Orientador: Janaina Habib Jorge / Banca: Ana Cláudia Pavarina / Banca: Nara hellen Campanha Bombarda / Resumo: Estudos têm sido conduzidos com o intuito de prevenir a formação do biofilme em biomateriais ou buscar terapias alternativas para o tratamento de doenças decorrentes da instalação do biofilme. Como terapia alternativa, este estudo avaliou (1) a citotoxicidade da terapia fotodinâmica (PDT), através da utilização de queratinócitos humanos co-cultivados com Candida albicans. Em relação à prevenção da formação do biofilme, (2) foi avaliada a citotoxicidade de nanopartículas (NP) de tungstato de prata (Ag2WO4) e de molibdato de prata (Ag2MoO4), em solução e como revestimento de biomateriais. No estudo 1, a co-cultura foi realizada utilizando uma membrana Transwell, em que células e micro-organismos cresceram separadamente durante 24h, e ficaram em contato por mais 24h. Após este período, a PDT foi realizada utilizando-se a curcumina como fotossensibilizador. As seguintes condições foram testadas: P+ L+; P- L+; P+ L; P- L. Além disso, como controle negativo, três membranas de cada placa foram destinadas apenas ao crescimento de microorganismos e outros três poços para o crescimento de células separadamente, com seus respectivos meios. A proliferação celular, foi avaliada através dos testes Alamar Blue, MTT, XTT e UFC. Para o estudo 2, as NP foram sintetizadas e caracterizadas através de Microscopia Eletrônica de Varredura e Difração de Raios X. A partir da confecção das NP, foram feitas as soluções e o revestimento de titânio (Ti), zircônia (Zi), resina acrílica (RA) e silicone (Si). Para a realização do teste de citotoxicidade, 100 µL da suspensão composta por 1,5 x 104 células/ml (HaCat) foram colocados em cada compartimento de uma placa com 96 orifícios, incubada em estufa com 5% de CO2, a 37ºC por 24 horas. Após tal período de incubação, o meio de cultura foi desprezado, permanecendo as células aderidas no fundo da placa...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Studies have been conducted in order to prevent biofilm formation on biomaterials or seek alternative therapies for the treatment of diseases caused by biofilm installation. As an alternative therapy, this study evaluated (1) the cytotoxicity of photodynamic therapy (PDT) by the use of co-cultured human keratinocytes with Candida albicans (Ca). In relation to prevention of biofilm formation, (2) the cytotoxicity was evaluated nanoparticles (NP) silver tungstate (Ag2WO4) and silver molybdate (Ag2MoO4), in solution and as a biomaterial coating. In study 1, the co-culture was performed using a Transwell membrane, and cells in which micro-organisms grown separately for 24 h, and were in contact for a further 24h.After this period, PDT was performed using curcumin as a photosensitizer. The following conditions were tested: P+ L+; P- L+; P+ L; P- L. In addition, as a negative control, three membranes of each plate were assigned only to the growth of microorganisms and another three wells for cell growth separately with respective means. Cell proliferation was evaluated by testing the Alamar Blue, MTT, XTT, and CFU. For the study 2, the NP were synthesized and characterized by scanning electronic microscopy and X-ray diffraction. Since the making of the NP, they were made solutions and the titanium coating (Ti), zirconium (Zi), acrylic resin (RA) and silicon (Si). To perform the cytotoxicity assay, 100 µL of suspension composed of 1.5 x 104 cells / mL (HaCaT) were placed in each compartment of a plate with 96 wells, incubated in an incubator with 5% CO2 at 37 ° C for 24 hours. After this incubation period, the culture medium was discarded, remaining adhered cells at the bottom of the wells. 100 µL of culture medium containing the nanoparticles in solution and the extracts were placed on each plate hole. The plate was incubated for another 24 hours. Cell proliferation was assessed using the Alamar ... (Complete abstract electronic access below) / Mestre

Orientador: Lívia Nordi Dovigo / Banca: Ewerton Garcia de Oliveira Mima / Banca: Clovis Wesley Oliveira de Souza / Resumo: Este estudo teve por finalidade: I. estabelecer um protocolo reprodutível utilizando a metodologia dos halos de precipitação em meio Ágar para avaliação da produção de fosfolipase e proteinase pela espécie Candida albicans (C. albicans); II. analisar a expressão dos fatores de virulência de Ca após inativação fotodinâmica (IF) mediada pela curcumina (CUR). No primeiro estudo utilizou-se 30 isolados clínicos e uma cepa de referência de C. albicans para obtenção de suspensões celulares (108ufc/mL) que foram plaqueadas nos meios específicos. Três variáveis independentes (nº de replicatas, cor de fundo e instrumento de leitura) originaram oito protocolos de leitura. A reprodutibilidade intra e interexaminadores da medida de produção de enzima (Pz) foi avaliada por meio do Coeficiente de Correlação Intraclasse (CCI). A enzima proteinase apresentou dois protocolos com ―Boa‖ reprodutibilidade intraexaminador (CCI ≥ 0,71) para todos os examinadores e o protocolo que utilizou leituras em triplicata sobre as fotografias contra luz natural atribuiu maior reprodutibilidade interexaminador para os valores de Pz-proteinase. Três protocolos com ‗Boa' concordância intraexaminador de Pz-fosfolipase foram selecionados para a análise interexaminador. Tanto as leituras em paquímetro como as realizadas em computador, em triplicata, mostraram reprodutibilidade ‗Muito Boa'. No estudo II, a concentração de CUR a 0,1µM foi utilizada associada a iluminação LED para promover dose subletal de IF. O grupo tratamento (C+L+) teve suas células fotossensibilizadas com CUR e iluminadas. O grupo controle positivo consistiu de amostras que receberam apenas CUR (C+L-), e o controle negativo não recebeu nem CUR nem luz (C-L-). A capacidade de adesão foi avaliada por meio das unidades formadoras de colônias (ufc/mL) e do método XTT. A formação de biofilme foi analisada ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to: I. to establish a reproducible protocol using the agar-Based methodology to evaluate the production of the phospholipase and proteinase by the species Candida albicans (C. albicans); II. to analyze the expression of virulence factors after photodynamic inactivation (PDI) mediated by curcumin (CUR). In the first study 30 clinical isolates and a reference strain of the C. albicans were used to obtain cell suspensions (108CFU/mL) that were plated in specific media. Three independent variables (number of replicates, background color and reading instrument) originated eight reading protocols. The intra- and inter-examiner reproducibilityof the enzyme production measure (Pz) was assessed using the intraclass correlation coefficient (ICC). The enzyme proteinase presented two protocols with "good" intra-rater reproducibility (ICC≥0.71) and the readings in triplicate against natural light showed the highest inter-examiner reproducibility for Pz-proteinase values. Three protocols with 'Good' intra-rater agreement for Pz-phospholipase were selected for interexaminer analysis. Caliper and computer readings, performed in triplicate, showed 'Very Good' reproducibility. In Study II, CUR at 0,1μM was used with LED light to promote sublethal dose of the PDI. The treatment group (C+L+) had its cells photosensitized with CUR and illuminated. The control group consisted of the samples that received only CUR (C+L-), and another which received neither CUR or light (C-L-). The adhesion ability was evaluated by means of CFU/mL and the XTT method. Biofilm formation was analyzed by means of CFU/mL, XTT and Crystal Violet (CV). The ability to secrete degradative enzymes was evaluated by the agarbased method and a colorimetric method. The results CFU/mL, XTT, CV were evaluated using a one-way multivariate analysis of the variance (MANOVA) and when statistically significant effects were detected, One... (Complete abstract electronic access below) / Mestre

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2015-10-22T17:34:42Z No. of bitstreams: 1 MaiaraDeMoraes_TESE.pdf: 4430780 bytes, checksum: 1f816fb63ca894e21d7bb94602ef5210 (MD5) / Approved for entry into archive by Elisangela Moura (lilaalves@gmail.com) on 2015-10-22T21:22:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MaiaraDeMoraes_TESE.pdf: 4430780 bytes, checksum: 1f816fb63ca894e21d7bb94602ef5210 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-22T21:22:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MaiaraDeMoraes_TESE.pdf: 4430780 bytes, checksum: 1f816fb63ca894e21d7bb94602ef5210 (MD5) Previous issue date: 2014-06-05 / Embora a terapia fotodin?mica venha sendo utilizada como uma ferramenta ?til nos ?ltimos 30 anos em oncologia, poucos estudos cl?nicos em odontologia t?m sido conduzidos. A terapia fotodin?mica (TFD) utiliza fotossensibilizantes at?xicos e seletivos que s?o administrados nas c?lulas alvo seguida de aplica??o local de luz vis?vel, produzindo esp?cies reativas de oxig?nio capazes de ocasionar morte celular por apoptose ou necrose, de afetar a vascularidade local, al?m de exercer importantes efeitos no sistema imune. Novas gera??es de f?rmacos fotossensibilizantes, como as ftalocianinas nanoparticuladas tem apresentado excelentes resultados na atividade antitumoral e antibacteriana. Neste contexto, o presente trabalho realizou o primeiro protocolo cl?nico de aplica??o local da nanoemuls?o de cloro-alum?nio ftalocianina (AlClFc) seguida de irradia??o em gengiva de humanos, e analisou descritiva e comparativamente, por meio de imunoistoqu?mica, a express?o de RANK, RANKL, OPG e VEGF em um modelo split-mouth. Oito volunt?rios saud?veis com indica??o cl?nica de exodontia foram inclu?dos no estudo. Sete dias antes da exodontia, foi aplicado na gengiva dos participantes, 5?M de nanoemuls?o de AlClFc seguida de irradia??o com laser diodo (660nm, 100J/cm2), o lado contralateral foi utilizado como controle. Os esp?cimes teciduais foram removidos sete dias ap?s a TFD e subdivididos em dois grupos (grupo teste e grupo controle) para an?lise histol?gica e imunoistoqu?mica. Os pacientes foram monitorados no dia aplica??o, 7, 14 e 30 dias ap?s a terapia para avalia??o de efeitos adversos da terapia. Altera??es vasculares foram observadas nas amostras gengivais que receberam a TFD. ?reas de edema e congest?o vascular, al?m de intensa vasculariza??o foram visualizadas. Adicionalmente, focos de calcifica??o distr?fica em regi?o subepitelial foram visualizados nos esp?cimes do grupo teste. Os resultados demonstraram um padr?o similar dos escores de imunomarca??o de RANK, RANKL e VEGF entre os grupos teste e controle, n?o havendo diferen?a estat?stica significante (p=0.317, p=0.777, p=.814, respectivamente). RANK e RANKL exibiram imunomarca??o fraca ou ausente em todos os esp?cimes analisados. N?o houve imunomarca??o para a OPG. O VEGF mostrou imunomarca??o moderada a forte nos esp?cimes do grupo teste. Adicionalmente, o estudo cl?nico mostrou que a terapia foi bem tolerada por todos os pacientes. Os efeitos adversos foram de curta dura??o e totalmente revers?veis. Tomados em conjunto, os resultados apresentados neste estudo mostraram que o protocolo da TFD mediada por nanoemuls?o contendo AlClFc ? segura para aplica??o cl?nica em tecido gengival e, sugerem uma forte imunomarca??o para o VEGF ap?s a terapia. / Although photodynamic therapy have been used as a useful tool over the past 30 years in oncology, few clinical trials have been conducted in dentistry. Photodynamic therapy (PDT) uses non - toxic photosensitizers and selective which are administered in target cells followed by local application of visible light, producing reactive oxygen species capable of causing cell death by apoptosis or necrosis, injured the local vasculature, and exert important effects on the im mune system. New generations of photosensitizing agents, such as nanoparticulate phthalocyanines, has shown excellent results in antitumor and antibacterial activity . In this context, the present work constitutes the first clinical protocol of local appli cation of nanoemulsion chloro - aluminum phthalocyanine (AlClFc) followed by irradiation in human gingiva, and analyzed descriptively and comparatively , by means of immunohistochemistry , the expression of RANK , RANKL , OPG and VEGF in a split - mouth model . Eight healthy volunteers with clinical indication for extraction were included in the study . Seven days before the extraction, was injected in the gingiva of participants, 5 ? M of nanoemulsion AlClFc followed by irra diation with diode laser (660nm , 7 J/cm2 ), the contralateral side was used as control. Tissue specimens were removed seven days after the TFD is performed. Tissues sample were divided into two groups (test and con trol groups) for histological and immunohistochemical analysis. Patients were monitored at days, 0, 7, 14 and 30 to assess adverse effects of the therapy. Vascular alterations were seen in gingival samples that received PDT. Areas of edema and vascular con gestion, and intense vascularization were viewed . Additionally, dystrophic calcification in subepithelial region were observed in the test group. The results showed a similar pattern of immunostaining scores of RANK, RANKL and VEGF between the test and co ntrol groups, with no statistically significant difference (p = 0.317, p = 0.777, p = 0 .814, respectively). RANK and RANKL exhibited weak or absent immunostaining in most specimens analyzed. There was n o immunostaining for OPG. VEGF showed moderate to stro ng immunostaining in specimens from the test group. In addition, the clinical study showed that therapy was well tolerated by all patients. Adverse effects were short - time and completely reversible. Taken together, the results presented in this study showe d that PDT mediated by nanoemulsion containing AlClPc is safe for clinical application in gingival tissue and suggests that a strong immunostaining for VEGF after therapy .

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-04-02T15:39:52Z No. of bitstreams: 1 IsraelAlexandreDeAraujoSena_DISSERT.pdf: 1066452 bytes, checksum: 0db686fe8e7a09cfb316d9c4ce792350 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-04-06T16:43:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 IsraelAlexandreDeAraujoSena_DISSERT.pdf: 1066452 bytes, checksum: 0db686fe8e7a09cfb316d9c4ce792350 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-06T16:43:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 IsraelAlexandreDeAraujoSena_DISSERT.pdf: 1066452 bytes, checksum: 0db686fe8e7a09cfb316d9c4ce792350 (MD5) Previous issue date: 2017-12-19 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / A Cloro-alum?nio ftalocianina (AlClFc), como droga fotossensibilizadora, tem demonstrado resultados favor?veis em estudos cl?nicos e laboratoriais, no entanto ainda n?o h? ensaios cl?nicos que avaliem sua aplica??o na terapia fotodin?mica antimicrobiana (TFDA) em periodontite cr?nica (PC). Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da TFDA com AlClFc adjuvante ? raspagem e alisamento corono-radicular (RACR) nos par?metros cl?nicos periodontais de pacientes com PC. O estudo caracterizou-se por um ensaio cl?nico boca dividida, randomizado, duplo cego, longitudinal e prospectivo. Cinquenta e quatro s?tios periodontais foram randomicamente distribu?dos em dois grupos: 27 no grupo teste (RACR + TFDA) e 27 no controle (RACR). A RACR foi realizada em sess?o ?nica e os par?metros cl?nicos periodontais de ?ndice de placa vis?vel (IPV), ?ndice de sangramento ? sondagem (ISS), profundidade de sondagem (PS) e n?vel de inser??o cl?nica (NIC) foram avaliados na linha base (T0) e ap?s 3 meses (T3) da TFDA. Os dados foram submetidos ? an?lise estat?stica pelos testes n?o-param?tricos de Wilcoxon e Mann-Whitney, ao n?vel de signific?ncia de 5%. Observou-se redu??o do ISS em ambos os grupos de tratamento, com TFDA adjuvante (p = 0,003) e somente RACR (p = 0,001), entre T0 e T3. Na compara??o intergrupos n?o houve diferen?a estatisticamente significativa. Verificou-se redu??o da PS e ganho de inser??o cl?nica para ambos os grupos de tratamento (p<0,05) ap?s 3 meses da terapia. Na compara??o intergrupos n?o houve diferen?a estatisticamente significativa (p>0,05) em nenhum dos tempos analisados. A TFDA com AlClFc, adjuvante ? RACR, n?o proporcionou benef?cios adicionais na redu??o da profundidade de sondagem e ganho de inser??o cl?nica. / Chloro-aluminum phthalocyanine (AlClPc), as a photosensitizing drug, has shown favorable results in clinical and laboratory studies; however, there are no clinical trials evaluating its application in antimicrobial photodynamic therapy (PDTa) in chronic periodontitis (CP). Thus, the objective of this study was to evaluate the effect of adjuvant PDTa with AlClPc on scaling and root planing (SRP) in periodontal clinical parameters of patients with CP. The study was characterized as split-mouth randomized clinical trial, double-blind, longitudinal and prospective. Fifty-four periodontal sites were randomly distributed into two groups: 27 in the test group (SRP + PDTa) and 27 in the control group (SRP). The SRP was performed in a single session and clinical periodontal parameters of plaque index (PI), bleeding on probing (BOP), probing depth (PD) and clinical attachment level (CAL) were assessed at the baseline ( T0) and after 3 months (T3) of the PDTa. Data were submitted to statistical analysis by the non-parametric Wilcoxon and Mann-Whitney tests, at a significance level of 5%. There was a reduction in the BOP in both treatment groups, with adjuvant PDTa (p = 0.003) and only SRP (p = 0.001), between T0 and T3. In the inter-group comparison there was no statistically significant difference. PD reduction and clinical insertion gain were observed for both treatment groups (p <0.05) after 3 months of therapy. In the inter-group comparison there was no statistically significant difference (p> 0.05) in any of the times analyzed. PDTa with AlClPc, adjuvant to RACR, did not provide additional benefits in reducing depth of probing and gain of clinical insertion.

A fotoquimioterapia (FQT) é uma técnica de tratamento de doenças graves, inclusive o câncer, que utiliza que utiliza compostos que, sendo introduzidos dentro de um organismo, não possuem alguma atividade contra ele e quando são excitados, através de luz na região espectral de 320 até 800 nm, produzem espécies reativas que induzem a morte celular. Dentre as formas desenvolvidas em FQT, a de maior destaque, e a que vem sendo mais utilizada em clínica, é a Terapia Fotodinâmica (TFD). Apesar das vantagens do uso da TFD, esta técnica possui limitações em sua eficiência, pois seu mecanismo está associado com à formação dos estados excitados do FS e do oxigênio molecular e, por isso, depende dos tempos de vida e rendimentos quânticos destes estados. Outro fator que limita a ampla aplicação da FQT na clínica é o alto custo dos FS utilizados atualmente. No grupo de fotobiofísica do Departamento de Física e Matemática da FCLRP-USP, tem-se trabalhado na busca de novos FS que possuam espécies reativas não excitados como, por exemplo, os radicais livres (peróxidos, ânion superóxido, radical hidroxila etc.), e que sejam mais viáveis economicamente em relação a outros FS já existentes no mercado. Os derivados de nitrofurano são fármacos já utilizados na rotina clínica que possuem as características promissoras para aplicação em FQT. Este trabalho dá continuidade à busca de novos FS. Escolhemos dentre inúmeros derivados de nitrofurano a Nitrofurantoína (NFT), que já é utilizada em clínica desde 1950, e que possui um custo baixo. Sua atividade fototóxica já foi documentada como reações fotoalérgicas em pacientes depois de ser administrada e nos estudos in vitro contra diversas linhagens das células neoplásicas. Contudo, os mecanismos e a dinâmica da fotoação da NFT não estavam ainda bem estabelecidas. Como objetivos gerais deste trabalho, definimos estudar a dinâmica da fotodecomposição da NFT e a liberação de radical NO em soluções aquosas, em função da composição do ambiente, tendo em vista analisar sua potencialidade para aplicação em fotoquimioterapia de diversas doenças, inclusive o câncer. Demonstramos que durante a sua fototransformação, a NFT libera o NO, e o rendimento do processo depende do estado de protonação da NFT. A liberação de NO se realiza por duas vias paralelas: liberação direta pela molécula de NFT e através da fotólise do seu fotoproduto. O estado tripleto da NFT apresenta tempo de vida (t) muito curto, provavelmente devido à participação ativa em formação de um dos fotoprodutos. Pelo fato de ser muito curto, é pouco provável que o estado T1 produza efetivamente, o oxigênio singleto. Assim, podemos associar a fotoatividade da NFT com a liberação de NO. Por fim, propusemos um esquema para a fotoliberação de NO pela fototransformação da NFT. / Photochemotherapy (PCT) is a technique applied in the treatment of serious diseases. For example in cancer, the PCT uses compounds that are introduced into an organism that do not have some activity against him, and that when are excited with light, in the spectral region from 320 to 800 nm, produces reactive species that induce the cell death. The photodynamic therapy (PDT) is the most widely used PCTtechnique in clinical applications. Despite the advantages of the use of PDT, this technique has efficiency limitations, because the PDT mechanism is associated with the formation of excited states in photosensitizer (PS) and in molecular oxygen and therefore, depends on the lifetimes and quantum yields of these states. Another limiting factor of the PDT in more PCT clinical applications is the high cost of the PS used today. The photo-biophysic group of the Department of Physics and Mathematics of the FFCLRP-USP has been working on searching of new PS without reactive species with exited states and cheaper than others PS on the market. For example, our group has investigated the free radicals: peroxide, superoxide anion, hydroxyl radical. This work continues the search for new PS. We chose the Nitrofurantoin (NFT), a nitrofuran derivative, which it is used in clinical applications since 1950 and have a low cost. The nitrofuran derivatives are drugs used in clinical applications with promising characteristics for applications in PCT. The photo-toxic activity of the NFT has been observed in photo-allergic reactions of patients and in vitro studies of several neoplastic cell lines. However, the NFT photo- action mechanisms and kinetics are not well established. The objective of this work was the study of the photo-decomposition dynamics of the NFT and the delivery of the NO radical in aqueous solutions depending on the composition of the environment, aiming to analyze its potential for application in PCT of several diseases, including cancer. In this work we demonstrated that during the photo-transformation, the NFT delivery NO and the yield of this process depends on the protonation state of the NFT. We observed that the NO delivery is made of two parallels ways: a direct delivery by NFT molecule and a delivery by photolysis of their photo-products. Probably due to the active participation in the photo-products formation we observed that the triplet state of NFT has very short lifetime (T) and therefore, it is not expected that the state T1 produces singlet oxygen. Thus, we can associate the NFT photo-activity with the NO delivery. Finally, this work proposes a scheme for NO photo-delivery using the NFT photo-transformation.

Orientador: Anibal Eugenio Vercesi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T17:46:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Inada_NataliaMayumi_D.pdf: 2015643 bytes, checksum: 46616bc6e9a94ab575e17060c6ed0645 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A ação das meso-porfirinas catiônica Fe(III)TMPyP e aniônica Fe(III)TPPS4 sobre a função mitocondrial e viabilidade de células de tumor de próstata LNCaP foi investigada. O tratamento das suspensões mitocondriais com 1 µM de Fe(III)TMPyP por 2 minutos e 45 segundos no escuro diminuiu o controle respiratório mitocondrial (C.R.) em 3%. A irradiação potencializou este efeito, induzindo uma queda no C.R. em 28%. A porfirina aniônica Fe(III)TPPS4, nas mesmas condições experimentais, não provocou efeito significativo algum. Ambas porfirinas aumentaram a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) na presença de Ca2+; o efeito de Fe(III)TMPyP foi significativamente maior. Esta porfirina catiônica, porém não a aniônica, promoveu o fenômeno de transição de permeabilidade mitocondrial (TPM), sensível à ciclosporina A (CsA). Além disso, Fe(III)TMPyP apresentou uma constante de associação (Kb) com mitocôndrias 11 vezes maior que Fe(III)TPPS4, provavelmente devido às interações eletroestáticas entre a porfirina catiônica e a membrana mitocondrial interna, carregada negativamente. Observou-se também que ambas porfirinas diminuíram a viabilidade de células tumorais de maneira dose-dependente, apresentando um IC50 de aproximadamente 15 µM, após 48 h de incubação no escuro. Tratando as células com a dose de 10 µM para cada porfirina e um tempo menor de exposição no escuro (1 h), observou-se efeito significativo após a irradiação das amostras. Nas condições experimentais testadas, a morte celular predominante foi a necrose (26% das células tratadas com a porfirina aniônica e 29%, com a catiônica). A apoptose ocorreu após irradiação, sendo o efeito da Fe(III)TMPyP duas vezes maior (14%) que o efeito da Fe(III)TPPS4 (7%). Ambas porfirinas aumentaram de maneira significativa a concentração intracelular do íon Ca2+ ([Ca2+]cit) após a irradiação. Tanto a necrose, como a apoptose foram mediadas pelo aumento da [Ca2+]cit, uma vez que ambas foram inibidas pelo quelante de Ca2+ citosólico BAPTA/AM. A CsA preveniu as mortes necrótica e apoptótica das células LNCaP tratadas e irradiadas na presença de ambos compostos / Abstract: The action of irradiated cationic Fe(III)TMPyP and anionic Fe(III)TPPS4 forms of mesoporphyrins on mitochondrial functions was investigated using experimental conditions that caused minimal effects on mitochondria in the dark. Treatment of mitochondria with 1 µM Fe(III)TMPyP for 2 min decreased the respiratory control by 3% in the dark and 28% after irradiation. Fe(III)TPPS4 (1 µM) had no significant effect on respiratory control under any of the above conditions. Both porphyrins increased mitochondrial production of reactive oxygen species in the presence of Ca2+; however, the effect of Fe(III)TMPyP was significantly stronger. Fe(III)TMPyP but not Fe(III)TPPS4 promoted cyclosporin A-sensitive mitochondrial permeability transition. It was also observed that the association constant of Fe(III)TMPyP with mitochondria was 11 times higher than Fe(III)TPPS4. In conclusion, the damage to isolated mitochondria induced by Fe(III)TMPyP under illumination was larger than by Fe(III)TPPS4, probably because its cationic charge favors association with the mitochondrial membrane. The citotoxic effect of both porphyrins, prior the irradiation and upon the cell viability were dose-dependent and the IC50 were approximatly 15 µM, after 48 hours of incubation. No significantly cytotoxic effect was observed when the tumor cells were treated with 10 µM for each porphyrin, in a time of incubation in the dark of one hour. This was significant only after the photoactivation of the samples. In these conditions, the irradiation of the tumor cells induced cell death both via necrose and apoptose. Cell death via necrose was higher for both porphyrins. Irradiation of both porphyrins significantly increased the cytosolic Ca2+ concentration ([Ca2+]cit) of the LNCaP cells, which mediated cell death, once BAPTA/AM (an intracellular Ca2+ chelator) protected against cell death. Mitochondrial permeability transition (MPT) was probably participating in these mechanisms since cyclosporin A prevented cell death / Doutorado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Doutor em Fisiopatologia Medica

Made available in DSpace on 2015-09-25T12:19:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vanda Sanderana Macedo Carneiro 1.pdf: 1849714 bytes, checksum: a96b8d758bb8c0159fe76b62f59377d6 (MD5) Previous issue date: 2012-07-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Photodynamic therapy (PDT) uses a photosensitizer and a light source, causing the bacterial unviability. This study evaluated the efficacy of photodynamic therapy mediated by methylene blue (0.01%) and malachite green (0.01%) separately in the healing of wounds contaminated with Staphylococcus aureus. Two circular surgical excisions were made with the aid of a cast template and a scalpel blade at the back of 90 male rats, weighing 250-300g, and then the wounds were inoculated with Staphylococcus aureus strains ATCC 26923. The animals were grouped according to the treatment used: G I PDT methylene blue; G II PDT malachite green; G III methylene blue; G IV malachite green; G V Low level laser therapy (LLLT); G VI Control. As a light source to fotoactivate de dyes, it was used the Thera Lase diode laser (100mW, 660nm, 120 J/cm 2 , 33s, continuous emission) (DMC, São Carlos, SP, Brazil). The animals were sacrified for analysis 01, 03, 07, 14 and 21 days after the surgery. Clinically, it was evaluated red area, witened area, presence and thickness of eschar, purulent exudates and wound perimeter. The specimens were processed for histological analysis and stained with hematoxylin and eosin (HE) for examination of edema, necrosis, inflammatory infiltrate, presence of young fibroblasts, granulation tissue, epithelialization and collagen degree. The descriptive statistics analysis were made and also the Fisher exact test (p<0.05). A day after te excision, the group I showed a moderate formation of granulation tissue and intense inflammatory infiltrate, when compared to other groups. At three days post-surgery, there was a tendency to a faster re-epithelialization of the non-treated group when compared to the groups treated with PDT, whether if it were with methylene blue or malachite green. The collagen degree was also lower in the groups treated with PDT, what also shows a tendency to delay de collagen deposition in wounds submitted to this treatment. PDT also showed a tendency to delay re-epithelialization of woundsafter 07 days, when compared wounds subjected to PDT with malachite green to the control group. This trend is not still observed at 14 days post-surgery, when was just found that the granulation tissue had a greater reduction in the group submitted to TFD methylene blue (p=0,182) compared to the control group. At 21 day after surgery, there was a prevalence of slight inflammatory infiltrate and granulation tissue, with no necrosis areas nor edema on both groups. We conclude that, for wounds potentially contaminated, the PDT, especially that mediated by the methylene blue dye, was able to promote a faster tissue repair through a granulation tissue formation, besides giving a tendency to a faster regression of this granulation tissue when compared to other treatments. There was observed a tendency of a delayed epithelialization in the treatment groups, both those submitted to PDT, LBP or dyes, suggesting that the repair takes longer in the treated groups. / A terapia fotodinâmica (TFD) utiliza um fotosensibilizador e fonte de luz provocando a inviabilidade bacteriana. Esse estudo avaliou a eficácia da terapia fotodinâmica mediada pelos corantes Azul de Metileno (0,01%) e Verde Malaquita (0,01%) separadamente na reparação tecidual em feridas contaminadas com Staphylococcus aureus. Foram confeccionadas, com auxílio de gabarito vazado e lâmina de bisturi, duas excisões cirúrgicas circulares no dorso de 90 ratos machos, com peso 250300g, e em seguida foram inoculados nos ferimentos cepas de Stafilococcus aureus ATCC 26923. Os animais foram agrupados conforme tratamento empregado: G I TFD Azul de metileno; G II TFD Verde malaquita; G III Azul de metileno; G IV Verde malaquita; G V Laser de baixa potência (LBP); G VI Controle. Foi utilizado como fonte de luz para fotossensibilizar os corantes, o Laser diodo Thera Lase (100mW, 660 nm, 120J/cm 2 , 33s, emissão contínua) (DMC equipamentos, São Carlos, SP). Os animais foram sacrificados para análise 01, 03, 07, 14 e 21 dias após a excisão cirúrgica. Foi avaliado clinicamente área avermelhada, esbranquiçada, presença e espessura de escara, pus e o perímetro da ferida. As peças foram processadas para análise histológica e coradas pela técnica da hematoxilina e eosina (HE) para análise do edema, necrose, infiltrado inflamatório, presença de fibroblastos jovens, tecido de granulação, reepitelização e grau de colagenização. Foi feita a análise estatística descritiva e o teste exato de Fisher (p<0,05). Um dia após a excisão, o Grupo I apresentou formação moderada de tecido de granulação e intenso infiltrado inflamatório, quando comparado aos demais grupos. Aos três dias pós-cirúrgicos, verificou-se uma tendência de reepitelização mais rápida do grupo não tratado do que nos grupos tratados com TFD, quer seja ela com Azul de metileno ou com Verde malaquita, sendo o grau de colagenização também inferior nos grupos tratados com TFD, o que mostra tendência a retardo também na deposição de fibras colágenas nos ferimentos tratados com TFD. Houve também tendência ao retardo da reepitelização durante o reparo aos 07 dias, quando comparou-se o grupo TFD verde malaquita aos ferimentos não tratados, porém esta não continuou a ser observada aos 14 dias pós-cirúrgicos, havendo apenas maior redução de tecido de granulação quando comparou-se o uso de TFD Azul de metileno (p=0,182) ao grupo controle. Após 21 dias, houve predomínio do infiltrado inflamatório e tecido de granulação discretos e ausência de edema e necrose em todos os grupos. Conclui-se que, para os ferimentos potencialmente contaminados, a TFD, em especial aquela mediada pelo corante Azul de metileno, foi capaz de promover um início de reparo tecidual mais rápido através de precoce formação de tecido de granulação, além de propiciar uma tendência de regressão mais rápida desse tecido de granulação quando comparado aos outros tratamentos. Observou-se a tendência ao retardo da reepitelização nos grupos de tratamento, tanto naqueles submetidos a TFD como naqueles tratados apenas com LBP ou corantes, sugerindo um reparo mais demorado nos grupos tratados.

Um dos principais problemas em Periodontia refere-se à redução microbiana subgengival e tornar a superfície radicular biocompatível, a qual pode ser realizada por raspagem e alisamento radicular, tratamentos químicos, laser em alta intensidade ou terapia fotodinâmica. O objetivo dessa pesquisa foi de comparar os efeitos de raízes humanas tratadas por diferentes técnicas como terapia fotodinâmica, Er:YAG, Nd:YAG, raspagem e alisamento radicular e ácido cítrico + tetraciclina, na proliferação de fibroblastos gengivais (FGH) e células de granulação óssea (GO) humanos. Para tal, foram preparados 45 fragmentos radiculares de 25 dentes extraídos por razões periodontais e que foram divididos em 6 grupos: controle com células (CC), controle com fragmento raspado (CD), laser de Er:YAG (ER - 60mJ, 10pps, varredura, distância focal 12mm, 10Hz, 10s, 2940nm), laser de Nd:YAG (ND - 0,5W, contato, 15Hz, 10s, 1640nm), terapia fotodinâmica (PDT - laser de InGaAIP - 30mW, distância focal &#x2264;1mm, 45J/cm2, 30s, 660nm + azul de toluidina O), e ácido cítrico com tetraciclina (AC). As células foram cultivadas em meio DMEM com 10% de soro fetal bovino, 1% de solução antibiótica e 0,5% de anfotericina B. Foram plaqueadas 2 x 103 células, na sexta passagem, em placas de 96 poços. Após 24h o meio foi substituído por meio condicionado pelos fragmentos tratados, com exceção do grupo controle de células (CC), que recebeu meio convencional. A viabilidade celular foi medida através do teste do MTT nos períodos de 24, 48, 72 e 96h. Os dados em forma de densidade óptica e porcentagem de crescimento foram analisados estatisticamente pelo teste ANOVA a três critérios complementado pelo teste de Tukey a um nível de significância de 5% (p<0,05). Não houve diferenças entre os grupos controle CC e CD (p>0,05). Para as células FGH em relação ao controle, houve maior estímulo após 48 e 72h no grupo PDT, após 72h no grupo ND, e após72 e 96h no grupo AC (p<0,05). Para as células GO, em relação ao controle, houve maior crescimento apenas no período de 72h para o grupo ND (p<0,05). Ao comparar os grupos experimentais e ambos os tipos celulares, após transformação em porcentagem de crescimento, houve diferença estatisticamente significante para o grupo ER nos períodos de 72 e 96h para as células FGH (p<0,05). Concluiu-se que todos os tratamentos, com exceção da raspagem e alisamento radicular, estimularam a proliferação de fibroblastos gengivais humanos e somente o tratamento com Nd:YAG estimulou a proliferação de células de granulação óssea humana. / One of the main problems in Periodontics is how to eliminate the subgingival bacteria and to convert the root surface in a biocompatible environment. These results can be achieved by scaling and root planning, chemical treatment, high energy lasers or photodynamic therapy. The aim of this study was to compare the effects of human root fragments treated by different techniques as photodynamic therapy, Er:YAG, Nd:YAG, scaling and root planning and citric acid plus tetracycline on proliferation of human gingival fibroblasts (HGF) and human osseous granulation cells (OG). Forty-five root fragments from 25 human teeth extracted by periodontal indication were divided in six groups: control with cells (CC), scaled fragment control (SC), Er:YAG laser (ER - 60mJ, 10pps, scanning, focal distance 12mm, 10Hz, 10s, 2940nm), Nd:YAG laser (ND 0.5W, contact, 15Hz, 10s, 1640nm), fhotodynamic therapy (PDT InGaAIP, 30mW, 45J/cm2,30s, 660nm, toluidine blue O), citric acid plus tetracycline (CA). The cells were grown in DMEM medium with 10% of bovine fetal serum, 1% of antibiotic solution and 0.5% amphotericin B. In 96-weIl plates 2 x 103 cells in the sixth passage were plated. After 24h the medium was replaced by medium conditioned by the treated fragments with exception of cell control group (CC) which received regular medium. Cell viability was measured by MTT test at 24, 48, 72 and 96h. Data was described in optic density and percentage of growth and was analyzed by ANOVA test complemented by Tukeys test at a significance level of 5% (p<0.05). There was no statistical differences between control groups CC and SC (p>0.05). For HGF cells in relation to control, there was a higher growth after 48h and 72h at PDT group, after 72h at ND group, after 72h and 96h at CA group (p<0.05). For OG cells in relation to control, there was a higher growth only at 72h-period at ND group (p<0.05). After transformation in percentage of growth and comparison among experimental groups and both cell types, there was a statistical significant difference at ER group at 72h and 96h-period (p<0.05). It was concluded that all treatments but scaling and root planning stimulated the proliferation of human gingival fibroblasts and only the Nd:YAG treatment stimulated the proliferation of human osseous granulation cells.

Avaliar os efeitos da terapia fotodinâmica sobre as funções motoras do sistema nervoso e a dura-máter utilizando os fotossensibilizadores ftalocianina de cloro-alumínio e azul de metileno. Materiais e Métodos: Foram utilizados 56 ratos machos da raça Wistar, divididos em dois grupos. Um grupo foi submetido ao tratamento com terapia fotodinâmica (PDT) e o outro como grupo controle, nos quais foram utilizados os fotosensibilizadores sem a sua foto ativação. Os fotossensibilizadores foram aplicados sobre a dura-máter, após a realização de laminectomia, ao nível da T10. Os métodos de avaliação empregados foram a escala de avaliação funcional de Basso, Beattie e Bresnahan (BBB) e o estudo da dura-máter por meio da microscopia de luz. Resultados: Não foram observadas alterações nas atividades motoras dos animais submetidos à PDT, em relação ao grupo controle. As avaliações histológica e histopatológica não mostraram diferenças entre o grupo dos fotosensibilizadores ativados e o grupo controle, com relação ao processo inflamatório e à necrose tecidual. Conclusão: A PDT em conjunto com os fármacos fotossensibilizantes, ftalocianina de cloro-alumínio e azul de metileno não induziu efeitos neurotóxicos clínicos e/ou alterações histológicas sobre a dura-máter dos animais estudados. / To determine the effects of photodynamic therapy on motor functional activity and the dura mater using the photosensitizers aluminum chloride phthalocyanine and methylene blue. Material and Methods: Fifty-six male Wistar rats were divided into two groups, one submitted to photodynamic therapy (PDT) and the other submitted to the photosensitizers without their photoactivation (control). The photosensitizers were applied to the dura mater after laminectomy at the T10 level. The methods used for assessment were the Basso, Beattie and Bresnahan (BBB) functional evaluation scale and study of the dura mater by light microscopy. Results: No changes in motor activity were observed in the animals submitted to PDT compared to control. Histological and pathological evaluation did not show differences between the group exposed to activated photosensitizers and the control group regarding the inflammatory process and tissue necrosis. Conclusion: The joint use of PDT with the photosensitizing pharmaceuticals aluminum chloride phthalocyanin and methylene blue did not induce any clinical neurotoxic effects or histological changes in the dura mater of the animals studied.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-04-08T19:04:51Z No. of bitstreams: 1 marianeflorianolopessantoslacerda.pdf: 1354774 bytes, checksum: 55f105b0766962bb875bd589c83403bf (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-04-24T03:38:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marianeflorianolopessantoslacerda.pdf: 1354774 bytes, checksum: 55f105b0766962bb875bd589c83403bf (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-24T03:38:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marianeflorianolopessantoslacerda.pdf: 1354774 bytes, checksum: 55f105b0766962bb875bd589c83403bf (MD5) Previous issue date: 2013-04-30 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A PDT antimicrobiana é um eficiente método coadjuvante na desinfecção do sistema de canais radiculares, o que torna importante o estudo sobre a possibilidade de alterações morfológicas e permeabilidade provocadas pelo laser de diodo na estrutura dentinária radicular. A proposta deste estudo foi investigar as alterações morfológicas e percentual de infiltração apical radicular após o uso do laser diodo. Quarenta dentes monorradiculares foram instrumentados pelo sistema rotatório Protaper e irrigados com NaOCl 5,25% e EDTA 17%. Depois, foram divididos aleatoriamente em: G1: não receberam PDT (controle); G2: receberam pré-irradiação com fotossensibilizador azul de toluidina e irradiação com laser diodo de AsGaAl. Em seguida, 10 dentes de cada grupo foram analisados por MEV quanto as alterações morfológicas. Os outros 10 dentes foram obturados e corados por Rodamina B para avaliar o percentual de infiltração apical. Os resultados mostraram diferença significativa entre G1 e G2 (p<0,001 - qui-quadrado), verificando maior presença de debris em G1 (controle) e maior ocorrência de túbulos dentinários abertos em G2 (PDT). Erosões e cracks foram observadas em ambos os grupos, sem diferença estatística significativa (p>0,001). O percentual de infiltração apical foi significativamente maior em G2 que em G1 (p<0,001 – t student). Concluiu-se que a utilização do laser diodo promoveu a redução de smear layer e abertura dos túbulos dentinários, não influenciando na ocorrência de erosão, cracks e carbonização. O laser aumentou a permeabilidade da dentina apical. / The antimicrobial PDT is an eficient method supporting the disinfection of the root canal system, which makes it important to study on the possibility of morphological and permeability caused by the diode laser on the root dentin structure. The purpose of this study was to investigate the morphological and percentage of root apical leakage after using the diode laser. Forty single teeth were instrumented by Protaper rotary system and irrigated with 5.25% NaOCl and 17% EDTA. They were then randomly divided into: G1 not receive PDT (control), G2: received pre-irradiation with toluidine blue photosensitizer and irradiation by GaAlAs laser diode. Then, ten teeth in each group were analyzed by SEM as morphological changes. The other ten teeth were filled and stained with Rhodamine B to evaluate the percentage of apical leakage. The results showed significant difference between G1 and G2 (p <0.001 - chi-square), checking greater presence of debris in G1 (control) and higher incidence of open dentinal tubules in G2 (PDT). Erosions and cracks were observed in both groups, with no statistically significant difference (p> 0.001). The percentage of apical leakage was significantly higher in G2 than in G1 (p <0.001 - t student). It was concluded that the use of the diode laser caused a reduction of smear layer and opening the dentinal tubules and does not influence the occurrence of erosion, cracks and carbonization. The laser increased the permeability of the apical dentine.