Orientador: Maria de Lourdes Garboggini da Gama / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-19T23:46:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LimaJunior_GersonMendesde_D.pdf: 2064230 bytes, checksum: dcd99a6419c6e3d90d3a3bf64dba2237 (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: Foi estudado o efeito da amputação dos incisivos inferiores s'obre as glândulas submandibulares de ratos machos castrados. Demonstramos que nestes animais, injetados com metotrexato Q,75 mg/kg, i.p., e submetidos ã amputação dos in cisivos inferiores',ocorre aumento do peso relativo das glându1as' submandibu1ares - não ocorrendo o mesmo em ratos cas- , trados que só .sofr'eram amputação dos incisivos inferiores. Assim, utilizando-se ratos que foram castrados aos 30 dias de idade, prQcedemQ~ a amputação dos incisivos inferiores e administramosDurateston 250R. Os resultados indicam um peso gla~ dular relativo menor para as glândulas dos ratos que receberam a adminis.tração da referida droga, por via i .m.. Animais machos castr'ados tambem foram submetidos à administração de metotrexato ou ci.clofosfamida e ã amputação única dos incisivos inferiores e administração de reserpina ou pindolol, com a finalidade de verificar se tais drogas bloqueadoras do simpático impediriam os aumentos relativos das glândulas submandibulares, que eram retiradas e pesadas no 79 dia após a amputação dos incisivos inferiores. Nos animais que se injetou matotrexato mais reserpina e se fez amputação dos incisivos inferiores, não houve significante aumento ou diminuições dos pesos glandulares relativos quando comparado com os contro- 1es, apesar de o peso glandular medio ter sido menor. Já os ratos i..njetadoscom reserpina 25 mg/kg e ciclofosfamida, apre sentaram pesos relativos maiores que os ratos do grupo injetados com r'e.serpinae metotrexato e com incisivos inferiores am- putados. Comparando-se ratos castrados, nos quais se injetava pindolol mais ciclofosfamida, não foi verificado diferença sig-. nificante entre os pesos glandulares médios destes ratos e do grupo controle, isto ê, ratos castrados, com incisivos inferiores amputados mais administração de pindolol. Os resultados dos experimentos foram submetidos ã análise de variância e ao teste de Tuk.ey / Abstract: Not informed. / Doutorado / Farmacologia / Doutor em Odontologia

Na presente investigação estudamos a possível influência da falta da insulina sobre a atividade de duas enzimas importantes para a via glicolítica: a hexoquinase (HK) e a fosfofrutoquinase-1 (PFK-1), nas glândulas submandibular (GLSM) e parótida (GLPA) de ratos. Para isso, em ratos mantidos em jejum durante aproximadamente 15 horas foi injetado, via intraperitonial, estreptozotocin dissolvido em tampão citrato 0,1M pH 4,5 (60 mg/Kg de peso corporal). 48 horas após a indução, o sangue dos animais foi coletado e a glicemia determinada. Somente aqueles ratos que apresentaram glicemia igual ou acima de 350mg de glicose/100 ml de sangue foram utilizados. Os animais foram sacrificados 30 dias após a indução do estado diabético, por traumatismo craniano. As GLSM e GLPA foram removidas e analisadas para atividade e distribuição das enzimas HK e PFK-1. A enzima HK foi determinada no citosol (fração solúvel) e ligada a mitocôndria (fração ligada). A enzima PFK-1 foi determinada no citosol (fração solúvel) e ligada ao citoesqueleto (fração ligada) em dois pHs: pH 6,9, sujeito a regulação alostérica e pH 8,2, em que mostra atividade máxima. Na GLPA observamos aumento da atividade da HK tanto na fração solúvel (aproximadamente 33%) quanto na fração ligada a mitocôndria (aproximadamente 85%). Relativamente a isoenzimas de HK, não verificamos alteração no estado diabético. A atividade da enzima PFK-1 na GLPA não apresentou alterações quer considerando a forma sujeita a regulação alostérica, quer a forma com atividade máxima e portanto, não sujeita a regulação. Na GLSM constatamos uma redução da enzima HK ligada a mitocôndria de aproximadamente 74%, não havendo alteração da forma determinada no citosol (forma solúvel). Relativamente às formas isoenzimáticas, verificamos a perda de uma forma isoenzimática tanto na fração solúvel quanto na fração ligada. Por outro lado, observamos um aumento da atividade da PFK-1 da fração solúvel de aproximadamente 50% quando determinada em pH 6,9, que reflete a forma regulada alostericamente, e de aproximadamente 84% quando determinada em pH 8,2 e, portanto, não sujeito a regulação. Contrariando ao esperado, o conteúdo de Fru-2,6-P2 nas GLSM de ratos diabéticos apresentou redução de aproximadamente 42% enquanto a atividade da PFK-2 também apresentou redução. / We have studied in the present investigation a possible influence of the diabetic state of the rats on the activity of two important enzymes of the glycolitic pathway, namely, the HK and PFK-1 of the submandibular and parotid gland. The diabetic state was induced by an injection of streptozotocin (60mg/Kg body weight) dissolved in 0,1M citrate buffer pH 4,5 in rats overnight fasted. Forty-eight hours after the injection, blood was collected and the glucose determined. Only those animals presenting a blood glucose equal or above 350mg glucose/100ml blood we used in this experiment. The animals were sacrificed by cranial traumatism, thirty days after the induction of the diabetes, the submandibular and parotid glands were removed and analyzed for activity and distribution of the enzymes HK and PFK-1. The activity of the enzyme HK was determined in the cytosol (soluble fraction) and bound to mitochondria (solubilized fraction). The activity of the enzyme PFK-1 was determined in the cytosol (soluble fraction) and bounded to cytoscheletal (bound fraction)at two pHs, pH 6,9 that respond to allosteric regulation and pH 8,2 in which it show maximum activity. In the parotid gland it was observed an increase in the HK activity in both fractions, soluble and bond to mitochondria, of about 33% and 85% respectively. It was not possible to observe alterations in the isoenzymes profile. The activity of PFK-1 in the parotid gland showed no variation either considering the soluble fraction on the bound form, at both pHs in which it was determined. In the submandibular gland, it was verified a reduction of the bound HK of about 74%, but no variation in the soluble form. Concerning the isoenzymes, it was observed the disappearance of an isoenzyme in both fraction. On the other hand, we observed an increase in the activity of PFK-1 of the soluble fraction of about 50%, when determined at pH 6,9, pH in which it respond to allosteric control, and about 84% when determined at pH 8,2. Contrary to what it was expected, the content of Fru-2,6-P2 were reduced in the submandibular gland of diabetic rats.

Orientador: Fábio Camargo Abdalla / Banca: Rogilene Aparecida Prado / Banca: Edmilson Amaral de Souza / Resumo: Nas abelhas, a espermateca, órgão responsável por estocar os espermatozoides e mantê-los viáveis após a cópula, está presente nas fêmeas da maioria dos insetos,. Associadas a estas, encontram-se as glândulas espermatecais, cuja função é sintetizar o fluido espermatecal no qual os espermatozoides ficam imersos. As rainhas das espécies de abelhas eussociais, pertencentes as tribos Apini e Meliponini, podem estocar os espermatozoides dos machos por anos devido a sua longevidade ser maior do que a de outras espécies de abelhas. Contudo, espécies que apresentam longevidade e taxa de oviposição menores, como é o caso, dos Bombini e das abelhas solitárias, também possuem glândulas espermatecais e espermateca, e mecanismos de preservação dos espermatozoides. Não se sabe ao certo como a espermateca conserva os espermatozoides e se a secreção das glândulas espermatecais são as únicas responsáveis pela formação do fluido espermatecal, o qual se supõe ser o responsável por manter os espermatozoides viáveis nas espécies de abelhas. O fluido espermatecal é formado também pelo conteúdo seminal dos machos, produzido por suas glândulas de muco. Em abelhas, a composição química e a função da secreção das glândulas espermatecais das fêmeas e das glândulas de muco dos machos ainda são pouco estudadas e não se tem nada conclusivo na literatura. Com o intuito de verificar se a organização social e o estado reprodutivo das abelhas refletem em diferenças no tipo de secreção contido nas espermatecas, nas glândulas espermatecais e nas glândulas de muco foi realizado um estudo comparado da histoquímica e do padrão de bandeamento proteico das glândulas de muco, bem como do conteúdo da vesícula seminal dos machos, juntamente com as glândulas espermatecais e do fluido espermatecal das fêmeas com diferentes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Spermatheca is the organ responsable to store the sperm and keep it viable after the copula. In association with this organ, we can find the spermathecal glands, which synthesize the spermathecal fluid that maintains the sperm. The eusocial bee queens of Apini and Meliponini tribes can store the male sperm for years due to its longevity is bigger than the others bee species. However, species with smaller longevity and oviposition rates like Bombini and lonely bees also have spermatheca, spermathecal glands and sperm preserving mechanisms. It is not known for sure how the spermatheca preserves the sperm and if the spermathecal glands secretion is the only responsible for the spermathecal fluid generation, which is believed to keeps the sperm viable. Some studies show that the spermathecal fluid is also formed by male seminal content produced in mucus glands. The spermathecal glands function and chemical composition in female bees and the male mucus glands are still less studied and there is nothing conclusive in the literature. This study aims to verify if different oviposition rates, longevity and social organization reflects in thta different kinds of secretion contained in spermatheca, spermathecal and mucus glands. For this I made a compared study of the histochemistry and protein band pattern of: 1. mucus glands secretion; 2. male seminal vesicle content plus spermathecal glands secretion; and 3. female spermathecal fluid. This comparison was done in diverse sociability levels and fecundity conditions: virgins and inseminated; with three bee species: Centris (ptilotopus) scopipes - solitary, Bombus morio - primitively eusocial, and Melipona quadrifasciata anthidioides - advanced eusocial. M. quadrifasciata anthidioides males don't have mucus gland, so in this case the seminal vesicle content was analyzed / Mestre

Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Luiz Antonio Guimarães Cabral / Banca: Ney Soares de Araujo / Banca: Ronaldo Maia Melhado / Banca: Vera Cavalcanti de Araujo / Resumo: Os tumores de glândulas salivares humanas originados do ducto intercalar apresentam grande variação histológica e citológica, atribuída principalmente à presença da celula mioepitelial. Neste estudo, pesquisou-se a presença dos filamentos intermediàrios vimentina e citoqueratina, de microfilamentos de actina e do antígeno epitelial de membrana (EMA), em 30 neoplasias originadas do ducto intercalar: 5 adenomas pleomórficos, 3 adenomas de celulas basais, 5 mioepiteliomas, 7 carcinomas adenóide císticos (CAC) e 10 adenocarcinomas polimorfos de baixo grau de malignidade (APBGM), com o intuito de verificar o grau de diferenciação das células neoplásicas e uma possível relação da diferenciação mioepitelial com a presença de secreção intra-luminal. Foram realizadas reações imuno-histoquímicas para dupla evidenciação de antígenos. Nas neoplasias em que há diferenciação para ducto intercalar (adenoma pleomórfico, adenoma de células basais e CAC), as células luminais expressam as citoqueratinas 7, 8, 18, 19 e eventualmente co-expressam a citoqueratina 14. Alguns ductos apresentam celulas luminais positivas para EMA, especialmente quando há secreção em seu lúmen. As células externas das estruturas ductais e demais células com características mioepiteliais expressam vimentina e co-expressam eventualmente actina e/ou citoqueratina 14, sendo sempre negativas para as demais citoqueratinas e para EMA. A co-expressao de actina, vimentina e citoqueratina 14, nas células externas das estruturas ductais, e mais comum quando a célula luminal é positiva para EMA. As células plasmocitóides, presentes no mioepitelioma e no adenoma pleomórfico, expressam vimentina e raramente as citoqueratinas 7, 8, 18 e 19, eventualmente co-expressando a citoqueratina 14, e são negativas para os outros antígenos pesquisados. Nos tumores em que não há diferenciação para ducto intercalar (APBGM e adenoma de células basais sólido)... / Abstract: Human salivary gland tumors originated from intercalated ducts present a broad range of histologic and cytologic patterns, mainly due to the presence of myoepithelial cells. The aim of this study is to verify the differentiation grade of neoplastic cells and a possible relation between myoepithelial cell differentiation and the presence of luminal secretory contents. The expression of vimentin and cytokeratin (CK) intermediate filaments, actin myofilament and epithelial membrane antigen (EMA) was investigated by double labeling immunocytochemical technique, in thirty salivary gland neoplasms: 5 pleomorphic adenomas, 5 myoepitheliomas, 3 basal cell adenomas, 7 adenoid cystic carcinomas (ACC) and 10 polimorphous low grade adenocarcinomas (PLGA). Tumors with intercalated duct differentiation (pleomorphic adenomas, basal cell adenomas and ACC) express CKs 7, 8, 18 and 19 in the luminal cells and coexpress eventually CK14 with these CKs. Some luminal cells stained with anti-EMA antibody, mainly where a secretory content in the lumen was observed. Outer ductal cells and other myoepithelial-like cells express vimentin, sometimes coexpressing actin and/or CK14 with vimentin. Plasmacytoid cells in myoepitheliomas and pleomorphic adenomas express vimentin and rarely CKs 7, 8, 18 and 19, sometimes coexpressing these CKs with CK14 but they are negative for the remaining antigens. Tumors without intercalated duct differentiation (solid basal cell adenoma and PLGA) express vimentin and CKs 7, 8, 14 and 18, sometimes coexpressing CKs 8 and 18 with CK14. In conclusion, in tumors with intercalated duct differentiation, myoepithelial cells express vimentin and sometimes coexpress actin and/or CK14 with vimentin, never coexpressing other CKs with vimentin. CK14 and actin are independently expressed by myoepithelial cells, so their expression is probably induced by different stimulus. However, the secretory function of luminal cells, visualized by EMA staining,....

Orientador: Yasmin Rodarte Carvalho / Coorientador: Luiz Eduardo Blumer Rosa / Banca: Adriana Aigotti Haberbeck Brandão / Banca: Carlos Eduardo Dias Colombo / Resumo: Os tumores de glândulas salivares apresentam uma grande diversidade celular, morfológica e de comportamento, tornando muitas vezes difícil seu diagnóstico, tratamento e prognóstico. Um componente importante desses tumores é a matriz extracelular, cuja remodelação é regulada por enzimas como as metaloproteinases da matriz (MMPs) e seus inibidores teciduais (TIMPs). O objetivo deste estudo foi avaliar a presença e expressão de MMP-9 e TIMP-1 em neoplasias de glândulas salivares. Foram estudados 20 casos de adenoma pleomórfico (AP), 05 de mioepitelioma (MIO), 17 de carcinoma mucoepidermóide (CME), 10 de adenocarcinoma polimorfo de baixo grau de malignidade (APBG) e 08 de carcinoma adenóide cístico (CAC), que foram selecionados dos arquivos do laboratório de Patologia Cirúrgica da FOSJC/UNESP. O material foi submetido à reação imuno-histoquímica para detecção de MMP-9 e TIMP-1, pelo método da estreptavidina-biotina peroxidase. Foi feita avaliação semiquantitativa da marcação e os dados foram submetidos à analise estatística descritiva e inferencial utilizando o programa Minitab (versão 16.0). Foram aplicados os testes Mann-Whitney e de sinais de postos de Wilcoxon, com nível de significância de 5%. Verificou-se que existe variação da expressão dos marcadores entre as diversas estruturas de cada lesão, com predomínio de TIMP-1 sobre MMP-9. Entre as neoplasias, observou-se maior expressão de TIMP-1 no AP, no CME e no CAC e de MMP-9 no MIO e no APBG, porém, sem diferença estatisticamente significante. Na comparação da marcação para cada anticorpo, entre lesões benignas e malignas, não se observou diferença estatisticamente significativa. Concluiu-se que a maioria das neoplasias de glândula salivar apresenta MMP-9 e TIMP-1 e que o grau de expressão dessas proteínas é... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The salivary gland tumors present very diverse cellular morphology and behavior, often making their diagnosis, treatment and prognosis difficult. An important component of tumors is the extracellular matrix, which is regulated by remodeling enzymes such as matrix metalloproteinases (MMPs) and their inhibitors (TIMPs). The objective of this study was to evaluate the role of MMP-9 and TIMP-1 in salivary gland neoplasms. We studied 20 pleomorphic adenomas (PA), 05 myoepitheliomas (MIO), 17 mucoepidermoid carcinomas (MEC), 10 polymorphous low-grade adenocarcinomas (PLGA) and 08 adenoid cystic carcinomas (ACC), which were selected from the files of the Laboratory of Surgical Pathology from FOSJC / UNESP. The material was subjected to immunohistochemical staining for detection of MMP-9 and TIMP-1 by the method of the streptavidin-biotin peroxidase. A staining semiquantitative assessment was made and the data were submitted to descriptive and inferential statistical analysis using Minitab (version 16.0). We applied the Mann-Whitney and Wilcoxon signs of posts tests, with a significance level of 5%. It was found that there is variation in the expression of markers among the various structures of each lesion, with a predominance of TIMP-1 over MMP-9. Among the tumors, we observed greater expression of TIMP-1 in PA, MEC and ACC and of MMP-9 in MIO and PLGA, however, any statistically significant difference has not been observed. Comparing the labeling for each antibody among benign and malignant lesions, there was no statistically significant difference. It was concluded that most of the salivary gland neoplasms express MMP-9 and TIMP-1 and that the degree of expression of these proteins is variable among the structures of the same lesion and among the various salivary neoplasms, regardless of their benign... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Yasmin Rodarte Carvalho / Co-orientador: Renata Falchete do Prado / Banca: Luana Marotta Reis de Vasconcellos / Banca: Ana Cristina Posch Machado / Resumo: As neoplasias de glândulas salivares compreendem cerca de 5% das neoplasias da região oral e maxilofacial. O estudo sobre a linfangiogênese pode permitir a melhor compreensão destas patologias. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre as características histológicas, a expressão do fator de crescimento vascular endotelial linfático (VEGF-C), a densidade microvascular linfática (DML) e a proliferação celular, em neoplasias de glândulas salivares. Foram analisados 67 casos de neoplasias benignas e malignas dos arquivos do Laboratório de Patologia da FOSJC-UNESP. O diagnóstico das lesões foi confirmado pela análise de lâminas coradas por HE. O material foi submetido à reação imuno-histoquímica para avaliar a proliferação celular pela detecção do Ki-67, da DML pelo D2-40 e do VEGF-C pelo anticorpo anti-VEGF-C. Foi realizada análise quantitativa da DML e do índice de proliferação celular e semi-quantitativa do VEGF-C. Os resultados foram submetidos à análise estatística descritiva e inferencial utilizando o programa Minitab (versão 16.0), sendo aplicados os testes de Pearson, Kruskal Wallis e t-Student, adotando-se o nível de significância de 5%. Analisando as lesões separadamente, não houve significância na comparação entre o índice de proliferação celular e a DML com relação à expressão de VEGF-C, exceto no adenocarcinoma polimorfo de baixo grau, em que maior proliferação foi observada nos casos com forte marcação para VEGF-C. Em nenhuma neoplasia foi observada correlação entre o índice de proliferação celular e a DML. Comparando-se os grupos das neoplasias benignas (25 casos) e malignas (42 casos), verificou-se que o índice de marcação para o Ki-67 e a DML não apresentaram diferença estatística significante e que houve maior expressão de VEGF-C em neoplasias benignas. Concluiu-se que na maioria dos tumores de glândula... / Abstract: The salivary gland neoplasms comprise about 5% of all cancers of the oral and maxillofacial region. The study of lymphangiogenesis may provide a better understanding of these diseases. The aim of this study was to evaluate the relationship among histological features, expression of lymphatic vascular endothelial growth factor (VEGF-C), lymphatic vessel density (LVD) and cell proliferation in salivary gland neoplasms. Sixty seven cases of benign and malignant neoplasms of the Laboratory of Pathology FOSJC-UNESP were analyzed. The diagnosis of the lesions were confirmed by analysis of slides stained with HE. The material was subjected to immunohistochemical staining to evaluate cell proliferation by detection of Ki-67, LVD by D2-40 and VEGF-C by anti-VEGF-C. Quantitative analysis of LVD and cell proliferation index and semi-quantitative analysis of VEGF-C were performed. The results were analyzed by descriptive and inferential statistics using Minitab (version 16.0), applying Pearson, Kruskal Wallis and t-test, with a significance level of 5%. Analyzing the lesions separately, there was no significance when comparing cell proliferation index and LVD to the expression of VEGF-C, except in polymorphous low grade adenocarcinoma, in which a higher proliferation index was observed in cases with strong staining of VEGF-C. There was no correlation between cell proliferation and LVD in any neoplasm. Comparing the groups of benign (25 cases) and malignant neoplasms (42 cases), the labeling index for Ki-67 and LVD showed no statistically significant difference and there was increased expression of VEGF-C in benign lesions. It was concluded that in the majority of salivary gland neoplasms there is no relation among the rate of cell proliferation, the expression of VEGF-C and LVD and that the cellular proliferation does not correlate with the LVD. Between benign and malignant neoplasms, cel... / Mestre

Orientador: Denise Fecchio / Coorientador: Célia Regina Nogueira / Banca: Selma Giorgio / Banca: Dulce Helena Jardim Costantino / Banca: Paula de Oliveira Montandon Hokama / Banca: Rozany Mucha Dofloth / Resumo: A importância do estrógeno (E2) no desenvolvimento do câncer de mama é bem estabelecido na literatura. O uso de antagonistas de E2 para o tratamento de tumores positivos para o receptor de estrógeno mostra-se importante para a sobrevida de pacientes acometidas pela doença. Amphiregulin (Areg), um fator de crescimento regulador multifuncional que pode ser induzido por estrógeno, possui papel central no desenvolvimento da glândula mamária e na morfogênese de órgãos e é expresso tanto em tecidos normais como cancerosos. Estudos clínicos sugerem que amphiregulin também desempenha papel importante na progressão do câncer da mama humano e a sua expressão aumentada tem sido associada com doença agressiva. Para investigar o mecanismo pelo qual o E2 induz a expressão de AREG, células MCF-7 e MDA-MB-231 foram tratadas durante 10 minutos, 30 minutos, 1 hora e 4 horas com veículo (controle) ou E2 isoladamente ou em associação com Fulvestrant (ICI, inibidor do receptor de estrógeno), Actinomicina D (ACTD, inibidor da transcrição gênica), Ciclohexamida (CHX, inibidor da síntese proteica) ou LY (inibidor da via PI3K). Os inibidores também foram utilizados isoladamente. O RNAm foi extraído das células pelo método de trizol e a expressão de AREG foi analisada por qRT-PCR. O tratamento de ambas as células com E2 induziu aumento do RNAm de AREG em todos os tempos analisados. Esse aumento foi parcialmente dependente de ER nas células MCF-7 nos tempos de 10 minutos, 1 e 4 horas. Em 30 minutos não foi observado a ligação do E2 com o ER para que houvesse o aumento da expressão do gene alvo. Nas células MDA-MB-231 o estrógeno aumentou o RNAm de AREG por pelo menos duas vias distintas em todos tempos analisados. Uma das vias ativa a via PI3K para que este efeito ocorra. Nossos resultados demonstram que o E2 é capaz de induzir a expressão de AREG em linhagens de células de câncer de ... / Abstract: The relevance of estrogen in breast cancer development is well established in the literature. The use of E2 antagonists for ER-positive breast cancer treatment is shown to be important to patients' survival. Amphiregulin, a multifunctional growth regulator factor that may be induced by estrogen plays a central role in development of mammary glands and organ morphogenesis, is expressed in both normal and cancerous tissues. Clinical studies suggest that amphiregulin also is important in human breast cancer progression and its expression has been associated with aggressive disease. To investigate the mechanism whereby E2 induces AREG expression, MCF-7 and MDA-MB-231 cells were treated for 10 minutes, 30 minutes, 1 hour or 4 hours with vehicle (control) or estrogen (E2) isolated or in association with Fulvestrant (ICI, estrogen receptor inhibitor), Actinomycin D (ACTD, gene transcription inhibitor), Cycloheximide (CHX, protein synthesis inhibitor ) or LY (PI3K inhibitor). The inhibitors were also used alone. mRNA was extracted from the cells by the Trizol method and AREG expression analyzed by qRT-PCR. Treatment of both cell types with E2 increased AREG mRNA expression at all moments. This increase was partially ER-dependent in MCF- 7 cells at 10 minutes, 1 and 4 hours. At 30 min, no binding of E2 to ER was obseved. In MDA-MB-231 cells, the estrogen-induced AREG mRNA was enhanced by two distinct pathways at the moments analyzed and PI3K pathways participated in one of them. Our results showed that E2 was able to induce the AREG expression in breast cancer cell lines in an ER-dependent and -independent manner / Doutor

Orientador: José Jurandir Fagliari / Coorientador: Ana Maria Centola Vidal / Banca: Paulo Francisco Domingues / Banca: Daniela Gomes Silva / Banca: Kalina Maria de Medeiros Gomes Simplício / Banca: Viviani Gomes / Resumo: O estudo teve como objetivo avaliar as alterações da secreção láctea de cabras com mastite mediante o uso do teste da caneca de fundo escuro, California Mastitis Test (CMT), contagem de células somáticas (CCS) e perfil microbiológico, bem como determinar o perfil bioquímico, em especial de proteínas de fase aguda, do soro sanguíneo e soro lácteo de cabras com mastite clínica ou subclínica, de ocorrência natural. Foram constituídos três grupos experimentais compostos de 30 metades mamárias de cabras sadias, com secreção láctea negativa na prova da caneca de fundo escuro, CMT e no exame microbiológico (grupo controle - G1), 30 metades mamárias com secreção láctea negativa ao teste da caneca de fundo escuro, reação moderada (2+) ou intensa (3+) no CMT e positividade no exame microbiológico (Grupo mastite subclínica - G2) e 12 metades mamárias com secreção láctea positiva na prova da caneca de fundo escuro e no exame microbiológico (grupo mastite clínica - G3). Após antissepsia dos tetos foram colhidas amostras de leite para CCS, cultura microbiológica e determinação do perfil bioquímico do soro lácteo, inclusive o proteinograma mediante fracionamento em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), e amostras de sangue venoso para determinação do perfil bioquímico sérico. A contagem automática de células somáticas (CCS) e por contagem microscopia direta foi maior nas amostras de secreção láctea das cabras com mastite subclínica (G2: 4.500.000 células/mL e 20.830.000 células/mL, respectivamente) e com mastite clínica (G3: 7.500.000 células/mL e 39.100.000 células/mL, respectivamente). Staphylococcus aureus, Staphylococcus coagulase negativa (SCN), Staphylococcus coagulase positiva (SCP), Corynebacterium spp. e Streptococcus spp. foram os microrganismos isolados nas amostras de leite das cabras do G2 e G3. As amostras de soro lácteo das cabras do G2 e G3 apresentaram maiores atividades das enzimas... / Abstract: The study aimed to evaluate the changes in milk from goats with mastitis by using the strip cup test, California Mastitis Test (CMT), somatic cell count (SCC) and microbiological profile as well as to determine the biochemical profile, especially acute phase proteins, in blood serum and whey from goats with naturally occurring clinical or subclinical mastitis. Three experimental groups were formed by 30 mammary glands from healthy goats with milk samples negative to strip cup test, CMT and microbiological examination (control group - G1); 30 mammary glands with milk samples negative to strip cup test but with moderate (2+) or intense (3+) reaction in CMT and microbiological examination (group with subclinical mastitis - G2), and 12 mammary glands with positive results to strip cup test and microbiological examination (group with clinical mastitis - G3). After asepsis of the teats milk samples were collected for SCC, microbiological culture, and to determine the biochemical profile in whey, including proteinogram by fractionation in poliacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). At the same time, blood samples were obtained to determine the serum biochemical profile. Automatic and microscopic methods were higher in milk samples from goats with subclinical mastits (G2: 4,500.000 cells/mL e 20,830,000 cells/mL, respectively) e with clinical mastitis (G3: 7,500,000 células/mL e 39,100,000 cells/mL, respectively). Staphylococcus aureus, Coagulase-negative Staphylococcus (CNS), Coagulase-positive Staphylococcus (CPS), Corynebaterium spp. and Streptococcus spp. were the microorganisms isolated in milk samples from goats of G2 and G3. Whey samples from goats of G2 and G3 showed higher activity of alkaline phosphatase (G2: 122 U/L and G3: 207 U/L) and gamma-glutamyltransferase (G2: 483 U/L and G3: 571 U / L), and higher concentrations of albumin (G2: 0.18 g/dL and G3: 0.29 g/dL), total protein (G2: 1.50 g/dL and G3: 1.67 g/dL), chlorides ... / Doutor

Resumo não disponível.

Os nucleotídeos da adenina são moléculas sinalizadoras no meio extracelular e estão envolvidas em importantes condições fisiológicas e patológicas. O papel do ATP como um mediador extracelular e neurotransmissor têm sido descrito em vários sistemas, inclusive na glândula salivar. Nas glândulas salivares, o ATP é liberado juntamente com acetilcolina e noradrenalina a partir do sistema de inervação da glândula. Esse ATP atua sobre os receptores P2X4, P2X7, P2Y1 e P2Y2, regulando importantes processos secretórios. Os eventos induzidos pelos nucleotídeos extracelulares são controlados pelas ectonucleotidases, que incluem membros da família das ecto-nucleosídeo trifosfato difosfoidrolases (E-NTPDases), ecto-nucleotídeo pirofosfatase/fosfodiesterases (E-NPPs) e ecto-5’-nucleotidase (ecto-5’N). Assim, no presente estudo nós investigamos a presença dessas ectonucleotidases nas células acinares da glândula submandibular. A presença de uma E-NTPDase e uma ecto-5'-nucleotidase foi identificada com as seguintes propriedades bioquímicas para a hidrólise de ATP, ADP e AMP: pH ótimo entre 6,5-8,0, requerimento de cátions divalentes (Ca2+ e Mg2+) e valores de Kmapp na faixa de micromolar. As células acinares das glândulas salivares também foram capazes de hidrolisar o p-Nph-5´-TMP, sugerindo a presença de uma E-NPP. A enzima descrita nesse estudo é dependente de cátions metálicos divalentes (Ca+2 e Mg+2), sendo que a hidrólise do p-Nph-5´-TMP foi máxima na presença de níveis basais de cátions e em pH entre 8,5 e 9,0. Também se analisou o efeito de vários compostos sobre a hidrólise do ATP, ADP e p-Nph-5´-TMP e verificou-se que aazida sódica, inibidor de várias NTPDases, inibiu a hidrólise do ATP e do ADP, e não teve efeito sobre o p-Nph-5´-TMP.A ouabaína e o NEM, inibidores clássicos de ATPases, não afetaram significativamente a hidrólise de ATP, ADP e p-Nph-5´- TMP, já o AMP, inibiu a hidrólise do p-Nph-5´-TMP. Esses resultados sugerem a co-existência de diferentes ectonucleotidases nas células acinares, que estão relacionadas com a hidrólise dos nucleotídeos e que podem atuar em diferentes situações. Também avaliamos o efeito de fármacos antidepressivos na atividade e expressão das enzimas envolvidas na hidrólise dos nucleotídeos. Em relação à atividade enzimática, observamos que a fluoxetina induziu um aumento na hidrólise de ATP e ADP e o moclobemide e a imipramina induziram um aumento significativo na hidrólise de todos os nucleotídeos (ATP, ADP e AMP). A expressão relativa da NTPDase1-3 aumentou e da ecto-5´-nucleotidase diminuiu com a imipramina. A fluoxetina aumentou a expressão relativa da NTPDase3 e ecto-5´-nucleotidase e inibiu a expressão relativa da NTPDase2. O moclobemide aumentou a expressão relativa de todas as enzimas. Em relação à atividade enzimática da NPP, os tratamentos com imipramina, fluoxetina e moclobemide levaram a um aumento significativo dessa atividade, enquanto as expressões relativas das NPP-1, NPP-2 e NPP-3 não apresentaram alteração. A presença de ectonucleotidases modulando os níveis dos nucleotídeos nas células acinares é importante tendo em vista o papel do ATP nos mecanismos de secreção salivar. / Adenine nucleotides are extracellular signaling molecules and are involved in important physiological and pathological conditions. The role of adenosine triphosphate (ATP) as an extracellular mediator and neurotransmitter has been described in various systems, including salivary glands. In salivary glands, extracellular ATP is co-released with acetylcholine and noradrenaline from glands nerve system. ATP acts on P2X4, P2X7, P2Y1 e P2Y2 receptors and may regulate important secretory processes in salivary gland cells. The events induced by extracellular nucleotides are controlled by ectonucleotidases, that include family members of ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolase (E-NTPDase), ectopyrophosphatases/ phosphodiesterases (E-NPP) and ecto-5’-nucleotidase. The presence of an E-NTPDase and ecto-5'-nucleotidase was identified with the following biochemical characteristics for ATP, ADP, and AMP hydrolysis: optimum pH between 6.5-8.0, dependence of divalent cations (Ca2+ e Mg2+) and Kmapp values in micromolar range. Acinar cells from salivary glands were capable to hydrolyze p-Nph-5´-TMP, suggesting the presence of an E-NPP. The enzyme described in this study is divalent cations-dependent (Ca+2 e Mg+2), and the p-Nph- 5´-TMP hydrolysis was maximal with basal levels of cations in pH between 8,5 and 9,0. The effect of different compounds in ATP, ADP e p-Nph-5´-TMP hydrolysis was evaluated and sodium azide, an inhibitor of several NTPDases, inhibited ATP and ADP hydrolysis, but have no effect in p-Nph-5´-TMP hydrolysis. Ouabain, NEM, classical ATPases inhibitors did not affect ATP, ADP e p-Nph-5´-TMPhydrolysis; however, AMP inhibited the p-Nph-5´-TMP hydrolysis. These results suggest the co-existence of different ectonucleotidases in acinar cells that are related with nucleotide hydrolysis and can act under different situations. The effect of antidepressants in activity and expression of enzymes involved in nucleotide hydrolysis was also evaluated. In relation to enzymatic activity, fluoxetine induced an increase only in ATP and ADP hydrolysis, whereas moclobemide and imipramine induced a significant increase in hydrolysis of all nucleotides (ATP, ADP and AMP). The relative expression of NTPDase1-3 was enhanced and for ecto-5´-nucleotidase was diminished with imipramine. Fluoxetine enhanced relative expression of NTPDase3 and ecto-5´-nucleotidase and inhibited the relative expression of NTPDase2. Moclobemide enhanced the relative expression of all enzymes. In relation to E-NPPs activities, imipramine, fluoxetine e moclobemide treatmens lead to a significant increase in this activity whereas the relative expression of NPP-1, NPP-2, and NPP-3 did not show modifications. The presence of ectonucleotidases modulating the levels of nucleotides in acinar cells is important considering the ATP role in the mechanisms of salivary secretion.