Orientador: Lucia Regina Durrant / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-23T07:29:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Falconi_FabianaAndre_M.pdf: 3998738 bytes, checksum: 115b43f03b9be9082412a908e275d20f (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Os fungos basidiomicetos de degradação branca apresentam um mecanismo enzimático não específico, que permite degradar não somente a lignina, mas uma série de poluentes tóxicos altamente recalcitrantes. Neste trabalho, utilizou-se o Phanerochaete çhrysosporium ATCC 24725, considerado fungo modelo de degradação branca e duas linhagens fúngicas (897 e 898), isoladas da Reserva Ecológica Juréia- Itatins, que embora não identificadas, sabe se que não pertencem ao grupo dos basidiomicetos. Os fungos foram crescidos em diversas condições de cult~vo (estacionária, agitação, oxigenação, adição de glicose e oxigenação com adição de glicose), por 3, 7 e 10 dias, em meio contendo 0,1 ou 0,5% de ácido tânico, ácido lignossulfônico, álcool veratrílico ou fenol como fontes de carbono. Após a medida das atividades das enzimas ligninolíticas (lacase, peroxidase, lignina peroxidase, álcool veratrílico oxidase e manganês peroxidase), os resultados revelaram que o melhor meio para produção enzimática foi aquele contendo 0,5% de fonte de carbono em condição, estacionária sem oxigenação. A degradação dos compostos (ácido tânico, ácido lignossulfônico e fenol) contidos neste meio, foi determinada por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), chegando-se à conclusão que a maior porcentagem de degradação foi a do ácido tânico pela linhagem 898. A porcentagem de redução da Demanda Química de Oxigênio (DQO), quantidade de oxigênio necessária para oxidar quimicamente a matéria orgânica, também foi determinada e chegou-se a resultados semelhantes aos encontrados por CLAE. Tanto o fungo 897 como o 898, apres~ntaram maiores atividades enzimáticas, porcentagem de degradação e redução de DQO, que o fungo P. chrysosporium. / Abstract: The basidiomycetes white-rot fungi present a non-specific enzymatic mechanism, which degrades not only lignin, but also various toxic pollutants. In this work, the white-rot fungus Phanerochaete chrysosporium ATCC 24725, considered a model lignin degrading .fungus, and two strains (897 and 898), isolated from the Jureia- Itatins Ecological Reserve were used. These two strains are not basidiomycetes. The fungi were grown under diverse conditions (stationaPj, agitation, oxygenation, addition of glucose and oxygenation with glucose addition), for 3,7 and 10 days, in culture containing 0.1% or 0.5% of tannic acid, lignosulfonic acid, veratryl alcohol and phenol as carbon sources. After measuring ligninolytic activities (laccase, lignin peroxidase, manganese peroxidase, veratryl alcohol oxidase and peroxidases), the results revealed that the bestmedium was that containing 0.5% ofthe carbon source without agitation or oxygenation. The degradation of compounds (tannic acid, lignosulfonic acid and phenol) contained in this medium was determined by High Perform~nce Liquid Chromatography (HPLC), revealing that the greatest degradation was .that of tannic acid by strain 898. The percentage reduction of Chemical Oxygen Demand (COD), was also determined, showing similar results to those obtained by HPLC. Both fungus 897 and 898 showed higher enzymatic activities, percentage degradation, and reduction of COD than the fungus Phanerochaete chrysosporium. / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Título original: Interação parasita-hospedeiro na fungicultura das formigas atíneas derivadas / Orientador: André Rodrigues / Banca: Silma Leite Rocha / Banca: Cláudio José Von Ruben / Resumo: A fungicultura das formigas atíneas é um modelo atrativo para estudar associações parasita-hospedeiro, pois abriga um amplo número de parasitas e hospedeiros filogeneticamente diversos. As formigas atíneas dependem do cultivo obrigatório de fungos para alimentar suas crias. Nesse mutualismo, fungos do gênero Escovopsis atuam como parasitos especializados do fungo cultivado pelas formigas. Neste trabalho determinamos que a virulência da interação Escovopsis-fungo mutualista é o resultado final da susceptibilidade do hospedeiro e a infectividade do patógeno. Para tanto, foram realizados ensaios de co-cultivo in vitro utilizando fungos mutualistas e isolados de Escovopsis provenientes de colônias de formigas atíneas derivadas. Adicionalmente, foram realizados bioensaios utilizando subcolônias inoculadas com esporos de Escovopsis, para avaliar como a complexidade do jardim de fungo, em conjunto com as formigas, interfere na virulência da interação patógeno-hospedeiro. Os resultados indicaram que o fungo mutualista de Trachymyrmex sp. é mais susceptível a infecção por Escovopsis, quando comparado com Leucoagaricus gongylophorus, o fungo mutualista cultivado por Atta sexdens rubropilosa. Além disso, foi observado que a susceptibilidade do hospedeiro tem uma maior influência do que infectividade do patógeno, no resultado final da interação Escovopsis-fungo mutualista. O fator que determinou a infectividade de Escovopsis foi o padrão de reconhecimento frente ao hospedeiro e não a taxa de crescimento do patógeno. Embora Escovopsis ocasionou a morte do hospedeiro na maioria dos confrontos in vitro, nos experimentos realizados com subcolônias houve a morte de apenas quatro dentre as 90 réplicas tratadas com Escovopsis. Tendo em vista que Escovopsis ocasiona a morte do fungo mutualista apenas in vitro, ou seja, sem a proteção das interações presentes no jardim ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Fungus-growing by attine ants is an attractive model system for studying host-parasite associations, because it harbors phylogenetically diverse parasites and hosts. These ants rely on fungal cultivation to feed their brood. In this mutualism, fungi in the genus Escovopsis act as specialized parasites of the ant fungal cultivar. Here, we determined that virulence of the interaction between Escovopsis and the mutualistic fungus is a result of the host susceptibility and the pathogen infectivity. We carried out in vitro dual-culture assays using mutualistic fungi and Escovopsis isolates from different higher-attine ant species. In addition, we performed bioassays using subcolonies inoculated with Escovopsis spores to evaluate how the complexity of the fungus gardens, along with the ants, interfere in the virulence of the host-pathogen interaction. Our results showed that the fungal cultivar of Trachymyrmex sp. is more susceptible to infection by Escovopsis when compared to Leucoagaricus gongylophorus, the mutualistic fungus cultivated by Atta sexdens rubropilosa. In addition, we observed that host susceptibility had a larger impact than the pathogen infectivity in the outcome of the Escovopsis- fungal cultivar interaction. The factor that determined the infectivity of Escovopsis was the patterns of host recognition but not the pathogen's growth rate. Escovopsis caused host death in most in vitro assays. On the other hand, only four out of 90 subcolonies treated with Escovopsis died during the experiments. Considering that Escovopsis caused the death of the mutualistic fungus only in vitro (without the protection of the interactions present in fungus garden), our results suggest that this fungus is an opportunistic pathogen / Mestre

A água é um recurso essencial a todas as formas de vida, e a forma como é explorada se reflete nos âmbitos sociais, econômicos e ambientais. A urbanização em torno de bacias hidrográficas é responsável por diversas alterações de serviços ecossistêmicos importantes. O Arroio Dilúvio, em Porto Alegre, é um importante afluente do Lago Guaíba, que por sua vez é a principal fonte hídrica de abastecimento da cidade. Ao longo da história o Arroio sofreu diversas modificações, além de intensa contaminação através da deposição de esgoto. O estudo da microbiota deste ambiente permite maior elucidação do efeito de contaminantes sobre a diversidade e manifestação de diferentes fenótipos. Leveduras são fungos unicelulares amplamente difundidos no ambiente, e estudos sugerem que há uma correlação positiva entre leveduras e ambientes aquáticos poluídos. Assim, o objetivo deste trabalho foi analisar a diversidade e a resistência à antifúngicos de leveduras isoladas de amostras de água coletadas ao longo do Arroio Dilúvio em Porto Alegre. Isolados de leveduras provenientes do Arroio Dilúvio foram submetidos a testes de suscetibilidade frente a antifúngicos através dos métodos de disco-difusão em ágar e ensaio de concentração inibitória mínima. Para a realização das técnicas moleculares, foi extraído o DNA genômico dos isolados para amplificação da região ITS1-5.8S-IT2 do rDNA utilizando os oligonucleotídeos iniciadores ITS1 e ITS4. A região ITS foi submetida a técnica de PCR-RFLP utilizando as endonucleases HinfI, HaeIII e CfoI e o perfil de restrição permitiu a construção de um dendrograma. Os ensaios de suscetibilidade mostraram alta prevalência de resistência a antifúngicos da classe dos azóis. Dezesseis isolados exibiram resistência a anfotericina B, dos quais 14 foram submetidos ao sequenciamento da região ITS. A análise das sequências permitiu a identificação de leveduras do gênero Candida, incluindo as espécies potencialmente patogênicas C. glabrata, C. parapsilosis e C. tropicalis, e do gênero Debaryomyces. A resistência a antifúngicos em leveduras do Arroio Dilúvio, reforça a importância de estudos da microbiota ambiental e indica que a degradação do ambiente influencia no fenótipo exibido. / Water is an essential resource to all forms of life, and the way it is exploited is reflected in the social, economic and environmental spheres. Urbanization around watershed is responsible for several important ecosystem service changes. In Porto Alegre, Arroio Dilúvio is an important component of Lake Guaiba, which in turn is the main water source of the city. Throughout history, Arroio Dilúvio underwent several changes, and it suffers with intense contamination by the deposition of sewage. The study of the environment's microbiota enables further elucidation of the effect of contaminants on diversity and expression of phenotypes. Yeasts are unicellular fungi widespread in the environment, and studies suggest that there is a positive correlation between yeast and polluted aquatic environments. The aim of this study was to analyze the diversity and resistance to antifungals of yeasts isolated from water samples collected along the Arroio Dilúvio in Porto Alegre. Yeast isolates from the Arroio Dilúvio were subjected to susceptibility testing against antifungals through the agar disk diffusion method and the minimum inhibitory concentration test. For the molecular techniques, the genomic DNA of the isolates was extracted with further amplification of ITS1-5.8S-IT2 using primers ITS1 and ITS4. The ITS region was subjected to PCR-RFLP using the restriction enzymes HinfI, HaeIII and CfoI and the restriction profile allowed the construction of a dendrogram. Susceptibility tests showed high prevalence of resistance to azole antifungals. Sixteen isolates exhibited resistance to amphotericin B, of which 14 were subjected to sequencing of the ITS region. The sequence analysis allowed the identification of Candida species, including the potentially pathogenic species C. glabrata, C. parapsilosis and C. tropicalis, and Debaryomyces genus. The manifestation of resistance to antifungals in yeasts isolated from Arroio Dilúvio reinforces the importance of studies of environmental microbiota and indicates that environmental degradation influences the phenotype displayed.

Ácaros podem ser encontrados nos mais diferentes ambientes e podem ter um papel importante na agricultura e na área médica. Por exemplo, ácaros aquáticos têm sido relatados como bioindicadores de qualidade da água. Em ambientes domiciliares e armazéns, a espécie Tyrophagus putrescentiae é frequentemente associada à deterioração de alimentos e à dispersão de microrganismos. Além disso, pode servir como alimento para outras espécies de ácaros. Assim, os objetivos deste estudo foram: Avaliar padrões ecológicos de ácaros aquáticos em áreas de arroz irrigado e lagoas nativas, e conhecer o ciclo biológico de T. putrescentiae e seu potencial de dispersão de fungos ambientais e de importância médica. Os resultados demonstraram que os ácaros aquáticos possuem forte correlação com a turbidez, apresentando maior riqueza e abundância em lagoas nativas do que em áreas de arroz irrigado. Com relação à T. putrescentiae, esta espécie apresentou melhores parâmetros demográficos quando alimentada sobre levedura seca. Entretanto, a 18 e 25ºC ovipositou mais sobre ração de rato, com diferentes padrões de oviposição para as temperaturas avaliadas. Alem disso, T. putrescentiae apresentou maiores taxas de crescimento populacional sobre os fungos Fusarium verticillioides, Penicillium citrinum e Trichophyton mentagrophytes, podendo, portanto, ser considerado um disseminador de fungos ambientais e de importância médica. Além disso, nosso estudo demonstrou que B. dentriticus é um predador em potencial de T. putrescentiae e Megninia ginglymura. Este foi o primeiro estudo no Brasil que demonstrou a importância de ácaros de ambientes aquáticos e dispersores de fungos ambientais e de importância medica. / Mites can be found in many different environments and can play an important role in agriculture and in the medical field. For example, aquatic mites have been reported as bioindicators of water quality. In home environments and warehouses, Tyrophagus putrescentiae is often associated with food spoilage and dispersal of microorganisms. In addition, it can serve as food for other species of mites. Thus, the objectives of this study were: To evaluate ecological patterns of aquatic mites in irrigated rice and native lagoons, and to know the biological cycle of T. putrescentiae and its potential for dispersion of environmental fungi and of medical importance. The results showed that aquatic mites have a strong correlation with turbidity, presenting greater richness and abundance in native ponds than in irrigated rice areas. In relation to T. putrescentiae, this species presented better demographic parameters when fed on dry yeast. However, at 18 and 25ºC it oviposit more on rat ration, with different oviposition patterns for the evaluated temperatures. In addition, T. putrescentiae presented higher population growth rates on fungi Fusarium verticillioides, Penicillium citrinum and Trichophyton mentagrophytes, and could therefore be considered a disseminator of environmental fungi and some of medical importance. In addition, our study demonstrated that B. dentriticus is a potential predator of T. putrescentiae and Megninia ginglymura. This is the first study in Brazil that demonstrated the importance of mites from aquatic environments and dispersers of environmental fungi and of medical importance.

Orientador: Gustavo Orlando Bonilla Rodriguez / Coorientador: Eleni Gomes / Banca: Vanildo Luiz Del Bianchi / Banca: Luciano Takeshi Kishi / Resumo: As celulases são enzimas empregadas principalmente na indústria de papel e celulose e têxtil, e têm ganhado destaque pelo seu potencial hidrolítico em materiais lignocelulósicos na produção de etanol, já que são capazes de hidrolisar a celulose. O objetivo do projeto foi efetuar a caracterização e isolamento das endoglucanases produzidas pelo fungo termofílico Myceliophthora thermophila M.7.7 em cultivo em estado sólido. Foram realizados ensaios para avaliar os efeitos do pH, da temperatura, de diversas substâncias químicas, cátions e compostos fenólicos na atividade enzimática. A estimativa da massa molecular foi realizada por eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), e como resultado foi possível observar sete endoglucanases detectadas por zimografia, que possuem massa molecular estimada entre 26 e 82 kDa. O valor ótimo para o pH do extrato enzimático bruto foi 5,5 e 70ºC para a temperatura ótima em incubação de 4 minutos. Em relação à estabilidade do extrato bruto, os maiores valores ocorreram entre as faixas de pH de 6 a 6,5, e 30 e 40ºC para temperatura até 120 minutos. Entre os reagentes testados, Triton, DTT e Isopropanol aumentaram a atividade enzimática sobre o extrato bruto em cerca de 10%. Os cátions NaCl, SrCl2, BaCl2 e ZnCl2 aumentaram a atividade das endoglucanases. Em relação aos compostos fenólicos, todos induziram em diversos graus o decréscimo da atividade das endoglucanases do extrato bruto. Das sete endoglucanases, três foram isoladas pela extração... / Abstract: Cellulases are enzymes used mainly in the paper and cellulose and textile industries and have been highlighted for their hydrolytic potential in lignocellulosic materials in the production of ethanol, since they are capable of hydrolyzing cellulose. The objective of the project was to characterize and isolate the endoglucanases produced by the thermophilic fungus Myceliophthora thermophila M.7.7 in solid state cultivation. Tests were carried out to evaluate the effects of pH, temperature, several chemical substances, cations and phenolic compounds on enzymatic activity. The molecular weight estimation was performed by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), and as a result it was possible to observe seven endoglucanases detected by zymography, which have an estimated molecular mass between 26 and 82 kDa. The optimum pH for the crude enzyme extract was 5.5, and 70 °C for the optimum incubation temperature for 4 minutes. Regarding the stability of the crude extract, the highest values occurred between the pH ranges from 6 to 6.5, and 30 to 40ºC for temperature up to 120 minutes. Among the tested reagents, Triton, DTT and Isopropanol increased the enzymatic activity on the crude extract by about 10%. NaCl, SrCl2, BaCl2 and ZnCl2 increased the endoglucanase activity. With respect to the phenolic compounds, all induced to varying degrees the decrease in the activity of the endoglucanases of the crude extract. Of the seven endoglucanases, three were isolated by direct gel ... / Mestre

Neste trabalho realizaram-se reações de resolução enzimática de alcoóis secundários utilizando a enzima imobilizada lipase de Candida antarctica (NOVOZYME 435). Os alcoóis utilizados foram: (RS)-1-(4-metoxifenil)etanol (1a); (RS)-4-metil-2-pentanol (3a); (RS)-2-metil-3-hexanol (4a); (RS)-5-metil-2-hexanol (5a); (RS)-2-octanol (6a); (RS)-3-heptanol (7a); (RS)-6-metil-5-hepten-2-ol (8a); (RS)-1-octen-3-ol (9a). Todos os alcoóis foram resolvidos pela lipase, com exceção do álcool 4a. Nas resoluções enzimáticas os excessos enantioméricos dos álcoois e acetatos foram superiores a 98 %, havendo a conversão total (50 %) dos enantiômeros S nos respectivos acetatos: (S)-1-acetato-4-metoxifenil (1b); (S)-2-acetato-4-metil-pentano (3b); (S)-2-acetato-5-metil-hexano (5b); (S)-2-acetato-octano (6b); (S)-3-acetato-heptano (7b); (S)-2-acetato-6-metil-5-hepteno (8b); (S)-3-acetato-1-octeno (9b). Realizou-se ainda um estudo biocatalítico envolvendo reações de redução de cetonas com fungos de origem marinha. Foram utilizadas na reduções as cetonas: 4-metoxiacetofenona (1), 1-fenil-etanona (2), 4-metil-2-pentanona (3), 2-octanona (6) e a 6-metil-5-hetpen-2-ona (8) e como biocatalisadores três fungos de origem marinha (Bionectria sp Ce5, Aspergillus sydowii Ce15 e Aspergillus sydowii Ce19). A 4-metoxiacetofenona (1) foi reduzida pelos fungos Bionectria sp Ce5, Aspergillus sydowii Ce15 e Aspergillus sydowii Ce19 com excesso enantiomérico de 98% e rendimento de 65 %. A 2-octanona (6) e a 6-metil-5-hepten-2-ona (8) foram reduzidas pelo fungo A. sydowii Ce15 nos respectivos (S)-álcoois 6a e 8a com pureza enantiomérica > 98 %. Já a 1-fenil-etanona (2) foi reduzida somente pelo fungo Bionectria sp Ce5 com excesso enantiomérico de 50 % e rendimento de 25 %. A 4-metil-2-pentanona (3) não foi reduzida por nenhum dos microrganismos estudados. / This work carried out the enzymatic reactions of alcohols by using a lipase from immobilized Candida Antarctica (NOVOZYME 435). The alcohols used were: (RS)-1- (4-methoxyphenyl) ethanol (1a), (RS)-4-methyl-2-pentanol (3a), (RS)-2-methyl-3- hexanol (4a), (RS)-5-methyl-2-hexanol (5a), (RS)-2-octanol (6a), (RS)-3-heptanol (7a), (RS)-6-methyl-5-hepten-2-ol (8a) and (RS)-1-octen-3-ol (9a). All the alcohols were catalyzed by lipase, except for the alcohol 4a. In this enzymatic resolutions the enantiomeric excesses of alcohols and acetates were more than 98% and total conversions (50%) for enantiomers of the acetates: (R)-1-acetate-4-methoxyphenyl (1b), (R)-2-acetate-4-methyl-pentane (3b), (R)-2-acetate-5-methyl-hexane (5b), (R)-2-acetateoctane (6b), (R)-3-acetate-heptane (7b), (R)-2-acetate-6-methyl-5-hepteno (8b) and (S)- 3-acetate-1-octene (9b). In addition it was studied the biocatalytic reduction of ketones with marine-derived fungi. The ketones used were the 4-metoxyacetophenone (1), 1- phenyl-etanone (2), 4-methyl-2-pentanone (3), 2-octanone (6) and 6-methyl-5-hetpen-2- one (8). The marine-derived fungi used as biocatalysts were Bionectria sp Ce5, Aspergillus sydowii Ce15 and Aspergillus sydowii Ce19. The 4-metoxyacetophenone (1) was reduced by Bionectria sp Ce5 by Aspergillus sydowii Ce15 and Aspergillus sydowii Ce19 in high enantiomeric excess (98% e.e.) and good yield, i.g., 65%. The 2- octanone (6) and 6-methyl-5-hepten-2-one (8) were reduced by A. sydowii Ce15 in the (R)-alcohols 6a and 8a in high enantiomeric purities, > 98% e.e. However the 1-phenyletanone (2) was reduced only by the fungus Bionectria sp Ce5 with enantiomeric excess of 50% and yield of 25%. The 4-methyl-2-pentanone (3) was not reduced by the microorganisms studied.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-02Bitstream added on 2014-06-13T21:01:54Z : No. of bitstreams: 1 freitas_fz_dr_araiq_prot.pdf: 4506629 bytes, checksum: 72017b1ea005ba3d7b6b2bb0d348f3cc (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As células eucarióticas são capazes de responder e de se adaptar a diferentes condições ambientais estressantes tais como o choque térmico, modulando sua atividade metabólica. Na levedura Saccharomyces cerevisiae o choque térmico é conhecido por induzir múltiplos genes relacionados a esta forma de estresse, através dos elementos transativadores Hsf1p (Heat Shock Protein) e Msn2/4p, os quais se ligam, respectivamente, às seqüências consensos HSE e STRE, ativando a transcrição. A seqüência nucleotídica do gene da glicogênio sintase (gsn) de Neurospora crassa foi previamente isolada em nosso laboratório e uma análise da expressão gênica mostrou que a transcrição do gene foi diminuída na situação de choque térmico (30 para 45ºC). Uma análise da região 5' flanqueadora revelou a presença dos elementos de DNA CRE, HSE e STRE tanto na região promotora do gene quanto na 5'-UTR. Neste trabalho, nós investigamos o envolvimento destes elementos de DNA na regulação da transcrição na condição de choque térmico, através de ensaios de mobilidade em gel (EMSA) usando como sondas, fragmentos de DNA contendo os elementos transcricionais citados anteriormente. Para isto, foram utilizados como fonte de proteínas extratos nucleares brutos ou fracionados em coluna de Heparina-Sepharose, preparados a partir de micélios coletados antes e após choque térmico (amostras HS30). Os resultados obtidos mostraram a presença de proteínas capazes de reconhecer e ligar aos elementos de DNA testados sob a condição estressante analisada. A especificidade das bandas de mobilidade reduzida foi confirmada por diferentes ensaios de competição, tais como 1) adição prévia de sondas de DNA não marcadas antes da reação de ligação, 2) adição de oligonucleotídeo de DNA dupla fita contendo o elemento STRE do promotor gsn como competidor específico, 3) utilização... / Eukaryotic cells respond and adapt to environmental stressing conditions such as heat shock, by modulating metabolic responses to counteract them. In the yeast Saccharomyces cerevisiae heat shock activates multiple stressing related genes by the trans acting elements Hsfp (Heat shock factors) and Msn2/4p, which bind to the cis regulatory elements HSE (Heat Shock Element) and STRE (Stress Responsive Element), respectively, and activates the gene transcription. We have previously isolated the gene encoding the Neurospora crassa glycogen synthase (gsn) and demonstrated that the gene transcription was decreased under heat shock (30 to 45ºC). An analysis of the gsn 5' flanking region showed the presence of the DNA elements CRE, HSE, and STRE, in the promoter region and in the 5'-untranslated region. In this work we investigated the involvement of these DNA elements in gene transcription regulation under heat shock condition by performing electrophoretic mobility shift assays (EMSA) using, as probes, DNA fragments containing the regulatory elements, and crude or Heparin-Sepharose fractionated nuclear extracts prepared from mycelia collected before and after 30 min of heat shock (HS30 sample). Ours results showed the presence of nuclear proteins capable to recognize and bind to the DNA regulatory elements under heat stress. The specificity of the DNA shifts were confirmed by using 1) unlabelled DNA probes as specific competitor, 2) the gsn promoter STRE double-stranded oligonucleotide as specific competitor, 3) a mutated gsn promoter STRE probe, and 4) the HSE unlabelled probe in a cross-reaction competition assay with the gsn promoter STRE probe. The involvement of the regulatory CRE elements in the modulation of the gsn gene transcription was investigated by using EMSA in the wild type strain, and also in two N. crassa mutant strains defective in the cAMP-signaling pathway: one having hyperactive...(Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Ângela Regina Araújo. / Banca: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca:Lourdes Campaner dos Santos / Banca:Jairo Kennup Bastos / Banca:Luce Maria Brandão Torres / Resumo: Os fungos, diferente dos vegetais são heterotróficos, mais especificamente quimiorganotróficos, por suas características específicas pertencem a um reino separado. Alguns dos fungos através de sua evolução se especializaram em invadir os espaços intercelulares das plantas passando a sobreviver dentro dos seus hospedeiros, não provocando nenhuma patologia. Estes microrganismos são denominados de fungos endofíticos. A disputa por alimentos entre os fungos no interior das espécies vegetais, gerou a necessidade dos fungos produzirem metabolitos secundários com atividades contra outros microrganismos, podendo assim demarcar seu território. Todo este processo deve acontecer de forma a não causar patologias na planta que é a fonte de seu alimento, em alguns casos essas relações de mutualismo e comensalismo se aprimoraram sendo muito comum alguns vegetais possuirem fungos endofíticos protegendo contra pragas insetos e patógenos. Este trabalho descreve o isolamento e a purificação dos fungos endofíticos associados às folhas, caules, raízes e sementes da espécie vegetal Michela champaca. Foram isolados 8 fungos, sendo 3 dos caules, 4 das folhas, 1 das raízes, nenhum fungo foi isolado das sementes. Os extratos brutos produzidos por estes fungos em caldo de dextrose e batata foram avaliados quimicamente (CLAE-DAD e RMN1H) e submetidos à bioensaios para avaliação da potencialidade anticancerígena, antifúngica e anticolinesterásica. Todos os extratos apresentaram atividade contra os fungos fitopatogênicos Cladosporium cladosporioides e Cladosporium sphaerospermum e 40% apresentaram atividade frente às linhagens mutantes de Saccharomyces cerevisiae. Após esta triagem, os fungos endofíticos Mc-8R (ainda não identificado) e Colletotrichum gloeosporioides (Mc-7F) foram selecionados para estudo químico/biológico. / Abstract: Some fungal species, through their evolution, have specialized in invading plants and surviving inside their hosts causing no warm them. These microorganisms have been called endophytic which in the invasion process, produce chemical substances that inhibit competitors to invade their neighborhood and thus survive in harmony with the host. This work seeks to evaluate the chemical diversity of substances from endophytic fungi associated to Michelia champaca L. that present biological activity by isolating and identification of their secondary metabolites. This work resulted in the isolation of eight fungi species and selection of 2 strains which presented strong antifungal activity against Cladosporium cladosporioides and C. sphaerospermum, both of them pathogenic fungus; and a weak antitumor activity against mutant strains of Saccharomyces cerevisiae. The first one was codified as Mc-8R and chromatographic fractionation of its EtOAc extract allowed the identification of the Pirenocines A (1), E (2) and B (3) and the Pirenochaetic acids, C (4), A (5) and B (6), and in addition to the novel (7) and (8). Ergosterol (9), was found in the hexanic extract obtained from growing Mc-8R in rice, and the Ergosterol peroxide (10), which was isolated from the hexanic extract in corn. The other selected fungi species was identified as Colletotrichum gloeosporioides. The fractioning of its EtOAc extract led to the isolation of the known substances as Uracil (11), cyclo-(S*-Pro-S*-Tyr) (12), cyclo-(S*-Pro-S*-Val) (13), 2-Aminophenyl acetic acid (2-APA), (14), p-Hydroxyphenylacetic acid (15), 4-Hydroxybenzamide (16) and (2-Hydroxy-phenyl)- acetic acid (17), in addition to the novel compounds (18) and (19). 2-Hexylidene-3-methylsuccinic acid (20) was also identified as major compound from the fungus Mc-C3, (Xylaria sp.). / Doutor

Orientador: Diltor Vladimir Araujo Opromolla / Resumo: O presente estudo teve por objetivos avaliar a susceptibilidade de camundongos isogênicos das linhagens BALB/c e B10.A à infecção pelo fungo Lacazia loboi (L. loboi), mediante estudo do aspecto histopatológico das lesões produzidas, número de fungos e índice de viabilidade obtidos nos diferentes períodos de sacrifício e também verificar se o padrão de resposta aos parâmetros avaliados, nos animais isogênicos, é homogêneo, de modo a permitir correlação dos resultados entre si. Ambos coxins plantares traseiros de quarenta e quatro camundongos BALB/c e quarenta e quatro B10.A foram intradermicamente inoculados com 0,03ml de uma suspensão fúngica. A suspensão foi obtida a partir de um único fragmento de lesão, coletado de um paciente portador da doença de Jorge Lobo. A biópsia foi macerada em solução salina 0,85% para obtenção da suspensão, sendo imediatamente submetida à técnica de coloração vital com diacetato de fluoresceína-brometo de etídeo para determinação do índice de viabilidade. A concentração fúngica foi estimada utilizando-se câmara de Neubauer e os resultados foram expressos em números absolutos. A suspensão possuía 9 x 105 fungos/ml (2,7 x 104 fungos/0,03ml) e 45% de índice de viabilidade. Os animais foram sacrificados vinte e quatro e setenta e duas horas, sete e quinze dias, um, quatro, sete, dez, treze, dezesseis e dezoito meses após inoculação. Ambos coxins plantares foram excisados, sendo um deles enviado para análise histopatológica e o outro macerado em solução salina para determinação do número de fungos e do índice de viabilidade. A linhagem BALB/c apresentou extenso infiltrado... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objectives of the present study were to evaluate the susceptibility of the inbred mice strains BALB/c and B10.A to the infection by the fungus Lacazia loboi (L. loboi) studying the histopathological aspects of lesions produced, number of fungi and viability index at each time of sacrifice, and also verify if the pattern of response among the isogenic strains is homogeneous, allowing a correlation of the results. Both hind foot pads of 44 BALB/c and 44 B10.A mice were intradermically inoculated with 0,03 ml of a fungal suspension. The fungal suspension was obtained from a single lesion fragment of a Jorge Lobo's disease patient. The biopsy was macerated in 0.85% saline and the suspension was immediately submitted to viability determination through the ethidium bromidefluorescein diacetate vital staining. The fungal concentration was estimated in Neubauer chamber and the results expressed in absolute numbers. The suspension contained 9x105 fungi/ml (2,7 x 104 fungos/0,03ml) and 45% of viable fungi. The animals were sacrificed at 24 and 72 hours, 7 and 15 days, 1, 4, 7, 10, 13, 16 and 18 months after inoculation. Both foot pads were excised, being one submitted to histopathological examination and the other macerated for fungal counting and viability index determination. The BALB/c strain presented an extensive granulomatous... (Complete abstract, click electronic access below) / Mestre

Resumo: Este trabalho objetivou desenvolver um protocolo para produção, isolamento e purificação de clamidósporos do P. brasiliensis (Pb) e estudar seu potencial infectante em camundongos. A cepa Bt83 foi cultivada em meio líquido por 14 dias à temperatura de 25 ºC e posteriormente incubada por 36 horas a 32°C para a produção de clamidósporos. Os clamidósporos foram liberados por agitação magnética e sonicação. A purificação foi realizada em gradiente de concentração com Percoll a 95%, resultando em suspensão de clamidósporos com viabilidade de 90% e com poucos (8%) fragmentos miceliais. Para avaliar seu potencial infectante, os clamidósporos foram inoculados em camundongos por via intranasal, e os animais eutanasiados após 24h, 1, 2 e 4 semanas de infecção foram estudados através da histologia e quantificação da carga fúngica pela contagem de unidades formadoras de colônia dos pulmões, baço e fígado. Vinte e quatro horas pós-infecção observaram-se no pulmão focos de broncopneumonia contendo grande número de leveduras, algumas em brotamento múltiplo. Nos períodos subseqüentes observaram-se lesões granulomatosas, com presença de fungos, principalmente nos pulmões. A disseminação para baço e fígado foi precoce, iniciando na 1ª semana de infecção. Neste trabalho demonstramos que os clamidósporos do Pb podem ser, fácil e rapidamente, produzidos e isolados. Também mostramos que estes esporos são altamente infectantes e capazes de disseminação precoce. Os resultados indicam que os clamidósporos podem desempenhar um importante papel na infecção e desenvolvimento da paracoccidioidomicose / Abstract: This study aimed at development a protocol for production, isolation and purification of chlamydospores of P. brasiliensis (Pb) and study their potential infectious in mice. Bt83 strain was grown in liquid medium for 14 days at 25 °C and then incubated for 36 hours at 32°C to produce chlamydospores. The chlamydospores were released by magnetic stirring and sonication. The purification was performed in concentration gradient with Percoll to 95%, resulting in a suspension of chlamydospores 90% viable and few (8%) mycelia non-viable fragments. To assess their potential infectious the chlamydospores, mice were inoculated intranasally and euthanized after 24 h, 1, 2 and 4 weeks of infection and their lungs, spleen and liver studied histologically and quantified the fungal burden by colony forming units counting. Twenty-four hours postinfection, multiple foci of bronchopneumonia were seen containing many multibudding yeast cells. In subsequent periods there were granulomatous lesions with the presence of fungi, mainly in the lungs. Dissemination to the spleen and liver was an early event, starting at 1 week of infection. This work provided evidences that the chlamydospores of Pb can be quickly and easily produced and isolated. It was also shown that these spores are highly infectious and have great ability to disseminate soon after infection. These results indicate that chlamydospores might be elected as an important infectious particle in paracoccidioidomycosis / Orientador: Denise Fecchio / Coorientador: Julio Defaveri / Banca: Angela Maria Victoriano de Campos Soares / Banca: Terezinha Inez Estivalet Svidzinski / Mestre