Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-29 / Objetivo: avaliar a possível relação entre polimorfismos dos genes codificadores de receptor 1 de interleucina (IL) 1 (IL-1R1) (PstI, rs2234650), IL-12 (+1188, rs3212227), IL-18 (-137, rs187238), IL-18 (-607, rs1946519), receptor tipo Toll (TLR) 2 (TLR-2) (+2258, rs5743708) e TLR-4 (+896, rs4986790) e a pré-eclâmpsia (PE). Pacientes e métodos: Este estudo de caráter caso-controle incluiu 109 pacientes com PE e 174 gestantes sem patologia sistêmica ou obstétrica, e com história de duas ou mais gestações sem intercorrências, como controles. O DNA genômico foi extraído de sangue periférico por método de DTAB/CTAB, e os polimorfismos foram genotipados por técnicas de PCR-RFLP ou PCR-ARMS. Para a análise dos resultados, foram utilizados os testes t de Student e exato de Fischer, tendo sido adotado o nível de significância de p<0,05. Resultados: As freqüências genotípicas do polimorfismo do gene IL-1R1 foram 20,9% CC, 59% CT e 20,1% TT em casos de PE; e 24,7% CC, 56,2% CT e 19,1% TT em controles (p=0,82). As freqüências do polimorfismo do gene IL-12 foram 54,7% AA, 32,9% AC e 12,4% CC em casos de PE; e 55,4% AA, 33,8% AC e 10,8% CC em controles (p=0,93). As freqüências genotípicas de IL-18 (-137) foram 5,2% CC, 42,7% CG e 52,1% GG em casos de PE; e 7,6% CC, 43% CG e 49,4% GG em controles (p=0,74). As freqüências genotípicas de IL-18 (-607) foram 41% CC, 52,7% CA e 6,3% AA em pacientes com PE; e 32,2% CC, 56,2% CA e 11,6% AA no grupo controle (p=0,22). As freqüências do polimorfismo do gene TLR-2 foram 84,6% GG e 15,4% GA em casos de PE; e 84,8% GG e 15,2% GA em controles (p=0,97). As freqüências do polimorfismo do gene TLR-4 foram 93,6% AA e 6,4% AG em casos de PE; e 87,6% AA, 11,7% AG e 0,7% GG em controles (p=0,23). Não houve diferenças significantes entre os grupos, quanto às freqüências genotípicas e alélicas. Conclusões: Não foi observada associação entre polimorfismos de genes codificadores de IL- 1R1, IL-12, IL-18, TLR-2 e TLR-4 e a ocorrência de pré-eclâmpsia. / Problem: Intense maternal inflammatory response is a central event in the pathogenesis of preeclampsia (PE) Our aim was to assess a possible relation between pro-inflammatory mediators: IL-1R1, IL-12, IL-18, IL-18, TLR-2 and TLR-4 gene polymorphisms and PE. Method of Study: This case-control study included 109 patients with PE and 174 healthy women (controls). Genotyping were performed by PCR-ARMS or PCR-RFLP techniques. Data were analyzed by Student´s t or Fischer´s exact tests, and significance was set at p<0.05. Results: Genotypic and allelic distribution for all six polymorphisms was similar between the study and control groups (p=0.82 for IL-1R1, p=0.93 for IL-12, p=0.74 for IL-18 -137, p=0.22 for IL-18 -607, p=0.97 for TLR-2 and p=0.23 for TLR-4 gene polymorphisms). Conclusions: Our findings suggest that the analyzed pro-inflammatory gene polymorphisms are not associated with the occurrence of PE. Further studies have to be done to confirm these results. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-30. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:07Z : No. of bitstreams: 1 Publico-12661a.pdf: 1894354 bytes, checksum: 39e63c18340aaa8ae1aee1ec0b447c39 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:08Z : No. of bitstreams: 2 Publico-12661a.pdf: 1894354 bytes, checksum: 39e63c18340aaa8ae1aee1ec0b447c39 (MD5) Publico-12661b.pdf: 1881342 bytes, checksum: 92081544fa53e07e990b31d9fe71e6a8 (MD5) / Objetivo: O Papillomavirus humano (HPV) é o agente etiológico do câncer cervical, mas isoladamente é incapaz de induzir a oncogênese. A progressão para as lesões invasoras está associada à imunidade do hospedeiro, dentre as quais, a interferência no processo de apoptose celular. Entre os vários genes associados à morte celular, o gene FAS parece ser um elemento importante. O objetivo deste estudo foi avaliar se há uma associação do polimorfismo da região promotora -670 do gene FAS com a NIC 3 e o carcinoma invasivo do colo do útero. Métodos: A avaliação da presença do polimorfismo do gene FAS foi realizada através da Técnica de PCR e RFLP em amostras de sangue para o grupo controle (225 amostras) e de tecido cervical para o grupo de casos, com NIC 3 (75 casos) e carcinoma invasor (214 casos). A análise estatística foi realizada através do cálculo do Teste Exato de Fisher, Kruskal-Wallis, Mann-Whitney e Qui-Quadrado, sendo considerado o valor de significância de 5% ou p<0,05. Resultados: O genótipo heterozigoto (AG) do gene FAS -670 foi significativamente mais frequente no grupo de mulheres com NIC 3, com um risco estimado de 3 vezes (OR=3,0; 95% IC: 1,29-7,16), quando ajustado a idade. Não houve diferença, porém, tanto no grupo controle quanto nas mulheres com carcinoma cervical. Nenhum genótipo esteve associado a um maior risco de NIC 3 ou câncer quando comparamos idade e etnia. Nas mulheres com câncer, os genótipos foram semelhantes nos diferentes tipos histológicos (epidermóide e adenocarcinoma) e grau de diferenciação tumoral. Avaliando a distribuição alélica (A e G), não observamos diferença na frequência dos alelos nos grupos estudados. Conclusão: O polimorfismo da região promotora do gene FAS -670 esteve associado a um risco maior de lesão intraepitelial de alto grau (NIC 3), mas não para o câncer invasor do colo do útero, quando comparados ao grupo controle. / Objective: The human papillomavirus (HPV) is the etiologic agent of cervical cancer, but alone it is incapable of inducing oncogenesis. Rather, progression to invasive lesions is associated with host immunity and interference in the process of cellular apoptosis. Among the several genes involved in cell death, the FAS gene appears to be an important factor. The aim of this study was to evaluate whether there is an association between polymorphisms of the FAS -670 gene promoter region and preinvasive and invasive lesions of the cervix. Methods: The FAS gene was evaluated for the presence of polymorphisms using polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism techniques in 225 blood samples for the control group, as well as cervical tissue from patients with cervical intraepithelial neoplasia grade 3 (CIN 3; 75 cases) or invasive carcinoma (214 cases). Results: The heterozygous genotype (AG) of the FAS -670 gene promoter region was significantly more frequent in women with CIN 3, with an estimated risk of three times (OR=3.0; 95% CI: 1.29 to 7.16). No difference, however, was observed in the control group and women with cervical cancer. In women with cancer, the genotypes were similar in the different histological types and degree of tumor differentiation. Assessing allelic distribution (A or G), we observed no difference in frequency of allele in studied groups. Conclusion: Polymorphism of the promoter region of the FAS -670 gene was associated with increased risk of CIN 3, but not for invasive cancer of the cervix when compared to the control group. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os polimorfismos denominados Indels são variações de comprimento geradas por inserção ou deleção de um ou mais nucleotídeos em uma sequência de DNA. Estes marcadores genéticos vêm apresentando um grande potencial para fins forenses e populacionais por combinar características dos marcadores SNPs, tais como a capacidade de analisar fragmentos curtos (menores que 250pb) e baixas taxas de mutação, com a facilidade da genotipagem dos STR em uma única PCR, seguida de detecção dos fragmentos amplificados por eletroforese. Com o objetivo de avaliar a eficiência dos Indels em aplicações forenses e esclarecer os detalhes da formação de diferentes populações brasileiras através de dados genéticos, amostras populacionais de diferentes estados brasileiros foram genotipadas através de dois sistemas multiplex. O primeiro (indelplex-HID) foi otimizado para fins de Identificação Humana (HID) e inclui um grupo de 38 marcadores Indels selecionados por apresentarem altos valores de diversidade genética dentro das principais populações continentais. Já o segundo (46-AI-indels), foi selecionado para estudos de ancestralidade e é composto por um conjunto de 46 marcadores informativos de ancestralidade (AIMs). Nesse último caso, ao contrário do anterior, o sistema multiplex inclui marcadores com alta divergência nas frequências alélicas entre populações continentais. Na primeira etapa, o multiplex HID foi aplicado em uma amostra populacional do Rio de Janeiro e em uma amostra populacional dos índios Terena. Um banco de dados de frequências alélicas foi construído para essas duas amostras populacionais. Os valores das frequências alélicas foram utilizados nas comparações estatísticas e parâmetros de vínculos genéticos e forenses foram calculados. O Poder de Discriminação acumulado na população do Rio de Janeiro para os 38 loci testados foi de 0,9999999999999990 e na população dos índios Terena de 0,9999999999997, validando o uso desse sistema numa população heterogênea como a brasileira. A eficiência do indelplex-HID também mostrou-se elevada nas amostras de casos forenses comprometidas, apresentando melhor resultados que marcadores STR em termos de número de loci genotipados e de qualidade de amplificação. Na segunda etapa, o multiplex 46-AI-indels foi aplicado com objetivo de avaliar a ancestralidade em amostras de diferentes estados do Brasil por permitir a identificação de diferenças entre frequências alélicas de grupos populacionais separados geograficamente. A maioria das populações analisadas apresentou elevada herança européia. As populações do Rio de Janeiro, Pernambuco, Mato Grosso do Sul, Amazonas, Alagoas, Minas Gerais e São Paulo apresentaram cerca de 50% de ancestralidade européia, enquanto que nas populações que formam o sul do país e o Espírito Santo este percentual girou em torno de 70%. De uma maneira geral, as contribuições ameríndias e africanas variaram um pouco de acordo com a região. As amostras de Santa Isabel do Rio Negro e dos índios Terena (amostras indicadas como ameríndio-descendentes) de fato mostraram majoritariamente ancestralidade ameríndia (>70%). Os resultados obtidos indicaram que os dados gerados a partir da tipagem dos AIMs estão em estreita concordância com os registros históricos e com outros estudos genéticos acerca da formação da população brasileira e os loci do sistema HID evidenciaram que os são altamente informativos, constituindo uma ferramenta importante em estudos de identificação humana e de relações de parentesco. / Indels are length polymorphisms created by the insertion or deletion of one or more nucleotides in a DNA sequence. This type of genetic marker is potentially very useful for forensic and population genetic applications because it combines some desirable SNP features, such as the possibility of being analyzed in small fragments (less than 250bp), and low mutation rate, and in the same way as for the STRs it is easily genotyped in a single PCR followed by capillary electrophoresis detection of the amplified fragments. In order to evaluate the efficiency of Indels in forensic applications, and clarify some details on the formation of different Brazilian populations through genetic data, population samples from different Brazilian States were genotyped through two Indel multiplex systems. The first (Indelplex-HID) has been optimized for Human Identification (HID), and includes a group of 38 Indel markers selected by presenting similarly high values of genetic diversity within the main continental populations. The second (46-AI-indels) was selected for studies of ancestry, and it is composed by a set of 46 ancestry informative markers (AIMs). The latter, unlike the first one, includes markers with high divergence in allele frequencies among populations. In a first stage, the multiplex HID was used to study a population sample of Rio de Janeiro and a population sample of Terena Amerindians. Allele frequency databases were built for these two population samples. Allele frequency values were used in statistical comparisons, and to calculate relevant kinship and identification parameters. The cumulative discrimination power for the 38 loci in the population from Rio de Janeiro was 0.9999999999999990, and for the Terena Indians it was 0.9999999999997, demonstrating the utility of this system in a heterogeneous population like the Brazilian. The effectiveness of the indelplex-HID was also revealed to be high in low template samples that have been analyzed, which were previously selected from forensic cases, showing better results than STR markers in terms of number of genotyped loci and amplification quality. In the second stage, the multiplex 46-AI-indels was used to assess the ancestry makeup of different States of Brazil, since it allows the identification of differences among allele frequencies in geographically separated population groups. Most of the populations analyzed showed high European heritage. The populations from Rio de Janeiro, Pernambuco, Mato Grosso do Sul, Manaus, Alagoas, Minas Gerais and São Paulo presented about 50% European ancestry, while in Espirito Santo and south of Brazil the frequency of European ancestry was about 70%. In General, the Amerindian and African contributions varied somewhat according to the region. Santa Isabel do Rio Negro and Terena (indicated as Ameridians-descendants) in fact showed mostly Amerindian ancestry (>70%). The results of AIMs typing are in close agreement with the historical records and other genetic studies on the formation of Brazilian population. The loci of the HID system were highly informative, and constitute an important tool in human identification and kinship studies.

O papel dos polimorfismos genéticos da ECA (PGECA) na insuficiência cardíaca (IC) como preditor de desfechos clínicos e ecocardiográficos ainda não está estabelecido. É necessário identificar o perfil genotípico local para se observar se o impacto clínico desses genótipos é igual entre populações estrangeiras e a brasileira. O objetivo deste trabalho foi determinar a frequência das variantes do PGECA e sua relação com a evolução clínica de pacientes com IC de etiologia não isquêmica de uma população do Rio de Janeiro, utilizando desfechos clínicos, ecocardiográficos e do Seattle Heart Failure Model (SHFM).Para isso, realizou-se análise secundária de prontuários de 111 pacientes, acompanhados de forma prospectiva e retrospectiva, além da análise genética com identificação da variante do PGECA e sua classificação. Os pacientes foram acompanhados em média por 64,93,9 meses, tinham 59,51,3 (26-89) anos, predomínio do sexo masculino (60,4%) e da cor da pele branca (51,4 %), mas com alta prevalência de pretos (36 %). A distribuição do PGECA observada foi: 51,4 % DD, 44,1 % DI e apenas 4,5 % II. Hipertensão arterial foi a comorbidade mais frequentemente observada (70,3 %). O tratamento farmacológico estava bastante otimizado: 98,2 % em uso de betabloqueadores e 89,2 % em uso de inibidores da ECA ou losartana. Nenhuma das características clínicas ou do tratamento medicamentoso variou entre os grupos. Cerca de metade da coorte (49,5 %) apresentou fração de ejeção de VE (FEVE) &#8804;35 %. O diâmetro sistólico do VE (DSVE) final foi a única variável ecocardiográfica isolada significativamente diferente entre os PGECA: 59,21,8 DD x 52,31,9 DI x 59,25,2 (p=0,029). Quando analisadas de maneira evolutiva, todas as variáveis (FEVE, DSVE e DDVE) diferiram de maneira significativa entre os genótipos: p=0,024 para &#8710;FE, p=0,002 para &#8710;DSVE e p=0,021 para &#8710;DDVE. O genótipo DI se associou ao melhor parâmetro ecocardiográfico (aumento de FEVE e diminuição de diâmetros de VE), enquanto que o DD e II apresentaram padrão inverso. Os valores derivados do SHFM (expectativa de vida, mortalidade em um ano e mortalidade em cinco anos) não variaram de forma significativa entre os genótipos, mas notou-se um padrão com o DD associado a piores estimativas, DI a estimativas intermediárias e II a valores mais benignos. Não houve diferença significativa entre desfechos clínicos isolados (óbitos: p=0,552; internação por IC: p=0,602 e PS por IC: p=0,119) ou combinados (óbitos + internação por IC: p=0,559). Na análise multivariada, o peso alelo D foi preditor independente da variação do DSVE (p=0,023). Em relação aos preditores independentes de óbito + internação por IC, foram identificados classe funcional NYHA final (p=0,018), frequência cardíaca final (p=0,026) e uso de furosemida (p=0,041). Em suma, a frequência alélia e das variantes do PGECA foram diferentes da maioria do estudos internacionais. O alelo D foi associado de forma independente à pior evolução ecocardiográfica. Não houve diferenças significativas em relação aos parâmetros derivados do SHFM, embora o genótipo II pareça estar associado com o melhor perfil clínico. Por último, não houve diferenças em relação aos desfechos clínicos entre os PGECA. / The role of angiotensin-converting enzyme polymorphisms (ACEGP) has not yet been established as predictors of clinical outcomes in Heart Failure (HF). The local genotype profile must be identified in order to discover whether the clinical impact of these genotypes is the same in the Brazilian and foreign populations. The objective was to define the frequency of ACEGP variants and its relationship with the clinical progress of HF patients with non-ischemic etiology for a population in Rio de Janeiro, using clinical outcomes, echocardiogram parameters and the Seattle Heart Failure Model (SHFM). The medical records of 111 patients monitored prospectively and retrospectively were studied through a secondary data analysis, in addition to a genetic analysis with identification of the ACEGP variant and its classification. Aged 59.51.3 (26-89) years old, the patients were followed for an average of 64.93.9 months, mainly men (60.4%) and white (51.4%), but with a high prevalence of black (36 %). The observed ACEGP distribution was: 51.4% DD, 44.1% DI and only 4.5% II. High blood Arterial Hypertension was the co- morbidity most frequently observed (70.3%). Pharmacological treatment was highly optimized: 98.2% were taking beta blockers and 89.2% were taking ACE inhibitors or losartan. There was no significant difference in clinical characteristics or medical treatment among the groups. Almost half the cohort (49.5%) presented a left ventricular ejection fraction (LVEF) of &#8804;35%. The final left ventricular systolic diameter (LVSD) was the only isolated echo-cardiographic variable that differed significantly among the ACEGP: 59.21.8 DD x 52.31.9 DI x 59.25.2 (p=0.029). When final and initial echocardiograms were compared, the variation of these variables (LVEF, LVSD and LVDD) differed significantly among the genotypes: p=0.024 for &#8710;EF, p=0.002 for &#8710;LVSD and p=0.021 for &#8710;LVDD. The DI genotype was associated with the best echocardiographic pattern (increased LVEF and smaller LV diameters), while DD and II presented an inverse pattern. The values derived from the SHFM (life expectancy, one-year mortality and five-years mortality) did not vary significantly among the genotypes, although a pattern was noted for DD associated with poorer estimates, intermediate DI estimates and II with the most benign values. There were no significant differences among clinical outcomes separately (deaths: p=0.552; hospitalization for HF: p=0.602 and emergency room visits for HF: p=0.119) or combined (deaths + hospitalization for HF: p=0.559). In the multivariate analysis, each copy of the D allele, was a predictor for LVSD change (p=0.023). In terms of independent predictors of death and hospitalization for HF, the following were identified: final functional class NYHA (p=0.018), final heart rate (p=0.026) and use of furosemide (p=0.041). Hence, the allele and ACEGP frequency differed from most of the international studies. The D allele was associated independently with the worst evolutive echocardiogram pattern. There were no statistically significant differences in terms of SHFM-based parameters, although genotype II seems to be associated with the best clinical profile. Finally, there were no differences in terms of the clinical outcomes among the ACEGP.

Pontifícia Universidade Católica do Rio de Janeiro / Diabetes mellitus e doenças periodontais são altamente prevalentes na população mundial. Doenças periodontais (DPs) compreendem um grupo de condições crônicas inflamatórias induzidas por microorganismos que levam à inflamação gengival, à destruição tecidual periodontal e à perda óssea alveolar. Diabetes mellitus (DM) é o termo utilizado para descrever um grupo de desordens metabólicas associadas à intolerância à glicose e ao metabolismo inadequado de carboidratos. Uma vez que DPs poderiam agir de forma similar a outros estados infecciosos sistêmicos, aumentando a severidade do diabetes, uma possível relação entre ambas tem sido considerada em todo o mundo. Polimorfismos genéticos de um único nucleotídeo (SNPs) têm sido estudados em diversas doenças. Nas periodontites, acredita-se que possam estar envolvidos na exacerbação da resposta inflamatória frente ao desafio bacteriano, modificando a susceptibilidade do hospedeiro. Neste estudo, a prevalência de periodontite foi avaliada em portadores de diabetes mellitus tipo I. Posteriormente, o SNP localizado na região promotora do gene TNFA (-1031T>C) foi analisado e sua importância para a doença periodontal destrutiva foi avaliada. O grupo teste foi constituído por diabéticos tipo I (DGT, n=113) enquanto o grupo controle por indivíduos não diabéticos (ND, n=73). Para as análises dos polimorfismos genéticos, um subgrupo foi retirado do grupo teste (DG, n=58) e comparado ao grupo ND. Os seguintes parâmetros clínicos e demográficos foram avaliados: percentual de sítios com profundidade de bolsa &#61619; 6,0 mm (%PBS&#61619;6,0 mm); índice gengival (IG); perda óssea radiográfica (POR); fumo; duração do diabetes ; idade; índice de massa corpórea (IMC), n&#61616; de internações e n&#61616; de dentes presentes. Amostras de sangue e/ou esfregaço bucal foram colhidas de 58 pacientes do grupo teste e de 73 controles. Após a extração do DNA genômico e amplificação da região genômica de interesse por PCR (Polymerase Chain Reaction), o polimorfismo TNFA 1031T>C foi analisado por BbsI RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism). A análise dos produtos de digestão foi feita por eletroforese em gel de poliacrilamida 8%. A análise estatística das freqüências alélica e genotípica juntamente com os dados clínicos e epidemiológicos entre os 2 grupos foi feita através do teste do Mann-Whitney e do Qui-quadrado. Os grupos de estudo obedecem ao princípio de Hardy-Weinberg. No grupo ND, as seguintes freqüências genotípicas foram encontradas: 78,1% (T/T); 20,5% (T/C) e 1,4% (C/C) enquanto no grupo D foram: 42,4%(T/T); 37,3% (T/C) e 20,3% (C/C). A frequência do alelo T no grupo diabético (D) foi de 0,610 ao passo que no grupo ND foi de 0,883. Não foi possível encontrar uma relação entre o polimorfismo -1031 T>C do gene TNFA e a presença de periodontite em diabéticos tipo I. Entretanto, o polimorfismo estudado se mostrou significativamente relacionado (p<0,0001 e OR= 4.85 95%IC 2,271-10,338) à presença do diabetes tipo I. / Diabetes mellitus and periodontal diseases are highly prevalent worldwide. Periodontal disease (PD) combines a group of chronic inflammatory conditions induced by microorganisms that leads to gingival inflammation, periodontal tissue destruction and alveolar bone loss. Diabetes mellitus (DM) is a term used to describe a group of metabolic disorders associated to glucose intolerance and inappropriate carbohydrate metabolism. Once PDs could act in a similar way to other systemic infectious states increasing diabetes severity, a possible correlation between both has been considerate around the world. Single nucleotide polymorphisms (SNPs) have been studied in relation to several diseases. In periodontitis, it is believed to be involved in an exacerbated inflammatory response due to bacterial challenge, modifying the host susceptibility. In this study, the prevalence of periodontal disease was evaluated in type I diabetes patients (TIDM). Further on, the SNP in the promoter region of the TNFA gene (-1031T>C) was analyzed and its importance to destructive periodontal disease was considered. The test group was formed by type I diabetic patients (TDG, n=113) and the control group was composed by non-diabetic patients (ND, n=73). For the genetic polymorphism analysis a subgroup was taken from the test group (DG, n=58) and compared to the ND group. The following clinical and demographic parameters were assessed: percentage of sites with periodontal pocket depth (PPD) &#61619; 6.0mm; gingival index (GI); radiographic bone loss (RBL); smoking habits; diabetes duration; age; bone mass index (BMI); number of admissions and number of teeth. Blood samples and oral epithelial cells were collected from 58 patients of the test group and 73 controls. After genomic DNA extraction and amplification of the genomic region of interest by PCR (Polymerase Chain Reaction), the TNFA 1031T>C polymorphism was analyzed by BbsI RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism). Analysis of the digestion products were performed by 8% polyacrylamide gel electrophoresis. The statistical analysis of the genotypes and allelic frequencies along with the clinical and epidemiological data between the two groups were done through the Mann-Whitney and Chi-square tests. The study groups are in Hardy-Weinberg equilibrium. In the ND group, the following genotypic frequencies were found: 78.1% (T/T); 20.5% (T/C) e 1.4% (C/C), while for the D group, they were: 42.4% (T/T); 37.3% (T/C) e 20.3% (C/C). The frequencies of T allele in the D and ND groups were 0.610 and 0.883, respectively. It was not possible to find any correlation between the -1031 T>C promoter polymorphism of the TNFA gene and the presence of periodontitis in type I diabetic patients. However the studied polymorphism showed to be significantly related (p<0.0001 and OR=4.85 95%CI 2.271-10.338) to the presence of type I diabetes mellitus.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-18Bitstream added on 2014-06-13T19:12:50Z : No. of bitstreams: 1 domingos_acb_me_sjrp.pdf: 2339356 bytes, checksum: a0674e0784be91957c9249d57f61d341 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O diabetes melito (DM) é um grupo heterogêneo de alterações metabólicas, caracterizado por hiperglicemia crônica, com alterações do metabolismo de carboidratos, ácidos graxos e proteínas. O diabetes melito tipo 2 (DMT2) é a forma mais comum dessa doença, acomentendo aproximadamente 90% dos indivíduos que apresentam DM. Caracteriza-se principalmente por modificações da ação e secreção de insulina, embora sua etiologia, genética e fisiopatologia específicas ainda não estejam completamente determinadas. Os pacientes com DMT2 apresentam maior risco de desenvolvimento de complicações macro e microvasculares. Estudos revelaram que a enzima conversora de angiotensina (ECA) e a adenosina deaminase (ADA) podem estar relacionadas ao desenvolvimento de DMT2 ou de suas complicações. Com base nesses dados, foram estudados os polimorfismos I/D do gene ECA e TaqI do gene ADA em 162 indivíduos com DMT2, e 160 indivíduos saudáveis. Segundo a Associação Americana de Diabetes, os indivíduos diabéticos que apresentam HDLc abaixo de 40mg/dl ou LDLc acima de 100 mg/dl ou triglicerídeos acima de 150 mg/dl apresentam maior risco de desenvolvimento de doenças cardiovasculares. Por isso, foram selecionados 81 indivíduos com essas características para compor o grupo de estudo de pacientes diabéticos com “risco de doença cardiovascular”. Os polimorfismos foram avaliados por PCR e PCR-RFLP para os genes da ECA e ADA respectivamente. As frequências obtidas para o polimorfismo do gene ECA foram: pacientes diabéticos: I/I (19,1%); I/D (52,5%); D/D (28,4%); grupo controle I/I (12,5%); I/D (55,6%); D/D (31,9%) e grupo de diabéticos com riscos de doença cardiovascular I/I (16%); I/D (59,3%); D/D (24,7%). E para o gene ADA: em pacientes diabéticos ADA*1/*1 (89,31%); ADA*1/*2 (10,06%); ADA*2/*2 (0,63%); grupo controle ADA*1/*1 (91,25%); ADA*1/*2 (7,50%); ADA*2/*2 (1,25%); pacientes... / Diabetes mellitus (DM) is a heterogeneous group of metabolic disorders characterized by chronic hyperglycemia, with changes in the carbohydrates, fatty acids and proteins metabolism. Diabetes mellitus type 2 (DMT2) is the most common form of this disease, that affect approximately 90% of people who have DM. It is characterized mainly by changes in the action and insulin secretion, although the etiology, genetics and specific pathophysiology of the disease is not yet completely determined. DMT2 patients have a higher risk of developing macro and microvascular complications. Studies have shown that angiotensin-converting enzyme (ACE) and adenosine deaminase (ADA) may be related to the development of DMT2 or its complications. Based on these data, we studied the polymorphisms I / D of the ACE gene and the polymorphism TaqI in the ADA gene, in 162 patients with DMT2, and 160 blood donors. According to the American Diabetes Association, people with diabetes who have HDL-C below 40 mg / dL or LDL-C above 100 mg / dl or triglycerides above 150 mg / dl are at increased risk of developing cardiovascular disease. Therefore, we selected 81 individuals with these characteristics to compose the study group of diabetic patients named “risk of cardiovascular disease . The polymorphisms are evaluated by PCR for ACE gene and PCR-RFLP for the ADA Gene. The frequencies obtained for the ACE gene polymorphism were: diabetic patients: I / I (19.1%), I / D (52.5%) and D / D (28.4%), control group: I / I ( 12.5%) I / D (55.6%) and D / D (31.9%) and group of patients with cardiovascular disease risk: I / I (16%) I / D (59.3% ), D / D (24.7%). And for the ADA gene polymorphism: in diabetic patients: ADA * 1 / * 1 (89.31%); ADA * 1 / * 2 (10.06%), ADA * 2 / * 2 (0.63%); control group: ADA * 1 / * 1 (91.25%); ADA * 1 / * 2 (7.50%); ADA * 2 / * 2 (1.25%), and patients with cardiovascular risk:... (Complete abstract click electronic access below)

Pontifícia Universidade Católica do Rio de Janeiro / Diabetes mellitus e doenças periodontais são altamente prevalentes na população mundial. Doenças periodontais (DPs) compreendem um grupo de condições crônicas inflamatórias induzidas por microorganismos que levam à inflamação gengival, à destruição tecidual periodontal e à perda óssea alveolar. Diabetes mellitus (DM) é o termo utilizado para descrever um grupo de desordens metabólicas associadas à intolerância à glicose e ao metabolismo inadequado de carboidratos. Uma vez que DPs poderiam agir de forma similar a outros estados infecciosos sistêmicos, aumentando a severidade do diabetes, uma possível relação entre ambas tem sido considerada em todo o mundo. Polimorfismos genéticos de um único nucleotídeo (SNPs) têm sido estudados em diversas doenças. Nas periodontites, acredita-se que possam estar envolvidos na exacerbação da resposta inflamatória frente ao desafio bacteriano, modificando a susceptibilidade do hospedeiro. Neste estudo, a prevalência de periodontite foi avaliada em portadores de diabetes mellitus tipo I. Posteriormente, o SNP localizado na região promotora do gene TNFA (-1031T>C) foi analisado e sua importância para a doença periodontal destrutiva foi avaliada. O grupo teste foi constituído por diabéticos tipo I (DGT, n=113) enquanto o grupo controle por indivíduos não diabéticos (ND, n=73). Para as análises dos polimorfismos genéticos, um subgrupo foi retirado do grupo teste (DG, n=58) e comparado ao grupo ND. Os seguintes parâmetros clínicos e demográficos foram avaliados: percentual de sítios com profundidade de bolsa &#61619; 6,0 mm (%PBS&#61619;6,0 mm); índice gengival (IG); perda óssea radiográfica (POR); fumo; duração do diabetes ; idade; índice de massa corpórea (IMC), n&#61616; de internações e n&#61616; de dentes presentes. Amostras de sangue e/ou esfregaço bucal foram colhidas de 58 pacientes do grupo teste e de 73 controles. Após a extração do DNA genômico e amplificação da região genômica de interesse por PCR (Polymerase Chain Reaction), o polimorfismo TNFA 1031T>C foi analisado por BbsI RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism). A análise dos produtos de digestão foi feita por eletroforese em gel de poliacrilamida 8%. A análise estatística das freqüências alélica e genotípica juntamente com os dados clínicos e epidemiológicos entre os 2 grupos foi feita através do teste do Mann-Whitney e do Qui-quadrado. Os grupos de estudo obedecem ao princípio de Hardy-Weinberg. No grupo ND, as seguintes freqüências genotípicas foram encontradas: 78,1% (T/T); 20,5% (T/C) e 1,4% (C/C) enquanto no grupo D foram: 42,4%(T/T); 37,3% (T/C) e 20,3% (C/C). A frequência do alelo T no grupo diabético (D) foi de 0,610 ao passo que no grupo ND foi de 0,883. Não foi possível encontrar uma relação entre o polimorfismo -1031 T>C do gene TNFA e a presença de periodontite em diabéticos tipo I. Entretanto, o polimorfismo estudado se mostrou significativamente relacionado (p<0,0001 e OR= 4.85 95%IC 2,271-10,338) à presença do diabetes tipo I. / Diabetes mellitus and periodontal diseases are highly prevalent worldwide. Periodontal disease (PD) combines a group of chronic inflammatory conditions induced by microorganisms that leads to gingival inflammation, periodontal tissue destruction and alveolar bone loss. Diabetes mellitus (DM) is a term used to describe a group of metabolic disorders associated to glucose intolerance and inappropriate carbohydrate metabolism. Once PDs could act in a similar way to other systemic infectious states increasing diabetes severity, a possible correlation between both has been considerate around the world. Single nucleotide polymorphisms (SNPs) have been studied in relation to several diseases. In periodontitis, it is believed to be involved in an exacerbated inflammatory response due to bacterial challenge, modifying the host susceptibility. In this study, the prevalence of periodontal disease was evaluated in type I diabetes patients (TIDM). Further on, the SNP in the promoter region of the TNFA gene (-1031T>C) was analyzed and its importance to destructive periodontal disease was considered. The test group was formed by type I diabetic patients (TDG, n=113) and the control group was composed by non-diabetic patients (ND, n=73). For the genetic polymorphism analysis a subgroup was taken from the test group (DG, n=58) and compared to the ND group. The following clinical and demographic parameters were assessed: percentage of sites with periodontal pocket depth (PPD) &#61619; 6.0mm; gingival index (GI); radiographic bone loss (RBL); smoking habits; diabetes duration; age; bone mass index (BMI); number of admissions and number of teeth. Blood samples and oral epithelial cells were collected from 58 patients of the test group and 73 controls. After genomic DNA extraction and amplification of the genomic region of interest by PCR (Polymerase Chain Reaction), the TNFA 1031T>C polymorphism was analyzed by BbsI RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism). Analysis of the digestion products were performed by 8% polyacrylamide gel electrophoresis. The statistical analysis of the genotypes and allelic frequencies along with the clinical and epidemiological data between the two groups were done through the Mann-Whitney and Chi-square tests. The study groups are in Hardy-Weinberg equilibrium. In the ND group, the following genotypic frequencies were found: 78.1% (T/T); 20.5% (T/C) e 1.4% (C/C), while for the D group, they were: 42.4% (T/T); 37.3% (T/C) e 20.3% (C/C). The frequencies of T allele in the D and ND groups were 0.610 and 0.883, respectively. It was not possible to find any correlation between the -1031 T>C promoter polymorphism of the TNFA gene and the presence of periodontitis in type I diabetic patients. However the studied polymorphism showed to be significantly related (p<0.0001 and OR=4.85 95%CI 2.271-10.338) to the presence of type I diabetes mellitus.

Os alelos HLA-DRB1, que codificam uma sequência de aminoácidos (QKRAA/QRRAA/RRRAA) nas posições 70 a 74 da terceira região hipervariável da cadeia &#61538;1 do gene DRB1, denominada epítopo compartilhado (EC), estão associados com maior susceptibilidade e gravidade para artrite reumatóide (AR) em diversas populações. Uma nova classificação proposta por Du Montcel et al tem sido desenvolvida para apurar a associação entre HLA-DRB1 e AR. Este estudo foi desenhado com o objetivo de determinar a frequência dos alelos HLA-DRB1 em pacientes brasileiros com AR, e sua associação com o fator reumatoide (FR), anticorpos antipeptídeos citrulinados (ACPA) e lesão radiográfica articular e óssea. Quatrocentos e doze pacientes com AR e 215 controles foram incluídos. A tipificação HLA-DRB1 foi realizada pela reação em cadeia de polimerase (PCR) usando primers específicos e hibridação com oligonucleotídeos de sequência específica (SSOP). A pesquisa de ACPA foi determinada pela técnica de ELISA e a do FR por nefelometria, a avaliação radiográfica realizada pelo método do índice de Sharp modificado de Van Der Heijde. Para análises estatísticas foram utilizados os testes do qui-quadrado, t de Student e a regressão logística. Nos pacientes com AR alelos HLA-DRB1*04:01, *04:04, *04:05 se associaram com AR (p<0,05), embora o amplo intervalo de confiança, vale a pena ressaltar a associação observada com o alelo DRB1*09:01 e a doença (p<0,05). Alelos HLA-DRB1 EC+ foram observados em 62,8% dos pacientes e em 31,1% do grupo controle (OR 3,62; p <0,001) e estiveram associados com ACPA (OR 2,03; p<0,001). Alelos DRB1 DERAA mostraram efeito protetor para a AR (OR 0,42; p<0,001). A análise da nova classificação de HLA-DRB1 mostra que S2 e S3P se associaram a AR (p<0,05). Alelos S2 e/ou S3P esteve presente em 65% dos pacientes e 32% do grupo controle (OR 3,86; p<0,001) e estiveram associados a ACPA (OR.2,11; p=0,001). Alelos S3D, S1, X mostraram efeito protetor para a AR. Os resultados obtidos neste estudo demonstram que pacientes brasileiros com AR de etnia majoritariamente mestiça, alelos HLA-DRB1 avaliados segundo a hipótese do EC e a classificação proposta por Du Montcel estiveram associados à suscetibilidade à doença e à presença de ACPA. / HLA-DRB1 alleles that encode an amino acid sequence at positions 70-74 of the third hypervariable region of the B chain of the DRB1 gene, called shared epitope (SE), are associated with increased susceptibility and severity to rheumatoid arthritis (RA) in different populations. A new classification proposed by Du Montcel et al has been developed to determine the association between HLA-DRB1 and RA. This study was designer to determine the frequency of HLA-DRB1 alleles in Brazilian patients with RA, and its association with rheumatoid factor (RF), citrullinated peptide antibodies (ACPA) and radiographic joint damage and bone. Four hundred and twelve patients with RA and 215 controls were included. The HLA-DRB1 typing was performed by polymerase chain reaction (PCR) using specific primers and hybridization with sequence specific oligonucleotides (SSOP). The survey of ACPA was determined by ELISA and the RF by nephelometry, the radiographic evaluation by index method modified Sharp Van Der Heijde. For statistical analysis we used the chi-square, Student and logistic regression. In patients with rheumatoid arthritis HLA-DRB1*04:01, *04:04, *04:05 are associated with RA (p<0,05), although the wide confidence interval, it is worth noting the association observed with the DRB1*09:01 allele and the disease (p<0,05). HLA-DRB1 SE+ were observed in 62.8% of patients and in 31.1% of the control group (OR 3.62, p<0,001) and were associated with ACPA (OR 2.03, p<0,001). DERRA alleles showed a protective effect against RA (OR 0,42, p<0,001). The analysis of the new classification of HLA-DRB1 shows that S2 and S3P were associated with RA (p<0,05). Alleles S2 and/or S3P was present in 65% and 32% of patients in the control group (OR 3,86, p<0,001) and were associated with ACPA (OR 2.11, p=0,001). S3D alleles, S1, X showed a protective effect against RA. The results of this study demonstrate that Brazilian patients with RA from mostly mixed ethnicity, HLA-DRB1 evaluated under the hypothesis of the SE and the classification proposed by Du Montcel et al were associated with disease susceptibility and the presence of ACPA.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os polimorfismos denominados Indels são variações de comprimento geradas por inserção ou deleção de um ou mais nucleotídeos em uma sequência de DNA. Estes marcadores genéticos vêm apresentando um grande potencial para fins forenses e populacionais por combinar características dos marcadores SNPs, tais como a capacidade de analisar fragmentos curtos (menores que 250pb) e baixas taxas de mutação, com a facilidade da genotipagem dos STR em uma única PCR, seguida de detecção dos fragmentos amplificados por eletroforese. Com o objetivo de avaliar a eficiência dos Indels em aplicações forenses e esclarecer os detalhes da formação de diferentes populações brasileiras através de dados genéticos, amostras populacionais de diferentes estados brasileiros foram genotipadas através de dois sistemas multiplex. O primeiro (indelplex-HID) foi otimizado para fins de Identificação Humana (HID) e inclui um grupo de 38 marcadores Indels selecionados por apresentarem altos valores de diversidade genética dentro das principais populações continentais. Já o segundo (46-AI-indels), foi selecionado para estudos de ancestralidade e é composto por um conjunto de 46 marcadores informativos de ancestralidade (AIMs). Nesse último caso, ao contrário do anterior, o sistema multiplex inclui marcadores com alta divergência nas frequências alélicas entre populações continentais. Na primeira etapa, o multiplex HID foi aplicado em uma amostra populacional do Rio de Janeiro e em uma amostra populacional dos índios Terena. Um banco de dados de frequências alélicas foi construído para essas duas amostras populacionais. Os valores das frequências alélicas foram utilizados nas comparações estatísticas e parâmetros de vínculos genéticos e forenses foram calculados. O Poder de Discriminação acumulado na população do Rio de Janeiro para os 38 loci testados foi de 0,9999999999999990 e na população dos índios Terena de 0,9999999999997, validando o uso desse sistema numa população heterogênea como a brasileira. A eficiência do indelplex-HID também mostrou-se elevada nas amostras de casos forenses comprometidas, apresentando melhor resultados que marcadores STR em termos de número de loci genotipados e de qualidade de amplificação. Na segunda etapa, o multiplex 46-AI-indels foi aplicado com objetivo de avaliar a ancestralidade em amostras de diferentes estados do Brasil por permitir a identificação de diferenças entre frequências alélicas de grupos populacionais separados geograficamente. A maioria das populações analisadas apresentou elevada herança européia. As populações do Rio de Janeiro, Pernambuco, Mato Grosso do Sul, Amazonas, Alagoas, Minas Gerais e São Paulo apresentaram cerca de 50% de ancestralidade européia, enquanto que nas populações que formam o sul do país e o Espírito Santo este percentual girou em torno de 70%. De uma maneira geral, as contribuições ameríndias e africanas variaram um pouco de acordo com a região. As amostras de Santa Isabel do Rio Negro e dos índios Terena (amostras indicadas como ameríndio-descendentes) de fato mostraram majoritariamente ancestralidade ameríndia (>70%). Os resultados obtidos indicaram que os dados gerados a partir da tipagem dos AIMs estão em estreita concordância com os registros históricos e com outros estudos genéticos acerca da formação da população brasileira e os loci do sistema HID evidenciaram que os são altamente informativos, constituindo uma ferramenta importante em estudos de identificação humana e de relações de parentesco. / Indels are length polymorphisms created by the insertion or deletion of one or more nucleotides in a DNA sequence. This type of genetic marker is potentially very useful for forensic and population genetic applications because it combines some desirable SNP features, such as the possibility of being analyzed in small fragments (less than 250bp), and low mutation rate, and in the same way as for the STRs it is easily genotyped in a single PCR followed by capillary electrophoresis detection of the amplified fragments. In order to evaluate the efficiency of Indels in forensic applications, and clarify some details on the formation of different Brazilian populations through genetic data, population samples from different Brazilian States were genotyped through two Indel multiplex systems. The first (Indelplex-HID) has been optimized for Human Identification (HID), and includes a group of 38 Indel markers selected by presenting similarly high values of genetic diversity within the main continental populations. The second (46-AI-indels) was selected for studies of ancestry, and it is composed by a set of 46 ancestry informative markers (AIMs). The latter, unlike the first one, includes markers with high divergence in allele frequencies among populations. In a first stage, the multiplex HID was used to study a population sample of Rio de Janeiro and a population sample of Terena Amerindians. Allele frequency databases were built for these two population samples. Allele frequency values were used in statistical comparisons, and to calculate relevant kinship and identification parameters. The cumulative discrimination power for the 38 loci in the population from Rio de Janeiro was 0.9999999999999990, and for the Terena Indians it was 0.9999999999997, demonstrating the utility of this system in a heterogeneous population like the Brazilian. The effectiveness of the indelplex-HID was also revealed to be high in low template samples that have been analyzed, which were previously selected from forensic cases, showing better results than STR markers in terms of number of genotyped loci and amplification quality. In the second stage, the multiplex 46-AI-indels was used to assess the ancestry makeup of different States of Brazil, since it allows the identification of differences among allele frequencies in geographically separated population groups. Most of the populations analyzed showed high European heritage. The populations from Rio de Janeiro, Pernambuco, Mato Grosso do Sul, Manaus, Alagoas, Minas Gerais and São Paulo presented about 50% European ancestry, while in Espirito Santo and south of Brazil the frequency of European ancestry was about 70%. In General, the Amerindian and African contributions varied somewhat according to the region. Santa Isabel do Rio Negro and Terena (indicated as Ameridians-descendants) in fact showed mostly Amerindian ancestry (>70%). The results of AIMs typing are in close agreement with the historical records and other genetic studies on the formation of Brazilian population. The loci of the HID system were highly informative, and constitute an important tool in human identification and kinship studies.

The aim of study was to evaluate milk efficiency of sheep Original Valachian (OV). Observation took place in the period 2006-2009 and were involved 123 ovine. Samples were taken from the morning milking during the months April to August (method ET). Milking proces was realised mechanically. In 84 sheep were known genotypes AA (n = 13), AB (n = 18), BB (n = 53). After evaluation of essential components of ewe{\crq}s milk from flock of lambing ewes OV during lactation were found these average values: Fat (F) 4,90 g.100g-1, crude protein (CP) 5,94 g.100g-1, casein (CAS) 4,40 g.100g-1, serum protein (SP) 1,18 g.100g-1, lactose (L) 5,07 g.100g-1, dry matter (DM) 16,45 g.100g-1, solid not fat (SNF) 11,63 g.100g-1 and utilizable dry matter (UDM) 10,85 g.100g-1. Average daily milk yield of OV was 0,70 l. Effect of stage of lactation was provable on all the indicators in the level of significance 0,001. It was evidenced a statistically significant effect of the control year on the content of SNF (P{<}0,05), on the L (P{<}0,01) and on all other components (P{<}0,001). At comparing milk production OV according to the genetic polymorphism of {$\beta$}-lactoglobulin have been identified probably significant differences in milk yield (P{<}0,05). The highest daily milk yield reached genotype AB (0,76 l.day-1) {>} BB (0,68 l.day-1) {>} AA (0,66 l.day-1). In AB genotype was found the lowest levels of these essential components F, CP, CAS, DM, SNF and UDM. Highly significant effect of genotype was found on content of L (P{<}0,001). The highest content of L was confirmed by genotype BB (5,13 g.100g-1) {>} AB (5,08 g.100g-1) {>} AA (4,91 g.100g-1). Less significant effect was found on SNF (P{<}0,1). The highest average content of SNF was found in genotype BB (11,72 g.100g-1) {>} AA (11,62 g.100g-1) {>} AB (11,54 g.100g-1). In genotype AA was found the highest values of F, CP, CAS, SP, DM. Both genotypes AA, BB showed the same content of DM (16,32 g.100g-1).