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Determinación de anticuerpos contra Neospora caninum en búfalos de agua (Bubalus bubalis) en el distrito de Jenaro Herrera, Loreto

Jara Vila, Javier Alfonso January 2010 (has links)
La neosporosis es una parasitosis de importancia en el sector ganadero al producir problemas reproductivos como causante de abortos y mortalidad neonatal. El objetivo del presente trabajo fue determinar la presencia de anticuerpos contra Neospora caninum en búfalos de agua procedentes de cinco centros de crianza ubicados en el distrito Jenaro Herrera, perteneciente al departamento de Loreto en el año 2008. Se evaluaron 83 muestras de suero, obtenidas de búfalos hembra en etapa productiva con propósito lechero, que fueron evaluadas utilizando dos pruebas diagnósticas: ELISA indirecto e Inmunofluorescencia indirecta (IFI). No se halló (0/83) evidencia de anticuerpos contra N. caninum a las diluciones 1:25 y 1:100 utilizando ELISA indirecto; así como a la dilución 1:100 con IFI. Estos resultados sugieren una baja o nula exposición de los búfalos de agua al parásito en la zona estudiada. El presente trabajo es el primer registro de evidencia serológica contra la infección de Neospora caninum en los búfalos de agua del Perú, siendo necesario realizar más estudios que confirmen estos hallazgos. Palabras claves: Neospora caninum, búfalos de agua, anticuerpos, ELISA, IFI. / The neosporosis is a parasitosis that has importance in the diary cattle. The infection has been associated with reproductive problems as abortions and mortality neonatal. The aim of this study was determine the presence of antibodies against Neospora caninum in water buffaloes coming from five breeders located in Jenaro Herrera district, Loreto, 2008. 83 sera samples, obtained from female dairy buffaloes, were tested by using indirect ELISA and indirect fluorescent antibody test (IFAT). None of sera (0/83) presented antibodies against N. caninum to the dilution 1:25 and 1:100 using indirect ELISA; neither to the dilution 1:100 by IFAT. These results suggest a low exposition of water buffaloes to parasites in the studied area. The present work is the first to report serological evidence of Neospora caninum infection in peruvian water buffaloes, being necessary to carry out more studies that confirm these results. Keywords: Neospora caninum, water buffaloes, antibodies, ELISA, IFI.
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Prevalencia de leptospirosis bovina en dos localidades de Puno en época seca y determinación de factores de riesgo

Arias Chauca, María Fiorella January 2008 (has links)
La leptospirosis es una enfermedad causada por una espiroqueta del género Leptospira. Es una zoonosis de distribución mundial que tiene gran impacto económico por importantes pérdidas que ocasiona en la ganadería sobretodo en la reproducción y la producción láctea, ya que tiene potencial abortivo y mortalidad neonatal, además de disminuir o anular la producción de leche. El objetivo del presente estudio fue determinar la prevalencia de leptospirosis en bovinos en dos predios del departamento de Puno la Estación Experimental de ILLPA- INIA y la Ganadería Cárdenas en la localidad de Mañazo, y su asociación con la época del año, la edad y sexo. Se evaluaron 116 muestras de suero en la época de seca, se recolectó muestra de sangre de la totalidad de hembras y machos de ambos predios, evaluándose mediante la Prueba de Aglutinación Microscópica (MAT) para la detección de anticuerpos, empleándose una batería de cuatro serovares (canicola, icterohaemorrhagiae, pomona y hardjo). Se obtuvo una prevalencia total de 2.6% del cual correspondió un 1.3% a animales de ILLPA- INIA y de 5.3% los animales de Mañazo. De los animales analizados se encontró que el serovar icterohaemorrhagiae fue el más prevalerte con un nivel de anticuerpos de 1:200. Estos resultados sugieren una prevalencia baja de Leptospira sp en la época de seca en la zona estudiada. / Leptospirosis is a disease caused by a spirochet of the genus Leptospira. Zoonosis is a world-wide distributed. It is zoonosis that has a huge economic impact because of the important loss that causes to stockbreeding, especially in terms of reproduction and milk production of the animals, given that it has an abortive potential, causes neonatal mortality, and decreases or annuls the production of milk. The goal of the present work was to estimate the prevalence of leptospirosis in bovines in two haciendas in the Department of Puno, the ILLPA-INIA Experimental Station and Livestock farming Cardenas, in the locality of Mañazo, and its association with the season of the year, age, and gender. One hundred and sixteen samples of serum were evaluated in the dry season; blood was collected from all the males and females from both haciendas and evaluated by the Microscopic Agglutination Test (MAT) for the detection of antibodies, using a set of four serovars (canicola, icterohaemorrhagiae, pomona, and hardjo). A total prevalence of 2.6% was obtained; 3.7% corresponded to animals of ILLPA-INIA and 15.4% to the animals of Mañazo. From the analyzed animals it was found that the serovar icterohaemorrhagiae was the most prevalent with a level of antibodies of 1:200. These results suggest a low prevalence of Leptospira sp. in the dry season in the area of study.
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Determinación de la eficacia del uso del oxfendazol, praziquantel y albendazol para el tratamiento de la hidatidosis en ovinos naturalmente infectados

Llamosas Chu, Mónica Susana January 2009 (has links)
El presente estudio tiene como objetivo evaluar la eficacia del oxfendazol (OXF), praziquantel (PZQ) y albendazol (ALB) contra quistes hidatídicos en una muestra de ovinos naturalmente infectados. Se usaron 30 animales por grupo, haciendo un total de 150 animales distribuidos en 5 grupos. Los grupos se trataron de la siguiente manera: Grupo 1, Control, sin dosificación; Grupo 2, OXF 60mg/kg, c/ semana por 4 veces; Grupo 3, OXF 100mg/kg, c/ 2 semanas por 2 veces; Grupo 4, ALB 30mg/kg + PZQ 40mg/kg, c/ sem por 6 veces (administración de los fármacos por separado) y Grupo 5, OXF 30mg/kg + PZQ 40mg/kg, c/ 2 sems por 3 veces (administración de los fármacos por separado). Todos los animales se mantuvieron bajo las mismas condiciones de manejo. Se evaluaron las variables de: positividad a la necropsia, ubicación por órgano (hígado y pulmón), tamaño (longitud en mm), fertilidad y viabilidad de los quistes; cantidad de quistes por órgano y animal. Los resultados mostraron que la fertilidad de los quistes a nivel de hígado tiene asociación estadística de acuerdo al tratamiento utilizado. De acuerdo a la longitud de los quistes se encontró diferencia estadística significativa entre el grupo control y los grupos de tratamiento (p menor 0.05) al igual que la viabilidad de los protoescólex muestra gran diferencia estadística entre el grupo control y los grupos de tratamiento (p menor 0.01) para ambos órganos. Es decir, se obtuvo en animales tratados, menor cantidad de quistes fértiles, quistes de menor tamaño y quistes con menor viabilidad, frente a los quistes de animales sin tratamiento. Se concluye que la combinación de fármacos (ALB+PZQ y OXF+PZQ) es más efectiva frente al uso de fármacos solos (OXF) en el presente estudio, en ovinos infectados naturalmente con el metacéstodo de E. granulosus (Quiste hidatídico). / The aim of this study was to evaluate the efficacy of oxfendazole (OXF), praziquantel (PZQ) and albendazole (ALB) against hydatid cysts in a sample of naturally infected ovines. 150 animals were divided into 5 groups of 30 each. The groups were treated as follows; Group 1: untreated controls. Group 2: 60 mg/kg OXF once a week during 4 weeks. Group 3: 100mg/kg OXF once each 2 weeks, during 4 weeks. Group 4: ALB 30mg/kg + PZQ 40mg/kg, once a week, during 6 weeks. Group 5: OXF 30mg/kg + PZQ 40mg/kg, once each 2 weeks, during 6 weeks. All animals were kept under the same management conditions. The variables positives to necropsy, cyst location by organ (lungs or liver), size, fertility and viability of the cysts as well as number of cysts per organ and per animal were evaluated. The results showed that the fertility of the liver cysts have statistic association with the treatment. About the size of the cysts, we found statistic significance between the untreated group and the treatments groups (p less than 0.05) and occurs the same with the protoescoleces viability which showed a big statistic difference between untreated group and the treatments groups in both organs. It means that the treated animales showed less fertile cysts, less size and less viability than the untreated animals cysts. It is concluded that the combination of drugs (ALB+PZQ and OXF+PZQ) is more effective comparing with a one drug (OXF) response used in this study, in sheep naturally infected with E. granulosus hydatid cysts.
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Concordancia entre las pruebas de hemaglutinación indirecta e inmunofluoerescencia indirecta para determinar la prevalencia de Toxoplasma gondii en ovinos

Huerta Ortega, Sandra Inés January 2005 (has links)
La toxoplasmosis es una zoonosis de amplia distribución mundial, causante de problemas de abortos y reabsorción embrionaria. En las explotaciones ovinas es importante desde el punto de vista económico, por las pérdidas que conlleva, tiene manifestaciones clínicas diversas e inespecíficas, por lo tanto es difícil poder precisar el diagnóstico con certeza, el diagnóstico debe contar con el apoyo de las pruebas inmunológicas adecuadas, actualmente existen dos pruebas la hemaglutinación indirecta (HAI) y la inmunofluorescencia indirecta (IFI) utilizadas con frecuencia. Es por esto que el objetivo del presente estudio fue medir el grado de concordancia entre las técnicas de HAI e IFI para la detección del Toxoplasma gondii en ovinos. Se colectaron 310 sueros de ovinos hembras de diferentes edades del Fundo Santa María, Distrito de Nuñoa, Provincia de Melgar, Departamento de Puno, los cuales fueron almacenados a -20° C para su posterior análisis serológico. La muestras fueron analizadas en el Laboratorio de Parasitología de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Al evaluar el grado de concordancia entre ambas tecnicas se halló un valor de Kappa (K) igual a 24% indicando que el grado de asociación entre ambas tecnicas fue del tipo regular y mediante la prueba de Mc Nemar se encontró que existen diferencias significativas entre ambas, no siendo reemplazable una por la otra. Adicionalmente se halló una seroprevalencia para Toxoplasma gondii de 50.3 ± 5.56 % por el método de HAI y 88.1 ± 3.6 % por el método de IFI. La frecuencia por edades en animales menores de 1 año, mayores de 1 año y menores de 2 años, mayores de 2 años y menores de 3 años y mayores de 3 años fue de 23.2 %, 33.3 %, 52.1 % y 58.7 % respectivamente por el método de HAI y de 72.01 %, 90,0 %, 91.2 % y 90.5 % por el método de IFI. Estos resultados confirmarían que la concordancia entre las pruebas de HAI e IFI en el diagnóstico de la toxoplasmosis ovina fue de tipo regular no siendo reemplazables entre ellas. / The toxoplasmosis is a zoonosis of worldwide distribution, which causes problems as abortions and embryonic reabsorption. In the sheep developments, it is very important from the economic point of view for the losses that it bears. The Toxoplasma gondii infection has clinical diverse and unspecific declarations, therefore it is hard to certainly precise the diagnosis, that's why the diagnosis must count on the support of the suitable immunological tests, at the moment two test exist indirect hemagglutination (HAI) and indirect inmunofluorescencia (IFI) wich are used frequently. The present work takes as a target measuring the grade of congruity between the skills of immunofluorescence innuendo and hemagglutination innuendo for the detection of the Toxoplasma gondii in sheep. For the study there were collected 310 wheys of sheep females of different ages from the farm Santa Maria, District of Nuñoa, County of Melgar, and Department of Puno. After collected the wheys were stored to 20° C for his later serologic analysis. The samples were analyzed in the laboratory of parasitology of the faculty of veterinary medicine of the University of San Marcos. The results were submitted to statistical analysis, being a grade of congruity between these two tests determined by the value of Kappa (K) equal to 0.24 what corresponds to a grade of affiliation of regular type and by means of the test of Mc Nemar it was found that significant differences between both exist not being replaceable one for other one, also the study found a seroprevalence for Toxoplasma gondii of 50.3±5.6% for the method of HAI and 88.1±3.6% for the method of IFI. The seroprevalence for ages which was categorized for practical ends in animals of until one year, up to two, up to three and bigger than 3, it was of 23.3, 33.3, 52.1 and 58.7 respectively for the method of HAI and of 72.1, 90,1, 91.7 and 90.5 for the method of IFI. These results confirm that the congruity between the tests of HAI and IFI in the diagnosis of the sheep toxoplasmosis is of regular type and both tests are not replaceable.
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Criopreservación de semen ovino empleando diferentes dilutores y combinaciones de agentes crioprotectores permeantes y no permeantes

Sandoval Monzón, Rocío Silvia January 2005 (has links)
El objetivo del estudio fue evaluar el efecto de cuatro combinaciones de dos agentes crioprotectores permeantes más dos no permeantes sobre la calidad del semen ovino post-descongelamiento. Para esto, primero (Experimento 1) se seleccionó, entre tres dilutores (A, B y C), el más adecuado para ser usado en la segunda parte (Experimento 2), en la cual se evaluaron las siguientes combinaciones de agentes crioprotectores permeantes y no permeantes: 1)Glicerol - Trehalosa, 2)Glicerol - Sacarosa, 3)Etilenglicol - Trehalosa y 4)Etilenglicol - Sacarosa sobre la calidad del semen ovino post-descongelamiento. Para tal efecto, se realizaron 6 repeticiones para el Experimento 1 y 8 repeticiones para el Experimento 2. Cada repetición constó de 4 eyaculados cada una. En el experimento 1 se encontró que el Dilutor A mantenía mejor la motilidad progresiva y viabilidad e integridad acrosomal post-descongelamiento (69% y 63%) en comparación con el Dilutor B (37% y 35%) y el Dilutor C (23% y 23%). Por lo cual, el Dilutor A fue empleado en el experimento 2. En el experimento 2 se encontró que la motilidad progresiva, la viabilidad e integridad acrosomal, la termoresistencia y la integridad de membrana plasmática post-descongelamiento fue mejor en los grupos con glicerol-sacarosa (64%; 56%; 40% y 63%) y glicerol-trehalosa (64%; 58%; 38% y 60%) en comparación con los grupos con etilenglicol-sacarosa (48%; 42%; 25% y 37%) y etilenglicol-trehalosa (44%; 38%; 27% y 40%). Lo cual demuestra que el glicerol es un mejor crioprotector permeante en comparacion con el etilenglicol. Sin embargo, no existe diferencia en el uso de sacarosa o trehalosa. Se concluye que un dilutor con las características del dilutor A, utilizando glicerol más trehalosa o sacarosa constituye una buena alternativa para la criopreservación de semen ovino. / The objective of the study was to evaluate the effect of four combinations of two permeant and two non permeant cryoprotectant agents on the quality of post thaw ram semen. In Experiment 1, three extender were evaluated (A, B, and C) in order to have th ebetter one for the next step. In Experiment 2, different combinations of cryoprotectant agents were evaluated as follow: 1) Glycerol–Trehalose, 2) Glycerol–Sucrose, 3) Ethyleneglycol-Trehalose, and 4) Ethyleneglycol–Sucrose. In this way, 6 assays for Experiment 1 and 8 assays for the Experiment 2 were carry out. In each assay, 4 ejaculated were mixed to work as an original sample. Percentages of motility, viability and acrosomal integrity in extender A were higher (69% and 63%) than extender B (37% and 35%) and extender C (23% and 23%). Therefore, extender A was used for experiment 2. In the experiment 2, motility, viability and acrosomal integrity, thermoresistance, and plasmatic membrane integrity were higher in groups Glycerol-sucrose (64%; 56%; 40%, and 63%) and Glycerol-trehalose (64%; 58%; 38%, and 60%) in comparison with groups Ethileneglycol-sucrose (48%; 42%; 25% and 37%) and Ethileneglycol-trehalose (44%; 38%; 27% and 40%). However, there is not significative differences between sucrose or trehalose. In conclusion, an extender with characteristics of extender A, it means, using glycerol plus trehalose or sucrose constitute a good alternative for cryopreservation of ram semen.
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Optimum ranch organization in Bagé, Rio Grande Do Sul, Brazil

Richter, Humberto Vendelino, January 1970 (has links)
Thesis (Ph. D.)--University of Wisconsin--Madison, 1978. / Typescript. Vita. eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references (leaves 172-173).
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Detección del gen PrP de Scrapie en ovinos de raza Junín

Rivera Jayrulina, Kamilo Luisovich January 2013 (has links)
Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Manifiesta que en los ovinos se ha establecido la influencia del gen Prion (PRNP) en la capacidad de resistir o padecer la enfermedad de scrapie. Desde hace varios años los Estados Unidos y la Unión Europea, entre otros países del mundo, promueven programas de erradicación de la enfermedad siendo un requisito realizar el genotipado de los animales para su posterior selección. En el Perú se tiene 9’523,200 (INEI) de ovinos entre carneros y corderos, y menos del 4.1% incluye a la raza Junín (INEI). Hasta la fecha se desconocía los diferentes genotipos del gen Prion en el ovino Junín, el estudio permitió validar la técnica y determinar los genotipos del gen Prión en una muestra de 56 ovinos de raza Junín provenientes de una Unidad de Producción Privada ubicada en la región central del departamento de Junín. Se obtuvieron 4 de los 5 genotipos reportados: el ARR (48,21%), ARQ (35,71%), AHQ (10,71%) y VRQ (5,36%). En relación a los genotipos, se encontraron 7 de los 15 reportados para el gen Prion: ARR/ARR (17.86%); ARR/AHQ (10.71%); ARR/ARQ (42.86%); ARQ/AHQ (10.71%); ARQ/ARQ (7.14%); ARR/VRQ (7.14%) y ARQ/VRQ (3.57%). De acuerdo al resultado obtenido se tiene un porcentaje de 82.14 % de animales con genotipos resistente y un 17.85 % de genotipos susceptibles. Aunque estos valores solo corresponde a un grupo de muestras (N=56), puede servir de punto de partida para futuras investigaciones. El conocer el genotipo de los animales permitiría establecer un programa de prevención seleccionando animales resistentes a la enfermedad. / Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (Perú) / Universidad Nacional Mayor de San Marcos (Lima). Vicerrectorado de Investigación y Posgrado / Universidad Nacional Mayor de San Marcos (Lima). Medicina Veterinaria / Tesis
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Evaluación del bienestar animal en sistemas de producción de bovinos de leche intensivos de la zona central de Chile utilizando el protocolo Welfare Quality®

Castro Castro, María José January 2017 (has links)
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El objetivo del presente estudio fue estimar el bienestar animal en rebaños lecheros de la zona central de Chile utilizando el sistema de evaluación diseñado por Welfare Quality®. La información fue recabada de acuerdo a las indicaciones del protocolo para lecherías, durante los años 2009 y 2010. Para investigar si el tipo de alojamiento y el tamaño del rebaño afectan el bienestar, se seleccionó un total de 19 lecherías con diferentes sistemas de confinamiento (cubículos y californiano) y diferentes tamaños de rebaño (pequeño, mediano y grande) Los resultados de este estudio muestran que el Bienestar Global no es significativamente diferente entre los dos sistemas de confinamiento, ni entre los tres tamaños de rebaño evaluado. Sin embargo, este protocolo permite describir diferencias en los criterios de bienestar, donde "Ausencia de Hambre Prolongada", "Expresión de Comportamientos Sociales" y "Buena Relación Humano-Animal" mostraron diferencias significativas (p ≤,05) por el sistema de alojamiento. El criterio “Expresión de Comportamientos Sociales” y “Buena Relación Humano- Animal” fueron mayores en el tipo de confinamiento en cubículos; Y “Ausencia de Hambre Prolongada” fue mayor en el sistema de alojamiento californiano. Este estudio también evidenció parámetros de comportamiento deficiente en ambos sistemas de vivienda, con valores que el protocolo califica como “Aceptables” y “No Clasifica”. / This study was to measured animal welfare parameters in the central region of Chile using the assessment protocol designed by Welfare Quality®. Data was collected according to the Welfare Quality® dairy farm protocol, between the years 2009 and 2010. To investigate if housing and herd size affect welfare, a total of 19 confined dairies with different housing system (9 free-stall and 10 open/dry lots) and herd size (small, medium and big) were selected. Results of this study show that global welfare is not significantly different between the two confinement systems and among herd sized assessed. However, this protocol allows to describe differences in welfare criteria, where “absence of prolonged hunger”, “expression of social behaviors” and “good human-animal relationship” showed a tendency to differ (p≤0,05) by housing system. “Expression of social behaviors” and “good human-animal relationship” were greater in the free-stall housing type; and “absence of prolonged hunger” was greater in the open/dry lot housing type. This study also evidenced poor behavior parameters in both housing systems, with values that the protocol Welfare Quality® qualifies as “acceptable” and “not classified”.
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Detección y caracterización de resistencia a antimicrobianos en cepas de Salmonella enterica de muestras de heces de bobinos de comunas rurales de la Región Metropolitana de Chile

Agüero Aguirre, Belén Monserrat January 2018 (has links)
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Salmonella enterica es rutinariamente encontrada en el tracto gastrointestinal de una amplia variedad de animales y generalmente no causa enfermedad en ellos. Sin embargo, cuando causa enfermedad, las manifestaciones comunes de salmonelosis en el ganado incluyen diarrea, neumonía, abortos y muerte. En humanos, normalmente se presenta como gastroenteritis autolimitada; no obstante, en niños, pacientes inmunodeprimidos o ancianos, puede llevar a la muerte, si no es tratada apropiadamente. Esta investigación busca detectar y caracterizar la resistencia antimicrobiana de S. enterica en muestras de heces de bovinos de comunas rurales de la Región Metropolitana, Chile. Para ello se obtuvieron 670 muestras de heces ambientales de bovinos de lechería, en un total de 14 muestreos en 4 localidades: María Pinto, Peñaflor, Melipilla e Isla Maipo. Las muestras fueron procesadas en el Laboratorio de Enfermedades Infecciosas, de la Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias de la Universidad de Chile, donde se realizó el aislamiento y confirmación por PCR, y posteriormente se analizaron en cuanto a su resistencia a antimicrobianos. Se registró un 6,7% de detección, de las cuales un 54% correspondió a S. enterica ser. Livingstone, 39% a S. enterica ser. Typhimurium y 7% a S. enterica ser. Infantis; con una detección de 6,7% en Isla Maipo, 9,2% en Peñaflor y 0% para Melipilla y María Pinto. Los mayores índices de resistencia antimicrobiana se presentaron contra ciprofloxacino, tetraciclina y cefotaxima, expresados en 8 perfiles distintos. Se encontró asociación estadísticamente significativa entre las variables lugar de detección, perfiles de resistencia y serotipos detectados. Si bien los valores de resistencia y multiresistencia a antimicrobianos encontrados no son excepcionalmente altos, es importante destacar que esto no debe ser motivo de disminución de la atención a esta bacteria, debido a los índices y alertas internacionales / Salmonella enterica is routinely found in the gastrointestinal tract of a wide variety of animals and generally does not cause disease. However, when it causes, common manifestations of salmonellosis in cattle include diarrhea, pneumonia, abortions and death. In humans, it usually presents as self-limited gastroenteritis; but, in children, immunosuppressed or elderly patients, it can lead to death, it can lead to death, if not treated properly. This research seeks to detect and characterize the antimicrobial resistance of S. enterica in stool samples of bovines from rural communes of the Metropolitan Region, Chile. For this, 670 samples of environmental feces of dairy cattle were obtained, in a total of 14 samplings from dairies located in 4 localities: María Pinto, Peñaflor, Melipilla and Isla Maipo. The samples were processed in the Laboratory of Infectious Diseases, in the Faculty of Veterinary and Animal Sciences of the University of Chile, where the isolation and confirmation was carried out by PCR, and later they were analyzed in terms of their antimicrobial resistance. There was a 6.7% detection, of which 54% corresponded to S. enterica ser. Livingstone, 39% to S. enterica ser. Typhimurium and 7% to S. enterica ser. Infantis; obtaining a detection of 6.7% in Isla Maipo, 9.2% in Peñaflor and 0% for Melipilla and María Pinto. The highest resistance indices were presented to ciprofloxacin, tetracycline and cefotaxime, expressed in 8 different profiles. A statistically significant association was found between the variables detection site, resistance profiles, and serotypes detected. Although the values of resistance and multiresistance to antimicrobials found are not exceptionally high, it is important to emphasize that this should not be the reason for diminishing attention to this bacterium, in response to international indicators and alerts / Proyecto FONIS SA15110094
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Determinación del potencial de migración y estimulación de angiogénesis in vitro de células madre mesenquimáticas derivadas de médula ósea y tejido adiposo fetal bovino

Jervis Secaira, Miguel Eduardo January 2017 (has links)
Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias. / Las células madres mesenquimáticas (MSC) se han caracterizado inicialmente por su potencial de autorenovación y diferenciación in vitro hacia linajes celulares mesodérmicos. Sin embargo; el potencial terapéutico de las MSC se basa principalmente en sus capacidades de migración y angiogénesis importantes para la regeneración tisular. El objetivo del presente estudio fue determinar los potenciales de migración y angiogénesis de las MSC derivadas de médula ósea (MSC-MO) y de tejido adiposo (MSC-TA) fetales bovinas. El ensayo de migración scratch se utilizó para determinar la capacidad migratoria de las MSC, utilizando fibroblastos (FB) fetales como controles biológicos. Para este ensayo se cultivaron 44 x 103 células/cm2 hasta alcanzar 80% de confluencia. Luego de 24 horas, se realizó el scratch en la monocapa de cada línea celular y el área de migración fue cuantificada en el tiempo 0 y luego de 24 horas mediante el software ImageJ. El análisis de migración transwell, se utilizó para determinar el potencial de migración celular en respuesta al quimiotáctico factor derivado de células estromales-1 (SDF-1). Para este análisis se cultivaron 25x103 células/mL por 24 horas, en respuesta a SDF-1 ulilizando 5% suero fetal bovino (SFB) y medio DMEM como controles. Las células que migraron hacia el lado inferior de la membrana transwell fueron observadas y cuantificadas mediante el software ImageJ. Para el análisis del potencial angiogénico de MSC, se realizó el ensayo de formación de túbulos. Células endoteliales de aorta bovina fetal fueron aisladas y resuspendidas en medios condicionados de MSC-MO, MSC-TA y FB. Luego de 6 horas de incubación a 38°C en 5% CO2 se observó y cuantificó la formación de estructuras tubulares utilizando el software ImageJ. La expresión de genes de migración, SDF-1, su receptor CXCR4 y la quimiocina secretada y expresada por linfocitos T normales regulada por activación (RANTES) y de genes de angiogénesis, factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y angiopoyetina 1 (ANGPT1) fue cuantificada mediante PCR cuantitativo (Q-PCR). Los datos obtenidos fueron analizados estadísticamente por ANOVA de una vía y para las diferencias entre los promedios se utilizó el post test de tuckey, utilizando el software InfoStat. Mediante ensayo scratch se determinó un mayor (p<0,05) porcentaje de migración in vitro en cultivos de MSC-MO comparado con FB. Sin embargo; los porcentajes de migración no fueron distintos (p>0,05) entre MSC-MO y MSC-TA. El ensayo transwell permitió determinar un mayor (p<0,05) número de células migrantes en cultivos tratados con DMEM suplementado con 5% de SFB. Sin embargo; no se detectaron diferencias significativas entre líneas celulares. Se determinó que los niveles de mRNA de SDF-1 fueron mayores (p<0,05) en MSC-TA comparado con MSC-MO y FB. Los niveles de mRNA de RANTES fueron mayores (p<0,05) en MSC-TA comparado con FB. Sin embargo; los niveles de mRNA de CXCR4 no fueron distintos (p>0,05) entre las líneas celulares en estudio. El medio condicionado concentrado de MSC-TA indujo mayor (p<0,05) formación de túbulos, comparado con MSC-MO, FB y sus controles DMEM con 5% de SFB y DMEM. Además, se cuantificó una mayor (P<0,05) expresión de VEGF en MSC-TA comparado con las otras líneas celulares. En comparación, la expresion de ANGPT1 fue mayor (p<0,05) en MSC-MO y FB comparado con MSC-TA. En conclusión, el potencial de migración entre MSC-MO y MSC-TA es similar, lo cual puede estar determinado por niveles de expresión similares del receptor CXCR4. A su vez, una mayor expresión de VEGF en MSC-TA puede determinar que estas células presenten una mayor capacidad angiogénica comparado con MSC-MO. / Mesenchymal stem cells (MSCs) were initially characterized by their potential for self-renewal and in vitro differentiation into mesodermal cell lines. However, the therapeutic potential of MSCs is primarily based on their migration and angiogenic capacities, which are important for tissue regeneration. The objective of the present study was to determine the migration and angiogenic potentials of MSCs derived from bone marrow (MSC-MO) and adipose fetal bovine tissue (MSC-TA). The scratch migration assay was used to determine the migratory capacity of MSC, using fetal fibroblasts (FB) as biological controls. For this, 44 x 103 cells/cm2 were cultured until 80% confluence. After 24 hours, the scratch was performed in the monolayer of each cell line culture and the migration area was quantified at time 0 and after 24 hours using ImageJ software. The transwell migration analysis was used to determine cell migration capacity in response to the chemokine stromal differentiation factor-1 (SDF-1). For this assay, 25x103 cells/mL were grown for 24 hours in response to SDF-1, using as SFB 5% and DMEM as controls. Cells that migrated to the underside of the transwell membrane were observed and quantified using the ImageJ software. In order to determine the angiogenic potential of MSC, the tubule formation test was performed. Endothelial cells of bovine aorta were isolated and resuspended in conditioned media of each cell line. After 6 hours of incubation, the number of tubular structures was quantified and analyzed using ImageJ software. The relative expression levels of migration genes SDF-1, its receptor CXR4, regulated upon activation normal T-cell expressed and secreted (RANTES) and angiogenic genes vascular endothelial growth factor (VEGF) and angiopoietin (ANGPT1) were analyzed using quantitative-PCR (Q-PCR). The data obtained were statistically analyzed by one-way ANOVA and the tuckey post test was used to determine differences between means, using InfoStat software.The scratch test allowed to determine a higher (p<0.05) percentage of migration in MSC-MO cultures compared to FB. However, migration rates were not different (p>0.05) between MSC-MO and MSC-TA. The highest (p <0.05) number of migrant cells in the transwell test was detected in cultures treated with DMEM supplemented with 5% FBS. However, no significant differences were detected between cell lines. SDF-1 mRNA levels were higher (p <0.05) in MSC-TA compared to MSC-MO and FB. Similarly, RANTES mRNA levels were higher (p <0.05) in MSC -TA compared to FB. CXCR4 mRNA levels were not different (p> 0.05) between cell lines. Concentrated conditioned (CC) media of MSC-TA induced greater (p <0.05) tubule formation, compared to CC of MSC-MO, FB and its controls. Moreover, the highest (P <0.05) expression of VEGF was observed in MSC-TA, compared to the other cell lines. In the case of the expression of ANGPT1 the expression was higher in MSC-MO and FB compared to MSC-TA. In conclusión, a similar migration potential between MSC-MO and MSC-TA may be associated to similar expression of the CXCR4 receptor. Moreover, higher expression of VEGF in MSC-TA may explain the greater angiogenic capacity of these cells compared to MSC-MO. / Financiamiento: Proyecto Fondef ID 15I10129.

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