho foi identificar 148 isolados em nível de espécie, por sequenciamento das regiões ITS do DNA ribossomal e avaliar a biodiversidade desses isolados com referência à origem geográfica. Foi realizada seleção in vitro de isolados com potencial de biocontrole, os quais foram avaliados, em casa de vegetação, quanto à capacidade de supressão do mofo branco e como promotores de crescimento do feijoeiro. Os 29 isolados selecionados foram também submetidos à técnica de MALDI-TOF MS (Matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry), para confirmação das espécies, correlacionando esta técnica de identificação com a técnica molecular empregada. Filtrados de culturas do isolado CEN201, com potencial de inibição do crescimento micelial do patógeno supracitado, foram submetidos a técnicas de extração e purificação de metabólitos secundários. A capacidade de inibição do crescimento micelial de S. Sclerotiorum, por esses compostos, foi confirmada. No capítulo 1 são relatados resultados desses estudos, mostrando que 17,4% dos isolados apresentaram alto nível de antagonismos em pareamento de culturas e dois grupos apresentaram 83,3 a 88,9% de inibição micelial do patógeno por metabolitos não voláteis. Outro ponto ressaltado nesta pesquisa foi o índice de biodiversidade relativa aos 144 isolados de Trichoderma procedentes de sete estados brasileiros, que alcançou 0,076 com 11 espécies. Já o capítulo 2 relata a supressão do mofo branco com 19 dos 29 isolados selecionados in vitro no capítulo 1. Observou-se, também, promoção de crescimento de plantas de feijão com 7 isolados estudados. Foram ainda mostrados os resultados obtidos na identificação dos isolados por espectrometria de massa (MALDI-TOF MS). Esses resultados, confrontados com os dados obtidos na identificação molecular verificada no capítulo anterior, indicaram a convergência das duas técnicas, confirmando o potencial de MALDI-TOF MS como método rápido para identificação de espécies de Trichoderma. O capítulo 3 está focado nos estudos com metabólitos não voláteis produzidos pelo isolado CEN201 (T.asperellum). As técnicas utilizadas, Cromatografia líquida e MALDI-TOF MS possibilitaram, por homologia de massa/carga, inferir a presença de dois compostos com ação antibiótica, Asperelina B e Trichocompactina, no filtrado de culturas estudado. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Trichoderma composes a genus of microfungi distributed worldwide. In soil, these fungi may be present as free life or colonizing plant roots. Can also to colonize plant tissues endophytically like symbionts. Some species have been studied as biocontrol agents of plant diseases, among which, white mold caused by Sclerotinia sclerotiorum in several plant species. Their mechanisms of action include the production of secondary metabolites with antibiotic effect, mycoparasitism and competition for space and nutrients. The molecular characterization of this group of antagonists is very important, both in studies of biodiversity and species distribution and for identification of potential biocontrol agents, and possible opportunistic pathogens to humans like Trichoderma longibrachiatum. The aim of this study was to identify 148 the isolates of Trichoderma on species level by sequencing the ITS region of Ribossomal and to evaluate their biodiversity with reference to geographical originan. Was performed, in vitro, selection of isolates with potencial biocontrol, which were evaluated in greenhouse as the ability of white mold supression and as beans growth promoters. The 29 selected isolates were also subjected to the technique of MALDI-TOF MS (Matrix-assisted laser desorption / ionization-time of flight mass spectrometry) to confirm the species, correlating this technique in identification with molecular technique employed. Culture filtrates of isolate CEN 201, with potential to inhibit the mycelial growth of the pathogen above, were subjected to techniques of extraction and purification of secondary metabolites. The capacity of mycelial growth inhibition of S. Sclerotiorum by these compounds was confirmed. In chapter 1, are reported results of these studies showing that 17,4% of the isolates showed a high level of antagonism in pairing cultures and two groups showed 83,3 to 88,9% of inhibition of the pathogen by volatile metabolites. Another point emphasized in this study was the index of biodiversity on 144 Trichoderma isolates from seven Brazilian states, which reached 0,076 with 11 species. Already Chapter 2 reports the suppression of white mold with 19 of the 29 isolates selected in vitro in Chapter 1. It was observed, also, promote growth of bean plants with 7 isolates tested. Also shown are the results obtained by identification of the isolated mass spectrometry (MALDI-TOF MS). These results, compared with the data obtained in the molecular identification verified in the previous chapter showed the convergence of the two techniques, confirming the potential of MALDI-TOF MS as a rapid method for identification of Trichoderma species. The Chapter 3 is focused on studies of non-volatile metabolites produced by isolated CEN201 (T.asperellum). The techniques used, liquid chromatography and MALDI-TOF MS was enable, by homology mass/charge, to infer the presence of two compounds with antibiotic activity, Trichocompactin and Asperelin B in culture filtrates studied.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2010. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2011-04-19T13:46:22Z No. of bitstreams: 1 2010_NataliaLucinda.pdf: 1450579 bytes, checksum: c6ffe1b291f24b75bbf847a37c4df803 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2011-05-25T00:23:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_NataliaLucinda.pdf: 1450579 bytes, checksum: c6ffe1b291f24b75bbf847a37c4df803 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-05-25T00:23:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_NataliaLucinda.pdf: 1450579 bytes, checksum: c6ffe1b291f24b75bbf847a37c4df803 (MD5) / O vírus Brugmansia suaveolens mottle virus (BsMoV) foi isolado da solanácea Brugmansia suaveolens (conhecida como trombeteira, saia-branca) da coleção de plantas medicinais do Instituto Agronômico, Campinas-SP, Brasil, sendo o isolado nomeado Bs-Campinas. Um trabalho anterior mostrou que o isolado Bs-Campinas foi transmitido por afídeos, induziu sintomas visíveis em algumas solanáceas e em duas espécies de Chenopodium sob condições experimentais, apresentando partículas e inclusões típicas de potyvírus em folhas sintomáticas, quando observadas por microscopia eletrônica de transmissão. Apenas parte do genoma do vírus era conhecida, uma região compreendendo a extremidade 3‟, o que o distinguiu suficientemente dos outros vírus para ser classificado como uma espécie nova de potyvírus. O vírus apresenta características distintas de outros potyvírus conhecidos, induzindo uma alta severidade de sintomas em diversas plantas susceptíveis, além da capacidade de infectar o tomateiro, uma cultura de alta importância econômica e social no Brasil. Essas características o tornam um excelente alvo para estudo dos genes relacionados à patogenicidade e para o desenvolvimento futuro de vetores virais. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi realizar a caracterização molecular do isolado Bs-Campinas através da determinação de sua sequência genômica completa e determinar o seu relacionamento filogenético com os diferentes potyvírus já relatados no mundo. Para tanto, procedeu-se o emprego de várias técnicas para o completo resgate do genoma viral e posterior determinação de sua sequência. O RNA total foi extraído e o cDNA sintetizado foi obtido pela técnica de 3‟ RACE usando primers universais para potyvírus, resultando na amplificação de um fragmento de 8,3kb. A tentativa de clonagem deste fragmento, contudo, resultou em clones que apresentavam uma deleção interna neste fragmento. Dessa forma, o segundo fragmento obtido resultou da amplificação por RT-PCR utilizando-se primers específicos desenhados com base nas sequências das extremidades do fragmento de 8,3kb com o intuito de resgatar a região interna do genoma gerando um fragmento de aproximadamente 4,7kb. Primers específicos foram também desenhados baseados na sequência da extremidade 5‟ do clone de 8kb obtido e a estratégia 5‟ RACE foi usada para amplificar e clonar a extremidade 5‟ do genoma do vírus, um fragmento de 1,8kb. As amplificações por PCR resultaram no resgate de três fragmentos de cDNA, os quais totalizam a sequência completa do genoma do BsMoV. O RNA genômico consistiu de 9870 nt sem a cauda de poli-A, codificando uma poliproteína típica dos potyvírus de 3090 aa. As análises da sequência de aminoácidos possibilitaram a dedução dos sítios de clivagem, bem como, a identificação das sequências e motivos conservados dentro da sequência de cada proteína, tendo o isolado Bs-Campinas exibido perfil típico de potyvírus. As análises filogenéticas, assim como, comparações com outras espécies de Potyvirus do banco de dados online revelaram que esta sequência tem uma identidade nucleotídica de 63,7% com Pepper mottle virus (PepMoV), a qual foi a sequência de potyvírus de maior identidade e, portanto, o mais estreitamente relacionado. Uma vez que este valor de identidade é inferior ao limiar (76% de identidade nucleotídica) atualmente usado para discriminar espécies de Potyvirus, foi confirmado que Brugmansia suaveolens mottle virus representa uma nova espécie dentro do gênero Potyvirus. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Brugmansia suaveolens mottle virus (BsMoV) was isolated from a Brugmansia suaveolens plant (known as "angel trumpet") in the collection of medicinal plants of the Instituto Agronômico, Campinas-SP, Brazil, being the isolate named Bs-Campinas. A previous study showed that the isolate Bs- Campinas was transmitted by aphids and induced visible symptom on some Solanaceous plants and two Chenopodium species under the experimental conditions, showing typical potyvirus particles and inclusions in symptomatic leaves, when observed by transmission electron microscopy. Only part of the virus genome was known, a region comprising the 3' terminal region of the genome, which distinguished it sufficiently from other viruses to be classified as a new potvvirus species. The virus showed characteristics that were distinct from other known potyviruses, such as the high symptom severity in many plants and the ability to infect tomato plants, a crop of high economic and social importance in Brazil. These findings showed that it can be an excellent target for the study of genes related to pathogenicity and for the future development of viral vectors. Therefore, the objective of this study was the molecular characterization of the isolate Bs-Campinas through the determination of its complete genomic sequence and its phylogenetic analysis, when compared with different potyviruses previously reported in the world. For this purpose, some techniques were attempted to enable the rescue of the viral genome and subsequent determination of its sequence. Total RNA was extracted and cDNA synthesis was done by 3 'RACE using universal primers for potyviruses, resulting in the amplification of a fragment of ca. 8,3 kb. However, the cloning of this fragment resulted in clones that presented an internal deletion in this fragment. Therefore, a second fragment using specific primers designed based on the sequence ends of the deleted clones, was amplified by PCR and cloned in order to rescue inner region of the genome by generating a fragment of approximately 4.7 kb. Specific primers were also designed based on the 5‟ end region of the 8,3 kb clone to enable cloning of the 5‟ terminal region of the genome by 5' RACE, a fragment of 1.8 kb. PCR amplifications resulted in three cDNA fragments, comprising the complete genome of BsMoV. The RNA genome consisted of 9870 nt without a poly-A tail, encoding a putative typical potyviral polyprotein of 3090 aa. Analysis of the amino acid sequence allowed the deduction of the cleavage sites, as well as the identification of conserved sequences and motifs within the sequence of each protein, in which the Bs-Campinas isolate displayed typical potyvirus genome strategy. Phylogenetic analysis, as well as comparisons with other species of the Potyvirus genus obtained on online databases revealed that this BsMoV sequence shared 63.7% nucleotide sequence with Pepper mottle virus (PepMoV), which was the best matched potyvirus sequence and, thus the most closely related species. Since this identity value is below the threshold of 76% nt identity presently used to discriminate Potyvirus species, it was confirmed that Brugmansia suaveolens mottle virus represents a new Potyvirus species.

Tese (doutorado)-Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2010. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2011-05-04T18:56:22Z No. of bitstreams: 1 2010_ReinaldoJosedeMirandaFilho.pdf: 3516221 bytes, checksum: 3a5e74e2805c830c0f5467b85a0baec4 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2011-05-25T02:22:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_ReinaldoJosedeMirandaFilho.pdf: 3516221 bytes, checksum: 3a5e74e2805c830c0f5467b85a0baec4 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-05-25T02:22:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_ReinaldoJosedeMirandaFilho.pdf: 3516221 bytes, checksum: 3a5e74e2805c830c0f5467b85a0baec4 (MD5) / O feijão tem uma ampla adaptação edafoclimática, o que permite seu cultivo, durante praticamente todo o ano, em quase todos os estados da federação. Outra característica desta leguminosa é possibilitar a sua produção em diversos ecossistemas tropicais e temperados, em monocultivo ou consorciados nos mais variados arranjos de plantas inter e intra-específicos. A cultura do feijoeiro está sujeita a inúmeras doenças de origens fúngica, viral, bacteriana, entre outras, que causam perdas significativas na produção. Dentre as doenças bacterianas, a Murcha de Curtobacterium, causada por Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens é uma que vem aumentando nos anos recentes. No presente trabalho, foram analisadas características relacionadas à Murcha de Curtobacterium, foram realizados levantamentos da ocorrência da doença na região do Distrito Federal e Entorno e ensaios experimentais visando um detalhamento na caracterização de sintomas, transmissão a curta distância, período de persistência da bactéria no solo, efeitos fisiológicos da doença nas plantas infectadas e efeito do tratamento de sementes com imersão em produtos químicos visando ao controle desta bacteriose. Foi constatada a presença da bactéria em propriedades dos municípios de Água Fria de Goiás, Serra Bonita, Formosa, Cidade Ocidental, Cabeceiras e Cristalina todos no estado de Goiás. Quanto aos sintomas observados, foram amarelecimentos com formação de manchas cloróticas nas folhas e uma “queima” das bordas e ponta das folhas, a observação de um estado flácido das folhas com um aspecto de folhas curvadas e posicionadas para baixo em diferentes níveis e a murcha nos estádios reprodutivos R7/R8. A bactéria possui grande adaptabilidade para sobrevivência em solo, permanecendo viável durante 22 meses. Foi possível constatar a transmissão da doença de planta para planta via sistema radicular e via parte aérea ficando na ordem de 10% a 20 % de transmissibilidade entre as plantas, respectivamente. A transmissão foi influenciada pela distância entre as plantas. A doença influenciou negativamente a fisiologia das plantas que apresentaram perdas estatisticamente significativas, na quantidade de folhas trifolioladas aos 30 dias após a inoculação das plantas, na quantidade final de vagens, na produção final, no peso de 100 grãos e também nas dimensões dos grãos. Tratamentos com Agrimaicin 500 (Oxitetraciclina + Sulfato de Cobre), Agrimicina (Oxitetraciclina + estreptomicina), Mycoshield (Oxitetraciclina) e Fegatex (Cloretos de Benzalcônio) não foram efetivos no controle da doença. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The common bean (Phaseolus vulgaris) is adapted to a wide range of climate and soil, and this allows it to be cultivated year-round in almost all Brazilian states. Another feature of this legume is that it can be produced in many tropical and temperate ecosystems, in monoculture or intercropped in various arrangements of plants. The bean crop is subject to numerous viral, fungal and bacterial diseases, which cause significant losses. Among the bacterial diseases, Curtobacterium Wilt, caused by Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens, has increased greatly in recent years. In this study the characteristics of Curtobacterium Wilt were analyzed, a survey was carried out of the occurrence of the disease in the Federal District and surrounding areas, and experimental studies were done to detail the characterization of symptoms, the short transmission distance, period of persistence of bacteria in the soil, physiological effects of the disease in infected plants and effect of treatment with immersion in chemicals for the control of the disease. The disease was detected in the municipalities of Agua Fria de Goiás, Serra Bonita, Formosa, Cidade Ocidental, Cabeceiras and Cristalina in Goias state. The symptoms observed were yellowing with formation of chlorotic spots on leaves and a blight of the edges and tips of leaves; it was also possible to observe flaccidity of the leaves with leaf looks bent down at various levels, with wilt in the reproductive R7/R8 stages. The bacterium has a wide adaptability to survive in soil, remaining viable for 22 months. Disease transmission was found from plant to plant through the root and shoot systems, at rates of 10% to 20% of transmission between plants. Transmission was influenced by the distance between plants. The disease had a negative influence on plant physiology and caused statistically significant losses, such as fewer trifoliate leaves at 30 days after inoculation of plants, fewer pods, lower final production, lower grain weight and dimensions. Treatments with Agrimaicin 500, Agrimicina, Mycoshield and Fegatex were not effective in the control of the disease.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-11-28T13:27:09Z No. of bitstreams: 1 Aricleia de Moraes Catarino.pdf: 1031221 bytes, checksum: 5bd0ffb507daa4b9b04ebd494fd2269c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-28T13:27:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aricleia de Moraes Catarino.pdf: 1031221 bytes, checksum: 5bd0ffb507daa4b9b04ebd494fd2269c (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / The grapevine (Vitis spp.) belongs to the family of Vitaceae, being the botanical species V. vinifera L. and V. labrusca L. the most and widely cultivated, due to their products consumed as fresh fruits, jam, juices and wines. Despite the high economical importance, several factors may severely affect this crop, including the diseases caused by viruses. This study aimed to verify the incidence of virus present in commercial vineyards of two producing areas in Northeastern Brazil and evaluate the efficiency of some molecular methods for detecting and identifying viral species associated with grapevine. Materials showing or not symptoms were collected from grapevine genotypes in vineyards of Pernambuco, Paraiba, Bahia and Rio Grande do Sul, Brazil, and Locorotondo, Province of Bari, of the Puglia Region, Italy. The first part of the work was conducted at the Virology Laboratory of the Embrapa Uva e Vinho, RS, Brazil. For the identification of viral agents in the samples collected in Brazil, the extraction of total RNA was performed, cDNAs were obtained and tested by real time RT-PCR, using primers and probes specific for the following viruses: Grapevine rupestris stem pitting-associated virus (GRSPaV), Grapevine virus A (GVA), Grapevine virus B (GVB), Grapevine leafroll-associated virus 2, 3 e 4 (GLRaV-2, -3 e -4), Grapevine fleck virus (GFkV), Grapevine rupestris vein feathering virus (GRVFV) and Grapevine fanleaf virus (GFLV). DNA fragments, products of the RT-qPCR, corresponding to the CP gene of each virus were eluted, linked to pGEM-T Easy vector (Promega) and used to transform bacteria. The plasmid DNA was extracted from transformed bacterial colonies, confirming the presence of the cloned fragments, which were sequenced. The grapevine material collected in Locorotondo was processed at the Istituto per la Protezione Sostenibile delle Piante (CNR-IPSP) and at the Dipartimento di Scienze del Suolo, della Pianta e degli Alimenti, Università degli Studi “Aldo Moro”. In order to detect in multiplex test the most relevant viruses involved in the aetiology of fanleaf degeneration and the complexes of leafroll and rugose wood of grapevine, amplification techniques based on Allele Specific Primer Extension (ASPE) were tested by using the obtained cDNAs. The results showed that the techniques aggregate some advantages, such as reduction in time and relative simplicity of implementation, completely eliminating the use of toxic reagents, such as the ethidium bromide. The use of multiplex facilitates amplification of multiple targets in a single reaction, reducing the time and cost of the analyzes. / A videira (Vitis spp.) pertence à família Vitaceae, sendo as espécies botânicas V. vinifera L. e V. labrusca L. cultivadas em maior escala devido seus produtos, consumidos na forma de frutos in natura, geleias, sucos e vinhos. Apesar da grande importância econômica, vários fatores podem comprometer a produção desta cultura, incluindo as doenças causadas por vírus. O presente trabalho teve como objetivos verificar a incidência de vírus presentes em vinhedos comerciais de duas áreas produtoras do Nordeste do Brasil e avaliar a eficiência de alguns métodos moleculares para detecção e identificação de espécies virais associadas à videira. Amostras, apresentando ou não sintomas, foram coletados de genótipos de videira em propriedades situadas em Pernambuco, Paraíba, Bahia e Rio Grande do Sul, Brasil, e em Locorotondo, Província de Bari, Região da Puglia, Itália. A primeira parte do trabalho foi conduzida no Laboratório de Virologia da Embrapa Uva e Vinho, RS, Brasil. Visando a identificação dos agentes virais, nas amostras coletadas no Brasil, foram realizadas as extrações do RNA total, obtidos os cDNAs e testados por PCR em Tempo Real, empregando-se primers e sondas, específicos para os seguintes vírus: Grapevine rupestris stem pitting-associated virus (GRSPaV), Grapevine virus A (GVA), Grapevine virus B (GVB), Grapevine leafroll-associated virus 2, 3 e 4 (GLRaV-2, -3 e -4), Grapevine fleck virus (GFkV), Grapevine rupestris vein feathering virus (GRVFV) e Grapevine fanleaf virus (GFLV). Fragmentos de DNA, produtos da RTq-PCR, correspondentes ao gene da CP de cada vírus foram eluídos, ligados ao vetor pGEM-T Easy (Promega) e utilizados na transformação de bactéria. Foi extraído o DNA plasmidial das colônias bacterianas transformadas, confirmando-se a presença dos fragmentos clonados, os quais foram sequenciados. A segunda parte, realizada com o material coletado em Locorotondo, foi processada no Istituto per la Protezione Sostenibile delle Piante (CNR-IPSP) e no Dipartimento di Scienze del Suolo, della Pianta e degli Alimenti, Università degli Studi “Aldo Moro”. Foram utilizadas, a partir de cDNAs obtidos, técnicas de amplificação baseadas na Allele Specific Primer Extension (ASPE), visando detectar em teste multiplex os vírus mais relevantes envolvidos na etiologia da degenerescência e nos complexos do enrolamento das folhas e do lenho rugoso da videira. Os resultados obtidos mostraram que as técnicas agregam algumas vantagens, como a redução no tempo e relativa simplicidade de execução, eliminando completamente o uso de reagentes tóxicos, a exemplo do brometo de etídeo. O uso de multiplex facilita a amplificação de múltiplos alvos em uma única reação, reduzindo o tempo e o custo das análises.