Orientadores : Reginaldo Bruno Gonçalves, Jaime Aparecido Cury / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-04T03:46:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zanin_IrianaCarlaJunqueira_D.pdf: 991186 bytes, checksum: d3d9066c7be1fddfbe7eb583080d8369 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A terapia fotodinâmica (TFD) é um tratamento antibacteriano alternativo para as doenças causadas por biofilmes como a cárie dental. Esta tese, apresentada na forma de 3 artigos, teve por objetivos: (1) revisar a literatura enfocando o efeito da TFD em bactérias cariogênicas, (2) validar um modelo de formação de biofilme de mono-espécies de estreptococos e avaliar o efeito da associação do azul de orto-toluidina (AOT) e um diodo emissor de luz (LED) vermelho sobre biofilmes formados pela associação dessas bactérias e, (3) avaliar o efeito da TFD utilizando um laser de HeNe ou uma luz LED vermelha sobre biofilmes de S. mutans crescidos em fermentador de espessura e fluxo contínuos (FEFC). No artigo 2, biofilmes de Streptococcus mutans, Streptococcus sobrinus e Streptococcus sanguinis foram formados in vitro sobre blocos de esmalte dental bovino. Nos biofilmes avaliou-se a contagem microbiológica e a concentração de polissacarídeo extracelular insolúvel, sendo que no esmalte foi determinada a perda de mineral. O potencial antimicrobiano da associação AOT a 100 mg/ml e um LED com densidade de energia de 85,7 J/cm2 sobre estes biofilmes foi avaliado através de contagem das bactérias viáveis. No artigo 3, foi testado o efeito antimicrobiano da TFD utilizando densidades de energia de um laser de HeNe ou uma luz LED vermelha variando entre 49 e 294 Jcm-2, sobre biofilmes de S. mutans crescidos em um FEFC. O efeito da TFD foi avaliado através da análise da viabilidade bacteriana e microscopia confocal a laser. A revisão da literatura demonstrou a relevância e a escassez de estudos utilizando a TFD sobre biofilmes cariogênicos. Os resultados do artigo 2 demonstraram que o modelo de formação de biofilme in vitro testado foi efetivo para simular situações de alto desafio cariogênico promovendo a desmineralização do esmalte, sendo que a aplicação da TFD foi eficaz para reduzir significantemente a viabilidade bacteriana nos biofilmes (p < 0,05). No terceiro estudo, reduções significativas (p < 0,05) da viabilidade S. mutans foram observadas após a TFD tanto com utilização do laser de HeNe como pela luz LED, porém este efeito se limitou as camadas externas dos biofilmes. No conjunto, os resultados desses estudos indicam que tanto o laser HeNe quanto a luz LED na presença de AOT apresentam efeito antimicrobiano sobre biofilmes de estreptococos / Abstract: Photodynamic therapy (PDT) is an alternative antibacterial therapeutic to biofilm-related diseases such as dental caries. This thesis, comprised by 3 manuscripts was designed (1) to review the literature about the use of PDT on cariogenic bacteria, (2) to validate a streptococci biofilm model and to evaluate the effect of toluidine blue O (TBO) and a red Light Emission Diode (LED) association on viability of biofilmes formed with these bacteria and, (3) to evaluate the effect of PDT using either a HeNe laser or a red LED light on the viability of S. mutans biofilms grown in a constant depth film fermentor (CDFF). In the second manuscript, Streptococcus mutans, Streptococcus sobrinus and Streptococcus sanguinis biofilms were grown on bovine enamel blocks. In the biofilms the microbiological counting and water-insoluble polysaccharide concentrations were analyzed; while mineral loss analysis were performed on enamel blocks. Also, the antimicrobial potential of TBO at 100 mg/ml associated with a LED at 85.7 Jcm-2 on single-species biofilms were evaluated by microbiological counting. In the manuscript 3, the antimicrobial effect of PDT on S. mutans biofilmes growth on CDFF were verified either using a HeNe laser or a red LED with energy density ranging from 49 to 294 Jcm-2. The effect of TFD was verified by analyzing bacterial viability and confocal scanner laser microscopy. The review of literature demonstrated the importance and shortage of studies about PDT on cariogenic biofilms. The results of manuscript 2 showed that the tested biofilm was effective to simulate high cariogenic challenger promoting enamel demineralization. Also, significant reductions (p = 0.05) in bacteria viability were founded after PDT. At the third study, significant reductions in S. mutans biofilms counting was observed after PDT using either a HeNe laser or a LED light the both light (p = 0.05), however, the effect was restricted to external biofilm layers. In conclusion, the results of these studies showed that either a HeNe laser or a LED light in the presence of TBO showed antimicrobial effect on streptococci biofilms / Doutorado / Cariologia / Doutor em Odontologia

Fundação de Amparo a Pesquisa no Estado do Rio Grande do Sul / The aim of this study was to evaluate a formulation of methylene blue (MB) with ethanol to antimicrobial photodynamic therapy (aPDT), used as an adjunct to mechanical treatment of experimental periodontitis induced in rats. Forty rats were randomized into five groups: without periodontitis (CN); and periodontitis without treatment (CP); periodontitis underwent three types of treatment: scaling and root planing and irrigation with saline (RAR); scaling and root planing and aPDT with MB diluted in water to 0.01% (aPDT/water); scaling and root planing and aPDT with MB diluted in 20% ethanol (aPDT/ethanol). Periodontitis was induced by placing ligature on the lower right first molar for seven days. Then, the ligatures were removed and the treatments applied. The animals were euthanized seven days after the treatment. The primary outcome was bone loss in the furcation region of the first molar evaluated histometrically. The secondary outcome was the number of osteoclasts immunohistochemically marked for tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP). Differences between groups were assessed by One Way ANOVA and post hoc Bonferroni. Thirty-seven rats were subjected to analysis. All three treatment groups showed statistically lower bone loss and smaller number of TRAP positive osteoclasts compared to the untreated group (CP) (P <0.05). No difference was observed for the outcomes between treatment groups (P> 0.05), and between treatments and the negative control (P> 0.05). Bone loss and osteoclastic activity were not changed by aPDT regardless of the inclusion of ethanol in methylene blue formulation when compared to RAR. Therefore, the aPDT did not result in additional benefit when used as adjunctive method to scaling and root planning, considering the parameters evaluated in this study. / O objetivo do presente estudo foi avaliar uma formulação de azul de metileno (AM) com etanol para terapia fotodinâmica antimicrobiana (TFDa), utilizada como coadjuvante ao tratamento mecânico da periodontite experimental induzida em ratos. Quarenta ratos foram randomizados em cinco grupos: sem periodontite (CN); com periodontite e sem tratamento (CP); com periodontite submetidos a três tipos de tratamento: raspagem e alisamento radicular e irrigação com solução salina (RAR); raspagem e alisamento radicular e TFDa com AM diluído em água a 0,01% (TFD/água); raspagem e alisamento radicular e TFDa com AM diluído em etanol 20% (TFDa/etanol). A periodontite foi induzida pela colocação de ligadura no primeiro molar inferior direito por sete dias. A seguir, as ligaduras foram removidas e os tratamentos aplicados. Os animais foram eutanasiados sete dias após o tratamento. O desfecho primário foi a perda óssea na região de furca do primeiro molar avaliada histometricamente. O desfecho secundário foi o número de osteoclastos imuno-histoquímicamente marcados para fosfatase ácida tartaratoresistente (TRAP). Diferenças entre grupos foram avaliadas por One Way Anova e post hoc Bonferroni. Trinta e sete ratos foram submetidos às análises. Os três grupos de tratamento demonstraram estatisticamente menor perda óssea e menor número de osteoclastos TRAP-positivos, quando comparados ao grupo sem tratamento (CP) (P<0.05). Nenhuma diferença foi verificada para os desfechos entre os grupos de tratamento (P>0,05) e entre os tratamentos e o controle negativo (P>0,05). A perda óssea e atividade osteoclástica não foram alteradas pela TFDa independentemente da inclusão do etanol na formulação do azul de metileno quando comparada a RAR. Portanto, a TFDa não resultou em benefício adicional quando utlizada como método coadjuvante à raspagem e alisamento radicular, considerando os parâmetros avaliados neste estudo.

Orientador: Antonio Wilson Sallum / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-26T23:46:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santana_AnaLiviaFileto_M.pdf: 1784469 bytes, checksum: 2e0765eeda22d929d35779199871496b (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: O aumento do biofilme e a ocorrência de gengivite é um achado comum durante o tratamento ortodôntico. O objetivo do presente estudo foi avaliar se o uso de terapia fotodinâmica (TFD), como coadjuvante ao controle mecânico do biofilme supragengival, tem eficácia no tratamento de pacientes com aparelhos ortodônticos fixos apresentando gengivite, em relação aos parâmetros clínicos e marcadores inflamatórios. Um estudo clínico cego, paralelo, randomizado e controlado foi realizado em pacientes ortodônticos com diagnóstico de gengivite, apresentando sangramento à sondagem em pelo menos um par de incisivos contralaterais e um par de molares ou pré-molares contralaterais (com bráquetes colados). Os pacientes selecionados foram alocados em dois grupos distintos para receber (1) TFD + profilaxia (pTFD; n=12) ou (2) profilaxia (PA; n=12). Nos sítios tratados com pTFD, o sistema incluiu um diodo emissor de luz (LED) com comprimento de onda igual a 450nm, 310mW de potência e 122,04mW/cm2 poder de densidade, associado a curcumina 10% como fotossensibilizador. No baseline, 1 e 3 meses após, parâmetros clínicos tais como nível de inserção clínica (NIC), profundidade de sondagem (PS), índice gengival (IG), índice de placa (IP), sangramento à sondagem (SS) foram mensurados e o padrão de citocinas [interferon (IFN)-y. interleucina (IL)-10, IL-17, IL-1?, IL-4, IL-6, IL-8 e fator de necrose tumoral (TNF)-?] no fluído gengival crevicular (FGC) foi determinado. Os parâmetros clínicos relacionados a inflamação, como IP e SS reduziram para ambos os grupos (p<0,05), porém sem diferenças estatísticas entre eles (p>0,05). Em relação as citocinas, aos 3 meses, menores concentrações de pró-inflamatórias como IFN-y, IL-1? e IL-8 foram encontradas na região anterior das arcadas do grupo pTFD quando comparadas com o grupo que só recebeu profilaxia (p<0,05). Adicionalmente, houve uma redução em IL-8 no grupo teste ao longo do tempo nesta mesma região (p<0,05) e um aumento em IL-1? na região posterior ao longo do tempo no grupo controle (p<0,05). A TFD como coadjuvante a remoção mecânica do biofilme demonstrou benefícios imunológicos adicionais em pacientes com gengivite e talvez seja uma importante alternativa durante o tratamento ortodôntico / Abstract: The increase in the biofilm and gingivitis occurrence are common findings during orthodontic treatment. The aim of the present study was to evaluate the use of photodynamic therapy (PDT), as an adjunct to mechanical control of supragingival biofilm, is effective in treating patients with fixed orthodontic appliances presenting gingivitis in terms of clinical parameters and inflammatory markers. A blind, parallel, randomized, controlled clinical trial was performed in orthodontic patients with gingivitis diagnosis presenting bleeding on probing in at least one pair of contralateral incisors and one more pair of contralateral molars or pre molars (with glued bráquetes). The selected patients were assigned to receive (1) PDT + prophylaxis (pPDT; n=12) or (2) prophylaxis alone (PA; n=12). In sites treated by pPDT, the laser system included an emitted blue light (LED) of wavelength 450nm, 310mW power and power density 122.04mW/cm2, with 10% curcumin as photosensitizer. At baseline, 1 and 3 months after, changes in clinical attachment level (CAL), in probing pocket depth (PPD), gingival index (GI), plaque index (PI), bleeding on probing (BoP) was performed and cytokine levels [interferon (IFN)-y. interleukin (IL)-10, IL-17, IL-1?, IL-4, IL-6, IL-8 and tumor necrosis factor (TNF)-?] in gingival crevicular fluid (GCF) were determined. The clinical parameters related to inflammation, such as PI and BoP reduced for both groups (p<0.05), but no statistical differences between them (p>0.05). Regarding cytokines, at 3-months, lower concentrations of pro-inflammatory IFN-y, IL-1? and IL-8 were found in anterior segment of pPDT group compared with PA group (p<0.05). Additionally, there was a reduction in IL-8 for the test group over time in the same part (p<0.05), and an increase in IL-1? in the posterior segment over time for the control group (p<0.05). PDT as an adjunctive to mechanical biofilm removal demonstrated additional immunological benefits in gingivitis patients and maybe be an alternative therapeutic strategy during orthodontic treatment / Mestrado / Periodontia / Mestra em Clínica Odontológica

Orientador: Carlos Henrique Ribeiro Camargo / Coorientadora: Marcia Carneiro Valera Garakis / Banca: Cláudio Antonio Talge Carvalho / Banca: Flaviana Bombarda de Andrade / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar, in vitro, a capacidade antimicrobiana da N-Acetilcisteína (NAC) e da terapia fotodinâmica (PDT) utilizando LASER diodo (LD) de baixa intensidade, sobre o Enterococcus faecalis, comparados ao uso do hidróxido de cálcio [Ca(OH)2] como medicação intracanal. Oitenta dentes humanos extraídos tiveram o diâmetro dos canais radiculares padronizados por meio do preparo com lima K#30. As raízes foram contaminadas com E. faecalis por 21 dias e divididas em cinco grupos de acordo com a medicação intracanal e/ou tratamento antimicrobiano a ser utilizada: 1) PDT+NAC; 2) NAC; 3) PDT; 4) Ca(OH)2 e 5) Solução salina. Sendo que 50 dentes foram avaliados por cultura microbiológica (UFC/mL), 10 por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e 20 por microscopia confocal de varredura a LASER (CLSM). Para UFC/mL foram feitas 3 coletas do conteúdo o canal radicular: a) após 21 dias de contaminação (coleta de confirmação - Sc); b) após PBM (S1); c) após 14 dias com as medicações intracanais (S2). UFC/mL não mostrou diferença estatística entre os grupos de PDT+NAC, NAC e Ca(OH)2, porém foram significantemente diferentes dos grupos da PDT, e solução salina. A análise ilustrativa por MEV mostrou resultados semelhantes à análise microbiológica (UFC/mL). No CLSM, todos os grupos avaliados foram efetivos contra E. faecalis, com a diferençando significantemente do grupo controle. Concluímos que NAC pode eliminar E. faecalis com ou sem PDT, sendo considerado como medicaçã... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to evaluate in vitro the antimicrobial capacity of N-Acetylcysteine (NAC) and photodynamic therapy (PDT) using low intensity LASER diode (LD) on Enterococcus faecalis, compared to the use of calcium hydroxide Ca(OH)2, as intracanal medication. Eighty extracted human teeth had their root canal diameters steardized by preparation with K 30 file. The roots were contaminated with E. faecalis for 21 days and divided into five groups according to the intracanal medication and/or antimicrobial treatment to be used. 1) PDT + NAC; 2) NAC; 3) PDT; 4) Ca(OH)2; 5) Saline solution. Fifty teeth were evaluated by microbiological culture (CFU/mL), 10 by scanning electron microscopy (SEM), and 20 by confocal LASER scanning microscopy (CLSM). The root canal was collected 3 times a) after 21 days of contamination (confirmation collection) (Sc); b) after biomechanical preparation S1; c) after 14 days with intracanal medications. CFU/mL showed no statistical difference between the PDT+NAC, NAC e Ca(OH)2 groups, but were significantly different from the PDT groups, and saline. The illustrative SEM analysis showed similar results to the analysis (CFU / mL). In CLSM, all evaluated groups were effective against E. faecalis, with a significant difference with the control group. We conclude that NAC can eliminate E. faecalis with or without PDT, being considered as a complementary medication in clinical practice / Mestre

Este estudo teve o objetivo de comparar os efeitos da biomodificação radicular por ácido cítrico associado à tetraciclina (AC) ou terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) no recobrimento de recessões gengivais pela técnica do enxerto de tecido conjuntivo subepitelial (ETCS). Para o estudo paralelo foram selecionados 60 sítios em 17 pacientes com recessões de classe I e II de Miller de 2 a 5 mm, múltiplas e isoladas, as quais foram divididas em 3 grupos: grupo controle (C) - apenas raspagem, grupo AC raspagem e, aplicação de gel de ácido cítrico associado à tetraciclina (90s) e o grupo aPDT - raspagem e aplicação da terapia fotodinâmica antimicrobiana (Azul de toluidina O 100g/ml + laser vermelho). Os parâmetros clínicos profundidade de sondagem (PS), nível clínico de inserção (NCI), altura da recessão (AR), largura mucosa ceratinizada (LMC), espessura de mucosa ceratinizada (EMC), índice de sangramento à sondagem (ISS), índice de placa (IPI) e porcentagem de recobrimento radicular (%REC) foram avaliados por um examinador cego e calibrado no baseline e 3, 6 e 12 meses de pós-operatório. Avaliou-se a hiperestesia dentinária (HIPER) e a percepção estética (EST) do paciente através de escala analógica visual no baseline e após 7 e 14 dias e 1, 3, 6 e 12 meses. A análise estatística dos dados de NCI foi feita pelo teste ANOVA complementado por Tukey. O teste de Friedman complementado por Wilcoxon foi aplicado para análise intra-grupos. O teste de Kruskal-Wallis foi aplicado para as diferenças entre os grupos, complementado por comparações múltiplas entre os três grupos. Para a %REC foi realizado o teste de Kruskal-Wallis complementado por Dunnet (p<0,05). Observou-se ganho do NCI em todos os grupos, mas este ganho foi maior para os grupos AC (0,55±1,68) e aPDT (0,80±2,11) em relação ao C (2,50±1,99) (p<0,05). Houve redução na AR em todos os grupos, porém o grupo AC (0,40±0,62) teve maior redução quando comparado C (1,15±1,04) (p<0,05). Houve aumento na LMC em todos os grupos e aumento na EMC também em todos os grupos, sendo que a EMC nos grupos aPDT (2,80±0,733) e AC (2,33±0,60) foram iguais com melhores resultados que o C (1,99±0,65) (p<0,05). Para a PS não foram observadas diferenças significantes entre os grupos e nem entre os períodos (p>0,05). A %REC foi maior nos grupos AC (82%±30%) e aPDT (82%±28%) do que no grupo C (58%±40%) (p<0,05). De maneira geral C, AC e aPDT foram semelhantes entre si e entre eles ao longo do tempo para o ISS e IPI (p>0,05). Houve redução significante da HIPER ao longo do tempo e entre os grupos, sendo que em AC (1,20±2,23) e aPDT (0,70±1,15) a diminuição da sensibilidade foi maior do que em C (2,63±2,22) (p<0,05). Houve melhora na EST ao longo do tempo e para o grupo AC (9,40±0,96) foi maior do que o C (8,58±1,07) (p<0,05), sendo que o grupo aPDT foi igual ao C. Concluiu-se que o uso de biomodificadores radiculares, como o AC e aPDT favorecem o recobrimento de recessões, resultando em redução da hipersensibilidade dentinária, maior porcentagem de recobrimento radicular e mais sítios com recobrimento completo, mantendo os resultados a longo prazo. / The aim of this study was to compare root biomodification by a combination of citric acid with tetracycline (CA) or antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) on root coverage by subepithelial connective tissue graft (SCTG). Sixty sites with Millers class I or II recessions were divided in three groups: Control (C) scaling only, CA scaling and root conditioning with a combination of citric acid and tetracycline (gel 90s), aPDT scaling and antimicrobial photodynamic therapy (toluidine blue O 100 g/ml and red laser). Periodontal clinical parameters as probing depth (PD), clinical attachment level (CAL), recession height (RH), keratinized mucosa height (KMH), keratinized mucosa width (KMW), bleeding on probing (BOP), plaque index (PI) and percentage of root coverage (%RC) were evaluated by a blinded calibrated examiner at baseline, 3, 6, 12 months. Dentinal hyperestesia (HYPER) and patient esthetic perception (EST) were recorded in a visual analogic scale at baseline, 7 and 14 days, 1, 3, 6,and 12 months. Statistical analysis of CAL values was done with ANOVA complemented by Tukey. Friedmans complemented by Wilcoxons test evaluated intragroup data, while Kruskal-Wallis was applied for intergroup data. Comparison for %RC was done by Kruskal-Wallis complemented by Dunnet (p<0.05). Reduction in CAL was observed in all groups, with higher numbers for CA (0.55±1.68) and aPDT (0.80±2.11) in relation to C (2.50±1.99) (p<0.05). A higher reduction in RH was observed for CA (0.40±0.62) compared to C (1.15±1.04) (p<0.05). There was an improvement of KMH and KMW for all groups, but with higher values of KMW for aPDT (2.80±0.733) and CA (2.33±0.60) in relation to C (1.99±0.65) (p<0.05). There were no differences for PD (p>0.05). There was a significant higher %RC for CA (82%±30%) and aPDT (82%±28%) in relation to C (58%±40%) (p<0.05). In general, BOP and PI were similar for all groups and periods (p>0.05). There was a significant reduction in hyperestesia along time, but for CA (1.20±2.23) and aPDT (0.70±1.15) the reduction was higher than C (2.63±2.22) (p<0.05). Esthetic perception was improved along time with higher values for CA (9.40±0.96) than C (9.40±0.96) (p<0.05). In conclusion, root biomodification agents as CA and aPDT favored recession coverage by STCG, resulting in reduction of dentin hypersensitivity, higher percentage of root coverage and more sites with total coverage. Additionally, these results had a long-term stability.

Objetivo: Alternativas para o tratamento da doença periodontal necessitam ser testadas e uma opção viável parece ser o uso da terapia antimicrobiana fotodinâmica. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito da terapia antimicrobiana fotodinâmica através das alterações no perfil microbiológico e no padrão de citocinas após o tratamento da doença periodontal induzida por ligaduras em cães. Métodos: Para tanto, foi induzida doença periodontal através da colocação de ligaduras em torno dos pré-molares mandibulares bilaterais em oito cães. Após a indução da doença os sítios foram aleatoriamente tratados através de raspagem e alisamento radicular (RAR) com instrumentos manuais, terapia antimicrobiana fotodinâmica (TAF) com a utilização de uma fonte de luz laser associada a um fotosensitizador, ou através da combinação das terapias. Para a análise da resposta dos sítios frente aos tratamentos, diferentes tempos experimentais foram utilizados (baseline, uma, três e quatro semanas) onde foram coletadas amostras de placa dentobacteriana subgengival e a contagem de 40 espécies microbianas foi determinada através da técnica de hibridização DNA-DNA. Além disso, amostras de tecidos periodontais foram removidas e a expressão gênica de diferentes citocinas (TNF-&alpha;, RANKL, OPG, MMP-1, IL-6 e IL-10) foi determinada pela técnica de reação em cadeia de polimerase quantitativa em tempo real. Os dados foram analisados através dos testes de equações de estimação generalizadas (EEG) e análise da variância (ANOVA) com um nível de significância de 0,05. Resultados: Os dados demonstraram uma redução dos níveis da maioria das espécies bacterianas monitoradas após uma semana para todos os tratamentos realizados (P < 0,001), no entanto, um aumento na contagem média de P. intermedia (P <0,01), P. nigrescens (P < 0,001) e T. forsythia (P < 0,05) foi observado para os sítios tratados por TAF e por RAR + TAF. Após quatro semanas foi observada uma possível recolonização de P. gingivalis e T. denticola, para todos os tratamentos testados (P < 0,001). A contagem média de T. forsythia manteve-se elevada durante o curso do estudo, especialmente para TAF e RAR + TAF. Adicionalmente foi observada uma notável redução da contagem média de A. actinomycetemcomitans para o grupo TAF (P < 0,001). Em relação ao perfil das citocinas avaliadas, os resultados foram similares para todos os tratamentos testados. O fator tempo foi considerado estatisticamente significante independente do tratamento realizado (P < 0,001) e não foi observada influência dos tratamentos sobre os resultados (P > 0,05). Foi observada uma redução progressiva na expressão das citocinas durante os períodos de observação, entretanto entre os períodos de três e quatro semanas não houve diferença estatisticamente significante (P > 0,05). Conclusões: De acordo com o modelo experimental utilizado neste estudo os dados sugerem que os tratamentos testados afetaram diferentemente as espécies bacterianas monitoradas e apresentaram um efeito similar na expressão das citocinas avaliadas. / The purpose of this study was to evaluate the effect of a single application of antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) on microbiological profile and cytokine pattern in dogs. Periodontal disease was induced by placing 3.0 silk ligatures around the mandibular pre-molars bilaterally during 8 weeks. The dogs were randomly treated with aPDT using a dye/laser system, scaling and root planning (SRP) or with the association of treatments (SRP+aPDT). Plaque samples were collected at baseline, 1, 3 and 4 weeks and the mean counts of 40 species were determined using DNA-DNA hybridization. Gingival biopsies were removed and the expression of tumor necrosis factor alpha (TNF-&alpha;), receptor activator of NF-kB ligand (RANKL), osteoprotegerin (OPG), matrix metalloproteinase (MMP-1), interleukin (IL) 6, IL-10 and total bacterial load by analysis of 16S rRNA gene were evaluated through RealTime PCR. The results shows that the levels of the majority of the species were reduced one week post therapy for all treatments, however, an increase in counts of Prevotella intermedia (P =0.00), Prevotella nigrescens (P =0.00) and Tannerella forsythia (P =0.00) was observed for aPDT and SRP+aPDT. After 4 weeks a regrowth of Porphyromonas gingivalis (P =0.00) and Treponema denticola (P =0.00), was observed for all treatments, also a strikingly reduction of counts on counts of Aggregatibacter actinomycetemcomitans was observed for the aPDT (P =0.00). For the cytokine pattern the results were similar for all treatments and it was observed a reduction in the expression of cytokines and bacterial load throughout the study. Our results suggest that SRP, aPDT in a single application and SRP+aPDT affects different bacterial species and have similar effects on the expression of cytokines evaluated during the treatment of ligature-induced periodontitis.

A Fotoquimioterapia (FQT) vem sendo usada no tratamento de várias doenças, inclusive câncer, com a vantagem de ser menos agressiva, possuindo efeitos colaterais negativos desprezíveis. Esta técnica envolve a combinação de uma fonte de luz visível e de um fotossensibilizador (FS), que é reativo apenas sob a irradiação com luz adequada, e que se acumula preferencialmente no tecido doente. Uma ideia para deixar essa técnica mais eficiente é potencializar esta última característica do FS com uso de um carreador que tenha afinidade com tecidos doentes. Pensamos na hipótese de usar a albumina do soro como carreador uma vez que ela é uma proteína intrínseca do organismo, tem alta afinidade com os tecidos tumorais e possui sítios para ligar vários compostos extrínsecos. Como modelo usamos a albumina de soro bovino (ASB). Como FS utilizamos acridina laranja, nitrofurantoína, corantes ciânicos com dois cromóforos e protoporfirina IX (PpIX) sintética e extraída de glândulas Harderianas de ratos da linhagem Wistar (PpIX endógena). Foram analisadas as características de ligação entre os FS e a ASB e seus efeitos nas características fotofísicas dos FS em função da sua estrutura, utilizando espectroscopias de absorção ótica, fluorescência estática e resolvida no tempo e a técnica de microscopia de imagens por tempo de vida da fluorescência (FLIM). Foi mostrado que a ligação com ASB induz ao deslocamento batocrômico dos espectros de absorção e da fluorescência, aumentando a intensidade e o tempo de vida de fluorescência dos FS. Características como carga positiva, estrutura linear e tamanho pequeno da molécula do FS favorecem sua ligação com a ASB. Uma comparação entre PpIX sintética e endógena mostrou que a formação de um complexo da PpIX com estruturas anfifílicas também aumenta a probabilidade da sua ligação com a ASB. Os resultados obtidos mostraram que a ASB se liga efetivamente aos FS de diferentes estruturas e pode ser usada como carreador dos mesmos para tecidos tumorais. / Photochemotherapy (PCT) is used for the treatment of various diseases, including cancer, with the advantage of being less aggressive with reduced adverse effects. This technique includes the use of a visible light source and a photosensitizer (PS), which is reactive only under light exposure and localizes preferably in abnormal tissues. To make this technique more efficient it is necessary to increase the PS content in these tissues using a carrier which possesses affinity with these tissues and is able to bind PS. A good opportunity is to use serum albumin as a carrier since it is an intrinsic protein, has high affinity to tumor tissues and possesses sites for binding of various extrinsic compounds. In this work the bovine serum albumin (BSA) was used as a carrier model. Acridine orange, nitrofurantoin, cyanine dyes with two chromophores and protoporphyrin IX synthetic and extracted from Harderian glands of Wistar line rats (endogenous) were used as PS. The characteristics of the PS binding with BSA and the effect of this interaction on PS photophysical properties were studied using optical absorption, steady-state and time resolved fluorescence spectroscopies, and fluorescence lifetime image microscopy (FLIM). It was demonstrated that PS binding with BSA produces a bathochromic shift in the PS absorption and fluorescence spectra and increases its fluorescence intensity and lifetime. The positive charge, linear structure and small size of the PS molecule favors its binding with BSA. A comparison between synthetic and endogenous PpIX demonstrates that complexation of PpIX molecule with an amphiphilic structure increases the probability of its binding with BSA. The obtained results demonstrate that BSA binds effectively PS with different molecular structures and it is promising for their transport to tumor tissue.

Orientador: Ana Cláudia Pavarina / Banca: Eunice Teresinha Giampaolo / Banca: Marco Antonio Compagnoni / Banca: Cristina Kurachi / Banca: Karin Hermana Neppelenbroek / Resumo: As próteses removíveis estão em contato direto com os tecidos bucais, saliva e sangue e, ao serem removidas da cavidade bucal do paciente, podem estar contaminadas com micro-organismos patogênicos. Esses micro-organismos podem ser transmitidos aos técnicos de laboratório por contato direto ou pelos aerossóis produzidos durante o desgaste ou o polimento de próteses contaminadas. Neste caso, os micro-organismos podem ser disseminados pelo ambiente, desencadeando infecção cruzada. Assim, para prevenir a contaminação cruzada, todas as próteses devem ser desinfetadas ao serem enviadas ao laboratório e ao retornarem ao consultório. Com base nessas considerações, o presente estudo avaliou a efetividade clínica da irradiação por micro-ondas e da terapia fotodinâmica (PDT) para desinfecção de próteses totais superiores. Para os procedimentos de irradiação por micro-ondas, amostras de biofilme das próteses foram coletadas de 30 pacientes, os quais foram divididos aleatoriamente em dois grupos experimentais com 15 indivíduos cada: Grupo 1 - as próteses foram expostas às micro-ondas durante 3 minutos (650 W), Grupo 2 - as próteses foram expostas às micro-ondas durante 2 minutos (650 W). Para os tratamentos com PDT, amostras de biofilme das próteses foram coletadas de 60 pacientes, os quais foram divididos aleatoriamente em quatro grupos experimentais (n = 15 cada): Grupos I e II - as próteses foram borrifadas com 50 mg/L e 100 mg/L do Photogem® em suspensão, respectivamente; Grupos III e IV - as próteses foram tratadas com 50 mg/L e 100 mg/L de Photogem® em gel, respectivamente. Após 30 minutos de pré-irradiação, todas as 60 próteses foram expostas à luz de LED azul com potência de 37,5 J/cm2 (26 minutos). Amostras das próteses foram obtidas utilizando-se swab estéril antes (nas superfícies do lado esquerdo) e após (nas superfícies do lado direito)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Prosthetic appliances that have been in contact with oral tissues, saliva and blood can be contaminated with pathogenic microorganisms when they are removed from the patient's mouth. These microorganisms can be transmitted to laboratory staff through direct contact with the infected denture or from aerosols that will be formed when the surfaces are ground or polished. In this case, microorganisms with varying degrees of virulence can be spread and disseminated into the air, leading to cross-infection. In order to prevent microbial cross-contamination among denture patients, all dental prostheses must be disinfected on entering and again on leaving the laboratory. Therefore, this investigation evaluated the clinical effectiveness of microwave irradiation and photodynamic therapy (PDT) on the inactivation of microorganisms present on complete dentures. For microwave irradiation procedures, biofilm samples were collected from dentures of 30 patients, who were randomly divided into two experimental groups of 15 subjects each: Group 1 - patients had their maxillary denture microwaved for 3 minutes (650 W); Group 2 - patients had their maxillary denture microwaved for 2 minutes (650 W). For PDT treatments, biofilm samples were collected from dentures of 60 patients, who were randomly divided into four experimental groups (n = 15 each): Groups I and II - patients had their maxillary denture sprayed with 50 mg/L and 100 mg/L of Photogem® suspension, respectively; Groups III and IV - patients had their maxillary denture treated with 50 mg/L and 100 mg/L of Photogem® gel, respectively. After 30 minutes of pre-irradiation, all sixty dentures were exposure to blue LED light at 37.5 J/cm2 (26 minutes). Denture samples were taken with sterile cotton swabs, before (left side surfaces) and after (right side surfaces) microwave irradiation and PDT procedures. All microbial material was diluted... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Ana Cláudia Pavarina / Resumo: Este trabalho avaliou a eficácia das Terapias Fotodinâmica Antimicrobiana (aPDT) e Sonodinâmica (SDT) na inativação de espécies de Candida. O estudo 1 avaliou a efetividade da aPDT na inativação de biofilmes de Candida albicans susceptível e resistente ao fluconazol, bem como seus efeitos sobre os fatores de virulência das cepas. Para isso, biofilmes destas cepas foram tratados com aPDT mediada pelo Photodithazine e luz LED. Após a aPDT, as células foram recuperadas e os fatores de virulência avaliados. A capacidade de adesão foi analisada pelos testes de XTT (atividade metabólica) e UFC/mL (viabilidade celular). A capacidade de formar biofilme foi avaliada pelos testes de XTT, UFC/mL e biomassa total. A síntese de exoenzimas foi avaliada por testes fluorimétricos. Os dados foram analisados por ANOVA a 2 ou 3 critérios (p≤0,05). Verificou-se que a aPDT reduziu a viabilidade das cepas, entretanto não alterou os fatores de virulência. No estudo 2, foi avaliada a efetividade da aPDT no tratamento de pacientes com estomatite protética em comparação com a Nistatina (NIS). Os pacientes do grupo aPDT (n=30) foram submetidos a 6 sessões de aPDT (3 vezes/semana, 15 dias) e os pacientes do grupo NIS (n=35) utilizaram o antifúngico 4 vezes/dia, durante 15 dias. Coletas microbiológicas das próteses e palatos foram realizadas e cultivadas em ágar sangue e chromagar (UFC/mL). Fotografias dos palatos foram tomadas para avaliação clínica da lesão. Os dados foram analisados pelo Modelo Linear... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This work evaluated the efficacy of Antimicrobial Photodynamic (aPDT) and Sonodynamics (SDT) Therapies in the inactivation of Candida species. The study 1 evaluated the efficacy of aPDT in the inactivation of susceptible and fluconazole resistant Candida albicans biofilms, as well as its effect on the virulence factors of the strains. For this, biofilms were treated with aPDT mediated by Photodithazine and LED light. After aPDT, cells were recovered and the virulence factors were evaluated. The adhesion capacity was assessed by XTT assay (metabolic activity) and CFU/mL (cell viability). The ability to form biofilm was evaluated by XTT, CFU/mL and total biomass. The synthesis of exoenzymes was evaluated by fluorimetric tests. Data were analyzed by ANOVA-2 or 3 way (p≤0.05). It was found that aPDT reduced the viability of the strains, however aPDT did not alter the virulence factors. The study 2, evaluated the effectiveness of aPDT in the treatment of patients with denture stomatitis in comparison with Nystatin (NYS). Patients of the aPDT group (n=30) underwent 6 sessions of aPDT (3 times/week, 15 days). Patients of the NYS group (n=35) rinsed the antifungal, 4 times/day, for 15 days. Microbiological collections of dentures and palates were performed and cultured on blood agar and chromagar (CFU/mL). Photographs of the palates were taken for clinical evaluation. Data were analyzed by the Linear Model of Repeated Measures (p≤0.05). It was observed that aPDT was more effective in... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Carla Raquel Fontana / Banca: Maurício da Silva Baptista / Banca: Ana Claudia Pavarina / Banca: Eduardo Maffud Cilli / Banca: Denise Maria Zezell / Resumo: Nos últimos anos, a Organização Mundial da Saúde vem alertando que a era pós-antibióticos é uma ameaça cada vez mais real. Além da resistência individual das células bacterianas, essas podem se tornar ainda mais tolerantes aos agentes antimicrobianos ao crescerem em biofilmes. A maior tolerância aos antibióticos observada nos biofilmes baseia-se principalmente na proteção das bactérias pela matriz polimérica extracelular autoproduzida, e nos diversos fenótipos de crescimento encontrados na estrutura, que podem ser refratários à ação os fármacos convencionais. Nesse cenário de crescente e disseminada resistência a antimicrobianos, a busca por novos fármacos e terapias alternativas se tornou crucial, especialmente aqueles que sejam capazes de eliminar os microrganismos resistentes, impedir o desenvolvimento de novas formas de resistência, e serem ativos contra biofilmes. A terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT, do inglês antimicrobial photodynamic therapy) e os peptídeos antimicrobianos (PAM) ganham destaque nesse contexto, em especial para o tratamento de infecções localizadas. Entretanto, ambas as abordagens apresentam limitações terapêuticas quando empregadas individualmente. Dessa forma, este trabalho teve por objetivo estudar os efeitos e mecanismos da combinação dos PAMs aureína 1.2 (AU) e seu dímero (AU)2K com a aPDT mediada pelos fotossensibilizadores (FS) azul de metileno (AM), clorina-e6 (Ce6) ou curcumina (CUR), usando como modelo a bactéria Enterococcus faecalis... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In the past few years, the World Health Organization has been warning that the post-antibiotic era is an increasingly real threat. In addition to the individual resistance of bacterial cells, they may be even more tolerant to antimicrobial agents by growing in biofilms. The higher tolerance to antibiotics observed in biofilms is mainly based on the protection of bacteria by the self-produced extracellular polymeric matrix, and in the various growth phenotypes found in the structure, which may be refractory to the action of conventional drugs. In this scenario of increasing and widespread antimicrobial resistance, the search for new drugs and alternative therapies has become crucial, especially for those that are capable of eliminating resistant microorganisms, preventing the development of new forms of resistance, and are active against biofilms. Antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) and antimicrobial peptides (AMP) are highlighted in this context, especially for the treatment of localized infections. However, both approaches have therapeutic limitations when used individually. Therefore, the aim of this study was to evaluate the effects and mechanisms of the combination of the AMPs aurein 1.2 (AU) and its dimer (AU)2K with aPDT mediated by the photosensitizers (PS) methylene blue (MB), chlorine-e6 (Ce6) or curcumin CUR), using the bacteria Enterococcus faecalis as a model, in planktonic phase and biofilm. The dimer (AU)2K did not present antibacterial activity in plankto... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor