Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-21T13:35:42Z No. of bitstreams: 1 Christtianno de Lima Rollemberg.pdf: 2445206 bytes, checksum: 4da0aaed00880d13a23b17cdb6cae239 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-21T13:35:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Christtianno de Lima Rollemberg.pdf: 2445206 bytes, checksum: 4da0aaed00880d13a23b17cdb6cae239 (MD5) Previous issue date: 2013-04-30 / This study evaluated the use of silicon (Si) in micropropagation of banana 'Silk' and 'Pacovan Ken' aiming to reduce the severity of fusarium wilt caused by Fusarium oxysporum f. sp. cubense and moko disease caused by Ralstonia solanacearum race 2. The banana plantlets were produced in vitro by adding calcium silicate and potassium silicate (0, 0.25, 0.5, 0.75 and 1 g L-1) to MS medium in the phases of multiplication and rooting. After in vitro culture, the plants were transferred to plastic tubes containing substrate plus the same sources of Si, and maintained in a greenhouse for 45 days, when they were inoculated with the pathogens. With respect to fusarium wilt in cultivars Silk and Pacovan Ken, the elevation of Si increased the incubation period (IP) and reduced the disease index (DI) and area under the disease progress curve (AUDPC). In cultivar Silk but not in Pacovan Ken calcium silicate was significantly more effective than potassium silicate. In shoots and roots of both cultivars in both sources, before and after acclimatization Si concentration was greater at a dose of 1.0 g L-1 compared to the control without Si. Before acclimatization, calcium silicate provided higher Si concentration in the shoots than potassium silicate. The opposite happened with the Si concentration in the roots. After acclimatization, there was no difference between the calcium silicate and potassium silicate, for both cultivars. In general, for both cultivars and sources of Si there were positive correlations with the concentration of Si and IP, and negative correlations with DI and AUDPC. Before and after acclimatization, the anatomical variable of roots: thickness of the root epidermis, cortex, endodermis and central cylinder of banana 'Silk' and 'Ken Pacovan' were influenced by Si sources. Calcium silicate was more efficient in increasing the thickness of the root epidermis, cortex and central cylinder, while potassium silicate was more efficient in thickening of the endodermis. In general, there were positive correlations among anatomical variable of roots with PI and negative correlations with DI and AUDPC, except for potassium silicate in cultivar Silk. The research conducted with moko disease showed that increase of Si in Silk and Pacovan Ken cultivars caused increase in IP and decreases the DI and AUDPC. At the dosage of 1.0 g L-1 AUCPD was reduced by 27.3%. In cultivar Silk, calcium silicate was more effective than potassium silicate (P≤0.05), while in „Pacovan Ken‟ there was no difference. In both cultivars, plants treated with Si showed, in general, concentrations of chlorophylls a, b and total higher than plants Si- up to six days after inoculation, which may have influenced the disease IP. In general, both the enzymes related to oxidative stress (CAT, SOD and APX), as the plant defense (POX, PPO, CHI and GLU), had increased its activities in plants treated with Si, especially those with calcium silicate, indicating a possible role in reducing the severity of the disease. The supply of Si in micropropagation of banana 'Silk' and 'Pacovan Ken' promoted reduction of Fusarium wilt and moko disease, and therefore can be used as a new technology in the management of these diseases. / Este estudo avaliou o uso do silício (Si) na micropropagação de bananeira „Maçã‟ e „Pacovan Ken‟ visando a redução da severidade da murcha-de-fusário, causada pelo Fusarium oxysporum f. sp. cubense e do moko da bananeira causado por Ralstonia solanacearum raça 2. As mudas de bananeira foram produzidas in vitro com adição de silicato de cálcio e silicato de potássio (0; 0,25; 0,5; 0,75 e 1 g L-1) ao meio de cultivo MS nas fases de multiplicação e enraizamento. Após o cultivo in vitro, as plantas foram transferidas para tubetes contendo substrato acrescido das mesmas fontes de Si, e mantidas em casa de vegetação por 45 dias, quando foram inoculadas com os patógenos. Com relação à murcha-de-fusário, nas cultivares Maçã e Pacovan Ken, a elevação das doses de Si aumentou o período de incubação (PI) e reduziu o índice de doença (IDO) e a área abaixo da curva de progresso da doença (AACPD). Em „Maçã‟ o silicato de cálcio foi significativamente mais eficiente que o silicato de potássio, o que não ocorreu na „Pacovan Ken‟. A concentração de Si na parte aérea e raízes das cultivares, em ambas as fontes, antes e após a aclimatização foi maior na dose de 1,0 g L-1 em relação à testemunha sem Si. Antes da aclimatização, o silicato de cálcio proporcionou maior concentração de Si na parte aérea que o silicato de potássio. O contrário aconteceu com a concentração de Si nas raízes. Após aclimatização, não houve diferença entre o silicato de cálcio e o silicato de potássio, para as duas cultivares. Em geral, para ambas as cultivares e fontes de Si foram observadas correlações positivas da concentração de Si com PI e correlações negativas com IDO e AACPD. Antes e após a aclimatização das plantas, as espessuras da epiderme radicular, córtex, endoderme e cilindro central das bananeiras „Maçã‟ e „Pacovan Ken‟ foram influenciadas pelas fontes de Si. O silicato de cálcio foi mais eficiente no aumento da espessura da epiderme radicular, córtex e cilindro central, enquanto o silicato de potássio foi mais eficiente no aumento da espessura da endoderme. Em geral, foram observadas correlações positivas das variáveis anatômicas das raízes com PI e correlações negativas com IDO e AACPD, exceto para silicato de potássio em bananeira „Maçã‟. Na pesquisa desenvolvida com o moko da bananeira, a elevação das doses de Si nas cultivares Maçã e Pacovan Ken causou aumento no PI e reduções do IDO e AACPD. Na dosagem de 1,0 g L-1, a AACPD foi reduzida em até 27,3%. Em bananeira „Maçã‟ o silicato de cálcio foi mais eficiente que o silicato de potássio (P≤0,05), enquanto na „Pacovan Ken‟ não houve diferença. Nas duas cultivares, plantas tratadas com Si apresentaram, de maneira geral, concentrações de clorofilas a, b e total maiores que as plantas Si- até os seis dias após inoculação, o que pode ter influenciado o PI da doença. Em geral, tanto as enzimas relacionadas ao estresse oxidativo (CAT, SOD e APX), quanto as de defesa da planta (POX, PFO, GLU e QUI), tiveram suas atividades aumentadas nos tratamentos com silício, especialmente naqueles com silicato de cálcio, indicando uma possível participação na redução da severidade da doença. O fornecimento de Si na micropropagação de bananeiras „Maçã‟ e „Pacovan Ken‟ promoveu redução da murcha-de-fusário e moko da bananeira, podendo ser utilizado como uma nova tecnologia no manejo dessas doenças.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-21T14:16:54Z No. of bitstreams: 1 Cintia de Sousa Bezerra.pdf: 529172 bytes, checksum: 3f8bd6778995572053eaacf5a2bbb510 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-21T14:16:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cintia de Sousa Bezerra.pdf: 529172 bytes, checksum: 3f8bd6778995572053eaacf5a2bbb510 (MD5) Previous issue date: 2011-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Vine decline of melons caused by Monosporascus cannonballus is a destructive disease worldwide. To implement a meaningful management of plantation diseases, it is important to have an understanding of the population diversity of the pathogen. The aims of this study were assay de genetic structure of M. cannonballus isolates from Brazil and compare this isolates with isolates form Spain. The population genetic structure of M. cannonballus was examined by applying ISSR and mycelial compatibility tests. Based on the frequencies of MCGs, and ISSR were estimated the genotype diversity indexes, as well as its richness and evenness components. All analyses were performed by R, NTSYS and PopGen software. The isolate were from 7 plantations in Mossoró in state of Rio Grande do Norte, Quixeré and Icapuí in state of Ceará. The seven plantations showed low genetic distance between them (GST 0.004 to 0.068), when grouped into two subpopulations CE and RN genetic diversity (GST 0.105) between them was also low, reflecting a high amount of gene flow (Nm = 31), genetic diversity within subpopulations (Hs = 0.2277) was 98% of the total genetic diversity of the population (HT = 0.2314). The genotypic diversity estimated by Sttodart and Taylor was 10% of the maximum possible. Four MC groups were found amongst 58 isolates from Brazil, whereas in Spain 6 MC were found in only 11 isolates. None Brazilian isolates was compatible with Spanish isolates. Genetic variability was low and similar in the subpopulations (Icapuí, Quixeré and Mossoró) from Brazil. The genotypic diversity for Brazilian population was lower compared with the Spanish population. Based on these data, the Spanish population was more diverse than the Brazilian population. No significant difference in diversity exists between Icapui, Quixere and Mossoró subpopulations. But significant difference in diversity exists between the Brazilian and Spanish populations of M. cannonballus. / O declínio das ramas do meloeiro causado pelo fungo Monosporascus cannonballus, vem causando prejuízos nas áreas de cultivo de melão em todo o mundo. Para o desenvolvimento de estratégias de manejo é essencial conhecer a estrutura genética da população do patógeno. Os objetivos deste estudo foram descrever a estrutura genética e as forças evolutivas que atuam sobre a população de M. cannonballus, e comparar a população Brasileira a isolados coletados na Espanha. Os isolados utilizados foram coletados em sete áreas de plantio comercial nos municípios de Mossoró no Rio Grande do Norte, Quixeré e Icapuí no Ceará. Foi feita a extração do DNA genômico, seguida de uma reação ISSR para a análise genética da população. Testes de incompatibilidade micelial foram realizados em meio BDA pareando os isolados consigo e com os demais para formar grupos. Com base nas freqüências de MCGs foram calculados índices de diversidade genotípica e seus componentes de riqueza e equitabilidade. Os dados obtidos foram análisados nos programas R, NTSYS e PopGen. As sete areas coletadas apresentaram baixa distancia genética entre si (GST 0,004-0,068), quando agrupadas em duas subpopulações CE e RN a diversidade genétia (GST 0,105) entre elas ainda foi baixa refletindo num alto valor de fluxo gênico (Nm=31) e a diversidade genética dentro das sub-populações (HS = 0,2277) representou 98% da diversidade genética total da população estudada (HT = 0,2314). A diversidade genotípica estimada pelo índice G foi 10% do máximo possível. Foram formados 4 MCG entre os 58 isolados do Brasil, enquanto na Espanha 6 grupos foram formados entre apenas 11 isolados. Os isolados do Brasil não foram compatíveis com os da Espanha. Houve uma diferença significativa na diversidade entre as populações da Espanha e Brasil, enquanto que entre as subpopulações brasileiras não houve diferença.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-03-10T14:34:25Z No. of bitstreams: 1 Elias Inacio da Silva.pdf: 496927 bytes, checksum: d6971c4e240310675bba44bb481b6833 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-10T14:34:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Elias Inacio da Silva.pdf: 496927 bytes, checksum: d6971c4e240310675bba44bb481b6833 (MD5) Previous issue date: 2002-09-30 / Melon is one of the most popular cucurbits in the world. The bacterial blotch of melon, caused by Acidovorax avenae subsp. citrulli has caused 40 to 50% losses in the production and made the fruits inappropriate for commercialization in the State of Rio Grande do Norte. This study aimed to survey the bacterial blotch incidence in 18 melon planting areas of the counties Mossoró and Baraúna in Rio Grande do Norte, and to determine the ideal sample size for disease assessment. Prevalence of 100% was reported in the studied fields. The incidence of the bacterial fruit blotch ranged from 4.30 to 47.29%. Incidence levels were under 20% in 50% of the areas and higher than 40% in 17% of the areas. There was significant difference for the variables melon type (P=0.01) and years of melon culture in the area (P=0.05). The t test showed the melon Piel de sapo was more susceptible than the yellow type and the disease incidence in areas with less than 10 years of melon cropping was higher than those with more than20 years. However, there were no significant differences (P=0.05) for disease incidence averages among areas planted with corn (18%) and corn plus other grasses (20%) between melon seasons. Using the incidence data from 18 areas as pilot-samples, the sample size for disease assessment was determined according to the mean variability coefficient. The Pierson test showed no significant correlations (P=0.05) between the levels of disease incidence and sample sizes. Based on the data obtained andconsidering 10% of acceptable error, it is recommended that in future surveys of melon bacterial blotch incidence in fields in Rio Grande do Norte, a sample composed by 12 subsamples comprising 100 m2/ha and 20 fruit evaluated per subsample must be analyzed. / O meloeiro é uma das cucurbitáceas mais populares do mundo. A mancha-aquosa do melão, causada pela bactéria Acidovorax avenae subsp. citrulli, tem causado perdas de 40 a 50% na produção e depreciação no valor comercial do fruto no estado do Rio Grande do Norte. Os objetivos deste estudo foram realizar o levantamento da incidência da mancha-aquosa em 18 áreas de plantio de meloeiro dos municípios Mossoró e Baraúna, no Rio Grande do Norte e determinar o tamanho ideal das amostras para quantificação da incidência da doença no campo. Foi registrada a prevalência da doença em 100% dos campos. A incidência da mancha-aquosa variou entre 4,30% e 47,29%. Em 50% das áreas foram constatados níveis de incidência da doença inferiores a 20%, enquanto em 17% foram registrados valores superiores a 40%. Houve diferença significativa na incidência da doença em relação aos tipos de melão (P=0,01) e aos anosde plantio na mesma área (P=0,05). Pelo teste t o melão tipo Pele de sapo foi mais suscetível que o Amarelo e a incidência da doença foi maior em áreas com menos de 10 anos de plantio em relação àquelas com mais de 20 anos de plantio dessa cucurbitácea. Não foram constatadas diferenças significativas (P=0,05) pelo teste t, para médias de incidência da mancha-aquosa entre áreas com plantio de milho (18%) e milho com outras gramíneas (20%) na entressafra. Utilizando os dados de incidência da doença nas 18 áreas como amostragens-piloto, o tamanho das amostras para quantificação da doença foi determinado com base no coeficiente de variação da média. O teste de Pierson não constatou correlações significativas (P=0,05) entre os níveis de incidência da doença e o tamanho das amostras. Considerando os resultados obtidos e um erroaceitável de 10%, em futuros levantamentos da incidência da mancha-aquosa em plantios de meloeiro no Rio Grande do Norte, recomenda-se a utilização de uma amostra de 12 subparcelas com 100 m2/ha e 20 frutos avaliados por subparcela

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-06-14T12:52:08Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 268871 bytes, checksum: beaffd937f002b4fb7644cfe54033395 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-14T12:52:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 268871 bytes, checksum: beaffd937f002b4fb7644cfe54033395 (MD5) Previous issue date: 2003-03-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Dentre as aplicações de computadores, em Fitopatologia, destacam-se os Sistemas Especialistas (SE), com ênfase na diagnose de doenças de várias culturas. Na cultura da batata, ocorrem vários problemas fitossanitários, principalmente doenças, que, não raro, são de difícil diagnose. Há deficiência de ferramentas informatizadas para a diagnose destes problemas. Assim, desenvolveu-se um SE para diagnose de doenças da batateira, que objetiva dar suporte a técnicos da extensão, na tomada de decisão, e auxiliar a docentes, como ferramenta educativa. Dividiu-se o desenvolvimento do SE em cinco fases independentes: i) seleção do problema; ii) aquisição do conhecimento; iii)organização do conhecimento e desenvolvimento do protótipo; iv) desenvolvimento do SE completo; e v) avaliação. O SE, denominado Sistema Especialista para Diagnose de Doenças da Batateira (SEDDB), contém 60 perguntas, 104 regras, 150 fotografias, glossário com 45 termos, e auxilia no diagnóstico de 33 doenças. Na construção do protótipo do SE, consultaram-se seis especialistas em doenças da batateira e utilizou-se o shell Expert Sinta, para verificação da lógica interna, e o software Delphi ® (versão 6.0), para o desenvolvimento da interface. Na fase de validação, participaram 54 estudantes, entre pós-graduandos em Fitopatologia e agronomandos. Os pós-graduandos tiveram índice de acerto médio na diagnose de 57,02% e de 73,00%, sem e com a utilização do SEDDB, respectivamente. Com o uso do SEDDB, os agronomandos obtiveram acerto médio de 69,14%, superior àquele obtido pelos pós-graduandos, sem a utilizarem o SE, na diagnose do mesmo grupo de doenças. / Expert Systems (ES) are being used in plant pathology, mostly to diagnosis various crop diseases. Potato plants are subjected to several important helth problems, especially diseases that quite frequently are difficult to diagnose. There is few computer tools specially designed to diagnosis potato diseases. Therefore an ES was development to diagnosis potato diseases, aiming to help extension agents, as a decision tool, and plant pathology lecturers, as an educational tool. The development of the ES, planned to help diagnosing of 33 diseases, was divided into five independent phases: i) problem selection; ii) acquisition of the knowledge; iii) organization of the knowledge and prototype development; iv) ES development; and v) ES evaluation. The ES, called Expert System to Diagnosis Potato Plant Diseases (SEDDB), includes 60 queries, 104 rules, 150 photographs, and a glossary with 45 terms. Throughout SEDDB construction, six specialists in potatoes diseases were consulted. The ES internal logic verification was through the shell Expert Sinta and the interface development was using the software Delphi ® (version 6.0). A total of 54 MS students in Plant Pathology and Agronomy undergraduate students participated in the ES validation. The graduate student’s accuracy in diagnosing diseases was 57,02% and 73,00%, with and without using SEDDB, respectively. To diagnose the same group of diseases, the undergraduate student’s accuracy using SEDDB was 69,14%, which was higher than graduate student’s accuracy without using the ES. / Dissertação antiga

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-10-16T10:49:48Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 987207 bytes, checksum: 859bdece8525a123062c87a512accb46 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-16T10:49:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 987207 bytes, checksum: 859bdece8525a123062c87a512accb46 (MD5) Previous issue date: 2012-02-13 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Doenças causadas por fitoplasmas têm emergido em diversas culturas nas últimas décadas tornando-se responsáveis por perdas econômicas significativas. Dentre os fitoplasmas causadores de doenças na cultura da mandioca (Manihot esculenta Crantz), se destaca o causador da doença do “Couro de Sapo da mandioca” (DCSM), o qual é responsável por grandes perdas na cultura em alguns países da América do Sul. Com o objetivo de detectar e caracterizar o fitoplasma causador da DCSM no Brasil, 30 plantas de mandioca apresentando sintomas típicos e 20 plantas de mandioca sem sintomas típicos de DCSM foram coletadas em Mocambinho (Jaíba), no estado de Minas Gerais, Brasil. O DNA total das raízes, caules e folhas foi extraído e utilizado como molde para a reação de PCR duplo. Foram desenhados iniciadores específicos para facilitar a detecção do fitoplasma na presença de Bacillus sp. (endofítico). Utilizando estes iniciadores foi possível detectar o fitoplasma em 16,7% das raízes, 66,7% dos caules e 73,3% das folhas em plantas sintomáticas, e em nenhuma das raízes, 45% dos caules e 30% das folhas em plantas assintomáticas. Um total de 37 plantas coletadas apresentou resultado positivo para a presença de fitoplasmas. O fitoplasma detectado foi identificado como pertencente ao grupo 16SrIII, subgrupo A, através de RFLP, sequenciamento e RFLP in silico. Análises filogenéticas, baseadas no 16S rDNA deram suporte à caracterização realizada através do RFLP. / Diseases caused by phytoplasmas in different crops have emerged in the past decades being responsible for significant economic losses worldwide. Of particular note among the disease-causing phytoplasmas in cassava (Manihot esculenta Crantz) is that responsible for cassava frog skin disease (CFSD), which causes great losses in some South American countries. In order to detect and characterize the phytoplasma that causes CFSD in Brazil, 30 cassava plants showing typical disease symptoms and 20 cassava plants CFSD symptomless were collected in Mocambinho (Jaíba) in the state of Minas Gerais, Brazil. Total DNA of tubers, stems and leaves was extracted and used as a template for nested-PCR reacions. Specific primers were designed to facilitate the detection of the phytoplasma in the presence of endophytic Bacillus sp. Using these primers it was possible to detect the phytoplasma in 16.7% of the tubers, 66.7% of the stems and 73.3% of the leaves of symptomatic plants, but in none of the tubers, 45% of the stems and 30% of the leaves of asymptomatic plants. A total of 37 cassava plants showed positive results for presence of phytoplasma. This phytoplasma was identified as belonging to the group 16SrIII, subgroup A, by in vitro and in silico RFLP analyses and sequencing. Phylogenetic analysis, based on 16S rDNA, supports the characterization performed by RFLP.

Os fungos toxigênicos Aspergillus flavus e Fusarium verticillioides podem colonizar plantas de milho em todas as etapas do cultivo, através da contaminação fúngica presente no solo, levando a queda de produtividade e qualidade do grão. Em adição, estes fungos podem produzir micotoxinas que põem em grande risco a saúde de humanos e animais que consomem os grãos contaminados. O controle biológico é um método de controle fúngico alternativo ao uso de fungicidas químicos e o uso de bactérias provenientes do sistema radicular de plantas de milho é extremamente promissor em função da capacidade competitiva e de sobrevivência destes micro-organismos. O objetivo deste trabalho foi selecionar bactérias do sistema radicular de plantas de milho com potencial para o biocontrole de Aspergillus flavus e Fusarium verticillioides no agroecossistema de cultivo do milho. Foram isolados 1283 colônias bacterianas do sistema radicular de plantas de milho e destas 24 apresentaram atividade antifúngica e 3 foram selecionados para o restante do trabalho. Os três isolados selecionados foram identificados como Bacillus safensis RF69, B. amyloliquefaciens RP103 e B. subtilis RP242. Os isolados foram capazes de reduzir a taxa de crescimento micelial in vitro dos dois fungos, assim como foram capazes de reduzir a produção, germinação e sobrevivência de conídios. Foi detectada a produção de iturina A pelos isolados B. amyloliquefaciens RP103 e B. subtilis RP242, caracterizando este metabolito como um dos responsáveis pela atividade antifúngica. Os isolados B. amyloliquefaciens RP103 e B. subtilis RP242 demonstraram a manutenção da dominância frente a A. flavus e F. verticillioides in vitro em diferentes condições ambientais, caracterizando alta eficácia no controle fúngico em situações de stress hídrico e de térmico. A bacterização de sementes com os três isolados foi efetiva na proteção radicular frente aos dois fungos, assim como levou ao aumento do comprimento e peso das plântulas, da taxa de emergência de plântulas e na germinação de sementes. Os isolados foram capazes de reduzir drasticamente as contagens fúngicas em solo não-rizosférico e no grão de milho, reduzindo também a concentração de aflatoxina B1 e fumonisina B1 nos grãos. Os isolados demonstraram-se extremamente promissores para serem utilizados em um bioformulado objetivando o controle micotoxigênico em plantas de milho em diferentes etapas da produção de grãos. / Toxigenic fungi Aspergillus flavus and Fusarium verticillioides may colonize maize grains on the field and during storage, leading to yield and quality losses, mainly by the production of aflatoxin B1 and fumonisin B1, carcinogenic and potentially carcinogenic mycotoxins, respectively. Biological control is a promising alternative control method and the usage of soil bacteria as biocontrol agents has great potential due to survival and competitive characteristics of those microorganisms. The objective of this study was to select bacteria from maize root system with potential to biocontrol Aspergillus flavus and Fusarium verticillioides on the agroecosystem of maize. We isolated 1283 bacterial colonies from maize root system, 24 of them presented antifungal activity and three were selected for the rest of the study. Selected isolates were identified as Bacillus safensis RP69, B. amyloliquefaciens RP103 and B. subtilis RP242. The isolates were capable to reduce in vitro mycelial growth rate of both fungi and reduce conidial production, germination and survival. Iturin A production was detected by B. amyloliquefaciens RP103 and B. subtilis RP242, characterizing this metabolite as one of the responsible for the antifungal activity. Isolates B. amyloliquefaciens RP103 and B. subtilis RP242 maintained in vitro dominance towards A. flavus and F. verticillioides in different environmental conditions, characterizing high efficacy on fungal control even in water and temperature stress situations. Seed bacterization was effective on root protection towards both fungi, as well as increased seedling length and weight, emergency rate and seed germination percentage. The isolates were able to reduce fungal counts on non-rhizospheric soil and on grain, and were able to decrease aflatoxin B1 and fumonisin B1 final concentrations on maize grain. The selected isolates shown extremely promising to be used as biocontrol agents on a bioformulated product aiming mycotoxigenic control on maize plants during different steps of grain production.

A citricultura é de extrema importância para a economia do Estado de São Paulo. O cancro cítrico, causado pela bactéria Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac), é um grave problema nesse setor, causando inúmeros prejuízos à produção de frutos e seus derivados. Nosso objetivo principal foi o estudo das interações proteína-proteína que ocorrem em Xac. Com este intuito, utilizamos como principal ferramenta, o sistema duplo-híbrido em leveduras, baseado nos domínios ativador e de ligação da proteína Gal4. Estivemos particularmente interessados em proteínas pertencentes aos Sistemas de dois-componentes, devido à sua importância em mecanismos de sinalização celular. A complexidade desses sistemas tornou a análise genômica comparativa de grande valor para estudos das vias de sinalização que podem levar a bactéria a colonizar o hospedeiro. Xac possui 37 histidina cinases (HKs) e 60 reguladores de resposta (RRs) além de 21 proteínas híbridas contendo ambos os domínios. Nossos resultados mostraram interações específicas entre várias proteínas desse sistema dentre as quais destacamos algumas HKs e seus RRs cognatos: XAC0135 e XAC0136, XAC0620 e XAC0621, XAC0683 e XAC0684, XAC0759 e XAC0760, além de interações entre XAC1669 e XAC1670 e XAC1669 e XAC1282, estas últimas possivelmente envolvidas em quimiotaxia. Outro foco de nosso trabalho foi a identificação de interações entre proteínas com similaridade aos componentes do Sistema de Secreção do Tipo IV (T4SS), envolvido em processos de conjugação e secreção em bactérias. Xac possui dois loci vir que codificam proteínas com similaridade aos componentes do T4SS, um localizado no plasmídeo e outro localizado no cromossomo. Identificamos novas interações entre proteínas hipotéticas adjacentes a esse locus no plasmídeo: XACb0018 e XACb0019 e interações entre VirB8 e VirB9 e VirB9 e XAC2610, estas últimas codificadas por genes presentes no cromossomo. Apesar da importância de alguns T4SSs na secreção de proteínas patogênicas em bactérias, verificamos que o nocaute da proteína VirD4, codificada pelo gene XAC2623 apresentou fenótipo de virulência alterado em apenas um, dos cinco clones infiltrados em folhas de laranja pêra. O nocaute da proteína VirB4 do T4SS plasmidial não apresentou alteração na virulência de Xac, quando infiltrado em folhas de laranja e limão cravo, corroborando a hipótese de o T4SS codificado pelo plasmídeo não estar envolvido em virulência, mas sim em processos conjugativos. Outro sistema secretório importante em bactérias é o Sistema de Secreção do Tipo III (T3SS). Em Xac, o T3SS é o responsável pela secreção de fatores patogênicos, entre eles a proteína HpaA e a proteína de avirulência PthA. Com esse intuito, estudamos possíveis alvos dessas proteínas em Citrus sinensis. Identificamos interações de PthA com a alfa-importina, corroborando dados da literatura que mostram que PthA é importada para o núcleo. Além disso, identificamos três proteínas que interagiram com HpaA, dentre elas, destacamos uma proteína dedo de zinco com domínio “RING C3HC4" característico de E3 ubiquitina-ligases. Isto sugere que HpaA interfere na degradação de proteínas do hospedeiro através do complexo ubiquitina/proteossomo, um processo que pode contribuir para a sobrevivência de Xac nos tecidos de plantas infectadas. / Citriculture is an important sector of the economy of the State of São Paulo. Citrus canker, caused by Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac), is a devastating disease responsible for large losses to Agroindustry every year. In this work, we used the yeast two-hybrid system to study protein-protein interactions that occur in Xac. We were particularly interested in proteins of two-component systems, due to their importance in cell signaling. The complexity of these systems makes genomic analysis an important tool in the study of signalling pathways that allow bacteria to infect the host. Xac has 37 histidine kinases (HK) and 60 response regulators (RR), besides 21 hybrid proteins with both domains. We detected specific interactions between several proteins that belong to this system, notably the following HKs and their cognate RRs: XAC0135 and XAC0136, XAC0620 and XAC0621, XAC0683 and XAC0684, XAC0759 and XAC0760, besides XAC1669 and XAC1670 and XAC1669 and XAC1282, the later possibly involved in bacterial chemotaxis. We were also interested in studying interactions between proteins that make up the Type IV Secretion System (T4SS), involved in bacterial conjugation and protein secretion. Xac has two loci vir, which code for proteins with sequence similarity to T4SS components, one in the plasmid and the other in the chromosome. We identified new interactions between hypothetical proteins adjacent to this locus in the plasmid (XACb0018 and XACb0019) and between VirB8 and VirB9 and VirB9 and XAC2610, coded within the chromosomal locus. Despite the importance of T4SS in the pathogenesis of bacteria, a chromosomal VirD4 knockout strain presented alterated virulence in only one out of five mutants tested in the leaves of Citrus sinensis. Plasmidial VirB4 knockout strains did not present any alteration in Xac virulence when tested in Citrus sinensis or Citrus limonia, consistent with the hypothesis that the T4SS coded by the plasmid is not involved virulence, but in bacterial conjugation. Another secretory system involved in bacterial pathogenesis is the Type III Secretion System (T3SS), responsible for secretion of pathogenic factors like HpaA protein and the avirulence protein PthA. We investigated possible targets for these proteins using a Citrus sinensis cDNA library. We identified interactions between PthA and importin alpha, corroborating previous data that suggest PthA translocation to the host cell nucleus. We also identified three proteins which interacted with HpaA. One of them is a zinc finger protein containing the “RING C3HC4" domain characteristic of E3 ubiquitin-ligases. This suggests that HpaA interferes in the ubiquitin/proteasome-dependent degradation of host target proteins, a process that may contribute towards Xac survival in host tissues.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2012-09-21T20:43:25Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_IsolamentoCaracterizacaoExpressao.pdf: 1351156 bytes, checksum: b4b77e8d0787e6b1ada62ef0472dda05 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2012-09-28T17:47:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_IsolamentoCaracterizacaoExpressao.pdf: 1351156 bytes, checksum: b4b77e8d0787e6b1ada62ef0472dda05 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-28T17:47:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_IsolamentoCaracterizacaoExpressao.pdf: 1351156 bytes, checksum: b4b77e8d0787e6b1ada62ef0472dda05 (MD5) Previous issue date: 2012-05 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / A pimenteira-do-reino (Piper nigrum L.) constitui uma das espécies de pimenta mais amplamente utilizadas no mundo, pertencendo à família Piperaceae, a qual compreende cerca de 1400 espécies distribuídas principalmente no continente americano e sudeste da Ásia, onde esta cultura originou. A pimenteira-do-reino foi introduzida no Brasil no século XVII, e tornou-se uma cultura de importância econômica desde 1933. O Estado do Pará é o principal produto brasileiro de pimenta-do-reino, contudo sua produção vem sendo afetada pela doença fusariose causada pelo fungo Fusarium solani f. sp. piperis. Estudos prévios revelaram a identificação de sequencias de cDNA diferencialmente expressas durante a interação da pimenteira-do-reino com o F. solani f. sp. piperis. Entre elas, uma sequencia de cDNA parcial que codifica para uma proteína transportadora de lipídeos (LTP), a qual é conhecida por seu importante papel na defesa de plantas contra patógenos e insetos. Desta forma, o objetivo principal deste trabalho foi isolar e caracterizar as sequencias de cDNA e genômica de uma LTP de pimenteira-do-reino, denominada PnLTP. O cDNA completo da PnLTP isolado por meio de experimentos de RACE apresentou 621 bp com 32 pb and 235 bp nas regiões não traduzidas 5‘ e 3‘, respectivamente. Este cDNA contem uma ORF de 354 bp codificando uma proteína deduzida de 117 resíduos de aminoácidos que apresentou alta identidade com LTPs de outras espécies vegetais. Análises das sequencias revelou que a PnLTP contem um potencial peptídeo sinal na extremidade amino-terminal e oito resíduos de cisteína preditos por formar quatro pontes de dissulfeto, as quais poderiam contribuir para a estabilidade desta proteína. O alinhamento entre as sequencias de cDNA e genômica revelou a ausência de introns na região codificante do gene PnLTP, o que está de acordo ao encontrado em outros genes de LTPs de plantas. Por último, a PnLTP madura foi expressa em sistema bacteriano. Experimentos adicionais serão realizados com o objetivo de avaliar a habilidade da PnLTP recombinante em inibir o crescimento do F. solani f. sp. piperis. / Black pepper (Piper nigrum L.) is one of the most widely used spices in the world belonging to the Piperaceae family, which comprises about 1400 species distributed mainly in the American tropics and Southern Asia, where this crop originated. Black pepper was introduced in Brazil in the 17th century and has been a nationally important crop since 1933. The Pará State is the main Brazilian producer of black pepper; however, the spice‘s production has been damaged by the root rot disease caused by Fusarium solani f. sp. piperis. Previous studies have revealed the identification of some cDNA sequences differentially expressed during compatible black pepper - F. solani f. sp. piperis interaction. Among them, a partial cDNA sequence coding for a putative Lipid transfer protein (LTP), which is know to play important roles in plant defense against insects and pathogens. Therefore, the aim of this work was to isolate and characterize the full-length cDNA and genomic sequences of black pepper LTP, named PnLTP. The PnLTP full-length cDNA isolated by RACE assays showed 621 bp with 32 bp and 235 bp non-coding sequences at the 5‘ and 3‘ ends, respectively. This cDNA contains a 354-bp ORF coding for a deduced protein with 117 amino acid residues that showed high identity with LTPs from different crops. Sequence analysis revealed that PnLTP contains a putative peptide signal at amino-terminal and eight cysteine residues predicted to form four disulfide bridges, which could contribute to protein stability. Alignment between genomic and cDNA sequences revealed no introns within PnLTP coding region, that is in accordance with other LTP plant genes. Finally, the mature PnLTP was expressed in bacteria system. Additional experiments will be performed in order to evaluate the ability of recombinant PnLTP in inhibit the F. solani f. sp. piperis growth.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-17T11:48:39Z No. of bitstreams: 1 Amanda de Melo Goncalves.pdf: 469509 bytes, checksum: 85589967175227a912f3d38c09495b82 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-17T11:48:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amanda de Melo Goncalves.pdf: 469509 bytes, checksum: 85589967175227a912f3d38c09495b82 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / Papaya is a fruit tree common in almost all countries of Tropical America. Its products are used for different uses in textile, pharmaceuticals, food and cosmetics industries. The Brazil is the world's leading producer and most of its production is for export. Several diseases affect the crop and are its main limiting factor, causing major damage to production and marketing. The main losses are responsible for diseases post-harvest, which occur during storage of the product, however, the rot in the middle part of the stem, caused by Lasiodiplodia theobromae, has been highlighting the culture. The disease spreads rapidly and has been observed decimating an entire orchard papaya, the symptoms are initially soaked lesions, showing disintegration of tissues and formation of pits, which under predisposing conditions evolve, surrounding the stem, causing it to overturn. There is little information regarding the development of the disease and prevention is the best control measure. Chemical control is already used when the disease is detected, but there is no product registered for pathosystem in this field. The lack of knowledge of the interaction pathogen-host added to the misuse of these continuous products can result in failure of control. Studies sensitivity to fungicide isolates found not sensitive to these products, which can complicate treatment and control of disease, demonstrating the importance of studying the behavior of these isolates in plants. / O mamoeiro é uma das fruteiras mais comuns em quase todos os países da América Tropical. Seus produtos são empregados para os mais diversos usos nas indústrias têxteis, famacêutica, de alimentos e de cosméticos. O Brasil é o principal produtor mundial e a maior parte da sua produção é destinada à exportação. Várias doenças acometem a cultura e constituem seu principal fator limitante, causando grandes danos na produção e na comercialização. As principais responsáveis pelas perdas são as doenças de pós-colheita, que ocorrem durante o armazenamento do produto, no entanto, uma podridão na parte mediana da haste, causada por Lasiodiplodia theobromae, vem se destacando na cultura. A doença se dissemina rapidamente e tem sido observada dizimando todo um pomar de mamoeiro, os sintomas consistem inicialmente em lesões encharcadas, apresentando desintegração dos tecidos e formação de pontuações, que sob condições predisponentes, evoluem circundando o caule, fazendo-o tombar. Existem poucas informações a respeito do desenvolvimento da doença e a prevenção é a melhor medida de controle. O controle químico já é utilizado quando a doença é detectada, mas não há produto registrado para esse patossistema em campo. A falta de conhecimento da interação patógeno-hospedeiro somada a utilização indevida e contínua desses produtos podem resultar no insucesso do controle. Estudos de sensibilidade a fungicida constataram isolados não sensíveis a esses produtos, fato que pode dificultar o manejo e o controle da doença, demonstrando a importância do estudo do comportamento desses isolados em plantas.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-17T15:11:31Z No. of bitstreams: 1 Claudeana Souza da Conceicao.pdf: 783432 bytes, checksum: fd59b60ffc3266d8d18f15005f8c14cc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-17T15:11:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Claudeana Souza da Conceicao.pdf: 783432 bytes, checksum: fd59b60ffc3266d8d18f15005f8c14cc (MD5) Previous issue date: 2013-07-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The combined effect of the antagonistic yeasts Rhodotorula aurantiaca LMA1, R. glutinis LMS and Pichia anomala CC-2 and silicon (Si) was evaluated in relation to the control of bacterial fruit blotch (Acidovorax citrulli) in seedlings and plants, and possible mechanisms of action involved in the control were analyzed. The incorporation of 1.41 g Si kg-1 (calcium silicate) into the substrate, together with foliar spraying with yeast (1.5 x 107 cells mL-1) and foliar spraying with 17 mM Si (potassium silicate) and the yeasts, separately or in combination, reduced the severity of the disease and protected seedlings and plants. These plants were inoculated with A. citrulli by foliar spraying (3.4 x 107 UFC mL-1) 24 h following the treatment. However, no additive or synergistic effects of the combined treatments were observed. The spraying of LMA1+Si and LMA1 resulted in the highest levels of control of bacterial fruit blotch in plants, and this level of control was higher than that provided by acibenzolar-S-methyl. Foliar spraying with LMA1 and Si, either separately or in combination, protected melon plants from infection by A. citrulli for 29 days. Increases in the activity of polyphenol oxidase (PFO) after foliar spraying with Si and LMA1, and increases of ascorbate peroxidase (APX) activity after foliar spraying with LMA1+Si and LMA1 are likely related to the induction of resistance to bacterial fruit blotch. / O efeito combinado de leveduras antagonistas (Rhodotorula aurantiaca LMA1, R. glutinis LMS e Pichia anomala CC-2) e silício (Si) foi avaliado em relação ao controle da mancha aquosa (Acidovorax citrulli) pela proteção de plântulas e plantas; e analisados possíveis mecanismos de ação envolvidos no controle. A incorporação de 1,41g Si kg-1 (silicato de cálcio) ao substrato e pulverização foliar com as leveduras (1,5 x 107 cels mL-1), assim como a pulverização com 17 mM Si (silicato de potássio) e leveduras, em combinação ou isoladamente, reduziram a severidade da doença, protegendo plântulas e plantas. As plantas foram inoculadas com A. citrulli por pulverização (3,4 x 107 UFC mL-1), 24 h após os tratamentos. No entanto, não foi verificado efeito aditivo ou sinergístico das combinações. A pulverização de LMA1+Si e LMA1 proporcionou os maiores níveis de controle da mancha aquosa em plantas, sendo superior ao acibenzolar-S-methyl. LMA1 e Si pulverizados em combinação ou não, protegeram as plantas de meloeiro da infecção por A. citrulli por 29 dias. Aumentos nos níveis das enzimas PFO pela pulverização de Si e LMA1 e APX por LMA1+Si e LMA1 estão provavelmente relacionados à indução de resistência a mancha aquosa.