Orientador: Laura Sterian Ward / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T20:51:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bufalo_NatassiaElena_M.pdf: 3282180 bytes, checksum: 0aa23171bc5ca7c18ed18eb22b3a23d2 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Tanto a doença de Graves como o câncer da tiróide são doenças de etiologia multifatorial e envolvem uma interação entre meio ambiente e fatores genéticos de predisposição. O ábito e fumar é um fator de risco reconhecido para o desenvolvimento da doença de Graves, particularmente para a oftalmopatia de Graves. Ao contrário, estudos epidemiológicos têm freqüentemente demonstrado a redução no risco ao carcinoma diferenciado da tiróide entre tabagistas. A herança de polimorfismos de genes relacionados com a metabolização e com a detoxificação de xenobióticos, assim como a herança de genes relacionados com a vida e a morte celular, desempenham um importante papel na suscetibilidade a doenças. Os objetivos foram determinar a influência dos polimorfismos dos genes CYP1A1, GSTM1, GSTT1, GSTP1 e 72TP53 no risco para a doença de Graves e o papel do gene CYP1A1 na tumorigênese tiroidiana. Para avaliar o papel destes genes na doença de Graves foi estudado um total de 400 pacientes com doença de Graves, comparados com 574 indivíduos-controle. Para analisar o papel destes genes no câncer da tiróide foi estudado 248 pacientes com nódulos tiroidianos, comparados com 277 indivíduos-controle, todos pareados para sexo, idade e etnia. As análises genotípicas foram feitas em DNA extraído de sangue periférico, através de amplificação por PCR, seguido de restrição enzimática para os genes CYP1A1, GSTP1 e 72TP53 e PCR-duplex para os genes GSTM1 e GSTT1. Não se encontrou relação entre os genótipos de GSTM1 e GSTT1 e a suscetibilidade à doença de Graves. Contudo, as variantes de GSTP1 (p<0.0001), CYP1A1 m1 (p<0.0033) e Pro/ProTP53 (p<0.0035) foram mais freqüentes em pacientes com doença de Graves do que nos controles. A análise de regressão logística multivariada corrigida parasexo, idade e etnia indicou que o hábito de fumar e a herança das variantes dos genes GSTP1, CYP1A1 e Pro/ProTP53 são importantes fatores de risco para a doença de Graves. Em relação aos nódulos tiroidianos, o genótipo selvagem do gene CYP1A1 foi mais freqüente entre pacientes com carcinoma papilífero (74.26%) do que na população-controle (62.45%) (p= 0.0147), diminuindo o risco para o desenvolvimento deste câncer (OR=0.564; 95% IC= 0.357 - 0.894). A análise de regressão logística multivariada corrigida para sexo, idade e etnia mostrou uma correlação inversa entre o hábito de fumar e a herança do gene CYP1A1 e a suscetibilidade ao carcinoma papilífero. Conclui-se que os polimorfismos de GSTP1, CYP1A1 e TP53 podem estar associados à suscetibilidade relacionada com o tabagismo para a doença de Graves e que o genótipo de CYP1A1 pode estar associado à redução no risco para o carcinoma papilífero entre fumantes / Abstract: Graves's disease and differentiated thyroid cancer are multifactorial diseases with environmental and genetic interactions. Cigarette smoking is a well-recognized risk factor for Graves¿ disease and, particularly, for Graves¿ ophthalmopathy. Conversely, epidemiologic studies have consistently reported a reduced risk of differentiated thyroid cancer in tobacco consumers. Inheritance of germline polymorphisms genes related with metabolizing and detoxification of xenobioticos, besides genes involved in major DNA repair/apoptosis pathways, might have an important role in the susceptibility to these diseases. To assess the influence of the GST, CYP and TP53 gene polymorphisms in the risk of Graves' disease and the CYP1A1 role in thyroid tumorigenesis, we used a PCR strategy to genotype for GSTT1, GSTM1, GSTP1, CYP1A1 and codon 72 of TP53 a group of 400 Graves¿ disease patients compared to 574 control individuals with similar environmental exposure features and 248 patients with thyroid nodules and 277 controls with similar ethnic backgrounds. DNA was extracted from a blood sample and submitted to PCR-RFLP for CYP1A1, GSTP1 and 72TP53 genes and PCR-duplex GSTM1 and GSTT1 genes assays. GSTM1 and GSTT1 genotypes were equally distributed in Graves' disease and controls. However, GSTP1 variants (p<0.0001), CYP1A1 variants (p<0.0033), and Pro/ProTP53 (p<0.0035) appeared more frequently in Graves¿ disease than in controls. A multivariate analysis indicated that cigarette smoking and the inheritance of GSTP1 variants, CYP1A1 variants and Pro/ProTP53 were important risk factors of risk for Graves¿ disease. Among the thyroid nodules, the wild-type CYP1A1 m1 genotype was more frequent in papillary carcinomas patients (74.26%) than in the control population (62.45%) (p= 0.0147) indicating that the variants of these genes reduce the risk for this cancer (OR=0.564; 95% IC= 0.357 to 0.894). Multiple logistic regression analysis showed an inverse correlation between cigarette smoking and CYP1A1 germline inheritance and the susceptibility to papillary carcinomas. We concluded that GSTP1, CYP1A1 and TP53 germline polymorphisms may be associated with smoking-related Graves¿ disease susceptibility and CYP1A1 genotype might be associated to the reported reduced risk to papillary carcinomas among smokers / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Ciências Básicas

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 karita antunes costa.pdf: 2247292 bytes, checksum: e3c53812f8fcfba9aaaf69bdcbf978e3 (MD5) Previous issue date: 2010-03-30 / The p53 gene encodes a protein which has various functions such as monitoring of the cell cycle, role in repair mechanisms and apoptosis. New functions performed by this protein have been observed and studied as acting in the cascade of skin pigmentation by acting as transcription factor for genes important in this process as POMC (pro-opiomelanocortin) and MC1R (melanocortin receptor 1). Among the genetic polymorphisms, the codon 72 p53 gene is the most commonly studied and this variant has been associated with increased risk for various cancers, including skin. However, the association between this and other types of cancers has generated controversial results. The polymorphism occurs in a substitution G / C codon 72 p53 gene resulting in a change of amino acid sequence (CGC to CCC for arginine and proline). This polymorphism occurs in areas rich in proline generating morphophysiological changes as well as a difference in electrophoretic mobility of the protein. The aim of this study was to establish a possible association between the codon 72 polymorphism of p53 gene with the characteristics of pigmentation such as skin color, hair, eye and skin response after exposure to sunlight (reddening or bronze). The 96 healthy volunteers were recruited randomly and information on skin color, ability to tan and other characteristics of pigmentation were collected through a standardized questionnaire. Genomic DNA was extracted from venous blood and genotyping was performed by polymerase chain reaction (PCR). The polymorphism was investigated by photo documentation after agarose gel electrophoresis. Samples that generated doubts were confirmed by digestion with sitespecific action of the restriction enzyme BstUI. Allele frequencies of 96 volunteers to p53Arg/72 and p53Pro/72 were 67.70% and 32.30% respectively. Genotype frequencies for Arg / Arg, Arg / Pro and Pro / Pro were 50.00% 35.40% 14.60% respectively. We did not detect a significant association between reddening or tanning after sun exposure with the polymorphism (p = 0.678), on the other hand we observed an association between the genotype Pro / Pro and blue eyes / green (p = 0.01) among showing redness of the skin, demonstrating a disadvantage in relation to the sun when there is occurrence of this specific phenotype (eye color) combined with the genotype Pro / Pro. / O gene p53 codifica uma proteína à qual exerce várias funções como monitoramento do ciclo celular, atuação em mecanismos de reparo e apoptose. Novas funções exercidas por essa proteína vêm sendo observadas e estudadas como a atuação na cascata de pigmentação da pele agindo como fator de transcrição para genes importantes nesse processo como POMC (Pro-opiomelanocortina) e MC1R (receptor melanocortina 1). Dentre os polimorfismos genéticos, o do códon 72 do gene p53 é o mais comumente estudado e esta variante tem sido associada ao risco elevado para vários tipos de cânceres, incluindo os de pele. No entanto, a associação entre este e outros tipos de cânceres tem gerado resultados controversos. O polimorfismo ocorre por uma substituição G/C no códon 72 do gene p53 resultando em uma mudança da sequência de aminoácidos (CGC para arginina e CCC para prolina). Esse polimorfismo ocorre em domínios ricos em prolina gerando alterações morfofisiológicas assim como, uma diferença na mobilidade eletroforética da proteína. O objetivo do presente estudo foi estabelecer uma possível associação entre o polimorfismo do códon 72 do gene p53 com as características de pigmentação como cor de pele, cabelo, olho e resposta da pele após exposição solar (apresentar vermelhidão ou se bronzear). Os 96 voluntários saudáveis foram recrutados randomicamente e as informações sobre cor de pele, capacidade de se bronzear e outras características de pigmentação foram coletadas mediante um questionário padronizado. O DNA genômico foi extraído a partir do sangue venoso e a genotipagem foi feita por Reações em Cadeia da Polimerase (PCR). O polimorfismo foi investigado por fotodocumentação após eletroforese em gel de agarose. As amostras que geraram dúvidas foram confirmadas por digestão sítio específica através da atuação da enzima de restrição BstUI. As frequências alélicas dos 96 voluntários para p53Arg/72 e p53Pro/72, foram 67,70% e 32,30% respectivamente. As freqüências genotípicas para Arg/Arg, Arg/Pro e Pro/Pro foram 50,00%, 35,40% 14,60% respectivamente. Não foi detectada associação significante entre apresentar vermelhidão ou se bronzear após a exposição solar com o polimorfismo (p = 0,678), por outro lado observamos uma associação entre o genótipo Pro/Pro e olhos azuis/verdes (p = 0,01) entre os que apresentam vermelhidão da pele, demonstrando uma desvantagem em relação a exposição solar quando há ocorrência deste fenótipo específico (cor de olho) aliado ao genótipo Pro/Pro.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:39:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigo Egidio da Silva.pdf: 422179 bytes, checksum: 83dd8949e51efd8441440005afe1be0c (MD5) Previous issue date: 2009-02-17 / Glaucoma primário de ângulo aberto (GPAA) é o tipo de glaucoma mais comum. O polimorfismo Arg-Pro (CGC para CCC) no exon 4 do codon 72 do gene p53 afeta várias propriedades biológicas; recentemente foi publicado que este afeta a indução da apoptose in vitro. Vários genótipos têm sido associados significantemente ao GPAA. Nós analisamos a distribuição deste polimorfismo em 104 pacientes com GPAA e em 58 pessoas saudáveis sem história de glaucoma na Pronto Clínica de Olhos em Goiânia, Brasil. Os controles foram recrutados entre os indivíduos em acompanhamento oftalmológico. O polimorfismo do codon 72 do gene p53 foi analisado no DNA genômico por PCR. O alelo Arg72 foi mais comum do que o alelo Pro72 em ambos os grupos. Não houve diferença significante na distribuição do polimorfismo do codon 72 entre os grupos (P= 0.3311). A distribuição de genótipo no grupo com GPAA foi de 23,07% homozigotos Arg, 75% heterozigotos e 1,93% homozigotos Pro, enquanto que no grupo controle foi de 31,04% homozigotos Arg, 68,96% heterozigotos e 0% homozigotos Pro. Concluímos que o polimorfismo do codon 72 Arg/Pro não está associado com o glaucoma em pacientes brasileiros.

Orientador: Laura Sterian Ward / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T03:45:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_LuisEduardoMurgeldeCastro_D.pdf: 684034 bytes, checksum: 23d763337837e7c15426a84955a7074e (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Vários estudos já investigaram a associação do polimorfismo do códon 72 de P53 (P53 Arg72Pro) a um risco aumentado para desenvolver câncer de bexiga, com resultados controversos. Aproveitando a diversidade étnica da população brasileira, nós genotipamos 94 indivíduos com câncer de bexiga (76 homens e 18 mulheres; idade 21 - 96 anos; 67 ±13 anos; 79 fumantes e 15 não fumantes), que foram cuidadosamente pareados com 159 indivíduos controle (104 homens e 55 mulheres; idade 20 - 100 anos; 65 ±21 anos; 33 fumantes e 126 não fumantes). A avaliação levou em conta exposição ambiental, fatores alimentares, história ocupacional, tabagismo, condições gerais de saúde e doenças prévias. O genótipo Arg/Pro foi menos frequente na população de pacientes e conferiu um risco 44% menor de câncer de bexiga. A análise de regressão logística univariada também identificou sexo masculino (OR = 6,87, 95% CI = 3,78 - 12,5; P < 0,001), idade acima de 65 anos (OR = 4,44, 95% CI = 2,56 - 7,71; P < 0,001), e tabagismo (OR = 18,61, 95% CI = 9,62 - 36,03; P < 0,001) como importantes fatores de risco para câncer vesical. No entanto, o genótipo P53 Arg72Pro desapareceu como um fator de susceptibilidade numa análise de regressão multivariada e univariada ajustada para sexo, idade e tabagismo, sugerindo que estava conectada a um destes fatores na predisposição ao câncer de bexiga. Além disto, uma análise mais detalhada revelou que o alelo Pro foi menos frequente em pacientes com >=65 anos (23, 88%) do que nos com <65 anos (51,85%) (P = 0,009; P = 0,029). Todos os pacientes e controles apresentaram o tipo selvagem Pro no códon 47. Nós concluímos que P53 Arg72Pro pode não constituir fator independente, mas sim ligado à idade na susceptibilidade ao câncer vesical / Abstract: Several studies have investigated the association between P53 Arg72Pro and an increased risk of developing bladder tumors, with controversial results. Taking advantage of the high admixture rates in the Brazilian population, we genotyped 94 bladder cancer patients (76 males and 18 females; aged 21 - 96 years old; 67 ± 13 years old; 79 smokers and 15 nonsmokers) carefully paired with 159 controls (104 males and 55 females; aged 20 - 100 years old; 65 ± 21 years old; 33 smokers and 126 nonsmokers) with respect to environmental exposure, diet routine, lifetime occupational history, smoking history, general health conditions, and previous diseases. Arg/Pro genotype was under-represented in the patient population, and conferred a 44% lower risk of bladder cancer. Univariate logistic regression analysis also identified male sex (OR = 6,87, 95% CI = 3,78 -12,50; P < 0,001), age over 65 years (OR = 4,44, 95% CI = 2,56 - 7,71; P < 0,001), and smoking habits (OR = 18,61, 95% CI = 9,62 - 36,03; P < 0,001) as important risk factors for bladder cancer. However, the P53Arg72Pro genotype disappeared as a susceptibility factor both in the multivariate regression analysis and in an univariate regression analysis adjusted for gender, age, and smoking, suggesting that it was connected with one of these factors in the predisposition to bladder cancer. Indeed, a further analysis demonstrated that both alleles and genotype variants of P53Arg72Pro are less frequent in older patients (P = 0,029). All the patients and control presented the wild-type Pro genotype at codon 47. We concluded that the effect of P53Arg72Pro, described in some studies as an important risk factor, may not be an independent, but an age-related factor of susceptibility to bladder cancer / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:56:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Antonio Alves dos Santos Neto.pdf: 3927958 bytes, checksum: 7706e6c0650836d76f51febe6d1d862e (MD5) Previous issue date: 2015-04-08 / The p53 gene is considered one of the most intensively studied genes from the genomic point of view and is related to the most common types of skin cancers, which show a trend of increasing incidence in modern human populations. DNA sequences of this gene are available in genomic databases with public access on the Internet and provide useful information for a wide range of applications. This research aimed to employ methods of comparative analysis of nucleotide sequences for evaluating mutations in the p53 gene in different countries, and evaluate the applicability of bioinformatics tools available on the web environment. Investigations were carried out to verify the most frequent mutations in the p53 gene whose sequences are deposited in human genomic databases located in the United States (NCBI), Europe (EBI) and Japan (DDBJ). In the NCBI database we found 194 mutant sequences of the p53 gene, and six of them were described as coming from people with skin cancer. In EBI database 62 mutant sequences of the p53 gene were found, and 50 were from patients with skin cancer. In DDBJ database we found 4075 mutant sequences for the same gene, but not identified as coming from patients with cancer. The original sequence of the p53 gene was compared with the mutant sequences derived from patients with various types of skin cancers, through the CLUSTALW and MAFFT bioinformatics tools. Studies comparing the mutant sequences allowed to establish relationships among the most frequent mutations and that might be related to the disease in different countries. The results showed the feasibility of the proposed approach, and allowed the identification of common characteristics between the analyzed mutants. It was possible to identify the gene regions most sensitive to changes in nucleotide sequences in the p53 gene, which might be related to the origin of the pathology. It was also possible to identify that the mutations commonly occur in very close areas, both for the sequences of the NCBI database as to those collected from EBI database. / O gene p53 é considerado um dos genes mais intensamente estudados do ponto de vista genômico e está relacionado com os tipos mais comuns de cânceres de pele, os quais mostram uma tendência de aumento da incidência em populações humanas modernas. Sequencias de DNA deste gene estão disponíveis em bancos de dados genômicos com acesso público na internet e fornecem informações úteis para uma grande variedade de aplicações. Esta pesquisa teve como objetivo empregar métodos de análise comparativa das sequências de nucleotídeos para a avaliação de mutações no gene p53 em diferentes países, e avaliar a aplicabilidade das ferramentas de bioinformática disponíveis no ambiente web. As investigações foram realizadas a fim de verificar as mutações mais frequentes no gene p53 já depositadas em bancos de dados genômicos humanos localizados nos Estados Unidos (NCBI), Europa (EBI) e Japão (DDBJ). Na base de dados NCBI foram encontradas 194 sequencias mutantes para o referido gene, sendo que seis destas sequências eram descritas como provenientes de pessoas com câncer de pele. Na base de dados EBI foram encontradas 62 sequencias mutantes do gene p53 em humanos, sendo que 50 eram provenientes de pacientes com câncer de pele. Na base de dados DDBJ foram localizadas 4075 sequencias mutantes para o mesmo gene, mas não identificadas como provenientes de pacientes com câncer. A seqüência original do gene p53 foi comparada com as sequências mutantes oriundas de pacientes com diversos tipos de cânceres de pele, por meio das ferramentas de bioinformática CLUSTALW e MAFFT. Estudos comparando as sequências mutantes permitiram estabelecer relações entre as mutações mais freqüentes e que podem estar relacionados com a patologia nos diferentes países. Os resultados mostraram a viabilidade da abordagem proposta, e permitiram a identificação de características comuns entre os mutantes analisados. Foi possível identificar as regiões gênicas mais sensíveis às alterações nas sequências de nucleotídeos no gene p53, e que podem estar relacionados com a origem da patologia. Também foi possível identificar que as mutações comumente ocorrem em regiões bem próximas, tanto para as sequencias oriundas do banco de dados NCBI quanto para aquelas coletadas do banco de dados EBI.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:46:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Antonio Alves dos Santos Neto.pdf: 3927958 bytes, checksum: 7706e6c0650836d76f51febe6d1d862e (MD5) Previous issue date: 2015-04-08 / The p53 gene is considered one of the most intensively studied genes from the genomic point of view and is related to the most common types of skin cancers, which show a trend of increasing incidence in modern human populations. DNA sequences of this gene are available in genomic databases with public access on the Internet and provide useful information for a wide range of applications. This research aimed to employ methods of comparative analysis of nucleotide sequences for evaluating mutations in the p53 gene in different countries, and evaluate the applicability of bioinformatics tools available on the web environment. Investigations were carried out to verify the most frequent mutations in the p53 gene whose sequences are deposited in human genomic databases located in the United States (NCBI), Europe (EBI) and Japan (DDBJ). In the NCBI database we found 194 mutant sequences of the p53 gene, and six of them were described as coming from people with skin cancer. In EBI database 62 mutant sequences of the p53 gene were found, and 50 were from patients with skin cancer. In DDBJ database we found 4075 mutant sequences for the same gene, but not identified as coming from patients with cancer. The original sequence of the p53 gene was compared with the mutant sequences derived from patients with various types of skin cancers, through the CLUSTALW and MAFFT bioinformatics tools. Studies comparing the mutant sequences allowed to establish relationships among the most frequent mutations and that might be related to the disease in different countries. The results showed the feasibility of the proposed approach, and allowed the identification of common characteristics between the analyzed mutants. It was possible to identify the gene regions most sensitive to changes in nucleotide sequences in the p53 gene, which might be related to the origin of the pathology. It was also possible to identify that the mutations commonly occur in very close areas, both for the sequences of the NCBI database as to those collected from EBI database. / O gene p53 é considerado um dos genes mais intensamente estudados do ponto de vista genômico e está relacionado com os tipos mais comuns de cânceres de pele, os quais mostram uma tendência de aumento da incidência em populações humanas modernas. Sequencias de DNA deste gene estão disponíveis em bancos de dados genômicos com acesso público na internet e fornecem informações úteis para uma grande variedade de aplicações. Esta pesquisa teve como objetivo empregar métodos de análise comparativa das sequências de nucleotídeos para a avaliação de mutações no gene p53 em diferentes países, e avaliar a aplicabilidade das ferramentas de bioinformática disponíveis no ambiente web. As investigações foram realizadas a fim de verificar as mutações mais frequentes no gene p53 já depositadas em bancos de dados genômicos humanos localizados nos Estados Unidos (NCBI), Europa (EBI) e Japão (DDBJ). Na base de dados NCBI foram encontradas 194 sequencias mutantes para o referido gene, sendo que seis destas sequências eram descritas como provenientes de pessoas com câncer de pele. Na base de dados EBI foram encontradas 62 sequencias mutantes do gene p53 em humanos, sendo que 50 eram provenientes de pacientes com câncer de pele. Na base de dados DDBJ foram localizadas 4075 sequencias mutantes para o mesmo gene, mas não identificadas como provenientes de pacientes com câncer. A seqüência original do gene p53 foi comparada com as sequências mutantes oriundas de pacientes com diversos tipos de cânceres de pele, por meio das ferramentas de bioinformática CLUSTALW e MAFFT. Estudos comparando as sequências mutantes permitiram estabelecer relações entre as mutações mais freqüentes e que podem estar relacionados com a patologia nos diferentes países. Os resultados mostraram a viabilidade da abordagem proposta, e permitiram a identificação de características comuns entre os mutantes analisados. Foi possível identificar as regiões gênicas mais sensíveis às alterações nas sequências de nucleotídeos no gene p53, e que podem estar relacionados com a origem da patologia. Também foi possível identificar que as mutações comumente ocorrem em regiões bem próximas, tanto para as sequencias oriundas do banco de dados NCBI quanto para aquelas coletadas do banco de dados EBI.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:54:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5215_1.pdf: 1381913 bytes, checksum: 3a78f7ed849513c01bc3e4ced1760801 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / O ácido úsnico é um metabólito de líquen que apresenta uma grande variedade de atividades biológicas, dentre as quais, citotoxidade frente a células oriundas de tumores malignos humanos. Apesar da existência de revisões recentes sobre a atividade citotóxica do ácido úsnico, o mecanismo de ação desta droga ainda não foi completamente elucidado. Não existe na literatura referência ao envolvimento do gene supressor de tumor p53 com os efeitos do ácido úsnico. Na sua forma normal, a proteína p53 atua em resposta a diferentes estresses celulares levando à transcrição de genes que induzem a retenção do ciclo celular ou apoptose. Entre as formas de atuação do p53 está a repressão de genes que codificam proteínas associadas à polimerização e estabilização de microtúbulos. Estas funções são perdidas quando ocorrem mutações em sua via metabólica, o que acontece em mais de 50% dos tumores cancerosos humanos. O objetivo deste trabalho foi investigar se o mecanismo da ação anticancerígena do ácido úsnico envolve a ativação da via metabólica p53. Para estudos da sensibilidade de linhagens cancerígenas ao ácido úsnico, foram realizados ensaios pelo método colorimétrico do MTT [3-(4,5- dimethylthiazol-2-yl)-2,5diphenyl-tetrazolium bromide], utilizando-se várias concentrações do fármaco (1 a 60 &#956;M) por 72h, frente às seguintes linhagens de células malignas humanas: MCF7(câncer de mama, positiva para receptores de estrogênio, p53 normal), MDA-MB-231(câncer de mama, negativa para receptores de estrogênio, p53 inativo), H1299 (câncer de pulmão, nula para p53). Para determinar o envolvimento do p53 na ação citotóxica do ácido úsnico, os níveis das proteínas p53 e p21 (um inibidor de quinases dependentes de ciclinas cuja expressão é controlada pelo p53) em células MCF7 tratadas com 29 &#956;M de ácido úsnico por 24h foram determinados utilizando-se ensaios western blot com o anticorpo monoclonal DO-12 (específico para p53) e WAF1 (específico para p21). Para verificar se a ação anticancerígena do ácido úsnico resulta em dano ao DNA celular, a fosforilação da SER15 do p53 (um marcador para danos em DNA) foi investigada, após tratamento de células MCF7 com 29 &#956;M de ácido úsnico por 24h. Nestes estudos, ensaios western blot foram realizados com o anticorpo policlonal FOSFO-SER15, específico para serina fosforilada. Para verificar se o aumento nos níveis da proteína p53 detectados após o tratamento com ácido úsnico eram acompanhados por um aumento em sua atividade transcricional, foram executados ensaios com ß-Gal. Nesta metodologia utilizaram-se fibroblastos T22 de camundongos, portadores do plasmídeo RGDFos-LacZ (contendo o resíduo de 36 pb do sítio de ligação para o p53), tratados com diferentes concentrações de ácido úsnico. Para a investigação dos efeitos do ácido úsnico na formação e estabilização de microtúbulos, células MCF7 foram tratadas com 29 &#956;M de ácido úsnico por 24h, fixadas em metanol e tratadas com anticorpo monoclonal anti-ß-tubulina. O ácido úsnico mostrou atividade citotóxica frente às várias linhagens celulares oriundas de tumores malignos humanos, promovendo elevação nos níveis das proteínas p53 e p21. Entretanto, este aumento não foi acompanhado de incremento na atividade transcricional nem da fosforilação da SER15 do p53. Também não foram detectadas modificações na formação dos microtúbulos. As propriedades anticancerígenas do ácido úsnico como agente não genotóxico que atua de uma forma independente do p53 fazem dele um candidato em potencial para novas terapias de câncer

Orientadores: Laura Sterian Ward, Ubirajara Ferreira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T18:25:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LimaJunior_MarioMacielde_D.pdf: 2397268 bytes, checksum: 63d55e4a5572d5d7f06e615be4d98384 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: As doenças da glândula prostática em geral e a incidência de câncer da próstata, em particular, mostram disparidades acentuadas entre os diferentes países e etnias. De fato, etnia, idade e história familiar são os mais fortes fatores de risco conhecidos para o câncer da próstata, mas a dieta, índice de massa corporal e outros fatores também podem influenciar o seu desenvolvimento. O objetivo deste estudo é descrever aspectos clínicos, antropométricos e genéticos da próstata de índios brasileiros da região amazônica. Foram analisados um total de 228 indígenas do sexo masculino ? 40 anos submetidos a exame físico, incluindo exame retal digital da próstata (TR), e a um questionário individualizado que incluía características demográficas e estilo de vida; história médica familiar e pessoal para câncer da próstata. Amostras de sangue foram obtidas para a determinação do antígeno prostático específico (PSA) e concentrações de testosterona sérica e genotipagem para TP53 e GSTP1. Os dados da população indígena foram comparados com os de um grupo controle de 87 não-indígenas masculinos da mesma região. Entre os 14 grupos étnicos identificados, Macuxi, é a etnia de índios aculturados mais frequente (43,6%), seguido pela Yanomami (14,5%), que é composta por índios mais isolados e primitivos. Os participantes tinham média de idade de 54,7 anos; circunferência abdominal de 86,6 cm e IMC de 23,9 kg/m2, com Yanomanis apresentando ambos IMC (21,4 contra 24,8; p=0,001) e peso da próstata mais baixos do que os Macuxis (15g contra 20g; p=0,001). Na população controle a idade média foi de 41 anos. Nenhum dos índios apresentaram sintomas relacionados à próstata e apenas um paciente teve diagnóstico de hiperplasia benigna da próstata, associada à manifestação de retenção urinária. Não foram identificadas diferenças nos valores de PSA (0,48 ng/mL contra 0,6 ng/mL; p=0,349) entre Yanomami e Macuxis. Observou-se correlação entre o IMC, peso da próstata, estilo de vida e hábitos alimentares, apesar das concentrações de testosterona (414 contra 502; p=0,207) serem semelhantes entre Macuxis e Yanomanis e, um aumento progressivo das concentrações de PSA ser observado com o envelhecimento em ambas etnias. A genotipagem de TP53 nos indígenas mostrou uma super representação do haplótipo selvagem Arg/Arg (74,5% versus 42,5%; p<0.0001) em relação à população controle. O perfil genotipico de GSTP1 também diferiu consideravelmente entre os não índios e os índios (Ile/Ile 60,9% versus 35,3%; Ile/Val 28,7% versus 45,9%; Val/Val 10,3% versus 18,8%; p = 0,0003, respectivamente). Não encontramos qualquer associação entre os hábitos alimentares ou características do estilo de vida, peso da próstata, PSA, concentrações de testosterona e o perfil genético da população investigada. No entanto, observamos especificidades alimentares, sociais e culturais nas populações estudadas, bem como um perfil genético específico para TP53 e GSTP1 que podem estar associados à boa saúde prostática da população indígena estudada / Abstract: Prostate diseases in general and prostate cancer incidence, in particular, show marked disparities among different countries and ethnicities. Age, ethnicity and family history are the strongest known risk factors for prostate cancer, but diet, body mass index and other factors may also influence its development. We aimed to describe clinical, anthropometric, genetic and prostatic features of Brazilian Indians from the Amazon area. A total of 228 male Indians ?40 years old were submitted to a physical examination, including digital rectal examination (DRE), and to an in-person questionnaire on demographic characteristics and life style; personal and familial medical history. Blood samples were obtained for the determination of total prostatic specific antigen (PSA) and serum testosterone levels. In addition, we obtained a control group of non-Indian males from the same region. Among the 14 ethnic groups identified, Macuxi group, composed by more acultured indians, was the most frequent (43.6%), followed by Yanomami (14.5%) group, that is composed by more isolated and primitive indians. Participants had a mean age of 54.7 years; waist circumference of 86.6 cm and BMI of 23.9 kg/m2, with Yanomamis presenting both lower BMI (21,4 versus 24,8; p=0,001) and lower prostate volume than Macuxis (15 versus 20; p=0,001). None of the indians presented prostate symptoms and only one patient had a benign prostate hyperplasia that caused urine retention. Serum PSA (0,48 versus 0,6 p=0,349). We observed a relationship among BMI, prostate volume, life style and dietary patterns, although testosterone (414 versus 502; p=0,207) levels were similar in Macuxi and Yanomami indians and a progressive increase of PSA levels was observed with aging in both groups. TP53 genotyping evidenced a different profile in indians, with a super representation of the Arg/Arg haplotype (74,5% versus 42,5%; p<0,0001) compared to the control population. Likewise, GSTP1 genotyping demonstrated very differently among control population compared to indians Ile/Ile 60,9% versus 35,3%; Ile/Val 28,7% versus 45,9%; Val/Val 10,3% versus 18,8%; p = 0,0003); respectively. We were not able to find any association among dietary patterns or any life style characteristic; prostate volume, serum PSA and testosterone levels; and the genetic profile of the investigated population. We observed specific dietary, social and cultural features, as well as a specific genetic profile for TP53 and GSTP1 that may contribute to Brazilian Indian population prostate good health / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O carcinoma gÃstrico à a segunda causa de morte por cÃncer no mundo. No Cearà à o segundo mais freqÃente entre os homens e o terceiro entre as mulheres. Dos cÃnceres gÃstricos os adenocarcinomas representam em torno de 95%. A doenÃa tem sido associada a fatores genÃticos e ambientais sendo demonstrada Ãntima relaÃÃo com a infecÃÃo por Helicobacter pylori, principalmente associada à presenÃa do gene cagA e genÃtipos vacAs1m1. Entretanto, apesar dos mecanismos pelos quais a bactÃria promove a carcinogÃnese gÃstrica ainda nÃo estarem esclarecidos, uma das hipÃteses seria atravÃs da inativaÃÃo de supressores tumorais. O objetivo do presente trabalho foi verificar, em adenocarcinomas gÃstricos, se a presenÃa de H. pylori, e de seus genes cagA e vacA, està relacionada com a mutaÃÃo e/ou alteraÃÃo na expressÃo protÃica dos supressores tumorais p53 e p27. Neste estudo, 74 amostras de pacientes foram analisadas quanto à presenÃa de H. pylori, cagA+ e os genÃtipos de vacA, pela reaÃÃo em cadeia da polimerase (PCR). A anÃlise mutacional do gene p53 foi realizada por PCR-SSCP e a detecÃÃo da mutaÃÃo/superexpressÃo do p53 e expressÃo da proteÃna p27 pelo mÃtodo imunohistoquÃmico. A bactÃria foi detectada em 95% das amostras, das quais 63% eram cagA(+). Dentre os alelos de vacA, observou-se predomÃnio de s1 (74%) e m1 (82%), associados em 69% dos casos. Na anÃlise mutacional do p53 verificou-se que 72% dos casos exibiram alteraÃÃo no padrÃo de mobilidade eletroforÃtica, sendo esta associada significativamente à presenÃa do gene cagA. Por outro lado, apenas 29% dos casos apresentaram detecÃÃo pelo mÃtodo imunohistoquÃmico, nÃo sendo encontrada associaÃÃo com a H. pylori. A proteÃna p27 demonstrou acentuada reduÃÃo em sua expressÃo (detectada em apenas 19% dos casos), nÃo demonstrando atividade compensatÃria em relaÃÃo à proteÃna p53 mutada e sem associaÃÃo estatÃstica dos casos negativos com a presenÃa da H. pylori. Finalmente, os resultados sugerem que estes supressores simultaneamente inativados podem ser o ponto chave da desregulaÃÃo do ciclo celular que, associados a outros fatores, favoreÃam o desenvolvimento e progressÃo dos adenocarcinomas gÃstricos. Hà indÃcios de que a presenÃa bacteriana, e dos seus genes cagA(+) e vacA/s1m1, possam influenciar, de forma nÃo esclarecida, as alteraÃÃes moleculares ocorridas nos supressores tumorais p53 e p27. / Gastric carcinoma is the second cause of death by cancer in the world. On State of Ceara-Brazil is the second most frequent type of cancer in men and third in women. Adenocarcinomas account for approximately 95% of all malignant gastric neoplasms. It has been associated to genetic and environmental factors and a intimate relationship between the infection by the bacteria Helicobacter pylori and the gastric carcinoma have been related. The presence of the cagA gene and specific genotypes (s1m1) of the gene vacA have been detected in more pathogenic strains. Although the precise molecular mechanisms by which H. pylori could promote the process of gastric carcinogenesis are under investigation, one hypothesized mechanism involves the tumor supressor genes inactivation. The aim of the present study was to verify if the presence of Helicobacter pylori, cagA and vacA genes is related to mutations in the tumor supressor gene p53 and altered expression of p53 and p27 proteins in gastric adenocarcinomas. Seventy-four (74) samples were analyzed to detect the presence of H. pylori, cagA and genotypes of vacA by Polymerization Chain Reaction (PCR). The mutational analysis of p53 gene was performed by PCR-SSCP (Polymerization Chain Reaction for analysis of the Single-strand Conformation Polymorphism). Analysis of mutation or overexpression of p53 protein and p27 expression was detected by the immunohistochemical method. The bacteria was detected in 95% of the samples, 63% was cagA(+). Among the vacA allele it was observed prevalence of s1 (74%) and m1 (82%), associated in 69% of the cases. Mutation analysis of p53 demonstrated 72% of the cases with altered electrophoretic mobility; The alterations were significatively more frequent in the presence of the cagA gene. Immunohistochemical analysis detected only 29% of cases with the expression of p53 protein. The protein p27 showed accentuated reduction in its expression (detected in only 19% of the cases), it has not demonstrated compensatory activity in relation to the p53 altered protein, neither association to H. pylori presence. Finally, these data suggest that simultaneous inactivation of these tumor suppressors genes may be the key point of deregulation of the cellular cycle that, associated to the other factors, favor the development and progression of the gastric cancer. There is some evidence that the bacterial presence, cagA and vacA/s1m1 genes, may influence, in a not understood way, the alterations observed in the tumor suppressors p53 and p27.