Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-18Bitstream added on 2014-06-13T19:21:43Z : No. of bitstreams: 1 calmon_mf_dr_sjrp.pdf: 7036402 bytes, checksum: b702ff2267d57efa64885bfa0453276c (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC) é uma doença heterogênea que afeta o epitélio da cavidade oral, laringe e faringe. A maioria dos pacientes é diagnosticada em estágios avançados da doença e ainda não existe nenhum marcador sensível e específico para o comportamento agressivo deste tumor. Portanto, uma detecção precoce e biomarcadores de prognóstico são altamente necessárias para uma administração mais racional da doença. A hipermetilação de ilhas CpGs é um dos mecanismos epigenéticos mais importantes que levam a um silenciamento gênico em tumores e tem sido extensivamente utilizados para a identificação de biomarcadores. Neste estudo foram combinados as análises de Rapid Substractive Hybridization (RaSH) e microarray de uma maneira hierárquica para selecionar genes que, supostamente, são reativados pelo agente desmetilante 5`'Aza'2`'deoxicitidina (5Aza'dC) em linhagens celulares derivados de carcinoma de cabeça e pescoço (FaDu, UM' SCC'14A, UM'SCC'17A e UM'SCC'38). Esta análise combinada identificou 78 genes dos quais 35 foram reativados em, pelo menos, 2 linhagens celulares e apresentavam ilha CpG nas suas regiões 5`. A reativação de três destes 35 genes (CRABP2, MX1 e SLC15A3) foi confirmada por PCR em tempo real (Fold change ≥ 3). O seqüenciamento de bissulfito de sódio das suas ilhas CpGs revelou que eles estão, de fato, diferencialmente metilados em linhagens celulares derivadas de carcinoma de cabeça e pescoço. Foram detectadas uma maior freqüência de hipermetilação dos genes CRABP2 (58.1% para a região 1) e MX1 (46.3%) em amostras primárias de câncer de cabeça e pescoço quando comparados a linfócitos de indivíduos saudáveis utilizando o PCR de metilação específica (MSP). Finalmente a ausência da proteína CRABP2 foi associada com... / Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a heterogeneous disease affecting the epithelium of the oral cavity, pharynx and larynx. Most patients are diagnosed at late stages of the disease and no sensitive and specific predictors of aggressive behavior have been identified yet. Therefore, early detection and prognostic biomarkers are highly desirable for a more rational management of the disease. Hypermethylation of CpG islands is one of the most important epigenetic mechanisms that leads to gene silencing in tumors and has been extensively used for the identification of biomarkers. In this study, we combined Rapid Subtractive Hybridization (RaSH) and microarray analysis in a hierarchical manner to select genes that are putatively reactivated by the demethylating agent 5'aza'2’'deoxycytidine (5Aza'dC) in HNSCC cell lines (FaDu, UM'SCC'14A, UMSCC'17A, UM'SCC'38A). This combined analysis identified 78 genes of which 35 were reactivated in at least 2 cell lines and harbored a CpG island at their 5’ region. Reactivation of three out of these 35 genes (CRABP2, MX1 and SLC15A3) was confirmed by qRT'PCR (fold change ≥ 3). Bisulfite sequencing of their CpG islands revealed that they are indeed differentially methylated in the HNSCC cell lines. Using Methylation Specific PCR (MSP), we detected a higher frequency of CRABP2 (58.1% for region 1) and MX1 (46.3%) hypermethylation in primary HNSCC, when compared to lymphocytes from healthy individuals. Finally, absence of the CRABP2 protein was associated with decreased disease'free survival rates, supporting a potential use of CRABP2 expression as a prognostic biomarker for HNSCC patients

abstract: CD8+ T-lymphocytes (CTLs) are central to the immunologic control of infections and are currently at the forefront of strategies that enhance immune based treatment of a variety of tumors. Effective T-cell based vaccines and immunotherapies fundamentally rely on the interaction of CTLs with peptide-human leukocyte antigen class I (HLA-I) complexes on the infected/malignant cell surface. However, how CTLs are able to respond to antigenic peptides with high specificity is largely unknown. Also unknown, are the different mechanisms underlying tumor immune evasion from CTL-mediated cytotoxicity. In this dissertation, I investigate the immunogenicity and dysfunction of CTLs for the development of novel T-cell therapies. Project 1 explores the biochemical hallmarks associated with HLA-I binding peptides that result in a CTL-immune response. The results reveal amino acid hydrophobicity of T-cell receptor (TCR) contact residues within immunogenic CTL-epitopes as a critical parameter for CTL-self/nonself discrimination. Project 2 develops a bioinformatic and experimental methodology for the identification of CTL-epitopes from low frequency T-cells against tumor antigens and chronic viruses. This methodology is employed in Project 3 to identify novel immunogenic CTL-epitopes from human papillomavirus (HPV)-associated head and neck cancer patients. In Project 3, I further study the mechanisms of HPV-specific T-cell dysfunction, and I demonstrate that combination inhibition of Indoleamine 2, 3-dioxygenase (IDO-1) and programmed cell death protein (PD-1) can be a potential immunotherapy against HPV+ head and neck cancers. Lastly, in Project 4, I develop a single-cell assay for high-throughput identification of antigens targeted by CTLs from whole pathogenome libraries. Thus, this dissertation contributes to fundamental T-cell immunobiology by identifying rules of T-cell immunogenicity and dysfunction, as well as to translational immunology by identifying novel CTL-epitopes, and therapeutic targets for T-cell immunotherapy. / Dissertation/Thesis / Doctoral Dissertation Biological Design 2017

O câncer é considerado uma doença genética, extremamente complexa, que resulta de alterações concomitantes em genes geralmente relacionados à proliferação, diferenciação e morte celular. Os tumores de cabeça e pescoço englobam ampla variedade de neoplasias malignas que tem origem na mucosa do segmento aerodigestório superior, sendo responsável por cerca de 5% de todos os novos tumores diagnosticados. A Odontologia desempenha hoje um papel importante nas diferentes fases terapêuticas contra o câncer, seja na fase que antecede a cirurgia, em que uma avaliação prévia poderá reduzir de forma efetiva complicações oriundas de processos infecciosos ou inflamatórios crônicos, de origem bucal, que podem exacerbar após o tratamento cirúrgico, seja na prevenção das sequelas bucais que ocorrem durante e após o tratamento por radioterapia, como a osteorradionecrose dos tecidos da região irradiada. Esse estudo teve como objetivo avaliar, bilateralmente, por meio da eletromiografia (EMG), o padrão de comportamento (morfológico e funcional) da atividade dos músculos masseter e temporal nas condições clínicas de Repouso, Protrusão, Lateralidades direita e esquerda, Máxima Intercuspidação Habitual (MIH) e Mastigação com Parafilme M®. Avaliou também a espessura muscular por meio da ultrassonografia no Repouso e na Máxima Intercuspidação Habitual (MIH) e a força de mordida molar máxima direita e esquerda de dez indivíduos dentados totais, portadores de câncer de cabeça e pescoço, após tratamento de radioterapia no \"Hospital do Câncer de Barretos (Fundação Pio XII)\" e compará-los com um Grupo controle, pareados sujeito a sujeito, por peso, idade e gênero. As médias eletromiográficas evidenciaram que no Repouso, Protrusão e na Lateralidade esquerda ocorreram diferenças estatisticamente significantes. Na avaliação com o ultrassom, a espessura muscular foi maior para os indivíduos com câncer no repouso e na MIH com resultados estatisticamente significante somente para o temporal direito durante a MIH. Foi possível verificar durante a realização dos exames eletromiográficos que o comportamento de ativação das fibras musculares era desordenado nos indivíduos com câncer quando comparados com o Grupo controle. Os indivíduos tratados de câncer de cabeça e pescoço avaliados no presente estudo revelaram atividade eletromiográfica aumentada quando comparada com o Grupo de indivíduos controle para todas as situações clínicas. Este resultado é um forte indício de hiperatividade muscular. Pode-se concluir que o tratamento aplicado em indivíduos com câncer de cabeça e pescoço gerou um aumento na atividade eletromiográfica e na espessura dos músculos da mastigação e da força de mordida quando comparados com indivíduos controles. Estes resultados são indicativos de disfunção muscular e de contração desorganizada e ineficiente das fibras musculares do sistema estomatognático. / Cancer is considered a genetic disease, extremely complex, resulting in concomitant changes in genes generally related to proliferation, differentiation and cell death. Tumors of the head and neck are a wide variety of malignancies that originate in the lining of the upper aerodigestive segment, accounting for about 5% of all new tumors diagnosed. Dentistry plays an important role in the different phases therapies against cancer, in the stage prior to surgery, in which a prior assessment can effectively reduce complications arising from chronic inflammatory or infectious processes of oral origin, which may exacerbate after surgical treatment, or prevention of the sequelae that occur during buccal and after treatment by radiotherapy as osteoradionecrosis of tissue irradiated area. This study aimed to evaluate by electromyography (EMG), the activity behavior (morphological and functional) of the masseter and temporal muscles in clinical conditions of rest, protrusion, right and left lateral, maximum intercuspal habitual (MIH) and chew with Parafilm M®. Also assessed muscle`s thickness by ultrasound in rest and maximal intercuspal habitual (MIH) and maximal molar bite force, both sides, in ten dentate patients after cancer of the head and neck radiotherapy treatment ended in the \"Hospital de Cancer de Barretos (Fundação Pio XII)\" and compare them with a control group matched for each subject, by weight, age and gender. The EMG average showed that in the rest, protrusion and left laterality clinical conditions the differences were statistically significant. In the evaluation with ultrasound, muscle thickness was greater for individuals with cancer at rest and MIH, with statistically significant only for the right temporal muscle during the MIH. It was verified during the examinations that the behavior of electromyographic activation of muscle fibers was disordered in individuals with cancer when compared with the control group. Individuals treated for head and neck cancer in the current study revealed electromyographic activity increased when compared with the group of control subjects for all clinical situations. This result is a strong indication of muscle hyperactivity. It can be concluded that the treatment applied to individuals with cancer of the head and neck caused an increase in the thickness, electromyographic activity of masticatory muscles and maximal molar bite force compared with control subjects. These results are indicative of muscle dysfunction and disorganized and ineffective contraction of the muscle fibers of the stomatognathic system.

O Projeto Genoma Humano do Câncer (PGHC), financiado pela FAPESP e pelo Instituto Ludwig de Pesquisa sobre o câncer, buscou identificar os genes expressos nos tipos mais comuns de câncer no Brasil. Tal projeto conseguiu identificar aproximadamente um milhão de sequências de genes de tumores frequentes no Brasil. A contribuição brasileira foi maior para tumores de cabeça e pescoço, mama e cólon. Uma das iniciativas mais recentes e estimuladas pelo PGHC é o projeto Genoma Clínico, o qual visa desenvolver novas formas de diagnóstico e tratamento do câncer através do estudo de genes expressos. A partir da análise molecular de tecidos saudáveis e neoplásicos em diferentes estágios, é possível identificar marcadores de prognóstico, permitindo escolhas de terapias mais adequadas e eficientes. A proteína MARK3 foi identificada como um desses marcadores, em neoplasias de tecidos de cabeça e pescoço, sendo o objetivo deste estudo a aplicação de técnicas de bioinformática e modelagem molecular no planejamento baseado em estrutura de candidatos a fármacos antineoplásicos que bloqueiem a atividade da proteína MARK3. Após screening virtual em bases de dados de compostos (1.000.000 aproximadamente) com propriedades drug-like, 20 compostos com potencial de inibidor da MARK3 foram selecionados. Os modos de ligação para cada um dos mesmos no sítio ligante da proteína MARK3 foram sugeridos por simulações de docking e apresentaram um bom encaixe espacial com os sítios receptores virtuais calculados pelos campos de interação molecular (MIF). Simulações de dinâmica molecular foram realizadas com o intuito de avaliar a estabilidade dos compostos selecionados, que também foram avaliados quanto à presença de grupamentos toxicofóricos em sua estrutura. / The Brazilian Project Genoma Câncer (PGHC) supported by FAPESP and the Ludwig Institute for Cancer Research, intended to identify the genes involved in the most common cases of cancer in Brazil. In this project about a million of gene sequences were identified. The major contribution was made in breast, colorectal and head and neck cancers. The results obtained stimulated the creation of another project, called Genoma Clínico, which intend to develop new trends in treatments and diagnosis of cancer based on the study of expressed genes. Analyzing healthy and neoplasic tissues in different stages, it is possible to identify molecular markers related to the prognosis of cancer, allowing the use of more efficient therapies. The MARK3 protein was identified as a molecular marker in head and neck cancer, where the objective of this work lies in the application of bioinformatics and molecular modeling strategies by structure-based drug design to identify potential antineoplasic drug candicates that could act against MARK3 protein. After the virtual screening simulations performed with drug-like compound databases, containing approximately 1.000.000 compounds, 20 were selected as potential ligands of MARK3 protein. The binding modes suggested for these compounds, by docking simulations, presented a good spatial fit when compared with the virtual receptor sites calculated by molecular interaction fields (MIF). Molecular dynamics simulations were performed in order to evaluate de stability of the binding modes suggested. The potential ligands were also evaluated to identify toxicophoric features in its chemical structures.

O câncer de cabeça e pescoço pode acarretar consequências aos indivíduos, como prejuízos na saúde oral e na performance mastigatória devido à localização do tumor ou pelo próprio tratamento, dificultando o consumo alimentar, resultando em desnutrição e prejuízos na qualidade de vida mesmo após o término do tratamento. O presente estudo teve como objetivo verificar a relação entre a função mastigatória, a condição nutricional, a saúde oral e a qualidade de vida em saúde oral em indivíduos após o tratamento de câncer de cabeça e pescoço. Foram avaliados 20 indivíduos que atenderam aos critérios de inclusão propostos, por meio da eletromiografia de superfície (EMGs) dos músculos masseter e temporal durante a mastigação unilateral; da avaliação antropométrica do estado nutricional, com peso, estatura, índice de massa corporal (IMC), pregas cutâneas; da avaliação dietética, através do recordatório alimentar de 24 horas; da avaliação da saúde oral, considerando o índice de atividade de cárie (CPOD), índice periodontal comunitário (CPI) e avaliação de uso e necessidade de prótese; da qualidade de vida com o instrumento Oral Health Impact Profile (OHIP-14). A EMGs demonstrou na avaliação da função mastigatória, na prova de Máxima Contração Voluntária (MCV) valores próximos de 100% para uma simetria perfeita da atividade muscular, valor de 9,07% para ausência de deslocamento dos músculos mastigatórios e o índice de atividade obteve maior prevalência dos músculos temporais. Na mastigação unilateral, os pacientes apresentaram padrão assimétrico na mastigação, assimetria entre os músculos masseteres e temporais para a mastigação do lado esquerdo, além de um predomínio do lado de trabalho. Na avaliação antropométrica 20% apresentaram baixo peso e 45% excesso de peso no IMC, enquanto a CB indicou 15% obesidade e 40% algum grau de desnutrição, confirmada na CMB. Para a porcentagem de gordura 20% estavam muito baixo e 30% acima do recomendado. Na avaliação dietética, 65% apresentaram consumo do valor energético total acima do recomendado, os macronutrientes estavam adequados em 70%, 90% e 60% para carboidrato, proteína e lipídeo respectivamente, os pacientes apresentaram consumo adequado: Ferro, Fósforo, Zinco, Vitamina B12 e E, os micronutrientes acima foram: Magnésio e Sódio. Foi verificado consumo baixo da necessidade para os micronutrientes: Potássio, Cálcio, Selênio, Vitamina D, A e C. Houve correlações entre o menor consumo de gordura e maior simetria da atividade muscular. A avaliação da saúde oral mostrou que 55% tinham baixa e 45% muito baixa atividade de cárie, 50% com sangramento gengival, 60% presença de cálculo e 35% bolsa periodontal de 4-5mm, 35% e 40% necessitavam de utilizar algum tipo de prótese superior e inferior, respectivamente. O OHIP-14 indicou fraco impacto da qualidade de vida na saúde oral para 55% dos participantes. Na saúde oral, quanto menor a necessidade de prótese inferior e quanto menor atividade de cárie maior simetria de atividade muscular na mastigação, enquanto maior necessidade de prótese resultou em mais ciclos mastigatórios. Portanto, após termino do tratamento de câncer de cabeça e pescoço foram encontrados prejuízos na mastigação, no estado nutricional, na ingestão alimentar e na saúde oral, existindo relação entre a atividade muscular durante a função mastigatória, a condição dietética e a saúde oral, indicando a necessidade do atendimento multidisciplinar voltado a esses pacientes. / The head and neck cancer can cause consequences to individuals, as losses in oral health and mastigatory function due to the location of the tumor our the treatments, difficulting food intake so, therefore cause malnutrition and losses in quality of life, even after end of treatment. The aim of the present study is checking the relation between the mastigatory function, with nutritional status, with oral health and with quality of life in oral health, in individuals after of head and neck cancer treatment. The sample consisted of 20 individuals that attended the criteria of inclusion and exclusion, through the surface electromyography (EMGs) of mastication muscles, masseter and temporal was performed during unilateral chewing; the nutrition status, with weight, height, Body Mass Index (BMI), skinfold thickness, dietary assessment, through the 24-hour dietary recall; the oral health assessment, DMF index, community periodontal index (CPI) and assessment of the use and need of a prothesis; the quality of life with questionnaire Oral Health Impact Profile (OHIP- 14). The EMGs showed of the masticatory function in the test of Maximum voluntary teeth clenching (MVC), values of 100% for a perfect symmetry of muscle activity, 9,07% for the absence of masticatory muscle data and index for the temporal muscle had prevalence of temporal muscles. Unilateral chewing showed asymmetrical standard in chewing asymmetrical between the muscles masseter and temporal to chewing on the left side and predominance of working-side. The anthropometric evaluation indicated 20% malnutrition and 45% overweight in BMI, whereas the CB indicated 15% overweight and 40% some degree of malnutrition, confirmed in CMB. The body fat 20% were a lot below and 30% above recommended. Dietary assessment showed that carbohydrate, protein and lipid were adequate with 70%, 90% and 60% respectively. The patients showed adequate intake: iron, phosphorus, zinc, vitamin B12 and E, the higher intake of sodium and magnesium, and lower intake of, potassium, calcium, selenium, vitamin D, A and C. The oral health assessment indicated that 55% were lower and 45% a lot lower caries activity, 50% with gingival bleeding, 60% stone and 35% periodontal pocket of 4-5 mm, 35% and 40% needed the use some type of superior and inferior prosthesis, respectively. The OHIP-14 indicated weak impact of quality of life in oral health to 55% of sample. Had correlated between lower intake of fat, higher symmetry of muscle activity in chewing. The oral health, how lower the need the prosthesis inferior and how lower carie activity higher symmetry of muscle activity in chewing, while higher need of prosthesis indicated in more masticatory cycles. Therefore, after end of treatment of head and neck cancer was found consequences in mastication, nutritional status, food intake and oral health, existed relation between muscle activity during the masticatory function the dietetics and the oral health, indicated the need of multidisciplinary activity with emphasis on these patients.

Câncer de cabeça e pescoço é um termo amplo comumente utilizado para definir neoplasias da cavidade oral, faringe e laringe. O tratamento com cirurgia, quimioterapia e radioterapia está associado a vários efeitos colaterais, dentre eles prejuízos na condição oral, capacidade mastigatória e quadros de desnutrição. O presente estudo teve como objetivo verificar a influência da condição de saúde oral sobre a capacidade mastigatória e o estado nutricional em indivíduos que realizaram tratamento para câncer de cabeça e pescoço. A condição oral foi avaliada de acordo com a classificação do índice CPOD, CPI e avaliação de uso e necessidade de prótese; a capacidade mastigatória com o uso da Escala Funcional Intraoral de Glasgow; e o estado nutricional por meio do R24h e antropometria (ASG-PPP, IMC, CB, PCT e CMB). Foram incluídos no estudo dados de 23 indivíduos (18 homens e 5 mulheres) após tratamento do câncer de cabeça e pescoço com idade média de 57 anos. De acordo com a avaliação da condição oral, o CPOD médio foi 24,3, 43,4% da amostra era edêntulo, 91,3% necessitavam de prótese e apenas 56,5% utilizavam prótese. Indivíduos idosos apresentaram maior índice de utilização de prótese. O estado de saúde oral foi correlacionado com a capacidade mastigatória, onde 78,2% da amostra relataram dificuldade de mastigação. Além disso, a maior necessidade de prótese e pior capacidade mastigatória correlacionaram-se com maior pontuação da ASG-PPP, e o maior CPOD com menor PCT. A ASG-PPP indicou que 86,9% da amostra apresentava risco ou algum grau de desnutrição, 73,9% disfagia, 65,2% xerostomia, 60,8% disgeusia e 60,8% problemas dentários. O IMC e a CB indicaram eutrofia em 69,5% e 47,8% da amostra respectivamente, e nesta pesquisa ambos não foram bons indicativos de estado nutricional. A avaliação de tecido muscular (CMB) e adiposo (PCT) indicaram desnutrição em 69,5% e 34,7% da amostra, respectivamente. Já a avaliação dietética mostrou que 52,1%, 34,7% e 65,2% dos participantes da pesquisa apresentavam ingestão de energia, proteína e lipídeo maior que a sua necessidade, e 65,2%, 86,9%, 91,3%, 82,6%, 60,8%, 60,8%, consumo de carboidrato, fibra, ácido fólico, cálcio, ferro e riboflavina abaixo da sua necessidade, respectivamente. A maior escolaridade correlacionou-se com menor consumo de alimentos fonte de selênio e zinco, e maior consumo de B12, assim como a pior saúde oral e capacidade mastigatória correlacionaram-se com maior quantidade de vitamina A, cálcio, vitamina D, riboflavina, B12, ácido fólico e zinco, e menor quantidade de carboidrato, ferro e niacina da dieta. Desta maneira, podemos concluir que a condição oral influenciou a capacidade mastigatória de indivíduos após tratamento de câncer de cabeça e pescoço, e esta, quando prejudicada, correlacionou-se com o maior risco nutricional e perda de tecido adiposo. Além disso, a condição oral prejudicada contribuiu para a inadequação na ingestão de macro e micronutrientes. / Head and neck cancer is a broad term commonly used to define tumors of the oral cavity, pharynx and larynx. Treatment with surgery, chemotherapy and radiation therapy is associated with several side effects, including damage to the oral condition, chewing ability and malnutrition frames. This study aimed to assess the effect of oral health condition of the masticatory capacity and nutritional status in patients who underwent treatment for head and neck cancer. The oral condition was evaluated according to the classification of the DMFT index, CPI and assessment of use and need for prostheses; chewing ability with the use of Functional Scale Intraoral of Glasgow; and nutritional status through R24h and anthropometry (PG-SGA, BMI, MC, TSF and MMC). The study included data from 23 subjects (18 men and 5 women) after treatment of head and neck cancer with an average age of 57 years. According to the assessment of oral conditions, the average was 24.3 DMFT, 43.4% of the sample was edentulous, 91.3% prosthesis needed and only 56.5% used prosthesis. Elderly individuals showed the highest rate of use of the prosthesis, the state of oral health was correlated with chewing ability, where 78.2% of the sample reported difficulty chewing. Moreover, the greatest need of prosthesis and worse chewing ability correlated with higher scores of PG-SGA, and the largest DMFT with lower TSF. The PG-SGA indicated that 86.9% of the sample had some degree of risk or malnutrition, dysphagia 73.9%, 65.2% xerostomia, dysgeusia 60.8% and 60.8% dental problems. The IMC and the CB indicated eutrophic in 69.5% and 47.8% of the sample respectively, and this research both were not good indicators of nutritional status. The evaluation of muscle tissue (MMC) and fat (TSF) indicated malnutrition in 69.5% and 34.7% of the sample, respectively. Since dietary evaluation showed that 52.1%, 34.7% and 65.2% of survey participants had intakes of energy, protein and lipid greater than their need, and 65.2%, 86.9%, 91 3%, 82.6%, 60.8%, 60.8%, carbohydrate consumption, fiber, folic acid, calcium, iron and riboflavin below its necessity, respectively. The higher education correlated with reduced consumption of selenium and zinc-rich foods, and greater consumer B12, as well as the worst oral health and masticatory ability correlated with higher vitamin A, calcium, vitamin D, riboflavin, B12 , folic acid and zinc and low-carbohydrate, dietary iron and niacin. Thus, we can conclude that the oral condition influenced the chewing ability of individuals following treatment of head and neck cancer, and that, when impaired, correlated with higher nutritional risk and loss of adipose tissue. Furthermore, impaired oral condition contributed to inadequate intake of macro and micronutrients.

O diabetes mellitus (DM) está associado com alguns tipos de câncer. No entanto, estudos realizados sobre a associação entre DM e câncer de cabeça e pescoço (CCP) apresentaram resultados controversos. Na avaliação da associação entre DM e câncer, destaque deve ser dado à metformina, medicamento utilizado no DM tipo 2, que se mostra inversamente associado a alguns tumores. O objetivo deste estudo foi avaliar a associação entre DM e CCP, bem como o impacto do uso de metformina no risco de CCP. Este estudo caso-controle incluiu 1021 casos de CCP com confirmação histológica de carcinoma espino celular selecionados em cinco hospitais de grande porte no estado de São Paulo entre 2011 e 2014. Os 1063 controles foram recrutados nos mesmos hospitais, pareados por frequência com os casos por sexo e idade (em grupos de 5 anos). Para avaliar o risco de CCP associado ao DM, odds ratios (OR) e intervalos com 95 por cento de confiança (IC 95 por cento ) foram estimados por meio de regressão logística não condicional. Os participantes diabéticos tiveram associação inversa com o CCP (OR = 0,68; IC 95 por cento : 0,49-0,95), e a proteção foi maior entre diabéticos usuários metformina (OR = 0,54; IC 95 por cento : 0,29-0,99). Diabéticos usuários de metformina que eram fumantes (OR = 0,13; IC 95 por cento : 0,04-0,44), ou consumidores de álcool acima de 40 g/ dia (OR = 0,31; IC 95 por cento : 0,11-0,88) apresentaram proteção ainda maior com relação ao CCP, comparado aos não diabéticos. Em conclusão, os indivíduos diabéticos apresentaram risco inverso de CCP e o uso de metformina pode explicar, ao menos parcialmente, esta associação. / Diabetes mellitus (DM) is directly associated with some cancers. However, studies on the association between DM and head and neck cancer (HNC) have rendered controversial results. Assessing DM and cancer, emphasis should be given to metformin, a medication used for DM type 2, which is shown to be inversely associated with some cancers. The objective of this study was to evaluate the association between DM and HNC, as well as the impact of metformin use on the risk of HNC. This case-control study included 1021 HNC cases with squamous cell carcinoma, histologically confirmed, and admitted in five large hospitals in the state of São Paulo, from 2011 to 2014. A total of 1063 controls were selected in the same hospitals and were frequency-matched to cases by sex and age (in 5-year groups). In order to assess the risk of CCP associated with DM, odds ratios (OR) and 95 per cent confidence intervals (CI 95 per cent ) were estimated using unconditional logistic regression. Diabetic participants had an inverse risk of HNC (OR=0.68; 95 per cent CI: 0.49 0.95), and this inverse association was more intense among diabetic metformin users (OR=0.54; 95 per cent CI: 0.29-0.99). Diabetic metformin users that were current smokers (OR=0.13; 95 per cent CI: 0.04-0.44) or had an alcohol consumption of >40 g/day (OR=0.31; 95 per cent CI: 0.11-0.88) had lower risk of HNC than non-diabetic participants. In conclusion, DM patients have um inverse risk of HNC and the use of metformin may at least partially explain this association.

Os tumores na região de cabeça e pescoço são frequentes ao redor do mundo, estando relacionados a altas taxas de morbidade e mortalidade. Recentemente, alguns estudos propuseram a associação entre doença periodontal, risco de câncer e piora na qualidade de vida de pacientes oncológicos. O objetivo deste estudo é investigar a possível associação clínica entre doença periodontal e neoplasias de cabeça e pescoço antes e após seu tratamento. Para isso, foram incluídos no grupo teste 40 pacientes de ambos os sexos, &#x2265;18 anos e com diagnóstico de câncer de cabeça e pescoço. Estes pacientes foram subdivididos em dois subgrupos: antes (T1; n=20) e após (T2; n=20) o tratamento quimio e/ou radioterápico. O grupo controle foi formado por 40 pacientes sistemicamente saudáveis selecionados aleatoriamente, sem diferenças significativas entre os grupos em relação à idade e sexo. Os pacientes responderam a um questionário de qualidade de vida relacionada à saúde oral (OHIP-14) e foram examinados periodontalmente em boca toda quanto às medidas de profundidade de sondagem (PS), recessão (REC)/hiperplasia (HP), nível de inserção clínica (NIC), índice de sangramento gengival (ISG) e índice de placa (IPl) e número de dentes perdidos. O nível ósseo proximal foi determinado a partir de imagens radiográficas pela distância entre junção cemento-esmalte e crista óssea alveolar (JCE-CA). O desfecho primário foi definido pelo diagnóstico de câncer pela equipe médica responsável, enquanto que a medida de exposição foi a doença periodontal. Houve maior número de dentes perdidos (p= 0.0017; ANOVA pós-teste Tukey) e maior quantidade de placa (p= 0.0003; Kruskal Wallis pós-teste Dunn) no grupo T2 comparativamente ao controle, porém sem diferenças em relação ao grupo T1. Não houve diferença entre os grupos (p> 0.05) quanto ao ISG, PS, REC/HP, NIC e prevalência de doença periodontal. A distância JCE-CA (p= 0.007; teste exato de Fischer) e a extensão da doença periodontal em &#x2265; 50% dos sítios (p= 0.0033; teste exato de Fischer) foram significativamente maiores no grupo teste. Foi observada associação entre câncer na região de cabeça e pescoço, presença de doença periodontal em &#x2265; 50% dos sítios (OR= 5,12; 95% CI: 1,76 14,91) e distância JCE-CA &#x2265; 4 mm (OR= 2.91; 95% CI: 1.14 7.39). Não houve associação entre câncer na região de cabeça e pescoço e exposição prévia ao fumo (p= 0.81; teste exato de Fischer) e etilismo (p= 0.15; teste exato de Fischer). Na análise da qualidade de vida relacionada à saúde oral, o grupo teste apresentou maior impacto do que o controle nas dimensões limitação funcional (p< 0.0001; Mann Whitney), dor física (p= 0.02; Mann Whitney), incapacidade social (p= 0.01; Mann Whitney), desvantagem social (p= 0.03; Mann Whitney) e na somatória das pontuações (p= 0.0092; Mann Whitney). Houve diferenças significantes entre os grupos T1 e T2 apenas no domínio limitação funcional (p= 0.0058; Kruskal Wallis pós-teste Dunn). Estes resultados sugerem que a extensão da doença periodontal em &#x2265; 50% dos sítios e a perda óssea interproximal média, determinada por meio da distância JCE-CA, &#x2265;4 mm estão associadas ao câncer na região de cabeça e pescoço. / Malignant tumors in the head and neck region are frequently observed all around the world, and are related to high morbidity and mortality rates. Recently, some studies have proposed an association among periodontal disease, risk of cancer and worsening of quality of life of oncologic patients. The aim of this study is to investigate the possible clinical association between periodontal disease and neoplastic lesions in head and neck before and after its treatment. It was included in the test group 40 patients, both genders, &#x2265;18 years old, diagnosed with cancer in the head and neck region. Patients were divided into two subgroups: before (T1; n= 20) and after (T2; n= 20) oncologic treatment. Control group was constituted by 40 systemically healthy patients randomly selected, with no significant differences in age and gender when compared with test group. All patients answered a quality of life questionnaire (OHIP-14) and were periodontally full-mouth examined according to probing depth (PD), recession (REC)/hyperplasia (HP), clinical attachment level (CAL), gingival bleeding index (GBI) and plaque index (PlI) and number of lost teeth. Interproximal bone level was determined from X-ray images as the distance between cementum-enamel junction and alveolar crest (CEJ-AC). Primary outcome was defined by the diagnosis of cancer in the head and neck region by medical staff, and the measure of exposure was periodontal disease. A higher number of missing teeth (p= 0.0017; ANOVA post hoc Tukey) and plaque accumulation (p= 0.0003; Kruskal Wallis post hoc Dunn) was observed at T2 compared to control, but with no differences when compared to T1. No differences between groups (p> 0.05) were found in GBI, PD, REC/HP, CAL and prevalence of periodontal disease. CEJ-AC (p= 0.007; Fischers exact test) and extension of periodontal disease in &#x2265; 50% of sites (p= 0.0033; Fischers exact test) were significantly higher in test than control group. It was observed a significant association between head and neck cancer, presence of periodontal disease in &#x2265; 50% sites (OR= 5,12; 95% CI: 1,76 14,91) and CEJ-AC distance &#x2265; 4 mm (OR= 2.91; 95% CI: 1.14 7.39). There was no association between head and neck cancer and previous exposition to smoking (p= 0.81; Fischers exact test) and alcohol consumption (p= 0.15; Fischers exact test). In the analysis of quality of life related to oral health, test group showed more impact than controls in the domains functional limitation (p< 0.0001; Mann Whitney), physical pain (p= 0.02; Mann Whitney), social disability (p= 0.01; Mann Whitney), handicap (p= 0.03; Mann Whitney) and total score (p= 0.0092; Mann Whitney). Significant differences between T1 and T2 groups were found only at functional limitation domain (p= 0.0058; Kruskal Wallis pós-teste Dunn). These results suggest that extension of periodontal disease in &#x2265; 50% sites and mean interproximal bone loss, determined by the distance CEJ-AC, &#x2265;4 mm are associated to head and neck cancer.

Como em diversos tumores sólidos, no câncer de cabeça e pescoço (HNSCC) a presença de metástases é um importante fator de mal prognóstico. Até o momento, estudos indicam que, no microambiente inflamatório tumoral, a estimulação com o Fator de Necrose Tumoral Alpha (TNF-?) leva à ativação de diferentes vias moleculares, como a via do Fator Nuclear Kappa-B (NF-kB) e PI3K/AKT, que inibem GSK3? e consequentemente, promovem a estabilização e translocação nuclear de SNAIL e betacatenina. De um modo geral, em diversos tipos de câncer, enquanto beta-catenina tem ação em promover a proliferação celular, membros da família SNAIL são capazes de induzir o processo de transição epitélio-mesenquimal (EMT). Sabe-se que os eventos de EMT estão envolvidos tanto na iniciação de metástases quanto na geração de célulastronco tumorais (CSCs), que por sua vez estão associadas à falha terapêutica e recidiva, devido à características que lhe conferem resistência aos tratamentos convencionais. Ao silenciar a expressão gênica de modo pós-transcricional, microRNAs (miRs) tem sido associados à regulação tanto da EMT quanto da geração de CSCs. Com uso da abordagem de High-Content Screening (HCS, análise celular multiparamétrica quantitativa por microscopia automatizada), buscamos investigar a capacidade de um grupo de 30 miRs humanos, muitos deles envolvidos em vias inflamatórias e na pluripotência, em modular aspectos relacionados a sobrevivência celular e EMT, em uma linhagem celular derivada de HNSCC (FADU) sob estímulo inflamatório. Inicialmente, avaliamos o potencial do TNF-? em modular parâmetros morfométricos, bem como a presença/localização de proteínas relacionadas com a EMT e capacidade migratória. Posteriormente, avaliamos o efeito de moléculas miméticas dos miRs em suprimir ou potencializar a sobrevivência celular e EMT em células estimuladas com TNF-?, seguido da identificação de transcritos alvos preditos (bem como das vias de sinalização enriquecidas para estes alvos) comumente alvejados por grupos de miRs que levaram a alterações multiparamétricas similares. De modo geral, miRs que alvejaram RELA e AKT2/AKT3 foram responsáveis pela redução na proliferação celular e EMT, enquanto o oposto foi observado em miRs que alvejaram GSK3B e ARHGAP5 (inibidor de RhoA). O silenciamento por siRNAs específicos contra RELA e CTNNB1, causou à redução na sobrevivência celular, enquanto que o silenciamento de AKT1 e CTNNB1 levou à redução na expressão proteica de SNAIL/SLUG. Finalmente, o silenciamento de RELA, AKT1, GSK3B e CTNNB1 levou a redução na sobrevivência celular e indução a apoptose mesmo na ausência de estimulação com TNF-?. Como um todo, nós demonstramos que a abordagem de HCS permitiu a identificação de miRs com efeitos fenotípicos similares (no contexto de proliferação e EMT) e que, a predição de alvos compartilhados por estes miRs, levou à identificação de alvos e vias de sinalização relevantes do ponto de vista terapêutico. / Like many solid cancers, in head and neck cancer (HNC) the presence of metastases is an important factor of poor prognosis. To date, studies indicate that, in the tumor inflammatory microenvironment, stimulation with Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-?) leads to the activation of different molecular pathways, such as the Nuclear Factor-Kappa B (NF-kB) and PI3K/AKT pathway, inhibiting GSK3? and the degradation of SNAIL and beta-catenin, stabilizing them promoting their nuclear translocation. In general, in several types of cancer, while beta-catenin acts to promote cell proliferation, members of the SNAIL family induce the epithelial-mesenchymal (EMT) transition process. It is known that EMT events are involved both in the initiation of metastases and generation of cancer stem cells (CSCs), which in turn are associated with therapeutic failure and relapse, due to its properties that confer resistance to conventional treatments. By silencing gene expression in a post-transcriptional fashion, microRNAs (miRs) have been associated with the regulation of both EMT and CSCs generation. Using the HighContent Screening (HCS) approach, we sought to investigate the ability of a group of 30 human miRs, many of them involved in inflammatory pathways and pluripotency, to modulate aspects related to cell survival and EMT, in a HNSCC-derived cell line (FADU) under inflammatory stimuli. Initially, we evaluated the potential of TNF-? in modulating morphometric parameters, as well as the presence/location of EMT-related proteins and migratory capacity. Subsequently, we evaluated the effect of miRs mimetic molecules on suppressing or potentiating cell survival and EMT in TNF-?-stimulated cells, followed by the identification of predicted target transcripts (as well as signaling pathways enriched for these targets) commonly targeted by groups of miRs that led to similar multiparametric changes. Overall, miRs that targeted RELA and AKT2/AKT3 were responsible for the reduction in cell proliferation and EMT, while the opposite was observed in miRs that targeted GSK3B and ARHGAP5 (RhoA inhibitor). Gene silencing by specific siRNAs against RELA and CTNNB1 caused a reduction in cell survival, while silencing of AKT1 and CTNNB1 led to reduced protein expression of SNAIL/SLUG. Finally, the silencing of RELA, AKT1, GSK3B and CTNNB1 led to a reduction in cell survival and induction of apoptosis even in the absence of TNF-? stimulation. As a whole, we demonstrated that the HCS approach allowed the identification of miRs with similar phenotypic effects (in the context of proliferation and EMT) and that the prediction of targets shared by these miRs led to the identification of relevant targets and signaling pathways from the therapeutic point of view.

INTRODUÇÃO: Osteopontina (OPN) é uma glicoproteína presente em tecidos e fluidos orgânicos e envolvida em vários processos patológicos que incluem inflamação, proliferação celular, invasão da matriz extracelular, progressão tumoral e metástase. Em pacientes (pts) portadores de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço (CECCP), OPN tem sido associada a uma maior agressividade tumoral e empregada como marcador prognóstico. Nós investigamos o valor prognóstico e preditivo da OPN sérica em pacientes portadores de CECCP tratados de forma uniforme. MÉTODOS: Estudo longitudinal prospectivo de 47 pts portadores de CECCP localmente avançado e irressecável submetidos à quimioterapia e radioterapia. OPN sérica foi determinada pelo método ELISA (kit 1 com17 pts e kit 2 com 30 pts) com coleta realizada antes e após o término do tratamento e estudada a relação entre OPN, categorizada como alta ou baixa em relação ao valor mediano, e as características clínico-patológicas, resposta ao tratamento, sobrevida global (SG) e sobrevida livre de progressão (SLP). RESULTADOS: A OPN sérica mediana dos pacientes determinada pelo kit 1 (em ng/ml) foi de 2,1 e 1,9 pré e pós-tratamento, respectivamente; no kit 2 (em ng/ml) foi de 69,5 e 87,9 pré e pós-tratamento, respectivamente. Pacientes portadores de tumores de orofaringe foram mais freqüentemente associados a baixos níveis séricos de OPN pós-tratamento, em comparação com outros sub-sítios (p=0,03). Observada tendência à associação entre os valores séricos baixos de osteopontina pós-tratamento e a resposta tratamento (p=0,06). Houve associação entre os valores elevados da osteopontina pós-tratamento e menor SLP (p=0,09, log rank), com medianas de 11,9 meses e 14,5 meses, conforme valores séricos de OPN pós-tratamento altos e baixos, respectivamente. Não houve associação dos valores séricos de OPN pré e pós-tratamento e a SG (p=0,19 e p= 0,10, respectivamente). CONCLUSÃO: Neste grupo de pacientes portadores de CECCP, sugere-se que OPN sérica baixa após a quimioradioterapia associa-se à resposta ao tratamento e melhor SLP. / INTRODUCTION: Osteopontin (OPN) is a glycoprotein present in tissues and body fluids involved in several pathological processes that include inflammation, cell proliferation, invasion of the extracellular matrix, tumor progression and metastasis. In head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) patients, OPN has been associated with greater tumor aggressiveness and used as a prognostic marker. We investigated the prognostic and predictive value of plasma OPN in homogeneously treated (HNSCC) patients. METHODS: Longitudinal prospective study of 47 patients with locally advanced and inoperable HNSCC treated with exclusive platin based concomitant chemoradiotherapy. Plasma OPN was determined by ELISA (n=14 kit I, n=32 kit II) pre and postreatment and correlated with tumor response, overall survival (OS) and progression-free survival (PFS). RESULTS: Median OPN levels in ng/ml were 2,1 and 1,9 pre and postreatment, respectively, by kit I and 69,5 and 87,9 by kit II. Patients were categorized as OPN low or high, using the median as a cut-off point. Patients with oropharynx tumors, as compared to other subsites, were more frequently categorized as low OPN (p = 0,03). A low postreatment OPN level was associated with tumor response (p = 0,06) and a high postreatment OPN level was associated with poor PFS, 11.9 vs. 14.5 months (p=0.09, log rank). Mean OS was 16.2 and 13.7 months in low and high postreatment OPN pts, respectively (p=0.10, log rank). CONCLUSIONS: In this group of HNSCC patients, it is suggested that a low plasma OPN after chemoradiotherapy is associated with a lower response rate and a worse PFS.