Introdução: O carcinoma adenoide cístico (CAC) é uma das neoplasias de glândula salivar mais comuns para o qual não se encontra quimioterapia eficaz. Um conceito emergente na terapia do câncer é atingir proteínas especificas do tumor. MDM2 (murine double minute 2) é um importante inibidor do supressor tumoral p53, e sua expressão é aumentada em CAC. O objetivo do Artigo 1 foi avaliar o efeito de um novo inibidor da interação MDM2-p53 (MI-773) no CAC in vitro e in vivo. O Artigo 2 teve como objetivo entender o papel da combinação de MI-773 com cisplatina, além de avaliar a recorrência de CAC frente a regime neoadjuvante de MI-773. Materiais e Métodos: 3 modelos de xenoenxerto derivado de paciente (XEDP, UM-PDXHACC- 5; ACCx6; ACCx9) e 5 culturas primarias de CAC (UM-HACC-1, -2A, -2B, -5, -6) foram usados para experimentos in vitro e in vivo. Ensaio de Sulforrodamina B (SRB) foi realizado para avaliar o efeito dos agentes experimentais na viabilidade celular, além de determinar valores de IC50. Western blots revelaram a expressão de p53, fosfo-p53, MDM2, p21, PUMA, BAX, Bcl-2 e Bcl-xL. Lâminas histológicas (UMPDX- HACC-5) foram avaliadas por imunohistoquímica e imunofluorescência para determinar a localização de p53. Técnica de TUNEL in situ revelou o número de células de UM-PDX-HACC-5 no processo de apoptose. Citometria de fluxo foi realizada para determinar o efeito da terapia na proporção de células-tronco tumorais (ALDHhighCD44high) e para avaliar o ciclo celular. Para os estudos in vivo, animais transplantados com tumores (UM-PDX-HACC5, ACCx6, ou ACCx9) receberam protocolo terapêutico (MI-773 – gavagem; cisplatina – injeção intraperitoneal; ou veículo controle) conforme indicado. ANOVA, seguido de testes post-hoc (Tukey), Mann-Whitney U-test ou Student’s t-test foram usados para determinar as diferenças no crescimento tumoral, peso, volume, apoptose, viabilidade celular, expressão de TUNEL e p53. Significância estatística: p<0.05. Resultados: MI-773 causa regressão do tumor em todos os modelos préclínicos de CAC. Doses diárias de 100mg/kg de MI-773 reduziram significativamente o volume tumoral quando comparado com doses intermediárias (10 ou 50 mg/kg MI-773) ou veículo controle, em todos os modelos de CAC. Alternativamente, camundongos transplantados com tumores UM-PDX-HACC-5 receberam doses semanais de MI-773 (200 mg/kg) e/ou cisplatina (5 mg/kg) por 30 dias, a fim de se avaliar o efeito da combinação das drogas. MI-773, como agente único, causou regressão tumoral, sendo mais efetivo do que a cisplatina. Cisplatina, por outro lado, mostrou limitado efeito terapêutico, estabilizando o crescimento tumoral. Notavelmente, a combinação MI-773 + cisplatina foi mais efetiva do que os agentes isoladamente, e não foi verificada retomada do tumor no período pósoperatório. Importantemente, os protocolos experimentais não comprometeram a saúde geral dos animais. Coletivamente, estes resultados in vivo demonstram que MI-773 atua como mediador na regressão tumoral de CAC e sensibiliza os tumores à cisplatina. A inibição terapêutica da interação MDM2-p53 ativa p53 e induz apoptose. MI-773 potentemente induz expressão de p53, seu alvo p21 e proteínas relacionadas à apoptose, como PUMA, BAX, Bcl-2 e Bcl-xL in vitro e in vivo. Análise do ciclo celular mostrou que a inibição terapêutica da interação MDM2-p53 por MI- 773 causa parada no ciclo celular no primeiro ponto de checagem (G1). Marcação por TUNEL revelou número significativamente maior de células em apoptose quando tumores de UM-PDX-HACC-5 foram tratados com MI-773 em comparação com controle (p<0.05) Utilizando o mesmo modelo de xenoenxerto, a técnica de imunohistoquímica mostrou que MI-773 não somente aumentou a porcentagem de células p53-positivas (p<0.001), como causou uma translocação parcial de p53 ao citoplasma. MI-773 reduz a fração de células-tronco tumorais (CTT) e previne recorrência do CAC. Tratamento com MI-773 como agente único ou combinado com cisplatina reduziu a fração de CTT (p<0.05). Notavelmente, nenhum animal tratado com regime neoadjuvante de MI-773 apresentou recorrência tumoral mesmo após 300 dias de acompanhamento. Em contraste, em 62,5% dos animais do grupo controle houve recorrência (p=0.0097). Conclusões: Em resumo, os estudos demonstram que a inibição terapêutica da interação MDM2-p53 com MI-773 é uma estratégia antitumoral eficaz, é capaz de sensibilizar tumores à cisplatina e previne recorrência neste modelo pré-clínico de CAC. Coletivamente, os dados sugerem que pacientes com carcinoma adenoide cístico podem ser beneficiados através de terapias-alvo contra MDM2. / Introduction: Adenoid cystic carcinoma (ACC) is one of the most common salivary gland malignancies for which no effective chemotherapy is available. An emerging concept in cancer therapy is to target specific tumor-related proteins. Murine double minute 2 (MDM2) is an important inhibitor of the tumor suppressor p53 and has been found overexpressed in ACC. Paper #1 aimed to evaluate the effect of a novel small molecule inhibitor of the MDM2-p53 interaction (MI-773) on ACC in vitro and in vivo. Paper #2 aimed to understand the role of combining MI-773 with cisplatin, and to evaluated ACC recurrence using a neoadjuvant regimen of MI-773. Material and Methods: 3 patient-derived xenograft (PDX) models (UM-PDX-HACC-5; ACCx6; ACCx9) and 5 low passage primary human ACC cells pools (UM-HACC-1, -2A, -2B, - 5, -6) were used for in vivo and in vitro experiments. Sulforhodamine B (SRB) assay was performed to evaluate the effect of experimental agents on ACC cell viability and to determine IC50 values. Western blots revealed the expression of p53, phosphop53, MDM2, p21, PUMA, BAX, Bcl-2 and Bcl-xL. Histological sections from UM-PDXHACC- 5 tumors were stained using immunohistochemistry and immunofluorescence techniques to determine p53 status. In situ TUNEL staining revealed the number of UM-PDX-HACC-5 cells undergoing apoptosis. Flow cytometry was carried out to determine the effect of therapy on the proportion of cancer stem cells (ALDHhighCD44high) and for cell cycle analysis. For in vivo studies, mice harboring UM-PDX-HACC5, ACCx6, or ACCx9 tumors were treated following specific therapeutic protocol (MI-773 – gavage; cisplatin – intraperitoneal injection; or vehicle control), as opportunely indicated. One-way ANOVA, followed by post-hoc tests (Tukey), Mann-Whitney U-test or Student’s t-test were used to determine significant differences in tumor growth, weight, volume, apoptosis levels, cell viability, TUNEL and p53 expression. Significance was determined at p<0.05. Results: MI-773 caused tumor regression in all ACC PDX models. Daily doses of 100 mg/kg MI- 773 significantly reduced tumor volume when compared to intermediate doses (10 or 50 mg/kg MI-773) or vehicle-treated controls in all ACC xenograft models. Alternatively, mice harboring UM-PDX-HACC-5 tumors received either weekly doses of MI-773 (200 mg/kg) and/or cisplatin (5 mg/kg) for 30 days, in order to evaluate the effect of this drug combination. MI-773 as single agent caused tumor regression, being more effective than single agent cisplatin. Cisplatin showed limited therapeutic response stabilizing tumor growth. Notably, combination of MI-773 with cisplatin was more effective than single agent therapies and no tumor rebound was observed during the follow up period. Importantly, experimental protocols did not compromise the overall health status of mice. Collectively, these in vivo results demonstrate that MI-773 mediates ACC tumor regression, and sensitizes ACC xenograft tumors to cisplatin. Therapeutic inhibition of the MDM2-p53 interaction activates p53 and induces apoptosis. MI-773 potently induced the expression of p53, its downstream target p21 and apoptosis-related proteins PUMA, BAX, Bcl-2 and Bcl-xL in vitro and in vivo. Cell cycle analysis showed that therapeutic inhibition of the MDM2-p53 interaction by MI-773 causes cell cycle arrest at the first checkpoint (G1). In situ TUNEL revealed a significant higher number of cells undergoing apoptosis in UMPDX- HACC-5 tumors treated with MI-773 compared to vehicle control (p<0.05). Using the same xenograft model, immunohistochemistry assay showed that MI-773 not only increased the percentage of p53-positive cells (p<0.001), but also caused a partial translocation of p53 to the cytoplasm. MI-773 reduces the fraction of cancer stem cells (CSC) and prevents recurrence in ACC. Treatment with MI-773 as single agent or combined with cisplatin significantly reduced the fraction of CSC (p<0.05). Notably, not a single animal treated with neoadjuvant MI-773 presented recurrence even after 300 days of follow-up. In contrast, 62,5% of mice that received vehicle control experienced tumor reappearance within this time period (p=0.0097). Conclusions: In summary, these studies demonstrate that therapeutic inhibition of the MDM2-p53 interaction with MI-773 is an effective anti-tumor strategy that mediates tumor regression, sensitizes tumors to cisplatin and prevents recurrence in this pre-clinical model of ACC. Collectively, these data suggest that patients with adenoid cystic carcinoma might benefit from MDM2-targeted therapies.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:23:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissRLA.pdf: 423500 bytes, checksum: 48847345bf5289e81fbcf58a5684edce (MD5) Previous issue date: 2004-12-17 / Universidade Federal de Sao Carlos / The present work had as objective to investigate the participation of the mechanisms adrenergics of the medial preoptic area (APM) in the salivary secretion induced for the peripheral colinergic stimulation (pilocarpine injection). Holtzman rats had been used (280-320 g). A part of the animals suffered electrolytic lesion in the APM through the ticket from electric chain (1mA x 3x10s), to serve as control, and another part of the animals was submitted to the same procedures of cerebral surgery, except that it was not displayed to the electric chain ticket (SHAM). Animals that suffered the surgery from implant of cannulas guides in the APM for the injection of adrenergics agonists and antagonists were also used. The saliva was collected using previously weighted and inserted balls of cotton in the mouth of the animal that was under anesthesia with quetamina (1mg/mL/kg). Salivation was induced for intraperitoneal injection (IP) of pilocarpine (1mg/mL/kg). The APM lesion in such a way reduced peripheral the pilocarpine-induced salivation group that suffered APM lesion 24 hours before the experiment (APM lesion 340,7 ± 41,1 mg/7min, versus SHAM 428,4 ± 31,6 mg/7min) as much as in the group that suffered APM lesion 5 days before the experiment (APM lesion 310,2 ± 35,4 mg/7min, versus SHAM 494,9 ± 35,5 mg/7min). Reduction in the peripheral pilocarpine-induced salivation was not verified in those animals that had suffered APM lesion 15 days before the experiment (APM lesion 461,6 ± 81,4 mg/7min, versus SHAM 575,7 ± 34,9 mg/7min). The injection of noradrenaline (80 nmol/0,5µL) in the APM did not reduce the peripheral pilocarpine-induced salivation (NOR + Pilo 356,0 ± 36,0 mg/7min versus Saline + Pilo 475,0 ± 73,0 mg/7min). This same drug in the dose of 160 nmol/0,5 µL reduced the peripheral pilocarpine-induced salivation (NOR + Pilo 251,0 ± 50,0 mg/7min versus Saline + Pilo 468,0 ± 59,0 mg/7min). The inhibitory effect of the injection in the APM of noradrenaline (160 nmol/0,5µL) in the peripheral pilocarpine-induced salivation was not reduced by the previous injection of the antagonist of adrenoceptors &#945;2, RX-821002 in the dose of 80 nmol/0,5µL (RX + NOR + Pilo 244,1 ± 29,2 mg/7 min, versus Saline + NOR + Pilo 202,3 ± 34,8 mg/7 min). On the other hand, this same drug injected in the dose of 160 nmol/0,5µL, partially reverted the inhibitory effect of the injection in the APM of noradrenalina (160 nmol/0,5µL) in the peripheral pilocarpine-induced salivation (RX + NOR + Pilo 329,9 ± 77,8 mg/7min, versus Saline + NOR + Pilo 148,2 ± 30,3 mg/7min). The RX- 821002 injected in the APM in the dose of 320 nmol/0,5µL, failed in showing the reversion of the inhibitory effect of the injection in the APM of noradrenaline (160nmol/0,5µL) in the peripheral pilocarpine-induced salivation (RX + NOR + 261,3 ± 18,9 mg/7min, versus Saline + NOR + Pilo 320,4 ± 30,2 mg/7min). The antagonist of adrenergics receptors &#945;1, Prazosin, did not reveal efficient, therefore the inhibitory effect of the injection in the APM of noradrenaline (160 nmol/0,5µL) in the peripheral pilocarpine-induced salivation was not reduced by the previous injection of the adrenergic antagonist &#945;1, Prazosin, in the dose of 160 nmol/0,5µL (Prazosin + NOR + Pilo 223,6 ± 35,8 mg/7min, versus Saline + NOR + Pilo 256,0 ± 58,5 mg/7min). The results show that the noradrenaline injected in the APM reduces the peripheral pilocarpine-induced salivation and this effect is reduced by the previous blockade of the receiving adrenergics &#945;2 of the same area, suggesting to the existence of an adrenergic &#945;2 inhibitory mechanism of the salivation in the APM. / O objetivo deste trabalho foi investigar a participação dos mecanismos adrenérgicos da área preóptica medial (APM) na secreção salivar induzida pela estimulação colinérgica (injeção de pilocarpina) periférica. Foram utilizados Ratos Holtzman (280-320 g). Uma parte dos animais sofreu lesão na APM através da passagem de corrente elétrica (1mA x 3x10s), para servir de controle, uma outra parte dos animais foi submetida aos mesmos procedimentos de cirurgia cerebral, exceto que não foi exposta à passagem de corrente elétrica (lesão fictícia). Foram utilizados também animais que sofreram a cirurgia de implante de cânulas guia na APM para a injeção de agonistas e antagonistas adrenérgicos. A saliva foi coletada utilizando-se bolas de algodão previamente pesadas e inseridas na boca do animal que se encontrava sob anestesia por quetamina (1mg/mL/kg). A salivação foi induzida por injeção intraperitoneal (ip) de pilocarpina (1mg/mL/kg). A lesão da APM reduziu a salivação induzida por pilocarpina ip tanto no grupo que sofreu lesão da APM 24 horas antes do experimento (lesão APM 340,7 ± 41,1 mg/7min, vs. LF 428,4 ± 31,6 mg/7min) quanto no grupo que sofreu a lesão 5 dias antes do experimento (lesão APM 310,2 ± 35,4 mg/7min, vs. LF 494,9 ± 35,5 mg/7min). Não foi verificada redução na salivação induzida por pilocarpina ip nos animais que sofreram lesão 15 dias antes do experimento. (lesão APM 461,6 ± 81,4 mg/7min, vs. LF 575,7 ± 34,9 mg/7min). A injeção de noradrenalina (80 nmol/0,5µL) na APM não reduziu a salivação induzida por pilocarpina ip (NOR + Pilo 356,0 ± 36,0 mg/7min vs. Salina + Pilo 475,0 ± 73,0 mg/7min) Essa mesma droga na dose de 160 nmol/0,5µL reduziu a salivação induzida por pilocarpina ip (NOR + Pilo 251,0 ± 50,0 mg/7min vs. Salina + Pilo 468,0 ± 59,0 mg/7min). O efeito inibitório da injeção na APM de noradrenalina (160 nmol/0,5µL) na salivação induzida por pilocarpina ip não foi reduzido pela injeção prévia do antagonista de receptores adrenégicos &#945;2, RX-821002 na dose de 80 nmol/0,5µL (RX + NOR + Pilo 244,1 ± 29,2 mg/7 min, vs. Salina + NOR + Pilo 202,3 ± 34,8 mg/7min). Já essa mesma droga injetada na dose de 160 nmol/0,5µL, reverteu parcialmente o efeito inibitório da injeção na APM de noradrenalina (160 nmol/0,5µL) na salivação induzida por pilocarpina ip (RX + NOR + Pilo 329,9 ± 77,8 mg/7 min, vs. Salina + NOR + Pilo 148,2 ± 30,3 mg/7min). O RX-821002 injetado na APM na dose de 320 nmol/0,5µL, falhou em mostrar a reversão do efeito inibitório da injeção também na APM de noradrenalina (160nmol/0,5µL) na salivação induzida por pilocarpina ip (RX + NOR + Pilo 261,3 ± 18,9 mg/7 min, vs. Salina + NOR + Pilo 320,4 ± 30,2 mg/7min). O antagonista de receptores adrenégicos &#945;1, Prazosin, não se mostrou eficaz pois o efeito inibitório da injeção na APM de noradrenalina (160 nmol/0,5µL) na salivação induzida por pilocarpina ip não foi reduzido pela injeção prévia do antagonista adrenégico &#945;1, Prazosin, na dose de 160 nmol/0,5µL (Prazosin + NOR + Pilo 223,6 ± 35,8 mg/7 min, vs. Salina + NOR + Pilo 256,0 ± 58,5 mg/7min). Os resultados mostram que a noradrenalina injetada na APM reduz a salivação induzida pela pilocarpina ip e que esse efeito é reduzido pelo bloqueio prévio dos receptores adrenérgicos &#945;2 da mesma área, sugerindo a existência de um mecanismo adrenérgico &#945;2 inibitório da salivação na APM.

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-31. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:16Z : No. of bitstreams: 1 000868765.pdf: 2521331 bytes, checksum: 991fffa9898ac1fb4f910430954d436c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Bolsa Estágio de Pesquisa no Exterior (BEPE) / A invasão da glândula salivar pela forma de esporozoítos do gênero Plasmodium é um passo crucial para o ciclo de vida nos mosquitos do gênero Anopheles, e um passo obrigatório para que a transmissão da malária ocorra. A TRAP domínio-A, uma proteína de esporozoítos que é secretada na face anterior do parasita quando em contato com a glândula salivar, interage com a saglin, proteína majoritária da glândula. Esta interação é fundamental para que ocorra a invasão. Este processo ocorre em Anopheles gambiae infectado com Plasmodium0berghei ou Plasmodium0 falciparum. No Brasil, o Anopheles darlingi é o principal veto do parasita da malária. Aproximadamente 80% dos!casos de malária são!causados por Plasmodium vivax, anualmente e aproximadamente 20% por Plasmodium falciparum. Em um estudo prévio de nosso grupo, foi observado! 80% de infecção por P. 0falciparum nos An. darlingi coletados em Rondônia, Porto Velho. Isto pode ser provavelmente porque o An. darlingi pode se infectar facilmente com P. falciparum, mas não o transmite de uma maneira eficiente. Comparamos a sequência da saglin de An. gambiae com sequências!de An. darlingi, e SG1 e SG1B foram as sequências mais relacionadas, com 27% de similaridade. Sequenciamos isolados de P alciparum!brasileiros, e!aminoácidos chave no!processo de invasão da glândula se apresentaram conservados. Caracterizamos, pela primeira vez, a região da saglin de An. gambiae, responsável pela interação com o domínio-A da TRAP, e observamos que esta sequência nao encontra homologia com sequências de An. darlingi. Anofelinos!da espécie An.gambiae e An. darlingi, divergiram há aproximadamente 79 milhões de anos, e o processo de especiação provocou o surgimento de algumas barreiras para o desenvolvimento de espécies de Plasmodium, que habitam regiões geográficas distintas. Parasitas da espécie P. falciparum chegaram no Brasil a aproximadamente 500 anos junto... / Salivary!gland!invasion!by!sporozoites!of!Plasmodium!genus!is!a!crucial!step! to! life! cycle! in! mosquitoes! of! Anopheles! genus, and! an! obligate! step! to! malaria! transmission! occurs.! TRAP! A! domain,! a! sporozoite! protein! that! is! secreted! on! anterior! tip! of! parasite! upon! contact! with! salivary! glands,! interacts! with! saglin,! a! major!gland!protein.!This!interaction!is!fundamental!to!gland!invasion.!This!process! occurs! in! Anopheles0 gambiae! infected! with! Plasmodium0 berghei! or! Plasmodium0 falciparum.!In!Brazil,!Anopheles0darlingi!is!the!main!vector!of!malaria!parasite.!Near! 80%! of!malaria! cases! are! due! Plasmodium0vivax,! annually,! and! about! 20%! due! to! Plasmodium0falciparum.! In! previous! studies! of! our! lab,! it!was! observed! 80%! of! P.! falciparum! infection! in! An.0 darlingi! collected! in! Rondonia,! Porto! Velho.! This! probably!happens!because!An.0darlingi!can!be!easily!infected!with!P.0falciparum,!but! can!not!efficiently!transmit!them.!We!compare!An.0gambiae!saglin!sequence!with0An.0 darlingi0sequences,!and!SG1!and!SG1B!were!the!most!related!sequences,!with!27%! of!similarity.!Brazilian!P.0falciparum!isolated!were!sequenced,!and!key!amino!acids! related!to!salivary!gland!invasion,!are!preserved.!We!characterize!for!the!first!time,! An.0gambiae! saglin! region! responsible! to! interact!with! A!domain!of!TRAP,! and!we! observed!that!these!sequences!have!no!homology!with!An.0darling!ones.!An.gambiae... / FAPESP: 2011/09400-6 / Bolsa Estágio de Pesquisa no Exterior (BEPE): 2012/16103-0

Orientadora: Maria Izabel Souza Camargo / Coorientadora: Karen Cristiane Martinez de Moraes / Banca: Flavio Flavio Henrique Caetano / Banca: Edson Luis Maistro / Resumo: Os carrapatos, ectoparasitas hematófagos, produzem uma saliva em cuja composição encontram-se moléculas capazes de modular o sistema imuneinflamatório e hemostático do hospedeiro. No presente estudo, foi realizada a caracterização do extrato de glândulas salivares de fêmeas do carrapato Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) alimentadas por quatro dias em coelhos hospedeiros, por meio de espectrometria de massas (LCMS-IT-TOF) pela estratégia de Shotgun, que identificou 14 proteínas, com as mais diversas funções como componentes estruturais de junções celulares, do citoesqueleto, do nucleossomo, além de proteínas com ações anticoagulante e anti-inflamatória corroborando os dados presentes na literatura. Neste trabalho buscou-se, ainda, analisar o potencial antitumoral desse extrato em células das linhagens tumorais SK-HEP-1 e HEP-G2, por meio de ensaios de MTT; análise, por técnicas de Microscopia de Confocal de Varredura a Laser, do núcleo e citoesqueleto; e análise do padrão de transcrição de mRNAs envolvidos nos eventos ou mecanismos de morte celular por apoptose, incluindo os produtos dos genes Bax, Bcl-2, Caspases 3 e 9, Fas e Interleucina 1 α. Os resultados obtidos mostraram que o extrato na concentração de 50 μg/mL inibiu significativamente a proliferação celular das duas linhagens testadas. Pela análise dos núcleos e filamentos de actina das células expostas, não foram verificadas características morfológicas que indicassem processos de morte celular por apoptose. Já a análise do padrão de transcrição de mRNAs envolvidos nos mecanismos de morte celular por apoptose, evidenciou a expressão significativa de alguns genes anti e pró-apotóticos nas células tratadas quando comparadas às do grupo controle, sugerindo que a ação do extrato pode causar o desbalanço na homeostase celular, que pode desencadear processos de morte celular por apoptose, corroborando os dados apresentados na... / Abstract: Ticks, hematophagous ectoparasites produces saliva that presents molecules capable of modulating the immune-inflammatory and hemostatic system of the host. The present study was performed to characterize the salivary gland extract of female Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) fed for four days in rabbits by mass spectrometry (LCMS-IT-TOF) by shotgun strategy, which identified 14 proteins with diverse functions: as structural components of cell junctions, cytoskeleton, the nucleosome, and protein with anticoagulant and antiinflammatory actions corroborating data in the literature. In this study, we attempted to also examine the antitumor potential of this extract on tumor cell lines SK HEP-1 and HEP-G2, by MTT assay; analysis by Laser Scanning Confocal Microscopy techniques, and pattern analysis of mRNA transcription involved in cell death by apoptosis, including the products of genes Bax, Bcl-2, Caspases 3 and 9 Fas and Interleukin-1 α. The results showed that the extract obtained in concentration of 50 μg/ml significantly inhibited the proliferation of both cell lines tested. In the analysis of cores and actin filaments, of the treated cells were not observed morphological characteristics that indicate cell death processes by apoptosis. The analysis of the pattern of transcription of mRNAs involved in mechanisms of cell death by apoptosis, showed a significant expression of some apoptotic genes, in treated cells compared to the control group, suggesting that the action of the extract can cause an unbalance homeostasis in the cell, which can trigger processes of cell death by apoptosis, confirming the data presented in the literature / Mestre

Orientador: Yasmin Rodarte Carvalho / Banca: Carlos Eduardo Dias Colombo / Banca: Luana Marotta Reis de Vasconcellos / Resumo: Dentre as neoplasias de glândulas salivares com participação das células mioepiteliais, encontra-se o adenoma pleomórfico (AP), o mioepitelioma (ME), o adenocarcinoma polimorfo de baixo grau de malignidade (APBGM) e o carcinoma adenóide cístico (CAC). A proposta deste trabalho foi estudar a expressão de actinas, vimentina, calponina e caldesmona no AP, ME, APBGM e CAC, buscando estabelecer diferenças entre essas neoplasias e facilitar o diagnóstico definitivo das mesmas. Foram estudados 27 casos de AP, 6 de ME, 9 de CAC e 6 de APBGM. Foram realizadas reações imunoistoquímicas, pela técnica da streptavidina biotina peroxidase com os anticorpos HHF35 (anti-actina músculo específica), 1A4 (anti-α-actina de músculo liso), V9 (anti-vimentina), CALP (anticalponina) e h-CD (anti-h-caldesmona). Nos adenomas pleomórficos a maioria das células não luminais, fusiformes e plasmocitóides exibiu forte marcação para vimentina. As células luminais foram sempre negativas. Grande número de células não luminais e fusiformes foi positivo para α-AML e CALP e algumas para HHF35. Nos mioepiteliomas, a marcação para vimentina e HHF35 foi semelhante à dos AP. Nos carcinomas adenóide císticos a maioria das células não luminais mostrou forte coloração para VIM, α-AML e CALP. Nos APBGM houve marcação positiva para VIM. A maioria das células neoplásicas foi negativa para HHF35, α-AML e CALP. Concluiu-se que a VIM foi o melhor marcador de células mioepiteliais neoplásicas em AP, ME e CAC, seguida da α-AML e CALP nos AP e CAC. A VIM foi o melhor marcador de células neoplásicas em APBGM. / Abstract: Among the salivary gland tumors in which there are participation of myoepithelial cells, it is found the pleomorphic adenoma (PA) and the myoepithelioma (ME), which may have overlapping histopathological features with polymorphous low-grade adenocarcinoma (PLGA), and adenoid cystic carcinoma (ACC). The aim of this work is to study the expression of actins, vimentin, calponin and caldesmon in the PA, ME, PLGA, ACC, seeking to establish differences between these tumours and facilitate the definitive diagnosis of them. We studied 27 PA, 6 ME, 9 ACC, and 6 PLGA. Immunohistochemical reactions were held, by the technique of streptavidin biotin peroxidase with antibodies HHF35 (Anti-specific muscle actin, 1A4 (anti-α-smooth muscle actin), V9 (anti-vimentin), CALP (anti-calponin) e h-CD (anti-h-caldesmon). In PA, most non luminal cells, spindle and plasmocytoid cells exhibited strong stainning for VIM. The luminal cells were always negative. A lot of non-luminal and spindle cells were positive for α-SMA and CALP and some for HHF35. In ME, the staining for VIM and HHF35 was similar to PA. In ACC the majority of nonluminal cells showed strong staining for VIM, α-SMA and CALP. In PLGA, there was positive staining for VIM. Most tumoral cells were negative for HHF35, α-SMA and CALP. In conclusion, VIM was the best marker for neoplastic myoepithelial cells in PA, ME and ACC, followed by α-smooth muscle actin and CALP in PA and the ACC. VIM was the best marker for neoplastic cells of PLGA. / Mestre

Orientador: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Coorientador: Débora Colombi / Banca: Maria Anice Sallum Mured / Banca: Marcelo Urbano Ferreira / Banca: Marcos Fontes / Banca: Valber de Albuquerque Pedrosa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho", Instituto de Biociências de Botucatu / Resumo: A invasão da glândula salivar pela forma de esporozoítos do gênero Plasmodium é um passo crucial para o ciclo de vida nos mosquitos do gênero Anopheles, e um passo obrigatório para que a transmissão da malária ocorra. A TRAP domínio-A, uma proteína de esporozoítos que é secretada na face anterior do parasita quando em contato com a glândula salivar, interage com a saglin, proteína majoritária da glândula. Esta interação é fundamental para que ocorra a invasão. Este processo ocorre em Anopheles gambiae infectado com Plasmodium0berghei ou Plasmodium0 falciparum. No Brasil, o Anopheles darlingi é o principal veto do parasita da malária. Aproximadamente 80% dos!casos de malária são!causados por Plasmodium vivax, anualmente e aproximadamente 20% por Plasmodium falciparum. Em um estudo prévio de nosso grupo, foi observado! 80% de infecção por P. 0falciparum nos An. darlingi coletados em Rondônia, Porto Velho. Isto pode ser provavelmente porque o An. darlingi pode se infectar facilmente com P. falciparum, mas não o transmite de uma maneira eficiente. Comparamos a sequência da saglin de An. gambiae com sequências!de An. darlingi, e SG1 e SG1B foram as sequências mais relacionadas, com 27% de similaridade. Sequenciamos isolados de P alciparum!brasileiros, e!aminoácidos chave no!processo de invasão da glândula se apresentaram conservados. Caracterizamos, pela primeira vez, a região da saglin de An. gambiae, responsável pela interação com o domínio-A da TRAP, e observamos que esta sequência nao encontra homologia com sequências de An. darlingi. Anofelinos!da espécie An.gambiae e An. darlingi, divergiram há aproximadamente 79 milhões de anos, e o processo de especiação provocou o surgimento de algumas barreiras para o desenvolvimento de espécies de Plasmodium, que habitam regiões geográficas distintas. Parasitas da espécie P. falciparum chegaram no Brasil a aproximadamente 500 anos junto... / Abstract: Salivary!gland!invasion!by!sporozoites!of!Plasmodium!genus!is!a!crucial!step! to! life! cycle! in! mosquitoes! of! Anopheles! genus, and! an! obligate! step! to! malaria! transmission! occurs.! TRAP! A! domain,! a! sporozoite! protein! that! is! secreted! on! anterior! tip! of! parasite! upon! contact! with! salivary! glands,! interacts! with! saglin,! a! major!gland!protein.!This!interaction!is!fundamental!to!gland!invasion.!This!process! occurs! in! Anopheles0 gambiae! infected! with! Plasmodium0 berghei! or! Plasmodium0 falciparum.!In!Brazil,!Anopheles0darlingi!is!the!main!vector!of!malaria!parasite.!Near! 80%! of!malaria! cases! are! due! Plasmodium0vivax,! annually,! and! about! 20%! due! to! Plasmodium0falciparum.! In! previous! studies! of! our! lab,! it!was! observed! 80%! of! P.! falciparum! infection! in! An.0 darlingi! collected! in! Rondonia,! Porto! Velho.! This! probably!happens!because!An.0darlingi!can!be!easily!infected!with!P.0falciparum,!but! can!not!efficiently!transmit!them.!We!compare!An.0gambiae!saglin!sequence!with0An.0 darlingi0sequences,!and!SG1!and!SG1B!were!the!most!related!sequences,!with!27%! of!similarity.!Brazilian!P.0falciparum!isolated!were!sequenced,!and!key!amino!acids! related!to!salivary!gland!invasion,!are!preserved.!We!characterize!for!the!first!time,! An.0gambiae! saglin! region! responsible! to! interact!with! A!domain!of!TRAP,! and!we! observed!that!these!sequences!have!no!homology!with!An.0darling!ones.!An.gambiae... / Mestre

Introdução: O carcinoma adenoide cístico (CAC) é uma das neoplasias de glândula salivar mais comuns para o qual não se encontra quimioterapia eficaz. Um conceito emergente na terapia do câncer é atingir proteínas especificas do tumor. MDM2 (murine double minute 2) é um importante inibidor do supressor tumoral p53, e sua expressão é aumentada em CAC. O objetivo do Artigo 1 foi avaliar o efeito de um novo inibidor da interação MDM2-p53 (MI-773) no CAC in vitro e in vivo. O Artigo 2 teve como objetivo entender o papel da combinação de MI-773 com cisplatina, além de avaliar a recorrência de CAC frente a regime neoadjuvante de MI-773. Materiais e Métodos: 3 modelos de xenoenxerto derivado de paciente (XEDP, UM-PDXHACC- 5; ACCx6; ACCx9) e 5 culturas primarias de CAC (UM-HACC-1, -2A, -2B, -5, -6) foram usados para experimentos in vitro e in vivo. Ensaio de Sulforrodamina B (SRB) foi realizado para avaliar o efeito dos agentes experimentais na viabilidade celular, além de determinar valores de IC50. Western blots revelaram a expressão de p53, fosfo-p53, MDM2, p21, PUMA, BAX, Bcl-2 e Bcl-xL. Lâminas histológicas (UMPDX- HACC-5) foram avaliadas por imunohistoquímica e imunofluorescência para determinar a localização de p53. Técnica de TUNEL in situ revelou o número de células de UM-PDX-HACC-5 no processo de apoptose. Citometria de fluxo foi realizada para determinar o efeito da terapia na proporção de células-tronco tumorais (ALDHhighCD44high) e para avaliar o ciclo celular. Para os estudos in vivo, animais transplantados com tumores (UM-PDX-HACC5, ACCx6, ou ACCx9) receberam protocolo terapêutico (MI-773 – gavagem; cisplatina – injeção intraperitoneal; ou veículo controle) conforme indicado. ANOVA, seguido de testes post-hoc (Tukey), Mann-Whitney U-test ou Student’s t-test foram usados para determinar as diferenças no crescimento tumoral, peso, volume, apoptose, viabilidade celular, expressão de TUNEL e p53. Significância estatística: p<0.05. Resultados: MI-773 causa regressão do tumor em todos os modelos préclínicos de CAC. Doses diárias de 100mg/kg de MI-773 reduziram significativamente o volume tumoral quando comparado com doses intermediárias (10 ou 50 mg/kg MI-773) ou veículo controle, em todos os modelos de CAC. Alternativamente, camundongos transplantados com tumores UM-PDX-HACC-5 receberam doses semanais de MI-773 (200 mg/kg) e/ou cisplatina (5 mg/kg) por 30 dias, a fim de se avaliar o efeito da combinação das drogas. MI-773, como agente único, causou regressão tumoral, sendo mais efetivo do que a cisplatina. Cisplatina, por outro lado, mostrou limitado efeito terapêutico, estabilizando o crescimento tumoral. Notavelmente, a combinação MI-773 + cisplatina foi mais efetiva do que os agentes isoladamente, e não foi verificada retomada do tumor no período pósoperatório. Importantemente, os protocolos experimentais não comprometeram a saúde geral dos animais. Coletivamente, estes resultados in vivo demonstram que MI-773 atua como mediador na regressão tumoral de CAC e sensibiliza os tumores à cisplatina. A inibição terapêutica da interação MDM2-p53 ativa p53 e induz apoptose. MI-773 potentemente induz expressão de p53, seu alvo p21 e proteínas relacionadas à apoptose, como PUMA, BAX, Bcl-2 e Bcl-xL in vitro e in vivo. Análise do ciclo celular mostrou que a inibição terapêutica da interação MDM2-p53 por MI- 773 causa parada no ciclo celular no primeiro ponto de checagem (G1). Marcação por TUNEL revelou número significativamente maior de células em apoptose quando tumores de UM-PDX-HACC-5 foram tratados com MI-773 em comparação com controle (p<0.05) Utilizando o mesmo modelo de xenoenxerto, a técnica de imunohistoquímica mostrou que MI-773 não somente aumentou a porcentagem de células p53-positivas (p<0.001), como causou uma translocação parcial de p53 ao citoplasma. MI-773 reduz a fração de células-tronco tumorais (CTT) e previne recorrência do CAC. Tratamento com MI-773 como agente único ou combinado com cisplatina reduziu a fração de CTT (p<0.05). Notavelmente, nenhum animal tratado com regime neoadjuvante de MI-773 apresentou recorrência tumoral mesmo após 300 dias de acompanhamento. Em contraste, em 62,5% dos animais do grupo controle houve recorrência (p=0.0097). Conclusões: Em resumo, os estudos demonstram que a inibição terapêutica da interação MDM2-p53 com MI-773 é uma estratégia antitumoral eficaz, é capaz de sensibilizar tumores à cisplatina e previne recorrência neste modelo pré-clínico de CAC. Coletivamente, os dados sugerem que pacientes com carcinoma adenoide cístico podem ser beneficiados através de terapias-alvo contra MDM2. / Introduction: Adenoid cystic carcinoma (ACC) is one of the most common salivary gland malignancies for which no effective chemotherapy is available. An emerging concept in cancer therapy is to target specific tumor-related proteins. Murine double minute 2 (MDM2) is an important inhibitor of the tumor suppressor p53 and has been found overexpressed in ACC. Paper #1 aimed to evaluate the effect of a novel small molecule inhibitor of the MDM2-p53 interaction (MI-773) on ACC in vitro and in vivo. Paper #2 aimed to understand the role of combining MI-773 with cisplatin, and to evaluated ACC recurrence using a neoadjuvant regimen of MI-773. Material and Methods: 3 patient-derived xenograft (PDX) models (UM-PDX-HACC-5; ACCx6; ACCx9) and 5 low passage primary human ACC cells pools (UM-HACC-1, -2A, -2B, - 5, -6) were used for in vivo and in vitro experiments. Sulforhodamine B (SRB) assay was performed to evaluate the effect of experimental agents on ACC cell viability and to determine IC50 values. Western blots revealed the expression of p53, phosphop53, MDM2, p21, PUMA, BAX, Bcl-2 and Bcl-xL. Histological sections from UM-PDXHACC- 5 tumors were stained using immunohistochemistry and immunofluorescence techniques to determine p53 status. In situ TUNEL staining revealed the number of UM-PDX-HACC-5 cells undergoing apoptosis. Flow cytometry was carried out to determine the effect of therapy on the proportion of cancer stem cells (ALDHhighCD44high) and for cell cycle analysis. For in vivo studies, mice harboring UM-PDX-HACC5, ACCx6, or ACCx9 tumors were treated following specific therapeutic protocol (MI-773 – gavage; cisplatin – intraperitoneal injection; or vehicle control), as opportunely indicated. One-way ANOVA, followed by post-hoc tests (Tukey), Mann-Whitney U-test or Student’s t-test were used to determine significant differences in tumor growth, weight, volume, apoptosis levels, cell viability, TUNEL and p53 expression. Significance was determined at p<0.05. Results: MI-773 caused tumor regression in all ACC PDX models. Daily doses of 100 mg/kg MI- 773 significantly reduced tumor volume when compared to intermediate doses (10 or 50 mg/kg MI-773) or vehicle-treated controls in all ACC xenograft models. Alternatively, mice harboring UM-PDX-HACC-5 tumors received either weekly doses of MI-773 (200 mg/kg) and/or cisplatin (5 mg/kg) for 30 days, in order to evaluate the effect of this drug combination. MI-773 as single agent caused tumor regression, being more effective than single agent cisplatin. Cisplatin showed limited therapeutic response stabilizing tumor growth. Notably, combination of MI-773 with cisplatin was more effective than single agent therapies and no tumor rebound was observed during the follow up period. Importantly, experimental protocols did not compromise the overall health status of mice. Collectively, these in vivo results demonstrate that MI-773 mediates ACC tumor regression, and sensitizes ACC xenograft tumors to cisplatin. Therapeutic inhibition of the MDM2-p53 interaction activates p53 and induces apoptosis. MI-773 potently induced the expression of p53, its downstream target p21 and apoptosis-related proteins PUMA, BAX, Bcl-2 and Bcl-xL in vitro and in vivo. Cell cycle analysis showed that therapeutic inhibition of the MDM2-p53 interaction by MI-773 causes cell cycle arrest at the first checkpoint (G1). In situ TUNEL revealed a significant higher number of cells undergoing apoptosis in UMPDX- HACC-5 tumors treated with MI-773 compared to vehicle control (p<0.05). Using the same xenograft model, immunohistochemistry assay showed that MI-773 not only increased the percentage of p53-positive cells (p<0.001), but also caused a partial translocation of p53 to the cytoplasm. MI-773 reduces the fraction of cancer stem cells (CSC) and prevents recurrence in ACC. Treatment with MI-773 as single agent or combined with cisplatin significantly reduced the fraction of CSC (p<0.05). Notably, not a single animal treated with neoadjuvant MI-773 presented recurrence even after 300 days of follow-up. In contrast, 62,5% of mice that received vehicle control experienced tumor reappearance within this time period (p=0.0097). Conclusions: In summary, these studies demonstrate that therapeutic inhibition of the MDM2-p53 interaction with MI-773 is an effective anti-tumor strategy that mediates tumor regression, sensitizes tumors to cisplatin and prevents recurrence in this pre-clinical model of ACC. Collectively, these data suggest that patients with adenoid cystic carcinoma might benefit from MDM2-targeted therapies.

A gengivite e a periodontite constituem doenças periodontais infecciosas comuns do homem, nas quais as bactérias periodontais e seus produtos participam ativamente para indução da inflamação local e efeitos sistêmicos (ex.: coração). Sabendo que a saliva representa a primeira e grande barreira às infecções orais, este trabalho se propôs a: i) avaliar a perda óssea induzida pela doença periodontal em ratos submetidos à indução de doença, via implante de ligadura, após os intervalos de 3, 7 e 14 dias; ii) Investigar possíveis alterações de fluxo (estimulado ou não com pilocarpina) e composição salivar nesses animais; iii) avaliar a concentração / expressão de marcadores de estresse oxidativo e inflamatórios em glândulas salivares e em amostras de saliva; iv) avaliar o papel funcional da função das glândulas salivares ex-vivo na produção da amilase. Para isto, ratos Wistar machos (180 -200g) foram submetidos à indução da periodontite através do implante da ligadura, e os parâmetros inflamatórios e bioquímicos foram avaliados nesses animais. Ratos com periodontite no dia 3, quando comparado ao grupo sham, exibiram aumento significativo do fluxo salivar (estimulada com pilocarpina), produção de Ca2+, secreção de proteínas e produção de amilase na saliva, bem como aumento do conteúdo de TBARs em glândulas parótida e da amilase liberada das glândulas submandibulares (GSM). Observou-se, ainda, aumento da expressão de mRNA para iNOS e nNOS em GSM. Em contrapartida, ratos com periodontite após 7 dias exibiram redução da taxa de salivação estimulada (e não estimulada), da produção de proteínas totais e da concentração e secreção de amilase na saliva, muito embora o conteúdo sérico e salivar de TBARs e da atividade de MPO na saliva desses animais mostrou-se elevado em relação ao grupo sham. Não foram observadas diferenças significativas quanto ao conteúdo de TBARs em glândulas salivares, secreção e concentração de Ca2+ na saliva e tampouco sobre o conteúdo de proteínas nitradas em amostras de GSM desses animais. Já no 14<font face=\"Symbol\">&#176; dia visualizou-se um aumento da atividade de NOS Ca2+ dependente e da expressão mRNA das iNOS e nNOS em GSM. Ratos com periodontite, após 14 dias de indução, não exibiram aumento significativo na taxa de salivação, concentração e secreção de Ca2+ salivar, produção e concentração de proteínas totais, amilase na saliva e conteúdo de TBARs em amostras de saliva e glândulas salivares. Ainda, observou-se aumento das atividades da peroxidase/MPO, concentração de nitrato em saliva e proteínas nitradas em GSM e maior concentração de citocinas Th1 / Th2 (IL-4, IL-13 e IL-10) em amostras de GSM. Conclui-se que a indução experimental da doença periodontal em ratos , influencia o funcionamento de glândulas salivares de acordo com os dias de indução, inicialmente estimulando, em um segundo momento inibindo e posteriormente retornando aos níveis basais. Após 7 dias, caracteriza-se como o tempo ideal para a manifestação dos efeitos inibitórios na glândula. / Gingivitis and periodontitis are common infectious periodontal diseases in man, in which periodontal bacteria and their products participate actively to induce local inflammation and systemic effects (eg heart). Knowing that saliva represents the first major barrier to oral infections, this study aimed to: i) to assess bone loss due to induced periodontitis in rats, after intervals of 3, 7 and 14 days, ii) to investigate possible changes in flow (or not stimulated with pilocarpine) and salivary composition in these animals, and iii) evaluate the concentration and expression of markers of oxidative stress and inflammation in the salivary glands and saliva samples, and iv) assess the functional role of salivary gland function in ex vivo production of amylase. For this purpose, male Wistar rats (180-200g) underwent induction of periodontitis by implanting the ligature, and biochemical and inflammatory parameters were assessed. Rats with periodontitis on day 3 when compared to sham group, exhibited a significant increase in salivary flow (stimulated with pilocarpine), production of Ca2+, protein secretion and production of amylase in saliva, as well as increased contents of TBARS in the parotid and amylase released from submandibular glands (GSM). There was also increased expression of mRNA for iNOS and nNOS in GSM. In contrast, rats with periodontitis after 7 days exhibited a reduction in stimulated saliva (not stimulated), production and total protein concentration and secretion of salivary amylase, although the content of serum and salivary TBARS and the activity of MPO in saliva of these animals was high compared to the sham group. There were no significant differences in TBARS content in salivary gland secretion and Ca2+ concentration in saliva, nor on the content of nitrated proteins in samples from these animals GSM. By the 14th day envisioned an increase of NOS activity and Ca2+ dependent mRNA expression of iNOS and nNOS in GSM. Rats with periodontitis, 14 days after induction, exhibited a significant increase in the rate of salivation, concentration and salivary secretion of Ca2+, production and concentration of total protein, salivary amylase and content of TBARS in samples of saliva and salivary glands. Still, there was increased activity of peroxidase / MPO, nitrate concentration in saliva and proteins nitrated in GSM and higher concentration of Th1 / Th2 (IL-4, IL-13 and IL-10) in samples of GSM. We conclude that the experimental induction of periodontal disease in rats, influence the functioning of the salivary glands according to the days of induction, initially stimulating, in a second time and subsequently inhibiting return to baseline levels. After 7 days, is characterized as the ideal time for the expression of an inhibitory effect on the gland function.

Submitted by Leonardo Freitas (leonardo.hfreitas@ufpe.br) on 2015-04-13T15:08:30Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Rebeca Dantas.pdf: 1820617 bytes, checksum: d68fe4bebd4ec1baa79747950d532554 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-13T15:08:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Rebeca Dantas.pdf: 1820617 bytes, checksum: d68fe4bebd4ec1baa79747950d532554 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-02-27 / Objetivo: Avaliar o efeito radioprotetor do extrato aquoso da Mentha piperita na disfunção salivar de ratos irradiados. Métodos: Foram utilizados 72 ratos machos (Rattus norvegicus, Albinus, Wistar), divididos aleatoriamente em quatro grupos experimentais: Controle, correspondendo aos animais que receberam água bidestilada e não foram irradiados; Irradiado, constituído por animais que receberam água bidestilada e foram irradiados com dose única de 15Gy de radiação gama; Menta, grupo em que os animais receberam extrato aquoso de Mentha piperita, mas não foram irradiados e Menta irradiado, constituído por animais que receberam extrato aquoso de Mentha piperita e foram irradiados com dose única de 15Gy de radiação gama. A medida da secreção salivar e a velocidade do fluxo salivar foram avaliadas 15, 30 e 60 dias após o processo de irradiação. Os dados foram submetidos ao Teste não paramétrico Kruskal-Wallis e ao teste de Mann-Whitney (p < 0,05). Resultados: Com 15 dias, o volume salivar e a VFS do grupo irradiado foram reduzidos significativamente comparados ao grupo controle. Com 30 dias, o grupo irradiado apresentou redução significativa do volume salivar e VFS em relação ao grupo controle e menta. Com 60 dias, o grupo irradiado apresentou redução significativa do volume salivar e VFS comparado ao grupo menta. O grupo menta irradiado apresentou volume salivar e VFS reduzidos comparado ao grupo controle e menta. Conclusão: O extrato aquoso da Mentha piperita não protegeu as glândulas salivares nos tempos de 15, 30 e 60 dias após a irradiação. Portanto, o extrato aquoso da Mentha piperita não pode ser considerado uma substância com potencial radioprotetor para as glândulas salivares, de acordo com a metodologia utilizada.

Orientador: Solange Maria de Almeida / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-05T09:03:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Domingos_AndreadeCastro_D.pdf: 10036948 bytes, checksum: 7cd917fe62aa2831d762e0ac4943e2b4 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O objetivo do presente trabalho foi avaliar morfologicamente e imunohistoquimicamente os efeitos agudos da radiação gama em glândulas parótidas de ratos. Vinte e um animais foram divididos em 2 grupos experimentais, controle e irradiado, sendo o primeiro grupo composto por animais não expostos à radiação e o segundo formado for animais que tiveram a região de cabeça e pescoço irradiada com uma dose única de 15 Gy. As glândulas parótidas dos animais irradiados foram removidas nos tempos 4, 8, 12, 24, 48 e 72 horas após sua exposição e, posteriormente, submetidas ao processamento tecidual por meio de métodos imunohistoquímicos, para a avaliação da proteína laminina, e pela coloração por hematoxilina-eosina, para avaliação morfológica. Não foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre a intensidade demarcação da laminina do grupo controle e do grupo irradiado. Por outro lado, verificou-se o espessamento e a presença de conglomerados de laminina nas membranas basais acinares dos subgrupos irradiados, tendo sido detectadas diferenças significativas entre o grupo controle e o subgrupo 72 horas (p = 0,0315). A análise morfológica revelou a presença de figuras de necrose nuclear, vacuolizações e severa atrofia dos ácinos, especialmente nos grupos 8 e 12 horas. O início do processo de reparo se deu no tempo 24 horas, mas não foi observada recuperação completa nos últimos tempos avaliados. Os resultados sugeriram que os efeitos deletérios da radiação ionizante podem ser um dos fatores responsáveis pelo remodelamento da matriz extracelular / Abstract: The aim of this study was to evaluate the morphological and immunohistochemical characteristics of gamma radiation acute effects on rat parotid glands. Twenty-one animals were divided into two groups: control and irradiated ones. The former was composed by non-exposed animals, while the latter was formed by rats which had their necks and heads irradiated with 15 Gy. The parotid glands were excised at 4, 8, 12, 24, 48 and 72 hours after irradiation and, then, were submitted to immunohistochemical methods, for the evaluation of the laminin, and to hematoxylin-eosin staining, for the analysis of the morphology. Laminin staining intensities between irradiated and non-irradiated salivary glands showed no statistically significant differences. Nevertheless, it was observed that laminin thickening and laminin-positive conglomerations demonstrated significant differences between the control and the 72-hour-subgroup (p= 0,0315). The morphological analysis revealed the presence of vacuolation, acinar atrophy and necrosis, especially by 8 and 12 hours after irradiation. Regeneration of the tissue started by 24 hours, but it was not complete at 48 and 72 hours after exposure. The results showed that radiation may be one of the factors that induce extracellular matrix remodeling / Doutorado / Radiologia Odontologica / Doutor em Radiologia Odontológica