Made available in DSpace on 2014-07-29T15:25:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Carina-pos defesa.pdf: 485460 bytes, checksum: 2ca505db4ca73a05349dd92fbfc7df1d (MD5) Previous issue date: 2011-03-18 / Montelukast is a potent reversible selective inhibitor of cysteinilleukotrien- 1 receptor, avoiding that these mediators promote the asthmatic response. Its commercialization in Brazil, as a terminated product, is protected by patent up to 2010. Once the active ingredient Montelukast is recent in the pharmaceutical market and there is no methodology description in official compendiums capable to assure the quality of new formulations, the objective of this paper was the pharmaceutics of montelukast film coated tablets, the development and the validation of analytical and bioanalytical methodologies foreseeing the pharmaceutical equivalence and bioequivalence with the reference medication of the market. With this purpose, some physicalchemical parameters were characterized, assay and dissolution methodologies were developed and validated per high performance liquid chromatography with ultraviolet detection (HPLC-UV) for the quantification of montelukast present in 10.0mg film coated tablets. The quantification of montelukast sodium in human plasma was performed using Loratadine as internal standard and high performance liquid chromatography attached to mass detector (HPLC - MS / MS). The active ingredient was extracted from the human plasma using precipitation extraction. The results found for the parameters of specificity, linearity, accuracy, precision, quantification and detection limits and stability in the methodologies validation confirm they were adequate for the objective proposed. The analytical methodologies developed and validated were applied in the pharmaceutics of the tablets for the determination of the formulation similar to the market reference medication Singulair®. This formulation was submitted to stability assays to assure its quality and to allow the performance of pharmaceutical equivalence and bioequivalence with the purpose of registering as a generic medication. / O Montelucaste é um potente inibidor seletivo reversível do receptor cisteinil-leucotrieno-1, evitando que os mediadores provoquem a resposta asmática. Sua comercialização no Brasil, na forma de produto acabado, é protegida por patente até 2010. Uma vez que o fármaco Montelucaste é recente no mercado farmacêutico e não há descrição de metodologia em compêndios oficiais capaz de assegurar a qualidade das novas formulações, o objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento farmacotécnico de comprimidos revestidos de montelucaste, desenvolvimento e validação de métodos analítico e bioanalítico visando obtenção de equivalência farmacêutica e bioequivalência com o medicamento referência de mercado. Com esta finalidade, foram caracterizados alguns parâmetros físico-químicos, desenvolvidos e validados métodos de doseamento e dissolução por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção ultravioleta (HPLC-UV) para quantificação de montelucaste presente em comprimidos revestidos de 10,0 mg. A determinação de montelucaste sódico em plasma humano foi realizada utilizando-se loratadina como padrão interno e cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a detector de massas (HPLC MS/MS). O fármaco foi extraído do plasma humano utilizando extração por precipitação. Os resultados encontrados dos parâmetros de especificidade, linearidade, exatidão, precisão, limites de quantificação e detecção e estabilidade nas validações dos métodos confirmam que os mesmos foram adequados para a finalidade proposta. Os métodos analíticos desenvolvidos e validados foram aplicados no desenvolvimento farmacotécnico dos comprimidos para determinação de uma formulação próxima ao medicamento referência de mercado Singulair®. Esta formulação foi submetida a ensaios de estabilidade para assegurar sua qualidade e permitir a realização de equivalência e bioequivalência farmacêutica com o intuito de registro como medicamento genérico.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / FundaÃÃo de Amparo a Pesquisa do Estado do Piauà / Objetivo: Investigar o potencial biotecnolÃgico do bagaÃo de uva, variedade Benitaka, cultivada no municÃpio de SÃo JoÃo do PiauÃ, PiauÃ, por meio de metodologias analÃticas cientificamente reconhecidas, buscando reconhecer os principais grupos de metabÃlitos responsÃveis por atividade antioxidante. Metodologia: As uvas (Vitis vinifera L.), variedade Benitaka, foram resultantes da safra 2011/2012 e coletadas no Polo de Viticultura do Assentamento Marrecas, no MunicÃpio de SÃo JoÃo do PiauÃ/PI e posteriormente higienizadas, prensadas em despolpadeira para separaÃÃo do bagaÃo, o qual foi submetido à desidrataÃÃo, trituraÃÃo, peneiramento e formaÃÃo do bagaÃo de uva em pÃ. A partir do bagaÃo de uva em pà foram realizadas anÃlises da composiÃÃo centesimal, conteÃdo de minerais, fibra dietÃtica total, solÃvel e insolÃvel, determinaÃÃo de Vitamina C, conteÃdo de antocianinas, perfil de Ãcidos graxos e investigaÃÃo de sua qualidade microbiolÃgica. Foram tambÃm elaborados extratos a partir de diferentes solventes, os quais foram analisados quanto à toxicidade frente à Artemia salina sp., conteÃdo de fenÃlicos totais, flavonÃides totais e taninos totais; atividade antioxidante in vitro pelos mÃtodos de DPPHâ e autooxidaÃÃo do sistema &#946;-caroteno/Ãcido linoleico; estabilidade oxidativa em Ãleo de soja e identificaÃÃo e quantificaÃÃo de polifenÃis por HPLC-UV. Os resultados foram expressos como mÃdia e desvio padrÃo (n=3) e utilizou-se o programa estatÃstico SAS para AnÃlise de VariÃncia e Teste de Tukey. Adotou-se o nÃvel de significÃncia de 5% (p<0,05). Resultados: Os resultados mostraram que no bagaÃo de uva em pà a quantidade de fibra dietÃtica total (46,17g/100g) se destacou quantitativamente em relaÃÃo aos carboidratos (29,2g/100g), proteÃnas (8,49g/100g) e lipÃdeos (8,16g/100g). O valor energÃtico total encontrado foi de 224Kcal/100g. A fraÃÃo fibra insolÃvel (79%) foi superior à fraÃÃo solÃvel (21%). O conteÃdo de Vitamina C foi de 26,25mg de Ãcido ascÃrbico/100g e de antocianinas, 131mg/100g. Os minerais ferro (18,08mg/100g), potÃssio (1,40mg/100g), zinco (0,98mg/100g), manganÃs (0,82mg/100g) e cÃlcio (0,44mg/100g) estavam presentes em maiores concentraÃÃes. A fraÃÃo lipÃdica foi composta principalmente por Ãcido linoleico (89,61%) e o teor de PUFA (89,61%) >MUFA (21,37%) >SFA (18,46%). O rendimento dos extratos variou de 6,85% a 45,5%, dependendo do solvente de extraÃÃo, sendo que o menor rendimento foi observado no extrato acetÃnico e o maior no extrato metanÃlico. O conteÃdo de fenÃlicos totais, flavonoides totais e taninos totais variaram em funÃÃo do solvente de extraÃÃo. Os extratos etanÃlico e acetÃnico conseguiram estabilizar o radical DPPHâ de forma eficiente, com valores de EC50 de 0,31 Âg/mL e 0,39 Âg/mL, os quais nÃo diferiram estatisticamente dos padrÃes quercetina (0,22 Âg/mL) e BHT (0,11 Âg/mL). Em relaÃÃo à avaliaÃÃo da atividade antioxidante pelo mÃtodo de autooxidaÃÃo do sistema &#946;-caroteno/Ãcido linolÃico, os extratos agiram de forma similar ao antioxidante sintÃtico BHT, com mÃdias de EC50 de 0.34 Âg/mL a 0.36 Âg/mL. O extrato etanÃlico aumentou a vida de prateleira do Ãleo de soja de forma similar ao BHT. O composto fenÃlico presente em maior concentraÃÃo foi isoquercitrina (12,94 mg/100g), seguido de rutina (7,54 mg/100g), quercetina (5,4 mg/100g) e resveratrol (2,5 mg/100g). ConclusÃo: Os resultados mostraram que o bagaÃo de uva representa uma fonte potencialmente importante de nutrientes e compostos fenÃlicos; alÃm de elevado potencial antioxidante, o que contribui para o seu elevado valor como um subproduto de frutos, com possibilidades de comercializaÃÃo como antioxidante natural.

<br /> Vários compostos químicos são usados para o controle de pragas e doenças na agricultura com a finalidade de aumentar a produtividade. É de conhecimento científico que tais compostos afetam negativamente a saúde humana e animal por meio da contaminação dos alimentos e do meio ambiente. Assim, o uso de substâncias obtidas da própria natureza para o combate de pragas e plantas invasoras é uma alternativa para o controle e, consequente, prevenção da contaminação ambiental. Neste trabalho foram avaliados os extratos aquosos das folhas da leguminosa feijão-de-porco (Canavalia ensiformis) como bioerbicida pós-emergente aplicado no controle de plantas invasoras em cultura de soja e seus efeitos no solo. Salienta-se que não há informações sobre os efeitos desses bioerbicida no solo. Os compostos fenólicos, em especial os ácidos fenólicos, têm ação inibitória no crescimento de plantas invasoras. O processo de extração dos compostos fenólicos foi feito em um sistema de digestão por micro-ondas, com aproximadamente 2 g de material vegetal seco, seguida de injeção cromatográfica. Para otimização do procedimento de extração via micro-ondas os parâmetros avaliados foram: tempo de irradiação, temperatura e rampa aplicada. Foram realizadas determinações cromatográficas para identificação e quantificação dos compostos fenólicos: rutina, ácido clorogênico, ácido ferúlico e naringenina presentes nas folhas do feijão-de-porco por HPLC-UV, mediante metodologia de extração por micro-ondas. Todo o trabalho foi desenvolvido de acordo com os requisitos de gestão da qualidade referentes às normas NBR ISO/IEC 17025 e BPL. / <br /> Several chemical compounds are used for pest and disease control in agriculture in order to increase productivity. It is well know that such pesticides adversely affect human and animal health through contamination by food and environment. Thus, the use of substances obtained from nature itself to combat pests and weeds is an alternative for the control of those and, consequently, prevent environmental contamination. This work were assessed aqueous extracts of jack bean leaves (Canavalia ensiformis) as a post-emergent bioherbicide applied in weed control in soybean crops and its effects on the soil. It is noteworthy there is not information on the effects of these bioherbicides on the soil. Phenolics compounds, notably, phenolics acids, have inhibitory action on the growth of weeds. The process of extraction of phenolic compounds was carried out in a digestion system by microwave, using approximately 2 g dry plant material, followed by chromatographic injection. For optimization of the extraction procedure by microwave-assisted extraction the factors evaluated were irradiation time, temperature and ramp time. Chromatographic determinations were performed for identification and quantification of the phenolic compounds: rutin, chlorogenic acid, ferulic acid and naringenin present in the Canavalia ensiformis leaves by HPLC-UV, through microwave extraction methodology. All the study was developed in compliance with the quality management concepts covered in NBR ISO/IEC 17025 and GLP.

Fundação de Apoio a Pesquisa e à Inovação Tecnológica do Estado de Sergipe - FAPITEC/SE / Rice is one of the most important crops in the world. The waters near the areas of this crop has a raised risk of contamination, once the cultivation of rice requires large quantities of pesticides. Due to their high toxicity, uncontrolled use and high solubility in water, pesticides are considered one of the main pollutants of aquatic ecosystems. This present work aims to develop an efficient method based on solid phase extraction (SPE) techniques and high performance liquid chromatography with spectrophotometric detector in the ultraviolet and visible region with diode array (HPLC UV-Vis/DAD) for determination pesticides deltamethrin, epoxiconazole, pyraclostrobin, pyriproxyfen, tebuconazole and thiamethoxan in irrigated rice water, using biochar of aguapé as an alternative adsorbent for SPE. For that, tests were carried out to optimize the chromatographic conditions and the extraction method. In the extraction stage of the pesticides, the method was optimized using the adsorbents C-18 and bio-carbon produced from aguapé. When the C-18 adsorbent was used, the best results were obtained using 10 mL of acidified acetone at pH 5,0 with formic acid solution, 69 ± 0,5 - 100 ± 5,9%. However, when the biochar was tested as an adsorbent for SPE extraction, it presented satisfactory recovery results between 70 ± 0,7% and 122 ± 10,7% for the concentration levels 0,3 to 1,0 μg mL -1. The methods developed were suitable for the determination of pesticide residues in water samples. Thus, the method of extraction using the bio-pot of water was chosen to be validated, because besides being efficient in the extraction of pesticides, it is also a sustainable option. The parameters evaluated for the validation of the method were: linearity and sensitivity, showing good linear response with determination coefficients above 0,9832 in the range of 0,025 to 10 μg mL-1; selectivity, through matrix effect studies; and limits of detection and quantification in the range of 0,01-0,08 μg mL -1, 0,04-0,3 μg mL -1, respectively. / O arroz é uma das culturas mais importantes no mundo, e as águas próximas das áreas desta cultura possuem elevado risco de contaminação, já que o cultivo de arroz requer a utilização de grandes quantidades de agrotóxicos. Devido à sua alta toxicidade, seu uso descontrolado e sua alta solubilidade em água, os agrotóxicos são considerados um dos principais poluentes dos ecossistemas aquáticos. O presente trabalho tem como objetivo desenvolver um método eficiente baseado nas técnicas de extração em fase sólida (SPE) e cromatografia líquida de alta eficiência com detector espectrofotométrico na região do ultravioleta e visível com arranjo de diodos (HPLC UV-Vis/DAD) para a determinação dos agrotóxicos deltametrina, epoxiconazol, piraclostrobina, piriproxifeno, tebuconazol e tiametoxan em água de cultivo de arroz irrigado. Para tanto, foram realizados testes para otimização das condições cromatográficas e do método de extração. Na etapa de extração dos agrotóxicos, o método foi otimizado utilizando adsorventes comerciais e alternativos. Quando se fez uso do adsorvente C-18, os melhores resultados foram obtidos utilizando 10 mL de acetona acidificado a pH 5,0 com solução de ácido fórmico, 69 ± 0,5 – 100 ± 5,9 %. Já quando o biocarvão produzido a partir de aguapé foi testado como adsorvente para a extração por SPE, apresentou resultados satisfatórios de recuperação entre 70 ± 0,7% – 122 ± 10,7% para os níveis de concentração 0,3 a 1,0 μg mL-1. Os métodos desenvolvidos se mostraram adequados para determinação de resíduos de agrotóxicos em amostras de água. Assim, o método de extração utilizando o biocarvão de aguapé foi escolhido para ser validado, pois além de ser eficiente na extração dos agrotóxicos trata-se também de uma opção sustentável. Os parâmetros avaliados para a validação do método foram: linearidade e sensibilidade, mostrando-se boa resposta linear com coeficientes de determinação superiores a 0,9832 no intervalo de 0,025 a 10 μg mL-1; seletividade, através de estudos de efeito matriz; e limites de detecção e quantificação no intervalo de 0,01 - 0,08 μg mL-1, 0,04 - 0,3 μg mL-1, respectivamente. / São Cristóvão, SE

Ces travaux ont pour but d’identifier des métabolites dans des teintures-mères (TMs) utilisées en homéopathie et en phytothérapie pour mieux contrôler la qualité des TMs et de mieux comprendre leur mode d’action sur la santé humaine. Nous avons étudié, par une approche de métabolomique globale, 19 TMs et un produit leader : le L52, fabriqués par les Laboratoires Lehning. Premièrement, nous avons utilisé des approches non-ciblées en construisant des banques de données GC-MS et UPLC-MS/MS, afin d’identifier un maximum de molécules dans chaque extrait. Puis, nous avons fractionné certaines TMs et purifié des métabolites inconnus pour une identification fine en HRMS. Nous avons identifié de nombreuses molécules dans chaque TM, montrant que ces dernières sont très riches en molécules pouvant être utilisées pour le contrôle-qualité des TMs et valorisées pour la santé humaine. / Tinctures defined as hydro-alcoholic extracts have been used from centuries in homeopathy and phytotherapy, but their chemical compositions remain still unknown. During my PhD, metabolomics analyses of nineteen tinctures and one leader product, L52, made by Laboratoires Lehning, were conducted using untargeted metabolomic approach. We build GC-MS and UPLC-MS/MS databases to identify a large amount of metabolites. Then, we used semi-preparative HPLC with both UV and mass detection to isolate some compounds from tinctures. We used UPLC-HRMS to obtain chemical formula, a prerequisite for metabolites identification. Finally, we identified a broad range of different metabolites in each tincture, highlighting the metabolic complexity of the TMs. These molecules can now be used for quality-control and valued for a better understanding of these products on human health.

L'évaluation de l'inertie des matières plastiques au contact de denrées alimentaires est régie par le règlement européen N°10/2011. Au Liban, l'absence de législations relatives à l'usage des matières en plastiques a conduit à des emballages non contrôlés au niveau de la production et du stockage, ce qui peut induire un risque sanitaire pour le consommateur. L'objectif de ce travail a été d'apprécier les phénomènes de migration des contaminants du PET vers l'eau. Pour cela, l'analyse de certains migrants potentiels a été initiée tels que des COV et des SV afin de vérifier la conformité de leur teneur par rapport aux LMA dans les règlementations internationales. Le dosage des aldéhydes dans l'eau a été effectué par dérivation avec la 2,4-DNPH, suivie d'une étape de préconcentration sur une cartouche en C18, puis séparation et quantification par HPLC-UV. L'analyse des composés SV a été réalisée par SPME-GC-FID sur une fibre en PDMS/DVB. L'analyse des BTEX et du styrène a été réalisée par HS-Trap-GC-FID. Ces méthodes ont été validées conformément à la norme NF T 90-210 avec des LQ inférieures aux LMA. L'analyse des COV dans l'eau embouteillée et dans le PET a été réalisée par HSTrap- GC-MS. La présence de FA, d'AA, de DEP et des BTEX dans l'eau embouteillée en PET a été confirmée. Il a été mis en évidence que la température et l'exposition solaire influencent la migration des aldéhydes. Les concentrations d'AA trouvées après incubation à 40ºC ne sont pas négligeables et peuvent modifier les propriétés organoleptiques de l'eau. L'analyse du PET montre la présence des hydrocarbures, des aldéhydes, des alcools, et des cétones / The inertness’ value of plastics that are on contact with foodstuffs is governed by the European rule N°10/2011. In Lebanon, the lack of the Rules and Regulations of plastics’ usage led for a non-controlled packing in production as in storage, which will cause a sanitary risk to the consumer and to the population. The purpose of this research was to appreciate the migration’s phenomena of contaminants from the PET to the water. For this, there was an analysis of potential migrants such as VOC and SV to verify their tenor’s conformity relative to the MCL in international regulations. The aldehydes’ dosage in the water was performed by the derivation with the 2,4-DNPH, followed by a concentration on a C18 cartridge, then separation and quantification was done by HPLC-UV. The SV compounds’ analysis was realized by SPME-GC-FID method on a PDMS / DVB fiber. The BTEX and the styrene’s analysis was done by HS-trap-GC-FID method. These methods were validated in accordance with standard NF T 90-210 with a LQ less than the MCL. The volatile compounds in the bottled water and in the PET were analyzed by HS-trap-GC-MS method. The presence of FA, AA, DEP and BTEX in the bottled water with the PET was confirmed. It was highlighted that temperature and sun exposition influence the aldehydes’ migration. The acetaldehyde’s concentration after incubation at 40ºC wasn’t negligible and can modify the water’s organoleptic properties. The PET’s analyze reveals the presence of hydrocarbons, aldehydes, alcohols and ketones

A sepse é a maior causa de morbidade e mortalidade em pacientes queimados, uma vez que profundas alterações ocorrem na farmacocinética de agentes anti-infecciosos prescritos para o controle das infecções. Além disso, pacientes queimados podem apresentar quadro de infecção por germes da comunidade, numa fase precoce de internação na UTI, devendo receber antimicrobianos que diferem daqueles indicados na infecção sistêmica causada por germes hospitalares. Adicionalmente, na vigência de infecção fúngica, o quadro se torna ainda mais grave para os pacientes queimados de prolongada internação e imunocomprometimento. No presente trabalho deve como objetivo realizar o monitoramento plasmático de fluconazol prescrito aos pacientes com infecção sistêmica fúngica internados na UTI e investigar a farmacocinética para o ajuste do regime de dose no controle da infecção fúngica nos pacientes queimados. Investigaram-se 12 pacientes queimados internados na UTI/ Unidade de Queimados - Divisão de Cirurgia Plástica do HC FMUSP, portadores de infecção fúngica recebendo fluconazol através de infusão. Os pacientes receberam o antifúngico geralmente em associação a outros antimicrobianos para o controle das infecções seguindo a recomendação da CCIH do hospital relativa ao regime de dose empírica inicial do controle de infecção na UTI de Queimados. Realizou-se o monitoramento plasmático do fluconazol através da coleta de amostras sanguíneas de pico e vale. Complementarmente, a critério Clínico, foram colhidas amostras seriadas de sangue (pico, 1ª, 2ª, 4ª, 6ª e vale), totalizando seis coletas, para investigação da farmacocinética do agente que requereu ajuste de dose e individualização de terapia no paciente queimado. As coletas de sangue foram realizadas através de cateter venoso (2 mL/coleta em tubos contendo EDTA sódico) pelo médico intensivista de plantão na UTI; o plasma foi obtido pela centrifugação para análise do fármaco de interesse ou então armazenado no congelador (-80&#176; C) até o ensaio. Previamente à realização da Etapa Clínica, foi realizado no Laboratório a validação do método bioanalítico para quantificação do fluconazol no plasma com base na legislação nacional e boas práticas de laboratório, empregando a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detector ultravioleta. A estatística foi realizada pelo tratamento estatístico com utilização do software GraphPad Instat 4.0., GraphPad Prism 4.0, pela utilização de testes não paramétricos. A modelagem farmacocinética foi realizada através da aplicação do software NonCompartmental Analysis, PK Solutions 2.0, aos pares de dados (C vs T) para o agente antifúngico investigado. Os pacientes queimados incluídos no protocolo eram adultos de ambos os sexos 8M/4F, 46,8 ± 20,6 anos, 69,9 ± 11,5 kg, 38,8 ± 24,0% de superfície corporal queimada, e os agentes da queimadura foram para 10 pacientes/ térmico-fogo e para dois pacientes/trauma elétrico; a lesão inalatória foi registrada em 50% pacientes com queimadura pelo fogo. Foram realizados 31 seguimentos farmacoterapêuticos com a emissão de laudos de resultado de exame para o fluconazol. Registrou-se alta variabilidade na farmacocinética para todos os parâmetros investigados. Adicionalmente, registrou-se alteração significativa na farmacocinética do fluconazol nos diversos seguimentos realizados nos pacientes queimados com disfunção renal dialítica quando comparados aqueles em que se registrou função renal preservada. O método bioanalítico mostrou-se adequado ao monitoramento das concentrações plasmáticas do fluconazol através cromatografia líquida de alta eficiência com detecção UV. Registrou-se alta variabilidade na farmacocinética desse agente que justificou em parte a substituição da terapia empírica inicial pela dose ajustada para garantia de terapia eficaz ao paciente queimado. / The sepsis is a main cause of morbidity and mortality in burn patients, once pharmacokinetics of anti-infective drugs prescribed for the control of systemic infections are significantly altered in those patients. In addition, burn patients in the ICU, initially can present infections by community microbial and must receive different antimicrobials than those prescribed for sepsis. On the other hand, burn immunocompromized patients with prolonged staying in the ICU, re-incidence of sepsis and fungal infection requires an effective antifungal agent that must be associated to the antimicrobials prescription. The objective of the study was to therapeutic plasma monitoring of fluconazole largely prescribed to burn patients from the ICU with fungal infection, Pharmacokinetic modeling for dose adjustment and for the control of infection. Twelve burn inpatients with systemic fungal infections from the ICU Burns- Division of Plastic Surgery of Clinics Hospital Medical School University of Sao Paulo received systemically antimicrobials/ antifungal agents. In general burn patients received several antimicrobial agents as recommended by the Control of Hospital Infection Committee as empirical dose at the beginning of therapy and also afterwards in the ICU. The control of infections by community microbial or yet by hospital microbial, and also for fungal infection, was performed by drug plasma after blood sample collection at the peak and at the trough. Complementary, usually by clinical criteria, six blood sample collections were performed at time dose interval (end of drug infusion 1st, 2nd, 4th, 6th and at the trough) for pharmacokinetic purposes, dose adjustment and individualization of drug therapy for burn patients. Blood sample collection was done by the physician from the ICU by venous catheter (2mL/each into blood collection tubes sodium EDTA); plasma obtained by centrifugation of blood tubes were analyzed in the same day or in a deep freezer to storage (-80&#176; C) until assay. Bioanalytical method reported previously was re-validated as recommended by good laboratory practices (GLP). Parameters as linearity, sensitivity, precision and accuracy, recovery and stability, specificity and selectivity were determined for all drugs investigated to guaranteed drug plasma measurements during the pharmacotherapeutic follow up in the ICU. Descriptive statistics was performed by applying the software GraphPad Instat 4.0., GraphPad Prism 4.0 non parametric tests. Pharmacokinetics was estimated by applying the software NonCompartmental Analysis, PK Solutions 2.0, to data (C vs T) for each antimicrobial agent. Burn patients included in the protocol were of both genders 8M/4F, 46.8+/- 20.6 yrs, 69.9+/- 11.5 kg, 38.8+/-24.0% TBSA; agents of the accident were fire/ alcohol for 10 patients and electrical trauma for two patients; inhalation injury were described for 50% of patients with fire. High pharmacokinetic variability was registered for the antifungal agent investigated. In addition, significant changes on pharmacokinetic parameters were described for fluconazole for burn patients with dialytic renal dysfunction compared to those with renal function preserved. Bioanalytical methods validated with basis on good laboratory practices (GLP), recommended by the national and international guidelines were adequate for drug plasma monitoring by liquid chromatography, UV detection. High pharmacokinetic variability was obtained for fluconazol. In conclusion, it was demonstrated that PK modeling of antimicrobial is an important tool for the control of severe systemic fungal infection in burn patients.

A sepse é a maior causa de morbidade e mortalidade em pacientes queimados, uma vez que profundas alterações ocorrem na farmacocinética de agentes anti-infecciosos prescritos para o controle das infecções. Além disso, pacientes queimados podem apresentar quadro de infecção por germes da comunidade, numa fase precoce de internação na UTI, devendo receber antimicrobianos que diferem daqueles indicados na infecção sistêmica causada por germes hospitalares. Adicionalmente, na vigência de infecção fúngica, o quadro se torna ainda mais grave para os pacientes queimados de prolongada internação e imunocomprometimento. No presente trabalho deve como objetivo realizar o monitoramento plasmático de fluconazol prescrito aos pacientes com infecção sistêmica fúngica internados na UTI e investigar a farmacocinética para o ajuste do regime de dose no controle da infecção fúngica nos pacientes queimados. Investigaram-se 12 pacientes queimados internados na UTI/ Unidade de Queimados - Divisão de Cirurgia Plástica do HC FMUSP, portadores de infecção fúngica recebendo fluconazol através de infusão. Os pacientes receberam o antifúngico geralmente em associação a outros antimicrobianos para o controle das infecções seguindo a recomendação da CCIH do hospital relativa ao regime de dose empírica inicial do controle de infecção na UTI de Queimados. Realizou-se o monitoramento plasmático do fluconazol através da coleta de amostras sanguíneas de pico e vale. Complementarmente, a critério Clínico, foram colhidas amostras seriadas de sangue (pico, 1ª, 2ª, 4ª, 6ª e vale), totalizando seis coletas, para investigação da farmacocinética do agente que requereu ajuste de dose e individualização de terapia no paciente queimado. As coletas de sangue foram realizadas através de cateter venoso (2 mL/coleta em tubos contendo EDTA sódico) pelo médico intensivista de plantão na UTI; o plasma foi obtido pela centrifugação para análise do fármaco de interesse ou então armazenado no congelador (-80&#176; C) até o ensaio. Previamente à realização da Etapa Clínica, foi realizado no Laboratório a validação do método bioanalítico para quantificação do fluconazol no plasma com base na legislação nacional e boas práticas de laboratório, empregando a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detector ultravioleta. A estatística foi realizada pelo tratamento estatístico com utilização do software GraphPad Instat 4.0., GraphPad Prism 4.0, pela utilização de testes não paramétricos. A modelagem farmacocinética foi realizada através da aplicação do software NonCompartmental Analysis, PK Solutions 2.0, aos pares de dados (C vs T) para o agente antifúngico investigado. Os pacientes queimados incluídos no protocolo eram adultos de ambos os sexos 8M/4F, 46,8 ± 20,6 anos, 69,9 ± 11,5 kg, 38,8 ± 24,0% de superfície corporal queimada, e os agentes da queimadura foram para 10 pacientes/ térmico-fogo e para dois pacientes/trauma elétrico; a lesão inalatória foi registrada em 50% pacientes com queimadura pelo fogo. Foram realizados 31 seguimentos farmacoterapêuticos com a emissão de laudos de resultado de exame para o fluconazol. Registrou-se alta variabilidade na farmacocinética para todos os parâmetros investigados. Adicionalmente, registrou-se alteração significativa na farmacocinética do fluconazol nos diversos seguimentos realizados nos pacientes queimados com disfunção renal dialítica quando comparados aqueles em que se registrou função renal preservada. O método bioanalítico mostrou-se adequado ao monitoramento das concentrações plasmáticas do fluconazol através cromatografia líquida de alta eficiência com detecção UV. Registrou-se alta variabilidade na farmacocinética desse agente que justificou em parte a substituição da terapia empírica inicial pela dose ajustada para garantia de terapia eficaz ao paciente queimado. / The sepsis is a main cause of morbidity and mortality in burn patients, once pharmacokinetics of anti-infective drugs prescribed for the control of systemic infections are significantly altered in those patients. In addition, burn patients in the ICU, initially can present infections by community microbial and must receive different antimicrobials than those prescribed for sepsis. On the other hand, burn immunocompromized patients with prolonged staying in the ICU, re-incidence of sepsis and fungal infection requires an effective antifungal agent that must be associated to the antimicrobials prescription. The objective of the study was to therapeutic plasma monitoring of fluconazole largely prescribed to burn patients from the ICU with fungal infection, Pharmacokinetic modeling for dose adjustment and for the control of infection. Twelve burn inpatients with systemic fungal infections from the ICU Burns- Division of Plastic Surgery of Clinics Hospital Medical School University of Sao Paulo received systemically antimicrobials/ antifungal agents. In general burn patients received several antimicrobial agents as recommended by the Control of Hospital Infection Committee as empirical dose at the beginning of therapy and also afterwards in the ICU. The control of infections by community microbial or yet by hospital microbial, and also for fungal infection, was performed by drug plasma after blood sample collection at the peak and at the trough. Complementary, usually by clinical criteria, six blood sample collections were performed at time dose interval (end of drug infusion 1st, 2nd, 4th, 6th and at the trough) for pharmacokinetic purposes, dose adjustment and individualization of drug therapy for burn patients. Blood sample collection was done by the physician from the ICU by venous catheter (2mL/each into blood collection tubes sodium EDTA); plasma obtained by centrifugation of blood tubes were analyzed in the same day or in a deep freezer to storage (-80&#176; C) until assay. Bioanalytical method reported previously was re-validated as recommended by good laboratory practices (GLP). Parameters as linearity, sensitivity, precision and accuracy, recovery and stability, specificity and selectivity were determined for all drugs investigated to guaranteed drug plasma measurements during the pharmacotherapeutic follow up in the ICU. Descriptive statistics was performed by applying the software GraphPad Instat 4.0., GraphPad Prism 4.0 non parametric tests. Pharmacokinetics was estimated by applying the software NonCompartmental Analysis, PK Solutions 2.0, to data (C vs T) for each antimicrobial agent. Burn patients included in the protocol were of both genders 8M/4F, 46.8+/- 20.6 yrs, 69.9+/- 11.5 kg, 38.8+/-24.0% TBSA; agents of the accident were fire/ alcohol for 10 patients and electrical trauma for two patients; inhalation injury were described for 50% of patients with fire. High pharmacokinetic variability was registered for the antifungal agent investigated. In addition, significant changes on pharmacokinetic parameters were described for fluconazole for burn patients with dialytic renal dysfunction compared to those with renal function preserved. Bioanalytical methods validated with basis on good laboratory practices (GLP), recommended by the national and international guidelines were adequate for drug plasma monitoring by liquid chromatography, UV detection. High pharmacokinetic variability was obtained for fluconazol. In conclusion, it was demonstrated that PK modeling of antimicrobial is an important tool for the control of severe systemic fungal infection in burn patients.

O paciente grande queimado está entre os de maior risco de contrair infecção hospitalar, sendo que, aproximadamente 80% dos óbitos nestes pacientes são decorrentes de infecção. Devido à prevalência de S. aureus meticilina resistente (MRSA) nas unidades de queimados prescreve-se a vancomicina como fármaco de 1ª linha. Entretanto como a farmacocinética se encontra profundamente alterada geralmente ocorre a falência terapêutica e surgimento de resistência antimicrobiana. O objetivo do presente estudo foi monitorar as concentrações plasmáticas através da análise em CLAE-UV e realizar a modelagem farmacocinética da vancomicina, administrada nestes pacientes. Para tanto, validou-se método analítico que se mostrou linear, preciso, exato e suficientemente sensível para o monitoramento das concentrações plasmáticas da vancomicina nos pacientes. Investigaram-se 9 pacientes adultos grandes queimados após cirurgia de debridamento; os pacientes foram informados em detalhes sobre o estudo e assinaram o TCLE, e incluídos no protocolo. Coletaram amostras sangüíneas seriadas para a farmacocinética (PK solutions 2.0). A estatística descritiva (Microsoft Excell, Office for Windows, versão 2000) forneceu os resultados expressos através da média +/- DP: 16 mg/L±11, para o pico (referência 20-40mg/L) e 2,6 mg/L±1,5 para o vale (referência,5-10mg/L), abaixo da CME nestes pacientes. Os parâmetros farmacocinéticos foram o volume aparente de distribuição que se mostrou aumentado em cerca de 3,5 vezes, (1,4 L/Kg ± 0,8 versus 0,33-0,45L/kg, referência, a depuração plasmática mostrou-se aumentada em cerca de 2,5 vezes (3,2±1,65 mL/min.kg versus 1,3 - 1,5mL/min.kg, referência, enquanto a constate de eliminação e a meia-vida biológica se mantiveram inalteradas. Este estudo indica que o regime posológico e tipo de infusão endovosa devam ser revistos, utilizando a farmacocinética como ferramenta importante. Recomenda-se ainda que a terapia dose ajustada seja baseada no controle terapêutico destes pacientes em todas as fases da internação, principalmente após cada cirurgia de debridamento. / Nosocomial infections shows high incidence in burn patient, and approximately 80% of mortality of them is due to severe infections and sepse. High prevalence of methycilin resistant S. aureus (MRSA) occurs in the intensive care units for burn patients and vancomycin is largely prescribed as first choice drug for severe infections and sepse. In general occurs therapeutic fail, since the pharmacokinetics is altered in these patients and arise the antimicrobial resistance. The main of the present study was to perform therapeutic plasma vancomycin monitoring by HPLC-UV and also PK- modelling after 1g every 12 hours, 1 hour infusion. Bioanalitical method was validated showing good linearity, precision, accuracy, good stability and robustness. Additionally method required 200&#181;L of plasma and showed sensitivity enough for vancomycin plasma monitoring. Nine large burn patients were included in the study after they signed the informed written consent term to participate of the protocol. The follow up was done after debridment surgery. Blood samples were collected from venous catheter at time dose interval to investigate the pharmacokinetics (PK solutions 2.0) and also to determine the peak and trough. Descriptive statistics was performed applying Microsoft Excell, Office for Windows, versão 2000. Data obtained were 16 mg/L±11 peak (reference 20-40mg/L) and 2.6 mg/L±1.5 trough that was lower than MEC since the reference ranges from 5 to 10mg/L). Pharmacokinetic parameters were volume apparent of distribution, that was increased by 3.5 times (1.4 L/Kg ± 0,8 against the reference values 0.33-0.45L/kg), plasma clearance was also increased by 2.5 times (3.2±1.7mL/min.kg versus 1.3 - 1.5mL/min.kg, reference values), while elimination rate constant and biological half-life remained unchanged in those patients. Based on data obtained in the study, author recommends a revision on dose schedule and also concerning intravenous drug infusion using the pharmacokinetics as a powerful tool and the therapeutic plasma vancomycin monitoring for dose adjustments in all phases of the follow up of burn patient, mainly after each surgery debridement.

HIV antiretroviral therapy spans several different drug classes, meant to combat various aspects of viral infection and replication. Many authors have argued the benefits of therapeutic drug monitoring (TDM) for the HIV patient including compliance assurance and assessment of appropriate drug concentrations; however, the array of drug chemistries and combinations makes TDM an arduous task. HPLC-UV and LC-MS/MS are both frequent instruments for the quantification of HIV drugs in biological matrices with investigators striving to balance sensitivity and affordability. Plasma, the dominant matrix for these analyses, is prepared using protein precipitation, liquid-liquid extraction or solid-phase extraction depending on the specific complement of analytes. Despite the range of polarities found in drug classes relevant to HIV therapeutics, most chromatographic separations utilize a hydrophobic column (C18 ). Additionally, as the clinically relevant samples for these assays are infected with HIV, along with possible co-infections, another important aspect of sample preparation concerns viral inactivation. Although not routine in clinical practice, many published analytical methods from the previous two decades have demonstrated the ability to conduct TDM in HIV patients receiving various medicinal combinations. This review summarizes the analytical methods relevant to TDM of HIV drugs, while highlighting respective challenges.