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Caracterização bioquímica e farmacológica da crotamina irradiada por raios gama de Co-60 / Biochemical and pharmacological characterization of irradiated crotamine by gamma rays Co60

Karina Corleto de Oliveira 24 November 2014 (has links)
A produção de soro no Brasil, único tratamento eficaz nos casos de acidentes ofídicos, utiliza equinos que apesar do grande porte, apresentam diminuição da longevidade quando comparado com os cavalos não imunizados. A radiação ionizante tem se mostrado como excelente ferramenta na diminuição da toxicidade de venenos e toxinas isoladas, além de promover a obtenção de melhores imunógenos para a produção de soro. Sabe-se, contudo, que os efeitos da radiação ionizante em materiais protéicos caracterizam-se por diversas alterações químicas, como fragmentação, cross-linking, agregação e oxidação devido aos produtos gerados pela radiólise da água. Porém, a ação da radiação gama em toxinas ainda não está totalmente esclarecida do ponto de vista estrutural e farmacológico, fato que impede a aplicação de tal metodologia no processo de produção do soro. Assim, foi proposto nesse trabalho a caracterização da crotamina, uma das principais proteínas do veneno da espécie Crotalus durissus terrificus, irradiada com raios gama de 60Co. Após o isolamento da toxina por técnicas cromatográficas e a realização de testes para comprovar a obtenção da crotamina pura, a toxina, nos estados nativo e irradiado, foi submetida às análises estruturais de Fluorescência e Dicroísmo Circular. Testes utilizando altas pressões hidrostáticas também foram realizados com o intuito de verificar se as alterações conformacionais causadas pela radiação sofreriam modificações sob altas pressões. Do ponto de vista farmacológico, testes de contração muscular foram realizados com o objetivo de delimitar a ação da crotamina em musculatura lisa, bem como a mudança na ação da toxina frente às alterações estruturais ocasionadas. As análises de Fluorescência e Dicroísmo Circular mostraram que há mudanças na conformação da crotamina quando submetida à radiação gama e que tais alterações possivelmente ocorrem na estrutura terciária e secundária da proteína. O observado nos testes farmacológicos mostraram que a crotamina irradiada foi menos eficaz na diminuição da contração muscular do ducto deferente de ratos em comparação com a crotamina nativa. Além disso, o comportamento da toxina irradiada na contração tônica, modulada por noradrenalina, foi distinto daquele observado para a toxina nativa. / The serum production in Brazil, the only effective treatment in cases of snakebites, uses horses that although large size, have reduced llifespan compared with horses not immunized. Ionizing radiation has been shown as an excellent tool in reducing the toxicity of venoms and toxins isolated, and promote the achievement of better immunogens for serum production, and contributing to the welfare of serum-producing animals. It is known, however, that the effects of ionizing radiation on protein are characterized by various chemical modifications, such as fragmentation, cross-linking due to aggregation and oxidation products generated by water radiolysis. However, the action of gamma radiation on toxins is not yet fully understood structurally and pharmacologically, a fact that prevents the application of this methodology in the serum production process. So we proposed in this paper the characterization of crotamine, an important protein from the venom of Crotalus durissus terrificus species, irradiated with 60Co gamma rays. After isolating the toxin by chromatographic techniques and testing to prove the obtaining of pure crotamine, it was irradiated with gamma rays and subjected to structural analysis, Fluorescence and Circular Dichroism. Using high hydrostatic pressure tests were also conducted in order to verify that the conformational changes caused by radiation suffer modifications under high pressures. From the pharmacological point of view, muscle contraction tests were conducted with the objective of limiting the action of crotamine in smooth muscle as well as the change in the action of toxin caused structural changes to the front. Analysis of Circular Dichroism and Fluorescence showed changes in structural conformation of crotamine when subjected to gamma radiation and that such changes possibly occurring in the secondary and tertiary structure of the protein. The observed in pharmacological tests showed that the irradiated crotamine was less effective in lowering the vas deferens twitch in rats in comparison to native crotamine. In addition, the behavior of irradiated toxin in tonic contraction, modulated by noradrenaline, was different from that observed for the native toxin.
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Esterilização de machos de Diabrotica speciosa (Coleoptera: Chrysomelidae) com irradiação gama visando controle em culturas de importância econômica / Sterilization of males Diabrotica speciosa (Coleoptera: Chrysomelidae) with gamma irradiation for control in cultures of economic importance

Márcio Martins de Araújo 15 August 2017 (has links)
Diabrotica speciosa (Germar, 1824), causa danos diretos por alimentação e indiretos como vetor de vírus para diversos grupos de plantas. A principal forma de controle são os agroquímicos, portanto visando o manejo populacional sem impacto ambiental, o presente trabalho teve como objetivo determinar a dose de radiação gama que proporciona a esterilidade de machos, o seu consumo foliar e as alterações histológicas em suas gônadas. Os adultos foram submetidos à radiação gama (60Co) no terceiro dia após a emergência nas doses de 0, 25, 50, 75 e 100 Gy a uma taxa de 0,808 KGy/hora, totalizando 20 repetições/ dose. A dose esterilizante baseou-se na fertilidade de fêmeas sexualmente maduras acasaladas por machos irradiados. Os casais foram individualizados em \"arenas\" e alimentados com folíolos de feijão (Phaseolus vulgaris L.) com gaze preta umedecida para oviposição. Os ovos foram tratados e dispostos em recipientes plásticos forrados com papel de filtro. Após a eclosão, as larvas foram transferidas para um recipiente maior com tampa telada contendo vermiculita fina e plântulas de milho (Zea mays L.) que foram substituídas a cada 10 dias, até a emergência do adulto. Após o 4º dia de irradiação disponibilizou-se um disco foliar de 3,2 cm de diâmetro por 24 horas, para cada casal. Os discos foram digitalizados e analisados no software ImageJ. Para avaliação das gônadas foram utilizados 3 machos por dose com 8 dias de idade dissecados em PBS e através da técnica de Hematoxilina Eosina as laminas foram avaliadas em microscópio óptico. Verificou-se que a esterilidade dos machos ocorreu a partir de 75 Gy e sua longevidade média foi de 12,5 dias. O consumo da área foliar dos casais constituídos por um macho estéril foi de 42,9% e a analise histológica testicular demonstrou desorganização nos tecidos e lacunas entre as células germinativas nas maiores doses de 75 Gy e 100 Gy. / Diabrotica speciosa (Germar, 1824), causes direct and indirect damage on crops by feeding and acting as virus vector for diverse groups of plants. The main control form is the use of agrochemicals so, aiming to manage the population without environment impact, the present work had as objective to determine the dose of gamma radiation that provides male sterility, its foliar consumption and gonads histological changes. Adult males were submitted to gamma radiation (60Co) on the third day after emergence at doses of 0, 25, 50, 75 and 100 Gy at 0,808 KGy/ hour rate, totaling 20 replicates/ dose. The sterilizing dose was based on the fertility of sexually mature non-irradiated females mated by irradiated males. The couples were individualized in \"arenas\" and fed with leaflets Phaseolus vulgaris L. with black gauze moistened for oviposition. Eggs were treated and arranged in plastic containers lined with filter paper. After hatching, larvae were transferred to a larger container with a cover cap containing fine vermiculite and maize seedlings (Zea mays L.), which were replaced every 10 days, until adult emergence. After the 4th day of irradiation, a leaf disc with 3.2 cm in diameter was available for 24 hours for each couple. The discs were scanned and analyzed in ImageJ software. To evaluate the gonads, 3 males with 8 days of age were used per dose. They were dissected in PBS, throught the Hematoxylin-Eosin technique the laminas were evaluated under an optical microscope. We observed that male sterility occurred from 75 Gy and the average longevity of this group was of 12.5 days. Consumption of the leaf area by couples composed by a sterile male was 42.9% and the testicular histological analysis demonstrated tissue disorganization and gaps between germ cells at the highest doses of 75 Gy and 100 Gy.
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Efeito radiomodificador do resveratrol em cultura de células de rabdomiossarcoma humano (RD) aplicando o teste do cometa / Radiomodifying effect of resveratrol in human rhabdomyosarcoma (RD) cell culture applying the comet assay

Vanessa Danielle Magalhães 13 September 2012 (has links)
O câncer é uma doença de alta incidência e é considerado um problema de saúde pública no mundo todo. O resveratrol é um polifenol de defesa que tem a habilidade de inibir a carcinogênese em múltiplos estágios. Este polifenol é sintetizado por uma grande variedade de plantas em resposta a exposição à radiação ultravioleta (UV) ou também, pelo estresse mecânico produzido pela ação de patógenos, agentes químicos e físicos. As videiras são consideradas as plantas que têm uma capacidade elevada de produzir o resveratrol, portanto suco de uva e vinho, principalmente o vinho tinto são considerados uma boa fonte de resveratrol. Os efeitos protetores exercidos pelo resveratrol promovem efeitos como indução da resposta antiinflamatória, atividade antitumoral, prevenção ou inibição de doenças degenerativas, diminuição da incidência de doenças cardiovasculares, inibição da agregação plaquetária, entre outros. Assim, o resveratrol é considerado um protetor celular. Porém, em concentrações mais elevadas, o resveratrol promove o efeito contrário, sensibilizando as células a algum tipo de efeito, como por exemplo, o efeito da radiação ionizante. O objetivo desse trabalho foi estudar o efeito radiomodificador do resveratrol em cultura de células RD (rabdomiossarcoma humano) aplicando o teste do cometa para avaliação do dano e capacidade de reparo celular. Foi obtida a DL50 das células RD em 403 Gy e o índice de citotoxicidade do resveratrol (IC50%) nas células RD foi de 150 μM. A partir destes resultados foram definidas as doses de radiação gama (50 Gy e 100 Gy) e as concentrações de resveratrol (15 μM 30 μM 60 μM) que foram analisadas no trabalho. Foram evidenciados os efeitos do resveratrol como protetor celular na concentração de 15 μM e seu efeito citotóxico em 60 μM. Com a interação da radiação gama, a concentração de 60 μM não mostrou efeito radiossensibilizador estatisticamente significante. / Cancer is a disease with high incidence and it is considered a worldwide public health problem. Resveratrol is a defense polyphenol that possesses a pharmacological activity of carcinogenisis inhibition in multiple levels. This polyphenol is synthesized naturally by a wide variety of plants according to response of ultraviolet radiation (UV) exposition or according to mechanical stress resulting of pathogens or chemical and physical agents. In vines this substance is found in elevated concentration. Thus, resveratrol is present in grape juice and wines, especially red wine. The protective effects performed by resveratrol during the process of cell damage, produced by oxidative effects of free radicals, promote anti-inflammatory, anti-platelet and anti- carcinogenic activity, prevent or inhibit degenerative diseases, decrease incidence of cardiovascular diseases. Moreover, resveratrol is considered as a cell radioprotector. On the other hand, in some elevated concentrations resveratrol may be considered as a radiosensitizing. The aim of this work was study the radiomodifying effect of resveratrol in human rhabdomyosarcoma (RD) cell culture applying the comet to assess the cellular damage and repair capacity. The RD cells gamma radiation LD50 was 403 Gy and the resveratrol index cytotoxicity (IC50%) was 150 μM. From these results were defined the gamma radiation doses (50 Gy 100 Gy) and the resveratrol concentrations (15 μM 30 μM 60 μM) were used in this study. The 15 μM and 30 μM concentrations showed cell protective and radioprotective effects. The third and higher concentration used in this work shown to be cytotoxic to RD tumor cells; with gamma radiation presence the 60 μM concentration showed no statistically significant radiosensitizing effects.
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Comparação ecotoxicológica de princípios ativos de repelentes para invertebrados aquáticos irradiados e não irradiados com radiação gama / Ecotoxicological comparison of active ingredients of repellents for aquatic invertebrates irradiated and non-irradiated with gamma radiation

Giovana Teixeira Gimiliani 25 February 2013 (has links)
Nas últimas décadas, a introdução de produtos de uso diário nos ambientes aquáticos tem sido uma das questões mais discutidas no que se refere ao monitoramento ambiental. Estes produtos não são totalmente removidos pelos processos convencionais de estações de tratamento de esgoto e de água e são continuamente inseridos no ambiente aquático. O Dietiltoluamida, um princípio ativo de repelente de insetos bastante utilizado mundialmente, é um composto ambientalmente persistente e sua toxicidade para alguns organismos aquáticos tem sido comprovada. Em substituição aos produtos sintéticos, a população tem optado em utilizar produtos naturais, sendo cada vez mais comum o uso de repelentes com óleos essenciais de gramíneas. O óleo essencial de capim-limão é um dos mais utilizados nas formulações de cosméticos e de cuidados pessoais. Entretanto, nenhum estudo tem comprovado a sua toxicidade para a biota aquática. Além dos poluentes químicos, os organismos aquáticos podem estar sujeitos à exposição da radiação ionizante proveniente de fontes naturais (background radiation) ou nas proximidades de instalações de usinas nucleares. O presente estudo avaliou a reprodução de invertebrados aquáticos C. silvestrii após a exposição à radiação gama e posteriormente submetidos aos princípios ativos de repelente sintético e natural. Para isso, avaliou-se a citotoxicidade in vitro bem como a ecotoxicidade aguda e crônica dos princípios ativos e o efeito da radiação gama para D. similis e C. silvestrii. Os ensaios com radiação gama foram realizados sob as mesmas condições dos testes de ecotoxicidade, utilizando o irradiador Gamma-Cell com fonte de Co60. De acordo com os resultados obtidos, o óleo essencial apresentou efeito citotóxico igual a 50 mg.L-1 enquanto para o dietiltoluamida, foi de 420 mg.L-1. O efeito tóxico agudo na sobrevivência (CE50) foi encontrado na concentração de 7,2 mg.L-1 e 3,8 mg.L-1 de óleo essencial para D. similis e C. silvestrii, respectivamente. Concentrações de 64,9 e 53,9 mg.L-1 de dietiltoluamida apresentaram efeito agudo na sobrevivência de D. similis e C. silvestrii, respectivamente. 3,4 mg.L-1 foi estabelecida como a concentração de inibição (CI25) de óleo essencial para o dietiltoluamida correspondeu a 16,4 mg.L- 1, ambos para C. silvestrii. As doses letais de radiação gama que causaram efeito agudo na sobrevivência (DL50) foram de 242 Gy para D. similis e 525 Gy para C. silvestrii. A reprodução de C. silvestrii apresentou redução de 25% na dose de 29 Gy. Depois de determinar a ecotoxicidade dos princípios ativos e o efeito da radiação gama, os organismos foram irradiados com dose de 25 Gy, sendo a maior dose que não causou efeito na reprodução de C. silvestrii, e posteriormente foram expostos às mesmas concentrações utilizadas para os princípios ativos. Os resultados mostraram que a reprodução de C. silvestrii não foi afetada significativamente após a irradiação dos organismos testados quando comparada com os organismos não irradiados. / Over the last decades, the introduction of personal care products in aquatic environments has been one of the most discussed issues regarding environmental monitoring. These products are not completely removed by conventional sewage and water treatment processes and are continuously inserted into the aquatic environment. Diethyltoluamide an active ingredient in insect repellents widely used worldwide is an environmentally persistent compound and its toxicity to some aquatic organisms has been proven. In order to replace synthetic products, people have opted to use natural products which made more common the use of repellents with essential oils of grasses. The essential oil of lemongrass is one of the most used in the formulations of cosmetics and personal care. However, no study has proven its toxicity to aquatic biota. In addition to chemical pollutants, aquatic organisms may be subject to exposure of ionizing radiation from natural sources (background radiation) or near nuclear installations. The present study evaluated the reproduction of aquatic invertebrates C. silvestrii after exposure to gamma radiation and further submitted to synthetic and natural repellents. On this account, we evaluated the in vitro cytotoxicity as well as acute and chronic ecotoxicity of the diethyltoluamide and lemongrass oil, as well as the effect of gamma radiation over D. similis and C. silvestrii. Irradiation experiments were carried out under the same conditions as performed for ecotoxicity assays, using a Gamma-Cell irradiator with a Co60 source. According to the results, the essential oil presented a cytotoxic effect at concentrations of 50 mg.L-1 whereas diethyltoluamide at 420 mg.L-1. The acute toxic effect on survival (EC50) was found at concentrations of 7.2 mg.L-1 for essential oil to and 3.8 mg.L-1 for D. similis and C. silvestrii respectively. Concentrations of 64.9 and 53.9 mg.L-1 of diethyltoluamide showed acute effect on survival of D. similis and C. silvestrii, respectively. 3.4 mg.L-1 of essential oil was established as the inhibition concentration (IC25) while for diethyltoluamide such value corresponded to 16.4 mg.L-1, both over C. silvestrii. The lethal doses induced by gamma radiation revealed an acute effect on survival (LD50) at 242 Gy for D. similis and 525 Gy for C. silvestrii. The reproduction C. silvestrii decreased by 25% at a dose of 29 Gy. After determining the ecotoxicity of the active ingredients and the effect of gamma irradiation, the organisms were irradiated at 25 Gy, which corresponded to the higher dose which caused no effect over the reproduction C. silvestrii and were subsequently exposed to the same concentrations used for the active ingredients. The results showed that reproduction C. silvestrii was not significantly affected after irradiation of the assayed organisms when compared to non-irradiated organisms.
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Estudo de soluções de MEH-PPV em dosimetria de radiação gama / Study of MEH-PPV solutions in gamma radiation solutions

Alves, Marcelo Caetano Oliveira 31 July 2008 (has links)
O presente trabalho teve por objetivo o estudo da viabilidade de utilização de soluções de poli[2-metóxi,5-(2-etil-hexiloxi)-p-fenileno vinileno] (MEH-PPV), em diversos solventes tais como CHCl3 (Clorofórmio), diclorometano (CH2Cl2), bromofórmio (CHBr3), dibromometano (CH2Br2), uma mistura de diclorometano (CH2Cl2) e diiodometano (CH2I2) e tolueno (C6H5CH3), como dosímetros de radiações ionizantes. A novidade está no fato de que estes dosímetros têm como principal característica a variação da cor, proporcionando uma medida visual e direta da radiação recebida. Além disso, a sensibilidade dos dosímetros pode ser ajustada por meio da variação da concentração das soluções do polímero. Neste trabalho, foi utilizada a radiação gama, 60Co, para os estudos de viabilidade deste dosímetro. Quando submetidos a certas doses de radiação gama, o polímero estudado sofre alterações em suas propriedades óticas e em sua estrutura molecular. Para avaliar as alterações óticas, foram utilizadas medidas de espectroscopia de absorção UV-Visível (UV-Vis) e fotoluminescência. Também foram avaliadas as alterações na estrutura molecular, como conseqüência da exposição à radiação gama por meio de técnicas como ressonância magnética nuclear (RMN) e cromatrografia de permeação de gel (GPC). Os Resultados obtidos mostraram que a radiação gama, 60Co, promove, de forma indireta, a diminuição do comprimento efetivo da conjugação do polímero, mais provavelmente em decorrência da quebra da cadeia principal do polímero devido às reações com as espécies reativas, possivelmente nos grupamento vinil. Estas quebras resultam em um deslocamento dos picos máximos dos espectros de absorção para regiões de maior energia (blueshift). Estes deslocamentos dependem não somente da dose de irradiação, mas também do solvente utilizado em da concentração da solução. / The present work aims the study of the viability of using solutions of poly[2-methoxy-5-(2\'-ethyl-hexyloxy)-1,4-phenylene vinylene] (MEH-PPV), in several solvents such as chloroform (CHCl3), dichloromethane (CH2Cl2), bromoform (CHBr3), dibromomethane (CH2Br2), a mix of dichloromethane (CH2Cl2) and diiodomethane (CH2I2), and toluene (C6H5CH3) as ionizing radiation dosimeters, gamma, in this case. The novelty is in the fact of the dosimeter main characteristic is color change, allowing a visual and direct received radiation measurement. Besides, the sensibility of the dosimeter can be adjusted by the polymer solution concentration variation. In this work, it was used the gamma radiation, 60Co, for the dosimeter viability studies. When exposed to certain doses of this kind of radiation, the studied polymer suffers changes in its optic properties and in its molecular structure. In order to evaluate the optical changes, UV-VIS absorption and photoluminescence spectroscopy measures were performed. Besides, the molecular structure changes, as a consequence of the exposure to gamma radiation, were evaluated by nuclear magnetic resonance (NMR) and Gel Permeation Chromatography (GPC). The results show that the gamma radiation, 60Co, promotes, indirectly, the decrease of the polymer conjugation length probably due the backbone scission caused by reactions with reactive species, probably in the vinyl side groups. These scissions resulted in a blueshift of the absorption spectra maximum peaks. Theses blueshifts depend on the irradiation dose, the used solvent and the solution concentration.
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Aplicação da radiação gama na determinação de parâmetros físicos em madeiras / Application of gamma radiation in the determination of physical parameters in woods

Carvalho, Gilberto 11 December 2013 (has links)
Por sua disponibilidade e características diferenciadas, a madeira foi um dos primeiros materiais a ser usado pelos seres humanos, com uma grande multiplicidade de usos, diretos e indiretos. Ainda hoje é uma importante fonte de energia doméstica e industrial, além de ser usada como matéria prima na fabricação de papel e celulose, nas indústrias químicas, moveleira, naval, de artigos esportivos, brinquedos e instrumentos musicais, bem como na construção civil e na distribuição de energia elétrica. A madeira tem sido bastante estudada, sendo do conhecimento dos pesquisadores da área, a influência de vários fatores no desenvolvimento das árvores e por consequência, nas madeiras, como temperatura, latitude, longitude, altitude, insolação, solo e índice pluviométrico, razões pelas quais, quando se trata de madeira, se fala sempre em propriedades médias. A densidade é na opinião da grande maioria dos pesquisadores, a propriedade mais importante da madeira, por manter estreitas relações com propriedades físicas e mecânicas. Há três tipos de densidades, básica, aparente e a verde. Destas, usou-se a densidade aparente, a 12% de umidade e próxima da umidade de equilíbrio com o meio ambiente e a densidade a verde, na simulação no laboratório. Neste trabalho foram utilizadas madeiras de densidades variáveis, de sete espécies diferentes, a saber: freijó, peroba-mica, jequitibá, muiracatiara, cumaru, ipê e sucupira. Para a determinação das densidades pelo método não convencional, um dos objetivos deste trabalho, foi usar os radioisótopos: 241Am, 133Ba, 192Ir, 137Cs e 60Co, um detetor de cintilação de NaI e um espectrômetro multicanal, desenvolvendo-se uma técnica alternativa, rápida e precisa, fato evidenciado pelos resultados obtidos. Os parâmetros nucleares obtidos, como meias espessuras e coeficientes de absorção linear, proporcionaram a escolha do radioisótopo, 137Cs, em relação à energia, atividade, espessuras ótimas de ensaio, resolução e proteção radiológica, para simulação em laboratório da integridade física de postes de madeira e árvores vivas, constituindo os parâmetros nucleares e as simulações em laboratório, os outros importantes objetivos do trabalho. / Due to availability and differentiated features, wood was one of first materials to be used by humans, with a wide variety of applications. Today it is still an important source of domestic and industrial energy, besides to be used as raw material in manufacture of pulp and cellulose, in chemical industry, furniture, naval, sporting goods, toys and musical instruments as well as in construction and distribution of electric energy. Wood has been studied intensively and researchers in the area are aware of the influence of various factors in the development of trees and as consequence, in wood, such as: temperature, latitude, longitude, altitude, sunlight, soil and rainfall, reasons for which when it refers to wood, always it is average properties. The density it is in the opinion of majority of researchers, the most important property of wood, maintaining a close relationship with mechanical and physics properties of wood. There are three types of densities; basic, apparent and green and among these we used the apparent density to 12% of moisture content and green, density of living trees. In this work it was used woods of various densities, of seven different species of trees, namely: ¨freijó¨, ¨peroba-mica¨, ¨jequitibá, muiracatiara, cumaru, ipê and sucupira. For the determination of densities, one of the goals of this work, was to use the radioisotopes: 241Am, 133Ba, 192Ir, 137Cs and 60Co, a NaI scintillation detector and a multichannel spectrometer, developing a non-conventional method, fast and accurate, evidenced by results. The nuclear parameters obtained such as, half value layers and linear attenuation coefficients provided the choice of the best radioisotope, 137Cs, for inspection of electric wooden poles and living trees in the laboratory simulations, are others important goals of this work.
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Efeitos da radiação gama na imunogenicidade das ribonucleoproteínas (RNPs) do vírus da raiva e purificação de anticorpos anti-RNPs para diagnóstico / Effects of gamma radiation immunogenicity of ribonucleoprotein (RNPs) of rabies virus and purification of anti-RNPs antibodies for diagnosis

Costa, Ana Elena Boamorte da 23 August 2010 (has links)
A Organização Mundial da Saúde recomenda o teste de Imunofluorescência Direta (IFD) para a realização do Diagnóstico Laboratorial e Avaliação Sorológica da raiva. Como reveladores deste teste, são utilizados conjugados fluorescentes antirribonucleoproteínas (RNPs) do vírus da raiva, produzidos a partir de anticorpos anti-RNPs obtidos da purificação de soros hiperimunes de animais imunizados com RNPs purificadas. Os objetivos deste estudo foram: avaliar os efeitos da radiação gama na imunogenicidade das RNPs e comparar dois métodos cromatográficos de purificação de imunoglobulinas anti-RNPs. Os soros de animais imunizados com RNPs irradiadas e não irradiadas foram avaliados nos testes de Imunfluorescência Indireta e Ensaio Imunoenzimático. A partir dos resultados obtidos pode-se concluir que os animais imunizados com RNPs irradiadas necessitam de um menor número de doses para uma resposta imunológica com alto título de anticorpos. Por meio da IFD verificou-se que o conjugado produzido com anticorpos anti-RNPs irradiadas apresentou especificidade semelhante a do conjugado produzido a partir de anticorpos anti-RNPs não irradiadas, mas com melhor definição das inclusões características do vírus. Os processos de purificação de anticorpos por cromatografia de troca iônica e cromatografia de afinidade foram avaliados utilizando-se os testes de Bradford e eletroforese (SDS-PAGE). Pelos resultados obtidos pode-se concluir que, neste estudo, o processo de purificação que utilizou a cromatografia de afinidade foi o método que apresentou melhor rendimento, menor tempo de execução e obtenção de anticorpos com maior grau de pureza. / The World Health Organization recommends the direct immunofluorescence test for laboratory diagnosis and serological evaluation of rabies. To achieve this test, fluorescent anti-ribonucleoproteins (RNPs) conjugates, produced from purified IgGs of RNP-immunized animals are employed. The aims of the present study were: investigate the effects of gamma radiation on the immunogenicity of RNPs, as well as to compare two chromatographic methodologies for the purification of anti-RNPs immunoglobulins. Sera from animals immunized with either native or irradiated RNPs were compared by direct immunofluorescence and immunoenzymatic assays. Our results indicate that the animals immunized with irradiated antigen requested a lower number of doses to reach high antibody titers. The immunofluorescence assays indicated that the conjugates produced with the anti-irradiated RNPs IgGs showed similar specificity to its anti-native counterpart, but with a higher definition of the virus inclusions. The purification methods were compared by Bradford and electrophoresis assays. According to the results, we concluded that the affinity-based process resulted in higher yields, lower execution time, and higher purity of the antibodies.
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Desenvolvimento do Processo de Fabricação de Tubos Hospitalares por RVNRL: Otimização e Protótipo de Extrusão a Baixas Temperaturas. / DEVELOPMENT OF MEDICAL TUBE FABRICATION PROCESS FROM RVNRL: OTIMIZATION AND EXTRUTION DEVICE AT LOW TEMPERATURE

Collantes, Hugo David Chirinos 15 October 1999 (has links)
O látex de borracha natural foi formulado, radiovulcanizado e, em seguida, estabilizado radioliticamente (GAMATEX), para ser empregado na fabricação de artefatos de borracha utilizados na área médica. A eficiência de reticulação do látex, quando radiovulcanizado com raios gama, correlacionou-se matematicamente com a razão de concentração do sistema de radiosensibilizador (x1 = [An-B] / [KOH]) e com a dose de vulcanização (x2), apresentando alto grau de interação, segundo o seguinte modelo matemático: , onde representa a resistência à tração na ruptura. O processo RVNRL foi otimizado para baixas doses de vulcanização e altas concentrações de An-B. A resistência radioxidativa da borracha, obtida a partir do GAMATEX, foi atingida adicionando-se uma mistura de antioxidantes (45% BANOX S + 55% TNPP). Esta mistura apresentou um efeito sinérgico. O látex apresentou comportamento pseudoplástico com a ocorrência de tensão de escoamento. A taxa de desestabilização irreversível do látex foi diretamente proporcional à [An-B] e inversamente proporcional à [KOH]. O efeito pós-irradiação do látex ou a desestabilização reversível, ocorreu devido à presença de uma concentração residual de An-B que não reagiu. A irradiação melhorou a estabilidade coloidal do GAMATEX, devido ao aumento da tixotropia e da tendência newtoniana além da correlação entre o grau de consistência (k) e o índice pseudoplástico (n), de acordo com o modelo matemático . Este fato permite um tempo maior de estocagem do GAMATEX. A viscosidade relativa do látex correlaciona-se com a temperatura e com o teor da borracha seca conforme o modelo matemático: , onde rw é a razão (BS/100-BS). O látex radiovulcanizado coagulou à temperatura de –10ºC no sistema de refrigeração projetado. / The natural rubber latex was formulated, irradiation vulcanized and stabilized (GAMATEX) to make rubber goods for medical purpose. When the latex was vulcanized by gamma rays the effectiveness crosslinking of GAMATEX relationship between the concentration ratio of sensitizer system (x1=[n-BA]/[KOH]) and the vulcanization dose (x2), showing high interaction grade according to the following the mathematical equation: , where is the tensile strength. The RVNRL process was optimized for low vulcanization doses and high concentrations of n-BA. The resistance to radiolitic oxidation of rubber obtained from GAMATEX was attained when one antioxidants mixture (45% BANOX S + 55% TNPP) was added. This mixture exhibited synergetic effect. The latex showed pseudoplastic rheological behavior and the yield stress occurrence. The irreversible destabilization rate of latex was direct proportional to [n-BA] and indirect proportional to [KOH]. The post-irradiation effects or reversible destabilization of latex occurred because there is a residual concentration of [n-BA] that it was not reacted. The colloidal stability of GAMATEX improved with irradiation, showing showing the increase of thixotropic behavior and the tendency to newtonian behavior flow besides the relationship between the viscosity index (k) and the pseudoplastic index (n) according to the mathematical model: . This fact allows the higher storage time of GAMATEX. The relative viscosity of latex was relationship between the temperature and the total dry rubber content according to the mathematical model: , where rw is the ratio (BS/100-BS). The radiation vulcanized latex coagulated at –10ºC into the projected freezing system.
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Efeitos da radiação gama sobre microbiota fúngica e micotoxinas encontradas em ração de frangos de corte. / Effects of gamma radiation on fungal microbiota and mycotoxins in broiler chicken feed.

Simas, Monica Mattos dos Santos 15 June 2010 (has links)
O objetivo do presente trabalho foi determinar o impacto do uso da radiação gama no controle de fungos toxigênicos e micotoxinas (aflatoxinas e fumonisinas) presentes na ração de frangos de corte. Os resultados de produtividade, rendimento, hematologia e bioquímica dos animais indicam que a irradiação da ração com 5 kGy foi efetiva no sentido de controlar os efeitos deletérios das micotoxinas. Amostras irradiadas apresentaram menor contaminação fúngica do que aquelas não irradiadas, no entanto as dose de 5 ou 10 kGy não provocaram redução do nível de contaminação de aflatoxinas ou fumonisinas pré-existentes nas amostras. Pode-se concluir que a dose de 5 kGy seria a mais indicada para o tratamento das rações de aves. Apesar de não alterar os níveis de micotoxinas presentes nas amostras, esta dose induz redução significativa da microbiota fúngica e altera a digestibilidade da ração, o que faz com que frangos alimentados com rações irradiadas com 5kGy apresentem melhor desempenho ao término do período de criação comercial. / The purpose of this experiment was to determine the impact of gamma radiation on the control of toxigenic fungi and mycotoxins (aflatoxin and fumonisin) found in broiler chicken feed. Results show that irradiation of feed with 5 kGy was effective on the control of deleterious effects caused by mycotoxins on performance parameters, hematological and biochemical values. Irradiated samples presented lower fungal contamination levels than those not irradiated, although radiation doses used in this experiment did not reduce aflatoxin and fumonisins levels previously found on the samples. We concluded that 5 kGy is the recommended dose for broiler´s feed. Despite the fact that it does not change the mycotoxin levels found in the samples, this dose significantly reduces the fungal microbiota and modifies the feed digestibility, increasing the final weight of broiler chickens.
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Análise da Metilação do DNA de Seleções de Figueira (Ficus carica L.) por MSAP e Sequenciamento / Analysis of Fig (Ficus carica L.) Selections DNA Methylation by MSAP and Sequencing

Rodrigues, Maria Gabriela Fontanetti 25 March 2015 (has links)
Os programas de melhoramento de figueira (Ficus carica L.) por métodos convencionais tais como cruzamentos dirigidos, para a obtenção de novos cultivares, são inviáveis em muitos países, como no Brasil, principalmente pela pequena variabilidade genética encontrada, e pela dificuldade de obtenção de plantas originadas pela fusão de gametas, uma vez que a vespa Blastophaga psenes, responsável pela polinização natural, não existe no país. Desse modo, o melhoramento genético, com o uso de mutagênicos, se torna uma linha de pesquisa importante para a melhoria da cultura, sendo necessário reunir informações sobre essa espécie, principalmente, em relação à sua variabilidade genética, para que projetos de propagação e manejo adequados sejam realizados. Diante do exposto, o objetivo do presente trabalho foi verificar a existência de variabilidade epigenética devido à metilação do DNA em seleções irradiadas de figueiras, entre si e quando comparadas ao principal cultivar comercial, Roxo-de-Valinhos, utilizando as técnicas de MSAP e ELISA, e posterior sequenciamento do DNA, tratado com bissulfito de sódio, para detecção do posicionamento das regiões polimórficas, analisado por ferramentas de bioinformática. Amostras do DNA genômico foram duplamente digeridas com a enzima HpaII (sensível à metilação) ou com o seu isoesquizomero MspI (não sensível à metilação), juntamente com a enzima EcoRI. Foram testadas 14 combinações de primers e obteve-se 87.9%, 10.1% e 2.0%, respectivamente, de regiões não metiladas CCGG, regiões metiladas CmCGG e regiões hemimetiladas hmCCGG, de um total de 553 produtos de amplificação, demostrando que a técnica MSAP é eficiente para detecção de sítios diferencialmente metilados no material genômico estudado, evidenciando sua divergência epigenética. Com o sequenciamento do DNA isolado desses sítios diferencialmente metilados, foi possível verificar diferentes padrões de metilação nos mesmos pelo sequenciamento dos DNAs tratados com bissulfito de sódio, em regiões codificadoras de genes regulatórios do desenvolvimento e amadurecimento dos frutos, além de terem sido encontrados no DNA mitocondrial dos tratamentos, o qual regula o fornecimento de energia em forma de ATP para as plantas, estando intimamente relacionado com o desenvolvimento das mesmas, justificando os diferentes fenótipos encontrados, tanto nos frutos, quanto no crescimento das plantas que sofreram estresse devido à exposição à radiação gama. Pela técnica de imunoquímica (ELISA), utilizando anticorpos anti 5-mC, foram observadas diferenças significativas pelo teste de Tukey, a 95 % de confiabilidade, no conteúdo global de metilação dos DNAs dos tratamentos, indicando que este fator abiótico foi responsável pelas alterações no epigenoma das plantas. Como o material utilizado como controle se encontrou também metilado, uma possível desmetilação dos materiais genômicos pode ser a responsável pela variação fenotípica entre os tratamentos. Diante disso, o estudo futuro da expressão gênica entre os tratamentos torna-se uma estratégia de extrema importância para o entendimento dos complexos sistemas regulatórios, levando à identificação de genes de interesse agronômico para a cultura da figueira, possibilitando a sua manipulação subsequente e propagação de cultivares melhorados para fins comerciais. / The fig tree (Ficus carica L.) breeding programs by conventional methods such as directed crosses, in order to obtain new cultivars, are unworkable in many countries, as in Brazil, mainly by small genetic variability found, and by the difficulty for obtaining plants originated from the fusion of gametes, since the wasp Blastophaga psenes, responsible for natural pollination, doesn`t exist in the country. In this way, the genetic breeding, with the use of mutagenic, becomes an important research line for the improvement of culture, being necessary to gather information about this species, mainly in relation to its genetic variability, for perform propagation projects and appropriate management. Given the above, The objective of this study was to verify the existence of epigenetic variability due to DNA methylation in irradiated fig selections, with each other and when compared to the main commercial cultivar, Roxo-de-Valinhos, using MSAP and ELISA techniques, and subsequent DNA sequencing, treated with sodium bisulfite, for detection of the position of the polymorphic regions, analyzed by bioinformatics tools. Samples of genomic DNA were double-digested with the HpaII enzyme (sensitive to methylation) with its isoschizomer MspI (insensitive to methylation), together with the EcoRI enzyme. Fourteen primer combinations were tested and it was obtained 87.9%, 10.1% e 2.0%, respectively, unmethylated CCGG, methylated CmCGG and hemimethylated regions hmCCGG, from a total of 553 amplification products, displaying, the MSAP technique, efficient for detection of differentially methylated sites in the genomic material studied, demonstrating their epigenetic divergence. With the sequencing of DNA isolated of these differentially methylated sites, it was possible to verify different patterns of methylation in them by sequencing the DNA treated with sodium bisulfite, in coding regions of regulatory genes of the development and fruits ripening, besides they have been found in the mitochondrial DNA of treatments, which regulates the supply of energy in ATP form for the plants, being closely related to their development, justifying the different phenotypes found in both fruits and plant growth that suffered stress due to exposure to gamma radiation. By the technique of immunochemistry (ELISA), using 5-mC antibodies, significant differences were observed by Tukey test, at 95% of trustworthiness, in the global content methylation of the treatments DNA, indicating that this abiotic factor was responsible for the changes in the epigenome of the plants. Since the material used as control was found also methylated, a supposed demethylation of the genomic material may be responsible for phenotypic variation among treatments. Considering this, future study of gene expression between treatments becomes an extreme important strategy for understanding the complex regulatory systems, leading to the identification of genes with agronomic interest for the fig culture, allowing its subsequent manipulation and propagation of improved cultivars for commercial purposes.

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