Orientador: Ewerton Garcia de Oliveira Mima / Resumo: Um dos principais mecanismos de resistência microbiana são os sistemas de efluxo, que transportam medicamentos antimicrobiano para fora da célula. A eficácia de alguns agentes de inibição dos sistemas de efluxo tem sido reportada para reverter a resistência microbiana e também para potencializar as terapias antimicrobianas. Além disso, métodos alternativos aos agentes antimicrobianos convencionais têm sido investigados, como a Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (aPDT). O objetivo desse estudo foi avaliar in vitro o efeito da aPDT e de dois inibidores de sistemas de efluxo microbiano (curcumina e verapamil) na resistência à inativação de C. albicans. Foram utilizadas duas cepas de C. albicans, uma susceptível (CaS) e outra resistente (CaR) a fluconazol. Os parâmetros de inativação fúngica foram determinados submetendo-se culturas planctônicas de ambas as cepas à curcumina, ao verapamil, ao fluconazol e também à aPDT (mediada pela curcumina 40 μM (14,73 μg/mL) e luz de LED azul de ≅455 nm a 5,28 J/cm2). As duas cepas foram cultivadas e tratadas associando-se os agentes de inibição do efluxo ao fluconazol em concentrações não letais. Os dados de UFC/mL foram analisados pelos testes paramétricos t de Student, ANOVA/Welch e post-hoc de Games-Howell e pelo teste não paramétrico de Mann-Whitney (α=0,05; n=12). Os resultados demostraram que aPDT promoveu uma redução significativa (p<0,001) de 4,5 e 4,42 log10 para CaS e CaR, respectivamente. Para CaS, os valores de Concentrações Ini... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: One of the major mechanisms of microbial resistance is the efflux systems, or efflux pumps, present in the plasma membrane of microorganisms that carry an antimicrobial drug out of the cell. The efficacy of some inhibitors of efflux systems has been reported to reverse microbial resistance, including C. albicans, and also to potentiate antimicrobial therapies. In addition, alternative methods to conventional antimicrobial agents have been investigated, such as antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT). The objective of this study was to evaluate in vitro the effect of aPDT and two inhibitors of microbial efflux systems (curcumina and verapamil) on the resistance to inactivation of C. albicans. For this, two strains of C. albicans, one susceptible (CaS) and another resistant (CaR) to fluconazol were used. Fungal inactivation parameters were determined by subjecting planktonic cultures of both strains to curcumina, verapamil, fluconazol, and also aPDT (mediated by curcumin at 40 μM (14.73 μg/mL) and blue LED light of ≅455 nm and 5.28 J/cm2). These strains were then cultured and treated associating one of the efflux inhibitors with fluconazole using non-lethal concentrations. For the statistical analysis, the normality and the homogeneity of variances were evaluated by the Shapiro-Wilk and Levene tests, respectively. Data were analyzed by Student's t-tests, Welch-corrected ANOVA and Games-Howell post-hoc and Mann-Whitney non-parametric test (α = 0.05) (n = 12). aPDT promoted a s... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ana Claudia Pavarina / Banca: Marco Antonio Compagnoni / Banca: Ana Lucia Machado / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Karin Hermana Neppelenbroek / Resumo: Estes estudos in vivo tiveram como objetivos: 1 - avaliar a efetividade da terapia fotodinâmica (PDT) na inativação de Candida albicans em um modelo murino de candidose bucal; 2 - comparar a eficácia clínica e microbiológica da PDT com a da terapia antifúngica tópica (nistatina suspensão oral) no tratamento da estomatite protética, assim como identificar e determinar a prevalência das espécies de Candida dessa patologia. Na primeira investigação, camundongos foram imunossuprimidos com injeções subcutâneas de prednisolona. Tetraciclina foi fornecida na água de beber para promover alteração da microbiota bucal dos camundongos. Os animais foram sedados com injeção de cloridrato de clorpromazina e um swab oral embebido em uma suspensão de C. albicans (107 UFC/mL) foi esfregado na cavidade bucal dos animais. Quatro dias após a inoculação, a PDT foi realizada no dorso lingual utilizando administração tópica de Photogem® a 400, 500 ou 1000 mg/L e, após 30 minutos, iluminação com 305 J/cm² de luz de LED a 455 ou 630 nm. Posteriormente, a quantidade de fungos viáveis foi determinada (UFC/mL) e analisada pelos testes de ANOVA e Holm- Sidak (P < 0,05). Os camundongos foram sacrificados, e as línguas foram removidas e processadas para avaliação histológica de presença de fungos e reação inflamatória. No estudo clínico, pacientes (n = 40) foram aleatoriamente atribuídos a um dos seguintes grupos de 20 indivíduos cada; grupo NYS: pacientes receberam tratamento tópico com nistatina (100.000 UI) quatro vezes ao dia por 15 dias e; grupo PDT: prótese total superior e o palato dos pacientes foram borrifados pelo Photogem® a 500 mg/L e, após 30 minutos de incubação, iluminado por luz de LED a 455 nm (37,5 e 122 J/cm2, respectivamente) três vezes por semana durante 15 dias. Culturas micológicas de amostras das próteses e das mucosas palatinas e fotografias... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: These in vivo studies evaluated 1 - the effectiveness of photodynamic therapy (PDT) on the inactivation of Candida albicans in a murine model of oral candidosis; 2 - compared the clinical and mycological efficacy of PDT with that of topical antifungal therapy (nystatin oral suspension) for the treatment of denture stomatitis (DS) as well as to identify and determine the prevalence of Candida species in DS. In the first investigation, mice were immunosupressed with subcutaneous injections of prednisolone. Tetracycline hydrochloride on drinking water was managed to change the oral microflora. They were kept in a sedative state after injection of chlorpromazine chloride and a suspension of C. albicans (107 CFU/mL) was swabbed in the oral cavity. Four days after oral infection, PDT was performed on the dorsum of the tongue using a topical administration of Photogem® at 400, 500 or 1000 mg/L and, after 30 minutes, illumination with 305 J/cm² of LED light at 455 or 630 nm. Then, the number of surviving yeast was determined (CFU/mL) and analyzed by ANOVA and Holm- Sidak tests (P < 0.05). Animals were sacrificed, the tongues surgically removed and processed for histological evaluation of yeast presence and inflammatory reaction. In the clinical trial, patients (n = 40) were randomly assigned to one of two groups of 20 subjects each; NYS group: patients received topical treatment with nystatin (100,000 IU) four times daily for 15 days; PDT group: maxillary denture and palate of patients were sprayed with 500 mg/L of Photogem® and, after 30 min of incubation, illuminated by LED light at 455 nm (37.5 and 122 J/cm2, respectively) three times a week for 15 days. Mycological cultures taken from dentures and palates and standard photographs of the palates were performed at baseline (day 0), at the end of the treatment (day 15) and at the follow-up (days 30, 60 and 90 after the beginning... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Valdir Gouveia Garcia / Banca: Giuseppe Alexandre Romito / Banca: José Roberto Pinto / Banca: Maria José Hitomi Nagata / Banca: Álvaro Francisco Bosco / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar a influência da terapia fotodinâmica (PDT) como coadjuvante ao tratamento não cirúrgico da doença periodontal (DP) experimentalmente induzida em ratos tratados ou não com nicotina. Cento e oitenta ratos foram divididos em 2 grupos de 90 animais cada. Os do Grupo Controle (C) receberam aplicações subcutâneas de soro fisiológico; os do Grupo Nicotina (N) receberam aplicações subcutâneas de nicotina. As injeções foram realizadas duas vezes ao dia e iniciadas 30 dias antes da indução da DP, continuando pós tratamento periodontal até os respectivos períodos de sacrifício. A DP foi induzida através da colocação de ligadura com fio de algodão na região dento-gengival dos primeiros molares inferiores esquerdos. Após 7 dias da indução, a ligadura foi removida e, os animais foram divididos em subgrupos de acordo com os seguintes tratamentos locais: Tratamento I - raspagem e alisamento radicular (RAR) e irrigação com soro fisiológico; Tratamento II - RAR e irrigação com azul de toluidina O (TBO) e Tratamento III - RAR, irrigação com TBO e, após 1 minuto, aplicação do laser em baixa intensidade (LLLT) (GaAsAl, 660 nm, 4J), realizando a PDT. Dez animais de cada subgrupo foram sacrificados aos 7, 15 e 30 dias. Os espécimes foram processados laboratorialmente e analisados histológica, histométrica e imunoistoquímicamente. Aos 7, 15 e 30 dias, em ambos os grupos, o tratamento RAR apresentou um tecido conjuntivo desorganizado, com elevado número de neutrófilos e discreto número de fibroblastos. O tecido ósseo apresentou áreas de necrose e trabéculas ósseas finas. Nos períodos de 7 e 15 dias os animais dos grupos C e N, tratados pela PDT, apresentaram um tecido conjuntivo bem desenvolvido com moderado número de fibroblastos, discreto infiltrado inflamatório crônico e tecido ósseo moderadamente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the influence of photodynamic therapy (PDT) as an adjunct to non-surgical treatment of periodontal disease (PD) experimental induced in rats treated with or without nicotine. One hundred and eighty rats were divided into 2 groups of 90 animals each. Control group (C) received subcutaneous infusions of saline, group of Nicotine (N) received subcutaneous infusions of nicotine. The injections were performed twice a day and started 30 days before induction of PD, continuing after periodontal treatment until their period of sacrifice. PD was induced by placing cotton ligature in the dento-gingival region of the left lower first molars. After 7 days of induction, the ligature was removed and the animals were divided into subgroups according to the following local treatments: treatment I - scaling and root planing (SRP) and irrigation with saline; Treatment II - SRP and irrigation with O toluidine blue (TBO) and Treatment III - SRP, irrigation with TBO and 1 minute after application of low intensity laser therapy (LLLT) (GaAlAs, 660 nm, 4J), performing the PDT. Ten animals of each subgroup were sacrificed at 7, 15 and 30 days. The laboratory specimens were processed and analyzed histologically, histometrically and immunohistochemically. At 7, 15 and 30 days in both groups, treatment SRP showed a disorganized tissue with high numbers of neutrophils and a small number of fibroblasts. The bone tissue showed areas of necrosis and trabecular bone thin. At 7 and 15 days the animals in groups C and N, treated by PDT, showed a well developed connective tissue with a moderate number of fibroblasts, mild chronic inflammatory infiltrate and bone moderately developed. At 30 days, they presented an intact periodontal ligament, and organized collagen fibers in parallel. The connective tissue was well-developed, healthy and with no inflammatory... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-04-28 / INTRODUÇÃO: Rejuvenescimento fotodinâmico refere-se ao tratamento do fotoenvelhecimento e das queratoses actínicas. OBJETIVO: Avaliar a eficácia da terapia fotodinâmica com ácido aminolevulínico a 20% (ALA) ¾ tópico e luz intensa pulsada no tratamento das queratoses actínicas e do fotoenvelhecimento facial. MÉTODOS: Quarenta e três pacientes com idade média 71,3 anos, fototipos de pele I e IV divididos em: Controle (aplicação LIP/18J); Tratamento-I (ALA incubado por duas horas; ativado por duas passagens de LIP/16J); Tratamento-II (ALA; duas passagens de LIP/18J), foram avaliados por dois observadores, clínica e fotograficamente, no Pré, 48 horas, 8 e 12 semanas após, pela escala de Griffiths. Cinco queratoses actínicas foram marcadas como alvo para contagem no Pós- Tratamento, sendo uma submetida à biopsia antes e depois do tratamento, para avaliação anatomopatológica de atipias e perda de polaridade. RESULTADOS: Testes não-paramétricos mostraram melhora significativa (rugas finas, alterações texturais, pigmentação irregular) nos Grupos-Tratamento-I/II. No Grupo Controle, significância apenas para alterações pigmentares. Queratoses actínicas tiveram redução maior nos Grupos II (68, 4%) e I (51,2%) em relação ao Controle (5%). Houve redução significativa da gravidade das atipias e perda de polaridade nos Grupos-TratamentoI/II em relação ao controle. CONCLUSÃO: A terapia fotodinâmica, com ácido 5aminolevulínico e luz intensa pulsada, mostrou-se efetiva no tratamento do fotoenvelhecimento e das queratoses actínicas faciais. O tratamento das queratoses actínicas foi mais efetivo com uso de maior energia. / BACKGROUND: Photodynamic rejuvenation is the term used to the treatment of actinic keratosis and photodamage with photodynamic therapy. OBJECTIVE: Evaluate the efficacy of photodynamic therapy with aminolevulinic acid and intense pulsed light in the treatment of actinic keratosis and photodamage. METHODS: Fourty three patients mean age 71,3 years, were randomized in three groups: Control (IPL 18J); Treatment I (ALA+ IPL 16J); and Treatment II ( ALA+ IPL 18J) and evaluated clinically an photographically by two observers in Pre, 48hs, 8 weeks and 12 weeks Post-Treatment using Griffth’s Photonumeric Scale. Five actinic keratosis were marked as target in Pre-Treatment and biopsies Pre and Post-Treatment were done in one lesion to evaluate atypias and loss of cellular polarity. RESULTS: Non parametric tests showed marked improvement in mottled pigmentation, texture fine wrinkles in Groups Treatment I and II. In Control Group improvement only in mottled pigmentation. Actinic Keratosis clearance in Groups Treatment I and II were 51,2% and 68,4% respectively, whereas in Group Control it was 5%. In relation to Control Group, Groups Treatment I and II showed significant reduction of atypias and improvement in loss of cellular polarity. CONCLUSIONS: Photodynamic therapy with aminolevulinic acid and intense pulsed light is effective in the treatment of photodamage and actinic keratosis. The resolution of actinic keratosis was better with higher levels of energy. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-24Bitstream added on 2014-06-13T19:41:01Z : No. of bitstreams: 1 ferreira_i_dr_botfmvz.pdf: 1207855 bytes, checksum: d7da521647b5501064e91ad55665b498 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma modalidade terapêutica utilizada para o tratamento de neoplasia maligna que induz a morte celular por necrose ou apoptose. Estudos in vitro e in vivo são realizados para avaliar o sucesso da terapia, bem como as respostas e alterações celulares ocorridas. Esse trabalho tem por objetivos avaliar a expressão dos genes BCL-2, BAX e HER-2 e de suas proteínas, relacionados à proliferação celular e apoptose, na eficácia da TFD, avaliar qualitativamente o grau de necrose causado pela TFD em diferentes doses e validar a técnica de PCR em tempo real com a imunohistoquímica em tumores de mama tratados por TFD. Para tal 28 ratas da linhagem Sprague-Dawley (SD) receberam dose única de DMBA (80mg/kg, via gavagem) para indução do tumor de mama, quando da manifestação clínica da neoplasia foi realizado exame citológico e os animais foram divididos em 4 grupos G1: grupo controle, tumor de mama não tratado; G2 tratado com TFD utilizando-se iluminação intersticial com dose de luz de 50J/cm; G3 dose de luz de 100J/cm, G4 dose de luz de 150J/cm. Amostras dos tumores foram colhidas para realização de exame histopatológico, imuno-histoquímica e qRT-PCR. Através da imuno-histoquímica observou-se que os tumores mamários induzidos químicamente em ratas SD superexpressam Bcl-2 e Bax e tem baixa expressão de Her-2 e que isso não se altera com os diferentes tratamentos (G2,G3 e G4) quando comparado com o grupo controle (G1). Já através do qRT-PCR observou –se que o padrão de expressão de BCL-2, BAX e HER-2 não se altera nos diferentes tratamentos (G2,G3 e G4) quando comparado ao controle (G1). Não há evidência estatística de que a TFD influencie a expressão proteíca e gênica de Bcl-2, Bax e Her-2 nas condições do experimento / Photodynamic therapy (PDT) is a therapeutic procedure used to treat malignancy which induces cell death by necrosis or apoptosis. In vitro and in vivo are performed to evaluate the success of therapy, as well as the responses and cellular changes that occur. This study aims to evaluate the expression of genes BCL-2, BAX and HER-2 and its protein related to cell proliferation and apoptosis in the efficacy of PDT, qualitatively assess the degree of necrosis caused by PDT at different doses and validate the technique of real time PCR with immunohistochemistry in breast tumors treated by PDT. For this 28 Wistar female Sprague-Dawley (SD) received a single dose of DMBA (80mg/kg by gavage) for induction of breast tumor, when the tumor clinical cytological examination was performed and the animals were divided into 4 groups G1: control group, untreated breast tumor; G2 treated with PDT using interstitial illumination with light dose of 50J/cm; G3 dose 100J/cm light, G4 light dose of 150J/cm. Samples of tumors were harvested for histological examination, immunohistochemistry and qRT-PCR. By immunohistochemistry it was found that the chemically induced mammary tumors in female rats SD overexpress Bcl-2 and Bax and has low expression of Her-2, and it does not change in either group (G2, G3 and G4) compared with the control group (G1). Already using the qRT-PCR showed that the expression pattern of BCL-2, BAX and HER-2 is not changed in different treatments (G2, G3 and G4) compared to control (G1). There is no statistical evidence that PDT influence the expression of gene and protein of Bcl-2, Bax and Her-2 in the experimental conditions

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-13Bitstream added on 2014-06-13T19:26:31Z : No. of bitstreams: 1 fernandes_la_me_araca.pdf: 1537611 bytes, checksum: 1b7f4b68989450019c5e001ea1de7401 (MD5) / O objetivo deste estudo foi avaliar histológica e histometricamente a influência da terapia fotodinâmica (PDT) no tratamento da doença periodontal induzida em ratos tratados ou não com corticóide. Cento e oitenta ratos foram divididos em 2 grupos de 90 animais. Os do Grupo A sofreram aplicações subcutâneas de soro fisiológico e os do Grupo B, aplicações subcutâneas de corticóide. A doença periodontal foi induzida por ligadura e após 7 dias foi removida e os animais divididos em subgrupos que receberam os tratamentos: I - raspagem e alisamento radicular (RAR) e irrigação com soro fisiológico; II - RAR e irrigação com azul de toluidina O (TBO); III – tratamento similar ao do grupo II e, após 1 minuto, aplicação do laser de ArGaAl (660 nm, 4J), realizando a terapia fotodinâmica (PDT). Dez animais de cada subgrupo foram sacrificados aos 7, 15 e 30 dias. Os espécimes foram processados laboratorialmente para análises histológica e histométrica. O tratamento com RAR (Grupos A e B) mostrou, aos 7, 15 e 30 dias, elevado número de neutrófilos e crista óssea com trabéculas finas e desorganizadas comparado ao TBO e PDT. No grupo A, a perda óssea (PO) foi significativamente maior (p<0,05) no tratamento com RAR (1,12±0,13; 0,90±0,27; 1,00±0,16) que no TBO no período de 7 dias (0,67±0,14) e quando comparado ao PDT em todos os períodos experimentais (0,54±0,06; 0,56±0,13; 0,53±0,05). No grupo B, houve maior perda óssea no tratamento com RAR (1,65±0,15; 1,71±0,11; 1,5±0,25) em relação ao TBO (0,74±0,12; 1,06±0,10; 0,75±0,31) e PDT (0,60±0,10; 0,59±0,13; 0,57±0,10) em todos períodos avaliados. O tratamento com PDT apresentou PO significativamente menor (p<0,05) que com TBO (15 dias) nos grupos A e B. Animais do grupo B, tratados com a PDT, demonstraram menor PO comparados aos animais do Grupo A, tratados pela RAR, aos 7 e 15 dias. / The purpose of this study was to evaluate histological and histometrically the influence of photodynamic therapy (PDT) in the treatment of periodontal disease induced in rats treated with corticosteroids or not. One hundred and eighty rats were divided into 2 groups of 90 animals. The Group's A suffered applications of subcutaneous saline in the Group B, subcutaneous application of corticosteroids. The periodontal disease was induced by ligation and after 7 days was removed and the animals divided into subgroups who received the treatments: I - scraping and hair root (RAR) and irrigation with saline; II - RAR, and irrigation with toluidine blue O ( TBO); III - treatment similar to the group II and, after 1 minute, ArGaAl of application of laser (660 nm, 4J), performing photodynamic therapy (PDT). December animals of each subgroup were sacrificed at 7, 15 and 30 days. The laboratory specimens were processed for histological analysis and histométrica. Treatment with RAR (Groups A and B) showed, at 7, 15 and 30 days, large numbers of neutrophils and crest bone trabeculae with fine and desorganizadas compared to TBO and PDT. In group A, bone loss (PP) was significantly higher (p <0.05) in treatment with RAR (1.12 ± 0.13, 0.90 ± 0.27, 1.00 ± 0.16), TBO in the period of 7 days (0.67 ± 0.14) and compared to PDT in all experimental periods (0.54 ± 0.06, 0.56 ± 0.13, 0.53 ± 0.05 ). In group B, there was greater bone loss in the treatment with RAR (1.65 ± 0.15, 1.71 ± 0.11, 1.5 ± 0.25) compared to TBO (0.74 ± 0.12; 1.06 ± 0.10, 0.75 ± 0.31) and PDT (0.60 ± 0.10, 0.59 ± 0.13, 0.57 ± 0.10) in all periods evaluated. Treatment with PDT presented PP significantly lower (p <0.05) than with TBO (15 days) in groups A and B.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-16Bitstream added on 2014-06-13T20:38:35Z : No. of bitstreams: 1 trindade_fz_me_arafo.pdf: 753799 bytes, checksum: 6cf9c912e4ce2332952d19081bfcbfa7 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A utilização da PDT para tratamento de diferentes tipos de infecções, tal como a candidose bucal, tem sido estudada. Entretanto, poucos são os dados científicos que relatam os possíveis efeitos tóxicos dessa terapia. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da irradiação na mucosa bucal de ratos com LED azul (de 460 nm e potência de 200 mW/cm2) em presença do fotossensibilizador (FS) Photogem®, em duas diferentes concentrações (500 mg/L e 1000 mg/L). Para isso, foram utilizados 101 ratos (Rattus Norvegicus Albinus Holtzman) distribuídos em 6 grupos, de acordo com os seguintes tratamentos: Grupo 1 – controle; Grupo 2 – aplicação do FS (500 mg/L); Grupo 3 – aplicação do FS (500 mg/L) e irradiação com LED; Grupo 4 - aplicação do FS (1000 mg/L); Grupo 5 – aplicação do FS (1000 mg/L) e irradiação com LED; e Grupo 6 – irradiação com LED. O FS foi aplicado por 30 minutos (tempo de pré-incubação) e o tempo de irradiação da mucosa foi de 20 minutos (dose de 144 J/cm2). Decorridos os 4 períodos de avaliação propostos (0 dia, 1dia, 3 dias e 7 dias), os animais tiveram a mucosa palatina fotografada para análise macroscópica, sendo então imediatamente sacrificados para remoção cirúrgica do palato e posterior análise em microscopia de luz e de fluorescência. Um mapeamento térmico foi realizado a fim de avaliar a variação de temperatura ocorrida no tecido durante a irradiação com LED. Macroscopicamente, em todos os grupos experimentais e para todos os períodos de avaliação propostos na presente pesquisa, observou-se que a mucosa apresentava-se intacta, com aspecto de normalidade semelhante ao do Grupo 1 (controle). Microscopicamente, alterações teciduais, caracterizadas especialmente por discreta inflamação, puderam ser observadas na mucosa palatina de apenas 4 de um total de 80 animais submetidos a PDT... / The use of PDT has been investigated for the treatment of different types of infection, like oral candidosis. There are, however, few research-based data that report the possible toxic effects of this therapy. Therefore, this study evaluated the effects of irradiating the palatal mucosa of rats with blue LED (460 nm; 200 mW/cm²) in the presence of the photosensitizer Photogem® at two concentrations (500 and 1000 mg/L). Then, 101 rats (Rattus norvegicus albinus Holtzman) were randomly distributed in six groups, according to the treatment performed on the palatal mucosa: Group 1: control; Group 2: Photogem® (500 mg/L); Group 3: Photogem® (500 mg/L) + blue LED; Group 4 - Photogem® (1000 mg/L); Group 5: (1000 mg/L) + blue LED; and Group 6: blue LED. The exposure times to the photosensitizing agent and to the light source were 30 min (pre-incubation time) and 20 min (144 J/cm2 energy density), respectively. At 0, 1, 3 and 7 days posttreatment, the animals had their palatal mucosa photographed for macroscopic analysis and were immediately sacrificed. The palate was removed for further analysis by light and fluorescence microscopy. Thermal mapping was made to evaluate the temperature change occurred in the tissue during LED irradiation. In all experimental groups and periods, the macroscopic analysis revealed intact mucosa with normal aspect similar to that of Group 1 (control). Tissue alterations, characterized primarily by a mild inflammation, were observed microscopically on the mucosa of only 4 out of 80 animals subjected to PDT. Photosensitizer penetration into the treated mucosa was identified by the fluorescence emitted by Photogem® and was limited to the epithelial layer. The thermal mapping revealed a temperature increase from 35 to 41ºC during the 20-min irradiation. In conclusion, under the tested conditions, PDT using Photogem® at 500 and 1000 mg/L concentrations... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Noeme Sousa Rocha / Banca: Júlio Lopes Sequeira / Banca: Carla Adriene da Silva Franchi / Banca: Luis Fernando Barbisan / Banca: Renata de Azevedo Canevari / Resumo: A Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma modalidade terapêutica utilizada para o tratamento de neoplasia maligna que induz a morte celular por necrose ou apoptose. Estudos in vitro e in vivo são realizados para avaliar o sucesso da terapia, bem como as respostas e alterações celulares ocorridas. Esse trabalho tem por objetivos avaliar a expressão dos genes BCL-2, BAX e HER-2 e de suas proteínas, relacionados à proliferação celular e apoptose, na eficácia da TFD, avaliar qualitativamente o grau de necrose causado pela TFD em diferentes doses e validar a técnica de PCR em tempo real com a imunohistoquímica em tumores de mama tratados por TFD. Para tal 28 ratas da linhagem Sprague-Dawley (SD) receberam dose única de DMBA (80mg/kg, via gavagem) para indução do tumor de mama, quando da manifestação clínica da neoplasia foi realizado exame citológico e os animais foram divididos em 4 grupos G1: grupo controle, tumor de mama não tratado; G2 tratado com TFD utilizando-se iluminação intersticial com dose de luz de 50J/cm; G3 dose de luz de 100J/cm, G4 dose de luz de 150J/cm. Amostras dos tumores foram colhidas para realização de exame histopatológico, imuno-histoquímica e qRT-PCR. Através da imuno-histoquímica observou-se que os tumores mamários induzidos químicamente em ratas SD superexpressam Bcl-2 e Bax e tem baixa expressão de Her-2 e que isso não se altera com os diferentes tratamentos (G2,G3 e G4) quando comparado com o grupo controle (G1). Já através do qRT-PCR observou -se que o padrão de expressão de BCL-2, BAX e HER-2 não se altera nos diferentes tratamentos (G2,G3 e G4) quando comparado ao controle (G1). Não há evidência estatística de que a TFD influencie a expressão proteíca e gênica de Bcl-2, Bax e Her-2 nas condições do experimento / Abstract: Photodynamic therapy (PDT) is a therapeutic procedure used to treat malignancy which induces cell death by necrosis or apoptosis. In vitro and in vivo are performed to evaluate the success of therapy, as well as the responses and cellular changes that occur. This study aims to evaluate the expression of genes BCL-2, BAX and HER-2 and its protein related to cell proliferation and apoptosis in the efficacy of PDT, qualitatively assess the degree of necrosis caused by PDT at different doses and validate the technique of real time PCR with immunohistochemistry in breast tumors treated by PDT. For this 28 Wistar female Sprague-Dawley (SD) received a single dose of DMBA (80mg/kg by gavage) for induction of breast tumor, when the tumor clinical cytological examination was performed and the animals were divided into 4 groups G1: control group, untreated breast tumor; G2 treated with PDT using interstitial illumination with light dose of 50J/cm; G3 dose 100J/cm light, G4 light dose of 150J/cm. Samples of tumors were harvested for histological examination, immunohistochemistry and qRT-PCR. By immunohistochemistry it was found that the chemically induced mammary tumors in female rats SD overexpress Bcl-2 and Bax and has low expression of Her-2, and it does not change in either group (G2, G3 and G4) compared with the control group (G1). Already using the qRT-PCR showed that the expression pattern of BCL-2, BAX and HER-2 is not changed in different treatments (G2, G3 and G4) compared to control (G1). There is no statistical evidence that PDT influence the expression of gene and protein of Bcl-2, Bax and Her-2 in the experimental conditions / Doutor

A Fotoquimioterapia (FQT) vem sendo usada no tratamento de várias doenças, inclusive câncer, com a vantagem de ser menos agressiva, possuindo efeitos colaterais negativos desprezíveis. Esta técnica envolve a combinação de uma fonte de luz visível e de um fotossensibilizador (FS), que é reativo apenas sob a irradiação com luz adequada, e que se acumula preferencialmente no tecido doente. Uma ideia para deixar essa técnica mais eficiente é potencializar esta última característica do FS com uso de um carreador que tenha afinidade com tecidos doentes. Pensamos na hipótese de usar a albumina do soro como carreador uma vez que ela é uma proteína intrínseca do organismo, tem alta afinidade com os tecidos tumorais e possui sítios para ligar vários compostos extrínsecos. Como modelo usamos a albumina de soro bovino (ASB). Como FS utilizamos acridina laranja, nitrofurantoína, corantes ciânicos com dois cromóforos e protoporfirina IX (PpIX) sintética e extraída de glândulas Harderianas de ratos da linhagem Wistar (PpIX endógena). Foram analisadas as características de ligação entre os FS e a ASB e seus efeitos nas características fotofísicas dos FS em função da sua estrutura, utilizando espectroscopias de absorção ótica, fluorescência estática e resolvida no tempo e a técnica de microscopia de imagens por tempo de vida da fluorescência (FLIM). Foi mostrado que a ligação com ASB induz ao deslocamento batocrômico dos espectros de absorção e da fluorescência, aumentando a intensidade e o tempo de vida de fluorescência dos FS. Características como carga positiva, estrutura linear e tamanho pequeno da molécula do FS favorecem sua ligação com a ASB. Uma comparação entre PpIX sintética e endógena mostrou que a formação de um complexo da PpIX com estruturas anfifílicas também aumenta a probabilidade da sua ligação com a ASB. Os resultados obtidos mostraram que a ASB se liga efetivamente aos FS de diferentes estruturas e pode ser usada como carreador dos mesmos para tecidos tumorais. / Photochemotherapy (PCT) is used for the treatment of various diseases, including cancer, with the advantage of being less aggressive with reduced adverse effects. This technique includes the use of a visible light source and a photosensitizer (PS), which is reactive only under light exposure and localizes preferably in abnormal tissues. To make this technique more efficient it is necessary to increase the PS content in these tissues using a carrier which possesses affinity with these tissues and is able to bind PS. A good opportunity is to use serum albumin as a carrier since it is an intrinsic protein, has high affinity to tumor tissues and possesses sites for binding of various extrinsic compounds. In this work the bovine serum albumin (BSA) was used as a carrier model. Acridine orange, nitrofurantoin, cyanine dyes with two chromophores and protoporphyrin IX synthetic and extracted from Harderian glands of Wistar line rats (endogenous) were used as PS. The characteristics of the PS binding with BSA and the effect of this interaction on PS photophysical properties were studied using optical absorption, steady-state and time resolved fluorescence spectroscopies, and fluorescence lifetime image microscopy (FLIM). It was demonstrated that PS binding with BSA produces a bathochromic shift in the PS absorption and fluorescence spectra and increases its fluorescence intensity and lifetime. The positive charge, linear structure and small size of the PS molecule favors its binding with BSA. A comparison between synthetic and endogenous PpIX demonstrates that complexation of PpIX molecule with an amphiphilic structure increases the probability of its binding with BSA. The obtained results demonstrate that BSA binds effectively PS with different molecular structures and it is promising for their transport to tumor tissue.

Este estudo teve o objetivo de comparar os efeitos da biomodificação radicular por ácido cítrico associado à tetraciclina (AC) ou terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) no recobrimento de recessões gengivais pela técnica do enxerto de tecido conjuntivo subepitelial (ETCS). Para o estudo paralelo foram selecionados 60 sítios em 17 pacientes com recessões de classe I e II de Miller de 2 a 5 mm, múltiplas e isoladas, as quais foram divididas em 3 grupos: grupo controle (C) - apenas raspagem, grupo AC raspagem e, aplicação de gel de ácido cítrico associado à tetraciclina (90s) e o grupo aPDT - raspagem e aplicação da terapia fotodinâmica antimicrobiana (Azul de toluidina O 100g/ml + laser vermelho). Os parâmetros clínicos profundidade de sondagem (PS), nível clínico de inserção (NCI), altura da recessão (AR), largura mucosa ceratinizada (LMC), espessura de mucosa ceratinizada (EMC), índice de sangramento à sondagem (ISS), índice de placa (IPI) e porcentagem de recobrimento radicular (%REC) foram avaliados por um examinador cego e calibrado no baseline e 3, 6 e 12 meses de pós-operatório. Avaliou-se a hiperestesia dentinária (HIPER) e a percepção estética (EST) do paciente através de escala analógica visual no baseline e após 7 e 14 dias e 1, 3, 6 e 12 meses. A análise estatística dos dados de NCI foi feita pelo teste ANOVA complementado por Tukey. O teste de Friedman complementado por Wilcoxon foi aplicado para análise intra-grupos. O teste de Kruskal-Wallis foi aplicado para as diferenças entre os grupos, complementado por comparações múltiplas entre os três grupos. Para a %REC foi realizado o teste de Kruskal-Wallis complementado por Dunnet (p<0,05). Observou-se ganho do NCI em todos os grupos, mas este ganho foi maior para os grupos AC (0,55±1,68) e aPDT (0,80±2,11) em relação ao C (2,50±1,99) (p<0,05). Houve redução na AR em todos os grupos, porém o grupo AC (0,40±0,62) teve maior redução quando comparado C (1,15±1,04) (p<0,05). Houve aumento na LMC em todos os grupos e aumento na EMC também em todos os grupos, sendo que a EMC nos grupos aPDT (2,80±0,733) e AC (2,33±0,60) foram iguais com melhores resultados que o C (1,99±0,65) (p<0,05). Para a PS não foram observadas diferenças significantes entre os grupos e nem entre os períodos (p>0,05). A %REC foi maior nos grupos AC (82%±30%) e aPDT (82%±28%) do que no grupo C (58%±40%) (p<0,05). De maneira geral C, AC e aPDT foram semelhantes entre si e entre eles ao longo do tempo para o ISS e IPI (p>0,05). Houve redução significante da HIPER ao longo do tempo e entre os grupos, sendo que em AC (1,20±2,23) e aPDT (0,70±1,15) a diminuição da sensibilidade foi maior do que em C (2,63±2,22) (p<0,05). Houve melhora na EST ao longo do tempo e para o grupo AC (9,40±0,96) foi maior do que o C (8,58±1,07) (p<0,05), sendo que o grupo aPDT foi igual ao C. Concluiu-se que o uso de biomodificadores radiculares, como o AC e aPDT favorecem o recobrimento de recessões, resultando em redução da hipersensibilidade dentinária, maior porcentagem de recobrimento radicular e mais sítios com recobrimento completo, mantendo os resultados a longo prazo. / The aim of this study was to compare root biomodification by a combination of citric acid with tetracycline (CA) or antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) on root coverage by subepithelial connective tissue graft (SCTG). Sixty sites with Millers class I or II recessions were divided in three groups: Control (C) scaling only, CA scaling and root conditioning with a combination of citric acid and tetracycline (gel 90s), aPDT scaling and antimicrobial photodynamic therapy (toluidine blue O 100 g/ml and red laser). Periodontal clinical parameters as probing depth (PD), clinical attachment level (CAL), recession height (RH), keratinized mucosa height (KMH), keratinized mucosa width (KMW), bleeding on probing (BOP), plaque index (PI) and percentage of root coverage (%RC) were evaluated by a blinded calibrated examiner at baseline, 3, 6, 12 months. Dentinal hyperestesia (HYPER) and patient esthetic perception (EST) were recorded in a visual analogic scale at baseline, 7 and 14 days, 1, 3, 6,and 12 months. Statistical analysis of CAL values was done with ANOVA complemented by Tukey. Friedmans complemented by Wilcoxons test evaluated intragroup data, while Kruskal-Wallis was applied for intergroup data. Comparison for %RC was done by Kruskal-Wallis complemented by Dunnet (p<0.05). Reduction in CAL was observed in all groups, with higher numbers for CA (0.55±1.68) and aPDT (0.80±2.11) in relation to C (2.50±1.99) (p<0.05). A higher reduction in RH was observed for CA (0.40±0.62) compared to C (1.15±1.04) (p<0.05). There was an improvement of KMH and KMW for all groups, but with higher values of KMW for aPDT (2.80±0.733) and CA (2.33±0.60) in relation to C (1.99±0.65) (p<0.05). There were no differences for PD (p>0.05). There was a significant higher %RC for CA (82%±30%) and aPDT (82%±28%) in relation to C (58%±40%) (p<0.05). In general, BOP and PI were similar for all groups and periods (p>0.05). There was a significant reduction in hyperestesia along time, but for CA (1.20±2.23) and aPDT (0.70±1.15) the reduction was higher than C (2.63±2.22) (p<0.05). Esthetic perception was improved along time with higher values for CA (9.40±0.96) than C (9.40±0.96) (p<0.05). In conclusion, root biomodification agents as CA and aPDT favored recession coverage by STCG, resulting in reduction of dentin hypersensitivity, higher percentage of root coverage and more sites with total coverage. Additionally, these results had a long-term stability.