GOES JÚNIOR, Francisco de Assis Mendes. Relaxamento do corpo cavernoso de coelho induzido pela fração alcaloidal F3-5 de Aspidosperma ulei Markgr. 2007. 65 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2007. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-02-19T16:37:10Z No. of bitstreams: 1 2007_dis_famgoesjpunior.pdf: 1185630 bytes, checksum: bc50b6e04e8e3c6c6879faa44b04e3be (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-02-19T16:38:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_dis_famgoesjpunior.pdf: 1185630 bytes, checksum: bc50b6e04e8e3c6c6879faa44b04e3be (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-19T16:38:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_dis_famgoesjpunior.pdf: 1185630 bytes, checksum: bc50b6e04e8e3c6c6879faa44b04e3be (MD5) Previous issue date: 2007 / Erectile dysfunction is a worldwide public health issue and, in spite of advances brougth by the utilization of type-5 phosphodiesterase inhibitors, there is still much interest in new treatment alternatives, especially when derived from natural products. Some investigators observed the pro-erectile effects of an alkaloidal-rich fraction from Aspidosperma ulei Markgr., named F3-5. In this study, it was evaluated the degree of relaxation induced by F3-5 on rabbit corpus cavernosum, as well as possible Pharmacological mechanisms involved, in vitro. Several experimental assays were performed, utilizing the methods of cascade tissue superfusion and isolated tissue bath. Wíth strips ot corpus cavernosum pre-contracted with phenilephrine (5µM), dose-response curves of relaxation for F3-5 papaverine and DMSO were produced. were There were also assays fo, evaluation of the effects of L-NAME, 7-NI, 000, propranolol, atropine, sildenafil and F3-5 on the relaxations mediated by sodium litroprusside, acetylcholine, isoproterenol, sildenafil and F3-S. With depolarized preparations of corpus cavernosum, in a calcium-free, potassium-rich (60 mM) medium, the effects of F3-S and DMSO on the contractions induced by the progressive increase in Ca2+ concentration (1 - 300 mM) were observed. F3-5 was capable of inducing complete relaxation of rabbit corpus cavernosum with magnitude similar to that of papaverine for all doses tested, except 3 mg, when ít presented a significantly higher relaxation. Superfusions of L-NAME, 7-NI and ODQ did not significantly inhibit the relaxatíons provoked by F3-5, suggesting that it acts independently of the nitrergiê pathway. Propranolol and atropine also did not significantly interfere with relaxations mediated by F3-5 indicating that B-adrenergic or rnuscarinic receptors also might not be involved. F3-5 did not significantly amplify the relaxations promoted by sodium nitroprusside or acetylcholine, as opposed to sildenafil, suggesting that it does not act through inhibition of type-5 ohosphodiesterase. Finally, in cavernous tissue pre-incubated with F3-5, the minimum dose of Ca2+ necessary for muscular contraction was thirty times superior to that utilizedon the tissue without previous treatment, or treated with OMSO. This inhibition of the contractions of corpus cavernosum mediated by Ca2+ suggests, therefore, that F3-S can act through blockade of voltage-dependent calcium channels. / A disfunção erétil é um problema mundial de saúde pública e, apesar dos avanços trazidos pela utilização dos inibidores da fosfodiesterase tipo-5, ainda há muito interesse em novas alternativas de tratamento, especialmente quando derivadas de produtos naturais. Alguns pesquisadores observaram os efeitos pró-eréteis de uma fração rica em alcalóides de Aspidosperma ulei Markgr., denominada F3-5. Neste estudo, foi avaliado o grau de relaxamento induzido por F3-5 no corpo cavernoso de coelho, bem como possíveis mecanismos farmacológicos envolvidos, in vitro. Foram realizados diversos ensaios experimentais, utilizando-se os métodos de superfusão de tecido em cascata e de banho isolado de tecido. Com tiras de corpo cavernoso pré-contraídas com fenilefrina (5 μM), foram produzidas curvas de dose-resposta de relaxamento para F3-5, papaverina e DMSO. Também foram realizados ensaios para avaliação dos efeitos de L-NAME, 7-NI, ODQ, propranolol, atropina, sildenafil e F3-5 sobre os relaxamentos mediados por nitroprussiato de sódio, acetilcolina, isoproterenol, sildenafil e F3-5. Com preparações de corpo cavernoso despolarizadas, em um meio livre de cálcio e rico em potássio (60 mM), os efeitos de F3-5 e DMSO sobre as contrações induzidas pelo aumento progressivo na concentração de Ca2+ (1 – 300 mM) foram observados. F3-5 foi capaz de induzir o relaxamento completo do corpo cavernoso de coelho, com magnitude similar à da papaverina para todas as doses testadas, exceto 3 mg, quando apresentou relaxamento significantemente maior. As superfusões de L-NAME, 7-NI e ODQ não inibiram significantemente os relaxamentos provocados por F3-5, sugerindo que este age independentemente da via nitrérgica. Propranolol e atropina também não interferiram significantemente com os relaxamentos mediados por F3-5, indicando que receptores β-adrenérgicos ou muscarínicos também não devem estar envolvidos. F3-5 não amplificou significantemente os relaxamentos promovidos por nitroprussiato de sódio ou acetilcolina, ao contrário de sildenafil, sugerindo que não age por inibição da fosfodiesterase tipo-5. Finalmente, em tecido cavernoso pré-incubado com F3-5, a dose mínima de Ca2+ necessária para contração muscular foi trinta vezes superior àquela utilizada em tecido sem tratamento prévio ou tratado com DMSO. Esta inibição das contrações de corpo cavernoso mediadas pelo Ca2+ sugere, portanto, que F3-5 pode atuar através do bloqueio de canais de cálcio voltagem-dependente.

CERQUEIRA, João Batista Gadelha de. Identificação dos mecanismos envolvidos no relaxamento da musculatura lisa cavernosa e da aorta de coelho, induzido por doadores de óxido nítrico do complexo nitrosil-rutênio. 2008. 125 f. Tese (Doutorado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-18T12:40:46Z No. of bitstreams: 1 2008_teses_jbgcerqueira.pdf: 1166899 bytes, checksum: 80812fd9e68a5a052d30380374a26a1a (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-18T12:41:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_teses_jbgcerqueira.pdf: 1166899 bytes, checksum: 80812fd9e68a5a052d30380374a26a1a (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-18T12:41:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_teses_jbgcerqueira.pdf: 1166899 bytes, checksum: 80812fd9e68a5a052d30380374a26a1a (MD5) Previous issue date: 2008 / Endothelial dysfunction makes 56% of patients with erectile dysfunction decline treatment with PDE-5 inhibitors. New forms of treatment are necessary for this group of patients. The present study evaluates the relaxation in vitro induced in rabbit corpus cavernosum smooth muscle and aortic rings by sodium nitroprusside (SNP) and by two new NO-donor substances of the nitrosyl-ruthenium complex: Rut-Byp and Rut-Caf. Tissues immersed in isolated baths of Krebs-Henseleit solution (37oC; pH 7.4) were precontracted with 1uM phenylephrine (PE). Relaxation concentration/response curves were plotted for all concentrations (10-12 to 10-4 M). To explore the mechanisms involved in induced relaxation, the following substances were added: 3µM, 10µM, 30µM or 100µM ODQ (soluble guanylate cyclase-specific inhibitor), 3µM or 10 µM oxyhemoglobin (extracellular NO scavenger), 1 mM L-cysteine (nitrosyl anion-specific scavenger), 100µM hydroxycobalamin (NO free radical scavenger), glibenclamide (ATP-dependent potassium channel blocker), iberiotoxin (medium and high-conductance potassium channel blocker) and apamin (low-conductance potassium channel blocker). The tissue samples were frozen in liquid nitrogen in order to quantify GMPc and AMPc produced during relaxation. All the substances tested produced a significant level of relaxation in the aortic vascular endothelium. Similar results were found for corpus cavernosum smooth muscle, with the exception of Rut-Byp (Emax 30%). In this tissue, Rut-Caf e SNP induced dose-dependent relaxation with a potency (pEC50) of 4.2 and 5.2, and a maximum effect (Emax) of 100% and 80%, respectively. All substances acted through the activation of soluble guanylate cyclase (sGC); therefore, the addition of 100µM ODQ inhibited the relaxation effect completely in all cases. Oxyhemoglobin reduced relaxation induced by all substances. At 3µM, the maximum effect (Emax) was reduced by 26% on the average, and at 10µM the effect was reduced by another 50% (p<0.05), though not completely neutralized. L-cysteine failed to affect relaxation, but hydroxycobalamin abolished Rut-Caf-induced relaxation in aortic rings (Emax: 112% vs 10%; p<0.005). A significant reduction was observed in corpus cavernosum smooth muscle relaxation, though not as intense as in aortic rings. The addition of glibenclamide to the baths increased the potency of Rut-Caf significantly (4.09 vs. 7.9; p<0.005) with no significant change in maximum effect. Potency and maximum effect remained unchanged with the other ion channel blockers. The agents released cGMP in both tissues studied. NO-donor substances of the nitrosyl-ruthenium complex were shown to be potent vasodilators. One substance (Rut-Caf) induced significant relaxation in animal corpus cavernosum. The substances tested in the study act through the activation of soluble guanylate cyclase producing intracellular GMPc. During relaxation they release NO and its free radical intracellularly, but not nitrosyl. They do not act directly upon potassium ion channels. Rut-Caf acts independently of the endothelial integrity. / Disfunção endotelial provoca 56% de resistência ao tratamento da disfunção erétil pelos inibidores da PDE-5. Novas formas de tratamento são necessárias para este grupo de pacientes. O estudo avaliou o relaxamento, in vitro, induzido por novas substâncias doadoras de óxido nítrico (NO) do complexo nitrosil-rutênio (Rut-Byp, Rut-Caf) na musculatura lisa de corpos cavernosos humanos e de coelho e em anéis de aorta de coelho e do nitroprussiato de sódio (SNP). Os tecidos, imersos em sistemas de banhos isolados em solução de KHS (pH 7,4; 37oC), foram pré-contraídos com fenilefrina (PE;1uM) e curvas de concentração-resposta (10-12M a10-4M) foram obtidas. Para esclarecer o mecanismo de ação envolvido no relaxamento induzido pelos agentes, foram adicionadas aos banhos as substâncias: ODQ (3µM, 10µM, 30µM e 100µM), inibidor da guanilatociclase solúvel; oxi-hemoglobina (3µM e 10µM), removedor extracelular do NO; L-cisteína (100µM), removedor intracelular do ânion nitroxil; hidroxicobalamina (100µM), removedor de radical livre do NO; glibenclamida, bloqueador de canais de íons potássio ATP-dependente (KATP); iberiotoxina, bloqueador de canais de potássio de alta e média condutividade (KCA); apamina, bloqueador de canais de potássio de baixa condutividade (KCA). Amostras dos tecidos foram congeladas em nitrogênio líquido para mensurar a quantidade de GMPc e AMPc produzido no relaxamento. Todas as substâncias provocaram relaxamento estatisticamente significante da musculatura lisa dos anéis de aorta. Na musculatura lisa cavernosa, só Rut-Byp não conseguiu induzir relaxamento significativo (efeito máximo= 30%). Neste tecido a Rut-Caf e SNP provocaram relaxamento dose-dependente, com efeito máximo de 80% e 100% e pEC50 4,2 e 5,2, respectivamente. Todas substâncias mostraram atividade mediante a ativação da enzima guanilatociclase solúvel (GCs), pois a adição do ODQ 100µM aos banhos, inibiu totalmente o efeito relaxante. A oxi-hemoglobina em anéis de aorta de coelho na dose de 3µM, diminuiu o efeito máximo das substâncias em média 26% e, na dose de 10µM, houve uma redução adicional de 50% (p<0,05). A L-cisteína falhou em alterar o relaxamento induzido pelos agentes estudados. A hidroxicobalamina em anéis de aorta e em corpo cavernoso de coelho aboliu o efeito relaxante da Rut-Caf (Efeito máximo: 112% x 10%; p<0,005). A adição de glibenclamida em corpos cavernosos de coelho aumentou a potência da substância Rut-Caf (4,09 x 7,9; p<0,005), sem alterar o efeito máximo. Não houve alteração de potência ou efeito máximo das substâncias com a adição de outros bloqueadores de canais de íons. A remoção do endotélio não alterou a potência e o efeito máximo da substância Rut-Caf em anéis de aorta de coelho. As substâncias liberaram GMPc em maior intensidade no corpo cavernoso do que em anéis de aorta. As substâncias doadoras de NO do complexo nitrosil-rutênio são potentes vasodilatadores e uma delas (Rut-Caf), demonstrou relaxamento significativo no tecido cavernoso animal e humano. As substâncias atuam ativando a enzima guanilatociclase solúvel produzindo GMPc, liberam NO e radical livre do NO durante o relaxamento, mas não o ânion nitrosil. Os agentes não atuam diretamente nos canais de íons potássio. A substância Rut-Caf atua independentemente da integridade endotelial.

Memoria para optar al título de Bioquímico / La regulación de la circulación pulmonar en el periodo de perinatal es fundamental en la mantención de una presión arterial media (mPAP) y una resistencia vascular disminuida. Una desregulación del tono arterial pulmonar basal puede llevar a patologías tal como hipertensión pulmonar. Está descrito que la regulación del tono arterial pulmonar basal es resultado de un equilibrio de agentes constrictores y relajantes. La principal vía de transducción de señales involucrada según la bibliografía es la de sGC-cGMP-PKG, sGC es activado por compuestos gaseosos como NO (producido en la capa endotelial por eNOS) y en menor proporción por CO, que puede ser producido endógenamente por hemoxigenasas. Existen antecedentes de la estimulación de la vía sGC-cGMP mediante la administración exógena de hemina en modelos de ovejas recién nacidas (RNOV) hipertensas. Se desconocen los efectos de la inducción de la respuesta dependiente de cGMP en un modelo de RNOV normotenso. Nuestra hipótesis es que la administración de hemina produce en la circulación pulmonar neonatal una exacerbación de la vía vasodilatadora dependiente de cGMP. Se utilizaron RNOV normotensas de nivel de mar, dividiéndolas en dos grupos al azar. Se les administró hemina (15mg/Kg peso) o control (Vehículo de NaOH 0,01N y PBS 1x) desde el 5to día de vida, durante 10 días. Al día 17 de vida se eutanizó y se recolectaron tejidos para el estudio funcional ex vivo con miografías de alambre de la vía dependiente de cGMP en arterias pequeñas de pulmón, e in vitro con PCR de la expresión génica de sus componentes y por ELISA para evaluar el contenido de cGMP del tejido pulmonar. Los resultados muestran un aumento del contenido total de cGMP en el grupo con administración de hemina y aumento de la funcionalidad dependiente de cGMP por lo que se acepta la hipótesis de la memoria. Estos resultados contrastan con la respuesta in vivo donde no se modificó la mPAP entre ambos grupos. Se concluye que la regulación del tono vascular basal primordialmente no depende del equilibrio de los agentes vasoactivos como es descrito en la bibliografía del tema estudiado y por lo tanto se cuestiona la supuesta regulación de la circulación pulmonar basal del periodo perinatal / The pulmonary circulation’s regulation in the perinatal period it is fundamental in the maintenance of mPAP and RVP decreased. A deregulation of basal pulmonary arterial tone can lead to pathologies as pulmonary hypertension. It is described that the basal pulmonary arterial tone regulation it is given by a balance between constrictors and dilators agents. The main signal transduction pathway involver according to research it is the sGC-cGMP-PKG one, sGC can be activated by gaseous compounds as NO (produced on the endothelial layer by eNOS) and in a minor degree by CO, which can be produced endogenously by hemoxygenases. The data showed that exogenous hemin administration in hypertensive newborn lamb can stimulate the sGC-cGMP pathway. It is unknown of the effects of the induction of cGMP-dependent response in a pulmonary normotensive newborn sheep model. Our hypothesis it’s that hemin administration lead to an exacerbation of the cGMP pathway on the pulmonary circulation regulation. Normotensive newborn sheep were used from lowlands, dividing them on two random groups. Hemin (15mg/Kg weight) or control (Vehicle 0.01N NaOH and PBS 1x) was administered from the 5th day of life, for 10 days. On day 17 postnatal life the animal was euthanized and tissues were collected for the ex vivo study with wire myographies of functional study of the cGMP dependent pathway in small pulmonary arteries, and in vitro with PCR of the mRNA expression of the components of the pathway and ELISA technique for cGMP content of lung tissue. The results showed an increase in the total cGMP content in hemin group administration and an increase in cGMP-dependent functionality hence accepting the hypothesis of this study. This results contrast with the in vivo response where mPAP was unmodificated. It is concluded that the basal pulmonary circulation tone regulation is not dependent of the balance between the vasoactive agents as described by a lot of researchers of the studied topic and therefore, the supposed regulation of the basal pulmonary circulation of the perinatal period is questioned

Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T06:23:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bau_FernandoRicardo_M.pdf: 739046 bytes, checksum: e73f0e5383c7082e68c3cbf81bdfce5f (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A síndrome da bexiga hiperativa atinge grande parte da população mundial, e gera sintomas que prejudicam a qualidade de vida dos portadores. Está associada com a hiperatividade do detrusor que se dá por um aumento das contrações espontâneas. Alguns estudos têm mostrado que a deficiência de NO é um dos fatores responsáveis por gerar estas contrações espontâneas. É sabido que o mecanismo de sinalização do NO envolve a ativação da guanilil ciclase solúvel e produção de GMPc. Atualmente, algumas drogas têm sido sintetizadas para mimetizar o efeito exercido pelo NO, tal como o BAY 41-2272, um potente estimulador da guanilil ciclase solúvel independente de NO. Vários trabalhos mostraram que o BAY 41-2272 causa relaxamento de vários tipos de musculatura lisa, podendo ser um composto com grande potencial terapêutico em doenças onde a via do NO/GMPc está prejudicada. O objetivo deste trabalho é investigar a capacidade do BAY 41-2272 de relaxar detrusor isolado de camundongo, coelho e rato in vitro e os mecanismos farmacológicos envolvidos na resposta relaxante. Camundongos C57b6 machos (30-40 g), coelhos New Zealand machos (2-3 kg) e ratos Wistar machos (250-300 g) foram anestesiados e mortos. As bexigas foram removidas e fragmentos de detrusor foram montados em banho para órgãos isolados contendo 10 ml de solução de Krebs. Curvas concentração-resposta ao BAY 41-2272 (10-9 - 10-4 M) foram construídas em tecidos précontraídos com carbacol (10 µM) ou KCl (80 mM), na ausência ou na presença de LNAME (inibidor da óxido nítrico sintase; 100 µM), ODQ (inibidor da guanilato ciclase solúvel; 100 µM), Sildenafil (inibidor da fosfodiesterase tipo-5; 10 µM), ou inibidores de canais de potássio (0,1 µM charibdotoxina + 1 µM apamina; 1µM tetraetilamônio; ou 10 µM glibenclamida). Curvas concentração-resposta ao nitroprussiato de sódio (SNP; 10-8 - 10-4 M), gliceril trinitrato (GTN; 10-8 - 10-4 M) e 8Br-GMPc (10-8 - 10-4 M) foram também construídas. Contrações induzidas por CaCl2 extracelular foram avaliadas na presença do BAY 41-2272, bem como o efeito no influxo de cálcio em plaquetas isoladas de coelho. Níveis de GMPc e AMPc foram avaliados após a estimulação do detrusor com BAY 41- 2272 (10 e 100 µM) e SNP (100 µM) na ausência ou na presença de ODQ (100 µM), através de imunoensaio enzimático (ELISA). O BAY 41-2272 produziu relaxamento de detrusor isolado de camundongos, ratos e coelhos de maneira concentração-dependente, com valores de resposta máxima de 61,3 ± 6,6%, 91,7 ± 5,9% e 95,1 ± 9,9%, respectivamente. Detrusor de coelhos foram selecionados para os experimentos subseqüentes. Os doadores de NO, SNP e GTN, bem com o 8Br-GMPc produziram um discreto relaxamento comparado ao BAY 41-2272. O tratamento dos tecidos com L-NAME (100 µM) ou sildenafil (10 µM) não afetou de maneira significativa o relaxamento induzido pelo BAY 41-2272. Entretanto, o ODQ (100 µM), reduziu significativamente a resposta ao BAY 41-2272. Os bloqueadores de canais de K+ (apamin + charibdotoxina, glibenclamida ou tetraetilamônio) também não afetaram a resposta relaxante do BAY 41-2272. O BAY 41-2272 (10 e 100 µM) elevou os níveis de GMPc em cerca de 14 e 20 vezes respectivamente, sem afetar os níveis de AMPc. Na menor concentração do BAY 41-2272 (10 µM), o ODQ aboliu a elevação dos níveis de GMPc, ao passo que na maior concentração do BAY 41-2272 (100 µM), o ODQ inibiu parcialmente a elevação dos níveis de GMPc. A adição de CaCl2 (0,01-30 mM) extracelular em detrusor isolado de coelhos causou contração de maneira concentração-dependente que foi significativamente reduzida pelo tratamento prévio com BAY 41-2272 (1 e 10 µM), sendo que este efeito não foi prevenido pelo ODQ. O BAY 41-2272 reduziu significativamente o aumento dos níveis intracelulares de cálcio em plaquetas de coelho induzido por trombina. Em resumo, o BAY 41-2272 produz relaxamento em detrusor isolado de camundongos, coelhos e ratos através da produção de GMPc e da inibição do influxo de cálcio que independe de GMPc / Abstract: Overactive bladder (OAB) is a highly prevalent condition that affects millions of people worldwide with a profound effect on quality of life. The bladder overactivity is related to spontaneous contractions of the detrusor smooth muscle causing an increase in the intravesical pressure and consequently stimulation of the micturirion reflex. Evidences suggest that impairment of nitric oxide (NO) signaling pathway may account for OAB. It is well established that NO signaling pathways involves soluble guanylate cyclase (sGC) stimulation and cyclic GMP production. Recently, pharmacological agents capable of directly stimulating soluble guanylate cyclase independenly of NO, such as BAY 41-2272 has been reported to produce relaxation of different types of smooth muscle, showing great therapeutic potential in disturbs which NO pathway is impaired. The present study aimed to evaluate the capacity of BAY 41-2272 to relax isolated mouse, rat and rabbit DSM and the mechanism underlying these response. C57b6 male mice, Wistar male rats and New Zealand male rabbits were anesthetized, and urinary bladder removed. DSM was transferred to 10-mL organ baths containing oxygenated and warmed Krebs-Henseleit solution. Tissues were connected to force-displacement transducers and changes in isometric force were recorded. Concentration-response curves to BAY 41-2272 (10-9 - 10-4M) were constructed, in previously contracted tissues with carbachol (10 µM) or KCl (80 mM), in the absence and in the presence of L-NAME (Nitric Oxide Synthase inhibitor; 100 µM), ODQ (sGC inhibitor; 100 µM), Sildenafil (phosphodiesterase type-5 inhibitor; 10 µM), or potassium channel blockers (0.1 µM charybdotoxin + 1 µM apamin; 1 µM tetraethylammonium; or 10 µM glybenclamide). Concentration-response curves to sodium nitroprusside (SNP; 10-8 - 10-4 M), glyceryl trinitrate (GTN; 10-8 - 10-4 M) and 8Br-cGMP (10-8 - 10-4 M) were also constructed. CaCl2-induced contractions in DSM and calcium influx in rabbit isolated platelets were evaluated in the presence of BAY 41-2272. Levels of cAMP and cGMP in DSM strips were determined after treatment with BAY 41-2272 (10 and 100 µM), SNP (100 µM) in the absence or in the presence of ODQ (100 µM) using specific EIA kit. BAY 41-2272 (0.001-100 µM) produced concentration-dependent DSM relaxations in mouse, rat and rabbit with maximal responses of 61.3 ± 6.6%, 95.1 ± 9.9% and 91.7 ± 5.9%, respectively. The NO-donors sodium nitroprusside and glyceryl trinitrate, as well as 8-bromo-cGMP also produced concentration-dependent rabbit DSM relaxations, but to a lesser extent than BAY 41-2272. Pretreatment with L-NAME (NO synthesis inhibitor) or sildenafil (phosphodiesterase-5 inhibitor) had no effect in BAY 41-2272- induced responses. However, the soluble guanylyl cyclase inhibitor ODQ significantly reduced BAY 41-2272-induced relaxantions. BAY 41-2272 (10 and 100 µM) increased the bladder cGMP levels by about of 14- and 20-fold, respectively, without affecting the cAMP levels. The cGMP increases in response to BAY 41-2272 and SNP were markedly reduced by ODQ. CaCl2 caused a concentration-dependent contraction in DSM strips and BAY 41- 2272 significantly reduced the contractile responses to extracellular Ca2+ in an ODQinsensitive manner. BAY 41-2272 also significantly reduced the increase of intracellular calcium levels induced by thrombin. This inhibitory effect was completely reverted after the treatment with ODQ. BAY 41-2272 relaxes DSM of the three animal species studied. BAY 41-2272-induced DSM relaxation involves mainly cGMP production, but an additional mechanism involving Ca2+ influx blockade independently of cGMP production appears to be involved / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

Orientador: Gilberto de Nucci / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T20:24:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Toque_HaroldoAlfredoFlores_D.pdf: 1734292 bytes, checksum: a664da49d6a032202e54c1490b0647dc (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O sildenafil, inibidor específico de PDE5, é utilizado no tratamento da disfunção erétil. Na procura de um inibidor mais potente e seletivo de PDE5, testamos vinte novos análogos do sildenafil (6a-v), caracterizados pela presença de um grupo sulfonil ou de um substituinte n'n'etilendiamina na posição do grupo metil da piperazina. Os objetivos deste trabalho foram: 1) Avaliar a atividade inibitória da PDE5 de plaquetas humanas; 2) Avaliar o efeito relaxante dos análogos do sildenafil em corpo cavernoso de coelho; 3) Avaliar o efeito relaxante dos análogos do sildenafil em anéis de aorta de coelho. Foi utilizado sangue de voluntários sadios para a atividade inibitória da PDE5 e coelhos New Zealand machos (2-3 kg) procedentes do CEMIB-UNICAMP para os estudos funcionais. Os animais foram anestesiados com uretana, o corpo cavernoso e a artéria aorta foram rapidamente removidos. O tecido cavernoso e anéis de aorta foram montados em banho para órgão isolado contendo solução de Krebs (37oC, 95% O2 / 5% CO2). Os tecidos foram ligados a transdutores isométricos conectados a um sistema PowerLab® de aquisição de dados. Nossos resultados mostraram que a atividade inibitória da PDE5 induzida pelos análogos do sildenafil em plaquetas humanas foi de maneira dependente da concentração. Os compostos 6m, 6n e 6q mostraram valores elevados de IC50 para inibir a PDE5 plaquetária, enquanto que os compostos 6a, 6b, 6d, 6g e 6p produziram inibição inferior a 50%. A potência inibitória (IC50) dos compostos 6c, 6e, 6f, 6h, 6i, 6l e 6o foi similar ao sildenafil (IC50: 0,05 µM) com valores variando entre 0,05 e 0,15 µM. Os análogos que derivaram da molécula n'n'etilendiamina (6r, 6s, 6t e 6v) mostraram uma boa atividade inibitória com valores entre 0,20-0,51 µM. Interessantemente, o composto 6u mostrou uma potência de 0,04 µM, o qual representou o menor valor obtido dos análogos do sildenafil. Nos estudos funcionais, todos os análogos do sildenafil, à exceção do análogo 6m, relaxaram preparações de corpo cavernoso de coelho de maneira dependente da concentração. Particularmente, o análogo 6f mostrou o melhor perfil farmacológico no relaxamento, com potência similar ao sildenafil, e pode servir de base para o desenvolvimento de novos inibidores de PDE5 para o tratamento da disfunção erétil. Além disso, nossos resultados mostraram que os análogos do sildenafil produzem relaxamento dependente da concentração em anéis de aorta de coelho com endotélio íntegro ou removido. Somente o análogo 6b e 6m apresentaram valores de potência inferiores quando comparados ao sildenafil em tecidos com endotélio íntegro. A remoção do endotélio ou a adição do LNAME ou do ODQ (inibidor da NO sintase e da guanilil ciclase solúvel, respectivamente) em tecidos com endotélio íntegro, provocou deslocamento à direita para o sildenafil e seus análogos, à exceção do 6r e 6u que não apresentaram diminuição da potência decorrente da inibição do NO, seja pela remoção do endotélio, pela inibição da NO sintase ou pela inibição da guanilil ciclase solúvel. Nossos dados também mostram que o 6r e 6u, em combinação com o BAY 41-2272, aumentam a potência evocada por estes análogos tanto em anéis de aorta com endotélio íntegro ou removido. O relaxamento evocado pelo sildenafil, 6r e 6u não envolve a participação de canais de potássio e de cálcio, nem envolve a formação de prostanóides. As respostas relaxantes destes dois análogos não foram alteradas em tecidos desprovidos de endotélio, mostrando-se independentes da via NO/GMPc. Isto sugere que estes dois análogos podem ser de particular interesse em patologias decorrentes de disfunção endotelial. / Abstract: Sildenafil, a cGMP-specific phosphodiesterase-5 (PDE5) inhibitor, is used for the treatment of erectile dysfunction. In the search for a potent and selective PDE5 inhibitor, new sildenafil analogues (6a-v), characterized by the presence on the sulphonyl group in the 5' position of novel N-4-substituted piperazines or ethylenediamine moiety, were synthesized. The aim of this work was 1) To evaluate the PDE5 inhibitory activity in human platelets; 2) To evaluate the relaxing effect of sildenafil analogues in rabbit corpus cavernosum; 3) To evaluate the relaxing effect of sildenafil analogues in rabbit isolated aorta. Blood from human volunteers were collected and used for PDE5 inhibitory activity and Male New Zealand rabbit (2-3 kg) for functional studies. The rabbits were anaesthetized with urethane and sacrificed. The cavernosal tissue and aortic rings were mounted in organ bath containing Krebs solution (37oC, 95% O2 / 5% CO2). Each tissue was connected to an isometric transducer which was connected to a data acquisition system Powerlab®. Our results showed that sildenafil and its analogues concentration-dependently inhibited PDE5 activity in human platelets. Compounds 6m, 6n and 6q showed higher values of IC50 to inhibit PDE5 of platelets, whereas compounds 6a, 6b, 6d, 6g and 6p did not reach 50% of inhibition. The inhibitory potency of PDE5 for 6c, 6e, 6f, 6h, 6i, 6l and 6o were similar with sildenafil (IC50: 0,05 µM) with values between 0,05-0,15 µM. Derived analogues from n'n' substitution showed great PDE5 inhibitory activity. Interesting, compound 6u exhibited greater IC50 value (0,04 µM). In functional studies, all sildenafil analogues with exception of 6m, relaxed concentration-dependently rabbit corpus cavernosum. Compound 6f exhibited great pEC50 value in corpus cavernosum and could be used as base for developing new PDE5 inhibitors. Moreover, our results showed that sildenafil analogues concentration-dependently relaxed both endothelium-intact and - denuded aortic rings with similar potency values of sildenafil. Compounds 6b and 6m showed lower values of potency when compared to sildenafil in endothelium intact. Endothelium denudation or addition of L-NAME or ODQ (NOS and sGC inhibitors, respectively) caused marked rightward shifts in the curve to sildenafil and its analogues, whereas the relaxation curves for 6r and 6u were not altered after endothelium removal or either by the NO synthase or sGC inhibition. Moreover, our data also suggest that compound 6r and 6u increased the potency values in combination with BAY 41-2272 in both intact and denuded endothelium. The relaxation evoked by sildenafil, 6r and 6u does not involve either calcium or potassium channels or prostanoids formation. The relaxing responses by these compounds were independent of NO/cGMP pathway, suggesting that these compounds may be used in several diseases involving endothelium dysfunction. / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T23:29:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Monteiro_PriscilaFukumura_M.pdf: 903494 bytes, checksum: 9d17a9657d72fedec2f6efc40cc3b082 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: As plaquetas desempenham uma função fisiológica importante no sistema hemostático, em resposta a lesão vascular através da prevenção da hemorragia. A adesão ou agregação plaquetária são eficazes na contribuição sinérgica de várias interações de múltiplos receptores, que transmitem sinais de ativação que iniciam uma série de respostas bioquímicas e morfológicas, associadas à remodelação do citoesqueleto, a secreção granular e a geração e liberação de agonistas endógenos solúveis, tais como ADP e tromboxano A2 (TXA2). O NO derivado da célula endotelial exerce um efeito inibitório na função da plaquetaria através da ativação de cGMP / PKG, a qual, por sua vez leva a uma redução na concentração de Ca2 + prevenindo assim a adesão e agregação de plaquetas à parede vascular. No entanto, a disfunção endotelial, presente em certas condições patológicas é caracterizada por uma diminuição da biodisponibilidade de NO que leva a ativação anormal das plaquetas conduzindo a trombose vascular À disfunção plaquetária é considerada uma fase final de complicações cardiovasculares no diabetes mellitus tipo II, obesidade, aterosclerose, levando ao resultado clínico, tais como enfarte do miocárdio, acidente vascular cerebral e doença arterial periférica. A obesidade é um importante problema de saúde pública, atingindo todas as idades e grupos socioeconômicos elevando a incidência de doenças cardiovasculares e endócrino-metabólica. Um estado crônico de stress oxidativo e inflamação são a marcados pela adiposidade que desempenha um papel crucial nos eventos fisiopatológicos desta desordem. Estes efeitos pró-inflamatórios e pró-oxidante estão associados com o aumento de ERO com diminuição da biodisponibilidade, o que aumenta o risco de eventos trombóticos aterosclerose. No entanto, os mecanismos pelos quais a adiposidade induz disfunção plaquetária são pouco esclarecidos. Além disso, a maioria dos eventos cardiovasculares fatais como consequência de complicação trombótica não estão associadas à estenose vascular completa, mas sim com as alterações de biomarcadores pró-inflamatórios e pró-oxidantes, o que pode prever futuros eventos cardiovasculares. Nossa hipótese é que a produção de ERO intraplaquetário causada pela adiposidade contribui para eventos trombóticos e distúrbios endocrinometabólico. Assim, investigou-se a reatividade plaquetária ex-vivo em resposta ao ADP e trombina, em ratos alimentados com dieta hiperlipídica, e o envolvimento de ERO e via do NO-cGMP na modulação da reatividade de plaquetária / Abstract: Platelets play an important physiological function in haemostasis system in response to vascular injury by preventing hemorrhage. Effective platelet adhesion and aggregation require the synergistic contribution of multiple receptor-ligand interactions that transmit activating signals initiating a range of platelet biochemical and morphological responses, linked to cytoskeleton remodeling, granule secretion and the generation and release of endogenous soluble agonists, such as ADP and thromboxane A2 (TXA2). Endothelial cell-derived nitric oxide (NO) exerts an inhibitory effect in the platelet function by activation of cGMP/PKG pathway, which in turn leads to reduction in concentration of Ca2+, thus preventing adhesion and aggregation of platelets to the vascular wall. Nonetheless, endothelium dysfunction, present in certain pathological conditions is characterized by a decreased NO bioavailability which incites abnormal platelet activation leading to vascular thrombosis. Platelet dysfunction is considered an end stage of cardiovascular complications in type II diabetes mellitus, obesity and atherosclerosis that results in clinical outcomes such as myocardial infarction, stroke and peripheral artery disease. Obesity is an important public health problem affecting all ages and socioeconomic groups greatly elevating the incidence of cardiovascular and endocrine-metabolic disorders. A chronic state of oxidative stress and inflammation are the hallmark of adiposity that plays a pivotal role in the physiopathological events in this disorder. These proinflammatory and pro-oxidant effects are associated with increased reactive-oxygen species (ROS) production and decreased NO bioavailability, which increases the risk of athero thrombotic events. Nonetheless, the exact mechanisms by which adiposity induces platelet dysfunction remain poorly investigated. In addition, most of fatal cardiovascular events as consequence of thrombotic complication are not associated with complete vascular stenosis, but rather with alterations of pro-inflammatory and pro-oxidant biomarkers, which can predict future cardiovascular events. We hypothesized that intraplatelet ROS production in adiposity contributes to thrombotic events in endocrinemetabolic disorders. Therefore, we have investigated the ex-vivo platelet reactivity in response to ADP and thrombin in high fat-fed rats, and the involvement of platelet-derived ROS and NO-cGMP pathway in modulating the platelet reactivity / Mestrado / Farmacologia / Mestra em Farmacologia

Orientador: Gilberto de Nucci / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-26T11:10:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arruda_AndreMoreiraMartins_M.pdf: 11172054 bytes, checksum: db7fb87cc200cb091d3be4733e8d8af5 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A presença de um par de órgãos copuladores, os hemipênis, é a característica mais singular do grupo Squamata, que reúne as serpentes e os lagartos. Para que ocorra a ereção, o hemipênis sofre ingurgitamento dos corpos cavernosos por sangue e linfa, além de contar com o auxílio da contração do músculo propulsor do pênis e o relaxamento do músculo retrator. O coito nestes animais pode durar até 28 horas, porém, os mecanismos envolvidos, as estruturas e sua base farmacológica de funcionamento são ainda pouco conhecidas. O hemipênis consiste de dois corpos cavernosos funcionalmente concêntricos, um deles contendo feixes de fibras musculares lisas. Em mamíferos, sintases de NO neuronais e endoteliais estão presentes em estruturas neurais e no endotélio, respectivamente, enquanto a guanilato ciclase solúvel e PDE5 (fosfodiesterase tipo 5) estão expressas no músculo liso trabecular. Partindo disto, para investigar as vias presentes no tecido das cobras, foram construídas curvas concentração-resposta cumulativas de relaxamento para a acetilcolina (ACh), nitroprussiato de sódio (SNP), BAY41-2272 e tadalafil em corpos cavernosos de Crotalus (CCC) pré-contraídos com fenilefrina. Relaxamentos induzidos por estímulo elétrico (EFS) também foram feitos na ausência e presença de L-NAME (100 mm), ODQ (10 mM) e tetrodotoxina (TTX, 1 mM). Em CCC pré-contraídos, o relaxamento dependente de frequência, gerado por EFS, durou três vezes mais do que aqueles em CC mamíferos. Embora estes relaxamentos sejam praticamente abolidos por L-NAME ou ODQ, eles não foram afetados pela TTX. Em contraste, o EFS promoveu relaxamento em corpos cavernosos de sagui que haviam sido incubados com TTX / Abstract: The presence of a pair of copulatory organs, the hemipenes, is the most unique feature of the group Squamata, which includes snakes and lizards. For an erection to occur, the hemipenes suffer engorgement of the corpora cavernosa with blood and lymph, besides counting with the aid of contraction of the propellant muscle and relaxation of penis retractor muscle. Coitus in these animals can last up to 28 hours, however, the mechanisms involved, the structures and their pharmacological basis are still little known. The hemipenis consists of two concentric functionally cavernous bodies, one containing bundles of smooth muscle fibers. In mammals, neuronal NO synthases and endothelial cells are present in the endothelium and neuronal structures, respectively, whereas the soluble guanylate cyclase and PDE5 (phosphodiesterase type 5) are expressed in trabecular smooth muscle. To investigas the tissue were constructed cumulative concentration-response curves for relaxation to acetylcholine (Ach), sodium nitroprusside (SNP), BAY41-2272 and tadalafil in the corpora cavernosa of Crotalus (CCC) pre contracted with phenylephrine. Relaxations induced by electrical stimulation (EFS) was also tested in the presence and absence of L-NAME (100 mm), ODQ (10 mM) and tetrodotoxin (TTX, 1 mM). In precontracted CCC, dependent relaxation frequency generated by EFS last three-times more than those in DC mammals. Although these relaxations are virtually abolished by L-NAME or ODQ, they were not affected by TTX. In contrast, EFS caused a relaxation of the corpus cavernosum in marmosets that had been incubated with TTX / Mestrado / Farmacologia / Mestra em Farmacologia

Orientador: Carlos Amilcar Parada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-26T11:05:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DosSantos_GilsonGoncalves_M.pdf: 2757194 bytes, checksum: 3b5bda3ca0fc7912d13b42ba51399734 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A dipirona (metamizol) é um pró-fármaco analgésico utilizado no controle da dor moderada, sendo metabolizada em dois metabolitos bioativos: 4-metil-aminoantipirina (4-MAA) e 4-aminoantipirina (4-AA). O objetivo deste estudo foi investigar a participação de receptores canabinóides periféricos, CB1, CB2 e canais de KATP sobre o efeito anti-hiperalgésico da dipirona, 4-MAA ou 4- AA. Para indução de hiperalgesia, PGE2 (100 ng/pata ) foi administrada localmente na pata traseira de ratos Wistar machos, e o limiar hiperalgésico mecânico foi quantificado por Von- Frey eletrônico, antes e três horas após a injeção. Dipirona, 4-MAA ou 4-AA foram administrados 30 minutos antes do Von Frey. Os antagonistas seletivos do receptor CB1 (AM251), CB2 (AM630) e glibenclamida, um bloqueador KATP (80 ug) ou ODQ um inibidor de cGMP (32 ?g) foram administrados 30 minutos antes da Dipirona, 4-MAA ou 4 -AA. O ODN-antisense para reduzir a expressão do receptor CB1 (30 ?g) foi administrado por via intratecal, uma vez por dia durante quatro dias consecutivos. A hiperalgesia mecânica induzida pela PGE2 foi reduzida pela dipirona, 4-MAA, e 4-AA de maneira dose-dependente. AM251 ou ODN-antisense contra o receptor neuronal CB1, mas não AM630, reduziu o efeito anti-hiperalgésico mediado por 4-AA, mas não da dipirona ou 4-MAA. Por outro lado, o efeito anti-hiperalgésico da dipirona, ou 4-MAA foi revertido por glibenclamida ou ODQ. Os resultados sugerem que a ativação de receptores neuronal CB1, mas não do receptor CB2, no tecido periférico esteja envolvido no efeito anti-hiperalgésico do metabólito 4-AA. Além disso, a dipirona e 4-MAA possui um efeito anti-hiperalgesico dependente de cGMP e consequente abertura KATP / Abstract: Dipyrone (metamizole) is an analgesic pro-drug used to control moderate pain. It is metabolized in two bioactive metabolites: 4-methylaminoantipyrine (4-MAA) and 4-aminoantipyrine (4-AA). The aim of this study was to investigate the participation of peripheral CB1 and CB2 cannabinoid receptors activation on the anti-hyperalgesic effect of Dypirone, 4-MAA or 4-AA. For induction of hyperalgesia, PGE2 (100 ng) was locally administrated in hindpaw of male Wistar rats, and the mechanical nociceptive threshold was quantified by electronic von-Frey, before and 3 hours after its injection. Dypirone, 4-MAA or 4-AA was administrated 30 minutes before the von-Frey test. The selective CB1 receptor antagonist AM251, CB2 receptor antagonist AM630, cGMP inhibitor ODQ (32 ?g) or KATP blocker glibenclamide (80 ?g) was administrated 30 minutes before Dypirone, 4-MAA or 4-AA. The antisense-ODN against CB1 receptor expression (30 ?g) was intrathecally administrated once a day during four consecutive days. PGE2-induced mechanical hyperalgesia was inhibited by dypirone, 4-MAA, and 4-AA in a dose-response manner. AM251 or ODN anti-sense against neuronal CB1 receptor, but not AM630, reversed the antihyperalgesic effect mediated by 4-AA, but not by dypirone or 4-MAA. On the other hand, the anti-hyperalgesic effect of dypirone or 4-MAA was reversed by Glibenclamide or ODQ. These results suggest that the activation of neuronal CB1, but not CB2 receptor, in the peripheral tissue is involved in the anti-hyperalgesic effect of 4-aminoantipyrine. In addition, 4- methylaminontipyrine mediates anti-hyperalgesic effect by the cGMP activation and the KATP opening / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular