Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-10-14T17:28:38Z No. of bitstreams: 1 Fernanda Khouri. Estudo in silico....pdf: 3863859 bytes, checksum: 34a7b6c0bc315b65207169652027de26 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-14T17:28:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernanda Khouri. Estudo in silico....pdf: 3863859 bytes, checksum: 34a7b6c0bc315b65207169652027de26 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / O HTLV-1 foi o primeiro retrovírus descrito associado a doenças humanas, tais como leucemia de célula T do adulto (ATLL), paraparesia espástica tropical/mielopatia associada ao HTLV (TSP/HAM), dermatite infecciosa, entre outras. Esse retrovírus possui um genoma de RNA de fita simples, com os genes gag (grupo antigênico), env (envelope), pol (polimerase), e uma região próxima à extremidade 3' conhecida como pX. Em cada extremidade do genoma existem sequências de repetições terminais longas (LTR – long terminal repeat), que são essenciais na integração do DNA proviral ao DNA do hospedeiro, e também para a regulação transcricional do genoma do vírus. Estima-se que cerca de 5-10 milhões de pessoas estejam infectadas pelo HTLV-1 no mundo. No Brasil, presume-se que 2,5 milhões de pessoas estejam infectadas. Apesar da infecção pelo HTLV-1 ser endêmica em diferentes regiões geográficas do mundo, ainda permanece sem um método de profilaxia eficaz. Pesquisas realizadas em macacos-esquilos no Instituto Pasteur da França e no Instituto Nacional do Câncer nos EUA avaliaram a imunogenicidade e a eficácia de uma vacina contendo o gene env ou env e gag do HTLV-1. Após a vacinação e transfusão de células infectadas com o HTLV-1 todos os animais mostraram-se protegidos. Anteriormente a este estudo, pesquisadores do Instituto Nacional do Câncer, NIH-EUA, avaliaram a eficácia de um vetor vacinal derivado do vírus da varíola atenuado contendo o gene env do HTLV-1 (R-ALVAC), e após o desafio vacinal todos os animais mostraram-se protegidos. Porém, a proteção destes dois estudos não foi permanente. Entretanto, esses resultados sugerem que uma vacina anti-HTLV-1 pode ser viável e, acreditamos que a produção dessa vacina tendo como vetor um vírus persistente como o HTLV-2 pode proteger contra a infecção pelo HTLV-1. Assim, desenvolvemos em colaboração com o NIH, um vetor vacinal contendo as duas regiões LTR do HTLV-2, para serem inseridos os genes gag e env do HTLV-1 sob o controle da região 3’LTR deste vetor. Para a utilização desse vetor recombinante faz-se necessário caracterizar a região promotora do HTLV-2, avaliando assinaturas nucleotídicas presentes em diferentes subtipos, bem como a presença de motifs importantes para a expressão do vetor vacinal. Pelo exposto, o objetivo principal desse trabalho foi avaliar in silico a habilidade do vetor recombinante do HTLV-2 poder ser utilizado como vetor vacinal anti-HTLV-1. Nossos resultados revelaram que existem pequenas diferenças na região promotora dos subtipos HTLV-2a, HTLV-2b, HTLV-2c e HTLV-2d. Algumas alterações resultam em ganho ou perda de motifs importante para a regulação da transcrição gênica, como o motif E Box, presente nas sequências dos diferentes subtipos do HTLV-2 e ausente na região promotora do vetor. Entretanto, estudos sugerem que esse motif pode ser responsável pela repressão da transcrição gênica e, portanto, essa diferença encontrada entre o vetor recombinante do HTLV-2 e as diferentes sequências analisadas sugere que a transcrição gênica do vetor vacinal sem esse motif pode ser mais eficiente. Logo, o vetor recombinante do HTLV-2 pode ser utilizado como vetor vacinal anti-HTLV-1 em ensaios pré-clínicos. / The HTLV-1 was first described retroviruses associated with human diseases, such as leukemia adult T cell (ATLL), tropical spastic paraparesis / HTLV-associated myelopathy (TSP / HAM), infective dermatitis, among others. This retrovirus has a genome of single-stranded RNA, with the genes gag (group antigen), env (envelope), pol (polymerase), and a region near the 3 'end known as pX. At each end of the genome are sequences of long terminal repeat (LTR) that are essential for the integration of the proviral DNA in the host DNA and also for the transcriptional regulation of the virus genome. It is estimated that about 5-10 million people are infected with HTLV-1 worldwide. In Brazil, it is assumed that 2.5 million people are infected. Despite the HTLV-1 is endemic in different geographic regions of the world still remains without an effective method of prophylaxis. Research conducted in squirrel monkeys at the Pasteur Institute in France and the National Cancer Institute in the USA evaluated the immunogenicity and efficacy of a vaccine containing the env gene or env and gag of HTLV-1. After vaccination and transfusion of infected cells with HTLV-1 all animals were shown to be protected. Prior to this study, researchers from the National Cancer Institute, NIH, USA, evaluated the efficacy of a vector vaccine derived from attenuated smallpox virus containing the env gene of HTLV-1 (R-ALVAC) and after challenge all animals were shown to be protected. However, the protection of these two studies was not permanent. At the same time, these results suggest that a vaccine anti-HTLV-1 may be feasible and we believe that the production of this vaccine as a vector having one persistent virus as HTLV-2 can protect against HTLV-1 infection. Thus, we developed in collaboration with the NIH, a vector vaccine containing the two LTR of HTLV-2, that will be inserted the env and gag genes of HTLV-1. To use this recombinant vector is necessary characterize the promoter region of HTLV-2, evaluating nucleotide signatures present in different subtypes, as well as the presence of motifs important for the expression vector vaccine. For these reasons, the aim of this study was to evaluate in silico the ability of recombinant vector of HTLV-2 be able to be used as a vector vaccine anti-HTLV-1. Our results reveal that there are small differences in the promoter region of HTLV-2a, HTLV-2b, HTLV-2c and HTLV-2d. Some changes results in loss or gain of motifs important for regulation of gene transcription, such as the E box motif present in the sequences of the different subtypes of HTLV-2 and absent in the promoter region of the vector. However, studies suggest that this motif can be responsible for the repression of gene transcription, and therefore this difference found between the recombinant vector of HTLV-2 and different sequences suggested that the analyzed gene transcription vector vaccine without this motif can be more efficient . Therefore, the recombinant vector HTLV-2 can be used in preclinical trials as a vaccine vector for HTLV- 1.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:34:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_5887_.pdf: 2872810 bytes, checksum: 5bafb57a7c99312716b93cb616939085 (MD5) Previous issue date: 2012-08-31 / Introdução: Existem poucos estudos realizados em amostras populacionais sobre a soroprevalência da infecção pelos vírus linfotrópicos de células T humanas tipo 1 e 2 (HTLV-1/2) e não se conhece a soroprevalência dessa infecção no Município de Vitória-ES. Objetivos: a) Determinar a prevalência sorológica da infecção por HTLV-1/2 em uma amostra de adultos, que procuram atendimento nos serviços de saúde do Município de Vitória -ES; b) Discriminar os tipos de HTLV encontrados; c) investigar possíveis formas de transmissão e fatores associados; d) georeferenciar a população da amostra e os casos positivos. Métodos: Estudo transversal, de setembro de 2010 a dezembro de 2011, em indivíduos de ambos os sexos, com 18 anos ou mais, residentes no município de Vitória-ES. Amostras de sangue venoso foram coletadas e submetidas à pesquisa de anticorpos anti-HTLV-1/2 por meio de imunoensaio quimioluminescente (CMIA). Indivíduos com resultado CMIA reativo foram submetidos à nova coleta de sangue para repetição do CMIA, e seguido por PCR em tempo real para confirmar e discriminar a infecção pelos tipos virais. Resultados: Foram testadas 1502 amostras, sendo 52,7% (791/1502) do sexo feminino e 47,3% (711/1502) do sexo masculino, distribuídas nas seis regiões de saúde, de acordo com a estimativa populacional do ano de 2009, no Município de Vitória-ES. A soroprevalência geral para HTLV-1/2 na amostra foi de 0,6% (9/1502; IC 95%; 0,2 - 1,0%). A taxa de infecção foi de 0,84% em homens (6/711; IC 95%; 0,17 - 1,51%), e 0.38% em mulheres (3/791; IC 95%; 0 - 0,81%). Sete amostras foram positivas para HTLV-1, uma amostra positiva para HTLV-2 e uma amostra não caracterizada. Conclusões: A prevalência encontrada (0,6%) é considerada intermediária. Os dois tipos virais (HTLV-1 e HTLV-2) estão presentes, com maior ocorrência do HTLV-1. Nenhuma das variáveis testadas permaneceu associada ao HTLV-1/2 no modelo final de regressão logística, mas foi importante à contaminação via transfusão de sangue, ocorrida antes de 1993, em três indivíduos. O georeferenciamento mostrou uma maior proporção de casos positivos nos naturais do Espírito Santo, originados de município do Norte do Estado, próximo à Bahia. PALAVRAS CHAVES: HTLV-1; HTLV-2; Prevalência; População geral; Vitória; Brasil.

HTLV-1 et HTLV-2 sont des virus provoquant des infections persistantes. Après une période de latence clinique de plusieurs décennies, 2 à 5 % des individus infectés par HTLV-1 développent des pathologies comme la leucémie à cellules T de l’adulte (ATL) ou la paraparésie spastique tropicale/myélopathie associée à HTLV-1 (TSP/HAM). Malgré une forte homologie avec HTLV-1 dans son organisation génomique et sa séquence nucléotidique, l'infection par HTLV-2 n'est pas associée à des désordres hématologiques. L’interféron α (IFN-α) est un acteur majeur de la réponse immunitaire innée de l’hôte. Le rôle de la réponse IFN-α au cours d'une infection par HTLV-1 et notamment dans le développement de l'ATL reste peu documenté et controversé. Mon travail de thèse a consisté à caractériser le rôle de l'IFN-αsur l'infection par HTLV-1 en comparaison de l'infection par HTLV-2. Nous avons montré que l'infection de novo de lymphocytes T par HTLV-1 ou HTLV-2 était inhibée par l'IFN-α. Cette inhibition repose sur l'activation (phosphorylation) de la protéine PKR par l'IFN-α qui réprime les étapes tardives du cycle viral. D'autre part, nous avons étudié le rôle de la protéine ADAR1-p150 dont l'expression est aussi induite par l'IFN-α. La protéine ADAR-1-p150 est surexprimée dans les lymphocytes primaires activés et dans des lymphocytes infectés par HTLV-1 ou HTLV-2. Nous avons montré que la protéine ADAR-1-p150 contrecarrait l'effet inhibiteur de l'IFN-α sur le cycle d'HTLV-1 et d'HTLV-2, grâce à sa capacité à inhiber l'activation de PKR. Ces résultats suggèrent qu'un équilibre entre l'expression de ces 2 protéines peut influer sur le déroulement de l'infection par HTLV-1 ou HTLV-2. Enfin, nous avons observé que l'IFN-α n'avait pas d'effet sur des cellules déjà infectées par HTLV-1 contrairement à HTLV-2 qui reste partiellement sensible à cette cytokine. Un rôle différent de l'IFN-α sur HTLV-1 et HTLV-2 pourrait être à l'origine de la différence de pathogénicité entre les deux virus. / HTLV-1 and HTLV-2 viruses are responsible for life-long infections. After a long latency period, 2 to 5 % of HTLV-1 infected people develop diseases such as Adult T cell leukemia (ATL) or Tropical Spastic Paraparesis/HTLV-1 associated Myelopathy (TSP/HAM). Although both viruses are very similar in their genomic organization and in their nucleotide sequence, HTLV-2 has not been associated to any malignant hematological disorders. Interferon α (IFN-α) plays a major role in host innate immune response. The role of IFN-α during HTLV-1 infection and ATL onset has poorly been investigated and results are controversial. My project was aimed at characterizing the role of IFN-α in HTLV-1 infection compared to HTLV-2 infection. We showed that IFN-α inhibits HTLV-1 and HTLV-2 de novo infection in T-cells. This inhibition is mediated through PKR activation (phosphorylation) that prevents the latest steps of the viral cycle. We also studied the effect of ADAR-1-p150 whose expression is also induced by IFN-α. We showed that ADAR-1-p150 counteracts the inhibitory effect of IFN-α on HTLV-1 and HTLV-2 cycles, through inhibition of PKR activation. These results suggest that a balance between ADAR-1-p150 and PKR expression could influence HTLV-1 and HTLV-2 infection. Furthermore we observed that IFN-α has no effect on HTLV-1 infected cells whereas HTLV-2 infected cells are still sensitive to the cytokine. A different effect of IFN-α on HTLV-1 and HTLV-2 could be involved in the distinct pathological outcomes of HTLV-1 or HTLV-2 infection.

Human T-lymfotropt virus (HTLV) är ett C-typ onkovirus som tillhör familjen Retroviridae som huvudsakligen angriper T-lymfocyter och orsakar leukemi och andra autoimmuna sjukdomar. I den nuvarande kliniska diagnostiken används Enzyme-linked immunosorbent assay och ibland vid screeningsmetoden uppträder ospecifika reaktioner. På senare tid har flera metoder baserade på real-tids PCR utvecklats för att bestämma halten av virala genom i patienter. Syftet med denna studie var att sätta upp och optimera en realtids-PCR för detektion av humant T-lymfotropt virus typ-1 och 2. Inför optimering av realtids-PCR extraherades DNA från MT-4 och MO-T cellinjer.  Under optimering av realtids-PCR användes SYBR Green och smältpunktsanalys där flera komponenter bl.a. templat-, primer-, magnesium- koncentrationer samt annealing/elongeringstemperaturen modifierades. Efter avslutad optimering utfördes probetitrering för att specifikt skilja ut HTLV-1 och HTLV-2. Amplifieringsprodukten verifierades med Sangersekvensering. För att hitta den lämpligaste metoden för extrahering av DNA från helblod testades olika extraheringsmetoder för DNA-preparering. Efter färdig optimering såg PCR-programmet ut enligt följande: 95ºC i 3 min följt av 45 cykler med 95ºC i 3s och 60ºC i 10s. De optimala koncentrationerna av de olika reagenserna var 0,5µM HTV-F5, 0,7µM HTV-R4, 0,2µM HTLV-P1 och 0,1µM HTLV-P2.  Den optimala extraktionsmetoden från helblod visades vara med MagNA Pure Compact med 500µL helblod. Den färdig optimerade PCR-metoden är en semi-kvanitativ metod som fungerar väl för detektion av HTLV 1 och 2, men vidareutveckling av metoden krävs innan den kan tas i bruk för klinisk diagnostik.

Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-10T17:37:43Z No. of bitstreams: 2 TESE Erlon dos Santos.pdf: 1734297 bytes, checksum: 205753dd558082606a830dc4239e9826 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-10T17:37:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Erlon dos Santos.pdf: 1734297 bytes, checksum: 205753dd558082606a830dc4239e9826 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-06-13 / Os vírus linfotrópicos de células T humana tipos 1 e 2 (HTLV-1/2) são retrovírus associados a algumas doenças. O HTLV-1 está associado à paraparesia espástica tropical/mielopatia (PET/MAH), enquanto o HTLV-2 tem sido ocasionalmente associado às síndromes neurológicas semelhantes a PET/MAH sem associação de malignidade. Os mecanismos envolvidos no surgimento das doenças ainda não estão bem definidos. Entretanto, a carga proviral do HTLV, as mutações e a proteína tax podem está envovolvidas no desenvolvimento da doença. Os objetivos do presente estudo foram caracterizar o HTLV em pacientes com PET/MAH e portadores e determinar a soroprevlência desses vírus em gestantes durante o pré-natal. O DNA proviral foi extraído a partir de células periféricas mononuclares, utilizando o kit comercial (QIAamp® DNA Blood Mini Kit) e a identificação do tipo viral foi realizada através da Nested-PCR. Já a carga proviral do HTLV-1 pela PCR quantitativa - expressas em 106/PBMC. Para classificar a sequência tax, foi utilizada a enzima de restrição Bsh1236I (BstUI). Na pesquisa do anti-HTLV1/2 nas gestantes foi utilizado o KIT ELISA Ab capture ELISA Teste System (Ortho clinical Diagnostic In, Raritan, USA). Foi utilizado o Teste de Fisher, Mann-Whitney para avaliar a média da carga proviral. A Razão de prevalência, qui-quadrado (x2) e exato de Fischer foram utilizados para determinar as associações entre as gestantes. O poder do teste foi de 95%, com p<0,05 como limite para a significância. Fizeram parte do estudo 101 pacientes infectados pelo HTLV 1/2 - sintomáticos e assintomáticos e 209 gestantes. O HTLV-1 foi identificado em 68,3% (69/101) e o HTLV-2 em 31,7% (32/101). A média da carga proviral do HTLV-1 nos pacientes portadores foi de 3,62 log10; DP ± 0,960; IC95% 3,31-3,93 e naqueles com PET/MAH foi de 3,18 log10; DP 1,261; IC95% 2,68-3,68 (p = 0.0218). Em relação à sequência tax do HTLV, o subgrupo A foi identificado em 95,7% (66/69) e o B em 4,3% (3/69). A soroprevalência do HTLV1/2 nas gestantes foi de 8,1% (17/209). O DNA proviral do HTLV-1 foi identificado em 64,2% (9/14), com média da carga proviral de 3,17 ± 1,87 log10. As demais amostras foram negativas para o HTLV-1. Todas as gestantes encontravam-se assintomáticas e nenhuma variável pesquisada apresentou associação estatisticamente significativa. Em conclusão, não houve diferença entre a média da carga proviral do HTLV-1 entre os pacientes com PET/MAH e portadores. Houve uma maior frequência do subgrupo A da sequência tax nos pacientes com PET/MAH, sem associação com o desenvolvimento da doença. Foi elevada a prevalência da infecção pelo HTLV-2 nos portadores. A alta soroprevalência do HTLV-1/2 nas gestantes sugere a implantação da triagem deste vírus no pré-natal.

Bien que très proches dans leur organisation génomique, le rétrovirus HTLV-1 est impliqué dans le développement de la leucémie à cellule T de l’adulte (ATL) alors que l’infection par HTLV-2 n’a jamais été associée à des désordres hématologiques malins. La transformation des cellules infectées par HTLV-1 a longtemps été attribuée uniquement à la protéine virale transactivatrice Tax (Tax-1). Cependant, son expression est très faible dans les cellules ATL. La protéine HBZ a été découverte en 2002. Elle est traduite à partir d'un ARNm transcrit à partir du LTR 3' d'HTLV-1 et est exprimée par les cellules infectées issues de tous les patients HTLV-1 quel que soit leur statut clinique. HBZ participe au maintien du phénotype tumoral en stimulant la prolifération des cellules leucémiques et intervient dans l'échappement du virus au système immunitaire. Des analyses in silico nous avaient permis de détecter un cadre ouvert de lecture sur le brin complémentaire de l’ARN génomique d’HTLV-2. Mon travail de thèse a consisté à amplifier et caractériser d’une part le transcrit APH-2 et d’autre part la protéine qui en est issue. Nous avons démontré dans un premier temps que la transcription d’APH-2 était initié dans le LTR 3’ et que le transcrit APH-2 était épissé et poly-adénylé. Nous avons ensuite mis en évidence l’expression d’APH-2 dans les lignées infectées par HTLV-2, ainsi que dans des cultures de lymphocytes issus de deux porteurs sains africains. La mise au point d’une technique quantitative de RT-PCR nous a permis de détecter APH-2 ex vivo chez 94% des individus d’une série de 51 porteurs sains américains. Nous avons aussi montré que l'expression de cet ARNm était proportionnelle à la charge provirale. APH-2 code une protéine de 183 acides aminés dont nous avons mis en évidence l’expression dans la lignée MO. Mes travaux ont aussi permis de démontrer le rôle inhibiteur d’APH-2 sur la transcription virale malgré l’absence d’un domaine bZip classique, ainsi que son interaction avec le facteur de transcription CREB. Par immunofluorescence, nous avons établi la localisation nucléaire d’APH-2. La protéine semble associée aux corps PML grâce à une région de six arginines comprise entre les résidus 78 et 92. Cependant, contrairement à HBZ, nous n’avons pas observé d’interactions entre APH-2 et les facteurs cJun, JunD ou le cofacteur de transcription CBP/p300. De plus nous avons observé qu’APH-2 était incapable d’induire la prolifération des lymphocytes in vitro alors qu’une lymphocytose est souvent observée chez les porteurs d’HTLV-2. Grâce à une approche comparative, mes travaux ont ainsi permis d’apporter des éléments nouveaux dans la compréhension de la différence de pathogénicité qu’il existe entre HTLV-1 et HTLV-2. / Although they are very similar in their genomic organization, the HTLV-1 retrovirus is involved in the development of adult T cell leukaemia (ATL) while HTLV-2 has not been associated to any malignant haematological disorders. The tumoral transformation of infected cells was widely associated to the viral transactivactor protein Tax (Tax-1), which modulates many cellular functions. However, its expression is slightly in ATL cells. In 2002, the HBZ protein was discovered, encoded from the 3’ LTR by the complementary strand of HTLV-1 and expressed by all HTLV-1 infected people. HBZ participates in the maintenance of the tumoral phenotype by stimulating leukemic cells proliferation and is involved in the immune system escape. We recently detected a coding region by an in silico analysis in the complementary strand of HTLV-2. My work consisted in the characterization of the APH-2 transcript, and in a second part, of the associated protein. At first, we characterized the APH-2 transcription initiation in the 3’LTR and that transcript was spliced and poly-adenylated and demonstrated that the APH-2 expression in all HTLV-2 cell lines and in short cultured lymphocytes from African healthy carriers. We used a quantitative RT-PCR on uncultured cells from 51 American HTLV-2 healthy carriers and we we detected APH-2 expression in 94% of them. We then showed that APH-2 RNA expression is correlated to the HTLV-2 proviral load. The APH-2 transcript encoded a 183 amino acid protein that was shown to be expressed in the HTLV-2 infected Mo cell line. Our work demonstrated the inhibitory functions of APH-2 in the viral transcription and its interaction with the transcriptional cofactor CREB despite the lack of a bZip domain. By an immunofluorescence approach we established the nuclear localisation of APH-2, which is in particular in the PML nuclear bodies. We demonstrated that six arginines in the 78-92 amino acids region is involved in this PML colocalization. Contrary to HBZ, we didn’t observe any interaction with between APH-2 and cJun or JunD factors nor with the transcriptional cofactor CBP/p300. Furthermore we showed that APH-2 is not involved in lymphocyte proliferation in vitro although a lymphocytosis is often observed in HTLV-2 carriers. According to this comparative approach, my work allowed us to better understand the difference of pathogenicity existing between HTLV-1 and HTLV-2.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria do Perpetuo Socorro Vendramini Orletti.pdf: 2872312 bytes, checksum: c043f9bf551219d5304da6f385e748f0 (MD5) Previous issue date: 2012-08-31 / Introdução: Existem poucos estudos realizados em amostras populacionais sobre a soroprevalência da infecção pelos vírus linfotrópicos de células T humanas tipo 1 e 2 (HTLV-1/2) e não se conhece a soroprevalência dessa infecção no Município de Vitória-ES. Objetivos: a) Determinar a prevalência sorológica da infecção por HTLV-1/2 em uma amostra de adultos, que procuram atendimento nos serviços de saúde do Município de Vitória-ES; b) Discriminar os tipos de HTLV encontrados; c) Investigar possíveis formas de transmissão dos tipos virais encontrados e fatores associados; d) Georeferenciar a população da amostra e os casos positivos. Métodos: Estudo transversal, de setembro de 2010 a dezembro de 2011, em indivíduos de ambos os sexos, com 18 anos ou mais, residentes no município de Vitória-ES. Amostras de sangue venoso foram coletadas e submetidas à pesquisa de anticorpos anti-HTLV-1/2 por meio de imunoensaio quimioluminescente (CMIA). Indivíduos com resultado CMIA reativo foram submetidos a nova coleta de sangue para repetição do CMIA, seguida por PCR em tempo real para confirmar e discriminar a infecção pelos tipos virais. Resultados: Foram testadas 1502 amostras, sendo 52,7% (791/1502) do sexo feminino e 47,3% (711/1502) do sexo masculino, distribuídas nas seis regiões de saúde, de acordo com a estimativa populacional do ano de 2009, no Município de Vitória-ES. A soroprevalência geral para HTLV-1/2 na amostra foi de 0,53% (8/1502; IC 95%; 0,2 - 0,9%). A taxa de infecção foi de 0,7% em homens (5/711; IC 95%; 0,1 - 1,3%), e 0,4% em mulheres (3/791; IC 95%; 0 - 0,8%). Sete amostras foram positivas para HTLV-1, uma amostra positiva para HTLV-2. Conclusões: A prevalência de HTLV-1/2 encontrada (0,53%) é considerada intermediária. Os dois tipos virais (HTLV-1 e HTLV-2) estão presentes na população estudada, com maior ocorrência do HTLV-1 (7:1). Nenhuma das variáveis testadas permaneceu associada ao HTLV-1/2 no modelo final de regressão logística, mas foi importante a infecção via transfusão de sangue, ocorrida antes de 1993, em dois indivíduos. O georeferenciamento mostrou uma maior proporção de casos positivos nos naturais do Espírito Santo, originados de município do Norte do Estado, próximo à Bahia / Introduction: There are few studies in samples of the general population on the seroprevalence of infection by human T cell lymphotropic virus type 1 and 2 (HTLV-1/2) and the seroprevalence of this infection in the municipality of Vitoria-ES is not known. Objectives: a) To determine the prevalence of serological infection by HTLV-1/2 in a sample of adults who seek care in the health services of the municipality of Vitoria -ES, b) To discriminate the types of HTLV found c) To investigate possible ways of transmission and associated factors; d) To establish the location by geo-reference of the positive cases in the sample of the population. Methods: a cross sectional study performed from September 2010 to December 2011, in individuals of both sexes, aged 18 or older residing in Vitória-ES. Venous blood samples were collected and submitted to search for anti-HTLV-1/2 antibodies by chemiluminescent immunoassay (CMIA). Individuals with CMIA reactive results were submitted to new blood collection for retesting of the CMIA, followed by PCR in real time to confirm and discriminate the infection by viral types. Results: From the 1502 samples tested, 52,7% (791/1502) were female and 47,3% (711/1502) male, distributed in six health zones, according to the estimated population of the year 2009, in Vitória-ES. The general seroprevalence for HTLV-1/2 in the sample was 0,53% (8/1502; 95% CI; 0,2 0,9%). The infection rate was 0,7% in men (5/711; 95% CI; 0,1 1,3%), and 0,4% in women (3/791; 95% CI; 0 0,8 %). Seven samples were positive for HTLV-1, a positive sample for HTLV-2. Conclusions: The prevalence found (0,53%) is considered intermediate. The two viral types (HTLV-1 and HTLV-2) are present, with greater occurrence of HTLV-1(7:1). None of the tested variables remained associated with HTLV-1/2 in the final logistic regression model, but it was important the infection via blood transfusion, that occurred prior to 1993, in two individuals. The geo-reference location showed a higher proportion of positive cases in individuals born in Espirito Santo state originated from northern towns close to Bahia state

Le virus T lymphotrope humain de type 1 (HTLV-1, Human T cell Leukemia Virus type 1) est l'agent responsable de la leucémie à cellules T de l'adulte, une prolifération maligne de lymphocytes T CD4+. L'activation constitutive de la voie NF-kB dans les lymphocytes T exprimant la protéine virale Tax s'est révélée primordiale pour la prolifération et la transformation induites par HTLV-1. Selon le modèle classique, Tax agit à deux niveaux de la voie NF-kB. Dans le cytoplasme, Tax active constitutivement le complexe IKK (IKB Kinase) en se liant à sa sous-unité régulatrice NEMO/IKKy. Dans le noyau, Tax interagit directement avec les dimères NF-kB dans des corps nucléaires Tax. L'ubiquitinylation et la SUMOylation de Tax ont été initialement décrites comme nécessaires pour l'activation de la phase cytoplasmique et de la phase nucléaire respectivement. Cependant, les mécanismes régulateurs des modifications post-traductionnelles de Tax restent difficiles à identifier car il n'a pas été possible d'étudier séparément l'ubiquitinylation et la SUMOylation de Tax.Au laboratoire, nous avons généré et caractérisé fonctionnellement un nouveau mutant de Tax qui nous a permis de découpler les rôles de l'ubiquitinylation et de la SUMOylation de Tax. Tax- P79AQ81A est ubiquitinylé de façon quantitativement similaire à Tax mais présente une forte réduction (80%) de SUMOylation. De plus, Tax-P79AQ81A ne forme pas de corps nucléaires. Néanmoins, ces deux défauts ne semblent pas préjudiciables pour la capacité du mutant à activer la voie NF-KB non seulement dans des lignées cellulaires mais également dans des lymphocytes T CD4+ primaires. En parallèle, nous avons montré que les corps nucléaires Tax sont rarement présents dans des lymphocytes T chroniquement infectés par HTLV-1, renforçant l'idée que ces structures ne sont pas requises pour l'activation de la voie NF-KB et probablement pas pour les autres fonctions de Tax. Enfin, nous avons démontré que les capacités d'activation de la voie NF-KB de différents mutants de Tax sont fortement corrélées à leur niveau d'ubiquitinylation mais pas de SUMOylation, confirmant que l'ubiquitinylation de Tax est la modification essentielle pour l'activation de la voie NF-KB.Le virus HTLV-2 ne possède pas les propriétés transformantes du virus HTLV-1 et les propriétés de la protéine Tax2 comparées à celles de Tax1 pourraient être à l'origine des différences de pathogénicité entre les deux virus. Notre étude a révélé que, de façon surprenante, l'activation de la voie NF-KB par la protéine Tax2 est non seulement indépendante de la SUMOylation et de la formation des corps nucléaires comme pour Tax1, mais également indépendante d'une quelconque ubiquitinylation, suggérant des mécanismes différents d'activation du complexe IKK parTax1 et Tax2.Nos études, aussi bien de la protéine Tax1 que de la protéine Tax2, nous ont donc permis de revisiter le modèle actuel d'activation de la voie NF-kB en démontrant l'impact mineur de la SUMOylation et en révélant une différence majeure en ce qui concerne le rôle de l'ubiquitinylation, distinguant les virus HTLV-1 et HTLV-2 / Human T cell Leukemia Virus type 1 (HTLV-1) is the etiological agent of adult T-cell leukemia (ATL), a CD4+ T-cell malignancy, Constitutive activation of the NF-KB pathway plays a crucial role in cell proliferation and transformation induced by HTLV-1, According to the classical model, Tax acts at two levels on the NF-KB pathway, In the cytoplasm, Tax activates the IKB kinase (IKK) complex by directly interacting with the regulatory subunit NEMO/IKKy, In the nucleus, Tax directly interacts with the NF-KB dimers in particular structures named Tax nuclear bodies, Both ubiquitinylation and SUMOylation were initially considered as critical for activation of the cytoplasmic or nuclear phase, respectively, However, the individual role of each modification was difficult to assess because of the lack of molecular tools allowing to study Tax ubiquitination and SUMOylation separately,In the laboratory, we functionally characterized a new Tax mutant, Tax-P 7 9AQ81A, which gave us the opportunity to uncouple Tax ubiquitination and SUMOylation, Indeed, Tax-P79AQ81A is ubiquitinated similarly to wild-type Tax but is severely reduced in SUMOylation, In addition, Tax- P 7 9AQ81A does not form nuclear bodies, However, despite these two severe defects, we found that the mutant is fully able to activate the NF-KB pathway not only in cells lines but also in CD4+ primary T cells, Moreover we showed that Tax nuclear bodies are hardly present in HTLV-1 chronically infected T cell lines, confirming the idea that these structures are not required for Tax-induced NF-KB activation and probably for other Tax functions, Finally, we demonstrated that ability of different Tax mutant to activate the NF-KB pathway is strongly correlated with their ubiquitination but not SUMOylation level, confirming that ubiquitination is the key Tax modification required for activation of the NF-KB pathway,In contrast to HTLV-1, the related HTLV-2 virus is not a transforming virus and therefore, the properties of the Tax2 protein compared to that of Tax1 could be responsible for the different pathogenicity of HTLV-2 and HTLV-1, We studied the post-translational modifications of Tax2 and surprisingly, found that Tax2-induced NF-KB activation is not only independent of SUMOylation and nuclear body formation but also of ubiquitination, suggesting different mechanisms of activation of the IKK complex by Tax1 and Tax2,In conclusion, our results led us to propose a new model for both Tax1- and Tax2-induced NF- KB activation in which SUMOylation has a minor role and in which the requirement of Tax ubiquitination distinguishes between HTLV-1 and HTLV-2

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Between August 2011 and July 2012, 37,306 first-time blood donors were screened by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the presence of anti-HTLV-1/2 antibodies in the Centro de Hematologia e Hemoterapia do Estado do Piauí (HEMOPI). The positive individuals were recruited for a second blood collection and interview, when their family members were invited to participate to this investigation. Sera were tested by ELISA, and the positivity confirmed by line immunoassay (LIA). Whole-blood samples of anti-HTLV seropositive individuals were submitted to proviral DNA detection by polymerase chain reaction (PCR) and nucleotide sequencing, followed by phylogenetic analysis. Of 37,306 first-time blood donors, 48 were anti-HTLV-1/2 reactive by ELISA. By testing the second serum samples, 47 (0.13%) were also reactive by ELISA. Among these, 22 (0.06%) were anti-HTLV-1 and 14 (0.04%) anti-HTLV-2 positive by LIA. Most of HTLV-1 or 2 infected patients reported risk characteristics related to vertical and sexual transmission. Genetic characterization demonstrated that all 22 HTLV-1 isolates belonged to the Cosmopolitan subtype HTLV-1a Transcontinental subgroup A. For HTLV-2, 11/14 (78.6%) anti-HTLV-2 positive samples were amplified and then identified as subtype a (HTLV-2 a/c). Of 21 families invited to take part in the study, five agreed to participate. Three had, in addition to the index case (blood donor), two or more anti-HTLV-1 or 2-positive members (ELISA/LIA). By combining epidemiological data of the first family members with molecular analysis of their isolates, intrafamilial/vertical transmission of HTLV-1 was suggested, as well as the transmission of HTLV-2 among the second and the third families. Additionally, HTLV-2 sexual transmission could be considered in the last family. The prevalence of 0.13% (CI 95%: 0.11-0.17) for HTLV-1/2 found in this study is similar to those observed in blood donors in Brazil, and HTLV-1 and 2 subtypes identified in this investigation were consistent with those circulating in Brazil. In addition, this study provides evidence of intrafamilial transmission of HTLV-1 and 2. / O vírus linfotrópico de células T humanas 1 (HTLV-1) é o agente etiológico da leucemia de células T do adulto (ATL) e mielopatia associada ao HTLV-1/paraparesia espástica tropical (HAM/TSP), além de outras doenças inflamatórias. O HTLV-2 tem sido associado com síndrome similar a HAM/TSP e outras manifestações clínicas. O presente estudo tem como objetivo investigar os aspectos soroepidemiológicos e moleculares da infecção pelo HTLV-1/2 em primodoadores de sangue e seus familiares no Estado do Piauí. No período de agosto/2011 a julho/2012, 37.306 primodoadores de sangue foram triados para detecção de anticorpos anti-HTLV-1/2 por ensaio imunoenzimático (ELISA), no Centro de Hematologia e Hemoterapia do Estado do Piauí (HEMOPI). Os indivíduos reagentes foram recrutados para segunda coleta de sangue e entrevista, ocasião que seus familiares foram convidados para participar da investigação. Os soros foram testados por ELISA, e a reatividade confirmada pelo line immunoassay (LIA). As amostras de sangue total dos indivíduos anti-HTLV-1/2 reagentes foram submetidas à detecção do DNA proviral por reação em cadeia pela polimerase (PCR) e sequenciamento, seguido da análise filogenética. Dos 37.306 primodoadores de sangue triados para anti-HTLV-1/2, 48 foram reagentes pelo ELISA. Ao testar a segunda amostra desses indivíduos também por ELISA, 47 (0,13%) permaneceram como reagentes. Destas, 22 (0,06%) foram anti-HTLV-1 e 14 (0,04%) anti-HTLV-2 positivas pelo LIA. A maioria dos doadores infectados pelo HTLV-1 ou 2 relatou características de risco relacionadas à transmissão vertical e sexual. A caracterização genética demonstrou que os 22 isolados do HTLV-1 foram pertencentes ao subtipo Cosmopolita (HTLV-1a) do subgrupo Transcontinental (A). Para o HTLV-2, 11/14 (78,6%) amostras anti-HTLV-2 positivas foram amplificadas e, posteriormente, caracterizadas como do subtipo a (HTLV-2a/c). De 21 famílias dos primodoadores de sangue HTLV-1/2 soropositivos contactadas, cinco concordaram em participar do estudo. Três famílias apresentaram, além do caso índice (doador), pelo menos dois outros membros anti-HTLV-1 ou 2 soropositivos (ELISA/LIA). Combinando os dados epidemiológicos dos membros da primeira família com a análise molecular de seus isolados, foi evidenciada a ocorrência de transmissão intrafamiliar/vertical do HTLV-1 e, na segunda e terceira famílias, do HTLV-2. Adicionalmente, nesta última, a transmissão sexual do HTLV-2 pode ser considerada. A prevalência encontrada para o HTLV- 1/2 no presente estudo (0,13%; IC 95%: 0,09-0,17) é concordante com as estimadas em doadores de sangue no Brasil, e os subtipos do HTLV-1 e 2 identificados nesta investigação corroboram a predominância desses no País. Este estudo fornece, ainda, evidência de transmissão intrafamiliar do HTLV-1 e 2.

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